CN1023323C - 农业园艺用新抗生素sp-120组合物的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一新抗生素SP-120，SP-120A，SP-120B及其制备方法，还提供了有效成分为SP-120，SP-120A，SP-120B或其复合体的农业园艺用农药。它们具有强选择性，又有高度安全性，对施用人员毫无影响并且无任何药害。是通过培养链霉菌SP.SP-120(Streptomyces SP.SP-120)来生产本发明的物质。

Description

本发明是关于新抗生素SP-120，SP-120A，SP-120B和其制备方法，以及一种有效成份为SP-120，SP-120A，SP-120B或其复合体的农业园艺用农药。

以往，农业园艺用农药一直是使用如铜，汞，砷之类重金属化合物制剂和有机氯，有机磷药剂。但是这些药剂对动物和人体都有害，对土壤有污染作用，并且残留在自然界中的有害物质又长期地作用于动、植物。这样造成的环境污染已成了当今重大的社会问题，从而导致了目前这种被禁止或限制使用的局面。此外，随着选择性药剂的减少及抗药菌的出现，各种植物病害-尤其是水稻的主要病害有明显加重的趋势。为此，人们迫切希望能开发出一些既有强选择性效果，又有高度安全性的新型农药。

本发明的目的在于提供一种对各种植物病害均有效的抗生素SP-120，SP-120A，SP-120B及其制备方法。而且本发明的目的还在于提供一种以上述抗生素SP-120，SP-120A，SP-120B或其复合体为有效成份的农业园艺用农药。

本发明所述的抗生素SP-120，SP-120A，SP-120B为未见文献报道的新抗生素，其具有后述的理化性质。同时，在后述的喷撒试验中，对水稻的主要病害如水稻纹枯病，稻瘟病及其它如黄瓜灰霉病，黄瓜炭疽病，茄黑斑病，葡萄晚腐病等各种植物病害都显示了出色的防治效果。并且既无任何药害，又对施用人员毫无影响，是一种优良的农业园艺用农药。

以下对本发明进行详细的说明。

抗生素SP-120，SP-120A，SP-120B的制备

使用的微生物

用来生产本发明所述的抗生素SP-120，SP-120A及SP-120B的微生物是一种属于链霉菌属的菌种，其具有生产抗生素SP-120，SP-120A及SP-120B的能力。

链霉菌SP.SP-120（Streptomyces    SP.SP-120）（中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心的保藏号CGMCC0022）（以下简称为“SP-120菌株）就是其中一例。该菌株在与本申请相应的日本专利申请中被命名为“链霉菌SP.RK-120。该微生物具有上述特性，适于生产本发明所述的抗生素SP-120，SP-120A，SP-120B，因而能有效地使用于本发明所述的制备方法中。

上述“SP-120菌株”是在中华人民共和国福建省三明地区土壤中分离而得。分离采用常规土壤稀释法进行。即先在天冬素-葡萄糖琼脂上于28℃培养6天，挑取单菌落移至该培养基的斜面上。筛选的方法是在SP-120菌发酵后，取发酵液喷雾到植株上，然后在植株上接入致病菌，于温室内放置2～4天后检查结果，发现有显著的防治效果。这样分离筛选出来的“SP-120菌株”实质上是纯的。

