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CN102711824A - 针对朗格汉斯细胞的疫苗 - Google Patents

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CN102711824A
CN102711824A CN2010800515192A CN201080051519A CN102711824A CN 102711824 A CN102711824 A CN 102711824A CN 2010800515192 A CN2010800515192 A CN 2010800515192A CN 201080051519 A CN201080051519 A CN 201080051519A CN 102711824 A CN102711824 A CN 102711824A
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CN
China
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seq
langerin
antibody
antigen
cancer
Prior art date
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CN2010800515192A
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J·F·班彻罗
S·祖拉夫斯基
G·祖拉夫斯基
E·克莱沙维斯基
吴相坤
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Baylor Research Institute
Original Assignee
Baylor Research Institute
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Publication date
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Abstract

本发明包括经分离的抗-Langerin疫苗，用于制备和使用经分离的抗-Langerin抗体或其结合片段和在所述经分离的抗-Langerin抗体的羧基末端的一个或多个抗原肽的方法，其中当存在两个或多个抗原肽时，所述抗原肽由含有至少一个糖基化位点的一个或多个接头肽分开。本发明还包括了用于表达抗-Langerin抗原递送载体的经分离的载体，其制造及用途。

Description

针对朗格汉斯细胞的疫苗
发明技术领域
本发明一般地涉及疫苗领域，以及更具体地涉及组合物和方法，该组合物和方法用于将抗原靶向和递送到用于抗原呈递的朗格汉斯细胞，所述的靶向和递送使用高亲和性抗-Langerin单克隆抗体及所述单克隆抗体的融合蛋白进行。
背景技术
在不限制本发明的范围的前提下，将其背景结合抗原呈递进行描述。
树突细胞（DC）是专职抗原呈递细胞（APC），其诱导并维持免疫应答，并且在建立耐受性和免疫性两者中都是基本的。DC捕获抗原并将其呈递给CD4+T细胞，所述的CD4+T细胞随后决定抗原特异性CD8+T细胞的数量和质量。存在DC的亚型1,2，其包括髓样DC和浆细胞样DC（分别为mDC和pDC）。
此前的Langerin相关试剂包括在授权给Duvert-Frances等人的第6,878,528号美国专利中所教导的那些，其包括编码哺乳动物朗格汉斯细胞抗原的多核苷酸，所述的抗原包括经纯化的名为Langerin的哺乳动物DC细胞表面蛋白，编码Langerin的核酸和特异性地结合Langerin的抗体。
其他的抗-DC相关试剂在Bowdish等人提交的第20060257412号美国专利公开中教导，其包括了通过诱导抗原呈递细胞的耐受性诱导抗原呈递来治疗自身免疫疾病。简单来说，此申请教导了抗原呈递细胞的抗体可以用于干预抗原呈递细胞和免疫细胞的相互作用，所述的免疫细胞包括T细胞。可以将肽连接到抗体从而产生对该肽的免疫应答，所述的肽例如与自身免疫关联的那些。
发明内容
在一个实施方案中，本发明包括用于激活B细胞应答的组合物和方法，所述组合物和方法通过将抗原靶向到抗原呈递细胞，同时恰当地激活PAC来激活T细胞和B细胞应答。一个实施方案是疫苗，所述的疫苗包含经分离的抗-Langerin抗体或其结合片段以及位于该抗-Langerin抗体的羧基末端的一个或多个抗原肽，其中当存在两个或多个抗原时，其通过一个或多个含有至少一个糖基化位点的接头肽分开。在一个方面，所述的抗体结合片段选自Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fc或者ScFv片段。在另一个方面，所述的抗体包含一个或多个互补决定区，所述互补决定区选自：
ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS                (SEQ          ID          NO.：           45)；SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA         (SEQ        ID         NO.：        46)；VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA           (SEQ           ID          NO.：           47)；SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC(SEQ ID NO.：48)；
或者其直接的等价物。在另一个方面，所述的抗原肽是癌症抗原，所述癌症抗原选自：
MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWV(SEQ                  ID                 NO.：              9)；LTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHD(SEQID                             NO.：                         10)；LMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVIS(SEQID                            NO.：                          11)；NDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERP(SEQ ID NO.：12)；SLYTKVVHYRKWIKDTIVANP(SEQ ID NO.：13)；IMDQVPFSV(SEQ ID NO.：14)；ITDQVPFSV(SEQ ID NO.：15)；YLEPGPVTV(SEQ ID NO.：16)；YLEPGPVTA(SEQ ID NO.：17)；KTWGQYWQV                       (SEQ         ID           NO.：        18)；APLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP(SEQ ID NO.：19)；
DTTEPATPTTPVTTPTTTKVPRNQDWLGVSRQLRTKAWNRQLYPEWTEAQRLDCWRGGQVSLKVSNDGPTLIGANASFSIALNFPGSQKVLPDGQVIWVNNTIINGSQVWGGQPVYPQETDDACIFPDGGPCPSGSWSQKRSFVYVWKTWGQYWQVLGGPVSGLSIGTGRAMLGTHTMEVTVYHRRGSQSYVPLAHSSSAFTITDQVPFSVSVSQLRALDGGNKHFLRNQ (SEQ   ID  NO.：20)；PLTFALQLHDPSGYLAEADLSYTWDFGDSSGTLISRAXVVTHTYLEPGPVTAQVVLQAAIPLTSCGSSPVPAS            (SEQ           ID           NO.：          21)；GTTDGHRPTAEAPNTTAGQVPTTEVVGTTPGQAPTAEPSGTTSVQVPTTEVISTAPVQMPTAESTGMTPEKVPVSEVMGTTLAEMSTPEATGMTPAEVSIVVLSGTTAA   (SEQ   ID  NO.：22)；QVTTTEWVETTARELPIPEPEGPDASSIMSTESITGSLGPLLDGTATLRLVKRQVPLDCVLYRYGSFSVTLDIVQ            (SEQ            ID           NO.：         23)；GIESAEILQAVPSGEGDAFELTVSCQGGLPKEACMEISSPGCQPPAQRLCQPVLPSPACQLVLHQILKGGSGTYCLNVSLADTNSLAVVSTQLIVPGILLTGQEAGLGQ      (SEQ  ID  NO.：24)；MEMKILRALNFGLGRPLPLHFLRRASKIGEVDVEQHTLAKYLMELTMLDY (SEQ ID NO.：25)；DWLVQVQMKFRLLQETMYMTVSIIDRFMQNNCVPKK      (SEQ   ID    NO.：    26)；MEHQLLCCEVETIRRAYPDANLLNDRVLRAMLKAEETCAPSVSYFKCV (SEQ ID NO.：  27)；QKEVLPSMRKIVATWMLEVCEEQKCEEEVFPLAMNYLDRFLSLEPVKKSRLQLLGATCMFVASKMKETIPLTAEKLCIYTDNSIRPEELLQMELL    (SEQ     ID      NO.：      28)；LVNKLKWNLAAMTPHDFIEHFLSKMPEAEENKQIIRKHAQTFVALCATDVKFISNPPSMV (SEQID                 NO.：                  29)；或AAGSVVAAVQGLNLRSPNNFLSYYRLTRFLSRVIKCDPDCLRACQEQIEALLESSLRQAQQNMDPKAAEEEEEEEEEVDLACTPTDVRDVDI(SEQ ID NO.：30)，
或其结合片段。在另一个方面，所述的抗原肽是病毒抗原，所述的病毒抗原选自：
VGFPVTPQVPLRPMTYKAAVDLSHFLKEKGGL       (SEQ       ID       NO.：31)；HTQGYFPDWQNYTPGPGVRYPLTFGWLYKL (SEQ ID NO.：32)；EKIRLRPGGKKKYKLKHIV(SEQ ID NO.：33)；NPPIPVGEIYKRWIILGLNKIVRMYSPTSILD (SEQ ID NO.：34)；AIFQSSMTKILEPFRKQNPDIVIYQYMDDLY      (SEQ       ID      NO.：   35)；DTICIGYHANNSTDTVDTVLEKNVTVTHSVNLLEDSHNGKLCRLKGIAPLQLGKCNIAGWLLGNPECDPLLPVRSWSYIVETPNSENGICYPGDFIDYEELREQLSSVSSFERFEIFPKESSWPNHNTNGVTAACSHEGKSSFYRNLLWLTEKEGSYPKLKNSYVNKKGKEVLVLWGIHHPPNSKEQQNLYQNENAYVSVVTSNYNRRFTPEIAERPKVRDQAGRMNYYWTLLKPGDTIIFEANGNLIAPMYAFALSRGFGSGIITSNASMHECNTKCQTPLGAINSSLPYQNIHPVTIGECPKYVRSAKLRMV(SEQ ID NO.：36)；
DQICIGYHANNSTEQVDTIMEKNVTVTHAQDILEKKHNGKLCDLDGVKPLILRDCSVAGWLLGNPMCDEFINVPEWSYIVEKANPVNDLCYPGDFNDYEELKHLLSRINHFEKIQIIPKSSWSSHEASLGVSSACPYQGKSSFFRNVVWLIKKNSTYPTIKRSYNNTNQEDLLVLWGIHHPNDAAEQTKLYQNPTTYISVGTSTLNQRLVPRIATRSKVNGQSGRMEFFWTILKPNDAINFESNGNFIAPEYAYKIVKKGDSTIMKSELEYGNCNTKCQTPMGAINSSMPFHNIHPLTIGECPKYVKSNRLVLA(SEQ ID NO.：37)；或
PIVQNIQGQMVHQAISPRTLNAWVKVVEEKAFSPEVIPMFSALSEGATPQDLNTMLNTVGGHQAAMQMLKETINEEAAEWDRVHPVHAGPIAPGQMREPRGSDIAGTTSTLQEQIGWMTNNPPIPVGEIYKRWIILGLNKIVRMYSPTSILDIRQGPKEPFRDYVDRFYKTLRAEQASQEVKNWMTETLLVQNANPDCKTILKALGPAATLEEMMTACQGVGGPGHKARVL(SEQ ID NO.：38)。
在另一个方面，当存在两个或多个抗原时，所述的抗原由一个或多个肽接头隔开，所述的肽接头选自：
SSVSPTTSVHPTPTSVPPTPTKSSP    (SEQ    ID   NO.：39)；
PTSTPADSSTITPTATPTATPTIKG(SEQ ID NO.：40)；TVTPTATATPSAIVTTITPTATTKP(SEQ IDNO.：41)；或者TNGSITVAATAPTVTPTVNATPSAA        (SEQ  ID  NO.：42)。在另一个方面，所述的抗-Langerin抗体选自以下各对的氨基酸序列或其结合片段：SEQ IDNOS.：2和4；6和7；52和54；56和58；以及78和80。在另一个方面，所述的抗-Langerin抗体是以下各对核酸序列的表达产物：SEQ ID NOS.：1和3；5和6；51和53；55和57；以及77和79。在另一个方面，所述的抗-Langerin抗体或其结合片段是以下的至少一个：ATCC登录号为PTA-9852的15B10、ATCC登录号为PTA-9853的2G3、91E7、37C1或者4C7及其人源化的衍生物。在另一个方面，所述抗-Langerin抗体或其结合片段和抗原肽为融合蛋白。
本发明的另一个实施方案包括经分离的核酸载体，所述的载体表达抗-Langerin抗体或其结合片段和两个或多个位于所述抗-Langerin抗体的轻链、重链或者轻链和重链两者的羧基末端的抗原肽，其中当存在两个或多个抗原肽时，所述的抗原肽通过一个或多个含有至少一个糖基化位点的接头肽分隔开。在一个方面，所述抗原肽是癌症肽，所述的癌症肽选自肿瘤相关抗原，所述肿瘤相关抗原选自：CEA、前列腺特异性抗原（PSA），HER-2/neu，BAGE，GAGE，MAGE 1-4、6和12，MUC（黏蛋白）（例如MUC-1、MUC-2等等），GM2和GD2神经节苷脂，ras，myc，酪氨酸酶，MART（黑色素瘤抗原），MARCO-MART，细胞周期蛋白B1，细胞周期蛋白D，Pmel 17（gp100），GnT-V内含子V序列（N-乙酰葡糖胺基转移酶V内含子V序列），前列腺Ca psm，前列腺血清抗原（PSA），PRAME（黑色素瘤抗原），β-联蛋白，MUM-1-B（黑色素瘤普遍存在的突变基因产物），GAGE（黑色素瘤抗原）1，BAGE（黑色素瘤抗原）2-10，c-ERB2（Her2/neu），EBNA（EB病毒核抗原）1-6，gp75，人乳头瘤病毒（HPV）E6和E7，p53，肺耐药蛋白（lung resistance protein）（LRP），Bcl-2和Ki-67。在另一个方面，所述的抗原肽是选自肿瘤相关抗原的癌症肽，所述的肿瘤相关抗原包括来自以下疾病的抗原：白血病和淋巴瘤，神经肿瘤如星形细胞瘤或成胶质细胞瘤，黑色素瘤，乳腺癌，肺癌，头颈部癌，肠胃肿瘤，胃癌，结肠癌，肝癌，胰腺癌，泌尿生殖肿瘤如宫颈癌、子宫癌、卵巢癌、阴道癌、睾丸癌、前列腺癌或者阴茎癌，骨肿瘤，血管瘤或者唇、鼻咽、咽和口腔、食道、直肠、胆囊、胆系、喉、肺和支气管、膀胱、肾脏、脑和神经系统的其他部分、甲状腺的癌症，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤，多发性骨髓瘤和白血病。在另一个方面，所述的抗原肽选自H1N1流感毒株的甲型流感红细胞凝集素HA-1、HLA-A201-FluMP(58-66)肽(GILGFVFTL)的四聚体、禽流感(HA5-1)、来自热纤梭菌（C.thermocellum）的锚定蛋白（dockerin）功能域（doc）、HIV gagp24(gag)、或者一条HIV肽链(Lipo5)、PSA(KLQCVDLHV)四聚体或者得自HIVgag的p24-PLA。在另一个方面，所述的抗-Langerin抗体选自下列各对的氨基酸序列或其结合片段：SEQ ID NOS.:2和4；6和7；52和54；56和58；以及78和80。在另一个方面，所述抗-Langerin抗体是下列各对核酸序列的表达产物，所述的各对核酸序列是SEQ ID NOS.:1和3；5和6；51和53；55和57；以及77和79。在另一个方面，所述抗-Langerin抗体或其结合片段是ATCC登录号为PTA-9852的15B10、ATCC登录号为PTA-9853的2G3、91E7、37C1或者4C7及其人源化的衍生物中的至少一个。在另一个方面，所述抗-Langerin抗体或其结合片段和抗原肽为融合蛋白。
本发明的再另一个实施方案包括增强T和B细胞应答的方法，该方法包括：将需要接种的受试者使用有效量的疫苗进行接种，所述的疫苗包含分离的融合蛋白，所述融合蛋白包含抗-Langerin抗体或其结合部分以及连接到所述抗-Langerin抗体的羧基末端的一个或多个抗原肽。在一个方面，所述抗原肽是癌症肽，所述的癌症肽选自肿瘤相关抗原，所述的肿瘤相关抗原选自：CEA，前列腺特异性抗原（PSA），HER-2/neu，BAGE，GAGE，MAGE 1-4、6和12，MUC（黏蛋白）（例如MUC-1、MUC-2等等），GM2和GD2神经节苷脂，ras，myc，酪氨酸酶，MART（黑色素瘤抗原），MARCO-MART，细胞周期蛋白B1，细胞周期蛋白D，Pmel 17（gp100），GnT-V内含子V序列（N-乙酰葡糖胺基转移酶V内含子V序列），前列腺Ca psm，前列腺血清抗原（PSA），PRAME（黑色素瘤抗原），β-联蛋白，MUM-1-B（黑色素瘤普遍存在的突变基因产物），GAGE（黑色素瘤抗原）1，BAGE（黑色素瘤抗原）2-10，c-ERB2（Her2/neu），EBNA（EB病毒核抗原）1-6，gp75，人乳头瘤病毒（HPV）E6和E7，p53，肺耐药蛋白（LRP），Bcl-2和Ki-67。在另一个方面，所述的抗原肽是选自肿瘤相关抗原的癌症肽，所述的肿瘤相关抗原包括来自以下疾病的抗原：白血病，淋巴瘤，神经肿瘤如星形细胞瘤或成胶质细胞瘤，黑色素瘤，乳腺癌，肺癌，头颈部癌，肠胃肿瘤，胃癌，结肠癌，肝癌，胰腺癌，泌尿生殖肿瘤如宫颈癌、子宫癌、卵巢癌、阴道癌、睾丸癌、前列腺癌或者阴茎癌，骨肿瘤，血管瘤或者唇、鼻咽、咽和口腔、食道、直肠、胆囊、胆系、喉、肺和支气管、膀胱、肾脏、脑和神经系统的其他部分、甲状腺的癌症，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤，多发性骨髓瘤和白血病。在另一个方面，所述的抗原肽选自来自H1N1流感毒株的甲型流感红细胞凝集素HA-1、HLA-A201-FluMP(58-66)肽(GILGFVFTL)的四聚体、禽流感(HA5-1)、来自H1N1流感毒株的甲型流感红细胞凝集素HA-1（HA1-1）、来自热纤梭菌的锚定蛋白功能域（doc）、HIV gag p24(gag)或者一条HIV肽链(Lipo5)、PSA(KLQCVDLHV)四聚体或者得自HIVgag的p24-PLA。
再另一个实施方案是制备抗-Langerin-抗原的融合蛋白的方法，所述的方法包括：在宿主细胞中表达经分离的融合蛋白，所述的融合蛋白包含抗-Langerin抗体或其结合片段，所述的融合蛋白在抗-Langerin抗体或其结合片段的羧基末端包含一个或多个抗原肽，其中当存在两个或多个癌症肽时，所述的癌症肽通过一个或多个接头隔开，至少一个接头包含糖基化位点；并且分离该融合蛋白。在一个方面，将在宿主中表达的融合蛋白进一步地分离和纯化。在另一个方面，所述的宿主是真核细胞。在另一个方面，所述抗原肽是选自肿瘤相关抗原的癌症肽，所述肿瘤相关抗原选自CEA，前列腺特异性抗原（PSA），HER-2/neu，BAGE，GAGE，MAGE 1-4、6和12，MUC相关蛋白（黏蛋白）（例如MUC-1、MUC-2等等），GM2和GD2神经节苷脂，ras，myc，酪氨酸酶，MART（黑色素瘤抗原），MARCO-MART，细胞周期蛋白B1，细胞周期蛋白D，Pmel 17（gp100），GnT-V内含子V序列（N-乙酰葡糖胺基转移酶V内含子V序列），前列腺Ca psm，前列腺血清抗原（PSA），PRAME（黑色素瘤抗原），β-联蛋白，MUM-1-B（黑色素瘤普遍存在的突变基因产物），GAGE（黑色素瘤抗原）1，BAGE（黑色素瘤抗原）2-10，c-ERB2（Her2/neu），EBNA（EB病毒核抗原）1-6，gp75，人乳头瘤病毒（HPV）E6和E7，p53，肺耐药蛋白（LRP），Bcl-2和Ki-67。在另一个方面，所述的抗原肽是选自肿瘤相关抗原的癌症肽，所述的肿瘤相关抗原包括来自以下疾病的抗原：白血病和淋巴瘤，神经肿瘤如星形细胞瘤或成胶质细胞瘤，黑色素瘤，乳腺癌，肺癌，头颈部癌，肠胃肿瘤，胃癌，结肠癌，肝癌，胰腺癌，泌尿生殖肿瘤如宫颈癌、子宫癌、卵巢癌、阴道癌、睾丸癌、前列腺癌或者阴茎癌，骨肿瘤，血管瘤或者唇、鼻咽、咽和口腔、食道、直肠、胆囊、胆系、喉、肺和支气管、膀胱、肾脏、脑和神经系统的其他部分、甲状腺的癌症，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤，多发性骨髓瘤和白血病。在另一个方面，所述的癌症肽选自以下的至少一种或其免疫原性的片段：
MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWV(SEQ                      ID                 NO.：              9)；LTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHD  (SEQID                             NO.：                            10)；LMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVIS  (SEQID                             NO.：                            11)；NDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERP(SEQ ID NO.：12)；SLYTKVVHYRKWIKDTIVANP(SEQ ID NO.：13)；IMDQVPFSV(SEQ ID NO.：14)；ITDQVPFSV(SEQ ID NO.：15)；YLEPGPVTV(SEQ ID NO.：16)；YLEPGPVTA(SEQ ID NO.：17)；KTWGQYWQV                       (SEQ         ID            NO.：        18)；APLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP (SEQ ID NO.：19)；
DTTEPATPTTPVTTPTTTKVPRNQDWLGVSRQLRTKAWNRQLYPEWTEAQRLDCWRGGQVSLKVSNDGPTLIGANASFSIALNFPGSQKVLPDGQVIWVNNTIINGSQVWGGQPVYPQETDDACIFPDGGPCPSGSWSQKRSFVYVWKTWGQYWQVLGGPVSGLSIGTGRAMLGTHTMEVTVYHRRGSQSYVPLAHSSSAFTITDQVPFSVSVSQLRALDGGNKHFLRNQ(SEQ   ID  NO.：20)；PLTFALQLHDPSGYLAEADLSYTWDFGDSSGTLISRAXVVTHTYLEPGPVTAQVVLQAAIPLTSCGSSPVPAS           (SEQ           ID            NO.：          21)；GTTDGHRPTAEAPNTTAGQVPTTEVVGTTPGQAPTAEPSGTTSVQVPTTEVISTAPVQMPTAESTGMTPEKVPVSEVMGTTLAEMSTPEATGMTPAEVSIVVLSGTTAA   (SEQ   ID  NO.：22)；QVTTTEWVETTARELPIPEPEGPDASSIMSTESITGSLGPLLDGTATLRLVKRQVPLDCVLYRYGSFSVTLDIVQ            (SEQ            ID            NO.：        23)；GIESAEILQAVPSGEGDAFELTVSCQGGLPKEACMEISSPGCQPPAQRLCQPVLPSPACQLVLHQILKGGSGTYCLNVSLADTNSLAVVSTQLIVPGILLTGQEAGLGQ     (SEQ  ID  NO.： 24)；MEMKILRALNFGLGRPLPLHFLRRASKIGEVDVEQHTLAKYLMELTMLDY (SEQ ID NO.：25)；DWLVQVQMKFRLLQETMYMTVSIIDRFMQNNCVPKK     (SEQ     ID     NO.：  26)；MEHQLLCCEVETIRRAYPDANLLNDRVLRAMLKAEETCAPSVSYFKCV (SEQ  ID  NO.：27)；QKEVLPSMRKIVATWMLEVCEEQKCEEEVFPLAMNYLDRFLSLEPVKKSRLQLLGATCMFVASKMKETIPLTAEKLCIYTDNSIRPEELLQMELL    (SEQ     ID      NO.：      28)；LVNKLKWNLAAMTPHDFIEHFLSKMPEAEENKQIIRKHAQTFVALCATDVKFISNPPSMV (SEQID                 NO.：                  29)；或
AAGSVVAAVQGLNLRSPNNFLSYYRLTRFLSRVIKCDPDCLRACQEQIEALLESSLRQAQQNMDPKAAEEEEEEEEEVDLACTPTDVRDVDI(SEQ ID NO.：30)。
在另一个实施方案中，本发明包括在体外扩增抗原特异性T细胞或者B细胞的方法，该方法包括：从癌症患者中分离外周血液单核细胞（PBMC）；将经分离的PBMC与免疫原性量的经分离的抗-Langerin-(PL-Ag)x或者抗-Langerin-(Ag-PL)x疫苗培养，其中Ag是肿瘤相关抗原，并且x是从1到20的整数；在有效量的IL-2的存在下将该PBMC扩增；收获细胞；并且评估细胞的细胞因子产量从而确定抗癌特异性T细胞或者B细胞的存在。
在再另一个实施方案中，本发明包括肿瘤相关抗原特异性T细胞或者B细胞，所述的T细胞或者B细胞通过包括以下步骤的方法制备：从癌症患者中分离外周血液单核细胞（PBMC）；将经分离的PBMC与免疫原性量的抗-Langerin-(PL-Ag)x或者抗-Langerin-(Ag-PL)x疫苗培养，其中Ag是肿瘤相关抗原，并且x是从1到20的整数；在有效量的IL-2的存在下将该PBMC扩增；收获细胞；并且评估细胞的细胞因子产量从而确定抗癌特异性T细胞或者B细胞的存在。
本发明的另一个实施方案包括治疗性疫苗，所述的疫苗包含经分离的融合蛋白，该蛋白包括式：Ab-(PL–Ag)x；Ab-(Ag-PL)x；Ab-(PL-Ag-PL)x；Ab-(Ag-PL-Ag)x；Ab-(PL–Ag)x-PL；或者Ab-(Ag-PL)x-Ag；其中Ab是抗-Langerin单克隆抗体或其结合片段；PL是包含至少一个糖基化位点的至少一个肽接头；Ag是至少一个感染性疾病抗原；并且x是从1到20的整数。
