[go: up one dir, main page]

CN102686601A - 合成Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的方法 - Google Patents

合成Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102686601A
CN102686601A CN2010800516439A CN201080051643A CN102686601A CN 102686601 A CN102686601 A CN 102686601A CN 2010800516439 A CN2010800516439 A CN 2010800516439A CN 201080051643 A CN201080051643 A CN 201080051643A CN 102686601 A CN102686601 A CN 102686601A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cys
arg
pbf
acm
phe
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2010800516439A
Other languages
English (en)
Inventor
Z·X·董
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ipsen Pharma SAS
Original Assignee
Ipsen Pharma SAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ipsen Pharma SAS filed Critical Ipsen Pharma SAS
Publication of CN102686601A publication Critical patent/CN102686601A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
    • C07K14/68—Melanocyte-stimulating hormone [MSH]
    • C07K14/685—Alpha-melanotropin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明涉及使用溶液相肽化学来合成黑皮质素类似物Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的新方法。

Description

合成Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的方法
发明背景
本发明涉及使用溶液相肽化学来合成黑皮质素类似物Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的新方法。
Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2是高效且药理学选择性的黑皮质素类似物。黑皮质素是一类调节肽，其由激素原前阿片黑素细胞皮质激素(POMC；长度131个氨基酸)的翻译后加工形成。POMC加工后形成三类激素：黑皮质素、促肾上腺皮质激素和多种内啡肽类(例如促脂解素)(Cone等人,Recent Prog.Horm.Res.,51:287-317,(1996)；Cone等人,Ann.N.Y.Acad.Sci.,31:342-363,(1993))。
在许多正常人类组织中已经发现黑皮质素，包括脑、肾上腺、皮肤、睾丸、脾、肾、卵巢、肺、甲状腺、肝、结肠、小肠和胰脏(Tatro,J.B.等人,Endocrinol.121:1900-1907(1987)；Mountjoy,K.G.等人,Science257:1248-1251(1992)；Chhajlani,V.等人,FEBS Lett.309:417-420(1992)；Gantz,I.等人J.Biol.Chem.268:8246-8250(1993)和Gantz,I.等人,J.Biol.Chem.268:15174-15179(1993))。
已经证明黑皮质素肽类表现出广泛的生理活性，包括控制行为和记忆，影响神经营养和退热的特性，以及影响免疫系统调节。除了其熟知的对肾上腺皮质功能(促肾上腺皮质激素或“ACTH”)和对黑素细胞(促黑激素或“MSH”)的作用以外，黑皮质素还表现出控制心血管系统、止痛、温度调节以及释放其它神经元介质因子，包括催乳素、促黄体激素和生物胺类(DeWied,D.等人,Methods Achiev.Exp.Pathol.15:167-199(1991)；De Wied,D.等人,Physiol.Rev.62:977-1059(1982)；Guber,K.A.等人,Am.J.Physiol.257:R681-R694(1989)；Walker J.M.等人,Science 210:1247-1249(1980)；Murphy,M.T.等人,Science 221:192-193(1983)；Ellerkmann,E.等人,Endocrinol.130:133-138(1992)和Versteeg,D.H.G.等人,Life Sci.38:835-840(1986))。
已经证明黑皮质素的结合位点分布在许多不同的组织类型中，包括泪腺和颌下腺、胰腺、脂肪、膀胱、十二指肠、脾、脑和生殖腺组织以及恶性黑色素瘤中。迄今为止已经鉴定了五种黑皮质素受体。它们包括黑素细胞特异性受体(MC1-R)、肾上腺皮质特异性ACTH受体(MC2-R)、黑皮质素-3(MC3-R)、黑皮质素-4(MC4-R)和黑皮质素-5受体(MC5-R)。全部此类黑皮质素受体都对促黑激素(MSH)类的肽类激素有反应(Cone,R.D.等人,Ann.N.Y.Acad.Sci.,680:342-363(1993)；Cone,R.D.等人,RecentProg.Horm.Res.,51:287-318(1996))。
MC1-R，本领域已知作为促黑激素受体(MSH-R)、促黑素细胞激素受体或黑皮质素-1受体，是属于G蛋白偶联受体家族的315个氨基酸的跨膜蛋白。MC1-R是MSH和ACTH受体。MC1-R的活性由激活腺苷酸环化酶的G蛋白介导。MC1-R受体在黑素细胞和肾上腺皮质组织以及其它组织例如肾上腺、白细胞、肺、淋巴结、卵巢、睾丸、垂体、胎盘、脾和子宫中发现。MC2-R，也称作促肾上腺皮质激素受体(ACTH-R)，是在黑素细胞和肾上腺皮质组织中发现的297个氨基酸的跨膜蛋白。MC2-R介导ACTH的促肾上腺皮质作用。在人类中，MC3-R是从脑组织中发现的360个AA的蛋白质；在大鼠和小鼠中，MC3-R是323个AA的蛋白质。MC4-R是332个氨基酸的跨膜蛋白，其在脑以及胎盘和肠组织中也有表达。MC5-R是325个氨基酸的跨膜蛋白，在肾上腺、胃、肺和脾中表达，在脑中以非常低的水平表达。MC5-R还在三层的肾上腺皮质中表达，主要是在产生醛固酮的丝球带细胞中表达。
但是，五种已知的黑皮质素受体的功能不同。例如，MC1-R是G蛋白偶联受体，其调节响应于α-MSH的色素沉着，α-MSH是有效的MC1-R激动剂。MC1-R受体的激动导致黑素细胞的刺激，其引起真黑色素并增加罹患皮肤癌的风险。MC1-R的激动还可以具有神经学的效应。刺激MC2-R的活性可以导致肾上腺组织癌。最近的药理学证明已经确认中枢MC4-R受体是分别报道为黑皮质素激动剂和拮抗剂的减食欲的和促进食欲的作用的主要调节物。MC3-R和MC5-R的激动作用还是未知的。
黑皮质素受体作为靶点来设计治疗体重紊乱例如肥胖症和恶病质的新的治疗剂引起了很大的兴趣。遗传学和药理学证据都指向中枢MC4-R受体作为首要的靶点(Giraudo,S.Q.等人,Brain Res.,809:302-306(1998)；Farooqi,I.S.等人,NE J Med.,348:1085-1095(2003)；MacNeil,D.J.等人,Eu.J.Pharm.,44:141-157(2002)；MacNeil,D.J.等人,Eu.J.Pharm.,450:93-109(2002)；Kask,A.等人,NeuroReport,10:707-711(1999))。受体选择性的激动剂和拮抗剂的目前进展证实了激活黑皮质素受体、特别是MC4-R的治疗潜力。
在美国专利号4,395,403中所述的溶液相合成是使用BTFA/TFA去除保护半胱氨酸的巯基的甲氧基苄基基团，然后环化。然而，已知在例如强酸处理去除保护基团的过程中经常出现色氨酸残基的分解。因此，需要开发制备Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的有效方法。
发明概述
在本发明的第一方面，提供了合成Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的新方法，其包括片段缩合方法，其中使用被保护的氨基酸，例如Boc保护的氨基酸、苯甲酰氧基羰基保护的氨基酸、Fmoc保护的氨基酸，与被保护的氨基酸的氟化物，例如Fmoc氨基酸氟化物或Bsmoc氨基酸氟化物，其中使用了混合酸酐偶联方法，且其中提供了被保护的肽片段Trp-Cys或Arg-Trp，例如Boc-Trp-Cys(Acm)-OMe或Boc-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe。
在本发明的第一方面的优选实施方案中，使用了肽-酰肼偶联方法，其中使用氨将酯官能团转化为酰胺官能团。
本发明的第一方面可以包含以下步骤：
(a)从苯甲酰氧基羰基-D-Ala-OH和H-His-OH在偶联剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His-OH；