SP-120菌株属于链霉菌属，它在培养基上发育状况及生理性质如下：

1.形态特征：

SP-120菌株在麦片-琼脂培养基，淀粉，酵母琼脂培养基（其组分如下所述）上能极其良好地发育，气生菌丝，孢子的附着很丰富，气生菌丝呈白色到淡灰色。其在蔗糖硝酸盐琼脂培养基、酵母麦芽琼脂培养基上的发育状况及气生菌丝、孢子的附着也都很好。在其它培养基，如在葡萄糖-天冬酰胺琼脂培养基，甘油-天冬酰胺琼脂培养基，淀粉-无机盐琼脂培养基，酪氨酸琼脂培养基，营养琼脂培养基，胨-酵母铁琼脂培养 基上也均能发育，但不充分。而在葡萄糖-天冬酰胺琼脂培养基，营养琼脂培养基，以及胨-酵母铁琼脂培养基上，该菌的气生菌丝的发育微弱或难以确认。一般地讲，可溶性色素的生成是很微弱的，仅能生产微黄色类色素。依靠酪氨酸琼脂培养基及胨-酵母铁琼脂培养基，则很难生成黑色素。基内菌丝在表面不呈现具有特征性的色调而呈微黄色或微褐色。气生菌丝呈直链状发育，再由这些直链状菌丝上分枝出呈强螺旋状的旋管，这就形成了长孢子锁。孢子近似于球形，长度在1微米以内，宽度约为0.5微米，球状部分的表面平滑。

在用糖类进行的碳源利用试验中，该菌株能很好地利用L-阿拉伯糖，D-果糖，棉子糖，乳糖，密二糖，其发育良好。在D-葡萄糖甘糖，肌醇，D-甘露醇中，虽然也能发育，但会有部分菌株生长较差。在D-木糖，鼠李糖中的发育不好，特别是在L-鼠李糖中艰难生成气生菌丝。

本菌株在葡萄糖-胨-明胶培养基上能发育，但不能使明胶液化;能完全胨化脱脂乳形成近于透明的液体;在淀粉-无机盐琼脂培养基上能促使淀粉强烈水解。

在用盐酸水解细胞壁时，用纸层析法检测细胞的氨基酸组分，可以发现L-二氨基庚二酸，这就表明了本菌株是属于链霉菌属的菌种。

2.在各种培养基上的性质

在接种后第三星期，观察菌株并记录结果如下，颜色按照“颜色名称描述词典”（Descriptive    color    names    dictionary）第4版的色名记号记述。