再另一个实施方案包括在体外扩增抗原特异性T细胞或者B细胞的方法，该方法包括：从怀疑具有感染的患者中分离外周血液单核细胞（PBMC）；将经分离的PBMC与免疫原性量的抗-Langerin-(PL-Ag)x或者αLangerin-(Ag-PL)x疫苗培养，其中Ag是感染因子的抗原，并且x是从1到20的整数；在有效量的一种或多种细胞因子的存在下将该PBMC在扩增；收获细胞；并且评估细胞的细胞因子产量从而确定抗感染因子特异性T细胞或者B细胞的存在。另一个实施方案是病毒相关抗原特异性T细胞或者B细胞，所述的T细胞或者B细胞通过包括以下步骤的方法制备：从怀疑具有病毒性感染的患者中分离外周血液单核细胞（PBMC）；将经分离的PBMC与免疫原性量的经分离的抗-Langerin-(PL-Ag)x或者抗-Langerin-(Ag-PL)x疫苗培养，其中Ag是病毒相关抗原，并且x是从1到20的整数；在有效量的一种或多种细胞因子的存在下将该PBMC扩增；收获细胞；并且评估细胞的细胞因子产量从而确定病毒相关抗原特异性T细胞或者B细胞的存在。
另一个实施方案是治疗性疫苗，所述的疫苗包含经分离的融合蛋白，该蛋白包括式：Ab-(PL-Ag)x；Ab-(Ag-PL)x；Ab-(PL-Ag-PL)x；Ab-(Ag-PL-Ag)x；Ab-(PL-Ag)x-PL；或者Ab-(Ag-PL)x-Ag；其中Ab是抗-Langerin单克隆抗体或其结合片段；PL是包含至少一个糖基化位点的至少一个肽接头；Ag是至少一个病毒抗原；并且x是从1到20的整数。在一个实例中，所述经分离的抗体包含选自以下的一个或多个互补决定区或者其直接等价物：
ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS               (SEQ           ID           NO.：          45)；SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA        (SEQ         ID         NO.：              46)；VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA           (SEQ          ID           NO.：                47)；SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC(SEQ ID NO.：48)。
在一个方面，所述的抗体是人源化的。在另一个方面，所述抗体是ATCC登录号为PTA-9852的15B10及其人源化衍生物。在另一个方面，所述抗体是ATCC登录号为PTA-9853的2G3、91E7、37C1或者4C7及其人源化的衍生物。
再另一个实施方案是经分离的核酸，该核酸编码15B10、2G3、91E7、37C1或者4C7抗体、其抗体结合片段或者其人源化的衍生物。在一个方面，所述的抗-Langerin抗体选自以下各对的氨基酸序列或其各自的结合片段：SEQ ID NOS.：2和4；6和7；52和54；56和58；以及78和80。在另一个方面，所述的抗-Langerin抗体是以下各对核酸序列的表达产物：SEQ ID NOS.：1和3；5和6；51和53；55和57；以及77和79；或其结合片段，所述其结合片段分别为15B10、2G3、91E7、37C1或者4C7抗体。
本发明的又一个实施方案是药物组合物，所述药物组合物包含经分离的抗-Langerin抗体或其结合片段和连接到该抗-Langerin抗体的一个或多个抗原肽，其中当存在两个或多个抗原时，所述的抗原通过一个或多个含有至少一个糖基化位点的接头肽分开。在一个方面，所述的抗体结合片段选自Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fc或者ScFv片段。在另一个方面，所述的抗-Langerin抗体选自下列各对氨基酸序列或其结合片段：SEQ ID NOS.：2和4；6和7；52和54；56和58；以及78和80。在另一个方面，所述抗-Langerin抗体是以下各对核酸序列的表达产物，所述的各对核酸序列是SEQ ID NOS.：1和3；5和6；51和53；55和57；以及77和79。在另一个方面，所述抗-Langerin抗体或其结合片段是ATCC登录号为PTA-9852的15B10、ATCC登录号为PTA-9853的2G3、91E7、37C1或者4C7及其人源化的衍生物中的至少一个。在另一个方面，所述抗-Langerin抗体或其结合片段和抗原肽是融合蛋白。在另一个方面，所述组合物还包含佐剂。在另一个方面，所述组合物还包含一种或多种药物赋形剂。
本发明的再另一个实施方案是治疗性疫苗，该疫苗包含融合蛋白，该蛋白包括式：Ab-(PL–Ag)x；Ab-(Ag-PL)x；Ab-(PL-Ag-PL)x；Ab-(Ag-PL-Ag)x；Ab-(PL–Ag)x-PL；或者Ab-(Ag-PL)x-Ag；其中Ab是抗-Langerin单克隆抗体或其结合片段；PL是包含至少一个糖基化位点的至少一个肽接头；Ag是至少一个病毒抗原；并且x是从1到20的整数。
本发明提供了结合Langerin的抗体（15B10），该抗体包含至少一个免疫球蛋白轻链可变功能域（VL），所述轻链可变功能域包含氨基酸和编码以下序列的核酸序列:
ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS(SEQ ID NO.:45)；或和其直接等价物。
相应地本发明提供结合Langerin的抗体(15B10)，该抗体包含抗原结合位点，所述抗原结合位点包含至少一个免疫球蛋白重链可变功能域（VH），所述重链可变功能域包含氨基酸和编码以下序列的核酸序列:
SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA(SEQ ID NO.:46)；和其直接等价物。
本发明提供了结合Langerin的抗体(2G3)，该抗体包含至少一个免疫球蛋白重链可变功能域（VH），所述重链可变功能域包含氨基酸和编码以下序列的核酸序列:
VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA(SEQ ID NO.:47)；或和其直接等价物。
相应地，本发明提供结合Langerin的抗体（2G3），该抗体包含抗原结合位点，所述抗原结合位点包含至少一个免疫球蛋白重链可变功能域（VH），所述重链可变功能域包含氨基酸和编码以下序列的核酸序列:
SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC(SEQ ID NO.:48)；和其直接等价物。
在一个方面，本发明提供了单功能域的Langerin抗体，该抗体包含经分离的免疫球蛋白轻链，所述轻链包含如前文所定义的重链可变功能域（VL）。在另一个方面，本发明提供了单功能域的Langerin结合分子，该Langerin结合分子包含经分离的免疫球蛋白重链，所述重链包含如前文所定义的重链可变功能域（VH）。
在另一个方面，本发明还提供了包含轻链（VL）可变功能域的结合Langerin的抗体，其中该结合Langerin的抗体包含至少一个抗原结合位点，所述抗原结合位点包括：在序列中包括高变区的抗体轻链可变功能域（VL），所述的高变区得自氨基酸和编码以下序列的核酸序列：ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS  (SEQ ID NO.:45);或者VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA(SEQ ID NO.:47)；和其直接等价物。
在另一个方面，本发明还提供了结合Langerin的抗体，该抗体包含重链可变功能域（VH）的氨基酸和核酸序列，该重链可变功能域在序列中包括得自以下序列的高变区：
SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA(SEQ ID NO.:46)；或DDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC(SEQ ID NO.:48)和其直接等价物。
mAnti-Langerin15B10K-分别为小鼠抗-Langerin 15B10抗体cDNA的轻链的核苷酸和成熟蛋白氨基酸序列。可变区残基是加下划线的。
Figure BDA00001636032700131
AAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGATGTTCTGGATTCCTGCTTCCAGCAGTGATGTTGTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCCGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCCTTGTACACAGTAATGGAAACACCTATTTACATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAAATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGACTTTATTTCTGCTCTCAAAGTACACATGTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAACAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATCGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGT
Figure BDA00001636032700132
(SEQ ID NO.49)
DVVMTQTPLSLPVRLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPD RFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMNSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC(SEQ ID NO.50)
mAnti-Langerin15B10H-LV-hIgG4H-C-分别为融合到人IgG4的小鼠抗Langerin 15B10抗体的重链可变区的核苷酸和成熟蛋白氨基酸序列。可变区残基是加下划线的。
Figure BDA00001636032700133
GAATGGAGGATCTTTCTCTTCATCCTGTCAGGAACTGCAGGTGTCCACTCCCAGGTTCAGCTGCGGCAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTTACTGACTATGTTATAAGTTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTTATCCTGGAAGTGGTTATTCTTTCTACAATGAGAACTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCACCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAACCTACTATAACTACCCTTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACAACGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCGAAGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAAGCTAGC
Figure BDA00001636032700141
(SEQ ID NO.51)
QVQLRQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENF KGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCATYYNYPFAYWGQGTLVTVSAAKTTGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKAS (SEQ IDNO.52)
mAnti-Langerin2G3L-分别为小鼠抗Langerin 2G3抗体cDNA的轻链的核苷酸和成熟蛋白氨基酸序列。可变区残基是加下划线的。
Figure BDA00001636032700142
GCCTGGATTTCACTTATACTCTCTCTCCTGGCTCTCAGCTCAGGGGCCATTTCCCAGGCTGTTGTGACTCAGGAATCTGCACTCACCACATCACCTGGTGAAACAGTCACACTCACTTGTCGCTCAAGTACTGGGGCTGTTACAACTAGTAACTATGCCAACTGGGTCCAAGAAAAACCAGATCATTTATTCACTGGTCTAATAGGTGGTACCAACAACCGAGTTTCAGGTGTTCCTGCCAGATTCTCAGGCTCCCTGATTGGAGACAAGGCTGCCCTCACCATCACAGGGGCACAGACTGAGGATGAGGCAATATATTTCTGTGCTCTATGGTACAGCAACCATTGGGTGTTCGGTGGAGGAACCAAACTGACTGTCCTAGGCCAGCCCAAGTCTTCGCCATCAGTCACCCTGTTTCCACCTTCCTCTGAAGAGCTCGAGACTAACAAGGCCACACTGGTGTGTACGATCACTGATTTCTACCCAGGTGTGGTGACAGTGGACTGGAAGGTAGATGGTACCCCTGTCACTCAGGGTATGGAGACAACCCAGCCTTCCAAACAGAGCAACAACAAGTACATGGCTAGCAGCTACCTGACCCTGACAGCAAGAGCATGGGAAAGGCATAGCAGTTACAGCTGCCAGGTCACTCATGAAGGTCACACTGTGGAGAAGAGTTTGTCCCGTGCTGACTGTTCC
Figure BDA00001636032700143
(SEQ ID NO.53)
QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFS GSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNHWVFGGGTKLTVLGQPKSSPSVTLFPPSSEELETNKATLVCTITDFYPGVVTVDWKVDGT
PVTQGMETTQPSKQSNNKYMASSYLTLTARAWERHSSYSCQVTHEGHTVEKSLSRADCS  (SEQID NO.54)
mAnti-Langerin2G3H-分别为小鼠抗Langerin 2G3抗体cDNA的重链的核苷酸和成熟蛋白氨基酸序列。可变区残基是加下划线的。
Figure BDA00001636032700144
ACATTGAACATGCTGTTGGGGCTGAAGTGGGTTTTCTTTGTTGTTTTTTATCAAGGTGTGCATTGTGAGGTGCAGCTTGTTGAGTCTGGTGGAGGATTGGTGCAGCCTAAAGGGTCATTGAAACTCTCATGTGCAGCCTCTGGATTAACCTTCAATATCTACGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGTTTGGAATGGGTTGCTCGCATAAGAAATAAAAGTAATAATTATGCAACATATTATGCCGATTCAGTGAAAGACAGGTTCACCATCTCCAGAGATGATTCACAAAGCTTGCTCTATCTGCAAATGAACAACTTGAAAACTGAGGACACAGCCATGTATTACTGTGTGGGACGGGACTGGTTTGATTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAAGCTAGC
Figure BDA00001636032700151
(SEQ ID NO.55)
EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYA DSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYCVGRDWFDYWGQGTLVTVSAAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGKAS (SEQ ID NO.56)
在另一个实施方案中，本发明包括抗体，所述的抗体包含一个或多个互补决定区，所述互补决定区选自：
ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS(SEQ ID NO.：45)；
SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA(SEQ ID NO.：46)；
VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA(SEQ ID NO.：47)；
SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC(SEQ ID NO.：48)
或其直接等价物。在一个方面，所述的抗体是人源化的。在另一个方面，所述的抗体是15B10、2G3或者其人源化衍生物。在另一个方面，本发明包括编码15B10、2G3或者其人源化衍生物的核酸。
附图说明
为了更完整地理解本发明的特征和优点，在此参考本发明的详述及附图，并且其中：
图1显示了存在两种主要的DC分化途径。髓样途径产生两个亚型：在分层的上皮细胞如皮肤中发现的朗格汉斯细胞(LC)以及在所有其他组织中发现的间质DC(intDC)。
图2显示了融合到抗原的重组抗-Langerin抗体保持了其结合到细胞表面Langerin的能力。
图3证明了融合到人前列腺特异性癌症抗原的重组抗-Langerin抗体在健康供体中引发抗原特异性CD4+T细胞扩增的能力。
图4证明了融合到人前列腺特异性癌症抗原的重组抗-Langerin抗体在前列腺癌患者中引发抗原特异性CD8+T细胞扩增的能力。
图5显示了抗-Langerin优先地靶向表皮LC。
图6显示了人皮肤DC对Langerin的差异表达。
图7显示了抗-Langerin抗体(15B10)特异性地染色人朗格汉斯细胞。
图8显示了抗Langerin抗体针对非人的灵长类靶的结合结果。
图9显示了融合到来自H1N1流感毒株的甲型流感红细胞凝集素HA-1的重组抗-Langerin 15B10抗体在NHP中强有力地引起抗原特异性抗体产生的能力。
图10显示了抗人DC受体和抗原的重组融合蛋白在NHP中诱导抗原特异性免疫应答。
图11显示了抗-Langerin G3抗体特异性地染色NHP朗格汉斯细胞。
图12显示了使用gag-微粒子、抗-hIGG4-gag抗体、抗-DCIR-gag疫苗和抗-Langerin-gag-p24疫苗，在所有加或不加聚I:C作为佐剂的情况下，在NHP接种中抗-HIV-gag抗体的抗体滴度。
图13显示了对Langerin克隆进行的FACS分析：将293F细胞短暂地使用载体转染，来指导来自人、恒河猴和小鼠的全长（细胞表面）的Langerin的表达。
图14显示了两种形式的ELISA结合分析结果直接的（抗原直接结合到板并且结合的抗体使用抗小鼠IgG-HRP缀合物检测）和捕获的（抗体结合到板）。
发明描述
尽管在下文中详细讨论了本发明的不同实施方案的制备和使用，应该认识到，本发明提供了多种可实施的发明构思，所述发明构思可以在多种特定的环境下实施。在此讨论的特定实施方案仅仅是用于制备及使用本发明的具体方式的说明，而不限制本发明的范围。
为了便于理解本发明，在下文定义了多个术语。在此定义的术语具有本发明相关领域的普通技术人员一般所理解的含义。术语如“一个（a）”，“一个（an）”及“该（the）”不是仅指单个的实体，而是包括其具体实例可以用于说明的大类。本文的术语用于描述本发明的具体实施方案，然而其使用不限制本发明，除非在权利要求中指出。
树突细胞（DC）的亚型。本发明人发现了存在两种主要的DC分化途径。髓样途径产生两个亚型：在分层的上皮细胞如皮肤中发现的朗格汉斯细胞（LC）以及在所有其他组织中发现的间质DC（intDC）。浆细胞样途径产生浆细胞样DC（pDC），其在病毒感染之后分泌大量的IFNαβ3，并且以新的机理有效地呈递病毒抗原4（图1）。DC及其前体显示出显著的功能可塑性。例如，pDC形成针对侵入病毒扩增的第一道屏障，从而通过释放干扰素来作为先天性免疫应答的部分5，6。单核细胞可以分化成为作为清除剂的巨噬细胞或者诱导特异性免疫应答的DC7,8。不同的细胞因子扭转（skew）单核细胞在体外分化为具有不同表型和功能的DC。因此，当经活化的（例如由GM-CSF活化的）单核细胞遇到IL-4时，其产生IL-4DC9-11。与此相比，在遇到IFNα、TNFα或者IL-15后，经活化的单核细胞将分化为IFNDC12-15、TNFDC8或者IL-15DC16。这些DC的各个亚型具有共同的以及独特的生物功能，这通过细胞表面分子和细胞因子的独特组合确定。例如，鉴于IL-4DC是缺乏LC的不成熟细胞的同源群体，大部分的IFNDC表达CD1a和Langerin8。
本发明还包括抗体（或者“Ab”）或其片段的变体和其他修饰，例如抗-Langerin融合蛋白（抗体与术语“免疫球蛋白”可交换使用）。如本文中所使用的，术语“抗体或其结合片段”包括完整的抗体或者抗体的结合片段，例如Fv、Fab、Fab′、F(ab′)2、Fc、及单链的Fv片段（ScFv）或者特异性地结合于例如Langerin的免疫球蛋白的任意生物学上有效的片段。与非人抗体相比，来自人源的抗体或者人源化的抗体在人类中具有降低的免疫原性或者没有免疫原性，并且具有更低数量的免疫原性表位或者没有免疫原性表位。一般地选择在人类中具有降低水平的免疫原性，或者没有免疫原性的抗体及其片段。
如本文中所使用的，术语“Ag”或者“抗原”指能够结合于免疫球蛋白分子的抗原结合区域，或者能够引发免疫应答的物质，所述的免疫应答如通过将抗原呈递给主要组织相容性复合体（MHC）细胞蛋白的T细胞介导的免疫应答。如本文中所使用的，“抗原”包括但不限于抗原决定簇、半抗原及免疫原，所述的抗原可以是肽、小分子、碳水化合物、脂类、核酸或其组合。熟练的免疫学家能够认识到，当讨论处理从而呈递给T细胞的抗原时，术语“抗原”是指由MHC呈递给T细胞受体的T细胞表位的抗原的那些部分（例如肽的片段）。在B细胞介导的免疫应答的环境下，以对“抗原”特异性的抗体形式使用时，结合到抗体（轻链和重链）的可变功能域的互补决定区的抗原的部分，该结合部分可以是线性的或者三维的表位。在本发明的环境下，术语抗原在两个环境下使用，即，抗体对于蛋白质抗原（Langerin）是特异性的，但还携带一个或多个用于由MHC呈递给T细胞的肽表位。在特定的情况下，将本发明的疫苗或者融合蛋白所递送的抗原内在化，并在呈递之前通过抗原呈递细胞进行加工，例如通过切割所述抗体或者融合蛋白的一个或多个部分。
如本文中所使用的，术语“抗原肽”指由B-细胞或者T-细胞特异性地识别的多肽抗原的那部分。B细胞通过抗体的产生对外来的抗原决定簇作出应答，而T-淋巴细胞是介导细胞的免疫性。因此，抗原肽是抗原被抗体所识别的那些部分，或者在MHC的环境下，是抗原被T-细胞受体所识别的那些部分。
如本文中所使用的，术语“表位”指能特异性地结合到免疫球蛋白，或者能够由主要组织相容性复合体（MHC）蛋白（如I类的或者II类的）呈递给T细胞受体的任何蛋白质决定簇。表位决定簇一般是5-30个氨基酸长的短肽，其适合MHC分子的沟槽，所述的MHC分子向T细胞受体呈递特定的氨基酸侧链基团，并在沟槽中具有特定的其他残基，例如由于沟槽、肽的侧基和T细胞受体的特定的电荷特征。一般来说，当解离常数是1mM、100nM或者甚至10nM时，抗体特异性地结合于抗原。
如本文所使用的，术语“载体（vector）”在两个不同的环境下使用。当使用术语“载体”指疫苗时，载体用于描述用于指导或者递送疫苗的抗原部分的非抗原部分。例如，可以将抗体或者其结合片段结合到引发免疫应答的抗原上，或者与该抗原形成融合蛋白。对于细胞疫苗来说，递送和/或呈递抗原的载体是抗原呈递细胞，其由加载了抗原的细胞进行递送。在特定的情况下，细胞载体自身也可以加工抗原（或多种抗原），并将其呈递到T细胞，并且激活抗原特异性免疫应答。当在核酸的环境下使用时，“载体”指构建体，所述的构建体能够在宿主细胞中递送，并且优选地能够表达一个或多个感兴趣的基因或者多核苷酸序列。载体的实例包括但不限于病毒载体、裸露的DNA或者RNA表达载体、与阳离子缩合剂有关的DNA或者RNA表达载体、包裹在脂质体和特定的真核细胞如生产细胞（producer cell）中的DNA或者RNA表达载体。
本发明的组合物和方法可以与大范围的肽和/或蛋白质一起使用，其中抗体或其结合片段及肽接头或“PL”产生稳定的和/或可溶的蛋白。
如本文中所使用的，组合物和方法使用的抗-Langerin抗原递送载体包含式：
Ab-(PL–Ag)x或者Ab-(Ag-PL)x;
其中Ab是抗-Langerin抗体或其结合片段；
PL是含有至少一个糖基化位点的至少一个肽接头；
Ag是至少一种抗原；以及
x是从1到20的整数。
如本文中所使用的，术语“稳定的”和“不稳定的”当其指蛋白时，用于描述保持其三维结构和/或活性的肽或蛋白质（稳定的），或者立刻或随时间失去其三维结构和/或活性的肽或蛋白质（不稳定的）。如本文中所使用的，术语“不溶的”指在细胞中产生时的那些蛋白质（例如在真核细胞或者原核细胞中，或者在体外表达的重组蛋白），在不使用变性条件或者变性剂（例如分别地热或者化学变性剂）的情况下在溶液中不溶的。发现在本文中教导的抗体或其片段及接头将具有所述的肽的抗体融合蛋白从不溶和/或不稳定转化成稳定和/或可溶的蛋白。另一个稳定性与不稳定性的实例是，当在同样的溶液中测量时，蛋白的功能域具有稳定的构型时，其具有比蛋白的不稳定功能域更高的熔化温度（Tm）。当在同样的溶液中测量时，与另一个功能域相比如果Tm的差异为至少约2℃，更优选为约4℃，再更优选为约7℃，又更优选为约10℃，还更优选为约15℃，再更优选为约20℃，还再优选为约25℃，以及最优选为约30℃，则该功能域相对于另一个功能域是稳定的。
如本文中所使用的，“多核苷酸”或者“核酸”指单链或者双链形式的脱氧核糖核苷酸或者核糖核苷酸的链（包括天然核苷酸的已知类似物）。双链的核酸序列包括互补的序列。所述的多核苷酸序列可以编码免疫球蛋白的可变区功能域和/或恒定区功能域，所述的免疫球蛋白的可变区功能域和/或恒定区功能域与一个或多个接头形成融合蛋白。在本发明的应用中，可以使多克隆位点（MCS）改造为位于抗体的重链和/或轻链的羧基末端的位置，从而使得能在接头之间框内插入所表达的肽。如本文中所使用的，术语“经分离的多核苷酸”指基因组、cDNA、或者合成来源的多核苷酸或其一些组合。由于其来源，所述的“经分离的多核苷酸”（1）与在自然界发现的“经分离的多核苷酸”的多核苷酸的全部或者部分不相关；（2）其可操作地连接到在自然条件下不与之连接的多核苷酸；或者（3）在自然条件下不以更大的序列的部分出现。本领域技术人员能够意识到，可以使用本领域中已知的技术在核酸的层面上进行操作，从而设计和完成具有式Ab-(PL–Ag)x或者Ab-(Ag-PL)x的载体，所述的本领域中已知的技术如John Wiley and Sons的Current Protocols in Molecular Biology,2007中教导的，其相关的部分在此引入作为参考。简单地说，可以使用聚合酶链式反应、寡核苷酸或者聚合酶链式反应片段的酶促插入（enzymatic insertion）将编码Ab、Ag和PL的核酸序列插入载体，所述的载体可以是表达载体。为了便于在抗体的轻链、重链或者轻链和重链两者的羧基末端插入(PL–Ag)x或者(Ag-PL)x，可以在抗体序列的序列中改造出多克隆位点（MCS）。
如本文中所使用的，术语“多肽”指氨基酸的聚合物，而不指特定长度的产物；因此，肽、寡肽和蛋白质包括在多肽的定义之内。此术语也不表示或者排除所述多肽的表达后修饰，所述表达后修饰例如糖基化、乙酰化、磷酸化等等。定义中所包括的例如，含有氨基酸的一个或多个类似物的多肽（包括，例如非天然氨基酸等等），具有取代连接键以及具有其他本领域中已知的修饰的多肽，所述的修饰可以是天然产生的和非天然产生的。术语“功能域”或者“多肽功能域”指在天然构型下，折叠成单个球形区域的多肽序列，其可以显示出分离的（discrete）结合或者功能性能。如本文中所使用的，术语“融合蛋白”是指由包含至少两种基因的核苷酸序列的核酸分子所表达成为蛋白质的杂种蛋白。例如，融合蛋白可以包含至少部分的抗-Langerin抗体或其结合片段，所述的抗-Langerin抗体或其结合片段与一个或多个抗原融合，当多于一个抗原与该抗体或其片段融合时，和/或一个或多个接头融合。
多肽或氨基酸序列“得自”指明的核酸序列是指具有与该序列中编码的多肽或其部分相同的氨基酸序列的多肽，其中所述的部分由至少3-5个氨基酸构成，优选地由至少4-7个氨基酸构成，更优选地由至少8-10个氨基酸构成，以及还更优选地由至少11-15个氨基酸构成；或者所述的多肽与该序列中编码的多肽在免疫上是可识别的。该术语还包括从所指明的核酸序列表达的多肽。
