CN102239172A

CN102239172A - Hiv整合酶抑制剂

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Publication number: CN102239172A
Application number: CN2009801489012A
Authority: CN
Inventors: R.C.A.伊萨克斯; W.J.汤普森; P.D.威廉斯; 苏达世; S.文卡特拉曼; M.W.恩布里; T.E.费希尔; J.S.维; D.C.杜博斯特; R.G.鲍尔; E.J.蔡; 裴涛; S.L.特里斯
Original assignee: Merck Sharp and Dohme LLC
Current assignee: Merck Sharp and Dohme LLC
Priority date: 2008-10-06
Filing date: 2009-10-02
Publication date: 2011-11-09
Also published as: CR20110184A; TW201020251A; ECSP11010959A; BRPI0920605A8; WO2010042391A2; CA2738814A1; EA201170537A1; DOP2011000093A; AU2009302663B2; US20130338141A1; MA32764B1; NI201100069A; JP2012036207A; CA2738814C; JP5600311B2; PE20110344A1; US20100087419A1; WO2010042392A3; JP4880097B1; CO6382127A2

Abstract

式I的化合物是HIV整合酶抑制剂和HIV复制抑制剂：

Figure 2009801489012100004DEST_PATH_IMAGE002

(I),其中X¹、X²、Y、R^1A、R^1B、R²和R³如本文中定义。该化合物可用于HIV感染的预防或治疗和AIDS的预防、治疗或延迟发作或发展。该化合物以化合物本身（或其水合物或溶剂合物）或以可药用盐形式使用来对抗HIV感染和AIDS。该化合物及其盐可任选与其它抗病毒剂、免疫调节剂、抗生素或疫苗结合用作药物组合物中的成分。

Description

HIV整合酶抑制剂

对相关申请的交叉引用

本申请要求美国临时申请No. 61/195,271（2008年10月6日提交）的权益，其公开内容全部经此引用并入本文。

发明领域

本发明涉及某些2-{[(取代苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-10-基)-N,N',N'-三烷基乙二酰胺化合物、某些2-{[(取代苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4H-嘧啶并[1,2-d][1,4]氧氮杂

-10-基)- N N' N'-三烷基乙二酰胺化合物及其可药用盐、它们的合成和它们作为HIV整合酶抑制剂的用途。本发明的化合物及其可药用盐可用于预防或治疗HIV感染和用于AIDS的预防、延迟发作或发展、或治疗。

发明背景

逆转录病毒指定的人免疫缺陷病毒（HIV），特别是被称作HIV 1型（HIV-1）病毒和2型（HIV-2）病毒的菌株，是包括免疫系统的进行性破坏（获得性免疫缺陷综合征；AIDS）以及中枢和周围神经系统退化的复杂疾病的病原体。这种病毒之前被称作LAV、HTLV-III或ARV。逆转录病毒复制的一个共同特征是+前病毒DNA被病毒编码的整合酶插入宿主细胞基因组——人T-淋巴样和单核细胞样细胞中的HIV复制中的所需步骤。整合被认为由整合酶在三个步骤中介导：具有病毒DNA序列的稳定核蛋白复合体的组装；两个核苷酸从线型前病毒DNA的3’末端上裂解；在宿主靶位处作出的交错切口处前病毒DNA的凹进3’ OH末端的共价连接。该方法中的第四步骤——所得间隙的修复合成——可通过细胞酶实现。

HIV的核苷酸序列显示在一个开放阅读框中存在pol基因[Ratner, L.等人, Nature, 313, 277(1985)]。氨基酸序列同源性提供pol序列编码逆转录酶、整合酶和HIV蛋白酶的证据 [Toh, H.等人, EMBO J. 4, 1267 (1985)；Power, M.D.等人, Science, 231, 1567 (1986)；Pearl, L.H.等人, Nature, 329, 351 (1987)]。所有这三种酶已表明是HIV复制所必需的。

充当HIV复制抑制剂的一些抗病毒化合物已知是AIDS和类似疾病治疗中的有效药剂，包括逆转录酶抑制剂，如叠氮胸苷（AZT）和依法韦仑，和蛋白酶抑制剂，如茚地那韦和奈非那韦。本发明的化合物是HIV整合酶抑制剂和HIV复制抑制剂。体外整合酶和细胞中HIV复制的抑制是抑制在HIV感染细胞中由重组整合酶体外催化的链转移反应的直接结果。

下列参考资料可用作背景：

Kinzel等人, Tet. Letters 2007, 48(37): 第6552-6555页公开了作为HIV-1整合酶抑制剂的骨架的四氢吡啶并嘧啶酮的合成。

Ferrara等人, Tet. Letters 2007, 48(37), 第8379-8382页公开了可用作HIV整合酶抑制剂的六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-2-羧酰胺衍生物的合成。

Muraglia等人, J. Med. Chem. 2008, 51: 861-874公开了作为有力和口服生物有效的HIV-1整合酶抑制剂的双环嘧啶酮的设计和合成。

US2004/229909公开了具有整合酶抑制活性的某些化合物。

US 7232819和US 2007/0083045公开了作为HIV整合酶抑制剂的某些5,6-二羟基嘧啶-4-羧酰胺。

US 7169780、US 7217713和US 2007/0123524公开了作为HIV整合酶抑制剂的某些N-取代的5-羟基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酰胺。

US 7279487公开了可用作HIV整合酶抑制剂的某些羟基萘啶酮羧酰胺。

US 7135467和US 7037908公开了可用作HIV整合酶抑制剂的某些嘧啶羧酰胺。

US 7211572公开了作为HIV整合酶抑制剂的某些含氮稠环化合物。

US 7414045公开了可用作HIV整合酶抑制剂的某些四氢-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶羧酰胺、六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

羧酰胺和相关化合物。

WO 2006/103399公开了可用作HIV整合酶抑制剂的某些四氢-4H-嘧啶并氧氮杂

羧酰胺、四氢吡嗪并嘧啶羧酰胺、六氢嘧啶并二氮杂

羧酰胺和相关化合物。

US 2007/0142635公开了制备六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-2-羧酸酯和相关化合物的方法。

US 2007/0149556公开了具有HIV整合酶抑制活性的某些羟基嘧啶酮衍生物。

在US 7115601、US 7157447、US 7173022、US 7176196、US 7192948、US 7273859和US 7419969中也公开了可用作HIV整合酶抑制剂的各种嘧啶酮化合物。

US 2007/0111984公开了可用作HIV整合酶抑制剂的一系列双环嘧啶酮化合物。

发明概述

-10-基)-N,N',N'-三烷基乙二酰胺化合物和某些2-{[(取代苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4H-嘧啶并[1,2-d][1,4]氧氮杂-10-基)- N N' N'-三烷基乙二酰胺化合物。这些化合物（包括其水合物和溶剂合物），任选为可药用盐形式，可以以化合物本身或以药物组合物成分形式用于HIV整合酶的抑制、HIV感染的预防、HIV感染的治疗以及AIDS和/或ARC的预防、治疗和延迟发作或发展，无论是否与其它HIV/AIDS抗病毒剂、抗感染药、免疫调节剂、抗生素或疫苗联合。更特别地，本发明包括式I的化合物及其可药用盐：

(I),

其中：

X¹和X²各自独立地为H、卤素或C_1-3烷基，条件是X¹和X²至少一个不是H；

Y是CH₂或O；

R^1A是H或C_1-3烷基；

R^1B是H、C_1-3烷基或O-C_1-4烷基；

R²是H或C_1-3烷基；且

R³是C_1-3烷基；

且条件是：

（C）当Y是O时，R^1A和R^1B都是 H且R²是C_1-3烷基；和

（D）当Y是CH₂时，

（i）R²是H，R^1A是C_1-3烷基且R^1B是C_1-3烷基或O-C_1-4烷基；

（ii）R²是C_1-3烷基，R^1A是H，且R^1B是H；或

（iii）R²是H，R^1A是H，且R^1B是O-C_1-4烷基。

本发明还包括含有式I的化合物或其可药用盐的药物组合物。本发明还包括用于治疗AIDS、延迟AIDS的发作或发展、预防AIDS、预防HIV感染和治疗HIV感染的涉及式I的化合物的方法。

在随后的说明书、实施例和所附权利要求中进一步描述或显而易见本发明的其它实施方案、方面和特征。

附图简述

图1是实施例2中描述的化合物2A的晶形的X-射线粉末衍射图。

图2是实施例4-1中描述的化合物4A的晶形的X-射线粉末衍射图。

图3是实施例5-1中描述的化合物5A的晶形I的X-射线粉末衍射图。

图4是实施例5-1中描述的化合物5A的晶形II的X-射线粉末衍射图。

图5是实施例6-1中描述的化合物6A的晶形的X-射线粉末衍射图。

发明详述

本发明包括上式I的化合物（包括其水合物和溶剂合物）及其可药用盐。如下列实施例7至9中所示的结果所证实，这些化合物是野生型HIV整合酶（例如，HIV-1）及其突变株的有效抑制剂。某些化合物也已在动物模型中表现出有利的药物动力学。