1）蔗糖硝酸盐琼脂培养基

生长    良好

气生菌丝的附着    良好

气生菌丝的颜色    2ba    灰白色（pearl）

基内菌丝的颜色    3lc    琥珀色（amber）

可溶性色素    3ga    木瓜黄（melon    yellow）

2）葡萄糖-天冬酰胺琼脂培养基

生长    不良

气生菌丝的附着    无

气生菌丝的颜色    不明

基内菌丝的颜色    5ca    浅红色（shell    pink）

可溶性色素    6ca    浅红色（shell    pink）

3）甘油-天冬酰胺琼脂培养基

生长    普通

气生菌丝的附着    不良

气生菌丝的颜色    7cb    暗浅红（cloud    pink）

基内菌丝的颜色    5pe    赤褐色（意terra    cotta）

可溶性色素    61/2gc灰珊瑚色（dust    coral）

4）淀粉-无机盐琼脂培养基

生长    普通

气生菌丝的附着    普通

气生菌丝的颜色    a    白色（white）

基内菌丝的颜色    3ca    深粉色（pearl    pink）

可溶性色素    无

5）酪氨酸琼脂培养基

生长    普通

气生菌丝的附着    普通

气生菌丝的颜色    b    亮灰色（light    grey）

基内菌丝的颜色    4pi    槲褐色（oak    brown）

可溶性色素    5ie    铜褐色（copper    tan）

6）营养琼脂培养基

生长    普通

气生菌丝的附着    无

气生菌丝的颜色    不明

基内菌丝的颜色    2ea    亮黄色（light    maize）

可溶性色素    2ea    亮黄色（light    maize）

7）酵母-麦芽琼脂培养基

生长    良好

气生菌丝的附着    良好

气生菌丝的颜色    a    白色（white）

基内菌丝的颜色    2ea    亮黄色（light    maize）

可溶性色素    无

8）麦片琼脂培养基

生长    良好

气生菌丝的附着    丰富

气生菌丝的颜色    c    亮灰色（light    grey）

基内菌丝的颜色    3ba    灰白色（pearl）

9）胨-酵母铁琼脂培养基

生长    普通

气生菌丝的附着    无

气生菌丝的颜色    不明

基内菌丝的颜色    2ea    亮黄色（light    maize）

可溶性色素    无

10）淀粉-酵母琼脂培养基＊

生长    良好

气生菌丝的附着    丰富

气生菌丝的颜色    a    白色（white）

基内菌丝的颜色    3pc    琥珀色（amber）

可溶性色素    3ca    深粉红（pearl    pink）

＊淀粉-酵母琼脂培养基的组份

可溶性淀粉    10克

酵母膏    1克

NZ氨基酸A    1克

琼脂    15克

水    1升    PH7.4

3.碳源的利用（普戈琼脂培养基）

碳源    发育状况＊

L-阿拉伯糖    ++

D-木糖    ±

D-葡萄糖    +

D-果糖    ++

蔗糖    +

肌醇    +

鼠李糖    ±

棉子糖    ++

D-甘露醇    +

乳糖    +++

密二糖    ++

＊发育状况

+++    发育非常好

++    发育良好

+    发育

±    稍发育

-    不发育

4.其它生理性质

合适温度    25～30℃

明胶    不液化

（葡萄糖-胨-明胶培养基）

淀粉水解    水解

（淀粉-无机盐琼脂培养基）

脱脂乳的液化    完全液化

黑色素的生成（酪氨酸琼脂

培养基及胨-酵母铁琼脂培    不生成

养基）

具有上述各性质的链霉菌属菌种的检索来自野野村氏的报告，即按野野村氏所著的“发酵工艺杂志”（Joural    of    Fermentation Technology）第5    卷2号所载的放线菌ISP458菌种分类法而记载。该分类法的名称为“458种链霉菌种类分类和鉴别的线索”Key    for    Classificat    ion    and    Identificat    ion    of    458    Species    of    the    Streptomyces    Included    in    ISP）。

本菌属于白色或灰色组属，其气生菌丝呈螺旋状，孢子的表面平滑而不形成黑色素。同时其内部和可溶性色素均不呈现显著的色调。对糖类中的鼠李糖和D-木糖的利用较差，但对其它的糖类而言，则大多数均可利用。能满足以上条件的菌种有生白链霉菌（Streptomyces    albofacience），因此，本菌属于S.生白链霉菌的一个近种。但新菌种SP-120（Streptomyces    SP.SP-120）与已知的生白链霉菌的不同点在于：

（1）在甘油-天冬素培养基上：

SP-120菌的背面为赤褐色，有灰褐色可溶性色素;

而S.生白链霉菌的背面无特征颜色，无可溶性色素。

（2）对糖类的利用：

SP-120菌可以稍利用鼠李糖，可利用蔗糖，并可很好地利用阿拉伯糖，棉子糖;

而S.生白链霉菌不可利用鼠李糖，可稍利用蔗糖，可利用阿拉伯糖，棉子糖。

SP-120菌的培养及SP-120，SP-120A，SP-120B的制取及提纯

用链霉菌属的上述抗生素生产菌，通过常规的抗生素生产方法，可以培养SP-120菌并制得本发明所述的抗生素SP-120，SP-120A，SP-120B。培养方式既可为液体培养也可为固体培养。但为了有利于工业性生产时的培养，宜将上述生产菌的孢子悬浮液或培养液接种到培养基上并进行通气搅拌培养。

对培养基中的营养源并无特殊的规定，可含有常用于微生物培养的碳源，氮源及其它营养源。其中碳源可为淀粉，糊精，甘油，葡萄糖，蔗糖，乳糖，肌醇，甘露醇等。氮源可为胨，大豆粉，肉膏，米糖，麦皮，尿素，玉米浆，铵盐，硝酸盐，以及其它有机或无机含氮化合物。对于其它营养源来讲，可适当添加一些无机盐类，例如，食盐，磷酸盐类及钾，钙，锌，锰，铁之类的金属盐，必要时也可添加些动，植，矿物油等作为消泡剂。