如本文中所使用的，“药学上可接受的载体”指任意的材料，所述的材料当与本发明的免疫球蛋白（Ig）融合蛋白结合时，使得所述的Ig能保持生物活性，并且所述的材料一般地与受试者的免疫系统不反应。实例包括，但不限于标准的药物载体如磷酸盐缓冲盐溶液、水、乳液如油/水乳液，及不同类型的润湿剂。例如，对于气雾剂或者肠道外给药，某些稀释剂可以与本发明一起使用，所述的稀释剂可以是磷酸盐缓冲盐水，或者生理（0.85%）盐水。
本发明提供了结合Langerin的抗体(15B10)，该抗体包含至少一个免疫球蛋白轻链可变功能域(VL)，该免疫球蛋白轻链可变功能域包含氨基酸和编码以下序列的核酸序列：ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS(SEQ ID NO.:45)；或者和其直接等价物。
相应地，本发明提供了结合Langerin的抗体(15B10)，该抗体包含含有至少一个免疫球蛋白重链可变功能域(VH)的抗原结合位点，该免疫球蛋白重链变功能域包含氨基酸和编码以下序列的核酸序列：SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA(SEQ ID NO.:46)；和其直接等价物。
本发明提供了结合Langerin的抗体(2G3)，该抗体包含至少一个免疫球蛋白轻链可变功能域(VL)，该免疫球蛋白轻链可变功能域包含氨基酸和编码以下序列的核酸序列：VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA(SEQ ID NO.:47)；或者和其直接等价物。
相应地，本发明提供了结合Langerin的抗体(2G3)，该抗体包含含有至少一个免疫球蛋白重链可变功能域(VH)的抗原结合位点，该免疫球蛋白重链可变功能域包含氨基酸和编码以下序列的核酸序列：SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC(SEQ ID NO.:48)；和其直接等价物。
在一个方面，本发明提供了包含如前文所定义的包含重链可变功能域的经分离的免疫球蛋白轻链（VL）的单功能域Langerin抗体。在另一个方面，本发明提供了包含如前文所定义的包含重链可变功能域的经分离的免疫球蛋白重链（VH）的单功能域Langerin抗体。
在另一个方面，本发明还提供了包含轻链（VL）可变功能域的结合Langerin的抗体，其中所述结合Langerin的抗体包含至少一个抗原结合位点，所述的抗原结合位点包括：在序列中包括高变区的抗体轻链可变功能域（VL），所述的高变区得自氨基酸和编码以下序列的核酸序列ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS(SEQ  ID  NO.:45)；或者（VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA(SEQ ID NO.:47)；和其直接等价物。
在另一个方面，本发明还提供了包含重链（VH）可变功能域的氨基酸和核酸序列的结合Langerin的抗体，其中所述的重链可变功能域在序列中包含得自以下序列的高变区：SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA(SEQ ID NO.:46)；或者SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC(SEQ ID NO.:48)；和其直接等价物。
除非另外地指明，任意的多肽链在本文中都描述为具有从N-末端开始，并在C-末端结束的氨基酸序列。如果抗原结合位点包括VH和VL功能域两者，其可以位于同一多肽分子上，或者优选地，各个功能域可以位于不同的链上，VH功能域为免疫球蛋白重链或其片段的部分，以及VL为免疫球蛋白轻链或其片段的部分。
如本文中所使用的，术语“Langerin结合分子”或者“结合Langerin的抗体”指能够单独地或者与其他的分子联合结合于Langerin抗原的任意分子，该分子具有本文教导的VL和VH CDR的一种或多种，在一些情况下具有2、3、4、5个CDR或者全部的6个CDR。结合反应可以通过标准方法（定性测定）显示，所述的方法例如通过阻断其他分子与Langerin的结合或者任意种类的结合确定的生物检测，或活性检测（例如免疫应答的激活、减少或者调节），上述的检测以阴性对照测试作为参考，在该阴性对照测试中，使用具有不相关的特异性但是属于同一同种型（isotype）的抗体，例如抗-CD 25或者抗-CD 80抗体。
本发明还可以制成单链抗体，所述的单链抗体具有由肽接头共价地连接的抗体的重链和轻链可变功能域，所述的肽接头通常包含10到30个氨基酸，优选地15-25个氨基酸。因此，该结构不包括重链和轻链的恒定部分，并且认为小肽间隔区应比整个的恒定部分具有较少的免疫原性。
如在本文中所使用的，术语“嵌合抗体”指重链或者轻链或者重链和轻链两者的恒定区为人来源，而重链和轻链两者的可变功能域为非人（如小鼠、仓鼠或者大鼠）的来源，或者是人来源但是来自不同的人抗体的抗体。
如本文中所使用的，术语“CDR-移植抗体”指高变互补决定区（complementarity determining regions）（CDR）得自供体抗体，如非人（例如小鼠）的抗体或者不同的人类抗体，而免疫球蛋白的其他部分的全部或者基本上全部（例如可变功能域的恒定区域，即构架区）得自受体抗体（人源化抗体的情形下-人来源的抗体）的抗体。CDR-移植抗体可以在构架区，例如在接近高变区的构架区域的部分包括供体序列的若干氨基酸。
如本文中所使用的，术语“人抗体”指重链和轻链两者的恒定区和可变区均为人来源，或者大体上与人来源的序列相同，而不必来自同一个抗体的抗体，并且所述抗体包括由小鼠产生的抗体，其中小鼠、仓鼠或者大鼠的免疫球蛋白的可变和恒定部分基因已经由其人等价物替代，例如，其一般描述于EP 0546073 B1、第5545806号美国专利、第5569825号美国专利、第5625126号美国专利、第5633425号美国专利、第5661016号美国专利、第5770429号美国专利、EP 0438474 B1和EP 0463151 B1中，相关的部分在此引入作为参考。
本发明的Langerin结合抗体包括人源化抗体，该人源化抗体包含得自抗-Langerin 15B10或2G3抗体的CDR。嵌合抗体的一个实例包括具有人来源的重链和轻链两者的可变功能域，例如抗-Langerin 15B10或者2G3抗体的可变人源化。所述的恒定区功能域优选地还包括适合的人恒定区功能域，例如描述于″Sequences of Proteins of Immunological Interest″,Kabat E.A.等人,US Department of Health and Human Services,Public Health Service,NationalInstitute of Health中。
高变区可以与任意类型的构架区关联，所述的构架区例如为人类来源的。适合的构架区由Kabat E.A.描述。一种重链构架是例如抗-Langerin 15B10或者2G3抗体的那些重链构架，其包括以下轻链框架区的序列：FR1L、FR2L、FR3L和FR4L区。以类似的方式，包含FR1H、FR2H、FR3H和FR4H区的序列的抗-Langerin 15B10或者2G3重链框架。所述的CDR可以加到人类抗体构架上，例如在授予Rybak等人的7456260中所描述的，其教导了新的人类可变链构架区及包含该构架区、相关的部分和构架序列的人源化抗体，在此引入作为参考。为了完成遗传学水平上的植入，本发明还包括VL和VH区的基本核酸序列，以及完整的抗体和其人源化类型。本发明的核酸序列分别包括抗-Langerin抗体的轻链和重链，以及包含用于同样的氨基酸序列及其保守的改变的可变密码子的那些核酸序列，所述的保守的变体在核酸或者氨基酸水平上具有85%、90%、95%或者100%的序列同源性。类似地，CDR分别地，成组地或者2、3、4或者5个或者全部一起可以在核酸或者氨基酸水平上具有85%、90%、95%或者100%的序列同源性。
通常在非人的系统中，例如在小鼠中开发抗在所有人类中天然地发现的蛋白质的单克隆抗体，因此其通常为非人类的蛋白质。这一点的直接后果是，由杂交瘤产生的异基因抗体当给药到人类时，引起不想要的免疫应答，所述的免疫应答主要由所述的异基因免疫球蛋白的恒定部分所介导。异基因抗体容易引起宿主免疫应答，从而限制了该抗体的用途，由于其不能在长时间内给药。因此，使用单链的、单功能域的、嵌合的、CDR-移植的或者尤其是人抗体是特别有用的，该抗体在给药到人类时不太可能引起显著的异基因反应。本发明包括在氨基酸序列上有小的改变的抗体，所述的改变如一个、几个或者甚至数个氨基酸的缺失、增加或者取代，所述的有小的改变的抗体仅仅是等位形式的原蛋白，所述等位形式的原蛋白具有基本上相同的性质。
可以在不同的检测中方便地测试针对Langerin与其受体的结合的抑制，所述的检测包括描述于下文的那些检测。术语“在同样的程度”意味着在前文中所指的检测之一中，对照和等价的分子显示出统计上显著的本质上相同的Langerin结合抑制曲线。例如所使用的检测可以是本发明的结合分子对Langerin的结合的竞争性抑制检测。
一般地说，人的抗-Langerin抗体至少包含：（a）一个轻链，其包含可变功能域和人轻链的恒定部分，所述的可变功能域具有与从第1位的氨基酸开始到第107位的氨基酸结束的15B10或2G3抗体基本上相同的氨基酸序列；以及（b）一个重链，其包含可变功能域和人重链的恒定部分，所述的可变功能域具有与15B10或2G3抗体基本上相同的氨基酸序列。所述的人重链的恒定部分可以是γ1、γ2、γ3、γ4、β2或者δ或者ε类型，优选为γ类型，然而所述的人轻链的恒定部分可以为κ或者λ类型（其包括λ1、λ2和λ3亚型）但是优选为κ类型。可变功能域和恒定功能域的一般位置上的氨基酸序列在本领域中是已知的，并一般地符合Kabat命名法。
本发明的Langerin结合分子可以通过重组DNA技术生产。因此，必须构建编码该结合分子的一个或多个DNA分子，使该DNA分子和合适的控制序列在一起，并将其转移到适合的宿主有机体中进行表达。
以非常一般的方式相应地提供了：（i）编码本发明的单功能域Langerin结合分子的DNA分子、本发明的单链Langerin结合分子、本发明的Langerin结合分子的重链或者轻链或其结合片段；以及（ii）本发明的DNA分子通过重组方法在生产本发明的Langerin结合分子中的用途。
当前的现有技术是，本领域技术人员可以根据本文中所提供的信息合成本发明的DNA分子，即，高变区的氨基酸序列和编码该氨基酸序列的DNA序列。构建可变功能域基因的方法例如描述于EPA 239 400中，其相关的部分在此引入作为参考。简单地说，克隆了编码MAb的可变功能域的基因。确定了编码构架和高变区的DNA片段，并且将编码所述的高变区的DNA片段去除，从而使编码所述的构架区的DNA片段在接点处与适合的限制性位点融合。所述的限制性位点可以按照标准步骤，通过DNA分子的诱变在合适的位置产生。根据15B10或者2G3（分别地，氨基酸和核酸序列）中给出的序列，通过DNA合成制备了双链的合成CDR盒。这些盒通常提供有粘性末端，从而使其可以在构架的接点处（junction）连接。
为了得到编码本发明的所述的Langerin结合分子的DNA构建体，没有必要从生产的杂肿瘤细胞系中得到mRNA。例如，第WO 90/07861号PCT申请中在仅考虑了关于基因的核苷酸序列的书面信息的情况下，通过重组DNA技术生成抗体给出了完整的指示，其相关的部分在此引入作为参考。简单地说，该方法包括多种寡核苷酸的合成、其通过PCR方法的扩增，以及其剪切从而得到所想要的DNA序列。
包括适合的启动子的表达载体或者编码重链和轻链的恒定部分的基因可以公开获得。因此，一旦制备了本发明的DNA分子，其可以方便地转移到合适的表达载体中。也可以通过标准的方法，例如WO 88/1649中所描述的方法制备编码单链抗体的DNA分子。在前文的基础上，杂交瘤或者细胞系的保藏不必符合说明书的充分公开的标准。
例如，制备了特异性地结合到Langerin上的第一和第二DNA构建体。简单地说，第一DNA构建体编码抗体的轻链、CDR或其片段，并且包含a）第一部分，该部分编码可变功能域，所述的可变功能域包含构架区和高变区的二者之一，所述的高变区位于序列CDR1L、CDR2L和CDR3L中，其氨基酸序列见于SEQ ID NO.45-48中；该第一部分从编码所述的可变功能域的第一个氨基酸的密码子开始，并且在编码所述可变功能域的最后一个氨基酸的密码子结束，以及b）第二部分，该第二部分编码轻链恒定部分或其结合片段，所述第二部分从编码重链的恒定部分的第一个氨基酸的密码子开始，并且在编码恒定部分或其结合片段的最后一个氨基酸的密码子处结束，随后为终止密码子。
所述的第一部分编码可变功能域，该可变功能域具有与15B10或2G3的氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列。第二部分编码人的重链的恒定部分，更优选地人的γ1链的恒定部分。该第二部分可以是基因组来源的DNA片段（包含内含子）或者cDNA片段（没有内含子）。
第二DNA构建体编码重链或其结合片段，并包含a）第一部分，该第一部分编码包含构架区和高变区二者之一的可变功能域；所述的高变区为CDR1H以及任选地为CDR2H和CDR3H，15B10或2G3的氨基酸序列；该第一部分从编码所述的可变功能域的第一个氨基酸的密码子开始，并且在编码所述可变功能域的最后一个氨基酸的密码子结束，以及b）第二部分，该第二部分编码重链恒定部分或其结合片段，其从编码轻链的恒定部分的第一个氨基酸的密码子开始，并且在编码恒定部分或其结合片段的最后一个氨基酸的密码子结束，随后为终止密码子。
所述的第一部分编码可变功能域，该可变功能域具有与15B10或2G3的氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列。所述的第一部分具有15B10或2G3抗体的核苷酸序列，所述核苷酸序列从第1位的核苷酸开始并且在第321位的核苷酸结束。还优选地，该第二部分编码人轻链的恒定部分，更优选地编码人κ链的恒定部分。
本发明还包括Langerin结合分子，其中CDR1L、CDR2L、CDR3L、CDR1H、CDR2H或者CDR3H或者构架的一个或多个残基，通常仅数个（如FR1-4L或者H）通过例如对应的DNA序列的定点突变，从15B10或2G3抗体的残基变化。本发明包括编码该改变的Langerin结合分子的DNA序列。尤其地，本发明包括Langerin结合分子，其中CDR1L、CDR2L和/或CDR3L的一个或多个残基从15B10或2G3抗体的残基变化，以及CDR1H、CDR2H和/或CDR3H的一个或多个残基从15B10或2G3抗体的残基变化。
各个DNA构建体置于适合的控制序列的控制下，尤其地，在适合的启动子的控制下。任意类型的启动子都可以使用，条件是其适合在其中转移DNA构建体用于表达的宿主有机体。然而，如果表达在哺乳动物细胞中进行，可以在B细胞中使用免疫球蛋白基因启动子。所述的第一和第二部分可以由内含子隔开，并且，可以将增强子合适地放置于第一部分和第二部分之间的内含子中。该转录而不翻译的增强子的存在可以帮助进行充分的转录。在特定的实施方案中，第一和第二DNA构建体包含增强子，所述的增强子为例如重链人基因的增强子。
抗体或其结合片段可以使用本领域中已知的任意方法进行分离、纯化和储存。结合片段保持完整抗体的特异结合活性，并且可以用于任意的使用完整抗体的应用中（例如治疗、诊断检测、竞争结合检测等等）。
在另一个方面，本发明提供了由上述的方法所产生的抗体或结合片段，并且可以进一步包括延长半衰期的载体，如本领域技术人员所知道的那些。该载体包括但不限于，线型聚合物（例如聚乙二醇（PEG）、聚赖氨酸（polylysine）、右旋糖酐等等）；支链聚合物（参见例如第4,289,872号美国专利、第5,229,490号美国专利、WO93/21259）；脂类；胆固醇群体（如类固醇）；碳水化合物或多糖；任意的天然或合成的蛋白质、多肽或者肽。此外，应当认识到也可以在本发明中采用一个或多个Fc区来提高半衰期。应当认识到载体可以通过本领域中已知的多种技术方式连接到抗体或者结合片段，所述的方法如共价连接。
想要的抗体可以在动物中作为腹水，在细胞培养物中，或者在转基因动物中产生。适用的转基因动物可以根据标准方法得到，所述的标准方法包括将位于适合的控制序列下的所述的第一和第二DNA构建体微注射到卵子中，将如此制备的卵子转移到合适的假妊娠雌性体内，并选择表达想要的抗体的后代。
本发明还提供了能够在原核或者真核细胞系中复制的表达载体，所述的表达载体包含前文描述的DNA构建体的至少之一。随后将含有DNA构建体的各个表达载体转移到适合的宿主有机体中。当DNA构建体分别插入到两个表达载体中时，可以将其分别地进行转移，即每个细胞中一种类型的载体，或者可以将其共转移，后者可能是优选的。适用的宿主有机体可以是细菌、酵母或者哺乳动物细胞系，后者是优选的。更优选地，所述的哺乳动物细胞系具有淋巴来源，如骨髓瘤、杂交瘤或者正常的永生B细胞，其合适地不表达任何的内源抗体重链或者轻链。
当在细胞培养物中产生所述的抗体链时，必须首先将DNA构建体插入到单个的表达载体中，或者插入到两个分开的但是相容的表达载体中，后者可能是优选的。为了在哺乳动物细胞中进行表达，优选的是将Langerin结合分子的编码序列整合到基因座内的宿主细胞DNA中，所述的基因座允许或者帮助该Langerin结合分子的高水平表达。
在本发明的再一个方面，提供了产生Langerin结合分子的产物的方法，该方法包括：（i）将使用以上定义的表达载体转化的有机体进行培养；并且（ii）从培养物中回收Langerin结合分子。
根据本发明，发现了抗-Langerin抗体15B10、2G3、91E7、37C1或者4C7和其人源化的衍生物显示出对人Langerin的抗原表位具有结合特异性。因此，最出人意料的是此表位的抗体，例如抗-Langerin 15B10、2G3、91E7、37C1或者4C7和其人源化的衍生物能够将抗原有效地递送到树突细胞（DC）中。抗体，尤其是嵌合抗体和CDR-移植抗体，以及尤其是人抗体，所述抗体对成熟的人Langerin的抗原表位具有结合特异性；以及该抗体在加载DC抗原中的用途是新颖的，并包括在本发明的范围内。
为了使用本发明的抗-Langerin抗体来治疗适应症，适当的剂量当然会根据例如将要使用的在本文中公开的抗体、宿主、给药方式和所治疗的疾病的性质和严重程度而变化。然而，在预防性用途中，通常在约0.05mg到约10mg每千克体重的剂量下，更通常地在约0.1mg到约5mg每千克体重的剂量下，得到令人满意的结果。在预防用途中给药的频率通常地在约一周一次到约每三个月一次的范围内，更通常地在约每两周一次到约每十周一次，例如每4到8周一次。本发明的抗-Langerin抗体可以经肠道外、经静脉内给药，例如给药到肘前静脉或者其他外周静脉、经肌肉内给药或者皮下给药。
本发明的药物组合物可以用常规方式进行制造，例如用冻干的形式。在即用给药时，将其溶解在合适的含水载体中，例如注射用无菌水，或者无菌缓冲生理盐水。如果然为需要制备更大体积的溶液用于输注给药而不是弹丸注射（bolus injection）给药，在配制时将人血清白蛋白或者患者自身的肝素化血液掺入到盐水中是有利的。过量的该生理惰性蛋白的存在阻止抗体被吸收到输注溶液所使用的容器和管的壁上而损失。如果使用白蛋白，适合的浓度是按重量计0.5%到4.5%的盐水溶液。
本发明的一个实施方案提供了免疫缀合物（immunoconjugate），所述的免疫缀合物包含本发明的人源化抗体，例如人源化抗-Langerin抗体，其连接到一个或多个效应分子（effector molecule）、抗原（或多个抗原）和/或可检测的标记（或多个标记）上。优选地，所述的效应分子是治疗性分子，例如含有一个或多个T细胞表位的一个或者多个肽、毒素、小分子、细胞因子或者趋化因子、酶或者放射性标记。
典型的毒素包括但不限于假单胞菌外毒素或者白喉毒素。小分子的实例包括但不限于化疗化合物，如紫杉醇（taxol）、阿霉素（doxorubicin）、依托泊苷（etoposide）和博来霉素（bleiomycin）。典型的细胞因子包括但不限于IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6和IL-12、IL-17和IL-25。典型的酶包括但不限于RNA酶、DNA酶、蛋白酶、激酶和半胱天冬酶。典型的放射性同位素包括但不限于32P和125I。
如本文中所使用的，术语“表位”指能够刺激免疫应答的分子或者物质。在一个实例中，表位包括但不限于多肽和编码多肽的核酸，其中当该核酸所表达的多肽经过加工并且呈递给主要组织相容性复合体（MHC）分子时，该核酸到多肽的表达能够刺激免疫应答。一般地说，表位包括呈递到细胞表面上的肽，所述的肽非共价地结合于I类或者II类MHC的结合沟，使得其可以与T细胞受体及各自的T细胞辅助分子相互作用。
抗原的蛋白水解加工。由MHC呈递到抗原呈递细胞上的表位是更大的肽或者蛋白质抗原前体的切割肽或者产物。对于MHC I表位来说，蛋白质抗原通常由细胞中固有的蛋白酶体消化。细胞内的蛋白酶体消化产生约3到23个氨基酸长度的肽片段，随后该肽片段加载到MHC蛋白上。细胞内或者在细胞外的环境中的其他蛋白水解作用可以进一步地剪切（trim）并加工这些片段。MHC II类表位的加工通常通过来自溶酶体/内涵体的隔室（compartment）中的细胞内蛋白酶进行。在一个实施方案中，本发明包括，连接到抗-Langerin抗体（或其片段）的预加工的肽，所述的抗-Langerin抗体（或其片段）指导所述的肽，针对该肽在直接探寻抗原呈递细胞中发生增强的免疫应答。
为了识别潜在有效的作为免疫原性化合物的表位，单独进行MHC结合的预测是有用的，但通常是不充分的。本发明包括特异性地鉴定抗原内表位的方法，所述的表位是最可能在探寻特定来源的抗原呈递细胞及应答子T细胞（responder T cell）中引起免疫应答的表位。
本发明使得能够为那些表位的鉴定进行快速和简易的检测，所述的表位是最可能在使用患者自身的抗原呈递细胞和T细胞系统时产生想要的免疫应答的表位。本发明的组合物和方法适用于任意的蛋白质序列，使得使用者鉴定能够结合到MHC并且合适地呈递给对该抗原应答的T细胞的表位。相应地，本发明不限于任意特定的靶或者医疗条件，相反涵盖来自任意有用来源的MHC表位（或多个表位）。
如本文中所使用的，对于本领域技术人员而言是显而易见的，术语“镶饰的（veneered）”指人源化抗体构架，在该抗体构架上，将抗原结合位点或者得自非人抗体的CDR（例如小鼠、大鼠或者仓鼠）置于人的重链和轻链保守结构构架区中（FR），例如在轻链或者重链多核苷酸中，从而将非人抗体的特异性从SEQ ID NOS:45-48或者编码那些序列的核酸中“移植”到人的构架中。表达所述的镶饰的抗体的多核苷酸表达载体或者多种载体可以转染哺乳动物的细胞，从而表达重组人抗体，该重组人抗体显示非人抗体的抗原特异性，并且经历会增强其表达、稳定性、溶解性或其组合的翻译后修饰。
抗原
用于本发明的病毒性抗原的实例包括但不限于，例如HIV、HCV、CMV、腺病毒、反转录病毒、小核糖核酸病毒等等。反转录病毒抗原的非限制性实例，如来自人类免疫缺陷病毒（HIV）抗原的反转录病毒抗原，如gag、pol和env基因的基因产物，Nef蛋白，反转录酶和其他的HIV组分；肝炎病毒抗原，如乙型肝炎病毒的S、M和L蛋白，乙型肝炎病毒的前-S抗原，和其他肝炎如甲型肝炎、乙型肝炎和丙型肝炎病毒组分，例如丙型肝炎病毒RNA；流感病毒抗原，如血凝素和神经氨酸苷酶及其他的流感病毒组分；麻疹病毒抗原，如麻疹病毒融合蛋白及其他的麻疹病毒组分；风疹病毒抗原，如蛋白质E1和E2及其他的风疹病毒组分；轮状病毒抗原，如VP7sc和其他的轮状病毒组分；巨细胞病毒抗原，如包膜糖蛋白B及其他的巨细胞病毒抗原组分；呼吸道合胞体病毒抗原，如RSV融合蛋白、M2蛋白和其他的呼吸道合胞体病毒组分；单纯疱疹病毒抗原，如极早期蛋白、糖蛋白D及其它的单纯疱疹病毒抗原组分；水痘带状疱疹病毒抗原，如gpI、gpII和其他的水痘带状疱疹病毒抗原组分；日本脑炎病毒抗原，如蛋白质E、M-E、M-E-NS1、NS1、NS1-NS2A、80% E及其它的日本脑炎病毒抗原组分；狂犬病病毒抗原，如狂犬病糖蛋白、狂犬病核蛋白及其它的狂犬病病毒抗原组分。病毒性抗原的其他实例参见Fundamental Virology,Second Edition,eds.Fields,B.N.and Knipe,D.M.(Raven Press,New York,1991)。所述的至少一个的病毒抗原可以是肽，所述的肽来自腺病毒、反转录病毒、小核糖核酸病毒、疱疹病毒、轮状病毒、汉坦病毒、冠状病毒、披膜病毒、黄病毒（flavirvirus）、弹状病毒、副粘病毒、正粘病毒、本扬病毒、砂粒病毒、呼肠孤病毒、乳头瘤病毒、细小病毒、痘病毒、嗜肝DNA病毒或海绵状病毒。在某些具体的非限制性实例中，所述的至少一种病毒抗原是肽，所述的肽得自HIV、CMV、甲型肝炎、乙型肝炎和丙型肝炎、流感、麻疹、骨髓灰质炎、天花、风疹；呼吸道合胞、单纯疱疹、水痘带状疱疹、EB（Epstein-Barr）、日本脑炎、狂犬病、流感和/或感冒病毒的至少一种。
在一个方面，所述的一种或多种抗菌肽选自以下的至少一种：Nef(66-97):VGFPVTPQVPLRPMTYKAAVDLSHFLKEKGGL(SEQ ID NO.:31)、Nef(116-145):HTQGYFPDWQNYTPGPGVRYPLTFGWLYKL(SEQ ID NO.:32)、Gag p17(17-35):EKIRLRPGGKKKYKLKHIV(SEQ ID NO.:33)、Gagp17-p24(253-284):NPPIPVGEIYKRWIILGLNKIVRMYSPTSILD(SEQ IDNO.:34)或者Pol 325-355(RT 158-188)是:AIFQSSMTKILEPFRKQNPDIVIYQYMDDLY(SEQ ID NO.:35)。在一个方面，融合蛋白肽由以下的一个或多个接头隔开：SSVSPTTSVHPTPTSVPPTPTKSSP(SEQ ID NO.:39)、PTSTPADSSTITPTATPTATPTIKG(SEQ ID NO.:40)、TVTPTATATPSAIVTTITPTATTKP(SEQ ID NO.:41)或者TNGSITVAATAPTVTPTVNATPSAA(SEQ ID NO:42)。
可以使用本发明的抗-Langerin抗原疫苗进行递送的抗原靶包括编码抗原的基因，所述的抗原如病毒性抗原、细菌性抗原、真菌性抗原或者寄生虫抗原。病原体包括锥虫，绦虫，蛔虫，蠕虫，疟疾。肿瘤标记物例如胎儿抗原或者前列腺特异性的抗原可以按此方式进行靶向。其他的实例包括：HIVenv蛋白和乙型肝炎表面抗原。为了接种的目的给予根据本发明的载体要求该载体相关的抗原是充分地无免疫原性的，从而使得该转基因的长期表达成为可能，而该转基因的强免疫应答是想要的。在一些情况下，对个体的接种的需要可以只是偶发的，例如每年一次或者每两年一次，并且该接种提供针对感染因子的长期免疫保护。本发明中用于载体以及最终用作抗原的有机体、过敏原和核酸和氨基酸序列的具体实例可以在第6541011号美国专利中找到，其相关的部分在此引入作为参考，尤其地，与有机体和特定的序列匹配的表格可以用于本发明。
与在本文中公开的与抗-Langerin抗原疫苗一起使用的细菌性抗原包括，但不限于，例如细菌抗原，如百日咳毒素、纤维状血凝素、百日咳杆菌粘附素、FIM2、FIM3、腺苷酸环化酶和其他的百日咳细菌抗原组分；白喉细菌抗原，如白喉毒素或者白喉类毒素，及其它的白喉细菌抗原组分；破伤风细菌抗原，如破伤风毒素或者破伤风类毒素，及其它的破伤风细菌抗原组分；链球菌细菌抗原，如M蛋白和其他的链球菌细菌性抗原组分；革兰氏阴性杆菌细菌抗原，如脂多糖和其他的革兰氏阴性细菌抗原组分；结核分枝杆菌细菌性抗原，如分枝菌酸、热激蛋白65（HSP65）、30kDa的主分泌蛋白、抗原85A及其他的分枝杆菌抗原组分；幽门螺旋杆菌细菌性抗原组分；肺炎球菌细菌性抗原，如肺炎球菌溶血素、肺炎球菌荚膜多糖和其他的肺炎球菌细菌性抗原组分；流感嗜血杆菌细菌抗原，如荚膜多糖和其他的流感嗜血杆菌细菌抗原组分；炭疽细菌性抗原，如炭疽保护性抗原和其他的炭疽细菌性抗原组分；立克次体细菌性抗原，如rompA和其他立克次体细菌性抗原组分。本文中所描述的细菌性抗原还包括任意其他的细菌、分枝杆菌、支原体、立克次氏体或者衣原体的抗原。病原体的部分或者全部也可以是流感嗜血杆菌、恶性疟原虫、脑膜炎奈瑟球菌、肺炎链球菌、淋球菌、沙门氏菌伤寒血清型、志贺菌、霍乱弧菌、登革热、脑炎、日本脑炎、莱姆病、鼠疫杆菌、西尼罗河病毒、黄热病、野兔热、肝炎（病毒性、细菌性），RSV（呼吸道合胞病毒）、HPIV 1和HPIV 3、腺病毒、天花、过敏和癌症。
用于本发明的组合物和方法的真菌性抗原包括，但不限于：例如假丝酵母真菌性抗原组分；组织胞浆菌真菌性抗原，如热激蛋白60(HSP60)及其他组织胞浆菌真菌性抗原组分；隐球菌真菌性抗原，如荚膜多糖和其他的隐球菌真菌性抗原组分；球孢子菌真菌性抗原，如小球抗原和其他的球孢子菌真菌性抗原组分；和癣真菌性抗原，例如毛癣菌素和其他的球孢子菌真菌性抗原组分。
