CN102813967A - 利用逆向热敏聚合物的暂时栓塞 - Google Patents

Abstract

本发明为利用逆向热敏聚合物的暂时栓塞。本发明的一个方面涉及栓塞哺乳动物中血管位点的方法，包括将包括逆向热敏聚合物的组合物导入哺乳动物的血管系统，其中所述的逆向热敏聚合物在所述的血管系统中凝胶化，该组合物可经过小导管进行注射，并且该组合物凝胶等于或低于体温。在栓塞方法的某些实施方案中，所述的组合物进一步包括标记分子，例如染料、不透射线的，或MRI-可见的化合物。

Description

利用逆向热敏聚合物的暂时栓塞

本申请是申请日为2004年3月5日，申请号为200480014298.6的、发明名称和本发明相同的发明专利申请的分案申请。

相关申请

本申请要求在2003年3月24日提交的美国临时专利申请序列号60/457,148的优先权利益。

发明背景

栓塞

通常，栓塞是血管的治疗性、暂时性或永久性的闭塞。血管需要闭塞可能有几个原因，包括预防异常流血、闭塞肿瘤供给血管、或闭塞在动脉和静脉之间形成异常连通的动静脉畸形(AVM)。

经皮肤的血管内技术，例如血管成形术或扩张，通常包括恢复患病血管的开放。较少出现介入的目的是永久的栓塞。在这种栓塞期间，也可能需要暂时闭塞正常的血管或支脉，以重定向流体驱动的微粒，或保护正常的血管床不被插栓试剂穿透或避免暴露于细胞毒性的药物。在这种情况下，使用具有暂时作用的闭塞试剂可能是有益的。这种试剂应该是不形成血栓的，并且该闭塞应是确实可逆的。

现在使用的绝大多数栓塞试剂是永久栓塞的。然而，存在许多其中需要暂时性栓塞的临床情况，例如创伤、产后出血、和GI流血。暂时性栓塞的一般目的是阻断穿刺位点的血流，而容许血管愈合。当暂时性栓塞试剂降解时，血管重通，恢复旧有的血管系统。

现在在临床安置中最经常使用的暂时性栓塞试剂是明胶海绵。一般参见Katsumori，T.等人，Am.J.Radiol.178(2002)135-139，″UterineArtery Embolization Using Gelatin Sponge Particles Alone forSymptomatic Uterine Fibroids″。这种栓塞试剂以片层的形式出现。医师将片状明胶海绵切为小块，并经过导管将其注射到血管中。明胶海绵受到血流中蛋白酶的降解。然而，由于患者之间酶表达的差异，以及所使用的明胶海绵块大小的改变，这种栓塞试剂的体内降解时间跨越了很宽的范围，即从几小时到几周。另一个已经临床使用的暂时性栓塞试剂是淀粉微球体。由于α-淀粉酶的作用，淀粉微球体迅速降解，即在几分钟至几小时内降解，令人遗憾的是，这个时间对于大多数用药来说太短了。

气囊血管成形术也可用于暂时性栓塞，尽管其更经常用于清除与动脉粥样硬化相关的阻断的动脉。在利用气囊血管成形术的暂时性栓塞中，将减压的气囊导管置于动脉位点以进行栓塞；然后使气囊充气膨胀，由此阻断该位点的血流。当栓塞不再是必须的，可使气囊放气并除去导管。

自体同源的材料，例如脂肪、硬膜、肌肉和自体同源的凝块也已经用于暂时性栓塞。这些材料的主要优点是其低成本和其固有的生物兼容性。最经常使用的自体同源试剂是自体同源的凝块。存在几个与使用这种栓塞试剂相关的缺点。如对涉及明胶海绵所注释的，自体同源材料的降解作用依赖于酶促作用。因为酶表达因人而异，就不能准确预测降解时间。

用于栓塞的水解可降解材料的使用为实现控制栓塞物的体内使用时间提供了手段。重要地，酶活性不是栓塞物降解速率的因素。进一步地，存在于栓塞位点的含水溶剂的数量和pH是可以准确预测的。包括水解可降解聚合物的材料已经用于制备水解可降解的栓塞物。

在外科手术期间通过夹钳和夹子关闭例如动脉的血管。这种装置压住柔性空心管的相对侧，因此管壁变平并且相互靠在一起。这在2个边缘产生轴向延伸的折痕。为了阻止流体经过血管的流动，这种挤压或紧压作用是非常有效的。然而，这些血管的内腔具有内层(内膜)，其不应被强烈扭曲而受损伤。强烈的压力和过度的弯曲(轴向皱叠)可能使其受损伤导致除去栓塞物后的并发症。因此，外科手术环境中血管的暂时性栓塞就例如患者的结果而言具有很大的应用前景。

泊洛沙姆

聚氧化乙烯、聚氧化丙烯b-聚氧化乙烯a的三嵌段(ABA)共聚物[PEOa-PPOb-PEOa]，也称为泊洛沙姆(或Pluronic)，是广泛用于各种工业应用的非离子型表面活性剂。Nonionic Surfactants：polyoxyalkylene block copolymers，Vol.60.Nace VM，Dekker M(编辑)，纽约，1996.280pp.其表面活性剂特性已经用于去垢、分散、稳定、起泡、和乳化作用。Cabana A，Abdellatif AK，Juhasz J.Study ofthe gelation process of polyethylene oxide.polypropylene oxide-polyethylene oxide.copolymer(poloxamer 407)aqueous solutions.Journal of Colloid and Interface Science.1997；190：307-312.某些poloxamines，例如poloxamine 1307也显示逆向的感温性。

一些聚合物已经被考虑用于多种心血管，以及镰刀形红细胞贫血病的用药。Maynard C，Swenson R，Paris JA，Martin JS，HallstromAP，Cerqueira MD，Weaver WD.Randomized，controlled trial ofRheothRx(poloxamer188)in patient with suspected acute myocardialinfarction.RheothRx in Myocardial Infarction Study Group.Am AmHeart J.1998May；135(5Pt 1)：797-804；；O′Keefe JH，GrinesCL，DeWood MA，Schaer GL，Browne K，Magorien RD，KalbfleischJM，Fletcher WO Jr，Bateman TM，GibbonsRJ.Poloxamer-188as an adjunct to primary percutaneoustransluminal coronary angioplasty for acute  myocardial infarction.Am J Cardiol.1996Oct 1；78(7)：747-750；和Orringer EP，CasellaJF，Ataga KI，Koshy M，Adams-Graves P，Luchtman-Jones L，Wun T，Watanabe M，Shafer F，Kutlar A，Abboud M，Steinberg M，Adler B，Swerdlow P，Terregino C，Saccente S，Files B，Ballas S，Brown R，WojtowiczPraga S，Grindel JM.Purified poloxamer188forof acute vasoocclusive crisis of sickle cell disease：A randomizedcontrolled controlled trial.trial.JAMA.2001Nov 7；286(17)：2099-2106。

重要的是，这个种类的聚合物的多种成员，例如泊洛沙姆188和泊洛沙姆泊洛沙姆407都在生理学的温度范围内显示逆向的感温性。Qiu Y，Park K.Environment-sensitive hydrogels for drug delivery.Adv Drug Deliv Rev.2001Dec 31；53(3)：321-339；and Ron ES，Bromberg LE Temperature-responsive gels and and thermo gellingpolymer gelling polymer matrices for for protein and peptide deliverydelivery Adv Adv Drug Drug Deliv Rev.19981998May4；31((3)：197-221。换言之，这2种聚合物在低温下可溶于含水溶剂，在高温下是胶化的种类的成员。泊洛沙姆407是生物相容的聚氧化丙烯-聚氧化乙烯嵌段共聚物，平均分子量为大约12,500并且聚氧化丙烯部分为大约30％。

这个类型的聚合物也认为是可逆胶化的，因为其粘度随着温度的升高和下降而分别增加和降低。这种可逆胶化系统对需要处理流体状态材料，但其性能在胶化或更粘稠状态是优选的材料是很有用的。如上文所指出的，某些聚(氧化乙烯)/聚(氧化丙烯)嵌段共聚物具有这些特性；它们是可商业获得的，如

泊洛沙姆(BASF，Ludwigshafen，德国)并且一般被称为泊洛沙姆。参见美国专利号4,188,373、4,478,822和4,474,751。进一步地，多种poloxamines在生理学的温度范围内显示了逆向的感温性。