或者，从苯甲酰氧基羰基-D-Ala-OH和H-His(Trt)-OH在偶联剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His(Trt)-OH；
(b-1)从苯甲酰氧基羰基-D-Phe-OH和H-Arg(Pbf)-OMe在偶联剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe；
(b-2)通过将在步骤(b-1)中得到的片段苯甲酰氧基羰基-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe氢化来合成片段H-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe；
(c-1)从苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His-OH和从步骤(b-2)中得到的片段H-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe在偶联剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe；
或者，从苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His(Trt)-OH和步骤(b-2)中得到的片段H-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe在偶联剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe；
(c-2)通过将在步骤(c-1)中得到的片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe氢化来合成片段H-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe；
或者，通过将在步骤(c-1)中得到的片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe氢化来合成片段H-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe；
(d-1)从Fmoc-Arg(Pbf)-OH和H-Cys(Acm)-OBzl在偶联剂的存在下反应然后氢化而合成片段Fmoc-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH；
(d-2)从在步骤(d-1)中得到的片段Fmoc-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH在碱的存在下合成片段H-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH；
(d-3)从在步骤(d-2)中得到的片段H-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-OH和H-Cys(Acm)-OMe在偶联剂的存在下反应然后用碱水解而合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH；
(e-1)从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH和H-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe在偶联剂的存在下合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH和H-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe在偶联剂的存在下合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe；
(e-2)通过在碱存在下水解在步骤(e-1)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe来合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OH；
或者，通过在碱存在下水解在步骤(e-1)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe来合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH；
(f)通过在肼存在下从步骤(e-1)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe  合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-NHNH2；
或者，通过在肼存在下从步骤(e-1)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-NHNH2；
(g-1)从Boc-Trp-OH和H-Cys(Acm)-OMe在偶联剂存在下合成片段Boc-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从Boc-Trp(For)-OH和H-Cys(Acm)-OMe在偶联剂存在下合成片段Boc-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
(g-2)从在步骤(g-1)中得到的片段Boc-Trp-Cys(Acm)-OMe在TFA存在下合成H-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从在步骤(g-1)中得到的片段Boc-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在TFA存在下合成H-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
(h)从步骤(f)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-NHNH2和H-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe，使用酸和亚硝酸叔丁基酯来合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
或者，从步骤(f)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-NHNH2和H-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe，使用酸和亚硝酸叔丁基酯来合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
或者，从步骤(f)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-NHNH2和H-Trp-Cys(Acm)-OMe，使用酸和亚硝酸叔丁基酯来合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从步骤(f)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-NHNH2和H-Trp-Cys(Acm)-OMe，使用酸和亚硝酸叔丁基酯来合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OH和H-Trp-Cys(Acm)-OMe  在偶联剂的存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH和H-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe  在偶联剂的存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OH和H-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe  在偶联剂的存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH和H-Trp-Cys(Acm)-OMe在偶联剂的存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe在TFA的存在下合成Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe在TFA的存在下合成Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在TFA的存在下合成Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在TFA的存在下合成Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
(i)从在步骤(h)中得到的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe在氨存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-NH2；
或者，从在步骤(h)中得到的Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-OMe在氨存在下合成Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-NH2；