本发明的第一实施方案（在本文中或称作“实施方案E1”）是式I的化合物（或者更简单地称作“化合物I”）或其可药用盐；其中：

X¹是F或CH₃；

X²是H、F或CH₃，且条件是：

（A）当X¹是F时，X²是H或CH₃，和

（B）当X¹是CH₃时，X²是F；

Y是CH₂或O；

R^1A是H或CH₃；

R^1B是H、CH₃或OCH₃；

R²是H、CH₃或CH₂CH₃；且

R³是CH₃或CH₂CH₃；

且条件是：

（C）当Y是O时，R^1A和R^1B都是H，R²是CH₃或CH₂CH₃，且R³是CH₃；和

（D）当Y是CH₂时，

（i）R²是H，R³是CH₃，R^1A是CH₃且R^1B是CH₃或OCH₃；

（ii）R²是CH_3，R³是CH₃，R^1A是H，且R^1B是H；或

（iii）R²是H，R³是CH₂CH₃，R^1A是H，且R^1B是OCH₃。

本发明的第二实施方案（在本文中或称作“实施方案E2”）是式II的化合物（或称作“化合物II”）或其可药用盐：

(II),

其中：

X¹是F或CH₃；

X²是H、F或CH₃，且条件是：

（A）当X¹是F时，X²是H或CH₃，和

（B）当X¹是CH₃时，X²是F；

Y是CH₂或O；

R^1A是H或CH₃；

R^1B是H、CH₃或OCH₃；且

R²是H、CH₃或CH₂CH₃；

且条件是：

（C）当Y是O时，R^1A和R^1B都是H且R²是CH₃或CH₂CH₃；和

（D）当Y是CH₂时，

（i）R²是H，R^1A是CH₃且R^1B是CH₃或OCH₃，或

（ii）R²是CH₃，且R^1A是H，且R^1B是H。

本发明的第三实施方案（实施方案E3）是式III的化合物（或“化合物III”）或其可药用盐：

(III),

其中：

X¹是F或CH₃；

X²是H、F或CH₃，且条件是：

（A）当X¹是F时，X²是H或CH₃，和

（B）当X¹是CH₃时，X²是F；且

R²是H。

在实施方案E3的一个方面中，R²是H。

本发明的第四实施方案（实施方案E4）是式I的化合物（或“化合物I”）或化合物II或化合物III或其可药用盐，其中X¹是F且X²是H或CH₃；所有其它变量如最初定义（即如发明概述中所定义）或如实施方案E1或实施方案E2或实施方案E3中所定义。在实施方案E4的一个方面中，X¹是F且X²是H。在实施方案E4的另一方面中，X¹是F且X²是CH₃。

本发明的第五实施方案（实施方案E5）是式I或式II或式III的化合物或其可药用盐，其中X¹是CH₃且X²是F；所有其它变量如最初定义或如实施方案E1或实施方案E2或实施方案E3中所定义。

本发明的第六实施方案（实施方案E6）是式II的化合物或其可药用盐，其中Y是CH₂；R²是H；R^1A是CH₃；且R^1B是CH₃或OCH₃；所有其它变量如实施方案E2中所定义。

本发明的第七实施方案（实施方案E7）是式II的化合物或其可药用盐，其中Y是CH₂；R²是CH₃；R^1A是H；R^1B是H；所有其它变量如实施方案E2中所定义。

本发明的第八实施方案（实施方案E8）是式II的化合物或其可药用盐，其中Y是O；R^1A和R^1B都是H；R²是CH₃或CH₂CH₃；所有其它变量如实施方案E2中所定义。

本发明的第九实施方案（实施方案E9）是式I的化合物，其选自：

,

,

,

,

,

,

及其可药用盐。

本发明的第十实施方案（实施方案E10）是式I或式II或式III的化合物或其可药用盐，其中该化合物是立体异构体纯的化合物。

本发明的第十一实施方案（实施方案E11）是式I的化合物或其可药用盐，其中该化合物是如实施例1至6任一中所述的化合物；即，该化合物是化合物1A、化合物1B、化合物2A、化合物2B、化合物2C、化合物2D、化合物3A、化合物3B、化合物4A、化合物4B、化合物4C、化合物4D、化合物5A、化合物5B、化合物5C、化合物5D、化合物6A或化合物6B。

本发明的第十二实施方案（实施方案E12）是式I的化合物或其可药用盐，其中该化合物是化合物1A、化合物2A、化合物2D、化合物4A、化合物4B、化合物4C、化合物5A、化合物5B或化合物6A。在此实施方案的一个方面中，该化合物是立体异构体纯的。各前述化合物是实施方案E12的单独方面。

本发明的第十三实施方案（实施方案E13）是式I的化合物或其可药用盐，其是：

。

在此实施方案的一个方面中，该化合物是化合物6A：

。

在此方面的一个特征中，该化合物是立体异构体纯的。

本发明的第十四实施方案（实施方案E14）是式I的化合物或其可药用盐，其是

。

在此实施方案的一个方面中，该化合物是化合物5A：

。

在此方面的一个特征中，该化合物是立体异构体纯的。

本发明的第十五实施方案（实施方案E15）是式I的化合物或其可药用盐，其是：

。

在此实施方案的一个方面中，该化合物是化合物2A：

。

在此方面的一个特征中，该化合物是立体异构体纯的。

本发明的第十六实施方案（实施方案E16）是式I的化合物或其可药用盐，其是：

。

在此实施方案的一个方面中，该化合物是化合物4A：

。

在此方面的一个特征中，该化合物是立体异构体纯的。

如本文所用和除非另行指明，关于本发明的化合物，术语“立体异构体纯”是指基本不含该化合物的其它立体异构体的化合物的一种立体异构体。例如，具有一个手性中心的立体异构体纯的化合物基本不含该化合物的相反对映体。具有两个手性中心的立体异构体纯的化合物基本不含该化合物的其它非对映体。立体异构体纯的化合物包含多于大约75重量%的该化合物的一种立体异构体和少于大约25重量%的该化合物的其它立体异构体（例如，多于大约80%的一种立体异构体和少于20%的其它立体异构体），优选多于大约90重量%的该化合物的一种立体异构体和少于大约10重量%的该化合物的其它立体异构体，更优选多于大约95重量%的该化合物的一种立体异构体和少于大约5重量%的该化合物的其它立体异构体，最优选多于大约97重量%的该化合物的一种立体异构体和少于大约3重量%的该化合物的其它立体异构体（例如，多于大约99%的一种立体异构体和少于1%的其它立体异构体）。可以使用标准分析方法测定该化合物和盐的纯度水平。如果使用多于一种分析方法且这些方法提供在给定样品中测得的立体异构体纯度水平的实验显著差异，则以提供最高纯度水平的方法为准。

要理解的是，无论是离析还是在混合物中，式I的化合物的所有异构体形式都在本发明的范围内。立体异构体纯的化合物仅代表本发明的一个方面。

本发明的第十七实施方案（实施方案E17）是化合物2A的晶形，其中通过下列实施例2中阐述的XRPD、DSC和TGA分析表征该晶形。在此实施方案的一个方面中，结晶化合物2A以包含在大约8.5、9.3、13.3、17.0、18.8和20.8度的2θ值（即在2θ值的反射）的使用铜K_α辐射（即辐射源是Cu K_α1和K_α2辐射的组合）获得的X-射线粉末衍射图为特征。在此实施方案和随后的任何类似实施方案中，术语“大约”被理解为修饰各个2θ值。在此实施方案的另一方面中，结晶化合物2A以包含在大约5.7、8.5、8.9、9.3、11.6、12.6、13.3、14.6、15.9、16.4、17.0、17.5、18.4、18.8、19.7、20.4、20.8、21.7、23.3、23.7、24.5、25.5、25.7、26.0、26.3、26.9、27.9、28.4、29.3、30.4、30.6、31.2、32.3、32.7、34.2、34.5、34.8、35.5、36.4、36.6、38.6和39.3度的2θ值的使用铜K_α辐射获得的X-射线衍射图为特征。

本发明的第十八实施方案（实施方案E18）是化合物2A的晶形，其中该晶形以图1中所示的由其X-射线衍射图推导的PDF迹线为特征。该PDF迹线提供规定该晶形的原子间距的指纹。可以以WO 2005/082050中描述的方式获得PDF迹线。在此实施方案的一个方面中，该晶形以与XRPD中在大约8.5、9.3、13.3、17.0、18.8和20.8度的2θ值对应的PDF迹线部分为特征。在此实施方案的另一方面中，该晶形以与XRPD中在大约5.7、8.5、8.9、9.3、11.6、12.6、13.3、14.6、15.9、16.4、17.0、17.5、18.4、18.8、19.7、20.4、20.8、21.7、23.3、23.7、24.5、25.5、25.7、26.0、26.3、26.9、27.9、28.4、29.3、30.4、30.6、31.2、32.3、32.7、34.2、34.5、34.8、35.5、36.4、36.6、38.6和39.3度的2θ值对应的PDF迹线部分为特征。

本发明的第十九实施方案（实施方案E19）是化合物4A的晶形，其中通过下列实施例4-1中阐述的XRPD、DSC和TGA分析表征该晶形。在此实施方案的一个方面中，结晶化合物2A以包含在大约6.1、10.4、12.9、13.7、19.4和22.9度的2θ值的使用铜K_α辐射获得的X-射线粉末衍射图为特征。在此实施方案的另一方面中，化合物4A的该晶形以包含在大约6.1、10.0、10.3、10.4、12.2、12.9、13.7、14.5、15.1、15.5、17.5、17.7、18.3、18.6、19.2、19.4、20.0、20.6、20.9、21.7、22.0、22.3、22.9、23.5、24.0、25.6、25.9、26.5、27.1、27.5、28.5、29.3、30.2、31.1、31.5、32.4、33.1、33.7、34.1、35.8和37.4度的2θ值的使用铜K_α辐射获得的X-射线粉末衍射图为特征。