发明概述

本发明的一个方面涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的方法，包括下列步骤：将包括逆向热敏聚合物的组合物导入哺乳动物，其中所述的逆向热敏聚合物在所述的血管系统中凝胶化，由此暂时栓塞所述哺乳动物的血管位点。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中所述的哺乳动物是人。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中所述的逆向热敏聚合物的转变温度在大约10℃和大约40℃之间。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中在其转变温度和生理学温度之间的逆向热敏聚合物的体积是在该逆向热敏聚合物低于其转变温度时体积的大约80％和大约150％之间。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中所述的逆向热敏聚合物是嵌段共聚物、无规共聚物、接枝聚合物、或支化共聚物。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中所述的逆向热敏聚合物是嵌段共聚物。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中所述的逆向热敏聚合物是聚氧化烯嵌段共聚物。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中所述的逆向热敏聚合物是泊洛沙姆或poloxamine。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中所述的逆向热敏聚合物是泊洛沙姆。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中所述的逆向热敏聚合物是泊洛沙姆407、泊洛沙姆338、泊洛沙姆188、poloxamine 1107或poloxamine 1307。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中所述的逆向热敏聚合物是泊洛沙姆407或泊洛沙姆338。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中所述逆向热敏聚合物的转变温度在大约10℃和大约40℃之间；并且在其转变温度和生理学温度之间的逆向热敏聚合物的体积是在该逆向热敏聚合物低于其转变温度时体积的大约80％和大约150％之间。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中所述逆向热敏聚合物的转变温度在大约10℃和大约40℃之间；在其转变温度和生理学温度之间的逆向热敏聚合物的体积是在该逆向热敏聚合物低于其转变温度时体积的大约80％和大约150％之间；并且所述的逆向热敏聚合物是嵌段共聚物、无规共聚物、接枝聚合物、或支化共聚物。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中所述逆向热敏聚合物的转变温度在大约10℃和大约40℃之间；在其转变温度和生理学温度之间的逆向热敏聚合物的体积是在该逆向热敏聚合物低于其转变温度时体积的大约80％和大约150％之间；并且所述的逆向热敏聚合物是嵌段共聚物。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中所述逆向热敏聚合物的转变温度在大约10℃和大约40℃之间；在其转变温度和生理学温度之间的逆向热敏聚合物的体积是在该逆向热敏聚合物低于其转变温度时体积的大约80％和大约150％之间；并且所述的逆向热敏聚合物是聚氧化烯嵌段共聚物。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中所述逆向热敏聚合物的转变温度在大约10℃和大约40℃之间；在其转变温度和生理学温度之间的逆向热敏聚合物的体积是在该逆向热敏聚合物低于其转变温度时体积的大约80％和大约150％之间；并且所述的逆向热敏聚合物是泊洛沙姆或poloxamine。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中所述逆向热敏聚合物的转变温度在大约10℃和大约40℃之间；在其转变温度和生理学温度之间的逆向热敏聚合物的体积是在该逆向热敏聚合物低于其转变温度时体积的大约80％和大约150％之间；并且所述的逆向热敏聚合物是泊洛沙姆。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中所述的血管位点邻近于外科手术切口、出血处、癌性组织、子宫纤维瘤、肿瘤或器官。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中使包括逆向热敏聚合物的所述组合物将所述的血管位点栓塞少于大约12小时。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中使包括逆向热敏聚合物的所述组合物将所述的血管位点栓塞少于大约9小时。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中使包括逆向热敏聚合物的所述组合物将所述的血管位点栓塞少于大约6小时。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中使包括逆向热敏聚合物的所述组合物将所述的血管位点栓塞少于大约3小时。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中使包括逆向热敏聚合物的所述组合物将所述的血管位点栓塞少于大约2小时。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中使包括逆向热敏聚合物的所述组合物将所述的血管位点栓塞少于大约1小时。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中使包括逆向热敏聚合物的所述组合物将所述的血管位点栓塞少于大约30分钟。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中该逆向热敏聚合物具有大约1.5至大约1.0的多分散指数。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中该逆向热敏聚合物具有大约1.2至大约1.0的多分散指数。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中该逆向热敏聚合物具有大约1.1至大约1.0的多分散指数。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中包括逆向热敏聚合物的所述组合物进一步包括对比增强试剂。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中所述的对比增强试剂选自不透射线的材料、顺磁性物质、重原子、过渡金属、镧系元素、锕系元素、染料、和包含放射性核素的材料。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中包括逆向热敏聚合物的所述组合物进一步包括生物活性剂。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中生物活性剂选自抗炎药、抗生素、抗菌剂、抗病毒剂、镇痛剂、抗增殖剂、和化疗剂。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中利用导管将包括逆向热敏聚合物的所述组合物导入所述哺乳动物的血管系统。

附图简述

图1描绘了利用热敏聚合物栓塞的体外模型。图1a是体外模型的略图，其中通过导管注射泊洛沙姆407并且在玻璃珠的柱子内凝胶化，导致柱子周围的流动改变方向直到溶解。图1b是说明溶解时间与泊洛沙姆407浓度相关的条形图。

图2图解描绘了在动物中栓塞右肺动脉后10分钟至120小时时泊洛沙姆407的血浆浓度。

图3描绘了来自用3mL的泊洛沙姆407(22％)栓塞右肾动脉之前(a、b)、栓塞后5分钟(c、d)、10分钟(e、f)和30分钟(g、h)，有(b、d、f、h)或没有(a、c、e、g)造影剂注射的肾血管造影照片(a-h)的选择观察。注意在5分钟(c、d中的箭头)时的肾支脉的完全铸型，而在10分钟(e)近乎全部溶解。在10分钟时(e中的箭头)小的支流保持闭塞状态，导致肾成像瑕点(f中的箭头)。在30分钟时肾是完全正常的。1周时的肉眼可见的和病理学研究显示没有实质的异常(i、j)(j：苏木精-藏红花焰红染料染色；初始放大倍数×50)。

图4描绘了泊洛沙姆407栓塞左侧颈动脉。栓塞前的左颈动脉造影照片(a)和恰好在处死前左颈动脉的泊洛沙姆铸型的放射照片(b)。恰好在处死后的肉眼可见的照相(c、d)以及病理学(e、f)显示没有血管损伤。

图5描绘了泊洛沙姆407闭塞的重通。泊洛沙姆栓塞兔模型中的中央耳状动脉后10(a)、60(b)和90分钟(c)耳支的肉眼可见的照相。血液通过侧系(箭头)到达铸型而使泊洛沙姆407溶解。

发明详述

现在参考附有的实施例更充分地描述本发明，其中显示了本发明的某些优选实施方案。然而本发明可以许多不同的形式体现并且不应被认为限于在此所示的实施方案；更确切些，提供这些实施方案是为了使本公开的内容透彻而完全，并且可充分地向本领域的技术人员表达本发明的范围。

优选实施方案的综述

值得注意地，已经开发了用于在血管内期间的安全暂时性栓塞的方法，例如基于导管、和经皮肤的血管内操作。泊洛沙姆和poloxamines是具有快速可逆的溶胶-凝胶转换特性的非离子型表面活性剂。两个聚合物作为暂时性栓塞试剂都是安全有效的。最初，在体外模型中确定泊洛沙姆和polxamines凝胶化后的溶解时间。进一步地，例如对7只狗的肾和肺动脉的暂时泊洛沙姆闭塞继之以系列血管造影照片。1周后研究肉眼可见的变化和病理变化。在猪的相似动脉和2只兔子的耳状动脉中重复这个实验。1-20小时内体外凝胶化后泊洛沙姆溶解是完全的，这取决于浓度。体内泊洛沙姆407(22％)注射导致完全的闭塞，然后在10-90分钟内重通而没有并发症。泊洛沙姆闭塞的唯一生化效应是甘油三酸酯水平的暂时升高。在1周时没有病理学的异常。例如，泊洛沙姆407可用作暂时性闭塞的安全可靠的栓塞物材料。

优选实施方案

用于治疗血管疾病的传统栓塞方法依赖于血流的直接栓塞。在临床实践中，有时候需要保护血管床不受栓塞试剂损伤，或重定向血流至靶位点。因此，短期和可逆的闭塞试剂可在这种操作中找到运用。

就暂时性栓塞来说，逆向热敏聚合物的吸引之处在于可将其在室温配制为液体，然后在体温凝胶化。PEO-PPO-PEO嵌段共聚物的含水溶液由于PPO区块的疏水性而显示出令人感兴趣的温度诱导的聚合。例如，在低的温度和浓度下，PEO-PPO-PEO嵌段共聚物作为溶解的单体存在于溶液中，但在高的浓度和温度下自组装成为胶团。Huang K，Lee BP，Ingram DR，Messersmith PB.Synthesis andcharacterization of self-assembling block copolymers containingbioadhesive end groups Biomacromolecules 2002；3：397-406。我们观察到泊洛沙姆407的聚合物溶液在低于12％的浓度下在任何研究的生理学温度不显示凝胶化，而浓度高于26％时在可能对于实际用途太低的温度下发生胶化。

值得注意地，泊洛沙姆和poloxamine注射导致在任何位点的稳定的血管闭塞，可以以足够的速率注射该试剂以充满血管内腔并在被血流带走前胶化。泊洛沙姆和poloxamine闭塞总是暂时的，栓塞后5至90分钟发生溶解。泊洛沙姆和poloxamine的暂时闭塞在刚闭塞或1周后不产生任何可检测到的管壁损伤。此外，末端器官不受这些短期闭塞的影响。进一步地，泊洛沙姆栓塞不影响凝血时间，不产生血栓栓塞并发症，并且不与血管痉挛相关。

在兔耳模型中闭塞90分钟后没有发生缺血性的并发症。溶解所需要的时间根据充填的完全度和结构血管床的状态而变化。在动脉和静脉、高流动性或低流动性、高压或低压、以及高阻或低阻系统之间没有观察到显著性差异。或许，根据与血液接触的泊洛沙姆占总体积的分数发生溶解。依据这种前提，血管床的更好充填导致更长的闭塞时间。

迅速地重通亚闭塞。在高流动性的情况中，注射速率必须很高。太缓慢地注射聚合物导致无效的栓塞、具有成碎片的泊洛沙姆的末梢栓塞、不完全的闭塞、过早的导管堵塞以及快速溶解。考虑到这一点，优选的输送系统包括冷却的导管。这种系统防止导管堵塞并且提供对泊洛沙姆递送的更好控制。

泊洛沙姆和poloxamines有效且完全地封闭动脉，然后该动脉经受胶质栓塞而不影响氰基丙烯酸酯聚合。这些实验的结果表明这些试剂可用于″保护″聚合物、颗粒或化学栓塞期间的区域。

短期闭塞的潜在问题是血栓形成。发现泊洛沙姆是抗血栓形成的并且是血小板凝集的抑制剂。Carr ME Jr，Powers PL，Jones MR.Effects of poloxamer 188on the assembly，structure and dissolution offibrin clotsThromb Haemost.1991Nov 1；66(5)：565568；ArmstrongJK，Mciselman HJ，Fisher TC.Inhibition of red blood cell-inducedplatelet aggregation in whole blood by a nonionic surfactant，poloxamer 188(RheothRx injection)Thromb Res.1995Sep 15；79(5-6)：437-450；and Carr ME Jr，Carr SL，High AA.Effects ofpoloxamer 407on the assembly，structure and dissolution of fibrinclots.Blood Coagul Fibrinolysis 1996Mar；7(2)：109-113。实际上，在用泊洛沙姆407进行的所有闭塞中，只有1个案例在次封闭的腔静脉中发现形成血栓。泊洛沙姆血栓形成的缺乏可解释为什么其用作股骨闭合试剂是不成功的：或许因为血小板或纤维蛋白血栓不能封闭刺入区域，一旦股骨动脉重通就发生流血。

操作后24小时泊洛沙姆暂时性闭塞与甘油三酸酯的暂时升高相关。这些脂类代谢中的异常先前在泊洛沙姆的全身输液中已有描述。Blonder JM，Baird L，Fulfs JC，Rosenthal GJ.Dose-dependenthyperlipidemia in rabbits following administration of poloxamer 407gel Life Sci.1999；65(21)：PL261-266。

泊洛沙姆也可用作在外科手术期间血行阻断的辅助工具。当切开动脉时缺少流血可能导致被忽视的血管创伤以及随后的伤口闭合后的出血。其它的应用潜力包括使用泊洛沙姆和poloxamines递送生长因子或基因治疗。Ron ES，Bromberg LE.Temperature-responsive gelsand thennogelling polymer matrices for protein and peptide deliveryAdv Drug Deliv Rev.1998May 4；31(3)：197-221。总而言之，泊洛沙姆和poloxamines是可用于在栓塞操作期间保护血管的安全有效的暂时性栓塞试剂。