或者，从在步骤(h)中得到的Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在氨存在下合成Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-NH2；
或者，从在步骤(h)中得到的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe在氨存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-NH2；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-NH2在TFA存在下合成Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-NH2；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-NH2在TFA存在下合成Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-NH2；以及
(j)从Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-NH2通过使用氧化剂合成Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2。
在上文所述本发明的方面，所述氧化剂优选是碘，所述偶联剂优选是DCC、HBTU、HATU、DIC、EDC或氯甲酸异丁基酯，且所述的碱优选是Et2NH、TAEA、哌嗪、氢氧化钠或氢氧化钾。
上文总结的合成次序在图1A中以图解表示。
图1B显示了上文总结的合成次序的另一个流程图。
在本发明的第二方面，其提供了合成Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的新方法，除了提供被保护的肽片段Cys-D-Ala或Arg-Cys以外，其与上文所述的第一方面类似。
在本发明的第二方面的优选的实施方案中，所述被保护的肽片段Cys-D-Ala是Boc-Cys(Acm)-D-Ala-OH。
本发明的第二方面可以包含以下步骤：
(a-1)从Boc-Cys(Acm)-OH和H-D-Ala-OH在偶联试剂的存在下合成片段Boc-Cys(Acm)-D-Ala-OH；
(a-2)从在步骤(a-1)中得到的片段Boc-Cys(Acm)-D-Ala-OH在TFA的存在下合成片段H-Cys(Acm)-D-Ala-OH；
(b)从Ac-Arg(Pbf)-OH和在步骤(a-2)中得到的片段H-Cys(Acm)-D-Ala-OH  在偶联试剂的存在下合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-OH；
(c-1)从Boc-His-OH和H-D-Phe-OMe在偶联试剂的存在下合成片段Boc-His-D-Phe-OMe；
(c-2)从在步骤(c-1)中得到的片段Boc-His-D-Phe-OMe在TFA的存在下合成片段H-His-D-Phe-OMe；
(d-1)从Boc-Trp-OH和H-Cys(Acm)-OMe在偶联试剂的存在下合成片段Boc-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从Boc-Trp(For)-OH和H-Cys(Acm)-OMe在偶联试剂的存在下合成片段Boc-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
(d-2)从在步骤(d-1)中得到的片段Boc-Trp-Cys(Acm)-OMe在TFA的存在下合成片段H-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从在步骤(d-1)中得到的片段Boc-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在TFA的存在下合成片段H-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
(e-1)从苯甲酰氧基羰基-Arg(Pbf)-OH和在步骤(d-2)中得到的片段H-Trp-Cys(Acm)-OMe在偶联试剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从苯甲酰氧基羰基-Arg(Pbf)-OH和在步骤(d-2)中得到的片段H-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在偶联试剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
(e-2)通过氢化在步骤(e-1)中得到的片段苯甲酰氧基羰基-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe来合成片段H-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，通过氢化在步骤(e-1)中得到的片段苯甲酰氧基羰基-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe来合成片段H-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
(f-1)从在步骤(b)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-OH和在步骤(c-2)中的得到的片段H-His-D-Phe-OMe在偶联试剂的存在下合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-OMe；
(f-2)从在步骤(f-1)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-OMe在肼的存在下合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-NHNH2；
或者，从在步骤(f-1)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-OMe在碱的存在下合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-OH；
(g)从在步骤(f-2)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-NHNH2和在步骤(e-2)中得到的片段H-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe使用酸和亚硝酸叔丁基酯合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从在步骤(f-2)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-NHNH2和在步骤(e-2)中得到的片段H-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe使用酸和亚硝酸叔丁基酯合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
或者，从在步骤(f-2)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-OH和在步骤(e-2)中得到的片段H-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe  在偶联试剂的存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从在步骤(f-2)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-OH和在步骤(e-2)中得到的片段H-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在偶联试剂的存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
(h)从在步骤(g)中得到的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe在氨的存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-NH2；
或者，从在步骤(g)中得到的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在氨存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-NH2；
或者，从在步骤(g)中得到的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe在氨的存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-NH2；
或者，从在步骤(g)中得到的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在氨的存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-NH2；
(i)从在步骤(h)中得到的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-NH2在TFA的存在下合成Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-NH2；以及