培养时的温度，时间等培养条件，并无严格的限制，以适于使用菌的发育为准，而以选择SP-120，SP-120A，SP-120B的产量最高的条件为好。例如，培养基的PH范围为4～9，以接近中性为好。培养温度为25℃至35℃。当然，包括培养组成物，培养基中氢离子的浓度，培养温度，搅拌等等所有这些培养条件，均应根据所使用的菌株的种类及外部条件等进行适当的调节，以获得最好的效果。

由上述所得的培养物出发，通过一些适当的方法就能制得SP-120，SP-120A及SP-120B。这些方法是常使用于提取代谢物的方法，例如，可利用SP-120，SP-120A，SP-120B与不纯物在溶解度，离子结合力，吸附亲和力及分子量等方面的差别进行提取。这些方法可单独使用，也可适当配合或反复使用。具体地讲，SP-120包括SP-120A以及SP-120B，它们大部分存在于培养滤液中。用丁醇反复提取培养液，或是用如Diaion    HP10之类的合成吸附剂进行吸附，然后再用50%的丙酰洗涤就可得到SP-120（其中含有SP-120A及SP-120B）的浓缩物。所得的浓缩物用硅胶进行反复柱层析，溶剂选用正丁醇-甲醇-水的混合溶液，调节它们的组分比率，即可达到色谱分离的目的。这样就得到两个区分，其中一个区分主要含SP-120A，另一个区分主要含SP-120B。对这两个区分，分别用凝胶过滤剂如葡萄糖凝胶LH-20等进行柱色谱，此时所用的溶剂以用与上述溶剂同一类系的为适宜。使用凝胶过滤进行进一步精制，即可分别获得白色粉末状的SP- 120A及SP-120B的精制品。

最后，采用高效液相色谱就能将SP-120A及SP-120B完全分离。充填剂选用Nucleosil 5C₁₈，溶剂为异丙醇-甲醇-水，并加有少量醋酸。

如此所制取的新抗生素SP-120A及SP-120B分别具有下述的理化性质。

SP-120A及SP-120B的理化性质。

1.熔点：

A：235～255℃分解呈褐色。

B：235～265℃分解呈褐色。

2.元素分析：

A：碳50.98%，氢7.11%，氮16.42%，硫3.55%，

B：碳50.91%，氢6.95%，氮16.12%，硫3.39%，

3.比旋度

A：[α]²⁵ _D-90° （C＝0.05，二甲亚砜）

B：[α]²⁵ _D-59° （C＝0.03，二甲亚砜）

4.紫外吸收光谱：

A：λ^{0.1N-HCl-MeOH} _max

220nm（E^1% _1cm186）峰肩（参见图1）

B：

λ^{0.1N-Hcl-MeOH} _max

220nm（E^1% _1cm293）峰肩（参见图2）

5.红外吸收光谱：按KBr法

A：3300，2903，2850，1655，1520，1460，1395，1382，1320，1280，1250，1215，1163，1100，1020，1002，900，840， 760cm