原生动物和其他的寄生虫抗原的实例包括，但不限于：例如恶性疟原虫抗原，如裂殖子表面抗原，子孢子表面抗原，环子孢子（circumsporozoite）抗原，配子体/配子表面抗原，红内期抗原pf155/RESA和其他的疟原虫抗原组分；弓形虫抗原，如SAG-I、p30和其他的弓形虫抗原组分；血吸虫抗原，如谷胱甘肽-S-转移酶、副肌球蛋白和其他的血吸虫抗原组分；硕大利什曼原虫抗原和其他利什曼原虫抗原，如gp63、脂磷聚糖和其相关的蛋白，和其他的利什曼原虫抗原组分；以及克氏锥虫抗原，如75-77kDa抗原、56kDa抗原和其他的锥虫抗原组分。
可以使用本发明的抗-Langerin抗原疫苗进行靶向的抗原一般地按照多种因素进行选择，所述的因素包括：内在化的可能性、免疫细胞特异性的水平、所靶向的免疫细胞的类型、免疫细胞成熟度和/或激活程度等等。在这个实施方案中，抗体可以是单特异性或者双特异性的抗体，后者包括一个抗-CD40的结合功能域和一个抗第二种抗原的结合功能域，所述的第二种抗原例如树突细胞的细胞表面标记物，如I类MHC、II类MHC、B7-2、CD 18、CD29、CD31、CD43、CD44、CD45、CD54、CD58、CD83、CD86、CMRF-44、CMRF-56、DCIR和/或Dectin-1等等；而在一些情况下，也缺少CD2、CD3、CD4、CD8、CD14、CD15、CD16、CD 19、CD20、CD56、和/或CD57。抗原呈递细胞的细胞表面标记物的实例包括但不限于：I类MHC、II类MHC、CD45、B7-1、B7-2、IFN-γ受体和IL-2受体、ICAM-1和/或Fcγ受体。T细胞的细胞表面标记物的实例包括，但不限于：CD3、CD4、CD8、CD14、CD20、CD11b、CD16、CD45和HLA-DR。
位于细胞表面用于递送的靶抗原包括特征为肿瘤抗原的那些，其通常得自肿瘤组织的细胞的细胞表面、细胞质、核、细胞器等。本发明的抗体部分的肿瘤靶点的实例包括但不限于：血液癌症如白血病和淋巴瘤，神经肿瘤如星形细胞瘤或恶性胶质瘤，黑色素瘤，乳腺癌，肺癌，头颈部癌，胃肠肿瘤如胃癌和结肠癌，肝癌，胰腺癌，泌尿生殖系统肿瘤如宫颈癌、子宫癌、卵巢癌、阴道癌、睾丸癌、前列腺癌或阴茎癌，骨肿瘤，血管瘤，或唇癌、鼻咽癌、咽和口腔癌、食道癌、直肠癌、胆囊癌、胆系癌、喉癌、肺和支气管癌、膀胱癌、肾癌、脑癌和神经系统的其他部分癌症，甲状腺癌，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤，多发性骨髓瘤和白血病。
可以利用本发明，单独或者结合递送到免疫细胞，进行抗原呈递的抗原的实例包括：肿瘤蛋白，如突变的癌基因；与肿瘤关联的病毒蛋白；以及肿瘤黏蛋白和糖脂。所述的抗原可以是与肿瘤关联的病毒性蛋白，可能是前文记载的各类病毒。特定的抗原可以是肿瘤的特征（通常不由肿瘤前体细胞表达的蛋白的一个亚型）或者可以是通常能够在肿瘤前体细胞中表达但是具有肿瘤的突变特征的蛋白质。其他的抗原包括正常蛋白的突变变体（或多种突变体），其具有改变的活性或者亚细胞的分布，例如产生肿瘤抗原的基因的突变。
用于抗-Langerin融合蛋白疫苗的肿瘤抗原的具体的非限制性实例包括，例如CEA，前列腺特异性抗原(PSA)，HER-2/neu，BAGE，GAGE，MAGE 1-4、6和12，MUC(黏蛋白)(如MUC-1、MUC-2等等)，GM2和GD2神经节苷脂，ras，myc，酪氨酸酶，MART(黑色素瘤抗原)，Pmel17(gp100)，GnT-V内含子V序列(N-乙酰基葡萄糖胺转移酶V内含子V序列)，前列腺Ca psm，PRAME(黑色素瘤抗原)，β-连环蛋白，MUM-1-B(黑色素瘤中普遍存在的突变基因产物)，GAGE(黑色素瘤抗原)1，MAGE，BAGE(黑色素瘤抗原)2-10，C-ERB2(Her2/neu)，DAGE，EBNA(EB病毒核抗原)1-6，gp75，人乳头瘤病毒(HPV)E6和E7，p53，肺耐药蛋白(LRP)，Bcl-2，Ki-67，细胞周期蛋白B1，gp100，存活素和NYESO-1。
此外，免疫原性的分子可以是涉及自身免疫疾病的起始和/或传播的自身抗原，其病理学在很大程度上是由于对由相应的靶器官、组织或者细胞如SLE或者MG表达的分子有特异性的抗体的活性。在该疾病中，可能希望将持续进行中的抗体介导的（即Th2-类型的）对相关的自身抗原的免疫应答指向细胞（即Th1类型的）免疫应答的方向。或者可以期待通过预防性地诱导针对合适的自身抗原的Th1应答，预防针对受试者的自身抗原的Th2应答的疾病的发生或者其水平降低，所述的受试者不具有，但是怀疑易患相关的免疫疾病。感兴趣的自身抗原包括但不限于：（a）关于SLE、Smith蛋白、RNP核糖核蛋白及SS-A和SS-B蛋白；以及（b）关于MG、乙酰胆碱受体。其他在一种或多种类型的自身免疫应答中涉及的多种抗原的实例包括：例如内源激素，如黄体生成素（luteinizing hormone）、促卵泡素（follicular stimulatinghormone）、睾酮（testosterone）、生长激素、催乳素（prolactin）和其他的激素。
在自身免疫疾病、过敏症和移植排斥中涉及的抗原可以用于本发明的组合物和方法。例如，下列自身免疫疾病或障碍的任意一种或多种中涉及的抗原可以用于本发明：糖尿病（diabetes）、糖尿病（diabetes mellitus），关节炎（包括类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、骨关节炎、银屑病关节炎）、多发性硬化、重症肌无力、系统性红斑狼疮、自身免疫性甲状腺炎、皮炎（包括异位性皮炎和湿疹性皮炎）、牛皮癣、干燥综合征，包括继发于干燥综合征的干燥性角结膜炎、斑秃、由于节肢动物叮咬反应引发的过敏反应、克罗恩病、阿弗他溃疡、虹膜炎、结膜炎、角结膜炎、溃疡性结肠炎、哮喘、过敏性哮喘、皮肤红斑狼疮、硬皮病、阴道炎、直肠炎、药疹、麻风病逆转反应、麻风结节性红斑、自身免疫性葡萄膜炎、变应性脑脊髓炎、急性坏死性出血性脑病、特发性双边进展性感觉神经性听力损失、再生障碍性贫血、单纯红细胞性贫血、特发性血小板减少症、多软骨炎、韦格纳肉芽肿病、慢性活动性肝炎、史蒂文斯-约翰逊综合征、特发性口炎性腹泻、扁平苔藓、克罗恩病、Graves眼病、结节病、原发性胆汁性肝硬化、后葡萄膜炎和肺间质纤维化。自身免疫疾病中涉及的抗原的实例包括谷氨酸脱羧酶65（GAD 65）、天然的DNA、髓磷脂碱性蛋白（myelin basic protein）、髓鞘蛋白脂质蛋白（myelin proteolipid protein）、乙酰胆碱受体组分、甲状腺球蛋白（thyroglobulin）和促甲状腺激素（TSH）受体。
过敏症中涉及的抗原的实例包括花粉抗原，如日本柳杉花粉抗原、豚草花粉抗原、黑麦草花粉抗原，动物源性抗原，如尘螨抗原和猫科动物抗原，组织相容性抗原(histocompatiblity antigen)和青霉素及其他治疗药物。移植排斥中涉及的抗原的实例包括：准备移植到移植接收者中的移植物的抗原组分，所述的移植物如心脏、肺、肝、胰腺、肾和神经移植部分。所述的抗原可以是在治疗自身免疫疾病中有用的改造的肽配体（altered peptide ligand）。
本领域技术人员应该认识到，任意的蛋白质效应分子的序列都可以进行以下方式的改造，该改造本质上不影响所述效应子蛋白质的功能的优点。例如，甘氨酸和丙氨酸一般被认为是可交换的，天冬氨酸和谷氨酸以及天冬酰胺和谷氨酰胺也是如此。本领域的技术人员应认识到效应子序列的许多不同改变将编码活性大体上与天然的效应子相同的效应子。所述的效应子分子和抗体可以通过前文所述的化学方式或者重组方式进行缀合。化学修饰包括，例如为了将所述的效应分子和抗体彼此连接的目的而进行衍生，所述的衍生是直接的或者通过连接的化合物，其通过蛋白质化学的领域中公知的方法进行。对于本发明的人源化抗体，共价的和非共价的连接方式均可以使用。
将效应分子连接到抗体的步骤根据要连接到抗体的部分的化学结构而不同。多肽一般含有多个官能团；例如羧酸（COOH）、游离的氨基（--NH2）或者巯基（--SH）基团，这些官能团可以与抗体上的适合官能团反应，导致其与效应分子的结合。可选地，可以将所述的抗体进行衍生化，从而使其暴露或者连接额外的反应性官能团，例如与可得自Pierce Chemical Company,Rockford Ill的多种接头分子之中任意的接头分子进行连接。
所述的接头能够与所述的抗体和所述的效应分子形成共价键。适合的接头对于本领域的技术人员来说是公知的并且包括但不限于：直链的或者支链的碳接头、杂环的碳接头或者肽接头。当抗体和效应分子是多肽时，可以通过其侧基将所述的接头连接到组成氨基酸上（例如通过半胱氨酸的二硫键连接）。然而，在优选的实施方案中，所述的接头连接到末端的氨基酸的α碳的氨基上和羧基上。
在一些情况下，在免疫缀合物达到其靶向位点时，希望将效应分子从抗体上释放。因此，在这些情况下，免疫缀合物包含在靶向位点的附近可切割的连接。为了从抗体释放效应分子，该接头的切割可以通过酶活性或者该免疫缀合物处于易受影响的环境引起，所述的环境为在靶向的细胞内部，或者在靶向的位点的附近。当所述的靶向位点是肿瘤时，可以使用在肿瘤位点处存在的环境下（例如当暴露于肿瘤相关的酶或者酸性的pH）可切割的接头。
本发明的效应分子和抗体的典型化学修饰还包括使用聚乙二醇（PEG）进行衍生化，从而延长在循环系统中的滞留时间并降低免疫原性，所述的衍生化根据公知的方法进行（参见例如Lisi等人,Applied Biochem.4:19(1982);Beauchamp等人,Anal Biochem.131:25(1982);以及Goodson等人,Bio/Technology 8:343(1990)）。
本发明预期了用于主动免疫和被动免疫的实施方案中的疫苗。建议适于用作疫苗的免疫原性组合物可以最容易地按照本文中所公开的方式，直接从肽进行制备，所述的肽能激发免疫原性的T细胞。将最终的接种材料进行粗略的透析，从而去除不想要的分子量小的分子，和/或冻干，从而更方便地配制到想要的载体中。在本发明特定的实施方案中，本发明的组合物和方法用于生产细胞疫苗，例如该抗体的递送抗原的抗-Langerin结合部分用于指导所述的抗原（或多种抗原）到达抗原呈递细胞，所述的抗原呈递细胞随后将所述的抗原“加载”到MHC蛋白上用于呈递。因此所述的细胞疫苗是使用本发明的组合物加载从而产生加载了抗原的抗原呈递细胞的抗原呈递细胞。
当所述的疫苗是抗-Langerin结合蛋白自身的时候，例如是完整的抗体或其结合片段时，则这些“活性成分”可以使用本领域中理解的方法制成疫苗，如第4608251、4601903、4599231、4599230和4578770号美国专利，其相关的部分引入本文作为参考。一般地，该疫苗制备成可注射的，例如制备成液态的溶液或者悬液，或者适于在注射前再悬浮于液体中的固体形式。该制剂也可以是乳化的。活性的免疫原性成分通常与药学上可接受的并且与所述的活性成分相容的赋形剂混合。适合的赋形剂为，如水、盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等等或者其组合。此外，所述的疫苗也可以按照需要含有少量的辅料，如润湿剂或者乳化剂、pH缓冲剂、或者提高所述疫苗的效果的佐剂。
将疫苗以与其剂量剂型相容的方式给予，并且其量是治疗上有效的和免疫原性的。所给予的量取决于所治疗的受试者，包括，例如个体的免疫系统产生免疫应答的能力。所需给予的细胞和活性成分的准确量依赖于从业医师的判断。然而，对于细胞疫苗来说，适用的剂量范围为数千个细胞（到数百万个细胞）的数量级。对于标准的表位或者表位递送疫苗来说，则该疫苗可以是每次接种数百微克的活性成分。对于初次给予和加强注射而言，适用的治疗方案也是可以变化的，但是定式为进行初次给予，接着是进行随后的接种（subsequent inoculation）或者其他的给予。
本申请的方式可以在大范围内变化，然而，本文中的特定实施方案最可能是经静脉内递送，或者直接地递送到肿瘤或者感染的位点。无论如何，任意给予疫苗的常规方法都是可行的。疫苗的剂量取决于给药的途径，以及将根据宿主的大小发生变化。
在许多情况下，希望将多次给予该疫苗，例如每周或者每隔一周进行四次到六次接种。正常的接种治疗方案通常以两周到十二周的间隔，或者三周到六周的间隔进行。为了将免疫应答维持在保护性的水平上，或者针对疾病缓解或者重新感染的可能性，可以希望采取1-5年间隔，通常地3年间隔的定期加强。免疫疗程之后可以进行检测，所述的检测如检测T细胞活化、细胞因子分泌或者甚至是抗体的产生，该检测最经常地在体外完成。这些免疫应答检测是公知的，并且可见于大量的专利中，并且如本文所教导的。
本发明的疫苗可以以一个或者多个“单位剂量”提供，这取决于使用的是核酸载体、最终的经纯化的蛋白质还是最终的疫苗形式。单位剂量定义为含有预先确定的量的治疗组合物，所述的治疗组合物按计算产生预期的，与其给予相关联的想要的应答，所述的给予即通过合适的途径和治疗方案。所给予的量，其具体的途径和制剂是临床领域的技术人员的技能范围之内的。也可以对所治疗的受试者进行评估，具体地，评估该受试者的免疫系统的状态，和所期待的保护的状态。单位剂量不需要以单次的注射进行给予，而是可以在一段时间内进行连续的输注。本发明的单位剂量可以方便地用DNA/kg(或者蛋白质/Kg)体重来表示，范围在约0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.5、1、10、50、100、1000或者更多的mg/DNA/kg或者蛋白质/Kg体重进行给予。
类似地，所递送的抗-Langerin抗原疫苗的量可以为约0.2到约8.0mg/kg体重。因此，在特定的实施方案中，可以将0.4mg、0.5mg、0.8mg、1.0mg、1.5mg、2.0mg、2.5mg、3.0mg、4.0mg、5.0mg、5.5mg、6.0mg、6.5mg、7.0mg和7.5mg的该疫苗递送到个体的体内。给予的疫苗的剂量在很大的程度上取决于所治疗的受试者的体重和身体状态，以及给药途径和治疗的频率。包括预先连接到脂质体或者病毒递送载体的裸露的多核苷酸的药物组合物可以以1μg到1mg的多核苷酸对应1μg到100mg蛋白质的量进行给予。因此，具体的组合物可以包括独立地与1μg、5μg、10μg、20μg、3.0μg、40μg、50μg、60μg、70μg、80μg、100μg、150μg、200μg、250μg、500μg、600μg、700μg、800μg、900μg、1mg、1.5mg、5mg、10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg或者100mg的载体结合的1μg、5μg、10μg、20μg、30μg、40μg、50μg、60μg、70μg、80μg、100μg、150μg、200μg、250μg、500μg、600μg、700μg、800μg、900μg或者1000μg的多核苷酸或者蛋白质。
本发明的抗体任选地可以共价或者非共价地连接到可检测的标记上。适合于该用途的可检测标记包括任意的可以由光谱、光化学、生物化学、免疫化学、电学、光学或者化学方法检测的组合物。在本发明中有用的标记包括磁性珠（例如DYNABEADSTM）、荧光染料（如异硫氰酸荧光素、德州红、罗丹明、绿色荧光蛋白等等）、放射性标记（例如3H、125I、35S、14C或者32P）、酶（例如辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶及其它在ELISA中常用的酶），以及比色标记如胶体金或者有色玻璃或者塑料（如聚苯乙烯、聚丙烯、乳胶等等）的珠。
检测该标记的方法对于本领域技术人员而言是公知的。因此，例如放射性标记可以使用感光胶片或者闪烁计数器进行检测，荧光标记物可以使用光电探测器检测发射的光进行检测。酶标记一般通过向该酶提供底物，并检测由酶对底物的作用所产生的反应产物进行检测，以及比色的标记通过简单地观看有色的标记进行检测。
本发明的抗体和/或免疫缀合物的组合物尤其对于肠胃外给药是有用的，所述肠胃外给药如经静脉给药或者给药到体腔中。用于给药的组合物一般地包含溶于药学上可接受的载体的所述抗体和/或免疫缀合物的溶液，所述的载体优选地为含水载体。多种含水载体都可以使用，例如缓冲盐水等等。这些溶液是无菌的，并且一般地不含有不想要的物质。这些组合物可以通过常规的、公知的灭菌技术进行灭菌。为了满足合适的生理条件的要求，该组合物可以含有药学上可接受的辅料，如pH调节剂和缓冲剂，毒性调节剂等等，例如乙酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等等。在这些制剂中，融合蛋白的浓度可以在很大范围内变化并主要基于流体的体积、粘度、体重等等，以及根据所选择的具体给药方式以及患者的需求进行选择。
因此，本发明的用于经静脉给予的一般的药物免疫缀合物的组合物为约0.1到10mg每例患者每天。可以使用每例患者每天0.1到高达约100mg的剂量。用于制备可给药的组合物的实际方法对于本领域技术人员而言是已知的或者显而易见的，并更加详细地描述于出版物如Remington′sPharmaceutical Science,19th Ed.,Mack Publishing Company,Easton,Pa.(1995)中。
本发明的组合物可以为了治疗性治疗给药。在治疗应用中，组合物以足以治愈或者至少部分地缓解疾病及其并发症的量给药到患病的患者。将足以完成此目的而言的量定义为“治疗上有效的剂量”。对于此应用有效的量取决于疾病的严重程度和患者健康的一般状态。该化合物的有效量是在由临床医师或者其他有资格的观测者的记载中，提供症状（或多种症状）主观上的缓解，或者提供客观上可确认的改善的量。
组合物的一次或多次给药的实施取决于患者所需要及其耐受的剂量和频率。无论如何，该组合物都应该提供足量的本发明的蛋白质，从而有效地治疗患者。优选地，该剂量给药一次，但是可以周期地施用，直到达到治疗效果或者直到副作用使得治疗中止。一般来说，所述的剂量足以治疗或者缓解疾病的症状或者体征，而不产生不可接受的对患者的毒性。
本发明的免疫缀合物组合物的控释的肠胃外制剂可以制成植入物、油性注射剂或者颗粒系统。蛋白质递送系统的广泛概述，参见Banga,A.J.,THERAPEUTIC PEPTIDES AND PROTEINS:FORMULATION,PROCESSING,ANDDELIVERY SYSTEMS,Technomic Publishing Company,Inc.,Lancaster,Pa.,(1995)，其在此引入作为参考。颗粒系统包括微球、微粒、微胶囊、纳米胶囊、纳米球和纳米颗粒。微胶囊含有作为中间芯的治疗蛋白。在微球中，治疗剂分布在该颗粒中。小于约1μm的颗粒、微球和微胶囊一般地分别称作纳米颗粒、纳米球和纳米胶囊。毛细血管具有约5μm的直径，从而只有纳米颗粒是经静脉给药的。微颗粒一般地直径在100μm左右，并经皮下或者经肌肉内给药。
可以将聚合物用于本发明的免疫缀合物组合物的离子控释。本领域已知有多种可降解的和不可降解的聚合物基质用于控制药物递送（Langer,R.,Accounts Chem.Res.26:537-542(1993)）。例如，嵌段共聚物，帕洛沙姆
Figure BDA00001636032700401
在低温下以黏的却有流动性的液体存在，但是在体温下形成半固体的凝胶，已经将羟基磷灰石用作蛋白质控释的微载体，和/或脂质体可以用于控释以及脂类包裹的药物的药物靶向。已知有多种用于将治疗性蛋白质进行受控的递送的其他系统。参见例如第5055303、5188837、4235871、4501728、4837028、4957735和5019369、5055303、5514670、5413797、5268164、5004697、4902505、5506206、5271961、5254342和5534496号美国专利，其各个的相关部分在此引入作为参考。
在本发明的免疫缀合物的多种不同用途中，包括由特定的人细胞引起的各种疾病病症，而所述的疾病病症可以被所述融合蛋白的毒性消除。例如，对于人源化抗-Langerin抗体，本文公开了例如ATCC登录号为PTA-9852的15B10、ATCC登录号为PTA-9853的2G3、91E7、37C1或者4C7及其结合片段。例如免疫缀合物的一个应用是处理表达Langerin的恶性肿瘤细胞。典型的恶性肿瘤细胞包括慢性淋巴细胞白血病和多毛细胞白血病的那些。
在另一个实施方案中，本发明提供了递送抗原的试剂盒，所述抗原如Langerin或者其免疫反应性片段，其为缀合的或者为具有一个或多个T细胞或者B细胞表位的融合蛋白的形式。如本文中所使用的，“生物样品”是含有抗原的生物组织或者流体的样品。该样品包括但不限于：来自活组织检查的组织、血液和血细胞（如白细胞）。优选地，所述的细胞是淋巴细胞，如树突细胞。生物样品还包括组织的片段，如出于组织学的目的取得的冷冻的片段。生物样品一般地得自多细胞的真核生物，优选地得自哺乳动物如大鼠、小鼠、牛、狗、豚鼠或者兔，以及更优选地得自灵长类动物，例如猕猴、黑猩猩或者人类。最优选地，该样品来自人类。本发明的抗体也可以在体内使用，例如作为用于体内成像的诊断性工具。
试剂盒一般地包括编码本发明的抗体（或其结合片段）的核酸序列，所述的抗体在羧基末端具有一个或多个构架部分或者多克隆位点，在该处可以插入一个或多个抗原的编码序列。在一些实施方案中，所述的抗体是人源化抗-Langerin Fv片段，如scFv或者dsFv片段。此外，该试剂盒一般地包括说明材料，该说明材料公开本发明的抗体的使用方法（例如针对在使用树突细胞进行免疫之前将其加载到树突细胞中，所述的树突细胞可以是自身的树突细胞）。所述的试剂盒还可以包括附加的组件，从而便于将其用于设计试剂盒的具体应用。因此，例如该试剂盒可以额外地包括检测标记的方法（例如用于酶标记的酶底物，用于检测荧光标记的滤器设备，如羊抗小鼠HPP的合适的二级标记等等）。该试剂盒可以额外地包括缓冲液和其他通常地用于具体方法的操作的试剂。该试剂盒和合适的容纳物对于本领域技术人员而言是已知的。
在本发明的另一系列用途中，可以将由本发明的抗体所靶向的免疫缀合物用于将靶向的细胞从培养物中的细胞群中清除。例如，如果特定群体的T细胞是优选的，可以使用本发明的免疫缀合物来富集具有进行的免疫应答的相反效果的T细胞群体。因此，例如可以通过向患者提供加载了抗原的树突细胞，从具有癌症的患者中培养的细胞中清除癌细胞，所述的抗原加载使用了本发明的抗体作为触发针对该癌症、病毒或者其他病原体的免疫应答的抗原的靶向部分。类似地，所述的免疫缀合物可以用于增加调节T细胞的群体，或者驱使免疫应答朝着或者远离细胞毒性T细胞应答方向或者甚至驱使B细胞应答。
DC亚型的分化功能：本发明人证明了，得自CD34+的造血前体细胞的LC和intDC在激活淋巴细胞的能力上有差别（图1）。IntDC诱导原态B细胞分化成为免疫球蛋白分泌的浆细胞，并且诱导CD4+T细胞分化成滤泡辅助T细胞（TFH）17,18，而LC是细胞毒性CD8+淋巴细胞（CTL）尤其有效的激活剂。此外，不同的是只有间质DC产生IL-10及其酶活性，其可能在选择呈递到T细胞的肽中是基础性的。实际上，如HIV nef蛋白质所表现出的19，不同的酶可能将抗原降解成不同的肽指令。这将导致呈递不同系列的MHC/肽复合物并导致不同的抗原特异性T细胞指令。Dudziak等人显示了20，将通过亚型特异性的外源凝集素Dectin-1递送到DC的抗原有差异地呈递给MHC II类，而通过DEC-205呈递的那些大部分呈递给MHC I类，并且这种差异对于DC亚型是内在的。
DC亚型在确定CD4+T细胞应答中起到重要的作用。极化的或者独特的DC亚型为T细胞提供不同的信号，这些信号确定了免疫应答的类型（类型1对类型2）21。因此在小鼠中，脾的CD8+DC引发原代CD4+T细胞，从而在牵涉到IL-12的过程中产生Th1细胞因子，然而脾的CD8+DC引发原代CD4+T产生Th2细胞因子22,23。另外，来自相同的DC的不同信号可以诱导不同的T细胞极化，这一点为以下的事实所显示，当DC由大肠杆菌脂多糖（LPS）活化时诱导IL-12产生和Th1-细胞极化，而当DC暴露到来自牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis）的LPS时没有IL-12产生和Th2-细胞极化。CD40-配体（CD40L）-活化的DC通过IL-12依赖的机制引发Th1的应答，然而使用IL-3和CD40L活化的pDC显示出分泌可忽略量的IL-12，并且引发Th2应答25。Soares等人还报道了表达不同的外源凝集素的两种DC亚型具有内在的倾向，该倾向通过不同的机制有差别地影响到体内Th1/Th2平衡。更有趣的是，我们发现了通过不同的DC受体将相同的抗原递送到相同类型的DC时诱导不同品质的CD4+T细胞应答（见前文的数据）。因此，两种DC亚型和DC所暴露于其中的信号在确定免疫结果的本质上是重要的因素。
图2-融合到抗原的重组抗-Langerin抗体保持其结合细胞表面Langerin的能力。CHO-S细胞被指导全长人Langerin表达的质粒稳定地转染。将纯的重组抗-Langerin 2G3或者15B10小鼠V区-人IgG4嵌合抗体或者C末端融合到来自Avian Flu(HA5-1)的甲型流感红细胞凝集素HA-1功能域的相同抗体、来自H1N1 Flu毒株(HA1-1)的甲型流感红细胞凝集素HA-1、来自热纤梭菌(Clostridium thermocellum)的锚定蛋白功能域、HIV gag p24(gag)或者HIV肽的链(Hipo5)，针对Langerin-CHO细胞进行了滴定。在冰上培养之后，将细胞洗涤，并使用抗人Fc-PE试剂进行处理。进一步在冰上培养之后，洗涤细胞并且在FACS阵列仪器上分析从而测定细胞结合的荧光度（表示为与未经转染的CHO-S细胞相比的%MFI）。
该数据显示了在H-链的C末端增加抗原不影响该抗体结合到细胞表面的Langerin，并且还证明了这些抗Langerin抗体作为有效的载体将抗原带到支持人Langerin的细胞表面上。
图3-证明了融合到人前列腺特异性癌症抗原的重组抗-Langerin抗体引发来自健康供体的抗原特异性CD4+T细胞的扩增的能力。图3a比较了将PSA通过CD40和Langerin递送到DC诱导产生IFNγ的PSA-特异性CD4+T细胞。将来自健康供体的CD4+T细胞与使用抗-CD40-PSA或者抗-Langerin-PSA靶向的IFNDC共培养8天。将细胞使用单个肽PSA(5μM)进行刺激（15具体的59个肽）。2天之后，分析培养物上清也来测定IFNγ。点线代表了没有肽的平均值±SD上限，而在此线以上的反应认为是显著的。图3b显示了将CD4+T细胞进行染色，用于测定肽特异性细胞内IFNγ+细胞的频率。
这些数据显示，支撑癌症抗原的抗-Langerin疫苗可以在体外使用来自正常个体的免疫细胞引发强效的抗原特异性抗-CD4+T细胞应答。在此体外培养系统中，此试剂与基于抗-CD的疫苗一样地有效——这些DC表达两种受体。在体内，基于抗-Langerin的疫苗将抗原仅靶向朗格汉斯细胞(LC)，并且基于最近的研究[Immunity,第29卷，第3期,第497-510页,2008年9月19日]，LC优先诱导分泌T辅助2(Th2)细胞的细胞因子的CD4+T细胞的分化，并且在引发和交叉引发原态CD8+T细胞中尤其地有效——后者的特征对于引起抗癌CTL应答是尤其想要的。与此相比，抗-CD40靶向剂能够在体内将抗原递送到APC的更广泛阵列。
图4-证明了融合到人前列腺特异性癌症抗原的重组抗-Langerin抗体引发来自前列腺癌患者的抗原特异性CD8+T细胞扩增的能力。使用靶向DC的抗-CD40-PSA和抗-Langerin-PSA靶向DC诱导PSA-特异性CD8+T细胞应答。（a）将IFNDC使用1mg mAb与PSA的融合蛋白进行靶向。将纯化的自体同源CD8+T细胞共培养10天。将细胞使用抗-CD8和PSA(KLQCVDLHV)-四聚体染色。细胞来自HLA-A*0201阳性前列腺癌患者。PSA四聚体试剂识别支撑T细胞受体的T细胞，所述的T细胞受体特异性地与支撑PSA KLQCVDLHV肽的HLA-A*0201复合物反应。
这些数据显示，支撑癌症抗原的抗-Langerin疫苗可以在体外使用来自前列腺癌症的免疫细胞引发强效的抗原特异性抗-CD8+T细胞应答。在此体外培养系统中，此试剂与基于抗-CD的疫苗一样地有效——这些DC表达两种受体。在体内，基于抗-Langerin的疫苗能够将抗原仅靶向朗格汉斯细胞(LC)，并且基于最近的研究[Immunity,第29卷,第3期,497-510,2008年9月19日]，LC优先诱导分泌T辅助2(Th2)细胞的细胞因子的CD4+T细胞的分化，并且在引发和交叉引发原态CD8+T细胞中尤其有效——后者的特征对于引起抗癌CTL应答中是尤其想要的。与此相比，抗-CD40靶向剂能够在体内将抗原递送到APC的更广泛的阵列。
图5-抗-Langerin优选地靶向表皮LC。将来自HLA-A201供体的经纯化的皮肤DC亚型（表皮LC，真皮CD1a+DC和CD14+DC）与8nM抗Langerin、IgG4缀合物mAb、游离FluMP或者没有抗原时培养3小时。将同源的经纯化的CD8+T细胞与抗原脉冲释药的DC以1∶20的DC/T比进行培养。24小时后，在培养物中加入CD40L(100ng/ml;R&D)。CD40-连接增强了DC的交叉呈递。将共培养物在37℃下培养8-10天。在第3天时加入IL-2(10U/ml)。使用HLA-A201-FluMP(58-66)肽(GILGFVFTL)四聚体评估FluMP-特异性CD8+T细胞的应答。