(j)从在步骤(i)中得到的Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-NH2使用氧化剂来合成Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2。
图2是上文所总结的合成次序的流程图。
图3-11是使用片段缩合步骤和不同肽片段的多种合成次序的流程图，其全部都得到Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2。
在本发明的第三方面，提供了合成Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的新方法，其包含线性的分步的合成方法。
在本发明第三方面的优选的实施方案中，使用了被保护的氨基酸，例如Boc保护的氨基酸、Fmoc保护的氨基酸以及被保护的氨基酸氟化物如Fmoc氨基酸氟化物或Bsmoc氨基酸氟化物，二甲基环丙基甲基胺用于被保护的肽链的C端，并使用了Fmoc-Cys(Trt)-NH-CMe2CP。
本发明的第二方面可以包含以下步骤：
(a)从Fmoc-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在碱的存在下合成H-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(b)从Fmoc-Trp(Boc)-OH和在步骤(a)中的得到的H-Cys(Trt)-NH-CMe2CP  在偶联试剂的存在下合成Fmoc-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(c)从在步骤(b)中得到的Fmoc-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在碱的存在下合成H-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(d)从Fmoc-Arg(Pbf)-OH和在步骤(c)中得到的H-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP  在偶联试剂的存在下合成Fmoc-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(e)从在步骤(d)中得到的Fmoc-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在碱的存在下合成H-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(f)从Fmoc-D-Phe-OH  和在步骤(e)中得到的H-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在偶联试剂的存在下合成Fmoc-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(g)从在步骤(f)中得到的Fmoc-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在碱的存在下合成H-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(h)从Fmoc-His(Trt)-OH  和在步骤(g)中得到的H-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在偶联试剂的存在下合成Fmoc-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(i)从在步骤(h)中得到的Fmoc-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在碱的存在下合成H-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(j)从Fmoc-D-Ala-OH和在步骤(i)中得到的H-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在偶联试剂的存在下合成Fmoc-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(k)从在步骤(j)中得到的Fmoc-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在碱的存在下合成H-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(l)从Fmoc-Cys(Trt)-OH和在步骤(k)中得到的H-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在偶联试剂的存在下合成Fmoc-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(m)从在步骤(l)中得到的Fmoc-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在碱的存在下合成H-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(n)从Fmoc-Arg(Pbf)-OH和在步骤(m)中得到的H-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在偶联试剂的存在下合成Fmoc-Arg(Pbf)-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(o)从在步骤(n)中得到的Fmoc-Arg(Pbf)-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在碱的存在下合成H-Arg(Pbf)-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(p)从在步骤(o)中得到的H-Arg(Pbf)-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP和Ac2O、AcCl或AcBr来合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-OH和在步骤(m)中得到的H-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在偶联试剂的存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(q)从在步骤(p)中得到的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在TFA的存在下合成Ac-Arg-Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys-NH2；以及
(r)从在步骤(q)中得到的Ac-Arg-Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys-NH2在氧化剂的存在下合成Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2。
在本发明的第三方面，所述氧化剂优选地是碘、氧、空气或DMSO；所述偶联试剂优选地是DCC、HBTU、HATU、DIC、EDC或氯甲酸异丁基酯，且所述的碱优选地是Et2NH、TAEA或哌嗪。
附图简述
图1A是如上文总结的本发明第一方面的流程图。
图1B显示了如上文总结的本发明第一方面的另一个流程图。
图2是如上文总结的本发明第二方面的流程图。
图3-11是使用片段缩合步骤和不同肽片段的多种合成次序的流程图，其全部获得Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2，并且其属于如本文所要求保护的本发明范围之内。
发明详述
本申请使用以下缩写：
Ac:        乙酰基
Acm:       乙酰氨基甲基
AcOH:      乙酸
Ala或A:    丙氨酸
Arg或R:    精氨酸
Boc:       叔丁氧基羰基
Bsmoc:     1,1-二氧代苯并[b]噻吩-2-基甲基氧基羰基
BTFA:      三-三氟乙酸硼酯
Bzl:       苄基
Cys或C:    半胱氨酸
DCCI:      N，N’-二环己基碳二亚胺
DIC:       N，N’-二异丙基碳二亚胺
DMF:       二甲基甲酰胺
EDC:       1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸化物
Fmoc:      9-芴甲氧基羰基
For:       甲酰基
HATU:      O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HBTU:      2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
His或H:    组氨酸
HOBt           1-羟基苯并三唑
HPLC:          高效液相色谱
Me:            甲基
MeOH:          甲醇
Mtr:           4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺酰基
Mtt:           甲基三苯甲基
NH2-CMe2CP:    二甲基环丙基甲基胺
Pbf：          2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基