（参见图3）

B：3300，2900，2850，1650，1520，1435，1392，1370，1342，

1322，1285，1212，1185，1168，1100，1024，1004，958，903，846，825，765cm^-1

（参见图4）

6.溶解性：

SP-120A及SP-120B均不溶于甲醇，乙醇，丙酮，乙酸乙酯，氯仿，苯，正己烷，乙醚等有机溶剂;难溶于水;可溶于正丁醇-甲醇-水的混合液。

7.分子量：按FAB质谱

A：911

B：923

8.显色反应：

SP-120A及SP-120B均与过锰酸钾，茴香醛-硫酸，碘呈阳性。

9.物质颜色

SP-120A及SP-120B均为白色粉末。

10.薄层色谱（美国Merck公司制薄层板0.25m/m）：

纤维素

（溶剂按正丁醇∶甲醇∶水＝4∶1∶2）

Rf值

A：0.60

B：0.66

硅胶

（溶剂按正丁醇∶甲醇∶水＝4∶1∶2）

Rf值

A：0.51

B：0.51

11.酸性水解

在6N-HCl中于105℃加热水解20小时，在SP-120A中，能检测出甘氨酸，亮氨酸的各氨基酸，在SP-120B中能检测出甘氨酸和缬氨酸。

12.抗菌谱：

采用通常的琼脂平板稀释法，以最低抑制浓度（MIC）来表示。细菌使用肉汤琼脂培养基，霉菌使用马铃薯蔗糖琼脂培养基

MIC（mcg/ml）

A    B

金色葡萄球菌    12.5    12.5

（Staphylococcus    aureus）

草分枝杆菌    12.5    12.5

（Mycobacterium    phlei）

假单胞菌·铜绿菌    ＞100    ＞100

（Pseudomonas    aeruginosa）

枯草杆菌    25    12.5

（Bacilus    subtilis）

格链孢菌    12.5    12.5

（Alternaria    mali）

水稻稻瘟病    25    12.5

（Pyricularia    oryzae）

黄瓜炭疽病    12.5    12.5

（Collectotrichum    lagenarium）

黄瓜灰霉病菌    12.5    12.5

（Botoryt    is    cinerea）

镰孢菌·尖孢菌    50    25

（Fusarium    oxysporum）

葡萄晚腐病菌    25    25

（Glomeralla    cingurata）

旋孢菌    25    25

（Cochliobolus    miyabeanus）

抗丝核菌·茄镰孢菌    12.5    25

（Rhizoctonia    solani）

曲霉菌    50    50

（Aspergillus    oryzae）

作为与本发明的抗生素SP-120A及SP-120B相比较的，已知在分子中含有3～4%硫的肽类抗生素有：波单霉素（Bottormycin），（Enshumycin），放线菌白素（Actinoleukin），神户霉素（Kobenomycin），佐尔博霉素（Zorbomycin）及腐草霉素（Phleomycin）等等。但SP-120A及SP-120B与上述抗生素在紫外吸收光谱及抗菌活性方面有着明显的差异。因此可以得出结论，即本发明所述的抗生素SP-120A及SP-120B是属于未见诸于文献记载的新抗生素。

SP-120，SP-120A，SP-120B或它们的复合体的农业园艺用农药。

这里所说的SP-120A及SP-120B的复合体是指多少含有些SP-120A及SP-120B的浓缩物。该浓缩物是由合成吸附剂吸附上述培养滤液后，再用含水丙酮抽提而制得。该两种物质由于从一个培养物中同时制得，故能以复合体的形式作为有效成分进行使用。这在经济方面极 为有利，因而引人注目。当然也可以单独使用SP-120，SP-120A或SP-120B作为有效成分。

本发明所述的有效成分用于农业园艺用农药等制剂时，可同样使用该技术领域中已知农药所通用的固相载体，液相载体及乳化分散剂等制剂，并能配制成颗粒剂，粉剂，乳化剂，可湿性粉剂，片剂，油剂，喷雾剂，烟雾剂等任意的剂型。这些载体中固相载体可以是粘土，高岭土，皂土，酸性白土，硅藻土，碳酸钙，硝化纤维素，淀粉，阿拉伯胶等;波相载体可为甲醇，乙醇，丙酮，二甲基甲酰胺，乙二醇等。同时，在制剂中一般可适当添加些辅助剂，如高级醇的硫酸酯，聚氧化乙烯，烷基-烯丙基醚，烷基烯丙基聚乙二醇醚，烷基烯丙基无水山梨糖醇月桂酸酯，烷基烯丙基磺酸盐，季胺盐，聚烯化氧等。