本发明的第二十实施方案（实施方案E20）是化合物5A的第一晶形，其中通过下列实施例5-1中阐述的XRPD、DSC和TGA分析表征该晶形。在此实施方案的一个方面中，形式I结晶化合物5A以包含在大约8.4、8.6、18.0、20.5、20.8、25.2、26.1和27.2度的2θ值的使用铜K_α辐射获得的X-射线粉末衍射图为特征。在此实施方案的另一方面中，形式I结晶化合物5A以包含在大约8.4、8.6、10.4、14.8、16.0、16.8、18.0、19.5、20.5、20.8、23.0、24.5、25.2、26.1,和27.2度的2θ值的使用铜K_α辐射获得的X-射线粉末衍射图为特征。在此实施方案的另一方面中，形式I结晶化合物5A进一步以在封闭铝盘中在氮气下以10℃/分钟加热速率获取的DSC曲线中大约149℃的最高温度为特征。

本发明的第二十一实施方案（实施方案E21）是化合物5A的第二晶形，其中通过下列实施例5-1中阐述的XRPD、DSC和TGA分析表征该晶形。在此实施方案的一个方面中，形式II结晶化合物5A以包含在大约8.4、8.6、18.0、20.4、20.8、25.9、26.2和27.1度的2θ值的使用铜K_α辐射获得的X-射线粉末衍射图为特征。在此实施方案的另一方面中，形式II结晶化合物5A以包含在大约8.4、8.6、10.3、14.8、16.0、16.7、18.0、19.4、20.4、20.8、23.0、24.4、25.1、25.9、26.2和27.1度的2θ值的使用铜K_α辐射获得的X-射线粉末衍射图为特征。在此实施方案的另一方面中，形式II结晶化合物5A进一步以在封闭铝盘中在氮气下以10℃/分钟加热速率获取的DSC曲线中大约155℃的最高温度为特征。

本发明的第二十二实施方案（实施方案E22）是化合物6A的晶形，其中通过下列实施例6-1中阐述的XRPD、DSC和TGA分析表征该晶形。在此实施方案的一个方面中，结晶化合物6A以包含在大约10.6、14.2、17.4、18.8和20.4度的2θ值的使用铜K_α辐射获得的X-射线粉末衍射图为特征。在此实施方案的另一方面中，结晶化合物6A以包含在大约5.6、7.0、9.9、10.6、12.8、14.2、15.0、16.0、16.2、16.6、17.4、18.0、18.4、18.8、19.8、20.0、20.4、20.6、21.2、21.7、22.1、22.7、23.1、23.2、24.1、24.8、25.1、25.5、26.1、26.2、26.6、27.9、28.5、29.2、29.3、30.1、30.6、31.0、31.5、32.0、32.3、32.6、33.1、33.9、34.5和35.5度的2θ值的使用铜K_α辐射获得的X-射线粉末衍射图为特征。

本发明的实施方案E23至E26分别对应于如实施方案E19至E22中阐述的结晶化合物4A、形式I结晶5A、形式II结晶5A和结晶化合物6A，其中该晶形以图2、3、4和5中所示的由其X-射线衍射图推导的PDF迹线为特征。

术语“大约”在修饰物理性质等的值时是指例如可能通过该物质或组合物表征中涉及的典型测量、操作和取样程序；通过这些程序中的不经意误差；通过用于制备该物质或实施该程序的成分的制造、来源或纯度的差异等发生的数值量的变化。在本文描述的XRPD中以度计的2θ值的特定情况下，术语“大约”通常是指该值±0.1。

本发明的另一实施方案是如任一前述实施方案或方面中规定的化合物I或其可药用盐（例如，实施方案E2中的化合物II或实施方案E3中的化合物III），其中该化合物或其盐为基本纯的形式。本文所用的“基本纯”是指含有化合物式I或其盐的产物（例如，从提供该化合物或盐的反应混合物中离析的产物）的合适地至少大约75重量%，通常至少大约80重量%，优选至少大约90重量%（例如，大约90重量%至大约99重量%），更优选至少大约95重量%（例如，大约95重量%至大约99重量%或大约98重量%至100重量%），最优选至少大约97重量%（例如，大约99重量%至100重量%）由该化合物或盐构成。可以使用标准分析方法，如薄层色谱法、凝胶电泳、高效液相色谱法和/或质谱法测定该化合物和盐的纯度水平。如果使用多于一种分析方法且这些方法提供在给定样品中测得的纯度水平的实验显著差异，则以提供最高纯度水平的方法为准。100%纯度的化合物是通过标准分析方法测得的不含可检出杂质的化合物。本发明的化合物具有一个或两个不对称中心，因此可作为立体异构体的混合物存在。要理解的是，基本纯的化合物可以是立体异构体的基本纯的混合物或基本纯的单独的非对映体或对映体。基本纯的单独的非对映体或对映体也是立体异构体纯的。

本发明的其它实施方案包括下列：

（a）包含有效量的化合物I或其可药用盐和可药用载体的药物组合物。

（b）包含通过合并（例如，混合）有效量的化合物I或其可药用盐和可药用载体制成的产物的药物组合物。

（c）（a）或（b）的药物组合物，进一步包含有效量的选自HIV抗病毒剂、免疫调节剂和抗感染剂的抗HIV剂。

（d）（c）的药物组合物，其中该抗HIV剂是选自HIV蛋白酶抑制剂、非核苷HIV逆转录酶抑制剂、核苷HIV逆转录酶抑制剂、HIV整合酶抑制剂、HIV融合抑制剂和HIV进入抑制剂的抗病毒剂。

（e）一种组合，其是（i）化合物I或其可药用盐和（ii）选自HIV抗病毒剂、免疫调节剂和抗感染剂的抗HIV剂；其中式I的化合物和抗HIV剂各自以使该组合有效抑制HIV整合酶、有效治疗或预防HIV感染或有效治疗、预防或延迟AIDS发作或发展的量使用。

（f）（e）的组合，其中该抗HIV剂是选自HIV蛋白酶抑制剂、非核苷HIV逆转录酶抑制剂、核苷HIV逆转录酶抑制剂、HIV整合酶抑制剂、HIV融合抑制剂和HIV进入抑制剂的抗病毒剂。

（g）在需要其的对象中抑制HIV整合酶的方法，包括给予该对象有效量的化合物I或其可药用盐。

（h）在需要其的对象中治疗或预防HIV感染的方法，包括给予该对象有效量的化合物I或其可药用盐。

（i）（h）的方法，其中式I的化合物与有效量的至少一种选自HIV蛋白酶抑制剂、非核苷HIV逆转录酶抑制剂、核苷HIV逆转录酶抑制剂、HIV整合酶抑制剂、HIV融合抑制剂和HIV进入抑制剂的抗病毒剂联合给药。

（j）在需要其的对象中治疗AIDS、预防AIDS或延迟AIDS发作或发展的方法，包括给予该对象有效量的化合物I或其可药用盐。

（k）（j）的方法，其中该化合物与有效量的至少一种选自HIV蛋白酶抑制剂、非核苷HIV逆转录酶抑制剂、核苷HIV逆转录酶抑制剂、HIV整合酶抑制剂、HIV融合抑制剂和HIV进入抑制剂的抗病毒剂联合给药。

（l）在需要其的对象中抑制HIV整合酶（例如，HIV-1整合酶）的方法，包括给予该对象（a）、（b）、（c）或（d）的药物组合物或（e）或（f）的组合。

（m）在需要其的对象中治疗或预防HIV（例如HIV-1）感染的方法，包括给予该对象（a）、（b）、（c）或（d）的药物组合物或（e）或（f）的组合。

（n）在需要其的对象中治疗、预防AIDS（例如归因于HIV-1的AIDS）或延迟AIDS发作或发展的方法，包括给予该对象（a）、（b）、（c）或（d）的药物组合物或（e）或（f）的组合。

本发明还包括本发明的化合物或其可药用盐，其（i）用于（a）疗法（例如，人体）、（b）药学、（c）抑制HIV整合酶、（d）治疗或预防HIV感染或（e）治疗AIDS、预防AIDS或延迟AIDS发作或发展；（ii）用作（a）疗法（例如，人体）、（b）药学、（c）抑制HIV整合酶、（d）治疗或预防HIV感染或（e）治疗AIDS、预防AIDS或延迟AIDS发作或发展用的药物；或（iii）用于制备或制造（a）疗法（例如，人体）、（b）药学、（c）抑制HIV整合酶、（d）治疗或预防HIV感染或（e）治疗AIDS、预防AIDS或延迟AIDS发作或发展用的药物。在这些用途中，本发明的化合物可任选与一种或多种选自HIV抗病毒剂、抗感染剂和免疫调节剂的抗HIV剂联合使用。

