CN102636638A - 基于大粒径磁珠的抗原抗体包被方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种医药试剂,具体的说是一种基于大粒径磁珠的抗原抗体包被方法,其特征在于,采用如下步骤:A、称取一定量的大粒径磁珠,置于锥形瓶内,并加入缓冲液,缓冲液的PH值为4.0-10.0;B、再加入需要包被的抗原或抗体,置于温控摇床内,4-37℃反应3-16h;C、反应后,取出锥形瓶,用清洗液清洗数次,然后加入封闭液,置于温控摇床内,4-37℃反应1-16h;D、反应后取出2-8℃保存待用。本发明同现有技术相比,就能够使包被了抗原抗体的磁珠在反应杯振荡,使抗原抗体之间的反应更充分,大大缩短抗原抗体的反应时间。
Description
[技术领域]
本发明涉及一种医药试剂,具体的说是一种基于大粒径磁珠的抗原抗体包被方法。
[背景技术]
免疫检测技术是指通过抗原与抗体特异性反应,建立的各种检测与分析的技术。目前的免疫检测技术主要包括酶联免疫、胶体金、免疫荧光和化学发光等技术。而这些技术原理都大致相同,都是把抗原、抗体固定到固相载体,然后通过抗原与抗体的特异性结合发生反应,最后通过放大系统把这种抗原与抗体的反应放大,转化为可接收的信号,以实现对目标物质的检测及分析。
目前国内用的较多的固相载体主要还是酶标板,而国外多用乳胶微球或磁性微球取而代之。乳胶微球相对酶标板有很多优势,这种微球的粒径多为纳米级及微米级微球,它相对于板大大提高了固相载体与抗原抗体交联的表面积,使抗原抗体的交联率大大提高。它的密度与缓冲液的密度几乎一致,这样使这些乳胶微球能够均匀的分布在溶液中,在抗原与抗体特异性反应时,不再像板一样是一种单向反应,而是抗原与抗体的双向反应,大大提高了反应的速度。但乳胶微球的粒径太小,这给抗原抗体特异性反应后的清洗带来了麻烦,往往需要比较昂贵的清洗仪器,如高速冷冻离心机。基于此,磁性微球也就得到了大家的青睐,它即有乳胶微球带来的优势,又弥补了乳胶微球的不足之处。国外很多诊断试剂公司主要用到的磁珠粒径在500nm-2.0um之间,而本发明用到的大粒径磁珠的粒径分布在0.5mm-3.0mm之间,结合我们的仪器,使清洗效力及速度大大提升,抗原抗体反应时间大大降低,只要数分钟就能完成一个检测。
[发明内容]
本发明为了克服现有技术的不足,一种基于大粒径磁珠的抗原抗体包被方法。
为了实现上述目的,本发明设计了一种基于大粒径磁珠的抗原抗体包被方法,其特征在于,采用如下步骤:
A、称取一定量的大粒径磁珠,置于锥形瓶内,并加入缓冲液,缓冲液的PH值为4.0-10.0;
B、再加入需要包被的抗原或抗体,置于温控摇床内,4-37℃反应3-16h;
C、反应后,取出锥形瓶,用清洗液清洗数次,然后加入封闭液,置于温控摇床内,4-37℃反应1-16h;
D、反应后取出2-8℃保存待用。
所述步骤A中,缓冲液包括如下物质:NaCl,8.0g;KCl,0.2g;Na2HPO4.12H2O,2.9g;KH2PO4,0.2g;加DDW定容至1000mL。
所述步骤A中,缓冲液包括如下物质:Na2CO3,1.59g;NaHCO3,2.93g;加DDW定容至1000mL。
所述步骤C中,清洗液包括如下物质:NaCl,8.0g;KCl,0.2g;Na2HPO4.12H2O,2.9g;KH2PO4,0.2g;Tween-20,0.5mL;加DDW定容至1000mL。
所述步骤C中,封闭液包括如下物质:NaCl,8.0g;KCl,0.2g;Na2HPO4.12H2O,2.9g;KH2PO4,0.2g;BSA,30.0g;甘露醇,10.0g;甘氨酸,20.0 g;Tween-20或Triton X-100,0.5 mL;NaN3,0.90g;加DDW定容至1000mL。