在方框图5A中的数据：2D FACs作图显示了由特异性HLA-A201-FluMP(58-66)四聚体染色来评估的FluMP-特异性CD8+T细胞扩增，这证明了通过抗-Langerin的靶向抗原仅通过LC引发抗原特异性CD8+T细胞扩增，这与其他的抗原递送方法如游离FluMP相比更为稳健。一些反应是由真皮CD1a+DC来诱导的，这与这些细胞在培养物中使Langerin上调相一致。图5B将此数据总结在图中，图中显示平均值±sd,N=3。图5C.与Langerin-FluMP、对照IgG4-FluMP、游离的FluMP或者没有抗原下培养8天的人LC的培养物上清中的IFN-γ水平。
图6显示了人皮肤DC差别表达Langerin。图6A显示了Langerin在分离的人皮肤DC亚型上的表达。数据显示Langerin在人LC上有限的表达，但是在真皮CD1a+或者CD14+DC上不表达。图6B显示了从3个不同物种中分离的皮肤DC的Langerin的基因表达分析。从分选移植的皮肤mDC亚型：表皮LC、内皮CD1a+DC和CD14+DC制备了RNA。图6C显示了将正常的人皮肤使用Langerin和HLA-DR mAb免疫荧光染色。
图7-抗-Langerin 15B10抗体（由ATCC登录号为PTA-9852的杂交瘤产生）特异性地染色朗格汉斯细胞。制备了人的上皮层并将其使用Alexa568[红色]-标记的抗-Langerin 15B10和商购的抗-HLA抗体标记的绿色染色。顶部的图显示了叠加的红色和绿色的图像，其突出显示了这两个标志物的共同定位。
构建体
mAnti-Langerin15B10K-分别为小鼠抗-Langerin 15B10抗体cDNA的轻链的核苷酸和成熟蛋白质氨基酸序列。可变区残基是加下划线的。
Figure BDA00001636032700451
AAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGATGTTCTGGATTCCTGCTTCCAGCAGTGATGTTGTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCCGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCCTTGTACACAGTAATGGAAACACCTATTTACATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAAATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGACTTTATTTCTGCTCTCAAAGTACACATGTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAACAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATCGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGT
Figure BDA00001636032700452
(SEQ ID NO.1)
DVVMTQTPLSLPVRLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPD RFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMNSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC(SEQ ID NO.2)
mAnti-Langerin15B10H-LV-hIgG4H-C-分别为融合到人IgG4的小鼠抗Langerin 15B10抗体的重链可变区的核苷酸和成熟蛋白质氨基酸序列。可变区残基为加下划线的。
Figure BDA00001636032700453
GAATGGAGGATCTTTCTCTTCATCCTGTCAGGAACTGCAGGTGTCCACTCCCAGGTTCAGCTGCGGCAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTTACTGACTATGTTATAAGTTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTTATCCTGGAAGTGGTTATTCTTTCTACAATGAGAACTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCACCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAACCTACTATAACTACCCTTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACAACGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCGAAGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAAGCTAGC
Figure BDA00001636032700454
(SEQ ID NO.3)
QVQLRQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENF KGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCATYYNYPFAYWGQGTLVTVSAAKTTGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKAS(SEQ IDNO.4)
mAnti-Langerin2G3L(由ATCC登录号为PTA-9853的杂交瘤产生)-分别为小鼠抗-Langerin 2G3抗体cDNA的轻链的核苷酸和成熟蛋白质氨基酸序列。可变区残基是加下划线的。
Figure BDA00001636032700461
GCCTGGATTTCACTTATACTCTCTCTCCTGGCTCTCAGCTCAGGGGCCATTTCCCAGGCTGTTGTGACTCAGGAATCTGCACTCACCACATCACCTGGTGAAACAGTCACACTCACTTGTCGCTCAAGTACTGGGGCTGTTACAACTAGTAACTATGCCAACTGGGTCCAAGAAAAACCAGATCATTTATTCACTGGTCTAATAGGTGGTACCAACAACCGAGTTTCAGGTGTTCCTGCCAGATTCTCAGGCTCCCTGATTGGAGACAAGGCTGCCCTCACCATCACAGGGGCACAGACTGAGGATGAGGCAATATATTTCTGTGCTCTATGGTACAGCAACCATTGGGTGTTCGGTGGAGGAACCAAACTGACTGTCCTAGGCCAGCCCAAGTCTTCGCCATCAGTCACCCTGTTTCCACCTTCCTCTGAAGAGCTCGAGACTAACAAGGCCACACTGGTGTGTACGATCACTGATTTCTACCCAGGTGTGGTGACAGTGGACTGGAAGGTAGATGGTACCCCTGTCACTCAGGGTATGGAGACAACCCAGCCTTCCAAACAGAGCAACAACAAGTACATGGCTAGCAGCTACCTGACCCTGACAGCAAGAGCATGGGAAAGGCATAGCAGTTACAGCTGCCAGGTCACTCATGAAGGTCACACTGTGGAGAAGAGTTTGTCCCGTGCTGACTGTTCC
Figure BDA00001636032700462
(SEQ ID NO.5)
QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFS GSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNHWVFGGGTKLTVLGQPKSSPSVTLFPPSSEELETNKATLVCTITDFYPGVVTVDWKVDGTPVTQGMETTQPSKQSNNKYMASSYLTLTARAWERHSSYSCQVTHEGHTVEKSLSRADCS(SEQ ID NO.6)
mAnti-Langerin2G3H-分别为小鼠抗-Langerin 2G3抗体cDNA重链的核苷酸和成熟蛋白质氨基酸序列。可变区残基为加下划线的。
Figure BDA00001636032700463
ACATTGAACATGCTGTTGGGGCTGAAGTGGGTTTTCTTTGTTGTTTTTTATCAAGGTGTGCATTGTGAGGTGCAGCTTGTTGAGTCTGGTGGAGGATTGGTGCAGCCTAAAGGGTCATTGAAACTCTCATGTGCAGCCTCTGGATTAACCTTCAATATCTACGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGTTTGGAATGGGTTGCTCGCATAAG AAATAAAAGTAATAATTATGCAACATATTATGCCGATTCAGTGAAAGACAGGTTCACCATCTCCAGAGATGATTCACAAAGCTTGCTCTATCTGCAAATGAACAACTTGAAAACTGAGGACACAGCCATGTATTACTGTGTGGGACGGGACTGGTTTGATTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGAC ATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAAGCTAGC(SEQ ID NO.7)
EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYA DSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYCVGRDWFDYWGQGTLVTVSAAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGKAS(SEQ ID NO.8)
C84 rAB-pIRES2[mAnti-Langerin2G3H-LV-hIgG4H-C-锚定蛋白]下文中显示了此H链-锚定蛋白融合蛋白的编码区。起始密码子和终止密码子为黑体，连接的GCTAGC限制性位点也是如此。
ACATTGAACATGCTGTTGGGGCTGAGGTGGGTTTTCTTTGTTGTTTTTTATCAAGGTGTGCATTGTGAGGTGCAGCTTGTTGAGTCTGGTGGAGGATTGGTGCAGCCTAAAGGGTCATTGAAACTCTCATGTGCAGCCTCTGGATTAACCTTCAATATCTACGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGTTTGGAATGGGTTGCTCGCATAAGAAATAAAAGTAATAATTATGCAACATATTATGCCGATTCAGTGAAAGACAGGTTCACCATCTCCAGAGATGATTCACAAAGCTTGCTCTATCTGCAAATGAACAACTTGAAAACTGAGGACACAGCCATGTATTACTGTGTGGGACGGGACTGGTTTGATTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACGAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCGAAGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA
Figure BDA00001636032700473
AATTCT CCTCAAAATGAAGTACTGTACGGAGATGTGAATGATGACGGAAAAGTAAACTCCACTGACT TGACTTTGTTAAAAAGATATGTTCTTAAAGCCGTCTCAACTCTCCCTTCTTCCAAAGCTGAAA AGAACGCAGATGTAAATCGTGACGGAAGAGTTAATTCCAGTGATGTCACAATACTTTCAAG ATATTTGATAAGGGTAATCGAGAAATTACCAATA
Figure BDA00001636032700474
(SEQ ID NO.57)
下文中显示了C84重链的成熟H链序列。连接序列AS为黑体，并且锚定蛋白为加下划线的。
EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYCVGRDWFDYWGQGTLVTVSAAKTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
Figure BDA00001636032700481
N SPQNEVLYGDVNDDGKVNSTDLTLLKRYVLKAVSTLPSSKAEKNADVNRDGRVNSSDVTILSR YLIRVIEKLPI(SEQ ID NO.58)
C85 rAB-pIRES2[mAnti-Langerin2G3H-LV-hIgG4H-C-Flex-FluHA1-1-6xHis]下文中显示了此H链-Flu HA1-1融合蛋白的编码区。起始密码子和终止密码子为黑体，连接的GCTAGC限制性位点也是如此。
Figure BDA00001636032700491
ACATTGAACATGCTGTTGGGGCTGAGGTGGGTTTTCTTTGTTGTTTTTTATCAAGGTGTGCATTGTGAGGTGCAGCTTGTTGAGTCTGGTGGAGGATTGGTGCAGCCTAAAGGGTCATTGAAACTCTCATGTGCAGCCTCTGGATTAACCTTCAATATCTACGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGTTTGGAATGGGTTGCTCGCATAAGAAATAAAAGTAATAATTATGCAACATATTATGCCGATTCAGTGAAAGACAGGTTCACCATCTCCAGAGATGATTCACAAAGCTTGCTCTATCTGCAAATGAACAACTTGAAAACTGAGGACACAGCCATGTATTACTGTGTGGGACGGGACTGGTTTGATTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACGAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCGAAGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA GATAC AACAGAACCTGCAACACCTACAACACCTGTAACAACAGACACAATATGTATAGGCTACCAT GCGAACAATTCAACCGACACTGTTGACACAGTACTCGAGAAGAATGTGACAGTGACACACT CTGTTAACCTGCTCGAAGACAGCCACAACGGAAAACTATGTAGATTAAAAGGAATAGCCCC ACTACAATTGGGGAAATGTAACATCGCCGGATGGCTCTTGGGAAACCCAGAATGCGACCCA CTGCTTCCAGTGAGATCATGGTCCTACATTGTAGAAACACCAAACTCTGAGAATGGAATATG TTATCCAGGAGATTTCATCGACTATGAGGAGCTGAGGGAGCAATTGAGCTCAGTGTCATCAT TCGAAAGATTCGAAATATTTCCCAAAGAAAGCTCATGGCCCAACCACAACACAAACGGAGT AACGGCAGCATGCTCCCATGAGGGGAAAAGCAGTTTTTACAGAAATTTGCTATGGCTGACG GAGAAGGAGGGCTCATACCCAAAGCTGAAAAATTCTTATGTGAACAAAAAAGGGAAAGAA GTCCTTGTACTGTGGGGTATTCATCACCCGCCTAACAGTAAGGAACAACAGAATCTCTATCA GAATGAAAATGCTTATGTCTCTGTAGTGACTTCAAATTATAACAGGAGATTTACCCCGGAAA TAGCAGAAAGACCCAAAGTAAGAGATCAAGCTGGGAGGATGAACTATTACTGGACCTTGCT AAAACCCGGAGACACAATAATATTTGAGGCAAATGGAAATCTAATAGCACCAATGTATGCT TTCGCACTGAGTAGAGGCTTTGGGTCCGGCATCATCACCTCAAACGCATCAATGCATGAGTG TAACACGAAGTGTCAAACACCCCTGGGAGCTATAAACAGCAGTCTCCCTTACCAGAATATA CACCCAGTCACAATAGGAGAGTGCCCAAAATACGTCAGGAGTGCCAAATTGAGGATGGTTC ACCATCACCATCACCAT
Figure BDA00001636032700493
(SEQ ID NO.59)
在下文显示了C85重链的成熟H链序列。连接序列AS为黑体，并且Flu HA1-1为加下划线的。柔性接头连接序列是斜体的。
EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYCVGRDWFDYWGQGTLVTVSAAKTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
Figure BDA00001636032700501
Figure BDA00001636032700502
DTICIGYHANNSTDTVDTVLEKNVTVTHSVNLLEDSHNGKLCRLKGIAPLQLG KCNIAGWLLGNPECDPLLPVRSWSYIVETPNSENGICYPGDFIDYEELREQLSSVSSFERFEIFPKE SSWPNHNTNGVTAACSHEGKSSFYRNLLWLTEKEGSYPKLKNSYVNKKGKEVLVLWGIHHPPN SKEQQNLYQNENAYVSVVTSNYNRRFTPEIAERPKVRDQAGRMNYYWTLLKPGDTIIFEANGNL IAPMYAFALSRGFGSGIITSNASMHECNTKCQTPLGAINSSLPYQNIHPVTIGECPKYVRSAKLRM VHHHHHH(SEQ ID NO.60)
C86 rAB-pIRES2[mAnti-Langerin2G3H-LV-hIgG4H-C-Flex-FluHA5-1-6xHis]下文中显示了此H链-Flu HA5-1融合蛋白的编码区。起始密码子和终止密码子为黑体，连接的GCTAGC限制性位点也是如此。
Figure BDA00001636032700503
ACATTGAACATGCTGTTGGGGCTGAGGTGGGTTTTCTTTGTTGTTTTTTATCAAGGTGTGCATTGTGAGGTGCAGCTTGTTGAGTCTGGTGGAGGATTGGTGCAGCCTAAAGGGTCATTGAAACTCTCATGTGCAGCCTCTGGATTAACCTTCAATATCTACGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGTTTGGAATGGGTTGCTCGCATAAGAAATAAAAGTAATAATTATGCAACATATTATGCCGATTCAGTGAAAGACAGGTTCACCATCTCCAGAGATGATTCACAAAGCTTGCTCTATCTGCAAATGAACAACTTGAAAACTGAGGACACAGCCATGTATTACTGTGTGGGACGGGACTGGTTTTGATTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACGAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCGAAGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA
Figure BDA00001636032700504
GATAC AACAGAACCTGCAACACCTACAACACCTGTAACAACAGATCAGATTTGCATTGGTTACCATG CAAACAACTCGACAGAGCAGGTTGACACAATAATGGAAAAGAACGTTACTGTTACACATGC CCAAGACATACTGGAAAAGAAACACAACGGGAAGCTCTGCGATCTAGATGGAGTGAAGCCT CTAATTTTGAGAGATTGTAGCGTAGCTGGATGGCTCCTCGGAAACCCAATGTGTGACGAATT CATCAATGTGCCGGAATGGTCTTACATAGTGGAGAAGGCCAATCCAGTCAATGACCTCTGTT ACCCAGGGGATTTCAATGACTATGAAGAATTGAAACACCTATTGAGCAGAATAAACCATTTT GAGAAAATTCAGATCATCCCCAAAAGTTCTTGGTCCAGTCATGAAGCCTCATTAGGGGTGAG CTCAGCATGTCCATACCAGGGAAAGTCCTCCTTTTTCAGAAATGTGGTATGGCTTATCAAAA AGAACAGTACATACCCAACAATAAAGAGGAGCTACAATAATACCAACCAAGAAGATCTTTT GGTACTGTGGGGGATTCACCATCCTAATGATGCGGCAGAGCAGACAAAGCTCTATCAAAAC CCAACCACCTATATTTCCGTTGGGACATCAACACTAAACCAGAGATTGGTACCAAGAATAGC TACTAGATCCAAAGTAAACGGGCAAAGTGGAAGGATGGAGTTCTTCTGGACAATTTTAAAG CCGAATGATGCAATCAACTTCGAGAGTAATGGAAATTTCATTGCTCCAGAATATGCATACAA AATTGTCAAGAAAGGGGACTCAACAATTATGAAAAGTGAATTGGAATATGGTAACTGCAAC ACCAAGTGTCAAACTCCAATGGGGGCGATAAACTCTAGCATGCCATTCCACAATATACACCC TCTCACCATTGGGGAATGCCCCAAATATGTGAAATCAAACAGATTAGTCCTTGCGCACCATC ACCATCACCAT
Figure BDA00001636032700511
(SEQ ID NO.61)
在下文中显示了C86重链的成熟H链序列。连接序列AS为黑体，并且Flu HA5-1为加下划线的。柔性接头连接序列是斜体的。
EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYCVGRDWFDYWGQGTLVTVSAAKTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
Figure BDA00001636032700512
Figure BDA00001636032700513
DQICIGYHANNSTEQVDTIMEKNVTVTHAQDILEKKHNGKLCDLDGVKPLILR DCSVAGWLLGNPMCDEFINVPEWSYIVEKANPVNDLCYPGDFNDYEELKHLLSRINHFEKIQIIP KSSWSSHEASLGVSSACPYQGKSSFFRNVVWLIKKNSTYPTIKRSYNNTNQEDLLVLWGIHHPN DAAEQTKLYQNPTTYISVGTSTLNQRLVPRIATRSKVNGQSGRMEFFWTILKPNDAINFESNGNFI APEYAYKIVKKGDSTIMKSELEYGNCNTKCQTPMGAINSSMPFHNIHPLTIGECPKYVKSNRLVL AHHHHHH(SEQ ID NO.62)
C804 rAB-cetHS-puro[mAnti-Langerin2G3H-LV-hIgGK-C-Flex-hPSA]在下文显示了此H链-PSA融合蛋白的编码区。起始密码子和终止密码子为黑体，连接的GCTAGC限制性位点也是如此。
ACATTGAACATGCTGTTGGGGCTGAAGTGGGTTTTCTTTGTTGTTTTTTATCAAGGTGTGCATTGTGAGGTGCAGCTTGTTGAGTCTGGTGGAGGATTGGTGCAGCCTAAAGGGTCATTGAAACTCTCATGTGCAGCCTCTGGATTAACCTTCAATATCTACGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGTTTGGAATGGGTTGCTCGCATAAGAAATAAAAGTAATAATTATGCAACATATTATGCCGATTCAGTGAAAGACAG GTTCACCATCTCCAGAGATGATTCACAAAGCTTGCTCTATCTGCAAATGAACAACTTGAAAACTGAGGACACAGCCATGTATTACTGTGTGGGACGGGACTGGTTTGATTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACGAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCGAAGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA
Figure BDA00001636032700522
GATAC AACAGAACCTGCAACACCTACAACACCTGTAACAACACCGACAACAACACTTCTAGCGCCC CTCATCCTGTCTCGGATTGTGGGAGGCTGGGAGTGCGAGAAGCATTCCCAACCCTGGCAGGT GCTTGTGGCCTCTCGTGGCAGGGCAGTCTGCGGCGGTGTTCTGGTGCACCCCCAGTGGGTCC TCACAGCTGCCCACTGCATCAGGAACAAAAGCGTGATCTTGCTGGGTCGGCACAGCCTGTTT CATCCTGAAGACACAGGCCAGGTATTTCAGGTCAGCCACAGCTTCCCACACCCGCTCTACGA TATGAGCCTCCTGAAGAATCGATTCCTCAGGCCAGGTGATGACTCCAGCCACGACCTCATGC TGCTCCGCCTGTCAGAGCCTGCCGAGCTCACGGATGCTGTGAAGGTCATGGACCTGCCCACC CAGGAGCCAGCACTGGGGACCACCTGCTACGCCTCAGGCTGGGGCAGCATTGAACCAGAGG AGTTCTTGACCCCAAAGAAACTTCAGTGTGTGGACCTCCATGTTATTTCCAATGACGTGTGT GCGCAAGTTCACCCTCAGAAGGTGACCAAGTTCATGCTGTGTGCTGGACGCTGGACAGGGG GCAAAAGCACCTGCTCGGGTGATTCTGGGGGCCCACTTGTCTGTAATGGTGTGCTTCAAGGT ATCACGTCATGGGGCAGTGAACCATGTGCCCTGCCCGAAAGGCCTTCCCTGTACACCAAGGT GGTGCATTACCGGAAGTGGATCAAGGACACCATCGTGGCCAACCCC
Figure BDA00001636032700523
(SEQ ID NO.63)
在下文中显示了C804重链的成熟H链序列。连接序列AS为黑体，并且PSA为加下划线的。柔性接头连接序列是斜体的。
EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYCVGRDWFDYWGQGTLVTVSAAKTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
Figure BDA00001636032700524
Figure BDA00001636032700525
APLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTA AHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSE PAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKV TKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKD TIVANP(SEQ ID NO.64)
C87 rAB-pIRES2[mAnti-Langerin15B10H-SLAML-V-hIgG4H-Flex-FluHA5-1-6xHis]在下文中显示了此H链-Flu HA5-1融合蛋白的编码区。起始密码子和终止密码子为黑体，连接的GCTAGC限制性位点也是如此。