Pmc:           2,2,5,7,8-五甲基色满-6-磺酰基
TAEA:          三(2-氨基乙基)胺
TFA            三氟乙酸
THF:           四氢呋喃
Trp或W:        色氨酸
Trt:           三苯甲基
Z或Cbz:        苯甲酰氧基羰基
在Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2中的标注“NH2”是指所述肽的C-端被酰胺化。
命名“-环(Cys-Cys)-”是指结构：
Figure BDA00001639751700161
如本文所用的与参数和量相关的术语“约”，是指该参数或量在所述的参数或量的+5%范围内。
合成
合成实施例1，即Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH 2
步骤1:制备Z-D-Ala-His-OH
将30mmol的Z-D-Ala-OH在150mL乙腈中冷却至-18°C。向该冷却的溶液中加入3.4mL的N-甲基-吗啉，然后加入4.1mL氯甲酸异丁基酯。将该溶液在-15°C搅拌15分钟，并加入30.3mmol的H-His-OH在30mL的1N NaOH中的冷却溶液和100mL乙腈。将所得溶液在-5°C至0°C下再搅拌18小时。将反应混合物真空浓缩，用水稀释，并用少量乙醚萃取3次。通过加入4N H2SO4将水相调至约pH2。形成沉淀，将其用乙醚/乙酸萃取。将有机相用水洗涤，并用Na2SO4干燥。真空蒸发后，将残余物从乙醚/石油醚中结晶，得到标题化合物。
步骤2:制备Z-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe
在搅拌中将13.5mL氯甲酸异丁基酯加入在-20°C预先冷却的溶于1200mL的THF的147mmol的Z-DPhe-OH中。在-15°C继续搅拌20分钟，并加入158mmol的HCTH-Arg(Pbf)-OMe在600mL的THF的冷却(-21°C)溶液中。逐滴加入17mL三乙胺，并将反应容器的温度保持在-15°C温度。将反应混合物在0°C搅拌18小时，并将产物真空浓缩。用乙醚/乙酸乙酯(1∶1)稀释并过滤。将滤液用2N柠檬酸、10%KHCO3和水洗涤。有机相用Na2SO4干燥并蒸发至干，得到标题化合物。
步骤3:制备Z-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe
将131mmol的Z-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe在150mL的MeOH中的溶液在Pd/C存在下氢化。过滤产物并用MeOH洗涤。将滤液真空蒸发。将形成的残余物与99mmol的Z-D-Ala-His-OH和2.0g HOBt一起溶于50mL的DMF中。将该溶液冷却至-15°C。在搅拌中加入2.1g的DCCI在15mL的DMF中的溶液。将所得溶液在0°C下再搅拌2天，真空蒸发，用乙酸/乙醚(1∶1)稀释，并过滤。将滤液用2N的柠檬酸、10%KHCO3和水洗涤。将有机相用Na2SO4干燥并蒸发。将残余物通过硅胶色谱用CH2Cl2/MeOH作为洗脱剂纯化。收集包含所需产物的流份，并真空蒸发得到标题化合物。
步骤4:制备H-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe
将1.3mmol的Z-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe在50mL的MeOH中的溶液在10%Pd/C存在下氢化，并将该溶液过滤，真空蒸发得到标题化合物。
步骤5:制备Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH
将8.4mL的NEt3，然后8.3mL的氯甲酸异丁基酯加入在-20°C预先冷却的60mmol的Ac-Arg(Pbf)-OH在300mL的THF的溶液中。将所得混合物在-15°C搅拌10分钟。依次逐滴加入H-Cys(Acm)-OH的冷却溶液和11.5mL的NEt3在400mL的THF/水(5∶1)中的溶液。将反应混合物在0°C搅拌约2天，真空浓缩，用1.3L的水稀释，并用乙醚萃取。通过加入4N的H2SO4将水相调至pH 2.0，并用乙酸乙酯萃取沉淀。将乙酸乙酯萃取物用水洗涤，用Na2SO4干燥并真空蒸发。将残余物经硅胶色谱用乙醚/1%AcOH作为洗脱剂纯化。将包含所需产物的流份合并，并真空蒸发得到标题化合物。
步骤6:制备Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe
将0.30g的DCCI在搅拌中加入预先冷却至20°C的溶于30mL DMF中的1.42mmol的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH、1.3mmol的H-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe和0.5g的HOBt的溶液中。将反应混合物在-5°C至0°C的恒定温度下搅拌约12小时，并随后在室温下搅拌约4小时。滤出沉淀的二环己基脲，并将滤液用2N柠檬酸、10%KHCO3和水洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，纯化并浓缩。通过加入乙醚沉淀产物，过滤并干燥得到标题化合物。
步骤7:制备 Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-NHNH 2
将1.5mL的水合肼加入0.07mmol的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe溶于15mL的DMF的溶液中。将该溶液在室温下放置5小时。随后加入MeOH水溶液。滤出形成的沉淀，用MeOH/水(1∶9)洗涤，并干燥得到标题化合物。
步骤8:制备H-Trp-Cys(Acm)-OMe
将17.2mmol的Boc-Trp-Cys(Acm)-OMe和5mL苯甲硫醚在25mL二氯甲烷中的溶液加入50mL的TFA中，并在室温下放置20分钟。将该溶液用约1.5L乙醚稀释，滤出形成的沉淀，用乙醚洗涤并干燥得到标题化合物。
步骤9:制备Boc-Trp-Cys(Acm)-OMe
在搅拌中将2.1mL的N-甲基吗啉加入预先冷却至-20°C的19.4mmol的Boc-Trp-OH在50mL的THF的溶液中，然后在-15°C逐滴加入2.4mL氯甲酸异丁基酯。在-15°C搅拌5分钟后，加入包含24mmol的H-Cys(Acm)-OMe和4.1mL的N-甲基吗啉在30mL的DMF中的冷却(-10°C)溶液。将该混合物在0°C的恒温下搅拌2小时，然后在室温下再搅拌2小时。加入50mL的10%KHCO3。将反应混合物真空浓缩，用乙酸乙酯稀释，并用2N的柠檬酸洗涤三次，然后用10%KHCO3洗涤3次，并随后用30%NaCl溶液洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，并真空蒸发得到标题化合物。
步骤10:制备 Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe
在搅拌中将0.7mL的5N HCl的乙醚溶液加入在-20°C预先冷却的0.63mmol的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-NHNH2在30mL的DMF的溶液中。然后加入0.8mL的10%亚硝酸叔丁基酯在DMF中的溶液。将该混合物在-20°C至-15°C搅拌15分钟。在-25°C加入0.56mL的NEt3，然后加入预先冷却至-15°C的1.1mmol的H-Trp-Cys(Acm)-OMe在3mL的DMF中的溶液，将所得混合物在-5°至0°C搅拌20小时，并随后在室温下再搅拌3小时。将反应混合物用约100mL甲醇稀释，并通过加入大约40mL水来沉淀产物。滤出形成的沉淀，用MeOH水溶液洗涤并干燥，得到标题化合物。
步骤11:制备 Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-NH 2
将0.5mmol的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe用液氨处理几小时。然后将氨缓慢蒸发。将残余物用约100mL甲醇稀释，并通过加入大约40mL水来沉淀产物。滤出形成的沉淀，用MeOH水溶液洗涤并干燥，得到标题化合物。
步骤12：制备Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH 2
在0°C下将0.4mmol的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-NH2和6.0mL的苯甲硫醚溶于30mL的TFA中。将温度保持在-5°C至-10°C继续搅拌1.5小时，并随后加入50mL冷却的MeOH(-70°C)。再过5分钟后，在搅拌中加入1L乙醚和5mL约5N HCl的乙醚溶液。滤出沉淀的产物，并迅速用乙醚洗涤。将残余物立即溶于2.5L的MeOH/H2O中。通过加入稀释的氨溶液将pH调至7-7.5。向该混合物中滴加碘的MeOH溶液直至达到持久的颜色。将反应物在室温下搅拌直至检测-SH基团为阴性(例如，Ellmann试验)。将反应物用10%NaS2O3猝灭。通过加入HCl将pH调至3-4。将所得溶液真空浓缩，并将产物冻干。将冻干物溶于少量10%AcOH中，并用HPLC纯化。收集包含所需产物的流份，冻干，得到标题化合物。
根据前述的公开内容，本发明的其它实施方案是很明显的，并且其包含在如本文充分描述的并且由以下权利要求所定义的本发明内。