逆向热敏聚合物

通常，可将用于本发明方法的、在或大约在体温变得胶化的逆向热敏聚合物以液态注射到患者体中。一旦注射材料达到体温，其从液体转换为凝胶。用于本发明方法的逆向热敏聚合物可包括具有逆热凝胶化特性的嵌段共聚物。嵌段共聚物可进一步包括聚氧化乙烯-聚氧化丙烯嵌段共聚物，例如聚氧化乙烯和聚氧化丙烯的可生物降解的、生物相容的共聚物。同样，逆向热敏聚合物可包括治疗剂例如抗血管形成剂。

逆向热敏聚合物的分子量优选在1,000和50,000之间，更优选在5,000和35,000之间。优选该聚合物是含水溶液。例如，典型的含水溶液包含大约1％至大约80％，优选大约10％至大约40％的聚合物。合适的逆向热敏聚合物(例如泊洛沙姆或poloxamine)的分子量可以是例如在5,000和25,000之间，以及更特别的是在7,000和20,000之间。

施用于哺乳动物的逆向热敏聚合物制剂的pH一般是大约6.0至大约7.8，其是用于注射进入哺乳动物体内的合适pH水平。可通过任何合适的酸或碱，例如盐酸或氢氧化钠调节pH水平。

合适的逆向热敏聚合物包括聚氧化乙烯-聚氧化丙烯(PEO-PPO)嵌段共聚物。2个实例是

F127和F108，其是分子量分别为12,600和14,600的PEO-PPO的嵌段共聚物。这些化合物中的每一种可从Mount Olive，N.J.的BASF获得。在磷酸盐缓冲的盐水(PBS)中浓度为12-25％的

F108是合适LCST材料的实例。在PBS中浓度为12-25％的

酸F127是合适材料的另一个实例。可向逆向热敏聚合物加入低浓度的染料(例如结晶紫)、激素、治疗剂、填充剂和抗生素。例如，可通过该聚合物携带癌症治疗试剂，例如内抑制素，因此与逆向热敏聚合物一起递送到机体内。通常，以在体温下为凝胶而在低于体温时为液体形态存在的其它生物相容的、可生物降解的PEO-PPO嵌段共聚物也可根据本发明加以使用。

值得注意的，

聚合物具有独特的表面活性剂性能和极其低的毒性以及免疫原性应答。这些产品具有低的急性口腔和表皮毒性以及导致刺激或致敏的低潜能，并且全身性慢性的和亚慢性毒性是很低的。实际上，

聚合物是已经由FDA批准直接用于医学应用和作为食品添加剂的少量表面活性剂之一(BASF(1990)

&Tetronic Surfactants，BASF Co.，Mount Olive，N.J.)。最近，已经发现几个

聚合物增强药物的治疗效果，和由腺病毒介导的基因转移效力。(March K L，Madison J E，TrapnellB C.(1995)″Pharmacokinetics of adenoviral vector-mediated genedelivery to vascular smooth muscle cells：modulation by poloxamer407and implication for cardiovascular gene therapy.″Hum GeneTherapy 6(1)：41-53，1995)。

泊洛沙姆的平均分子量是从大约1,000至大于16,000道尔顿的范围。因为泊洛沙姆是连续的系列反应的产物，个别泊洛沙姆分子的分子量在平均分子量周围形成统计分布。此外，可商业购买的泊洛沙姆包含重要数量的聚(氧化乙烯)同聚物和聚(氧化乙烯)/聚(氧化丙烯)二嵌段聚合物。当泊洛沙姆组分嵌段的分子量增加时，这些副产物的相对数量也增加。根据制造商，这些副产物可构成聚合物总质量的大约15至大约50％。

可利用分级分离水溶性聚合物的方法纯化逆向热敏聚合物，包括下列步骤，在水中溶解已知数量的聚合物，向聚合物溶液加入可溶解萃取的盐，保持溶液在恒定的最适温度下一段时间以足够使2个不同的相显现出来，以及物理分开这两相。另外，可将包含优选分子量聚合物部分的相用水稀释至原始体积，加入萃取盐以获得初始的浓度，以及根据需要重复分离过程直到可以回收比初始物质具有更狭窄的分子量分布和最佳物理特性的聚合物。

在某些实施方案中，纯化的泊洛沙姆或poloxamine具有大约1.5至大约1.0的多分散指数。在某些实施方案中，纯化的泊洛沙姆或poloxamine具有大约1.2至大约1.0的多分散指数。在某些实施方案中，纯化的泊洛沙姆或poloxamine具有大约1.1至大约1.0的多分散指数。

上述过程由形成包括在水中的聚合物和适当盐的含水的二相系统组成。在这种系统中，可向单相聚合物-水系统加入可溶盐以诱导相分离而产生高盐、低聚合物的底层相和低盐、高聚物的上层相。较低分子量的聚合物优先分配进入高盐、低聚合物相。可利用这个方法分级的聚合物包括聚醚、甘醇，例如聚(乙二醇)和聚(氧化乙烯)、聚氧化烯嵌段共聚物，例如泊洛沙姆、poloxamines、和聚氧化丙烯/聚氧化丁烯共聚物，以及其他多元醇，例如聚乙烯醇。这些聚合物的平均分子量可以是在大约800至大于100,000道尔顿的范围内。参见2002年9月26日公开的美国专利申请2002/0137973。

上述的纯化方法固有地利用了泊洛沙姆分子、聚(氧化乙烯)均聚物和聚(氧化乙烯)/聚(氧化丙烯)二嵌段副产物的大小和极性以及溶解度的差异。除去一般包括低分子量级分和副产物的泊洛沙姆的极性级分，来容许回收泊洛沙姆的高分子量级分。通过这个方法回收的较大分子量的泊洛沙姆具有基本上不同于初始物质或可商业购买的泊洛沙姆的物理特性，包括较高的平均分子量、较低的多分散性以及在水溶液中的较高粘度。

其它的纯化方法可用来达到所需要的结果。例如，WO 92/16484公开了使用凝胶渗透色谱法分离显示有益生物效应、而不潜在产生有害副作用的泊洛沙姆188的馏分。如此获得的共聚物具有1.07以下的多分散指数，并且基本上是饱和的。证明潜在地具有有害的副作用与聚合物的低分子量、不饱和部分相关，而医药上有益的效果存在于均一的高分子量物质中。通过纯化在合成共聚物期间的聚氧化丙烯的中央嵌段或共聚物产物本身来获得其它类似的改良的共聚物(Emanuele美国专利号5,523,492、Emanuele美国专利号5,696,298)。

进一步地，如在美国专利号5,567,859中公开的，超临界流体提取技术已经被用于分离聚氧化烯嵌段共聚物。获得由具有多分散性小于1.17的相当均一的聚氧化烯嵌段共聚物组成的纯化馏分。依据这种方法，在压力维持为2200磅/平方英寸(psi)和温度为40℃下的二氧化碳气流中除去低分子量馏分。

另外，美国专利号5,800,711公开了利用盐萃取和液相分离技术通过分批除去低分子量种类而分级分离聚氧化烯嵌段共聚物的方法。通过这个方法分馏泊洛沙姆407和泊洛沙姆188。在所有情况下，获得与初始物质相比具有较高平均分子量和较低多分散指数的共聚物馏分。然而，多分散指数的变化是少量的并且通过凝胶渗透色谱法的分析表明仍然保留了一些低分子量物质。分级的聚合物的含水溶液的粘度显著大于温度在10℃和37℃之间的可商业购买的聚合物的粘度，这个特性对于一些医学和药物递送应用很重要。尽管如此，当用于机体内部时，认为这些聚合物的一些低分子量污染物产生有害的副作用，而使得在分级分离方法中将其除去变得特别重要。因此，通过这个方法分级的聚氧化烯嵌段共聚物不适合于所有的医学用途。

栓塞

栓塞是将物质注射到血管中以至少部分地填充或塞住血管和/或促进凝块形成以致经过该血管的血流减少或停止的方法。参见发明背景。血管的栓塞可用于多种医学原因，包括防止或控制由于损害(例如，器官流血、胃肠道流血、血管流血、和与动脉瘤相关的流血)、或通过切断血液供给摘除有病的组织(例如肿瘤、血管畸形、出血过程)造成的流血。栓塞也可用于在外科手术期间或刚好在外科手术后防止失血。手术前可进行肿瘤栓塞以缩小肿瘤大小；帮助肿瘤显像；和使与外科手术操作相关的失血最小化或防止失血。

换言之，栓塞在许多临床情况中是有用的。栓塞在出血中是特别有效的，不管病因是否是创伤、肿瘤、鼻出血、手术后的出血或GI出血。可在安插导管的体内任何地方进行，包括颅内血管系统、头和颈、胸、腹部、骨盆和四肢。伴随有共轴微导管的可利用性，可进行高度选择性的栓塞。在大多数患者中，用于出血的栓塞优于外科手术备选方案。