Figure BDA00001636032700531
GACCCCAAAGGCTCCCTTTCCTGGAGAATACTTCTGTTTCTCTCCCTGGCTTTTGAGTTGTCGTACGGACAGGTTCAGCTGCGGCAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTTACTGACTATGTTATAAGTTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTTATCCTGGAAGTGGTTATTCTTTCTACAATGAGAACTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCACCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAACCTACTATAACTACCCTTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACAACGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCGAAGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA
Figure BDA00001636032700532
GATAC AACAGAACCTGCAACACCTACAACACCTGTAACAACAGATCAGATTTGCATTGGTTACCATG CAAACAACTCGACAGAGCAGGTTGACACAATAATGGAAAAGAACGTTACTGTTACACATGC CCAAGACATACTGGAAAAGAAACACAACGGGAAGCTCTGCGATCTAGATGGAGTGAAGCCT CTAATTTTGAGAGATTGTAGCGTAGCTGGATGGCTCCTCGGAAACCCAATGTGTGACGAATT CATCAATGTGCCGGAATGGTCTTACATAGTGGAGAAGGCCAATCCAGTCAATGACCTCTGTT ACCCAGGGGATTTCAATGACTATGAAGAATTGAAACACCTATTGAGCAGAATAAACCATTTT GAGAAAATTCAGATCATCCCCAAAAGTTCTTGGTCCAGTCATGAAGCCTCATTAGGGGTGAG CTCAGCATGTCCATACCAGGGAAAGTCCTCCTTTTTCAGAAATGTGGTATGGCTTATCAAAA AGAACAGTACATACCCAACAATAAAGAGGAGCTACAATAATACCAACCAAGAAGATCTTTT GGTACTGTGGGGGATTCACCATCCTAATGATGCGGCAGAGCAGACAAAGCTCTATCAAAAC CCAACCACCTATATTTCCGTTGGGACATCAACACTAAACCAGAGATTGGTACCAAGAATAGC TACTAGATCCAAAGTAAACGGGCAAAGTGGAAGGATGGAGTTCTTCTGGACAATTTTAAAG CCGAATGATGCAATCAACTTCGAGAGTAATGGAAATTTCATTGCTCCAGAATATGCATACAA AATTGTCAAGAAAGGGGACTCAACAATTATGAAAAGTGAATTGGAATATGGTAACTGCAAC ACCAAGTGTCAAACTCCAATGGGGGCGATAAACTCTAGCATGCCATTCCACAATATACACCC TCTCACCATTGGGGAATGCCCCAAATATGTGAAATCAAACAGATTAGTCCTTGCGCACCATC ACCATCACCAT
Figure BDA00001636032700533
(SEQ ID NO.65)
下文中显示了C87重链的成熟H链序列。连接序列AS为黑体，并且Flu HA5-1是加下划线的。
QVQLRQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCATYYNYPFAYWGQGTLVTVSAAKTTGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
Figure BDA00001636032700541
Figure BDA00001636032700542
DQICIGYHANNSTEQVDTIMEKNVTVTHAQDILEKKHNGKLCDLDGVKPLILRD CSVAGWLLGNPMCDEFINVPEWSYIVEKANPVNDLCYPGDFNDYEELKHLLSRINHFEKIQIIPKS SWSSHEASLGVSSACPYQGKSSFFRNVVWLIKKNSTYPTIKRSYNNTNQEDLLVLWGIHHPNDA AEQTKLYQNPTTYISVGTSTLNQRLVPRIATRSKVNGQSGRMEFFWTILKPNDAINFESNGNFIAP EYAYKIVKKGDSTIMKSELEYGNCNTKCQTPMGAINSSMPFHNIHPLTIGECPKYVKSNRLVLAHHHHHH(SEQ ID NO.66)
C88 rAB-pIRES2[mAnti-Langerin15B10H-SLAML-V-hIgG4H-C-锚定蛋白]下文中显示了此H链-锚定蛋白融合蛋白的编码区。起始密码子和终止密码子为黑体，连接的GCTAGC限制性位点也是如此。
Figure BDA00001636032700543
GACCCCAAAGGCTCCCTTTCCTGGAGAATACTTCTGTTTCTCTCCCTGGCTTTTGAGTTGTCGTACGGACAGGTTCAGCTGCGGCAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTTACTGACTATGTTATAAGTTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTTATCCTGGAAGTGGTTATTCTTTCTACAATGAGAACTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCACCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAACCTACTATAACTACCCTTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACAACGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCTGCCCAGCACCTGAGTTCGAAGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA
Figure BDA00001636032700544
AATTCT CCTCAAAATGAAGTACTGTACGGAGATGTGAATGATGACGGAAAAGTAAACTCCACTGACT TGACTTTGTTAAAAAGATATGTTCTTAAAGCCGTCTCAACTCTCCCTTCTTCCAAAGCTGAAA AGAACGCAGATGTAAATCGTGACGGAAGAGTTAATTCCAGTGATGTCACAATACTTTCAAG ATATTTGATAAGGGTAATCGAGAAATTACCAATA
Figure BDA00001636032700545
(SEQ ID NO.67)
下文中显示了C88重链的成熟H链序列。连接序列AS为黑体，并且锚定蛋白为灰色阴影。柔性接头连接序列为加下划线的。
QVQLRQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCATYYNYPFAYWGQGTLVTVSAAKTTGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
Figure BDA00001636032700551
NS PQNEVLYGDVNDDGKVNSTDLTLLKRYVLKAVSTLPSSKAEKNADVNRDGRVNSSDVTILSRY LIRVIEKLPI(SEQ ID NO.68)
C89
rAB-pIRES2[mAnti-Langerin15B10H-SLAML-V-hIgG4H-Flex-FluHA1-1-6xHis]下文中显示了H链-Flu HA1-1融合蛋白的编码区。起始密码子和终止密码子为黑体，连接的GCTAGC限制性位点也是如此。
GACCCCAAAGGCTCCCTTTCCTGGAGAATACTTCTGTTTCTCTCCCTGGCTTTTGAGTTGTCGTACGGACAGGTTCAGCTGCGGCAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTTACTGACTATGTTATAAGTTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTTATCCTGGAAGTGGTTATTCTTTCTACAATGAGAACTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCACCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAACCTACTATAACTACCCTTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACAACGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCGAAGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA GATAC AACAGAACCTGCAACACCTACAACACCTGTAACAACAGACACAATATGTATAGGCTACCAT GCGAACAATTCAACCGACACTGTTGACACAGTACTCGAGAAGAATGTGACAGTGACACACT CTGTTAACCTGCTCGAAGACAGCCACAACGGAAAACTATGTAGATTAAAAGGAATAGCCCC ACTACAATTGGGGAAATGTAACATCGCCGGATGGCTCTTGGGAAACCCAGAATGCGACCCA CTGCTTCCAGTGAGATCATGGTCCTACATTGTAGAAACACCAAACTCTGAGAATGGAATATG TTATCCAGGAGATTTCATCGACTATGAGGAGCTGAGGGAGCAATTGAGCTCAGTGTCATCAT TCGAAAGATTCGAAATATTTCCCAAAGAAAGCTCATGGCCCAACCACAACACAAACGGAGT AACGGCAGCATGCTCCCATGAGGGGAAAAGCAGTTTTTACAGAAATTTGCTATGGCTGACG GAGAAGGAGGGCTCATACCCAAAGCTGAAAAATTCTTATGTGAACAAAAAAGGGAAAGAA GTCCTTGTACTGTGGGGTATTCATCACCCGCCTAACAGTAAGGAACAACAGAATCTCTATCA GAATGAAAATGCTTATGTCTCTGTAGTGACTTCAAATTATAACAGGAGATTTACCCCGGAAA TAGCAGAAAGACCCAAAGTAAGAGATCAAGCTGGGAGGATGAACTATTACTGGACCTTGCT AAAACCCGGAGACACAATAATATTTGAGGCAAATGGAAATCTAATAGCACCAATGTATGCT TTCGCACTGAGTAGAGGCTTTGGGTCCGGCATCATCACCTCAAACGCATCAATGCATGAGTG TAACACGAAGTGTCAAACACCCCTGGGAGCTATAAACAGCAGTCTCCCTTACCAGAATATA CACCCAGTCACAATAGGAGAGTGCCCAAAATACGTCAGGAGTGCCAAATTGAGGATGGTTC ACCATCACCATCACCAT (SEQ ID NO.69)
在下文中显示了C89重链的成熟H链序列。连接序列AS为黑体，并且Flu HA1-1是加下划线的。柔性接头连接序列是斜体的。
QVQLRQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCATYYNYPFAYWGQGTLVTVSAAKTTGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
Figure BDA00001636032700562
DTICIGYHANNSTDTVDTVLEKNVTVTHSVNLLEDSHNGKLCRLKGIAPLQLGK CNIAGWLLGNPECDPLLPVRSWSYIVETPNSENGICYPGDFIDYEELREQLSSVSSFERFEIFPKESS WPNHNTNGVTAACSHEGKSSFYRNLLWLTEKEGSYPKLKNSYVNKKGKEVLVLWGIHHPPNSK EQQNLYQNENAYVSVVTSNYNRRFTPEIAERPKVRDQAGRMNYYWTLLKPGDTIIFEANGNLIA PMYAFALSRGFGSGIITSNASMHECNTKCQTPLGAINSSLPYQNIHPVTIGECPKYVRSAKLRMVHHHHHH(SEQ ID NO.70)
C246 rAB-pIRES2[mAnti-Langerin15B10H-SLAML-V-hIgG4H-Viralgag]在下文中显示了H链-gag融合蛋白的编码区。起始密码子和终止密码子为黑体，连接的GCTAGC限制性位点也是如此。
Figure BDA00001636032700571
GACCCCAAAGGCTCCCTTTCCTGGAGAATACTTCTGTTTCTCTCCCTGGCTTTTGAGTTGTCGTACGGACAGGTTCAGCTGCGGCAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTTACTGACTATGTTATAAGTTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTTATCCTGGAAGTGGTTATTCTTTCTACAATGAGAACTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCACCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAACCTACTATAACTACCCTTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACAACGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCGAAGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA GACAT GGCCAAGAAGGAGACAGTCTGGAGGCTCGAGGAGTTCGGTAGGCCTATAGTGCAGAACATC CAGGGGCAAATGGTACATCAGGCCATATCACCTAGAACTTTAAATGCATGGGTAAAAGTAG TAGAAGAGAAGGCTTTCAGCCCAGAAGTAATACCCATGTTTTCAGCATTATCAGAAGGAGC CACCCCACAAGATTTAAACACCATGCTAAACACAGTGGGGGGACATCAAGCAGCCATGCAA ATGTTAAAAGAGACCATCAATGAGGAAGCTGCAGAATGGGATAGAGTACATCCAGTGCATG CAGGGCCTATTGCACCAGGCCAGATGAGAGAACCAAGGGGAAGTGACATAGCAGGAACTA CTAGTACCCTTCAGGAACAAATAGGATGGATGACAAATAATCCACCTATCCCAGTAGGAGA AATTTATAAAAGATGGATAATCCTGGGATTAAATAAAATAGTAAGAATGTATAGCCCTACC AGCATTCTGGACATAAGACAAGGACCAAAAGAACCTTTTAGAGACTATGTAGACCGGTTCT ATAAAACTCTAAGAGCCGAGCAAGCTTCACAGGAGGTAAAAAATTGGATGACAGAAACCTT GTTGGTCCAAAATGCGAACCCAGATTGTAAGACTATTTTAAAAGCATTGGGACCAGCGGCT ACACTAGAAGAAATGATGACAGCATGTCAGGGAGTAGGAGGACCCGGCCATAAGGCAAGA GTTTTG
Figure BDA00001636032700573
(SEQ ID NO.71)
下文中显示了C89重链的成熟H链序列。连接序列AS为黑体，并且Gag p24是加下划线的。柔性接头连接序列是斜体的。
QVQLRQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCATYYNYPFAYWGQGTLVTVSAAKTTGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
Figure BDA00001636032700575
PIVQNIQGQMVHQAISPRTLNAWVKVVEEKAFSPEVIPMFSALSEGATPQ DLNTMLNTVGGHQAAMQMLKETINEEAAEWDRVHPVHAGPIAPGQMREPRGSDIAGTTSTLQE QIGWMTNNPPIPVGEIYKRWIILGLNKIVRMYSPTSILDIRQGPKEPFRDYVDRFYKTLRAEQASQ EVKNWMTETLLVQNANPDCKTILKALGPAATLEEMMTACQGVGGPGHKARVL(SEQ ID NO.72)
C742 rAB-cetHS-puro[mAnti-Langerin15B10H-LV-hIgG4H-C-Flex-hPSA]下文中显示了H链-PSA融合蛋白的编码区。起始密码子和终止密码子为黑体，连接的GCTAGC限制性位点也是如此。
Figure BDA00001636032700581
GAATGGAGGATCTTTCTCTTCATCCTGTCAGGAACTGCAGGTGTCCACTCCCAGGTTCAGCTGCGGCAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTTACTGACTATGTTATAAGTTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTTATCCTGGAAGTGGTTATTCTTTCTACAATGAGAACTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCACCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAACCTACTATAACTACCCTTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACAACGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCGAAGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA
Figure BDA00001636032700582
GATACAACAGAACCTGCAACA CCTACAACACCTGTAACAACACCGACAACAACACTTCTAGCGCCCCTCATCCTGTCTCGGAT TGTGGGAGGCTGGGAGTGCGAGAAGCATTCCCAACCCTGGCAGGTGCTTGTGGCCTCTCGTG GCAGGGCAGTCTGCGGCGGTGTTCTGGTGCACCCCCAGTGGGTCCTCACAGCTGCCCACTGC ATCAGGAACAAAAGCGTGATCTTGCTGGGTCGGCACAGCCTGTTTCATCCTGAAGACACAG GCCAGGTATTTCAGGTCAGCCACAGCTTCCCACACCCGCTCTACGATATGAGCCTCCTGAAG AATCGATTCCTCAGGCCAGGTGATGACTCCAGCCACGACCTCATGCTGCTCCGCCTGTCAGA GCCTGCCGAGCTCACGGATGCTGTGAAGGTCATGGACCTGCCCACCCAGGAGCCAGCACTG GGGACCACCTGCTACGCCTCAGGCTGGGGCAGCATTGAACCAGAGGAGTTCTTGACCCCAA AGAAACTTCAGTGTGTGGACCTCCATGTTATTTCCAATGACGTGTGTGCGCAAGTTCACCCT CAGAAGGTGACCAAGTTCATGCTGTGTGCTGGACGCTGGACAGGGGGCAAAAGCACCTGCT CGGGTGATTCTGGGGGCCCACTTGTCTGTAATGGTGTGCTTCAAGGTATCACGTCATGGGGC AGTGAACCATGTGCCCTGCCCGAAAGGCCTTCCCTGTACACCAAGGTGGTGCATTACCGGAA GTGGATCAAGGACACCATCGTGGCCAACCCC
Figure BDA00001636032700583
(SEQ ID NO.73)
下文中显示了C742重链的成熟H链序列。连接序列AS为黑体，并且PSA为加下划线的。柔性接头连接序列是斜体的。
QVQLRQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCATYYNYPFAYWGQGTLVTVSAAKTTGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
Figure BDA00001636032700584
Figure BDA00001636032700585
APLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAA HCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEP AELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVT KFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTI VANP(SEQ ID NO.74)
C1011 rAB-cetHS-puro[mAnti-Langerin15B10H-LV-hIgG4H-C-Flex-v1-Pep-gag17-f1-gag253-f2-nef1 16-f3-nef66-f4-pol158]a.k.a.抗-Langerin15B10H-HIPO5.下文显示了此H链-HIV肽融合蛋白的编码区。起始密码子和终止密码子为黑体，连接GCTAGT的限制性位点也是如此。
Figure BDA00001636032700591
GAATGGAGGATCTTTCTCTTCATCCTGTCAGGAACTGCAGGTGTCCACTCCCAGGTTCAGCTGCGGCAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTTACTGACTATGTTATAAGTTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTTATCCTGGAAGTGGTTATTCTTTCTACAATGAGAACTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCACCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAACCTACTATAACTACCCTTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACAACGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCGAAGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA CAGACCCCCACCAACACCATC AGCGTGACCCCCACCAACAACAGCACCCCCACCAACAACAGCAACCCCAAGCCCAACCCCG CTAGTGAGAAGATCCGGCTGCGGCCCGGCGGCAAGAAGAAGTACAAGCTGAAGCACATCGT GGCTAGTAGCAGCGTGAGCCCCACCACCAGCGTGCACCCCACCCCCACCAGCGTGCCCCCC ACCCCCACCAAGAGCAGCCCCGCTAGTAACCCCCCCATCCCCGTGGGCGAGATCTACAAGC GGTGGATCATCCTGGGCCTGAACAAGATCGTGCGGATGTACAGCCCCACCAGCATCCTGGA CGCTAGTCCCACCAGCACCCCCGCCGACAGCAGCACCATCACCCCCACCGCCACCCCCACCG CCACCCCCACCATCAAGGGCGCTAGTCACACCCAGGGCTACTTCCCCGACTGGCAGAACTAC ACCCCCGGCCCCGGCGTGCGGTACCCCCTGACCTTCGGCTGGCTGTACAAGCTGGCTAGTAC CGTGACCCCCACCGCCACCGCCACCCCCAGCGCCATCGTGACCACCATCACCCCCACCGCCA CCACCAAGCCCGCTAGTGTGGGCTTCCCCGTGACCCCCCAGGTGCCCCTGCGGCCCATGACC TACAAGGCCGCCGTGGACCTGAGCCACTTCCTGAAGGAGAAGGGCGGCCTGGCTAGTACCA ACGGCAGCATCACCGTGGCCGCCACCGCCCCCACCGTGACCCCCACCGTGAACGCCACCCC CAGCGCCGCCGCTAGTGCCATCTTCCAGAGCAGCATGACCAAGATCCTGGAGCCCTTCCGGA AGCAGAACCCCGACATCGTGATCTACCAGTACATGGACGACCTGTACGCTAGC
Figure BDA00001636032700593
(SEQ IDNO.75)
在下文显示了C1011重链的成熟H链。连接序列AS为黑体，并且HIV肽是加下划线的。柔性接头连接序列为斜体。
QVQLRQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCATYYNYPFAYWGQGTLVTVSAAKTTGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
Figure BDA00001636032700601
Figure BDA00001636032700602
EKIRLRPGGKKKYKLKHIV
Figure BDA00001636032700603
Figure BDA00001636032700604
NPPIPVGEIYKRWIILGLNKIVRMYSPTSILD
Figure BDA00001636032700605
HTQG YFPDWQNYTPGPGVRYPLTFGWLYKL
Figure BDA00001636032700606
VGFPVTPQVPLR PMTYKAAVDLSHFLKEKGGI AIFQSSMTKILEPFRKQN PDIVIYQYMDDLY
Figure BDA00001636032700608
(SEQ ID NO.76)
图8显示了融合到抗原的重组抗-Langerin抗体的结合保持了其与人和非人灵长类(NHP)Langerin胞外域蛋白质修饰的珠结合的能力。将不同颜色的Luminex珠共价连接到融合到锚定蛋白的纤维素结合蛋白。随后将该珠与融合到黏蛋白的人Langerin胞外域，或者与融合到黏蛋白的NHP(恒河猴)Langerin胞外域混合。将珠洗涤并混合，随后将其与按系列稀释的多种纯重组抗-Langerin 2G3或者15B10小鼠V区-人IgG4嵌合抗体，或者在C末端融合到人前列腺特异性抗原(PSA)相同的抗体，或者对照的纯重组抗-CD4012E12小鼠V区-人IgG4嵌合抗体一起培养。在洗涤之后，将珠使用抗人Fc-PE试剂培养，再次洗涤，并且随后在BioPlex仪器上读数，从而检测结合到不同的带颜色的珠的荧光(表达为相对于各个珠子类型上所见的最大信号的％MFI)。