本发明的另一些实施方案包括上述（a）-（n）中阐述的药物组合物、组合和方法和上一段中阐述的用途（i）（a）-（e）至（iii）（a）-（e），其中所用的本发明的化合物是如上所述的实施方案之一的化合物（例如，实施方案E2中的化合物II或实施例E3中的化合物III）或其一个方面。在所有这些实施方案等中，该化合物可任选以可药用盐形式使用。

本发明的另一些实施方案包括前述段落中阐述的各药物组合物、组合、方法和用途，其中所用的本发明的化合物或其盐是基本纯的。关于包含化合物I或其盐和可药用载体和任选一种或多种赋形剂的药物组合物，要理解的是，术语“基本纯”是指式I的化合物或其盐本身。

本发明的另一些实施方案包括上述（a）-（n）中阐述的药物组合物、组合和方法和上文阐述的用途（i）（a）-（e）至（iii）（a）-（e），其中感兴趣的HIV是HIV-1。因此，例如，在药物组合物（d）中，式I的化合物以有效对抗HIV-1的量使用，且抗HIV剂是选自HIV-1蛋白酶抑制剂、HIV-1逆转录酶抑制剂、HIV-1整合酶抑制剂、HIV-1进入抑制剂和HIV-1融合抑制剂的HIV-1抗病毒剂。

本领域普通技术人员会认识到，本发明的化合物可作为互变异构体存在，如下列：

无论是离析还是在混合物中，该化合物的所有互变异构体形式都在本发明的范围内。

本领域普通技术人员还要理解，本发明的化合物可形成水合物和/或溶剂合物。式I所含的化合物的化学稳定的水合物和溶剂合物及其可药用盐在本发明的范围内。

术语“烷基”是指具有在规定范围内的碳原子数的一价直链或支链、饱和脂族烃基。因此，例如，“C_1-4烷基”（或“C₁-C₄烷基”）是指正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基、正丙基和异丙基、乙基和甲基。作为另一实例，“C_1-3烷基”是指正丙基和异丙基、乙基和甲基。

术语“卤素”（或“卤代”）是指氟、氯、溴和碘（或称作氟代、氯代、溴代和碘代）。

“稳定”化合物是可制备和离析并可使其结构和性质在足以将该化合物用于本文所述的用途的时间内保持基本不变的化合物。

本发明的化合物可用于抑制HIV整合酶（例如，HIV-1整合酶）、预防或治疗HIV感染和预防、治疗后继病理状况，如AIDS或延迟其发作或发展。AIDS的预防、AIDS的治疗、AIDS的延迟发作或发展、HIV感染的预防或HIV感染的治疗被定义为包括，但不限于，治疗多种HIV感染病状：有症状和无症状的AIDS、ARC（AIDS相关综合征），和实际或潜在的HIV暴露。例如，本发明的化合物可用于治疗在怀疑通过如输血、体液交换、咬伤、意外针刺或术中接触患者血液之类的途径接触HIV后的HIV感染。

本发明的化合物可用于抗病毒化合物的筛选检测的准备和实施。例如，本发明的化合物可用于分离作为更有力抗病毒化合物的优异筛选工具的酶突变体。此外，本发明的化合物可用于例如通过竞争性抑制确定或测定其它抗病毒剂与HIV整合酶的结合位点。因此，本发明的化合物可以是为这些用途出售的商品。

本发明的化合物可以以可药用盐形式给药。术语“可药用盐”是指具有母体化合物的效力并且在生物学或其它方面不是不理想的（例如，对其接受者而言既无毒也在其它方面无害）的盐。合适的盐包括酸加成盐，其可例如通过将本发明的化合物的溶液与可药用酸溶液，如盐酸、硫酸、乙酸或苯甲酸混合形成。本发明的化合物带有酸性部分，因此其合适的可药用盐可包括碱金属盐（例如钠或钾盐）、碱土金属盐（例如钙或镁盐）和与合适的有机配体形成的盐，如季铵盐。而且，在存在酸（-COOH）或醇基的情况下，可以使用可药用酯改变该化合物的溶解度或水解特征。

关于本发明的化合物的术语“给药”及其变型是指向需要治疗或预防的个体提供该化合物或其盐（或水合物或溶剂合物）。当本发明的化合物与一种或多种其它活性剂（例如可用于预防或治疗HIV感染或AIDS的抗病毒剂）联合提供时，“给药”及其变型各自理解为包括同时或在不同时间提供该化合物和其它药剂。当联合药剂同时给药时，它们可以在单一组合物中一起给药或它们可以分开给药。

本文所用的术语“组合物”意在包括包含指定成分的产物以及通过合并指定成分而直接或间接产生的任何产物。

“可药用”是指该药物组合物的成分必须彼此相容并对其接受者无害。

本文所用的术语“对象”（或“患者”）是指作为治疗、观察或实验对象的动物，优选哺乳动物，最优选人。

本文所用的术语“有效量”是指在组织、系统、动物或人中引出研究人员、兽医、医生或其它临床医师追求的生物或医药响应的活性化合物或药剂的量。在一个实施方案中，有效量是用于减轻所治疗的疾病或病症的症状的“治疗有效量”。在另一实施方案中，有效量是用于预防要预防的疾病或病症的症状的“预防有效量”。该术语在本文中还包括足以抑制HIV整合酶并由此引出所追求的响应的活性化合物的量（即，“抑制有效量”）。当该活性化合物（即活性成分）以盐形式给药时，活性成分的量是指该化合物的游离酸或游离碱形式。

为了抑制HIV整合酶、预防或治疗HIV感染或预防或治疗AIDS或延迟AIDS发作或发展，任选为盐（或水合物或溶剂合物）形式的本发明的化合物可通过使活性剂与药剂作用位点接触的任何方式给药。它们可作为单独的治疗剂或治疗剂的组合通过可与药物联合使用的任何常规方式给药。它们可独自给药，但通常与根据所选给药途径和标准制药实践选择的药物载体一起给药。本发明的化合物可以例如，以含有有效量化合物和常规无毒可药用载体、辅助剂和赋形剂的药物组合物的单位剂量形式口服、肠道外（包括皮下注射、静脉内、肌肉内、胸骨内注射或输液技术）、通过吸入喷雾或经直肠给药。适于口服给药的液体制剂（例如悬浮液、糖浆、酏剂等）可根据本领域已知技术制备并可采用任何常用介质，如水、二醇、油、醇等等。适于口服给药的固体制剂（例如粉剂、丸剂、胶囊和片剂）可根据本领域已知技术制备并可采用如淀粉、糖、高岭土、润滑剂、粘合剂、崩解剂之类的固体赋形剂。肠道外组合物可根据本领域已知技术制备并通常采用无菌水作为载体和任选采用其他成分，如溶解助剂。注射液可根据本领域已知方法制备，其中载体包括盐溶液、葡萄糖溶液或含有盐水和葡萄糖的混合物的溶液。在Remington's Pharmaceutical Sciences, 第18版，A. R. Gennaro编辑, Mack Publishing Co., 1990和在Remington - The Science and Practice of Pharmacy, 第21版, Lippincott Williams & Wilkins, 2005中提供适用于制备本发明的药物组合物的方法和适用在所述组合物中的成分的进一步描述。

本发明的化合物可以以单剂量或分剂量在每天大约0.001至大约1000 mg/kg哺乳动物（例如人）体重的剂量范围内口服给药。一个优选剂量范围是以单剂量或分剂量每天口服大约0.01至大约500 mg/kg体重。另一优选剂量范围是以单剂量或分剂量每天口服大约0.1至大约100 mg/kg体重。为了口服给药，该组合物可以以含有大约1.0至大约500毫克活性成分，特别是1、5、10、15、20、25、50、75、100、150、200、250、300、400和500毫克活性成分的片剂或胶囊形式提供，以便依症状调节给予要治疗的患者的剂量。在一个实施方案中，本发明的化合物以便利形式（例如以在水性甲基纤维素中的溶液形式或以胶囊或片剂形式）以大约200毫克至大约800毫克的量每天一次或每天两次口服给药于成年人。用于任何特定患者的具体剂量水平和给药频率可变，并取决于各种因素，包括所用具体化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用长度、年龄、体重、一般健康、性别、饮食、给药模式和时间、排泄速率、药物组合、特定病症的严重性和经受治疗的宿主。

如上所述，本发明还涉及与可用于治疗HIV感染或AIDS的一种或多种抗HIV剂一起使用本发明的HIV整合酶抑制剂化合物。“抗HIV剂”是直接或间接有效地抑制HIV整合酶或HIV复制或感染所需的另一酶、治疗或预防HIV感染和/或治疗、预防AIDS或延迟AIDS发作或发展的任何药剂。要理解的是，抗HIV剂有效治疗、预防HIV感染或AIDS和/或由其引发或与其相关的疾病或病症或延迟其发作或发展。例如，本发明的化合物可以有效地在暴露前和/或暴露后与有效量的一种或多种可用于治疗HIV感染或AIDS的HIV抗病毒剂、免疫调节剂、抗病毒药或疫苗，如WO 01/38332的表1中或WO 02/30930的表中公开的那些联合给药。适合与本发明的化合物联合使用的HIV抗病毒剂包括，例如，下表A中所列的那些：