一般而言，各制剂中有效成分的配比，在乳剂及可湿性粉剂中为10～90%;在粉剂及油剂等中为0.1～10%;当然，也可根据不同的使用目的而适当增减。

本发明的制剂还可与其它的杀菌剂，除草剂，杀虫剂，肥料物质，土壤改良剂等配合使用。

以下就本发明的制造，实施，试验事例作具体的说明，但并不意味着限定本发明。

其中，在实施例中的“比”为重量比。

制造例：

以葡萄糖2%，可溶性淀粉1%，肉汁浸膏0.1%，干燥酵母0.4%，大豆粉2.5%，食盐0.2%，磷酸二氢钾0.005%的配比制成培养基，将上述SP-120菌株（微生物储存号码CGMCC0022）接种于该培养基中，在28℃振荡培养96小时。取其培养滤液25升，于4升甲醛类树脂HP-10（三菱化成（株）制）层析柱中吸附出活性成分，用40升50%的丙酮提取，提取液在减压下浓缩至2升，过滤沉淀并水洗。然后以正丁 醇-甲醇-水（8∶1∶1）为溶剂平衡一根直径为50mm，长度为40cm的硅胶柱。用0.1    NHCl-MeOH（1∶8）的试剂溶解沉淀，并把溶解液加于柱顶，然后进行展开。正丁醇-甲醇-水的配比开始时为8∶1∶1，然后改为5∶1∶1，最后采用4∶1∶1。以每55ml为一计量，在最初No57～100里主要得到SP-120B，此后，在No101～123里主要得到SP-120A。

将这两个活性区分分别减压浓缩，冷冻干燥后分别得到产物990mg和170mg，此为粗制粉末。

把含有SP-120A的粗制粉末装入葡聚糖凝胶LH-20（瑞典，医药品公司制）层析柱中，该柱的直径为50mm，长度为90cm，是以正丁醇-甲醇-水（4∶1∶2）平衡而得。然后，用上述同一溶剂展开，以每10ml为一管，在No28～35管，主要含有SP-120A，将这些流出液减压浓缩，并经冷冻干燥得到76mg白色粉末。此后，用高效液相色谱对其进行分离，得到SP-120A和SP-120B。色谱柱选用核苷5C₁₈，直径为20mm，长度为30cm。溶液采用异丙醇-甲醇-水（2∶2∶6）并添加0.15%的醋酸。流速为6.0ml/分，压力为180kg/cm²，展开时间为30分钟时出现SP-120B，42分钟时出现SP-120A。收集SP-120A的部分，减压浓缩直至除尽异丙醇和甲醇时为止，然后冷冻干燥，得到白色粉末27mg。

SP-120B的粗制粉末同样也可采用葡聚糖凝胶LH-20柱层析及选用核苷5C₁₈的高效液相进行分离而制得SP-120B。收集SP-120B的部分，在减压下浓缩除去溶剂，经冷冻干燥后得到14.8mgSP-120B的白色粉末。

然后采用下述方法进行脱盐。

将SP-120A溶于正丁醇-甲醇-水（2∶1∶2）并加有0.15%醋酸的溶剂中，除去不溶物。边加水边减压蒸馏除去正丁醇和水，使醋酸的浓度保持在0.15%以下，然后冷冻干燥。此后，用正丁醇-甲醇-水（2∶1 ∶2）200ml使其溶解，减压浓缩至为10ml左右，过滤分出SP-120A沉淀并充分水洗，再用丙酮和乙醚洗涤干净后置于干燥器中干燥，即得到12.8mg纯SP-120A粉末。

以同样方法进行SP-120B的脱盐处理，也可得4.2mg粉末状纯品。

实施例1    可湿性粉剂

将10份SP-120A（或SP-120，SP-120B或复合体）与5份十二烷基磺酸钠，2份二苯甲烷-二磺酸钠-甲醛聚合物及83份陶土混合，粉碎，即得到100份制剂。

实施例2    乳剂

将8份SP-120A（或SP-120，SP-120B或复合体）与10份乙二醇，20份二甲基甲酰胺，10份烷基二甲苯氯化胺及52份甲醇混合溶解，即得到100份乳剂。