图9显示了融合到来自H1N1 Flu毒株的甲型流感红细胞凝集素HA-1的重组抗-Langerin 15B10抗体引发强效的NHP中抗原特异性抗体生产的能力。将NHP经肌肉内(im)注射10E6 pr8 Flu病毒，并且经皮下(sc)注射HIV gag p24蛋白质(初次加强)；在～2个月之后，将该NHP再次注射HIVgag p24蛋白质注射(第二次加强)；在6周和4个月之后，将NHP经皮内(id)注射100μg抗-Langerin 15B10 HA1-1融合蛋白及聚IC作为佐剂，或者注射抗-DCIR HA1-1融合蛋白与IC，或者注射标准剂量的商购的Vaccigrip Flu疫苗和10E6 pr8 Flu病毒。在所指明的日期收集并合并血清样品(每组中4个NHP)并且将其系列稀释，通过基于珠的检测测试HA1-1特异性IgG抗体。数据显示，抗-Langerin-HA1-1疫苗在NHP中产生了强效的高滴度的抗-HA1-1抗体——观察到的滴度与Vaccigrip对照组中所观察到的相比，log值高1-2。
这些数据显示，抗-Langerin 15B10和2G3重组抗体或者连接到癌症抗原的该抗体均保持了对NHP Langerin的显著结合——对于商业上将这些抗体开发成抗原-靶向的疫苗而言非常想要的性质[这使得能进行基于机理的临床前测试，临床前测试NHP模型的安全性和有效性]。
图10显示了抗-人DC受体和抗原的重组融合蛋白在NHP中诱导抗原特异性免疫应答：使用活的流感病毒（A/PR8,H1N1）和得自HIVgag的p24-PLA在第0天经肌肉内免疫恒河猴（每组中有4只动物）。在第28天，将动物使用p24-PLA单独进行加强。在第77天和第119天，将各组的动物按照图18（下文）中所述进行免疫。在恒河猴中的抗-Langerin-HA1反应—在体外使用HA肽刺激之后，通过ELISPOT测量的IFN-γ反应。红色的箭头指示了活的流感病毒（A/PR8,H1N1）的初次注射。蓝色的箭头指示了加强注射。对照组（4只动物）经肌肉内注射活流感病毒和商购的流感病毒疫苗VACCIGRIP以及按照每只动物100ug聚I:C进行免疫。将实验组（4只动物）经皮内注射抗-DCIR-HA1(100μg/动物)及按照每只动物100μg聚I:C进行加强。上文的数据显示，通过IFNγ ELISPOT测量，抗-Langerin-HA1引起了强效的HA1-特异性T细胞应答。
图11显示了抗-Langerin G3抗体特异性染色NHP朗格汉斯细胞。制备了恒河猴皮肤切片，并且使用抗-Langerin 2G3，并随后使用Texas Red标记的山羊抗小鼠试剂染色该切片。将细胞核使用DAPI[蓝色]染色。这显示了NHP LC的特异性染色，这证实了该抗-人Langerin抗体与NHP Langerin的特异性交叉反应性。
15B10.3杂交瘤按照布达佩斯条约保藏于U.S.American Type CultureCollection，并且收到了PTA-9852的保藏编号；并且2G3.6杂交瘤收到了PTA-9853的保藏编号。
图12显示了使用gag-微粒、抗-hIGG4-gag抗体、抗-DCIR-gag疫苗和抗-Langerin-gag-p24疫苗，其全部使用或者不使用聚I:C作为佐剂，接种NHP产生的抗-HIV-gag抗体的抗体滴度。简单地说，将非人灵长类动物（NHP）进行免疫，并测定了抗-Langerin-gag24抗体的反应。发现了抗-Langerin-gagp24构建体可能比微载体上的gag p24或者对照抗体-p24更强效。与抗-DCIR靶向不同，发现了抗-Langerin-Ag接种与聚I:C佐剂相对地独立。每条曲线对应于一只猴子，该检测是对血清稀释液测试其抗p24的抗体的。将食蟹猴经皮内注射250ug的每个连接到微载体的抗体-HIV gag p24疫苗或者gag p24（将p24的量针对所注射的实际量的p24的量标准化）。将动物随后以6周的间隔再注射两次。图12的曲线图显示了在第三次注射后两周，收集的血清样品的对抗原特异性抗-gag p24滴度的代表性ELISA检测。图12显示了对于各个猴子[曲线图线以蓝色显示]作图的血清系列稀释。猴子的平行组使用p24蛋白和聚I:C佐剂进行共注射[曲线图线以红色显示]。
图13Langerin克隆的FACS分析：将293F细胞使用载体短暂转染，以指导人、恒河猴和小鼠的全长（细胞表面）langerin的表达。将细胞使用纯单克隆抗体的稀释系列进行染色，洗涤，并且随后使用抗小鼠gG-PE缀合物复染，随后再次洗涤。通过流式细胞法分析细胞。其数据以给出了相对于对照未转染细胞的阳性细胞表面染色信号的细胞%表示。
图14—两种形式的ELISA分析—直接法（直接地结合到板上的抗原，以及使用抗小鼠IgG-HRP缀合物检测的结合抗体）和捕获法（结合到板的抗体，捕获固定浓度的生物素化Langerin胞外域蛋白质，使用亲和素-HRP试剂检测）。显示了人、恒河猴和小鼠的Langerin胞外域蛋白的ELISA数据。
表1.图12中抗-Langerin-Gag和抗-DCIR-Gag融合蛋白在食蟹猴中的免疫原性
第1组(n=6)0.25mg抗-Langerin-Gag
第2组(n=6)0.25mg抗-Langerin-Gag+0.25mg聚IC
第3组(n=6)0.25mg抗-DCIR-Gag
第4组(n=6)0.25mg抗-DCIR-Gag+0.25mg聚IC
第5组(n=3)0.25mg IgG4-Gag
第6组(n=3)0.25mg IgG4-Gag+0.25mg聚IC
第7组(n=3)0.0635mg Gag
第8组(n=3)0.0635mg Gag+0.25mg聚IC
Figure BDA00001636032700621
Figure BDA00001636032700631
mAnti-Langerin 91E7K轻链序列
ATGGATTTTCAGATGCAGATTATCAGCTTGCTGCTAATCAGTGTCACAGTCATAGTGTCTAATGGAGAAATTGTGCTCACCCAGTCTCCAACCACCATGGCTGCATCTCCCGGGGAGAAGATCACTATCACCTGCAGTGCCAGCTCAAGTATAAGTTCCCATTACTTACATTGGTATCAGCACAAGCCAGGATTCTCCCCTAAACTCTTGATTTATAGGACATCCAATCTGGCTTCTGGAGTCCCAGCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATTGACACCATGGAGGCTGAAGATGTTGCCACTTACTACTGCCAGCAGGGTAGTAGTATACCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGCACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATCGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG(SEQ ID NO.：51)
mAnti-Langerin 91E7K轻链序列
EIVLTQSPTTMAASPGEKITITCSASSSISSHYLHWYQQKPGFSPKLLIYRTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTIDTMEAEDVATYYCQQGSSIPFTFGSGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC(SEQ ID NO.：52)
mAnti-Langerin 91E7H[小鼠IgG2a]重链
ATGAGATCACTGTTCTCTTTACAGTTACTGAGCACACAGGACCTCGCCATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAGGTGTCCACTCTCAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAACTTGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGTTACTGGATGCAGTGGGTAAAGCAGAGGCCTGGACAGGGCCTTGAGTGGATCGGAGAGATTGATCCTTCTGATAGCTATACTAACTACAATCAAAGGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGTGGACACATCCTCCAGCACAGCCTACATACAGCTCAGCAGCCTGACGTCTGAGGACTCTGCGGTCTGTTTCTGTGCAAGACGCTACTATGGTAACTACGATGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACAACAGCCCCATCGGTCTATCCACTGGCCCCTGTGTGTGGAGGTACAACTGGCTCCTCGGTGACTCTAGGATGCCTGGTCAAGGGTTATTCCCTGAGCCAGTGACCTTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGTGGTGTGCACACCTTCCCAGCTCTCCTGCAGTCTGGCCTCTACACCCTCAGCAGCTCAGTGACTGTAACCTCGAACACCTGGCCCAGCCAGACCATCACCTGCAATGTGGCCCACCCGGCAAGCAGCACCAAAGTGGACAAGAAAATTGAGCCCAGAGTGCCCATAACACAGAACCCCTGTCCTCCACTCAAAGAGTGTCCCCCATGCGCAGCTCCAGACCTCTTGGGTGGACCATCCGTCTTCATCTTCCCTCCAAAGATCAAGGATGTACTCATGATCTCCCCGAGCCCCATGGTCACATGTGTGGTGGTGGATGTGAGCGAGGATGACCCAGACGTCCAGATCAGCTGGTTTGTGAACAACGTGGAAGTACACACAGCTCAGACACAAACCCATAGAGAGGATTACAACAGTACTCTCCGGGTGGTCAGTGCCCTCCCCATCCAGCACCAGGACTGGATGAGTGGCAAGGAGTTCAAATGCAAGGTCAACAACAGAGCCCTCCCATCCCCCATCGAGAAAACCATCTCAAAACCCAGAGGGCCAGTAAGAGCTCCACAGGTATATGTCTTGCCTCCACCAGCAGAAGAGATGACTAAGAAAGAGTTCAGTCTGACCTGCATGATCACAGGCTTCTTACCTGCCGAAATTGCTGTGGACTGGACCAGCAATGGGCGTACAGAGCAAAACTACAAGAACACCGCAACAGTCCTGGACTCTGATGGTTCTTACTTCATGTACAGCAAGCTCAGAGTACAAAAGAGCACTTGGGAAAGAGGAAGTCTTTTCGCCTGCTCAGTGGTCCACGAGGGTCTGCACAATCACCTTACGACTAAGACCATCTCCCGGTCTCTGGGTAAA
Figure BDA00001636032700641
TGA[GCTAGC
[黑体的GCTAGC是H-链C-末端的抗原的框内融合](SEQ ID NO.：53)
mAnti-Langerin 91E7H[小鼠IgG2a]成熟的H重链序列
QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMQWVKQRPGQGLEWIGEIDPSDSYTNYNQRFKGKATLTVDTSSSTAYIQLSSLTSEDSAVCFCARRYYGNYDGFAYWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGGTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPALLQSGLYTLSSSVTVTSNTWPSQTITCNVAHPASSTKVDKKIEPRVPITQNPCPPLKECPPCAAPDLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISPSPMVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNRALPSPIEKTISKPRGPVRAPQVYVLPPPAEEMTKKEFSLTCMITGFLPAEIAVDWTSNGRTEQNYKNTATVLDSDGSYFMYSKLRVQKSTWERGSLFACSVVHEGLHNHLTTKTISRSLGKAS
Figure BDA00001636032700642
mAnti-Langerin 37C1K轻链
ATGAGGGCCCCTGCTCAGTTTTTTGGGATCTTGTTGCTCTGGTTTCCAGGTATCAGATGTGACATCAAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCATGTATGCATCGCTGGGAGAGAGAGTCACTATTACTTGCAAGGCGAGTCAGGACATTAAAAGCTATTTAACTTGGTACCAGCAGAAACCATGGAAATCTCCTAAGACCCTGATCAATTATGCAACAAGCTTGGCAGATGGGGTCCCATCAAGATTCAGTGGCAGTGGATCTGGACAAGATTATTCTCTAACCATCAGCAGCCTGGAGTCTGACGATACAGCAACTTATTACTGTCTACAGCATGGTCAGAGTCCGTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAGGCTGGAGATAAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCGGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCA ACTTCACCCATCGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG
Figure BDA00001636032700651
mAnti-Langerin 37C1K轻链
DIKMTQSPSSMYASLGERVTITCKASQDIKSYLTWYQQKPWKSPKTLINYATSLADGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLESDDTATYYCLQHGQSPFTFGGGTRLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
Figure BDA00001636032700652
mAnti-Langerin 37C1H[小鼠IgG2a]重链
ATGAGATCACTGTTCTCTTTACAGTTACTGAGCACACAGGACCTCGCCATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAGGTGTCCACTCTCAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAGCTTGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGTTACTGGATGCAGTGGGTAAAGCAGAGGCCTGGACAGGGCCTTGAGTGGACCGGAGAGATTGATCCTTCTGATAGCTATACTAACTACAATCAAAGGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGTGGACACATCCTCCAGCACAGCCTACACACAGCTCAGCAGCCTGACGTCTGAGGACTCTGCGGTCCATTTCTGTGCAAGACGCTACTATGGTAACTACGATGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACAACAGCCCCATCGGTCTATCCACTGGCCCCTGTGTGTGGAGGTACAACTGGCTCCTCGGTGACTCTAGGATGCCTGGTCAAGGGTTATTTCCCTGAGCCAGTGACCTTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGTGGTGTGCACACCTTCCCAGCTCTCCTGCAGTCTGGCCTCTACACCCTCAGCAGCTCAGTGACTGTAACCTCGAACACCTGGCCCAGCCAGACCATCACCTGCAATGTGGCCCACCCGGCAAGCAGCACCAAAGTGGACAAGAAAATTGAGCCCAGAGTGCCCATAACACAGAACCCCTGTCCTCCACTCAAAGAGTGTCCCCCATGCGCAGCTCCAGACCTCTTGGGTGGACCATCCGTCTTCATCTTCCCTCCAAAGGTCAAGGATGTACTCATGATCTCCCTGAGCCCCATGGTCACATGTGTGGTGGTGGATGTGAGCGAGGATGACCCAGACGTCCAGATCAGCTGGTTTGTGAACAACGTGGAAGTACACACAGCTCAGACACAAACCCATAGAGAGGATTACAACAGTACTCTCCGGGTGGTCAGTGCCCTCCCCATCCAGCACCAGGACTGGATGAGTGGCAAGGAGTTCAAATGCAAGGTCAACAACAGAGCCCTCCCATCCCCCATCGAGAAAACCATCTCAAAACCCAGAGGGCCAGTAAGAGCTCCACAGGTATATGTCTTGCCTCCACCAGCAGAAGAGATGACTAAGAAAGAGTTCAGTCTGACCTGCATGATCACAGGCTTCTTACCTGCCGAAATTGCTGTGGACTGGACCAGCAATGGGCGTACAGAGCAAAACTACAAGAACACCGCAACAGTCCTGGACTCTGATGGTTCTTACTTCATGTACAGCAAGCTCAGAGTACAAAAGAGCACTTGGGAAAGAGGAAGTCTTTTCGCCTGCTCAGTGGTCCACGAGGGTCTGCACAATCACCTTACGACTAAGACCATCTCCCGGTCTCTGGGTAAA
Figure BDA00001636032700661
TGA
Figure BDA00001636032700662
mAnti-Langerin 37C1H[小鼠IgG2a]重链
QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMQWVKQRPGQGLEWTGEIDPSDSYTNYNQRFKGKATLTVDTSSSTAYTQLSSLTSEDSAVHFCARRYYGNYDGFAYWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGGTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPALLQSGLYTLSSSVTVTSNTWPSQTITCNVAHPASSTKVDKKIEPRVPITQNPCPPLKECPPCAAPDLLGGPSVFIFPPKVKDVLMISLSPMVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNRALPSPIEKTISKPRGPVRAPQVYVLPPPAEEMTKKEFSLTCMITGFLPAEIAVDWTSNGRTEQNYKNTATVLDSDGSYFMYSKLRVQKSTWERGSLFACSVVHEGLHNHLTTKTISRSLGKAS
Figure BDA00001636032700663
mAnti-Langerin 4C7K(轻链)
ATGGATTTTCAAGTGCAGATTTTCAGCTTCCTGCTAATCAGTGCTTCAGTCATAATGTCCAGAGGACAAATTGTTCTCTCCCAGTCTCCAGCAATCCTGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACAATGACTTGCAGGGCCAGCTCAAGTGTAAGTTACATGCACTGGTACCAGCGGAAGCCAGGATCCTCCCCCAAACCCTGGATTTATGCCACATCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTGCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTATTCTCTCACAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGCAGTGGAGTAGTAACCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATCGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG
Figure BDA00001636032700671
QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYMHWYQRKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSSNPLTFGAGTKLELKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
Figure BDA00001636032700672
mAnti-Langerin 4C7H[小鼠IgG2a]重链
ATGGAATGGAGCTGGGTCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGTAATTGCAGGTGTCCAATCCCAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGACGCTGTCCTGCAAGGCTTCGGGCTACACATTTATTGACCATGATATGCACTGGGTGCAGCAGACACCTGTGTATGGCCTGGAATGGATCGGAGCTATTGATCCTGAAACTGGTGATACTGGCTACAATCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCATACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGGACAGCCTACATGGAACTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTACAATCCCCTTCTACTATAGTAACTACAGCCCGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGGCTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACAACAGCCCCATCGGTCTATCCACTGGCCCCTGTGTGTGGAGGTACAACTGGCTCCTCGGTGACTCTAGGATGCCTGGTCAAGGGTTATTTCCCTGAGCCAGTGACCTTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGTGGTGTGCACACCTTCCCAGCTCTCCTGCAGTCTGGCCTCTACACCCTCAGCAGCTCAGTGACTGTAACCTCGAACACCTGGCCCAGCCAGACCATCACCTGCAATGTGGCCCACCCGGCAAGCAGCACCAAAGTGGACAAGAAAATTGAGCCCAGAGTGCCCATAACACAGAACCCCTGTCCTCCACTCAAAGAGTGTCCCCCATGCGCAGACCTCTTGGGTGGACCATCCGTCTTCATCTTCCCTCCAAAGATCAAGGATGTACTCATGATCTCCCTGAGCCCCATGGTCACATGTGTGGTGGTGGATGTGAGCGAGGATGACCCAGACGCCCAGATCAGCTGGTTTGTGAACAACGTGGAAGTACACACAGCTCAGACACAAACCCATAGAGAGGATTACAACAGTACTCTCCGGGTGGTCAGTGCCCTCCCCATCCAGCACCAGGACTGGATGAGTGGCAAGGAGTTCAAATGCAAGGTCAACAACAGAGCCCTCCCATCCCCCATCGAGAAAACCATCTCAAAACCCAGAGGGCCAGTAAGAGCTCCACAGGTATATGTCTTGCCTCCACCAGCAGAAGAGATGACTAAGAAAGAGTTCAGTCTGACCTGCATGATCACAGGCTTCTTACCTGCCGAAATTGCTGTGGACTGGACCAGCAATGGGCGTACAGAGCAAAACTACAAGAACACCGCAACAGTCCTGGACTCTGATGGTTCTTACTTCATGTACAGCAAGCTCAGAGTACAAAAGAGCACTTGGGAAAGAGGAAGTCTTTTCGCCTGCTCAGTGGTCCACGAGGGTCTGCACAATCACCTTACGACTAAGACCATCTCCCGGTCTCTGGGTAAA
Figure BDA00001636032700681
TGA
Figure BDA00001636032700683
mAnti-Langerin 4C7H[小鼠IgG2a]重链
QVQLQQSGAELVRPGASVTLSCKASGYTFIDHDMHWVQQTPVYGLEWIGAIDPETGDTGYNQKFKGKAILTADKSSRTAYMELRSLTSEDSAVYYCTIPFYYSNYSPFAYWGQGALVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGGTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPALLQSGLYTLSSSVTVTSNTWPSQTITCNVAHPASSTKVDKKIEPRVPITQNPCPPLKECPPCADLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPMVTCVVVDVSEDDPDAQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNRALPSPIEKTISKPRGPVRPQVYVLPPPAEEMTKKEFSLTCMITGFLPAEIAVDWTSNGRTEQNYKNTATVLDSDGSYFMYSKLRVQKSTWERGSLFACSVVHEGLHNHLTTKTISRSLGKAS
Figure BDA00001636032700684
预期的是，本说明书中所讨论的任何实施方案可以通过关于本发明的任何方法、试剂盒、试剂或组合物来实施，反之亦然。此外，本发明的组合物可以用于实现本发明的方法。
要理解的是，本文所述的具体实施方案是通过举例说明的方式来显示而不是为了限制本发明。本发明的主要特征可以在不脱离本发明范围的情况下用于各种实施方案中。本领域技术人员将认识到，或者能够仅仅利用常规的实验确定本文所述具体步骤的许多等同物。这样的等同物被认为是在本发明的范围内，且被权利要求所涵盖。
本说明书中提到的所有出版物和专利申请表明了本发明所涉及领域的技术人员的水平。所有的出版物和专利申请均引入本文作为参考，其引入的程度如同各个独立的出版物或专利申请具体并独立地被指明引入作为参考。
词语“一个（a）”或“一种（an）”当与权利要求和/或说明书中的术语“包含（comprising）”结合使用时，可以指“一种”，但其也与“一种或多种”、“至少一种”和“一种或多于一种”的意思相一致。在权利要求中所使用的术语“或者”是指“和/或”，除非明确指明仅仅是指替代物，或替代物为相互排斥的，尽管公开内容支持仅仅指替代物及“和/或”的定义。在整个本申请中，术语“大约”用来说明这样的值，其包括用来测定所述值的装置和方法的误差的固有变化，或者研究受试者之间存在的变化。
如在本说明书和权利要求（或多个权利要求）中所使用的，词语“包含（comprising）”（以及任何形式的“包含”，如“包含（comprise）和包含（comprises）”），“具有（having）”（以及任何形式的“具有”，如“具有（have）”和“具有（has）”），“包括（including）”（以及任何形式的“包括”，如“包括（includes）”和“包括（include）”）或“含有（containing）”（以及任何形式的“含有”，如“含有（contains）”和“含有（contain）”）是包括的或开放式的，且不排除额外的，未述及的元素或方法步骤。如本文所使用的，短语“基本上由...组成”将权利要求的范围限制在指定的材料或步骤以及在材料上不影响要求保护的发明的基本的和新颖特性。如本文所述使用的，短语“由...组成”排除了权利要求中未指定的任何元素、步骤或成分，除了例如通常与元素或限制有关的杂质以外。