栓塞可用于治疗皮肤、头、或颈肿瘤，子宫或输卵管的肿瘤、肝或肾脏肿瘤、子宫内膜异位、纤维瘤等。特别地，栓塞已经被用于骨盆、肾脏、肝、脊柱和脑的动静脉畸形。子宫动脉栓塞已经被用于治疗纤维瘤；肾动脉栓塞已经被用于治疗肾血管肌脂瘤和肾细胞癌瘤；颅内栓塞已经被用于治疗大脑和颅内动脉瘤、神经内分泌转移、颅内硬脑膜动静脉瘘和动脉导管未闭。特定栓塞操作的其它实例包括肝动脉栓塞和肺动脉栓塞。这种方法的实例在例如Mourikis D.，Chatziioannou A.，Antoniou A.，Kehagias D.，Gikas D.，Vlahous L.，″Selective Arterial Embolization in the Management of SymptomaticRenal Angiomyolipomas(AMLs)，″European Journal of Radiology 32(3)：153-9，1999Dec.；Kalman D.Varenhorst E.，″The Role ofArterial Embolization in Renal Cell Carcinoma，″ScandinavianJournal of Urology&Nephrology，33(3)：162-70，1999Jun.；LeeW.，Kim T S.，Chung J W.，Han J K.，Kim SH.，Park JH.，″RenalAngiomyolipoma  ：Embolotherapy with a Mixture of Alcohol andIodized Oil，″Journal of Vascular&Interventional Radiology，9(2)：255-61，1998March-April；Layelle I.，Flandroy P.Trotteur G.，Dondelinger R F.，“Artirial Embolization of Bone Metastases：is itWorthwhile”Journal Belge de Radiologie，81(5)：223-5，1998Oct.；Berman，M.F.，Hartmann A.，MastH.，Sciacca R R.，Mohr J P.，PileSpellman J.，Young W L.，”Determinants of Resource Utilization inthe Treatment of Brain Arteriovenous Malformations，”Ajnr：American Journal of Neuroradiology，20(10)：2004-8，1999Nov.-Dec.；Shi H B.，Suh D C.，Lee H K.，Lim S M.，Kim D H.，Choi C G.，Lee C S.，Rhim S C.，“Preoperative Transarterial Embolization ofSpinal Tumor：Embolization Techniques and Results，”Ajnr：American Journal of Neuroradiology，20(10)：2009-15，1999Nov-Dec.；nagono M.，Kamiya J.，Kanai M.，Uesaka K.，Sano T.，Yamamoto H.，Hayakawa N.，Nimura Y.，“Right Trisegment Portal Vein Embolizationfor Biliary Tract Carcinoma：Technique and Clinical Utility，”Surgery，127(2)：155-60，2000Feb.；Mitsuzaki K.，Yamashita Y.，Utsunomiva D.，Sumi S.，Ogata I.，takahashi M.，Kawakami S.，UedaS.，”Ballon-Occluded Retrograde Transvenous Embolization of aPelvic Arteriovenous Malformation，”Cardiovascular&Interventional Radiology 22(6)：518-20，1999Nov-Dec.中有描述。

在许多情况中，栓塞操作开始于诊断性血管造影术，以确定出血源。例如，在鼻出血中，同时注意到上颌骨内动脉的颈外动脉血管造影术可能是有帮助的。在骨盆骨折中，用血管造影术检查髂骨内的动脉。选择性或超选择性血管造影术在找出出血源时比非选择性的研究是更灵敏的。因此，临床怀疑和其他成像研究的结果，例如对比增强的CT和使用锝Tc 99m-标记的RBCs的放射性核素扫描对于引导血管造影术检查是很重要的。在腹内出血中，例如复杂创伤后，CT扫描可确定急性出血位点，因为与旧有出血相比，急性出血经常证明是高密度的(Houndfield单位)，这被称为“岗哨凝块信号”。

通常利用导管递送栓塞试剂，例如热敏聚合物。递送栓塞试剂组合物的导管可以是小直径的医用导管。所使用的特定导管不是很关键的，只要导管成分和栓塞试剂是相互兼容的。关于这点，聚乙烯导管成分可能是有用的。与栓塞试剂组合物相容的其他材料可包括含氟聚合物和硅树脂。

一旦放置好导管，通过导管缓慢注射栓塞试剂组合物，一般使用X射线或荧光镜辅助引导。可将栓塞试剂组合物直接导入关键的出血血管或将其导入靶血管的上游。在栓塞操作期间导入的栓塞试剂组合物的数量是足够产生栓塞的量，例如足够减少或停止经过该靶血管的血流。递送的栓塞试剂组合物的数量可根据例如待栓塞血管的大小和面积而变化。这种因素的调节是在栓塞领域的普通技术人员的技术范围内的。栓塞后，可进行另外的动脉造影来证实操作的完成。邻近于栓塞的健康机体组织仍然将存在一定程度的动脉血流，而到达患病的或靶向组织的血流受到阻断。

栓塞试剂组合物优选包括增强对比度的试剂，其可通过已知的方法加以追踪和监测，包括放射照相和荧光镜法。反差增强试剂可以是能够以所需要的显像方式增强对比度的任何物质(例如，磁共振、X射线(例如CT)、超声波、磁性断层成像、电阻抗成象、光成象(例如共聚焦显微镜术和荧光成象)以及核成像(例如闪烁扫描术、SPECT和PET))。反差增强试剂是栓塞和类似医疗实践领域公知的，在本发明的制剂和方法中任何多种反差增强试剂都适合使用。

某些优选的实施方案包括不透射线的反差增强试剂；特别是显示永久射线不透性的不透射线物质，例如金属或金属氧化物。永久的射线不透性不同于其它反差增强试剂或用于类似医学应用的不透射线材料，上述试剂或材料可生物降解或经过某一周期，例如几天或数周，例如7至14天丧失其有效性(参见，例如PCT/GB98/02621)。永久的不透射线材料经常是优选的，因为它们可被监测或追踪，只要其保留在机体中，而其它的非永久反差增强试剂或不透射线的物质具有有限的被检测和追踪的时间。

不透射线的物质包括顺磁性物质(例如，稳定的自由基或更优选的化合物、盐、和顺磁性金属物质，例如过渡金属或镧系元素离子的配合物)；重原子(即原子序数在37以上)化合物、盐、或复合物(例如，重金属化合物，碘化化合物等)；包含放射性核素的化合物、盐、或复合物(例如，放射性金属同位素的盐、化合物或复合物或放射性的有机化合物)；和超顺磁的颗粒(例如，金属氧化物或混合氧化物颗粒，特别是铁氧化物)。优选的顺磁性金属包括Gd(III)、Dy(III)、Fe(II)、Fe(III)、Mn(III)和Ho(III)、和顺磁的Ni、Co和Eu种类。优选的重金属包括Pb、Ba、Ag、Au、W、Cu、Bi和镧系元素，例如Gd。

使用的反差增强试剂的数量应足够容许按需要检测栓塞物。优选地，栓塞试剂组合物可包括大约1至大约50重量百分数的反差增强试剂。不透射线物质的浓度差异如下：例如，在优选的实施方案中，逆向热敏聚合物混合物包含大约50vol％的不透射线造影剂溶液，其中优选的造影剂例如Omnipaque或Visipaque是非离子性的。用于MRI检测时，MR检测剂的浓度优选是大约1重量％。

栓塞的选择性临床应用

正如以上讨论的，一般利用伴随有引导和监测的血管造影技术进行栓塞，例如以荧光镜或X射线引导，以将栓塞试剂传递至血管或动脉。进一步地，可将血管扩张剂(例如腺苷酸)预先、同时或随后施用于患者以便于操作。

重要的是，虽然随后的说明书部分包括关于栓塞的特定临床应用的术语，认为各种类型的栓塞方法都在本发明方法的预期范围之内。具体地，医学或栓塞领域的技术人员将理解和认识到在此所描述的水解可降解的水凝胶微粒如何通过引导输送装置至所需要的血管机体位点，并且递送适量的微粒至该位点以产生限流、闭塞、充填、或封塞一个或多个所需要的血管并且减少或停止经过该血管的血流来用于多种栓塞方法。可考虑、控制或调整以将该方法应用于任何特定栓塞方法的因素，可包括选择的微粒组合物(例如，考虑成像、追踪、和检测不透射线的颗粒底物)；递送到机体位点的微粒数量；递送方法，包括使用的特定设备(例如，导管)以及用于将导管发药末端放置在所需要的机体位点的方法和途径等。普通技术人员将认识到这些因素中的每一个，并且可容易地加以处理以将描述的方法应用于无数的栓塞方法。

A.头和颈

在头和颈中，最经常进行栓塞术是为了用于鼻出血和创伤性出血。耳鼻喉科医师根据结构和临床基础区分前部和后部的鼻出血。鼻出血由许多原因造成，包括环境因素，例如温度和湿度、感染、变应性、创伤、肿瘤和化学刺激物。外科手术连接中的栓塞的优点是更多选择性地阻塞较小的支脉。通过仅仅栓塞流血的支脉，保持了到达内部上颌骨分布的其余部分的正常血流。栓塞的并发症可能包括预定栓塞范围外部的栓塞物质逆流，在最坏的情况中，可能导致中风或失明。已经证明栓塞比动脉结扎更有效。尽管栓塞具有次要并发症的较高比率，但是在主要并发症的比率方面没有发现差异。对于创伤性出血，栓塞技术是与对于鼻出血相同的。由于头和颈中动脉的大小，经常需要微导管。

B.胸

在胸部，涉及与出血相关的栓塞的2个主要适应症是：(1)肺动静脉畸形(PAVM)；和(2)咳血。PAVMs通常是先天性的器官损害，尽管外科手术或创伤后也可能发生。先天性形式一般与遗传性出血性毛细血管扩张症，也称为Rendu-Osler-Weber综合症相关。对于这个病症存在遗传倾向性。PAVMs可以是单个或多重的，并且如果足够大，可导致生理性的右侧至左侧心脏旁路。旁路的临床表现包括紫绀和红细胞增多症。可从反常栓塞导致中风和脑脓肿。PAVMs也可能出血，其导致咳血。

对于PAVMs的治疗选择包括外科手术和转导管治疗。治疗目的是减轻与右侧至左侧旁路相关的呼吸困难和疲劳的症状。此外，如果患者患有反常栓塞，治疗可防止进一步的急性发作。由于该操作的较少侵入特性和优良的技术成功率，目前认为栓塞是用于单个的或多重的PAVM的选择治疗。栓塞术是显然用于PAVMs的选择的治疗。

在患有大量咳血的患者中进行支气管动脉栓塞，大量咳血被定义为在24小时的时间内咳血500cm³。病因各异，包括支气管扩张、囊性纤维化、肿瘤、肉瘤样结节病、肺结核和其他感染。未经治疗的大量咳血导致高死亡率。最经常是由于窒息而不是失血导致死亡。对于大量咳血的医药和外科治疗通常是无效的，死亡率为35-100％。栓塞具有95％的最初成功率，与外科切除术相比具有较小的发病率和致死率。因此转导管栓塞已经成为大量咳血的治疗选择，而目前外科切除术被保留用于栓塞失败或先前多次栓塞后的反复的大量咳血。

C.腹和骨盆

在腹部和骨盆中存在许多栓塞的适应症。对于出血的栓塞，最常见的适应症是急性GI出血。通常对于肝和脾脏的实质器官损伤，可容易地用栓塞处理。存在其它的适应症，例如涉及妇科/产科的出血和骨盆环骨折。

一旦确定了出血源，可计划适当的栓塞操作。用于栓塞的技术对于上游GI流血和下游GI流血是不同的。UGI区域中的血管供给是很充分并联的，因此可进行相对非选择性的栓塞而不会有梗塞下层器官的危险。相反，LGI区域具有较少并行供给的，必须进行更选择性的栓塞。