表A

didehydrodeoxythymidine：二脱氢脱氧胸苷

EI = 进入抑制剂；FI =融合抑制剂；InI =整合酶抑制剂；PI =蛋白酶抑制剂；nRTI = 核苷逆转录酶抑制剂；nnRTI = 非核苷逆转录酶抑制剂。该表中所列的一些药物以盐形式使用；例如硫酸阿巴卡韦、硫酸茚地那韦、硫酸阿扎那韦、甲磺酸奈非那韦。

要理解的是，本发明的化合物与抗HIV剂的组合范围不限于表A中所列和/或WO 01/38332和WO 02/30930中的上述引用表中所列的HIV抗病毒剂，原则上还包括与可用于治疗或预防HIV感染或AIDS的任何药物组合物的任何组合。HIV抗病毒剂和其它药剂通常以如业内报道的它们的常规剂量范围和方案用在这些组合中，包括例如，Physicians' Desk Reference, Thomson PDR, Thomson PDR, 第57版 (2003), 第58版 (2004), 第59版 (2005)和它们之后的版本中描述的剂量。这些组合中本发明的化合物的剂量范围与上文阐述的那些相同。

缩写包括下列：ACN = 乙腈；AcOH = 乙酸；Barg = 巴-表压；Bn = 苄基；Boc = 叔丁氧基羰基；(Boc)₂O = 碳酸二叔丁酯；BOP = 苯并三唑-1-氧基三-(二甲基氨基)鏻；DABCO = 1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷；DBA（或dba） = 二亚苄基丙酮；DBU = 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯；DCC = 二环己基碳二亚胺；DCE = 1,2-二氯乙烷；DCM = 二氯甲烷；DMAC = N,N-二甲基乙酰胺；DMAD = 二甲基乙炔二甲酯；DMAP =4-二甲基氨基吡啶；DMF = N,N-二甲基甲酰胺；DMPU = N,N'-二甲基丙烯脲；DMSO = 二甲亚砜；EDC = 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺；ES MS = 电喷雾质谱法；Et = 乙基；EtNH₂ = 乙胺；EtOAc = 乙酸乙酯；EtOH = 乙醇；FBS = 胎牛血清；GC = 气相色谱法；HDPE = 高密度聚乙烯；HMPA = 六甲基磷酰胺；HOAT = 1-羟基-7-氮杂苯并三唑；HPLC = 高效液相色谱法；HRMS = 高分辨质谱法；IPA = 异丙基醇；IPAc = 乙酸异丙酯；LAH = 氢化锂铝；LC-MS = 液相色谱法-质谱法；LDA = 二异丙基氨基化锂；Me = 甲基；MeOH = 甲醇；MeTHF = 2-甲基四氢呋喃；MsCl = 甲磺酰基（或mesyl）氯；MTBE = 甲基叔丁基醚；NBD = norbornadine；NBS = N-溴代琥珀酰亚胺；NMM = N-甲基吗啉；NMP = N-甲基吡咯烷酮；NMR =核磁共振；NOE = 核欧沃豪斯效应；OBD = 最佳床密度（色谱柱）；PTSA = 对甲苯磺酸；RB = 圆底(ed) (烧瓶)；TBAF = 四丁基氟化铵；TBS-Cl = 叔丁基二甲基甲硅烷基氯；t-BuOK = 叔丁醇钾；TEA = 三乙胺；TEMPO = 2,2,6,6-四甲基-1-哌啶-1-氧基；Tf = 三氟甲磺酸盐 (= 三氟甲磺酸盐)；TFA = 三氟乙酸；TFE = 2,2,2-三氟乙醇；THF = 四氢呋喃；TLC = 薄层色谱法；UV = 紫外线；XRPD = X-射线粉末衍射。

下列实施例仅用于举例说明本发明及其实践。这些实施例不应被视为限制本发明的范围或精神。在这些实施例中，“室温”或“环境温度”是指大约20℃至大约25℃的温度。通过异构体的对比NOE研究测定实施例2-5中各标题产物的相对立体化学。

实施例1

N-((10R)-2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-7,7-二甲基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-10-基)-N,N',N'-三甲基乙二酰胺(化合物1A)。

(1A)

N-((10S)-2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-7,7-二甲基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-10-基)-N,N',N'-三甲基乙二酰胺(化合物1B)。

(1B)

步骤1：2,2-二甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)丙酸甲酯

在冷却下向羟基特戊酸甲酯（50.0克，378毫摩尔）和一水合对甲苯磺酸（1.439克，7.57毫摩尔）在250毫升甲基-叔丁基醚中的搅拌的混合物中缓慢加入二氢吡喃（48.1毫升，568毫摩尔）。该混合物在室温下搅拌整夜，加入50毫升饱和NaHCO₃，将该混合物摇振并分离。有机层经MgSO₄干燥并浓缩。残留物通过使用330 g 柱，在己烷中的0%-5%乙酸乙酯的快速色谱法提纯产生清澈油形式的2,2-二甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)丙酸甲酯：¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.5 (s, 1H), 3.8-3.6 (m, 2H), 3.6 (m, 3H), 3.4 (s, 1H), 3.25 (m, 1H), 1.7 (m, 1H), 1.6-1.18 (m, 5H), 1.05 (m, 6H)。

步骤2：2,2-二甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)丙-1-醇

经由保持低于6℃的内部温度的加料漏斗向在冰浴中冷却至0℃的LiAlH₄（397毫升，397毫摩尔）在THF（250毫升）中的溶液中加入在THF（250毫升）中的2,2-二甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)丙酸甲酯（82克，378毫摩尔）。在添加完成时，使该反应升温至室温并搅拌整夜。该混合物在冰浴中冷却并用H₂O（16毫升，888毫摩尔）猝灭，随后在5分钟后，加入10 N NaOH（16毫升，160毫摩尔），在另外15分钟后，加入H₂O (48毫升，2664毫摩尔）。使该混合物搅拌30分钟，随后用THF漂洗过滤。将滤液浓缩并用甲苯共沸干燥。在真空下进一步干燥产生无色液体状的2,2-二甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)丙-1-醇：¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.58 (m, 1H), 3.85 (m, 1H), 3.6 (d, 1H), 3.5 (m, 2H), 3.4 (m, 1H), 3.2 (d, 1H), 2.8 (t, 1H), 1.8 (m, 2H), 1.6 (m, 4H), 0.85 (s, 6H)。

步骤3：2,2-二甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)丙醛

向在冰浴中冷却至0℃ ± 5℃的2,2-二甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)丙-1-醇（20克，106毫摩尔）、TEA（44.4毫升，319毫摩尔）在无水二氯甲烷（300毫升）中的搅拌溶液中一次性加入三氧化硫吡啶络合物（50.7克，319毫摩尔）在无水DMSO（300毫升）中的溶液。放热至27℃。移除浴并使该混合物在室温下搅拌20分钟，在该时间后通过TLC确定转化完全。该反应用225毫升饱和NaHCO₃猝灭，在旋转蒸发仪上浓缩以除去二氯甲烷并用 3 x 200毫升乙酸乙酯萃取。合并的萃取物用250毫升10%柠檬酸洗涤一次，经MgSO₄干燥并浓缩。真空干燥产生油状的2,2-二甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)丙醛。通过NMR，含有～40% DMSO: ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.6 (s, 1H), 4.6 (m, 1H), 3.8 (d, 1H), 3.5 (m, 1H), 3.38 (d, 1H), 1.8-1.4 (m, 6H), 1.06 (s, 3H), 1.04 (s, 3H)。

步骤4：(2E)-4,4-二甲基-5-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)戊-2-烯酸乙酯

在氮气下在25℃下向乙腈（200毫升）和氯化锂（13.66克，322毫摩尔）的混合物浆料中加入膦酰基乙酸三乙酯（64.5毫升，322毫摩尔）和随后DBU（32.4毫升，215毫摩尔）。在该添加过程中，反应温度升至33℃，随后经30分钟冷却回25℃。搅拌该混合物并冷却至0℃，与5毫升CH₃CN漂洗剂一起加入反应物1（20克，107毫摩尔）。在0℃下搅拌1小时后，使该混合物升温并在25℃下搅拌2小时，随后用250毫升MTBE和250毫升水稀释，分离，有机层用100毫升水洗涤。合并的水层用100毫升MTBE萃取且合并的有机萃取物用200毫升盐水洗涤和经MgSO₄干燥，随后浓缩。通过用在己烷中的0%至10% EtOAc洗脱的快速色谱法提纯产生无色油状的(2E)-4,4-二甲基-5-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)戊-2-烯酸乙酯: ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.0 (d, 1H), 5.8 (d, 1H), 4.58 (t, 1H), 4.2 (q, 2H), 3.8 (m, 1H), 3.6 (d, 1H), 3.5 (m, 1H), 3.16, (d, 1H), 1.8-1.5 (m, 6H), 1.3 (t, 3H), 1.06 (s, 3H), 1.05 (s, 3H)。

步骤4：4,4-二甲基-5-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)戊酸乙酯

在Parr上在45 psi氢气下摇振(2E)-4,4-二甲基-5-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)戊-2-烯酸乙酯（23克，90毫摩尔）和5%载铂碳（3克，14.65毫摩尔）在乙醇（200毫升）中的混合物5天（通过TLC确定完全转化: 10% EtOAc/己烷-无UV活性点）。滤除催化剂并浓缩滤液。真空干燥产生无色油状的4,4-二甲基-5-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)戊酸乙酯: ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.7 (t, 1H), 4.12 (q, 2H), 3.8 (m, 1H), 3.5 (m, 1H), 3.4 (d, 1H), 3.0, (d, 1H), 2.3 (m, 2H), 1.8 (m, 1H), 1.7-1.5 (m, 6H), 1.9 (s, 3H), 1.88 (s, 3H)。