实施例3    粉剂

将0.2份SP-120A（或SP-120，SP-120B或复合体）与0.5份硬脂酸钙，50份滑石粉及49.3份陶土混合粉碎，即得100份粉剂。

实施例4    颗粒剂

将10份SP-120A（或SP-120，SP-120B，或复合体）与15份淀粉，72份皂土粉及3份硫酸十二烷基酯的钠盐混合粉碎，即得100份制剂。

试验例1

对黄瓜灰霉病的防治试验

将按实施例1所制成的可湿性粉剂稀释至所定的浓度，然后喷洒到播种后生育15天的黄瓜（品种：相横半白）幼苗上，并进行风干。

将黄瓜霉病菌（Botorytis    cinerea）置于土豆，葡萄糖琼脂培养基上培养，用BLB光进行照射使孢子诱发。将诱发后的孢子悬浮于10%葡萄糖和1%的酵母抽提溶液中。

药液干燥后，将黄瓜移至接种箱，将上述悬浮液用喷雾器进行喷雾接种，每10棵黄瓜幼苗约喷药10cc。

接种后的黄瓜幼苗置于恒温多湿的地方，4天后检查发病的情况。

防治效果按下述方法进行计算

发病指数    发病程度

0    不发病

1    仅有病斑

2    发病面积占10%以下

3    发病面积占10%以上至20%以下

4    发病面积占20%以上至30%以下

5    发病面积占30%以上至40%以下

6    发病面积占40%以上

防治效果＝（1- (处理区发病指数总和)/(对照区发病指数总和) ）×100

其结果如表1所示

表1

试验化合物    喷洒浓度（ppm）    防治效果（%）    药害

SP-120A    200    90    无

SP-120B    200    81    无

SP-120复合体＊    500    100    无

SP-120复合体＊    250    99    无

SP-120复合体＊    125    89    无

苯莱特1）    250    92    无

ロブラ-

2） 250 90 无

对照处理    -    0    -

＊其中含有有效成份约30%

1）1-丁胺甲酰基）-2-苯并咪唑氨基甲酸酯。

2）1-异丙基氨基甲酰基-3-（3，5-二氯苯基）乙内酰脲（50%）

试验例2

对黄瓜炭疽病的防治试验

把按实施例2所制成的乳剂稀释至所定的浓度，然后喷洒到播种后生育期为15天的黄瓜（品种：相横半白）幼苗上，进行风干。

将黄瓜炭疽病菌（Colletotrichum    lagenarium）置于土豆琼脂平板培养基上培养，并将生育后的孢子制成悬浮液（孢子浓度为一个视野[显微镜倍率×150]约200个）。

药液干燥后，将黄瓜幼苗移至接种箱内，以上述悬浮液用喷雾器进行喷雾接种，每10棵黄瓜幼苗约喷药10cc。接种后的黄瓜幼苗在湿度为100%的接种箱内放置24小时，然后移至自然光的温室内，4天后检查病斑数。各药剂处理区均使用10棵黄瓜幼苗。

防治效果按下述方法进行计算

防治效果＝1- (处理区病斑总数)/(对照区病斑总数) ×100

其结果如表2所示

表2

试验化合物    喷洒浓度（ppm）    防治效果（%）    药害

SP-120A    200    98    无

100    88    无

50    62    无

SP-120B    200    89    无

100    78    无

50    63    无

SP-120复合体＊    500    100    无

250    100    无

125    98    无

菌清3）    1000    90    无

对照处理    -    0    -

＊含有效成份约30%

3）四氯间苯二腈

试验例3

对稻纹枯病的防治试验

预先准备若干盆栽（每盆7棵，每区10盆）水稻（品种：十石）幼苗，在温室内培养至第五叶期。将按实施例1所制成的可湿性粉剂用甲醇及水稀释至所定的浓度，再用喷雾器按平均每盆约40ml的剂量进行喷洒。2小时后，将稻纹枯病菌（Pellicuaria    sasakii）的菌丛插入水稻的新叶鞘间进行接种，基叶都用塑料薄膜加以覆盖，然后于温室保温7天后测定水稻发病总病斑长度。防治效果按下式进行计算。