GI区域外部，当在腹部中进行栓塞时，存在器官特异的因素。例如，肝具有双重血液供给，75％的总供给来自门静脉，25％来自肝动脉。肝动脉由于相对于门静脉其血压较高总是造成由于创伤引起的出血。因此，在肝动脉而非门静脉中进行肝中所有的栓塞。由于双重血液供给，可进行肝动脉大的支脉的闭塞而没有坏死的危险。

相比之下，脾的栓塞总是应在尽可能远侧端进行。脾动脉的闭塞可能导致脾坏死和栓塞后脾脓肿的可能性。如果对于创伤性出血考虑闭塞整个脾动脉，应进行全脾切除术来代替栓塞或在栓塞后进行全脾切除术。

对于腹部和骨盆中出血栓塞的进一步适应症包括产后、剖腹产后的、和手术后的流血。对于产后流血的不同诊断包括阴道壁裂伤、异常的胎盘形成、受孕的残留物、和子宫破裂。用于治疗产后出血的保守措施包括阴道密封，宫颈扩张子宫刮术以除去残留物、IV和肌内投药法(例如催产素、前列腺素)、和子宫按摩。当保守方法失败时，栓塞是控制骨盆出血的安全有效的方法，其可避免外科手术的危险，保护生育力，并缩短住院时间。

最后，内部髂骨动脉的栓塞在患有血液动力学不稳定的骨盆骨折的患者中是有用的。对于创伤的方法包括对相关的最初软组织损伤的治疗，然后是骨盆环的稳定。患有持续的血液动力学不稳定性的患者是栓塞的候选者。如在其它的临床安置中，血管造影术用来确定出血源，并且进行选择性的栓塞。

栓塞结合药物递送

在适当的时候以控制的方式，以最小副作用和每剂量具有更大效果递送药物的新方法是药物递送和制药行业所寻找的。用于本发明栓塞方法的可逆胶凝聚合物具有使得其成为递送通用的小分子药物，以及新的大分子(例如肽)药物或其它治疗产品的合适载体的物理化学特性。因此，包括热敏聚合物的合成物可进一步包括所选择的制药试剂来提供预选择的药用效果。药用效果是寻求治疗疾病或物理紊乱的来源或症状的效果。药物包括受到FDA药物准则管理的产品以及消费品。重要的是，用于本发明栓塞方法的组合物能够溶解和释放生理活性物质。预期溶解作用作为大块水相溶解的结果而发生，或通过由泊洛沙姆的疏水性结构域产生的胶束的形式掺入溶质而发生。可通过分散或网络侵蚀机制发生药物的释放。

本领域的技术人员可认识到用于本发明栓塞方法的组合物可同时用于传递多种的药物和个人护理用药。为了制备药物组合物，将给予所需要药物效果的有效量药物活性剂掺入用于本发明栓塞方法的可逆凝胶组合物中。优选地，选择的试剂是水可溶的，其将容易地有助于遍及可逆凝胶组合物的均匀分散体系。优选该试剂不与组合物起反应。对于非水溶性的物质，其也在本发明栓塞方法的范围内，可分散或悬浮全部组合物的亲脂性的物质。可利用本发明的方法递送无数的生理活性物质；递送的生理活性物质包括麻醉剂、抗微生物剂(抗菌的、抗真菌的、抗病毒的)、消炎剂、诊断试剂和伤口愈合试剂。

因为用于本发明方法的可逆凝胶组合物适合于在多种生理情况下应用，可掺入多种药物学活性剂并施用该组合物。装载入热敏聚合物的聚合物网络中的药物试剂可以是任何具有生物活性的物质，包括蛋白质、多肽、多核苷酸、核蛋白、多糖、糖蛋白、脂蛋白、及其合成的和生物学工程化的类似物。

可在用于本发明方法的聚合物中掺入许多治疗剂。通常可通过本发明的方法给药的治疗剂包括但不限于：抗感染药物，例如抗生素和抗病毒剂；镇痛剂和镇痛剂组合物；减食欲剂；驱肠虫药；治风湿药；平喘药；抗惊厥剂；抗抑郁剂；抗利尿试剂；止泻药；抗组胺剂；抗炎症试剂；抗偏头痛制剂；止恶心药；抗肿瘤药；抗帕金森病药物；抗痒药；；抗精神病药；退热药、抗痉挛药；抗胆碱能药；拟交感神经药；黄嘌呤衍生物；心血管制剂，包括钙离子通道阻断剂和β-阻断剂，例如心得静和抗心律失常药；抗高血压药；利尿剂；血管扩张剂，包括全身性冠状动脉的、外周的和大脑的；中枢神经系统兴奋剂；咳嗽和风寒制剂，包括减充血剂；激素，例如雌二醇和其他类固醇，包括皮质醇；安眠药；免疫抑制剂；肌肉松弛药；副交感神经阻滞药；精神神经兴奋剂；镇静剂；和安定药；以及天然衍生或遗传工程化的蛋白质、多糖、糖蛋白、或脂蛋白。用于肠胃外给药的合适制药学是已知的，如由Handbook on Injectable Drugs，6th edition，by LawrenceA.Trissel，American Society ofHospital Pharmacists，Bethesda，Md.1990所举例说明的(由此引入作为参考)。

药物学上的活性化合物可以是任何具有生物活性的物质，包括蛋白质、多肽、多核苷酸、核蛋白、多糖、糖蛋白、脂蛋白、及其合成的和生物学工程化的类似物。术语″蛋白质″是可理解的领域术语，并且为了本发明的目的也包括肽。蛋白质或肽可以是任何生物学活性的、天然存在或合成的蛋白质或肽。

蛋白质的实例包括抗体、酶、生长激素和生长激素-释放激素、促性腺激素释放激素、及其拮抗剂和拮抗剂类似物、抑生长素及其类似物、促性腺激素，例如促黄体生成激素和促卵泡激素、肽T、降钙素、甲状旁腺激素、胰高血糖素、加压素、催产素、血管紧张素I和II、缓激肽、胰激肽、促肾上腺皮质激素、促甲状腺激素、胰岛素、胰高血糖素以及上述分子的许多类似物和同源物。药物试剂可选自胰岛素、选自MMR(腮腺炎、麻疹和风疹)疫苗、伤寒疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、单纯疱疹病毒、细菌类毒素、霍乱毒素B-亚基、流感疫苗病毒、博德特氏菌百日咳病毒、牛痘病毒、腺病毒、黄痘、脊髓灰质炎疫苗病毒、恶性疟原虫、bacillus calmette geurin(BCG)、肺炎克雷白杆菌、HIV外壳糖蛋白的抗原和细胞因子及其他选自牛生长激素(有时称为BST)、雌激素、雄激素、胰岛素生长因子(有时称为IGF)、白细胞介素I、白细胞介素H和细胞因子的试剂。这3种细胞因子是干扰素-β、干扰素-γ和吞噬细胞增强激素。

可掺入装载入用于本发明栓塞方法的组合物的细菌类毒素的实例是破伤风、白喉、假单胞菌属A、结核分枝杆菌。可掺入用于本发明栓塞方法的组合物的试剂的实例是HIV外壳糖蛋白，例如用于AIDS疫苗的gp 120或gp 160。可包括的抗溃疡的H2受体拮抗体的实例是甲胺呋硫、甲腈咪胍和法莫替丁、以及其他的抗溃疡药物是omparazide、cesupride和迷索前列醇。低血糖试剂的实例是glizipide。

可加入掺入用于本发明栓塞方法的组合物的试剂的药物学活性化合物种类包括但不限于，抗-AIDS物质、抗癌症物质，抗生素、免疫抑制剂(例如环孢菌素A)、抗病毒物质、酶抑制剂、神经毒素、阿片样物质、安眠药、抗组胺剂、润滑的安定药、抗惊厥剂、肌肉松弛剂和抗帕金森病物质、抗痉挛药和肌肉收缩剂、缩瞳剂和抗胆碱能药、抗青光眼化合物、抗寄生虫和/或抗原生动物化合物、抗高血压药、镇痛剂、退热药、和消炎药物，例如NSAIDs、局部麻醉剂、眼药、前列腺素、抗抑郁剂、抗精神神经病物质、抗催吐剂、成像试剂、特异的靶向试剂、神经传递物质、蛋白质、细胞应答修饰剂和疫苗。

认为特别适用于掺入用于本发明栓塞方法的组合物的例证性药物试剂包括但不限于，imidizole，例如霉康唑、益康唑、特康唑、沙泊那唑、依曲康唑、甲硝哒唑、氟康唑、酮康唑、克霉唑、促黄体素释放激素(LHRH)及其类似物、壬苯聚醇-9、GnRH激动剂和拮抗剂、天然或合成的progestrin，例如选择的黄体酮、17-羟基黄体酮衍生物，例如甲孕胴，和19-去甲酮类似物，例如炔诺酮、天然或合成的雌激素、共轭的雌激素、雌二醇、哌嗪雌酮硫酯、和乙炔雌二醇，二磷酸盐，包括1-羟基-亚乙基-1，1-二膦酸、阿伦膦酸盐、替鲁膦酸盐、利塞膦酸、氯膦酸盐和氨羟二磷酸二钠、降血钙素、甲状旁腺激素、碳酸酐酶抑制剂，例如非班酯和多佐胺、肥大细胞稳定剂，例如xesterbergsterol-A、lodoxamine、和色甘酸钠，前列腺素抑制剂，例如二氯芬酸和痛力克，类固醇，例如氢化强的松、地塞米松、fluromethylone、双甲丙酰龙和氯替泼诺，抗组胺剂，例如安塔唑啉、非尼拉敏、和组胺试剂、硝酸毛果芸香碱，β-阻断剂，例如佐布诺洛尔和马来酸噻吗心安。本领域的技术人员将理解，可组合两种以上的药物试剂达到特殊效果。可同简单的实验测定活性成分的必需数量。

仅仅是以举例方式，可将任何数目的抗生素和抗微生物剂包括在用于本发明方法的热敏聚合物中。优选包括在用于本发明栓塞方法的组合物中的抗微生物药物包括内酰胺药物的盐、喹诺酮药物、环丙沙星、氟哌酸、四环素、红霉素、氨丁卡霉素、二氯苯氧氯酚、强力霉素、卷曲霉素、双氯苯、金霉素、土霉素、氯林大霉素、乙胺丁醇、己氧苯脒、羟乙基磺酸盐、甲硝哒唑、戊烷脒、庆大霉素、卡那霉素、lineomycin、甲烯土霉素、乌洛托品、二甲胺四环素、新霉素、奈替霉素、巴龙霉素、链霉素、托普霉素、霉康唑和amanfadine等。