所述步骤C中,封闭液包括如下物质:NaCl,8.0g;KCl,0.2g;Na2HPO4.12H2O,2.9g;KH2PO4,0.2g;酪蛋白,20.0g;BSA,10.0g;海藻糖,10.0g;Triton X-100,0.5mL;NaN3,0.90 g;加DDW定容至1000mL。
所述步骤A中,大粒径磁珠的粒径范围为0.5mm-3.0mm。
本发明同现有技术相比,具有以下特点:
1、分离速度快,只需要数秒钟即可达到固相与液相分离的效果。
2、就能够使包被了抗原抗体的磁珠在反应杯振荡,使抗原抗体之间的反应更充分,大大缩短抗原抗体的反应时间。
3、清洗方便、分离完全,大大简化了仪器在清洗装置的自动化设计。
4、基于大粒径磁珠的抗原抗体物理吸附包被法,使操作更加简单,大大提高了包被的稳定性及重复性。
[附图说明]
图1为本发明试剂与罗氏Elecsys试剂的相关性趋势图。
[具体实施方式]
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解这些实施例仅用于说明本发明不用于限制本发明的范围。
实施例1:
配置磷酸盐缓冲液:
NaCl 8.0g;
KCl 0.2g;
Na2HPO4.12H2O 2.9g;
KH2PO4 0.2g;
调PH至7.4,加DDW定容至1000mL。
配置PBST清洗液:
NaCl 8.0g;
KCl 0.2g;
Na2HPO4.12H2O 2.9g;
KH2PO4 0.2g;
Tween-20 0.5mL;
调PH至7.4,加DDW定容至1000mL。
配置封闭液:
NaCl 8.0g;
KCl 0.2g;
Na2HPO4.12H2O 2.9g;
KH2PO4 0.2g;
BSA 30.0g;
甘露醇 10.0g;
甘氨酸 20.0g;
Tween-20 0.5mL;
NaN3 0.90g;
调PH至7.4,加DDW定容至1000mL。
称取1g,粒径为0.7mm的磁珠,置于锥形瓶内,加入PH7.4的磷酸盐缓冲液,再加入100ugAFP抗体,置于温控摇床内,4℃反应12-16h。反应后,取出锥形瓶,用0.1M PBST清洗液清洗3次,然后加入40ml封闭液,置于温控摇床内,4℃反应12-16h。反应后取出2-8℃保存待用。
如图1所示为本发明试剂与罗氏Elecsys试剂的相关性趋势图。
实施例2:
配置碳酸盐缓冲液:
Na2CO3 1.59g;
NaHCO3 2.93g;
调PH至9.6,加DDW定容至1000mL。
配置PBST清洗液:
NaCl 8.0g;
KCl 0.2g;
Na2HPO4.12H2O 2.9g;
KH2PO4 0.2g;
Tween-20 0.5mL;
调PH至7.4,加DDW定容至1000mL。
配置封闭液:
NaCl 8.0g;
KCl 0.2g;
Na2HPO4.12H2O 2.9g;
KH2PO4 0.2g;
酪蛋白 20.0g;
甘露醇 5.0g;
甘氨酸 20.0g;
Triton X-100 0.5mL;
NaN3 0.90g;
调PH至7.4,加DDW定容至1000mL。
称取1g,粒径为1.2mm的磁珠,置于锥形瓶内,加入PH9.6的碳酸盐缓冲液,再加入80ug乙肝核心抗原,置于温控摇床内,4℃反应12-16h。反应后,取出锥形瓶,用0.1M PBST清洗液清洗3次,然后加入40ml封闭液,置于温控摇床内,4℃反应12-16h。反应后取出2-8℃保存待用。
对上述试剂进行性能诊断:
在对临床400份临床判定为阳性的血清样本的检测中,397例样品被检出;在对600份临床判定为阴性的血清样品德检测中,600例样品被检出。临床林敏度为99.25%,临床特异性为100%,临床符合率为99.70%。