步骤5：4,4-二甲基-5-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)戊醛

在氮气下向冷却至-78℃的4,4-二甲基-5-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)戊酸乙酯（11.3克，43.7毫摩尔）在甲苯（300毫升）中的溶液中缓慢加入在庚烷中的二异丁基氢化铝1.0M（53毫升，52.5毫摩尔），使内部温度保持低于-70℃。使该混合物冷却搅拌15分钟（TLC: 在己烷中的20% EtOAc）。该反应用MeOH（3.00毫升，161毫摩尔）萃取，升温至-10℃，用500毫升乙酸乙酯和500毫升饱和NaCl稀释。使该混合物升温并搅拌60分钟，形成凝胶。该凝胶混合物经硅藻土过滤并用750毫升乙酸乙酯洗涤。分离有机层，经MgSO₄干燥并浓缩。真空干燥产生清澈油状的4,4-二甲基-5-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)戊醛: ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.8 (s, 1H), 4.6 (t, 1H), 3.8 (m, 1H), 3.6 (m, 1H), 3.5 (d, 1H), 3.0, (d, 1H), 2.4 (m, 2H), 1.8 (m, 1H), 1.7-1.5 (m, 6H), 0.93 (s, 3H), 0.92 (s, 3H)。

步骤6：[1-氰基-4,4-二甲基-5-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)戊基]甲基氨基甲酸叔丁酯

在加塞烧瓶中搅拌粗制4,4-二甲基-5-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)戊醛、MTBE（15毫升）、甲胺盐酸盐（3.08克，45.7毫摩尔）、氰化钠（1.399毫升，45.7毫摩尔）和水（15.0毫升）的混合物24小时。TLC（10% EA/己烷）表明原材料完全消耗。该混合物用25毫升乙酸乙酯萃取，在旋转蒸发仪上浓缩。真空干燥产生清澈油。将该粗制氨基腈溶解在25毫升乙酸乙酯中并加入二碳酸二叔丁酯（10.49毫升，45.7毫摩尔）。在室温下搅拌一周末后，浓缩该混合物。通过用10%EtOAc/己烷洗脱的快速色谱法提纯提供[1-氰基-4,4-二甲基-5-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)戊基]甲基氨基甲酸叔丁酯: ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.7 (dd, 1H), 3.8 (t, 1H), 3.6 (m, 1H), 3.5 (dd, 1H), 3.0, (dd, 1H), 2.89, 2.88 (2s, 3H), 1.8 (m, 2H), 1.5 (m, 6H), 1.47 (s, 9H), 1.3 (m, 2H), 0.92 (s, 3H), 0.915 (s, 3H)。

步骤7：[1-[氨基(羟基亚氨基)甲基]-4,4-二甲基-5-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)戊基]甲基氨基甲酸叔丁酯

向[1-氰基-4,4-二甲基-5-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)戊基]甲基氨基甲酸叔丁酯（8.5克，23.98毫摩尔）在甲醇（5毫升）中的搅拌溶液中加入50% 羟胺（1.543毫升，25.2毫摩尔）。将该混合物加热至60℃ 3小时（LC-MS表明完全转化），冷却并浓缩。与甲醇共沸除去过量羟胺产生[1-[(Z)-氨基(羟基亚氨基)甲基]-4,4-二甲基-5-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)戊基]甲基氨基甲酸叔丁酯: MS (ES+): 388.26 (M+H)。

步骤8：(2-({[(1-氨基-2-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-5,5-二甲基-6-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)亚己基]氨基}氧基)丁-2-烯二酸二甲酯

在氮气下向冷却至-10℃的粗制[1-[氨基(羟基亚氨基)甲基]-4,4-二甲基-5-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)戊基]甲基氨基甲酸叔丁酯（98毫摩尔）在MeOH（800毫升）中的搅拌溶液中缓慢加入二甲基乙炔二甲酯（12.09毫升，98毫摩尔），使内部温度保持在-10℃。所得溶液在-10℃（在冷冻器中）或以下老化整夜，随后使其升温至25℃并搅拌30小时。该混合物用200毫升甲苯稀释并浓缩。真空干燥整夜产生棕色稠油，通过NMR，其含有甲苯，并且是异构体混合物。该粗产物不经进一步提纯即用于下一步骤: MS (ES+): 530.2 (M+H)。

步骤9：2-[1-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-4,4-二甲基-5-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)戊基]-5-羟基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸甲酯

将粗制(2-({[1-氨基-2-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-5,5-二甲基-6-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)亚己基]氨基}氧基)丁-2-烯二酸二甲酯（40.6克）溶解在邻二甲苯（100毫升）中，并在115℃ ± 5℃（在120℃下的油浴）下加热12小时。反应混合物在达到115℃后立即变深。48小时后的TLC和LC-MS检测表明一种异构体消耗，但留下大约10%的另一（次要）异构体。再继续加热48小时，此时观察到通过LC-MS测得的完全转化。将该混合物冷却至室温，用100毫升EtOAc稀释，经4英寸硅胶垫过滤，用EtOAc洗脱。将滤液减压浓缩。真空干燥产生棕色泡沫状的标题产物: MS (ES+): 498.1 (M+H)。

步骤10：2-{1-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-5-羟基-4,4-二甲基戊基}-5-羟基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸甲酯

将粗制2-[1-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-4,4-二甲基-5-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)戊基]-5-羟基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸甲酯（32克）和1克一水合对甲苯磺酸的混合物溶解在甲醇（100毫升）中并在室温下搅拌2小时。该反应用3毫升饱和NaHCO₃猝灭并浓缩。将残留物溶解在500毫升EtOAc中，用饱和NaHCO₃洗涤并经Na₂SO₄干燥。减压除去溶剂，产生棕色泡沫状的标题产物: MS (ES+): 314.1 (M+H)。

步骤11：[1-(4-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-5-羟基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-2-基)-5-羟基-4,4-二甲基戊基]甲基氨基甲酸叔丁酯

将2-{1-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-5-羟基-4,4-二甲基戊基}-5-羟基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸甲酯（5.11克，12.36毫摩尔）、1-(4-氟-3-甲基苯基)甲胺（2.064克，14.83毫摩尔）和TEA（3.45毫升，24.72毫摩尔）在2-丙醇（80毫升）中的混合物在氮气下加热至80℃ ± 2℃（在82℃下的油浴）整夜。浓缩该混合物，残留物溶解在100毫升iPrOAc中，用2 x 50毫升1N HCl、2 x 25毫升水、25毫升饱和NaHCO₃洗涤，并经MgSO₄干燥。该溶液用50毫升甲苯稀释并浓缩。真空干燥产生褐色泡沫: MS (ES+): 521.19 (M+H). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.3 (br s, 1H), 7.2 (m, 2H), 6.9 (t, 1H), 5.4 ( br s, 1H), 4.8 (d, 1H), 4.5 (m, 2H), 3.3 (m, 1H), 3.0, (s, 3H), 2.2 (s, 3H), 2.0 (m, 1H), 1.7 (m, 2H), 1.2 (s, 9H), 0.92 (s, 6H)。

步骤12：5-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-5-(4-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-5-羟基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-2-基)-2,2-二甲基戊基甲磺酸酯

向（5.45克，10.47毫摩尔）的冰冷溶液（T = 2℃ ± 2℃）中加入TEA（8.75毫升，62.8毫摩尔），随后逐滴加入MsCl（4.89毫升，62.8毫摩尔），使内部温度保持低于10℃。所得浆料在2℃ ± 2℃下老化2.5小时，随后将5N NaOH（14.66毫升，73.3毫摩尔）缓慢添加到该冷反应混合物中。随后将该反应混合物升温至80℃ ± 2℃（在83℃下的油浴）20小时。在冷却至50℃后，经1小时逐滴加入6N HCl（34.0毫升，68.0毫摩尔）直至pH为2.5-3.0（pH试纸和条带）。滤液用100毫升水稀释，用2N HCl调节pH至2（从～8）并用3 x 500毫升乙酸异丙酯萃取。合并萃取物，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩。将所得褐色固体产物真空干燥: MS (ES+): 599.1 (M+H)。

步骤13：(2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-7,7-二甲基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂-10-基)甲基氨基甲酸叔丁酯

将5-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-5-(4-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-5-羟基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-2-基)-2,2-二甲基戊基甲磺酸酯（7.8克，13.03毫摩尔）、碳酸铯（11克，33.8毫摩尔）和75毫升二氧杂环己烷的混合物加热至80℃整夜。在冷却至室温后，该混合物用100毫升EtOAc稀释，用水（150毫升）、饱和NaCl（50毫升）洗涤，经Na₂SO₄干燥并浓缩。将所得褐色固体产物真空干燥: MS (ES+): 503.3 (M+H)；¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.8 (br s, 1H), 7.6 (br s, 1H), 7.17 (m, 2H), 7.0 (m, 1H), 4.9 (m, 1H), 4.5 (m, 2H), 3.3 (dd, 1H), 2.8 (s, 3H), 2.3, (s, 3H), 1.6 (复合 m, 6H), 1.3 (s, 9H), 1.1 (s, 3H), 0.83 (s, 3H)。