例如仅仅就抗炎症来说，可将非类固醇的抗炎药试剂(NSAIDS)掺入用于本发明栓塞方法的组合物，例如丙酸衍生物、乙酸、灭酸衍生物、联苯羧酸衍生物、苯并噻嗪类，包括但不限于阿斯匹林、醋氨酚、布洛芬、甲氧萘丙酸、苯恶洛芬、氟吡洛芬、芬布芬、酮基布洛芬、吲哚布洛芬、吡丙芬、carporfen、和bucloxic酸等。

栓塞试剂盒

也可利用包括例如泊洛沙姆407的栓塞试剂盒来实施本发明的方法。这种试剂盒可包含无菌形式的热敏聚合物，并且可包括可接受的重新构成液体的无菌容器。合适的重新构成液体在Remington′sPharmaceutical Sciences and The United States Pharmacopia--TheNational Formular中有公开。这种试剂盒可备选地包含例如泊洛沙姆407的组合物的无菌容器。如果需要，这种试剂盒还可包括其它的常规试剂盒组分，例如一个或多个一个或多个载体、一个或多个用于混合物的附加小瓶。在试剂盒中还可包括插页或标贴的说明书，来指明栓塞组合物和载体的数量、混合这些成分的指导原则以及给药方法。可利用本领域技术人员公知的常规消毒和冻干法进行试剂盒内包括的容器和任何物质的消毒以及栓塞组合物的冻干(也称为冷冻干燥)。

对栓塞试剂盒有用的冻干助剂包括但不限于甘露糖醇、乳糖、山梨糖醇、葡聚糖、聚蔗糖和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。对栓塞试剂盒有用的稳定助剂包括但不限于抗坏血酸、半胱氨酸、单硫代甘油、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、龙胆酸和肌醇。对栓塞试剂盒有用的制菌剂包括但不限于苯甲醇、苯扎氯铵、氯代丁醇和对羟基苯甲酸甲酯、丙酯或丁酯。栓塞试剂盒中的成分也可发挥一个以上的功能。还原剂也可起稳定辅助剂的作用，缓冲液也可起转移配体的作用，冻干辅助剂也可起转移、辅助或共同配体的作用等。

通过多种有时候特异于那种成分的因素来确定栓塞试剂盒的每种成分的绝对相对数量，而在其它情况下依赖于另一个成分的数量或任选成分的存在和数量。通常，使用给出该制剂预期效果的每种成分的最小数量。制剂的预期效果是栓塞试剂盒的最终用户可以不会受到伤害的高度确定性的实施本发明的栓塞方法。

栓塞试剂盒也包含对于实施最终用途的书面指令。这些说明书可以是附着于一个或多个小瓶或附着于其中包装该小瓶用于船运的容器的，或可以是包装说明书中的分开插页。

定义

为了方便起见，在此收集本说明书、实施例和所附权利要求中使用的某些术语。

在此使用冠词″一个″和″一种″是指语法上目的该物品的一个或一个以上(即至少一个)。例如、″一个元件″是指一个元件或一个以上的元件。

术语″可逆胶化″和″逆向热敏″是指当温度增加而不是温度降低时发生凝胶化的聚合物特性。

术语″转变温度″是指逆向热敏聚合物发生凝胶化的温度或温度范围。

术语″反差增强″是指能够通过监测和检测这种物质的方法，例如通过射线照相术或荧光检查法在注射进入哺乳动物受试个体期间被监测的物质。反差增强试剂的实例是不透射线的物质。包括不透射线物质的反差增强试剂可以是水溶性的或不溶于水的。水溶性的不透射线物质的实例包括甲泛葡胺、碘必乐、碘酞酸钠、iodomide钠和葡甲胺。不溶于水的不透射线物质的实例包括金属和金属氧化物，例如金、钛、银、不锈钢、其氧化物、氧化铝、氧化锆等。

如在此使用的，术语“聚合物”是指通过两个或多个低聚物单位的化合而形成的分子。通常通过共价键连接化学单位。聚合物中的两个或多个化合单位可以是全部相同的，在这种情况下该聚合物被称为均聚物。它们也可以是不同的，因而该聚合物是不同单位的组合。这些聚合物被称为共聚物。

如在此使用的术语″生物相容的″是指具有生物学兼容的特性而不在活组织中产生有毒的、有害的或免疫的应答。

如在此使用的术语“可降解的”是指在特定条件，例如中性或碱性pH下具有崩解或降解的特性。

如在此使用的术语″可生物降解的″，是指当与生物系统接触时，例如导入动物时，发生分解的物质。可通过例如溶解、解聚、分裂、或通过另一个化学或物理变化，由此生物系统中大部分物质随时间减少来证明分解。分解可以是，但不是必须地，受到生物系统成分(例如酶)的催化。

术语″泊洛沙姆″表示对称的嵌段共聚物，由其两末端羟基被PPG聚氧化乙烯化的核心组成，即其符合可相互变换的通式(PEG)_X-(PPG)_Y-(PEG)_x和(PEO)_x-(PPO)_y-(PEO))_x。每种泊洛沙姆名称以随机的代号结束，其涉及由X和Y表示的相应单体单位的平均数值。

术语″poloxamine″表示聚烷氧化的乙二胺的对称的嵌段共聚物，其符合一般类型[(PEG)_x-(PPG)_Y]₂-NCH₂CH₂N-[(PPG)_Y-(PEG)_X]₂。每种Poloxamine名称后面有随机的代号，其涉及由X和Y表示的相应单体单位的平均数值。

如在此使用的术语″逆向的热敏聚合物是指在室温下可溶于水，但在生理学温度至少部分从水相中分离的聚合物。逆向热敏聚合物包括泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、

F127、

F68、聚(N-异丙基丙烯酰胺)、聚(甲基.乙烯基醚)、聚(N-乙烯基己内酰胺)；和某些聚(有机磷腈)。参见Bull.Korea71Chem.Soc.2002，23，549-554。

短语″多分散指数″是指特定聚合物的″重量平均分子量″与″数量平均分子量″的比率；其反映了聚合物样品中个体分子量的分布。

短语″重量平均分子量″是指聚合物分子量的特定量度。重量平均分子量计算如下：测定许多聚合物分子的分子量；加上这些重量的二次方；然后除以分子的总重量。

短语″数量平均分子量″是指聚合物分子量的特定量度。数量平均分子量是个体聚合物分子的分子量的简单平均。通过测量n聚合物分子的分子量，加和重量，并除以n来进行确定。

如在此使用的术语″杂原子″是指除了碳或氢以外的任何元素的原子。优选的杂原子是硼、氮、氧、磷、硫和硒。

术语″烷基″是指饱和的脂肪烃基，包括直链烷基、支链烷基、环烷基(脂环)基团、烷基取代的环烷基基团、和环烷基取代的烷基。在优选的实施方案中，在其主链中直链或支链烷基具有30或更少的碳原子(例如对于直链为C₁-C₃₀，对于支链为C₃-C₃₀)，以及更优选为20或更少。同样，优选的环烷基在其环状结构中具有3-10个碳原子，以及更优选在环状结构中具有5、6或7个碳。

除非另外说明碳的数目，如在此使用的″低级烷基″是指如上所定义的烷基，但是在其主链结构中具有1至10个碳原子，更优选具有1至6个碳原子。同样，″低级烯基″和″低级炔基″具有相似的链长度。优选的烷基是低级烷基。在优选的实施方案中，在此指明为烷基取代基是低级烷基。

在此使用的术语″芳烷基″是指被芳基(例如，芳香族的或杂原子的基团)取代的烷基。

术语″烯基″和″炔基″是指具有类似长度的不饱和脂肪基并可能取代如上所述的烷基，但是分别包含至少1个双键或三键。

术语邻、间和对分别适用于1，2-、1，3-和1，4-双取代的苯。例如，名称1，2-二甲苯和邻二甲苯是同义的。

缩写Me、Et、Ph、Tf、Nf、Ts、Ms分别表示甲基、乙基、苯基、三氟甲基磺酰基、九氟丁基磺酰基、对-甲苯磺酰基和甲基磺酰基。由具备本领域的普通技术的有机化学家使用的缩写的更全面的列表出现在Journal of Organic Chemistry每卷的创刊号中；这个列表一般以标准简写表(Standard List of Abbreviations)命名的表格出现。包含于所述列表中的缩写和由具备本领域普通技术的有机化学家使用的所有缩写由此引入作为参考。

如在此使用的，每种表述的定义，例如烷基、m、n等，当其在任何结构中出现不止一次时，规定为在相同结构中不依赖于其在别处的定义。

如在此使用的短语″保护基″是指保护潜在的反应官能团使其不发生不需要的化学变化的临时取代基。这种保护基的实例分别包括羧酸类的酯、醇的甲硅烷基醚以及醛和酮的缩醛和缩酮。保护基化学的领域已有综述(Greene，T.W.；Wuts，P.G.M.Protective Groups inOrganic Synthesis，2nded.；Wiley：New York，1991)。

为了本发明的目的，根据Periodic Table of the Elements，CASversion，Handbook of Chemistry and Physics，67th Ed.，1986-87封面内确定化学元素。

本发明的方法

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的方法，包括下列步骤：

将包括逆向热敏聚合物的组合物导入哺乳动物，其中所述的逆向热敏聚合物在所述的血管系统中凝胶化，由此暂时栓塞所述哺乳动物的血管位点。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中所述的哺乳动物是人。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中所述逆向热敏聚合物的转变温度在大约10℃和大约40℃之间。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中在其转变温度和生理学温度之间的热敏聚合物的体积是在该热敏聚合物低于其转变温度时体积的大约80％和大约150％之间。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中所述的逆向热敏聚合物是嵌段共聚物、无规共聚物、接枝聚合物、或支化共聚物。