结果如下表所示:
| 临床判定为阳性标本 | 临床判定为阴性标本 | |
| 阳性标本 | 397 | 0 |
| 阴性标本 | 3 | 600 |
实施例3:
配置碳酸盐缓冲液:
Na2CO3 1.59g;
NaHCO3 2.93g;
调PH至9.6,加DDW定容至1000mL。
配置PBST清洗液:
NaCl 8.0g;
KCl 0.2g;
Na2HPO4.12H2O 2.9g;
KH2PO4 0.2g;
Tween-20 0.5mL;
调PH至7.4,加DDW定容至1000mL。
配置封闭液:
NaCl 8.0g;
KCl 0.2g;
Na2HPO4.12H2O 2.9g;
KH2PO4 0.2g;
酪蛋白 20.0g;
BSA 10.0g;
海藻糖 10.0g;
Triton X-100 0.5mL;
NaN3 0.90g;
调PH至7.4,加DDW定容至1000mL。
称取1g,粒径为1.7mm的磁珠,置于锥形瓶内,加入PH9.6的碳酸盐缓冲液,再加入40ug乙肝表面抗体,置于温控摇床内,4℃反应12-16h。反应后,取出锥形瓶,用0.1M PBST清洗液清洗3次,然后加入40ml封闭液,置于温控摇床内,4℃反应12-16h。反应后取出2-8℃保存待用。
在对临床412份临床判定为阳性的血清样本的检测中,411例样品被检出;在对608份临床判定为阴性的血清样品德检测中,604例样品被检出。临床林敏度为99.76%,临床特异性为99.34%,临床符合率为99.51%。
对上述试剂进行性能诊断:
| 临床判定为阳性标本 | 临床判定为阴性标本 | |
| 阳性标本 | 411 | 4 |
| 阴性标本 | 1 | 604 |
Claims (6)
1.一种基于大粒径磁珠的抗原抗体包被方法,其特征在于,采用如下步骤:
(A)称取一定量的大粒径磁珠,置于锥形瓶内,并加入缓冲液,缓冲液的PH值为4.0-10.0;
(B)再加入需要包被的抗原或抗体,置于温控摇床内,4-37℃反应3-16h;
(C)反应后,取出锥形瓶,用清洗液清洗数次,然后加入封闭液,置于温控摇床内,4-37℃反应1-16h;
(D)反应后取出2-8℃保存待用。
2.根据权利要求1所述的基于大粒径磁珠的抗原抗体包被方法,其特征在于,所述步骤A中,缓冲液包括如下物质:NaCl,8.0g;KCl,0.2g;Na2HPO4.12H2O,2.9g;KH2PO4,0.2g;加DDW定容至1000mL。
3.根据权利要求1所述的基于大粒径磁珠的抗原抗体包被方法,其特征在于,所述步骤A中,缓冲液包括如下物质:Na2CO3,1.59g;NaHCO3,2.93g;加DDW定容至1000mL。
4.根据权利要求1所述的基于大粒径磁珠的抗原抗体包被方法,其特征在于,所述步骤C中,清洗液包括如下物质:NaCl,8.0g;KCl,0.2g;Na2HPO4.12H2O,2.9g;KH2PO4,0.2g;Tween-20,0.5mL;加DDW定容至1000mL。
5.根据权利要求1所述的基于大粒径磁珠的抗原抗体包被方法,其特征在于,所述步骤C中,封闭液包括如下物质:NaCl,8.0g;KCl,0.2g;Na2HPO4.12H2O,2.9g;KH2PO4,0.2g;BSA,30.0g;甘露醇,10.0g;甘氨酸,20.0g;Tween-20或Triton X-100,0.5mL;NaN3,0.90g;加DDW定容至1000mL。
6.根据权利要求1所述的基于大粒径磁珠的抗原抗体包被方法,其特征在于,所述步骤A中,大粒径磁珠的粒径范围为0.5mm-3.0mm。
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