步骤14：N-(4-氟-3-甲基苄基)-3-羟基-7,7-二甲基-10-(甲基氨基)-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-2-羧酰胺盐酸盐

用在二氧杂环己烷中的4N HCl（15.17毫升，60.7毫摩尔）处理(2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-7,7-二甲基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂-10-基)甲基氨基甲酸叔丁酯 (6.1克，12.14毫摩尔）。使该混合物在室温下搅拌1.5小时（通过LC-MS确定完全转化），随后浓缩。真空干燥产生褐色结晶固体状的N-(4-氟-3-甲基苄基)-3-羟基-7,7-二甲基-10-(甲基氨基)-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂-2-羧酰胺盐酸盐: MS (ES+): 403.2 (M+H)。

步骤15：N-(2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-7,7-二甲基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂-10-基)-N,N',N'-三甲基乙二酰胺

向N-(4-氟-3-甲基苄基)-3-羟基-7,7-二甲基-10-(甲基氨基)-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-2-羧酰胺盐酸盐（200 毫克，0.421毫摩尔）、HOAt（68.7 毫克，0.5毫摩尔）、N,N-二甲基草氨酸（74 毫克，0.631毫摩尔）和三乙胺（0.235毫升，1.683毫摩尔）在二氯甲烷（5毫升）中的混合物中加入EDC（224 毫克，1.262毫摩尔）。在室温下在氮气下搅拌该混合物整夜，用25毫升EtOAc稀释，用各10毫升饱和NaHCO₃溶液、H₂O和盐水洗涤，并经Na₂SO₄干燥。浓缩产生粗制标题产物，其通过制备反相色谱法提纯（梯度洗脱，在水/乙腈中的0.1% AcOH）产生固体状标题产物: HRMS (ES+): 502.2484 (M+H)；¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.35 (br s, 3H), 7.2 (m, 2H), 6.9 (t, J = 9 Hz, 1H), 5.34 (br s, 1H), 4.8 (d, J = 14 Hz, 1H), 4.5 (m, 21H), 4.5 (m, 2H), 3.3 (d, J = 14 Hz, 1H), 3.0 (s, 3H), 2.98, (s, 3H), 2.96 (s, 3H), 2.2 (s, 3H), 2.0 (m, 2H), 1.9 (m, 1H), 1.7 (s, 2H), 1.12 (s, 3H), 0.83 (s, 3H)。

在手性柱上拆分产生：

1A. N-((10R)-2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-7,7-二甲基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂-10-基)-N,N',N'-三甲基乙二酰胺。[α]_D ^23℃ = +67.6° (c = 0.5, MeOH)；HRMS (ES+): 502.2482 (M+H)；¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.35 (br s, 3H), 7.2 (m, 2H), 6.9 (t, J = 9 Hz, 1H), 5.34 (br s, 1H), 4.8 (d, J = 14 Hz, 1H), 4.5 (m, 21H), 4.5 (m, 2H), 3.3 (d, J = 14 Hz, 1H), 3.0 (s, 3H), 2.98, (s, 3H), 2.96 (s, 3H), 2.2 (s, 3H), 2.0 (m, 2H), 1.9 (m, 1H), 1.7 (s, 2H), 1.12 (s, 3H), 0.83 (s, 3H)。

1B. N-((10S)-2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-7,7-二甲基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-10-基)-N,N',N'-三甲基乙二酰胺。[α]_D ^23℃ = -72.4° (c = 0.5, MeOH)；HRMS (ES+): 502.2481 (M+H)；¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.35 (br s, 3H), 7.2 (m, 2H), 6.9 (t, J = 9 Hz, 1H), 5.34 (br s, 1H), 4.8 (d, J = 14 Hz, 1H), 4.5 (m, 21H), 4.5 (m, 2H), 3.3 (d, J = 14 Hz, 1H), 3.0 (s, 3H), 2.98, (s, 3H), 2.96 (s, 3H), 2.2 (s, 3H), 2.0 (m, 2H), 1.9 (m, 1H), 1.7 (s, 2H), 1.12 (s, 3H), 0.83 (s, 3H)。

实施例2

N-(2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-7-甲氧基-7-甲基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂-10-基)-N,N',N'-三甲基乙二酰胺的离析立体异构体

步骤1：2-甲氧基-2-甲基戊-4-烯酸甲酯

经由加料漏斗经35分钟在-48℃下向二异丙胺（2.34升，16.4摩尔）在THF（6升）中的溶液中加入正丁基锂（5.78升，14.5摩尔），经20分钟将所得混合物升温至-15℃，在-15℃下保持10分钟，随后冷却至-40℃。经由加料漏斗经1.75小时向该溶液中加入2-甲氧基丙酸甲酯（1.85千克，12.4摩尔）。在搅拌30分钟后，经由加料漏斗加入烯丙基溴（1.4升，16.4摩尔）。将所得溶液搅拌30分钟，经1小时升温至0℃，随后用3N HCl（7升）猝灭并用MTBE（2x4升）萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤，并真空浓缩。该粗制残留物不经进一步提纯即用于下一反应。

步骤2：叔丁基[(2-甲氧基-2-甲基戊-4-烯-1-基)氧基]二甲基硅烷

在使反应温度保持低于23℃的同时，经由加料漏斗向<10℃的LAH（丸粒，251.4克，6.29摩尔）在THF（6升）中的悬浮液中加入2-甲氧基-2-甲基戊-4-烯酸甲酯（1.9千克，粗制）。所得混合物在～5℃下搅拌1小时；随后用水（250毫升，13.9摩尔）、15% NaOH（250毫升，12.4摩尔）和水（750毫升，41.6摩尔）猝灭；随后用8升MTBE稀释；经500克MgSO₄干燥整夜；并通过真空过滤法过滤。所得滤饼用THF和MTBE洗涤。合并滤液并真空浓缩以提供粗制醇。

向TBS-Cl（4.06千克，26.1摩尔）在DCM（23升）中的溶液中加入DMAP（74克，0.606摩尔）和粗制醇（2.6千克，20.08摩尔）和TEA（3.94升，28.1摩尔）。将所得混合物在环境温度下搅拌整夜并用水（6升）猝灭。收集有机层，用1M HCl（6升）和用盐水（4升）洗涤，随后经MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩。用DCM洗脱的快速柱色谱法（Biotage 150 L，5千克二氧化硅）提供TBS醚衍生物。该材料不经进一步提纯即转入下一步骤。

步骤3：5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-甲氧基-4-甲基戊-1-醇

在使反应温度保持在<15℃的同时经由漏斗向<5℃的叔丁基 [(2-甲氧基-2-甲基戊-4-烯-1-基)氧基]二甲基硅烷（2.45千克，10.04摩尔）在THF（3.5升）中的溶液中加入在THF中的BH₃（1M溶液，11.05升，11.05摩尔）。将该反应混合物搅拌30分钟并用水（11.75升，652摩尔）猝灭。向该搅拌的混合物中加入四水合过硼酸钠（4.64千克，30.2摩尔）并在环境温度下搅拌该混合物整夜。随后过滤该反应混合物，滤饼用14升MTBE洗涤。合并的有机层用盐水/水（7L/3L）洗涤。用MTBE（14升）萃取水层。合并的有机层相继用18.75升5%硫代硫酸钠水溶液/盐水/水（10L/5L/3.75L）洗涤，随后真空浓缩以提供粗制材料。用在庚烷中的0%至100% DCM、随后在DCM中的1%至50% EtOAc洗脱的快速柱色谱法（多道）提供所需醇。¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 3.65-3.59 (m, 2 H)；3.47 (dd, J = 23.9, 10.1 Hz, 2 H)；3.24 (s, 3 H)；2.21-2.07 (m, 1 H)；1.63-1.54 (m, 4 H)；1.05-0.70 (m, 9 H)；0.04 (s, 6H)。

步骤4：5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-甲氧基-4-甲基戊醛

向碳酸氢钠（627克，74.6摩尔）和溴化钾（672克，56.5摩尔）在水（20升）中的溶液中加入5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-甲氧基-4-甲基戊-1-醇（3.5千克，11.2摩尔）、DCM（10升）、TEMPO（17.6克，113摩尔）。将所得混合物冷却至<5℃并在保持反应温度<5℃的同时逐份经漏斗加入NaOCl（13%溶液，总共6.7升，14.6摩尔）。搅拌该混合物 6小时，升温至环境温度。收集有机层。用4升DCM萃取水层。合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤，并真空浓缩。粗制材料，4.2千克，不经进一步提纯即用于下一步骤。¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 9.75 (t, J = 1.8 Hz, 1 H)；3.43 (q, J = 10.4 Hz, 2 H)；3.17 (s, 3H)；2.43 (t, J = 1.8 Hz, 2H)；2.02-1.65 (m, 2 H)；0.99-0.71 (s, 9H)；0.14 (s, 6H)。

步骤5：5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-1-氰基-4-甲氧基-4-甲基戊基)甲基氨基甲酸叔丁酯