在某些实施方案中，本发明涉及上述的方法，其中所述的逆向热敏聚合物是嵌段共聚物。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中所述的逆向热敏聚合物是聚氧化烯嵌段共聚物。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中所述的逆向热敏聚合物是泊洛沙姆或poloxamine。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中所述的逆向热敏聚合物是泊洛沙姆。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中所述的逆向热敏聚合物是泊洛沙姆407、泊洛沙姆338、泊洛沙姆188、poloxamine 1107或poloxamine 1307。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中所述的逆向热敏聚合物是泊洛沙姆407或泊洛沙姆338。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中所述逆向热敏聚合物的转变温度在大约10℃和和大约40℃之间；并且在其转变温度和生理学温度之间的逆向热敏聚合物的体积是在该逆向热敏聚合物低于其转变温度时体积的大约80％和大约150％之间。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中所述逆向热敏聚合物的转变温度在大约10℃和和大约40℃之间；在其转变温度和生理学温度之间的逆向热敏聚合物的体积是在该逆向热敏聚合物低于其转变温度时体积的大约80％和大约150％之间；并且所述的逆向热敏聚合物是嵌段共聚物、无规共聚物、接枝聚合物或支化共聚物。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中所述逆向热敏聚合物的转变温度在大约10℃和和大约40℃之间；在其转变温度和生理学温度之间的逆向热敏聚合物的体积是在该逆向热敏聚合物低于其转变温度时体积的大约80％和大约150％之间；并且所述的逆向热敏聚合物是嵌段共聚物。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中所述逆向热敏聚合物的转变温度在大约10℃和大约40℃之间；在其转变温度和生理学温度之间的逆向热敏聚合物的体积是在该逆向热敏聚合物低于其转变温度时体积的大约80％和大约150％之间；并且所述的逆向热敏聚合物是聚氧化烯嵌段共聚物。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中所述逆向热敏聚合物的转变温度在大约10℃和大约40℃之间；在其转变温度和生理学温度之间的逆向热敏聚合物的体积是在该逆向热敏聚合物低于其转变温度时体积的大约80％和大约150％之间；并且所述的逆向热敏聚合物是泊洛沙姆或poloxamine。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中所述逆向热敏聚合物的转变温度在大约10℃和和大约40℃之间；在其转变温度和生理学温度之间的逆向热敏聚合物的体积是在该逆向热敏聚合物低于其转变温度时体积的大约80％和大约150％之间；并且所述的逆向热敏聚合物是泊洛沙姆。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中该逆向热敏聚合物具有大约1.5至大约1.0的多分散指数。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中该逆向热敏聚合物具有大约1.2至大约1.0的多分散指数。

在某些实施方案中，本发明涉及暂时栓塞哺乳动物中血管位点的上述方法，其中该逆向热敏聚合物具有大约1.1至大约1.0的多分散指数。

实施例

现在大略地描述本发明，可通过参考下列实施例容易地理解本发明，包括这些实施例只是为了例证性地说明本发明的某些方面和实施方案，而不是为了限制本发明。

实施例1

聚合物制剂

将纯化的泊洛沙姆407(多分散指数，1.06)(HinsbarLaboratories，Clawson，MI，美国)边搅拌边缓慢加入冰冷的盐水，达到最终制剂所需要浓度的2倍。当泊洛沙姆开始溶解时，向终体积加入冰冷的造影剂(Omnipaque 300，Amersham Health，Princeton，NJ，美国)。在冰浴中将最初的浆液搅拌过夜，然后通过过滤灭菌。对于体外实验，加入1滴食用色素帮助目测评估溶解。

实施例2

暂时性栓塞的体外模型

使用体外模型来研究多种浓度(14-24％(w/w))的泊洛沙姆407的凝胶溶解时间。体外模型由充满200-400微米大小玻璃珠的5mL柱子组成，模拟毛细血管床(图1a)。利用Harvard泵以400mL/min的流速灌流浸于38℃加热的水浴中的柱子。柱子周围的旁路用于在闭塞周围的液流转向。在典型的实验中，通过共轴的导管从玻璃柱上端2厘米注射1mL的聚合物溶液。通过凝胶的消失和经过柱子的流动恢复可视地确定溶解的时间。图1b中说明了依赖于浓度的泊洛沙姆407溶解时间。通常，与体内实验相比，体外溶解被大大地延迟了。例如，发现22％(w/w)的浓度在体内闭塞动脉10-90分钟，而体外闭塞持续了8小时以上。

实施例3

体内的暂时性栓塞

体内血管闭塞

用于动物实验的方法是根据加拿大委员会对动物管理的指导原则经公共动物管理委员会批准的。在全身麻醉下进行所有的血管内过程。用肌内注射乙酰丙嗪(0.1mg/kg)、胃长宁(0.01mg/kg)和布托啡诺(0.1mg/kg)镇静8只重量为10至15kg的比格尔犬，并用静脉注射戊硫代巴比妥(15mg/kg)进行麻醉。给动物人工换气并且用2％的异氟烷保持外科手术的麻醉状态。在介入期间泊洛沙姆407(22％)保存在冰上。含有盐水的注射器也保存在冰上以在注射泊洛沙姆前立刻冷却导管。

然后选择用于大多数栓塞的经过5-F导管的快速注射(Balt，Montmorency，法国)。通过经皮肤的转股骨静脉和动脉途径利用5F导引器套(Cordis Corporation，Miami，FL，美国)进行导管插入术。通过注射大约3mL的泊洛沙姆407(22％)，动物经受右侧叶间肺动脉和右侧肾动脉的暂时性闭塞。

在栓塞后5、10、20或30分钟和材料溶解后，通过进行血管造影术连续地研究所有的血管闭塞。在所有的动物中进行对侧肾的血管造影照片以将血管造影的动脉和泊洛沙姆407溶解后的实质阶段与正常的肾脏进行比较。利用从股鞘中取出的血液在各个步骤前和步骤后立即测量6只狗中自动的凝固时间。在一周时重复进行跟踪血管造影的研究以排除任何延迟效应，例如在经受瞬时闭塞的动脉水平上新内膜的形成。在处死前立刻探测多种其它血管位点的暂时性闭塞以避免可能与瞬时闭塞一起发生的临床并发症。这些包括腰部和肝的动脉、旋绕的股静脉，以及最经常为左侧颈总动脉(n＝5)。也尝试包括髂静脉(n＝3)和腔(n＝3)的大静脉闭塞来用于静脉用药。

也在2只兔和1只猪中测试泊洛沙姆407闭塞，以评估使用泊洛沙姆的可靠瞬时闭塞是否特异于所研究的种属。利用如上所述在狗中的相同技术在1个动物中进行猪肾、股骨、内髂和肺部动脉的栓塞。也在兔中研究中央耳状动脉的暂时性闭塞。用肌肉注射乙酰丙嗪(0.75mg/kg)和胃长宁(0.01mg/kg)镇静2只重量为2.5-3.0kg的新西兰兔。用EMLA乳膏剂(利多卡因2.5％和丙胺卡因2.5％，AstraZeneca LP)提供手术前的镇痛。将导管插入耳朵的中央动脉并在造影剂血管造影术后用0.05和0.1mL的泊洛沙姆407(22％)栓塞。评估动脉的外观、血流和恢复以及耳朵的状态并且与仅仅注射了生理盐水的对侧耳朵相比较。

所有的叶间肺动脉可以被阻塞，并且可靠地在10至20分钟内重通。最短的闭塞时间与亚闭塞相关，从远端至近端的血管内腔填充越完全闭塞时间越长。在任何情况下，肾动脉可完全被闭塞。在大约80分钟发生重通，经常比在肺动脉水平看到的有略微更长的闭塞时间。栓塞不导致任何放射照相的异常并且在溶解后肾的血管造影照片是对称的(图3)。

在尸检时肺和肾脏在宏观上是完整的(图3)。肺部或肾的动脉未显示组织病理学异常。经常在泊洛沙姆407注射侧的对照侧面上发现新内膜加厚的小聚焦面，这归因于导管创伤。经泊洛沙姆407瞬时动脉阻塞1周后肾和肺的实质是正常的。

在处死前即刻用泊洛沙姆407阻塞颈动脉。在直接检查尸体时可发现该聚合物。与对侧动脉相比，血管内层没有可见的改变(图4)。

可用大量的泊洛沙姆407以快速率注射来阻塞高流动性的大静脉结构(n＝3)。在1个案例中腔的部分闭塞伴随有凝块形成，唯一可见的凝块与整个研究中泊洛沙姆407的使用相关。这些注射导致观察到聚合物逸散至肺床，导致比直接的肺动脉注射泊洛沙姆栓塞物更迅速地溶解。在猪动脉中泊洛沙姆407栓塞导致在犬模型中相同的观察结果，在所有的位点闭塞了大约20分钟。

尸检

在尸检的时候进行主要动脉和末端器官的肉眼可见的照相。在来自任何可见异常的样品和没有异常的器官随机抽样的组织块中进行病理学研究。用苏木精-根皮红-藏红花和Movat′s戊铬染剂染色载片。与从来自泊洛沙姆注射对侧侧面的动脉、静脉、或末端器官制备的对照载片相平行地，研究了各个载片。

实施例4

血管内的暂时性栓塞

在跟踪血管造影照片的时候，探测潜在的血管内应用。经置于泊洛沙姆407闭塞近侧的2F微导管(Target Therapeutics Inc.，BostonScientific Corporation，Fremont，CA，美国)注射氰基丙烯酸酯，以测试该胶质是否能浸润泊洛沙姆，或在泊洛沙姆和管壁之间发生穿透(n＝4)。通过在1个肝动脉、1个腰动脉、1个旋绕的静脉和1个颈动脉中，邻近泊洛沙姆407注射氰基丙烯酸酯产生完全且永久的动脉阻塞。氰基丙烯酸酯不能穿越泊洛沙姆凝胶，也不能在泊洛沙姆407铸型和管壁之间形成浸润。

实施例5

导管血管造影术后股动脉的暂时性栓塞

在收回导管以探测潜在的泊洛沙姆407作为血管造影术后的股骨闭合试剂的时候，股骨动脉也是暂时闭塞的(n＝3)。当使用泊洛沙姆407进行股骨闭合时，可从股骨动脉收回导管而没有任何挤压或流血。然而15至32分钟后，在任何情况下伤口突然再打开，而必须进行常规挤压来止血。注射泊洛沙姆407不产生任何凝血时间的变化。表1中概括了常规血液学和生物化学测试的结果。

实施例6

实验室研究

在操作前后即刻、在24小时和1周时，在4只狗中进行常规的血液学和生物化学多重分析。因为许多生理学的值受到禁食、麻醉、血管造影术、和恢复期的干扰，将常规的实验室试验与其它6只接受铂线圈栓塞的狗进行比较。用独立样品T检验作出统计比较。

将泊洛沙姆407用于泊洛沙姆测试中。

表1：常规血液学和生物化学测试的结果

^＊p＝0.031，独立的样品T检验

在经受线圈栓塞的对照系统的狗中，存在许多相似的生理变化，例如手术后血液立即稀释，在24小时血液浓缩并且白细胞计数升高，我们将这个发现归因于对手术的应激。在24小时甘油三酸酯升高，在经受线圈栓塞的动物中未发现异常(参见上述的表1)。