Claims (25)

1.Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其包括片段缩合方法。
2.如权利要求1所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中使用了被保护的氨基酸。
3.如权利要求2所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中所述被保护的氨基酸选自Boc保护的氨基酸、苯甲酰氧基羰基保护的氨基酸、Fmoc保护的氨基酸，以及被保护的氨基酸的氟化物。
4.如权利要求3所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中所述被保护的氨基酸的氟化物是Fmoc氨基酸氟化物或Bsmoc氨基酸氟化物。
5.如上述权利要求中任一项所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中使用了混合酸酐偶联方法。
6.如上述权利要求中任一项所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中使用了肽-酰肼偶联方法。
7.如上述权利要求中任一项所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中使用氨将酯官能团转化为酰胺官能团。
8.如上述权利要求中任一项所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中提供了被保护的肽片段Trp-Cys或Arg-Trp。
9.如权利要求8所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中所述被保护的肽片段Trp-Cys是Boc-Trp-Cys(Acm)-OMe或Boc-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe。
10.如权利要求8或权利要求9所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中提供了被保护的肽片段D-Ala-His或His-D-Phe。
11.如权利要求10所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中所述被保护的肽片段D-Ala-His是苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His-OH或苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His(Trt)-OH。
12.如权利要求8-11所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其包含步骤：
(a)从苯甲酰氧基羰基-D-Ala-OH和H-His-OH在偶联剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His-OH；
或者，从苯甲酰氧基羰基-D-Ala-OH和H-His(Trt)-OH在偶联剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His(Trt)-OH；
(b-1)从苯甲酰氧基羰基-D-Phe-OH和H-Arg(Pbf)-OMe在偶联剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe；
(b-2)通过将在步骤(b-1)中得到的片段苯甲酰氧基羰基-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe氢化来合成片段H-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe；
(c-1)从苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His-OH和从步骤(b-2)中得到的片段H-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe在偶联剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe；
或者，从苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His(Trt)-OH和步骤(b-2)中得到的片段H-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe在偶联剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe；
(c-2)通过将在步骤(c-1)中得到的片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe氢化来合成片段H-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe；
或者，通过将在步骤(c-1)中得到的片段苯甲酰氧基羰基-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe氢化来合成片段H-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe；
(d-1)从Fmoc-Arg(Pbf)-OH和H-Cys(Acm)-OBzl在偶联剂的存在下反应然后氢化而合成片段Fmoc-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH；
(d-2)从在步骤(d-1)中得到的片段Fmoc-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH在碱的存在下合成片段H-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH；
(d-3)从在步骤(d-2)中得到的片段H-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-OH和H-Cys(Acm)-OMe在偶联剂的存在下反应然后用碱水解而合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH；
(e-1)从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH和H-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe在偶联剂的存在下合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-OH和H-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe在偶联剂的存在下合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe；
(e-2)通过在碱存在下水解在步骤(e-1)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe来合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OH；
或者，通过在碱存在下水解在步骤(e-1)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe来合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH；
(f)通过在肼存在下从步骤(e-1)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-NHNH2；
或者，通过在肼存在下从步骤(e-1)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OMe合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-NHNH2；
(g-1)从Boc-Trp-OH和H-Cys(Acm)-OMe在偶联剂存在下合成片段Boc-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从Boc-Trp(For)-OH和H-Cys(Acm)-OMe在偶联剂存在下合成片段Boc-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
(g-2)从在步骤(g-1)中得到的片段Boc-Trp-Cys(Acm)-OMe在TFA存在下合成H-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从在步骤(g-1)中得到的片段Boc-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在TFA存在下合成H-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
(h)从步骤(f)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-NHNH2和H-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe，使用酸和亚硝酸叔丁基酯来合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
或者，从步骤(f)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-NHNH2和H-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe，使用酸和亚硝酸叔丁基酯来合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
或者，从步骤(f)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-NHNH2和H-Trp-Cys(Acm)-OMe，使用酸和亚硝酸叔丁基酯来合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从步骤(f)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-NHNH2和H-Trp-Cys(Acm)-OMe，使用酸和亚硝酸叔丁基酯来合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OH和H-Trp-Cys(Acm)-OMe  在偶联剂的存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH和H-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe  在偶联剂的存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-OH和H-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在偶联剂的存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH和H-Trp-Cys(Acm)-OMe  在偶联剂的存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe在TFA的存在下合成Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe在TFA的存在下合成Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在TFA的存在下合成Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在TFA的存在下合成Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
(i)从在步骤(h)中得到的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe在氨存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-NH2；
或者，从在步骤(h)中得到的Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-OMe在氨存在下合成Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-NH2；
或者，从在步骤(h)中得到的Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在氨存在下合成Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-NH2；
或者，从在步骤(h)中得到的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe在氨存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-NH2；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-NH2在TFA存在下合成Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-NH2；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-NH2在TFA存在下合成Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-NH2；以及
(j)从Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-NH2通过使用氧化剂合成Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2。
13.如权利要求12所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中：
所述氧化剂是碘；
所述偶联剂是DCC、HBTU、HATU、DIC、EDC或氯甲酸异丁基酯；且
所述的碱是Et2NH、TAEA、哌嗪、氢氧化钠或氢氧化钾。
14.如权利要求8或权利要求9所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中提供了被保护的肽片段Cys-D-Ala或Arg-Cys。
15.如权利要求14所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中所述被保护的肽片段Cys-D-Ala是Boc-Cys(Acm)-D-Ala-OH。
16.如权利要求14或权利要求15所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，包含步骤：
(a-1)从Boc-Cys(Acm)-OH和H-D-Ala-OH在偶联试剂的存在下合成片段Boc-Cys(Acm)-D-Ala-OH；
(a-2)从在步骤(a-1)中得到的片段Boc-Cys(Acm)-D-Ala-OH在TFA的存在下合成片段H-Cys(Acm)-D-Ala-OH；
(b)从Ac-Arg(Pbf)-OH和在步骤(a-2)中得到的片段H-Cys(Acm)-D-Ala-OH在偶联试剂的存在下合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-OH；
(c-1)从Boc-His-OH和H-D-Phe-OMe在偶联试剂的存在下合成片段Boc-His-D-Phe-OMe；
(c-2)从在步骤(c-1)中得到的片段Boc-His-D-Phe-OMe在TFA的存在下合成片段H-His-D-Phe-OMe；