防治效果（%）＝1- (处理区的总病斑长度)/(对照区的总病斑长度) ）×100

其结果如表3所示

表3

试验化合物    喷洒浓度（ppm）    防治效果（%）    药害

SP-120A    200    95    无

SP-120B    200    92    无

SP-120复合体＊    500    100    无

250    100    无

150    90    无

田安4）    65    90    无

对照处理    -    0    -

＊含有效成份约30%

4）甲基胂酸铁铵（65%）

本发明的效果

根据以上试验的结果可以证明，本发明所述的农业园艺用农药，提供了一种新的农药。这种农药既对各种植物病害具有极高的防治效果，又具有高度的安全性并且无任何药害。

4.附图的说明

图1为本发明所述抗生素SP-120A的紫外吸收光谱图。图2为SP-120B的紫外吸收光谱图。图3为抗生素SP-120A的红外吸收光谱图。图4为抗生素SP-120B的红外吸收光谱图。

Claims (2)

1、一种农业园艺用新抗生素SP-120组合物的制备方法，其中所述的组合物的有效成分由新抗生素SP-120A和新抗生素SP-120B所组成，它们的理化性质如下：

新抗生素SP-120A

(1)熔点：于235～255℃分解呈褐色；

(2)元素分析：碳50.98%，氢7.11%，氮16.42%，硫3.55%；

(3)比旋度：[α]²⁵ _D=-90°(C=0.05，二甲亚砜)；

(4)紫外吸收光谱：λ^0.1 _maxN-Hcl-MeoH 220nm

(E^1% _1cm186) 峰肩

(5)红外吸收光谱：(KBr法)3300，2903，2850，1655，1520，1460，1395，1382，1280，1250，1215，1163，1100，1020，1002，900，840，760cm^-1

(6)溶解性：不溶于甲醇，乙醇，丙醇，乙酸乙酯，氯仿，苯，正己烷和乙醚；难溶于水；可溶于正丁醇-甲醇-水的混合液；

(7)分子量：(按FAB质谱)911；

(8)显色反应：与过锰酸钾，茴香醛-硫酸，碘呈阳性；

(9)物质颜色：白色粉末；

(10)酸性水解：加酸水解，得亮氨酸及甘氨酸；

(11)抗菌谱：对革兰氏阳性菌，抗酸性菌，阴性菌及植物病原菌呈抗菌活性；

2、新抗生素SP-120B

（1）熔点：235～265℃分解呈褐色;

（2）元素分析：碳50.91%，氢6.95%，氮16.12%，硫3.39%;

（3）比旋度：〔α〕²⁵ _D＝-59°（C＝0.03，二甲亚砜）;

（4）紫外吸收光谱：λ^{0.1N-Hcl-MevH} _max220nm

（5）红外吸收光谱：（KBr法）3300，2900，2850，1650，1520，1435，1392，1370，1342，1322，1285，1212，1185，1168，1100，1024，1004，958，903，846，825，765Cm^-1;

（6）溶解性：不溶于甲醇，乙醇，丙醇，乙酸乙酯，氯仿、苯，正己烷和乙醚;难溶于水;可溶于正丁醇-甲醇-水的混合液;

（7）分子量：（按FAB质谱）923;

（8）显色反应：与过锰酸钾，茴香醛-硫酸，碘呈阳性;

（9）物质颜色：白色粉末;

（10）酸性水解：加酸水解，得缬氨酸及甘氨酸;

（11）抗菌谱：对革兰氏阳性菌，抗酸性菌，阴性菌及植物病原菌呈抗菌活性;所述的方法包括培养链霉菌SP-120（Streptomyces  SP.SP-120，CGMCC0022），然后从培养物中分离提取所述的有效成分，最后将得到的有效成分与农药上适用的载体混合。

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