实施例7

犬动脉的暂时性栓塞--栓塞物的快速溶解

用泊洛沙姆407阻塞狗的肺动脉。阻塞后立即交换导管并在闭塞的近侧注射冷的盐水。泊洛沙姆407溶解并且该动脉没有任何闭塞。这个实验表明栓塞的符合需要的可逆性。

实施例8

兔中的暂时性栓塞

在2只兔中，将导管插入中央耳状动脉并用泊洛沙姆407(22％)栓塞。在两个动物中的闭塞时间都是大约90分钟。通过直接观测和放大倍数直接证实了重通(图5)。在通过旁支以退行性的方式提供的动脉节段水平处，材料开始溶解。首先沿着节段通路重通内腔。一旦开始这个过程，溶解变得加速并且在另外的30分钟内完成溶解。在一段时期的瞬时局部缺血后，耳朵看来似乎是正常的。与两侧的泊洛沙姆407闭塞相比，在导管的尖端处的瞬时痉挛持续了更长时间。追踪兔子1周，在耳朵或中央耳状动脉水平处没有任何可见的并发症。

实施例9

可溶性泊洛沙姆的药物动力学研究

为了测定溶解后体内泊洛沙姆407的半衰期，从用3mL泊洛沙姆407(22％)(w/w)闭塞右下叶肺动脉后15分钟至120小时的1只狗收集血液。通过HPLC测定泊洛沙姆407的血浆浓度。简而言之，通过用四氢呋喃反复提取而从血浆等分定量回收泊洛沙姆407。合并提取物并且通过减压蒸发除去溶剂。将残余物再溶解在已知体积的四氢呋喃中，加入包含UV吸收生色团的衍生化试剂，并容许反应进行完成。通过凝胶渗透色谱法(GPCHPLC)从过量的衍生化试剂和血浆成分中分离泊洛沙姆407衍生物并利用UV检测显现。通过将泊洛沙姆衍生物峰面积与一系列以类似方式制备的外部标准进行比较来定量存在于血浆中的泊洛沙姆407的数量。检测极限是每mL血浆大约2μg泊洛沙姆407。

图2中显示了用3mL瞬时闭塞右肺动脉后溶解的泊洛沙姆407的血浆浓度。100小时后在血浆中不能检测到泊洛沙姆407。

实施例10

利用泊洛沙姆338进行的栓塞

利用如上所述的实验方法，用大约6mL包含18wt％聚合物和50％不透射线的造影剂Omnipaque^TM的冷却、分馏的泊洛沙姆338(多分散指数，1.08)溶液闭塞比格尔犬的肝动脉。动脉保持阻塞45分钟并通过注射冷盐水再打开它。用大约4mL相同的泊洛沙姆338溶液阻塞右肺动脉大约20分钟，其后聚合物溶解并且再次打开该动脉。

实施例11

利用Poloxamine 1107的进行栓塞

利用如上所述的实验方法，用大约6mL包含20wt％聚合物和50％不透射线的造影剂Omnipaque^TM的冷却、分馏的poloxamine 1107溶液封闭比格尔犬的肝动脉。动脉保持阻塞大约20分钟并通过溶解聚合物而再打开它。用大约3mL相同的poloxamine 1107溶液阻塞右侧的肾动脉，大约5分钟后再次打开该动物。

实施例12

利用Poloxamine 1307的进行栓塞

利用如上所述的实验方法，用大约5mL包含21wt％聚合物和50％不透射线的造影剂Omnipaque^TM的冷却、分馏的poloxamine 1307溶液栓塞比格尔犬的肝动脉。在10分钟时血流部分恢复，而在15分钟时完全恢复。利用相同的poloxamine 1307溶液阻塞部分肩动脉，保持阻塞大约10分钟，其后血流恢复。

引用的其它专利和出版物

1.美国专利申请公开号US 2002/0137973A1.

2.Blood Coagulation and Fibrinolysis，7，109-113(1996).

3.Life Sciences，Vol.65，No.21，pp.PL 261-266，(1999).

4.Nonionic Surfactants Polyoxyalkylene Block Copolymers；edited by Vaugh M.Nace；Marcel Dekker，Inc.，New York.

5.美国专利号5,834,007

6.国际公开专利申请号WO 00/45868

7.美国专利号5,525,334

8.J.Biomater.Sci.Polymer Edn.Vol.7，No.9，pp.795-804(1996).

9.TIBTECH October 2000(Vol.18)412-420.

10.Advanced Drug Delivery Reviews 53321-339(2001).

11.Advanced Drug Delivery Reviews 31197-221(1998).

12.美国专利号4,268,495.

13.美国专利号6,333,194.

14.美国专利号5,744,163.

15.美国专利号5,605,687.

16.美国专利号5,470,568.

17.美国专利申请公开号US 2002/0077461Al.

18.Schmolka，″A Review of Block Polymer Surfactants″J.Am.Oil Chemists′Soc.54：110-116(1977).

19.Matsumaru，Y.et al.″Application of thermosensitive polymersas a new embolic material for intravascular neurosurgery″Journal ofBiomaterials Science：Polymer Edition，Vol.7，No.9，795(1996).

20.美国专利号6,316,011

作为参考文献的引入

在此引用的所有专利和出版物由此引入作为参考

等价物

本领域的技术人员将认识到或能够确定仅仅使用常规实验方法就可以获得在此所描述的本发明的具体实施方案的许多等价物。这种等价物也包括在下列的权利要求中。

Claims (14)

1.逆向热敏聚合物在制备用于暂时栓塞哺乳动物中血管位点的药物组合物中的用途，其中所述逆向热敏聚合物在血管位点形成凝胶，由此暂时栓塞血管位点，并且通过使凝胶变为液体而终止暂时栓塞；

优选地，其中所述的哺乳动物是人。

2.权利要求1的用途，其中所述的逆向热敏聚合物的转变温度在大约10℃和大约40℃之间。

3.权利要求1的用途，其中在其转变温度和生理学温度之间的逆向热敏聚合物的体积为在该逆向热敏聚合物低于其转变温度时体积的大约80％和大约150％体积之间。

4.权利要求1的用途，其中所述的逆向热敏聚合物是嵌段共聚物、无规共聚物、接枝聚合物或支化的共聚物；

优选地，其中所述的逆向热敏聚合物是嵌段共聚物；

更优选地，其中所述的逆向热敏聚合物是聚氧化烯嵌段共聚物；

更优选地，其中所述的逆向热敏聚合物是泊洛沙姆或poloxamine；

更优选地，其中所述的逆向热敏聚合物是泊洛沙姆；

更优选地，其中所述的逆向热敏聚合物是泊洛沙姆407、泊洛沙姆338、泊洛沙姆188、poloxamine 1107或poloxamine 1307；

更优选地，其中所述的逆向热敏聚合物是泊洛沙姆407或泊洛沙姆338。

5.权利要求1的用途，其中所述逆向热敏聚合物的转变温度在大约10℃和大约40℃之间；并且该逆向热敏聚合物在其转变温度和生理学温度之间的体积为在该逆向热敏聚合物低于其转变温度时体积的大约80％和大约150％之间。

6.权利要求1的用途，其中所述逆向热敏聚合物的转变温度在大约10℃和大约40℃之间；该逆向热敏聚合物在其转变温度和生理学温度之间的体积为在该逆向热敏聚合物低于其转变温度时体积的大约80％和大约150％之间；并且所述的逆向热敏聚合物是嵌段共聚物、无规共聚物、接枝聚合物、或支化的共聚物；

优选地，所述的逆向热敏聚合物是嵌段共聚物；

更优选地，所述的逆向热敏聚合物是聚氧化烯嵌段共聚物；

更优选地，所述的逆向热敏聚合物是泊洛沙姆或poloxamine； 

更优选地，所述的逆向热敏聚合物是泊洛沙姆。

7.权利要求1或4的用途，其中包括逆向热敏聚合物的所述组合物是用导管导入所述哺乳动物的血管系统的。

8.权利要求1或4的用途，其中所述的血管位点邻近于外科手术切口、出血处、癌性组织、子宫纤维瘤、肿瘤或器官。

9.权利要求1或4的用途，其中包括逆向热敏聚合物的所述组合物将所述的血管位点栓塞少于大约12小时；

优选地，其中包括逆向热敏聚合物的所述组合物将所述的血管位点栓塞少于大约9小时；

更优选地，其中包括逆向热敏聚合物的所述组合物将所述的血管位点栓塞少于大约6小时；

更优选地，其中包括逆向热敏聚合物的所述组合物将所述的血管位点栓塞少于大约3小时；

更优选地，其中包括逆向热敏聚合物的所述组合物将所述的血管位点栓塞少于大约2小时；

更优选地，其中包括逆向热敏聚合物的所述组合物将所述的血管位点栓塞少于大约1小时；

更优选地，其中包括逆向热敏聚合物的所述组合物将所述的血管位点栓塞少于大约30分钟。

10.权利要求1或4的用途，其中所述的逆向热敏聚合物具有大约1.5至大约1.0的多分散指数；

优选地，其中所述的逆向热敏聚合物具有大约1.2至大约1.0的多分散指数；

更优选地，其中所述的逆向热敏聚合物具有大约1.1至大约1.0的多分散指数。

11.权利要求1的用途，其中包括逆向热敏聚合物的所述组合物进一步包括对比增强试剂；

优选地，其中所述的对比增强试剂选自不透射线的材料、顺磁性物质、重原子、过渡金属、镧系元素、锕系元素、染料和包含放射性核素的材料。

12.权利要求1的用途，其中包括逆向热敏聚合物的所述组合物进一步包括生物活性剂； 

优选地，其中生物活性剂选自抗炎药、抗生素、抗菌剂、抗病毒剂、镇痛剂、抗增殖剂和化疗剂。

13.权利要求1或4的用途，其中由于向血管系统中注入含水溶液而使凝胶溶解；

优选地，其中所述含水溶液处于或低于逆向热敏聚合物的凝胶转换温度；

优选地，其中所述含水溶液是盐水。

优选地，其中所述含水溶液是处于或低于逆向热敏聚合物的凝胶转换温度的盐水。

14.权利要求1或4的用途，其中由于邻近所述凝胶的局部温度的下降而使凝胶溶解；

优选地，其中所述局部温度的下降是由冷却血管系统的外部实现的；

优选地，其中所述冷却是通过向血管系统的外部施用处于或低于逆向热敏聚合物的凝胶转换温度的含水溶液或含水悬液而实现的。 

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