(d-1)从Boc-Trp-OH和H-Cys(Acm)-OMe在偶联试剂的存在下合成片段Boc-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从Boc-Trp(For)-OH和H-Cys(Acm)-OMe在偶联试剂的存在下合成片段Boc-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
(d-2)从在步骤(d-1)中得到的片段Boc-Trp-Cys(Acm)-OMe在TFA的存在下合成片段H-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从在步骤(d-1)中得到的片段Boc-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在TFA的存在下合成片段H-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
(e-1)从苯甲酰氧基羰基-Arg(Pbf)-OH和在步骤(d-2)中得到的片段H-Trp-Cys(Acm)-OMe在偶联试剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从苯甲酰氧基羰基-Arg(Pbf)-OH和在步骤(d-2)中得到的片段H-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在偶联试剂的存在下合成片段苯甲酰氧基羰基-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
(e-2)通过氢化在步骤(e-1)中得到的片段苯甲酰氧基羰基-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe来合成片段H-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，通过氢化在步骤(e-1)中得到的片段苯甲酰氧基羰基-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe来合成片段H-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
(f-1)从在步骤(b)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-OH和在步骤(c-2)中的得到的片段H-His-D-Phe-OMe在偶联试剂的存在下合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-OMe；
(f-2)从在步骤(f-1)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-OMe在肼的存在下合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-NHNH2；
或者，从在步骤(f-1)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-OMe在碱的存在下合成片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-OH；
(g)从在步骤(f-2)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-NHNH2和在步骤(e-2)中得到的片段H-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe使用酸和亚硝酸叔丁基酯合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从在步骤(f-2)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-NHNH2和在步骤(e-2)中得到的片段H-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe使用酸和亚硝酸叔丁基酯合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
或者，从在步骤(f-2)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-OH和在步骤(e-2)中得到的片段H-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe  在偶联试剂的存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe；
或者，从在步骤(f-2)中得到的片段Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-OH和在步骤(e-2)中得到的片段H-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在偶联试剂的存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe；
(h)从在步骤(g)中得到的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe在氨的存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-NH2；
或者，从在步骤(g)中得到的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在氨存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-NH2；
或者，从在步骤(g)中得到的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-OMe在氨的存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-NH2；
或者，从在步骤(g)中得到的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-OMe在氨的存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(For)-Cys(Acm)-NH2；
(i)从在步骤(h)中得到的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp-Cys(Acm)-NH2在TFA的存在下合成Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-NH2；以及
(j)从在步6骤(i)中得到的Ac-Arg-Cys(Acm)-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys(Acm)-NH2使用氧化剂来合成Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2。
17.如权利要求16所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中：
所述氧化剂是碘；
所述偶联剂是DCC、HBTU、HATU、DIC、EDC或氯甲酸异丁基酯；且
所述的碱是Et2NH、TAEA、哌嗪、氢氧化钠或氢氧化钾。
18.Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其包含线性的分步的合成方法。
19.如权利要求12所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中使用了被保护的氨基酸。
20.如权利要求19所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中所述被保护的氨基酸选自Boc保护的氨基酸、Fmoc保护的氨基酸以及被保护的氨基酸的氟化物。
21.如权利要求20所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中所述被保护的氨基酸的氟化物是Fmoc氨基酸氟化物或Bsmoc氨基酸氟化物。
22.如权利要求18-21中任一项所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中二甲基环丙基甲基胺用于被保护的肽链的C端。
23.如权利要求22所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中使用了Fmoc-Cys(Trt)-NH-CMe2CP。
24.如权利要求23所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，包含步骤：
(a)从Fmoc-Cys(Trt)-NH-CMe2CP  在碱的存在下合成H-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(b)从Fmoc-Trp(Boc)-OH和在步骤(a)中的得到的H-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在偶联试剂的存在下合成Fmoc-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(c)从在步骤(b)中得到的Fmoc-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在碱的存在下合成H-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(d)从Fmoc-Arg(Pbf)-OH和在步骤(c)中得到的H-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在偶联试剂的存在下合成Fmoc-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(e)从在步骤(d)中得到的Fmoc-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在碱的存在下合成H-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(f)从Fmoc-D-Phe-OH和在步骤(e)中得到的H-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在偶联试剂的存在下合成Fmoc-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(g)从在步骤(f)中得到的Fmoc-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在碱的存在下合成H-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(h)从Fmoc-His(Trt)-OH  和在步骤(g)中得到的H-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在偶联试剂的存在下合成Fmoc-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(i)从在步骤(h)中得到的Fmoc-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在碱的存在下合成H-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(j)从Fmoc-D-Ala-OH和在步骤(i)中得到的H-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在偶联试剂的存在下合成Fmoc-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(k)从在步骤(j)中得到的Fmoc-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在碱的存在下合成H-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(l)从Fmoc-Cys(Trt)-OH和在步骤(k)中得到的H-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在偶联试剂的存在下合成Fmoc-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(m)从在步骤(l)中得到的Fmoc-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在碱的存在下合成H-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(n)从Fmoc-Arg(Pbf)-OH  和在步骤(m)中得到的H-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在偶联试剂的存在下合成Fmoc-Arg(Pbf)-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(o)从在步骤(n)中得到的Fmoc-Arg(Pbf)-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在碱的存在下合成H-Arg(Pbf)-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(p)从在步骤(o)中得到的H-Arg(Pbf)-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP和Ac2O、AcCl或AcBr来合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
或者，从Ac-Arg(Pbf)-OH和在步骤(m)中得到的H-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在偶联试剂的存在下合成Ac-Arg(Pbf)-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP；
(q)从在步骤(p)中得到的Ac-Arg(Pbf)-Cys(Trt)-D-Ala-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-NH-CMe2CP在TFA的存在下合成Ac-Arg-Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys-NH2；以及
(r)从在步骤(q)中得到的Ac-Arg-Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys-NH2在氧化剂的存在下合成Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2。
25.如权利要求24所述的Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的溶液相合成方法，其中：
所述氧化剂是碘、氧、空气或DMSO；
所述偶联试剂是DCC、HBTU、HATU、DIC、EDC或氯甲酸异丁基酯；且
所述的碱是Et2NH、TAEA或哌嗪。
CN2010800516439A 2009-11-16 2010-11-15 合成Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的方法 Pending CN102686601A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US28135909P 2009-11-16 2009-11-16
US61/281,359 2009-11-16
PCT/US2010/056696 WO2011060355A1 (en) 2009-11-16 2010-11-15 Process for the synthesis of ac-arg-cyclo(cys-d-ala-his-d-phe-arg-trp-cys)-nh2