本文所使用的术语“或它们的组合”是指在该术语之前所列举项目的全部排列和组合。例如，“A、B、C或它们的组合”意在包括A、B、C、AB、AC、BC或ABC中的至少一种，并且如果在特定的上下文中顺序是重要的，那么还包括BA、CA、CB、CBA、BCA、ACB、BAC或CAB。继续这个例子，明显包括的是包含一种或多种项目或术语的重复的组合，如BB、AAA、MB、BBC、AAABCCCC、CBBAAA、CABABB等等。本领域技术人员将理解的是，通常对任何组合中的项目或术语的数目没有限制，除非从上下文中另外是明显的。
如本文所使用的，表示近似的词语如但不限于“约”、“基本的”或者“基本上”指这样的情况，当这样修饰时理解为并非必须是绝对的或者完美的，而应认为是很接近本领域技术人员认为与当前的情况一样可以使用的情况。说明书可以变化的程度取决于进行多大的变化之后，仍然使得本领域技术人员认为经改变的特征仍然具有所需的性质和未经改变的特征所具有的能力。总地来说，与前面的讨论一致地，使用表示近似的词语如“约”修饰的数值可以从所宣称的数值变化至少±1、2、3、4、5、6、7、10、12或者15%。
根据本发明的公开内容，在不过度的实验下可以制备和实施本文所公开和要求保护的全部组合物和/或方法。尽管以经以优选的实施方案的形式描述了本发明的组合物和方法，但是对于本领域技术人员来说明显的是，在不脱离本发明的构思、精神和范围的情况下，可以改变本文所述的组合物和/或方法以及方法的步骤或方法的步骤的顺序。对本领域技术人员而言明显的所有这样相似的取代和修饰被认为是在所附的权利要求所限定的本发明的精神、范围和构思内。
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Figure IDA00001636033600011
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Claims (48)

1.一种疫苗，其包含经分离的抗-Langerin抗体或其结合片段和在该抗-Langerin抗体的羧基末端处的一个或多个抗原肽，其中当存在两个或多个抗原时，所述抗原被一个或多个接头肽分开，所述接头肽含有至少一个糖基化位点。
2.权利要求1所述的疫苗，其中所述抗体结合片段选自Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fc或者ScFv片段。
3.权利要求1所述的疫苗，其中所述抗体包含一个或多个选自以下序列或其直接等价物的互补决定区：
ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS(SEQ ID NO.：45)；
SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA(SEQ ID NO.：46)；
VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA(SEQ ID NO.：47)；
SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC(SEQ ID NO.：48)
4.权利要求1所述的疫苗，其中所述抗原肽是选自以下序列或其结合片段的癌症抗原：
MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWV(SEQ ID NO.：9)；
LTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHD(SEQID NO.：10)；
LMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVIS(SEQID NO.：11)；
NDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERP(SEQ ID NO.：12)；
SLYTKVVHYRKWIKDTIVANP(SEQ ID NO.：13)；
IMDQVPFSV(SEQ ID NO.：14)；
ITDQVPFSV(SEQ ID NO.：15)；
YLEPGPVTV(SEQ ID NO.：16)；
YLEPGPVTA(SEQ ID NO.：17)；
KTWGQYWQV(SEQ ID NO.：18)；
APLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP(SEQ ID NO.：19)；
DTTEPATPTTPVTTPTTTKVPRNQDWLGVSRQLRTKAWNRQLYPEWTEAQRLDCWRGGQVSLKVSNDGPTLIGANASFSIALNFPGSQKVLPDGQVIWVNNTIINGSQVWGGQPVYPQETDDACIFPDGGPCPSGSWSQKRSFVYVWKTWGQYWQVLGGPVSGLSIGTGRAMLGTHTMEVTVYHRRGSQSYVPLAHSSSAFTITDQVPFSVSVSQLRALDGGNKHFLRNQ(SEQ ID NO：20)；
PLTFALQLHDPSGYLAEADLSYTWDFGDSSGTLISRAXVVTHTYLEPGPVTAQVVLQAAIPLTSCGSSPVPAS(SEQ ID NO.：21)；
GTTDGHRPTAEAPNTTAGQVPTTEVVGTTPGQAPTAEPSGTTSVQVPTTEVISTAPVQMPTAESTGMTPEKVPVSEVMGTTLAEMSTPEATGMTPAEVSIVVLSGTTAA(SEQ ID NO：22)；
QVTTTEWVETTARELPIPEPEGPDASSIMSTESITGSLGPLLDGTATLRLVKRQVPLDCVLYRYGSFSVTLDIVQ(SEQ ID NO.：23)；
GIESAEILQAVPSGEGDAFELTVSCQGGLPKEACMEISSPGCQPPAQRLCQPVLPSPACQLVLHQILKGGSGTYCLNVSLADTNSLAVVSTQLIVPGILLTGQEAGLGQ(SEQ ID NO.：24)；
MEMKILRALNFGLGRPLPLHFLRRASKIGEVDVEQHTLAKYLMELTMLDY(SEQ ID NO.：25)；
DWLVQVQMKFRLLQETMYMTVSIIDRFMQNNCVPKK(SEQ ID NO.：26)；
MEHQLLCCEVETIRRAYPDANLLNDRVLRAMLKAEETCAPSVSYFKCV(SEQ ID NO.：27)；
QKEVLPSMRKIVATWMLEVCEEQKCEEEVFPLAMNYLDRFLSLEPVKKSRLQLLGATCMFVASKMKETIPLTAEKLCIYTDNSIRPEELLQMELL(SEQ ID NO.：28)；
LVNKLKWNLAAMTPHDFIEHFLSKMPEAEENKQIIRKHAQTFVALCATDVKFISNPPSMV(SEQID NO.：29)；或
AAGSVVAAVQGLNLRSPNNFLSYYRLTRFLSRVIKCDPDCLRACQEQIEALLESSLRQAQQNMDPKAAEEEEEEEEEVDLACTPTDVRDVDI(SEQ ID NO.：30)。
5.权利要求1所述的疫苗，其中所述抗原肽是选自以下序列的病毒抗原：
VGFPVTPQVPLRPMTYKAAVDLSHFLKEKGGL(SEQ ID NO.：31)；
HTQGYFPDWQNYTPGPGVRYPLTFGWLYKL(SEQ ID NO.：32)；
EKIRLRPGGKKKYKLKHIV(SEQ ID NO.：33)；
NPPIPVGEIYKRWIILGLNKIVRMYSPTSILD(SEQ ID NO.：34)；
AIFQSSMTKILEPFRKQNPDIVIYQYMDDLY(SEQ ID NO.：35)；
DTICIGYHANNSTDTVDTVLEKNVTVTHSVNLLEDSHNGKLCRLKGIAPLQLGKCNIAGWLLGNPECDPLLPVRSWSYIVETPNSENGICYPGDFIDYEELREQLSSVSSFERFEIFPKESSWPNHNTNGVTAACSHEGKSSFYRNLLWLTEKEGSYPKLKNSYVNKKGKEVLVLWGIHHPPNSKEQQNLYQNENAYVSVVTSNYNRRFTPEIAERPKVRDQAGRMNYYWTLLKPGDTIIFEANGNLIAPMYAFALSRGFGSGIITSNASMHECNTKCQTPLGAINSSLPYQNIHPVTIGECPKYVRSAKLRMV(SEQ ID NO.：36)；
DQICIGYHANNSTEQVDTIMEKNVTVTHAQDILEKKHNGKLCDLDGVKPLILRDCSVAGWLLGNPMCDEFINVPEWSYIVEKANPVNDLCYPGDFNDYEELKHLLSRINHFEKIQIIPKSSWSSHEASLGVSSACPYQGKSSFFRNVVWLIKKNSTYPTIKRSYNNTNQEDLLVLWGIHHPNDAAEQTKLYQNPTTYISVGTSTLNQRLVPRIATRSKVNGQSGRMEFFWTILKPNDAINFESNGNFIAPEYAYKIVKKGDSTIMKSELEYGNCNTKCQTPMGAINSSMPFHNIHPLTIGECPKYVKSNRLVLA(SEQ ID NO.：37)；或
PIVQNIQGQMVHQAISPRTLNAWVKVVEEKAFSPEVIPMFSALSEGATPQDLNTMLNTVGGHQAAMQMLKETINEEAAEWDRVHPVHAGPIAPGQMREPRGSDIAGTTSTLQEQIGWMTNNPPIPVGEIYKRWIILGLNKIVRMYSPTSILDIRQGPKEPFRDYVDRFYKTLRAEQASQEVKNWMTETLLVQNANPDCKTILKALGPAATLEEMMTACQGVGGPGHKARVL(SEQ ID NO.：38)。
6.权利要求1所述的疫苗，其中所述一个或多个肽接头选自：
SSVSPTTSVHPTPTSVPPTPTKSSP(SEQ ID NO.：39)；
PTSTPADSSTITPTATPTATPTIKG(SEQ ID NO.：40)；
TVTPTATATPSAIVTTTTPTATTKP(SEQ ID NO.：41)；或
TNGSITVAATAPTVTPTVNATPSAA(SEQ ID NO.：42)。
7.权利要求1所述的疫苗，其中所述抗-Langerin抗体选自以下各对的氨基酸序列或其结合片段：SEQ ID NOS.：2和4；6和7；52和54；56和58；以及78和80。
8.权利要求1所述的疫苗，其中所述抗-Langerin抗体是以下各对核酸序列的表达产物：SEQ ID NOS.:1和3；5和6；51和53；55和57；以及77和79。
9.权利要求1所述的疫苗，其中所述抗-Langerin抗体或其结合片段是以下中的至少一个：ATCC登录号为PTA-9852的15B10、ATCC登录号为PTA-9853的2G3、91E7、37C1或者4C7，及其人源化的衍生物。
10.权利要求1所述的疫苗，其中所述抗-Langerin抗体或其结合片段和所述抗原肽是融合蛋白。
11.一种经分离的核酸载体，其表达抗-Langerin抗体或其结合片段和两个或多个抗原肽，所述两个或多个抗原肽位于所述抗-Langerin抗体的轻链、重链或轻链和重链两者的羧基末端，其中当存在两个或多个抗原肽时，所述抗原肽被一个或多个肽接头分开，所述肽接头包含至少一个糖基化位点。
12.权利要求11所述的载体，其中所述抗原肽是癌症肽，所述癌症肽选自肿瘤相关抗原，所述肿瘤相关抗原选自：CEA，前列腺特异性抗原(PSA)，HER-2/neu，BAGE，GAGE，MAGE 1-4、6和12，MUC(黏蛋白)(例如，MUC-1、MUC-2等等)，GM2和GD2神经节苷脂，ras，myc，酪氨酸酶，MART（黑色素瘤抗原），MARCO-MART，细胞周期蛋白B1，细胞周期蛋白D，Pmel 17（gp100），GnT-V内含子V序列（N-乙酰葡糖胺基转移酶V内含子V序列），前列腺Ca psm，前列腺血清抗原（PSA），PRAME（黑色素瘤抗原），β-联蛋白，MUM-1-B（黑色素瘤普遍存在的突变基因产物），GAGE（黑色素瘤抗原）1，BAGE（黑色素瘤抗原）2-10，c-ERB2（Her2/neu），EBNA（EB病毒核抗原）1-6，gp75，人乳头瘤病毒（HPV）E6和E7，p53，肺耐药蛋白（LRP），Bcl-2和Ki-67。
13.权利要求11所述的载体，其中所述抗原肽是癌症肽，所述癌症肽选自肿瘤相关抗原，所述肿瘤相关抗原包括来自以下疾病的抗原：白血病和淋巴瘤，神经肿瘤如星形细胞瘤或成胶质细胞瘤，黑色素瘤，乳腺癌，肺癌，头颈部癌，肠胃肿瘤，胃癌，结肠癌，肝癌，胰腺癌，泌尿生殖肿瘤如宫颈癌、子宫癌、卵巢癌、阴道癌、睾丸癌、前列腺癌或者阴茎癌，骨肿瘤，血管瘤或者唇、鼻咽、咽和口腔、食道、直肠、胆囊、胆系、喉、肺和支气管、膀胱、肾脏、脑和神经系统的其他部分、甲状腺的癌症，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤，多发性骨髓瘤和白血病。
14.权利要求11所述的载体，其中所述抗原肽选自：来自H1N1流感毒株的甲型流感红细胞凝集素HA-1、HLA-A201-FluMP(58-66)肽(GILGFVFTL)四聚体、禽流感(HA5-1)、来自热纤梭菌(C.thermocellum)的锚定蛋白功能域（doc）、HIV gag p24(gag)或者HIV肽链(Lipo5)、PSA(KLQCVDLHV)四聚体或者得自HIVgag的p24-PLA。
15.权利要求11所述的载体，其中所述抗-Langerin抗体选自以下各对的氨基酸序列或其结合片段：SEQ ID NOS.:2和4；6和7；52和54；56和58；以及78和80。
16.权利要求11所述的载体，其中所述抗-Langerin抗体是以下各对核酸序列的表达产物：SEQ ID NOS.:1和3；5和6；51和53；55和57；以及77和79。
17.权利要求11所述的载体，其中所述抗-Langerin抗体或其结合片段是以下的至少一个：ATCC登录号为PTA-9852的15B10、ATCC登录号为PTA-9853的2G3、91E7、37C1或者4C7及其人源化的衍生物。
18.权利要求11所述的载体，其中所述抗-Langerin抗体或其结合片段和所述抗原肽是融合蛋白。
19.一种增强T细胞和B细胞应答的方法，所述方法包括：
将需要接种的受试者使用有效量的疫苗进行接种，所述疫苗包含经分离的融合蛋白，所述融合蛋白包含抗-Langerin抗体或其结合部分以及连接到所述抗-Langerin抗体的羧基末端的一个或多个抗原肽。
20.权利要求19所述的方法，其中所述抗原肽是癌症肽，所述癌症肽选自肿瘤相关抗原，所述肿瘤相关抗原选自：CEA，前列腺特异性抗原(PSA)，HER-2/neu，BAGE，GAGE，MAGE 1-4、6和12，MUC(黏蛋白)(例如，MUC-1、MUC-2等等)，GM2和GD2神经节苷脂，ras，myc，酪氨酸酶，MART（黑色素瘤抗原），MARCO-MART，细胞周期蛋白B1，细胞周期蛋白D，Pmel 17（gp100），GnT-V内含子V序列（N-乙酰葡糖胺基转移酶V内含子V序列），前列腺Ca psm，前列腺血清抗原（PSA），PRAME（黑色素瘤抗原），β-联蛋白，MUM-1-B（黑色素瘤普遍存在的突变基因产物），GAGE（黑色素瘤抗原）1，BAGE（黑色素瘤抗原）2-10，c-ERB2（Her2/neu），EBNA（EB病毒核抗原）1-6，gp75，人乳头瘤病毒（HPV）E6和E7，p53，肺耐药蛋白（LRP），Bcl-2和Ki-67。
21.权利要求19所述的方法，其中所述抗原肽是癌症肽，所述癌症肽选自肿瘤相关抗原，所述肿瘤相关抗原包括来自以下疾病的抗原：白血病，淋巴瘤，神经肿瘤如星形细胞瘤或成胶质细胞瘤，黑色素瘤，乳腺癌，肺癌，头颈部癌，肠胃肿瘤，胃癌，结肠癌，肝癌，胰腺癌，泌尿生殖肿瘤如宫颈癌、子宫癌、卵巢癌、阴道癌、睾丸癌、前列腺癌或者阴茎癌，骨肿瘤，血管瘤或者唇、鼻咽、咽和口腔、食道、直肠、胆囊、胆系、喉、肺和支气管、膀胱、肾脏、脑和神经系统的其他部分、甲状腺的癌症，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤，多发性骨髓瘤和白血病。
22.权利要求19所述的方法，其中所述抗原肽选自：来自H1N1流感毒株的甲型流感红细胞凝集素HA-1、HLA-A201-FluMP(58-66)肽(GILGFVFTL)四聚体、禽流感(HA5-1)、来自H1N1流感毒株的甲型流感红细胞凝集素HA-1（HA1-1）、来自热纤梭菌(C.thermocellum)的锚定蛋白功能域（doc）、HIV gagp24(gag)或者HIV肽链(Lipo5)、PSA(KLQCVDLHV)四聚体或者得自HIVgag的p24-PLA。
23.一种制备抗-Langerin-抗原的融合蛋白的方法，该方法包括：
在宿主细胞中表达经分离的融合蛋白，所述融合蛋白包含抗-Langerin抗体或其结合片段，所述融合蛋白在抗-Langerin抗体或其结合片段的羧基末端包含一个或多个抗原肽，其中当存在两个或多个癌症肽时，所述癌症肽由一个或多个接头分开，至少一个接头包含糖基化位点；并且
分离所述融合蛋白。
24.权利要求23所述的方法，其中将宿主中表达的融合蛋白进一步纯化。
25.权利要求23所述的方法，其中所述宿主是真核细胞。
26.权利要求23所述的方法，其中所述抗原肽是癌症肽，所述癌症肽选自肿瘤相关抗原，所述肿瘤相关抗原选自：CEA，前列腺特异性抗原(PSA)，HER-2/neu，BAGE，GAGE，MAGE 1-4、6和12，MUC相关蛋白(黏蛋白)(MUC-1、MUC-2等等)，GM2和GD2神经节苷脂，ras，myc，酪氨酸酶，MART（黑色素瘤抗原），MARCO-MART，细胞周期蛋白B1，细胞周期蛋白D，Pmel 17（gp100），GnT-V内含子V序列（N-乙酰葡糖胺基转移酶V内含子V序列），前列腺Ca psm，前列腺血清抗原（PSA），PRAME（黑色素瘤抗原），β-联蛋白，MUM-1-B（黑色素瘤普遍存在的突变基因产物），GAGE（黑色素瘤抗原）1，BAGE（黑色素瘤抗原）2-10，c-ERB2（Her2/neu），EBNA（EB病毒核抗原）1-6，gp75，人乳头瘤病毒（HPV）E6和E7，p53，肺耐药蛋白（LRP），Bcl-2和Ki-67。
27.权利要求23所述的方法，其中所述抗原肽是癌症肽，所述癌症肽选自肿瘤相关抗原，所述肿瘤相关抗原包括来自以下疾病的抗原：白血病和淋巴瘤，神经肿瘤如星形细胞瘤或成胶质细胞瘤，黑色素瘤，乳腺癌，肺癌，头颈部癌，肠胃肿瘤，胃癌，结肠癌，肝癌，胰腺癌，泌尿生殖肿瘤如宫颈癌、子宫癌、卵巢癌、阴道癌、睾丸癌、前列腺癌或者阴茎癌，骨肿瘤，血管瘤或者：唇、鼻咽、咽和口腔、食道、直肠、胆囊、胆系、喉、肺和支气管、膀胱、肾脏、脑和神经系统的其他部分、甲状腺的癌症，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤，多发性骨髓瘤和白血病。
28.权利要求23所述的方法，其中所述癌症肽选自以下序列中的至少一个：
MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWV(SEQ ID NO.：9)；
LTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHD(SEQID NO.：10)；
LMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVIS(SEQID NO.：11)；
NDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERP(SEQ ID NO.：12)；
SLYTKVVHYRKWIKDTIVANP(SEQ ID NO.：13)；
IMDQVPFSV(SEQ ID NO.：14)；
ITDQVPFSV(SEQ ID NO.：15)；
YLEPGPVTV(SEQ ID NO.：16)；
YLEPGPVTA(SEQ ID NO.：17)；
KTWGQYWQV(SEQ ID NO.：18)；
APLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP(SEQ ID NO.：19)；
DTTEPATPTTPVTTPTTTKVPRNQDWLGVSRQLRTKAWNRQLYPEWTEAQRLDCWRGGQVSLKVSNDGPTLIGANASFSIALNFPGSQKVLPDGQVIWVNNTIINGSQVWGGQPVYPQETDDACIFPDGGPCPSGSWSQKRSFVYVWKTWGQYWQVLGGPVSGLSIGTGRAMLGTHTMEVTVYHRRGSQSYVPLAHSSSAFTITDQVPFSVSVSQLRALDGGNKHFLRNQ(SEQ ID NO.：20)；
PLTFALQLHDPSGYLAEADLSYTWDFGDSSGTLISRAXVVTHTYLEPGPVTAQVVLQAAIPLTSCGSSPVPAS(SEQ ID NO.：21)；
GTTDGHRPTAEAPNTTAGQVPTTEVVGTTPGQAPTAEPSGTTSVQVPTTEVISTAPVQMPTAESTGMTPEKVPVSEVMGTTLAEMSTPEATGMTPAEVSIVVLSGTTAA(SEQ ID NO.：22)；
QVTTTEWVETTARELPIPEPEGPDASSIMSTESITGSLGPLLDGTATLRLVKRQVPLDCVLYRYGSFSVTLDIVQ (SEQ ID NO.：23)；
GIESAEILQAVPSGEGDAFELTVSCQGGLPKEACMEISSPGCQPPAQRLCQPVLPSPACQLVLHQILKGGSGTYCLNVSLADTNSLAVVSTQLIVPGILLTGQEAGLGQ(SEQ ID NO.：24)；
MEMKILRALNFGLGRPLPLHFLRRASKIGEVDVEQHTLAKYLMELTMLDY(SEQ ID NO.：25)；
DWLVQVQMKFRLLQETMYMTVSIIDRFMQNNCVPKK(SEQ ID NO.：26)；
MEHQLLCCEVETIRRAYPDANLLNDRVLRAMLKAEETCAPSVSYFKCV(SEQ ID NO.：27)；
QKEVLPSMRKIVATWMLEVCEEQKCEEEVFPLAMNYLDRFLSLEPVKKSRLQLLGATCMFVASKMKETIPLTAEKLCIYTDNSIRPEELLQMELL(SEQ ID NO.：28)；
LVNKLKWNLAAMTPHDFIEHFLSKMPEAEENKQIIRKHAQTFVALCATDVKFISNPPSMV(SEQID NO.：29)；或
AAGSVVAAVQGLNLRSPNNFLSYYRLTRFLSRVIKCDPDCLRACQEQIEALLESSLRQAQQNMDPKAAEEEEEEEEEVDLACTPTDVRDVDI(SEQ ID NO.：30)，
或其免疫原性片段。
29.一种在体外扩增抗原特异性T细胞或B细胞的方法，所述方法包括：
从癌症患者中分离外周血液单核细胞(PBMC)；
将经分离的PBMC与免疫原性量的经分离的抗-Langerin-(PL-Ag)x或者抗-Langerin-(Ag-PL)x疫苗培养，其中Ag是肿瘤相关抗原并且x是从1到20的整数；
在有效量的IL-2的存在下扩增该PBMC；
收获所述细胞；并且
评估细胞的细胞因子产量从而确定抗癌特异性T细胞或者B细胞的存在。
30.一种肿瘤相关抗原特异性T细胞或B细胞，所述的T细胞或B细胞由包括以下步骤的方法制备：
从癌症患者中分离外周血液单核细胞(PBMC)；
将经分离的PBMC与免疫原性量的抗-Langerin-(PL-Ag)x或者抗-Langerin-(Ag-PL)x疫苗培养，其中Ag是肿瘤相关抗原并且x是从1到20的整数；
在有效量的IL-2的存在下扩增该PBMC；
收获所述细胞；并且
评估细胞的细胞因子产量从而确定肿瘤相关抗原特异性T细胞或者B细胞的存在。
31.一种治疗性疫苗，该疫苗包含经分离的融合蛋白，所述融合蛋白包含式：Ab-(PL-Ag)x；Ab-(Ag-PL)x；Ab-(PL-Ag-PL)x；Ab-(Ag-PL-Ag)x；Ab-(PL-Ag)x-PL；或者Ab-(Ag-PL)x-Ag；其中Ab是抗-Langerin单克隆抗体或其结合片段；PL是包含至少一个糖基化位点的至少一个肽接头；Ag是至少一个感染性疾病抗原；并且x是从1到20的整数。
32.一种在体外扩增抗原特异性T细胞或者B细胞的方法，该方法包括：
从怀疑具有感染的患者中分离外周血液单核细胞（PBMC）；
将经分离的PBMC与免疫原性量的经分离的抗-Langerin-(PL-Ag)x或者αLangerin-(Ag-PL)x疫苗培养，其中Ag是感染因子的抗原并且x是从1到20的整数；
在有效量的一种或多种细胞因子的存在下扩增该PBMC；
收获所述细胞；并且
评估细胞的细胞因子产量从而确定抗感染因子特异性T细胞或者B细胞的存在。
33.一种病毒相关抗原特异性T细胞或B细胞，所述T细胞或B细胞通过包括以下步骤的方法制备：
从怀疑具有病毒感染的患者中分离外周血液单核细胞（PBMC）；
将经分离的PBMC与免疫原性量的经分离的抗-Langerin-(PL-Ag)x或者抗-Langerin-(Ag-PL)x疫苗培养，其中Ag是病毒相关抗原并且x是从1到20的整数；
在有效量的一种或多种细胞因子的存在下扩增该PBMC；
收获细胞；并且
评估细胞的细胞因子产量从而确定病毒相关抗原特异性T细胞或者B细胞的存在。
34.一种治疗用疫苗，其包含经分离的融合蛋白，该融合蛋白包括式：Ab-(PL-Ag)x；Ab-(Ag-PL)x；Ab-(PL-Ag-PL)x；Ab-(Ag-PL-Ag)x；Ab-(PL-Ag)x-PL；或者Ab-(Ag-PL)x-Ag；其中Ab是抗-Langerin单克隆抗体或其结合片段；PL是包含至少一个糖基化位点的至少一个肽接头；Ag是至少一个病毒抗原；并且x是从1到20的整数。
35.一种经分离的抗体，其包含选自以下序列或其直接等价物的一个或多个互补决定区：
ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS(SEQ ID NO.：45)；
SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA(SEQ ID NO.：46)；
VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA(SEQ ID NO.：47)；
SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC(SEQ ID NO.：48)。
36.权利要求27所述的抗体，其中所述抗体是人源化的。
37.权利要求27所述的抗体，其中所述抗体是ATCC登录号为PTA-9852的15B10、ATCC登录号为PTA-9853的2G3、91E7、37C1或者4C7及其人源化的衍生物。
38.一种经分离的核酸，其编码15B10、2G3、91E7、37C1或者4C7抗体、其抗体结合片段或者其人源化的衍生物。
39.权利要求38所述的核酸，其中所述抗-Langerin抗体选自以下各对的氨基酸序列或其结合片段：SEQ ID NOS.：2和4；6和7；52和54；56和58；以及78和80。
40.权利要求38所述的核酸，其中所述抗-Langerin抗体是以下各对核酸序列或其结合片段的表达产物：SEQ ID NOS.：1和3；5和6；51和53；55和57；以及77和79。
41.一种药物组合物，其包含经分离的抗-Langerin抗体或其结合片段和连接到该抗-Langerin抗体的一个或多个抗原肽，其中当存在两个或多个抗原时，所述抗原由一个或多个接头肽分开，所述接头肽含有至少一个糖基化位点。
42.权利要求41所述的组合物，其中所述抗体结合片段选自Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fc或者ScFv片段。
43.权利要求41所述的组合物，其中所述抗-Langerin抗体选自以下各对的氨基酸序列或其结合片段：SEQ ID NOS.:2和4；6和7；52和54；56和58；以及78和80。
44.权利要求41所述的组合物，其中所述抗-Langerin抗体是以下各对核酸序列的表达产物：SEQ ID NOS.:1和3；5和6；51和53；55和57；以及77和79。
45.权利要求41所述的组合物，其中所述抗-Langerin抗体或其结合片段是以下的至少一个：ATCC登录号为PTA-9852的15B10、ATCC登录号为PTA-9853的2G3、91E7、37C1或者4C7及其人源化的衍生物。
46.权利要求41所述的组合物，其中所述抗-Langerin抗体或其结合片段和所述抗原肽是融合蛋白。
47.权利要求41所述的组合物，其中所述组合物还包含佐剂。
48.权利要求41所述的组合物，其中所述组合物还包含一种或多种药物赋形剂。
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