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN102686601A true CN102686601A (zh) 2012-09-19

Family

ID=43992093

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2010800516439A Pending CN102686601A (zh) 2009-11-16 2010-11-15 合成Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的方法

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20120226018A1 (zh)
EP (1) EP2501712A4 (zh)
JP (1) JP2013510881A (zh)
CN (1) CN102686601A (zh)
RU (1) RU2012125033A (zh)
WO (1) WO2011060355A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN118598949A (zh) * 2024-05-15 2024-09-06 万邦德制药集团有限公司 一种二硒环肽及其制备方法和应用

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
LT3539551T (lt) 2011-12-29 2022-01-10 Rhythm Pharmaceuticals, Inc. Su melanokortino-4 receptoriumi susijusių sutrikimų gydymo būdas heterozigotiniuose nešiotojuose
EP3450449A3 (en) 2013-03-15 2019-06-12 Rhythm Pharmaceuticals, Inc. Peptide compositions
EP2970389B1 (en) * 2013-03-15 2020-08-19 Rhythm Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions
US12479882B2 (en) 2022-12-15 2025-11-25 Chunghwa Chemical Synthesis & Biotech Co. Ltd. Preparation method of setmelanotide by cyclization of disulfide bond in solid phase
CN119462838B (zh) * 2024-09-03 2025-08-19 万邦德制药集团有限公司 一种二硫环肽化合物及其制备方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007008704A2 (en) * 2005-07-08 2007-01-18 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques S.A.S. Melanocortin receptor ligands
US20080171849A1 (en) * 2004-09-20 2008-07-17 Matthieu Giraud Peptide Cyclisation

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020155999A1 (en) * 1998-04-30 2002-10-24 Han In Suk Method of using a porphyrin-like molecule conjugated with an anti-cancer drug for the treatment of cancer
IL145406A0 (en) * 1999-03-29 2002-06-30 Procter & Gamble Melanocortin receptor ligands
HUP0303085A2 (hu) * 2000-09-27 2003-12-29 The Procter & Gamble Co. Melanokortin receptor ligandumok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények
WO2002059095A1 (en) * 2001-01-23 2002-08-01 Eli Lilly And Company Melanocortin receptor agonists
CA2673229A1 (en) * 2006-12-29 2008-07-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods for the synthesis of cyclic peptides
EP2167112A4 (en) * 2007-06-15 2012-01-25 Ipsen Pharma Sas CYCLIC PEPTIDE MELANOCORTIN RECEPTOR LIGANDS
JP2013501053A (ja) * 2009-08-05 2013-01-10 イプセン ファルマ ソシエテ パール アクシオン サンプリフィエ 脂質異常症を治療するためのメラノコルチンの使用
DK2473518T3 (en) * 2009-08-31 2017-03-27 Tensive Controls Inc Stabilized melanocortin ligands
JP5486690B2 (ja) * 2009-11-16 2014-05-07 イプセン ファルマ ソシエテ パール アクシオン サンプリフィエ メラノコルチン受容体リガンドの医薬組成物

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080171849A1 (en) * 2004-09-20 2008-07-17 Matthieu Giraud Peptide Cyclisation
WO2007008704A2 (en) * 2005-07-08 2007-01-18 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques S.A.S. Melanocortin receptor ligands

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
STEPHEN B. H. KENT: "CHEMICAL SYNTHESIS OF PEPTIDES AND PROTEINS", 《ANN. REV. BIOCHEM》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN118598949A (zh) * 2024-05-15 2024-09-06 万邦德制药集团有限公司 一种二硒环肽及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
US20120226018A1 (en) 2012-09-06
RU2012125033A (ru) 2014-01-20
EP2501712A4 (en) 2013-09-04
EP2501712A1 (en) 2012-09-26
JP2013510881A (ja) 2013-03-28
WO2011060355A1 (en) 2011-05-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220127305A1 (en) Melanocortin receptor ligands
US20100173834A1 (en) Cyclic peptide melanocortin receptor ligands
US8349797B2 (en) Ligands of melanocortin receptors
CN102686601A (zh) 合成Ac-Arg-环(Cys-D-Ala-His-D-Phe-Arg-Trp-Cys)-NH2的方法
HK40067409A (zh) 黑皮质素受体配体
HK1258965B (zh) 黑皮质素受体配体
HK1180596B (zh) 黑素皮质素受体配体
HK1151246B (zh) 黑色素皮质素受体配体
HK1151246A (zh) 黑色素皮质素受体配体
HK1149190B (zh) 黑皮质素受体配位体
HK1180596A (zh) 黑素皮质素受体配体

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20120919