在使反应温度保持在15℃的同时经10分钟向甲胺盐酸盐（0.83千克，12.34摩尔）在水（14.66升）中的溶液中加入二氧杂环己烷（24.43升）和5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-甲氧基-4-甲基戊醛（粗制，2.9千克，11.22摩尔）和NaCN（0.605千克，12.34摩尔）。将反应混合物搅拌整夜，随后加入NaCl（1.7千克）并分层。用EtOAc（2x4升）萃取水层。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以提供5.63千克（>100%）粗制材料。经由加料漏斗经5分钟向在6℃下的该粗制残留物在EtOAc中的溶液（20升）中加入在1.5升EtOAc中的二碳酸二叔丁酯（2.57千克，11.78摩尔）。将反应混合物在15℃下搅拌整夜并真空浓缩。用在庚烷中的0至30% EtOAc洗脱的快速柱色谱法提供所需产物。

步骤6：{5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-1-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-4-甲氧基-4-甲基戊基}甲基氨基甲酸叔丁酯

在30℃下向(5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-1-氰基-4-甲氧基-4-甲基戊基)甲基氨基甲酸叔丁酯（4.37千克，10.91摩尔）在MeOH（28升）中的溶液中加入羟胺水溶液（50%在水中，1.2升，19.63摩尔）。将所得混合物加热至40℃整夜，随后冷却并真空浓缩。将该粗制残留物溶解在1.5升甲苯中，减压浓缩并真空干燥。该粗制材料不经进一步提纯即用于下一步骤。LC-MS: 434.3。

步骤7：2-(1-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-甲氧基-4-甲基戊基)-5-羟基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸甲酯

在使反应温度保持低于8℃的同时，经40分钟向0℃的{5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-1-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-4-甲氧基-4-甲基戊基}甲基氨基甲酸叔丁酯（4.17千克，96.18摩尔）在MeOH（26升）中的溶液中加入二甲基乙炔二甲酯（1.3升，10.7摩尔）。将该反应混合物加热至30℃整夜。追加二甲基乙炔二甲酯（总共0.454升，3.7摩尔）。将反应混合物在30℃下搅拌整夜，冷却，真空浓缩，并从二甲苯中浓缩以提供所需二酯衍生物。LC-MS: 576.2。

将二酯衍生物（4.15千克，7.21摩尔）在二甲苯（24升）中的溶液在140℃下加热20小时，随后冷却，用4升庚烷稀释该反应混合物，并经Celite 545垫过滤。先用庚烷，随后用100% EtOAc 60分钟，和最后用含1%乙酸的EtOAc洗脱的该滤液的快速色谱法（Biotage Flash Si 150L, 5.0千克二氧化硅）提供标题产物。LC-MS: 544.1。

步骤8：[1-(4-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-5-羟基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-2-基)-5-羟基-4-甲氧基-4-甲基戊基]甲基氨基甲酸叔丁酯

向2-(1-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-甲氧基-4-甲基戊基)-5-羟基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸甲酯（1.73千克，5.11摩尔）在2-丙醇（10.23升）中的溶液中加入4-氟-3-甲基苄基胺（0.854千克，6.14摩尔）。将所得混合物加热至75℃整夜，随后冷却并真空浓缩。残留物用EtOAc（8升）稀释并用10%柠檬酸水溶液（5升）洗涤。过滤除去白色固体。用EtOAc (2x2L)萃取水层。合并的有机层用50%饱和碳酸氢钠（1x5L）、和盐水（1x5L）洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩以提供粗制酰胺。LC-MS: 651.1。

向在25℃下的粗制酰胺（1.75千克，2.69摩尔）在THF（0.75升）中的溶液中加入TBAF（1M在THF中，7.26升，7.26摩尔）和粉状活化3?分子筛（500克）。将反应混合物在25℃下旋转整夜，真空浓缩，随后追加TBAF（1M在THF中，1.076升，1.076摩尔）和粉状活化3?分子筛（300克）。将反应混合物在30℃下旋转整夜，随后过滤以除去分子筛。用MeOH（3升）洗涤滤饼并将滤液真空浓缩。将残留物溶解在6升DCM中，用30%饱和NaHCO₃ (4x4L)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩以提供粗制标题产物，其不经进一步提纯即用于下一步骤。LC-MS: 537.1。

步骤9：(2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-7-甲氧基-7-甲基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-10-基)甲基氨基甲酸叔丁酯

在使反应温度保持低于5℃的同时经45分钟向0℃的[1-(4-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-5-羟基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-2-基)-5-羟基-4-甲氧基-4-甲基戊基]甲基氨基甲酸叔丁酯（1.44千克，2.68摩尔）在无水乙腈（5.37升）中的溶液中逐滴加入TEA（1.87升，13.42摩尔）和甲磺酰氯（0.836升，10.73摩尔）。将所得混合物在0℃下搅拌14小时，用30%饱和NaHCO₃（10升）稀释，并用MTBE（4x2L）萃取。合并的有机层用5%柠檬酸和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，并真空浓缩以提供粗制甲磺酸酯。LC-MS: 670.1 (M+1-Boc)。

向来自前一步骤的粗制甲磺酸酯（1.53千克，1.985摩尔）在DMF（7.94升）中的溶液中加入Cs₂CO₃（2.59千克，7.94摩尔）。将反应混合物加热至100℃ 15小时，随后冷却并真空浓缩。该残留物用EtOAc（4升）稀释并用10%柠檬酸酸化至pH 4。分离层。用EtOAc (3x2L)萃取水层。合并的有机层用50%盐水（10升）和盐水（5升）洗涤，经干燥Na₂SO₄，过滤，并真空浓缩。该粗制标题产物不经进一步提纯即用于下一反应。LC-MS: 519.1。

步骤10：10-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-7-甲氧基-7-甲基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-3-基甲磺酸酯

在15℃下向(2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-7-甲氧基-7-甲基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-10-基)甲基氨基甲酸叔丁酯（1.029千克，1.98摩尔）在无水乙腈（8升）中的溶液中加入MsCl（0.27升，3.47摩尔）。将反应混合物在-60℃下搅拌1小时，用EtOAc（4升）、硫酸氢钾（1.08千克，7.94摩尔，在8升H2O中）、4升盐水和6升EtOAc稀释。收集有机层并用盐水（2x5L）洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，并真空浓缩。将该粗制残留物溶解在DCM（1.5升）和庚烷（1升）中并过滤除去固体。将滤液浓缩并通过快速柱色谱法（Biotage 150L, 5千克二氧化硅）提纯，用在DCM中的50% 庚烷，随后用100%DCM，最后用在DCM中的12%丙酮洗脱，产生所需甲磺酸酯。LC-MS: 597.2。

步骤11：N-(2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-7-甲氧基-7-甲基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-10-基)-N,N',N'-三甲基乙二酰胺

在0℃下向10-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-7-甲氧基-7-甲基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-3-基甲磺酸酯（0.291千克，0.488摩尔）在EtOAc（3.2升）中的悬浮液中鼓入HCl（g）直至饱和。将反应混合物在0℃下搅拌1小时，升温至15℃ 15分钟，随后冷却至0℃并在0℃下搅拌2小时。该反应混合物用氮气吹扫20分钟并真空浓缩。该残留物从EtOAc（1.5升）中浓缩两次以除去HCl并用1升EtOAc和500毫升MTBE结晶。过滤提供浅褐色固体，其用500毫升1:1 EtOAc/MTBE，接着 1升MTBE漂洗。该固体在50℃下真空干燥30分钟以提供HCl盐。LC-MS: 497.1。

在环境温度下向HCl盐（197.9克，371摩尔）在DCM（2升）中的溶液中加入N,N-二甲基草氨酸（87克，743摩尔）、EDC（157克，817摩尔）和HOAt（50.5克，371摩尔）。将该反应混合物冷却至9℃。经2分钟向该冷却溶液中加入N-甲基吗啉（0.204升，18.56摩尔）。追加N,N-二甲基草氨酸（21.74克，186摩尔）、EDC（36.6克，189摩尔）和HOAT（25.3克，186摩尔）。所得混合物用H₂O（2升）和盐水（1升）稀释。分离层。用DCM（1升）萃取水层。合并的有机层用50%盐水（2x2L）洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，并真空浓缩。产物从DCM中结晶。该结晶混合物用乙酸异丙酯稀释。过滤提供白色固体，其在真空炉中在30℃下干燥。LC-MS: 596.2。

向甲磺酸酯产物（148.9克，250毫摩尔）在2-丙醇（1.5升）中的溶液中加入1M NaOH（375毫升，375毫摩尔）。所得混合物在不加热的情况下声处理。在3小时后，追加1M NaOH（125毫升，125毫摩尔），该混合物在不加热的情况下声处理1小时。将反应混合物过滤并真空浓缩。通过添加1M HCl（500毫升，500毫摩尔），使该粗制材料结晶，过滤。滤饼用50% EtOH/H₂O和EtOH洗涤，随后在50℃下真空干燥18小时。该混合物通过手性SFC提纯（AD-H柱，40%IPA，样品以60毫克/毫升溶解在1:1氯仿:IPA中，1毫升注射，50毫升/分钟，周期时间: 3.5分钟）：

化合物2A - 第二洗脱峰: 7-OMe反式连接到10-酰胺侧链上，测得下述绝对立体化学，LC-MS: M + 1 = 518.2。HR MS ESI: M + 1理论518.2409, 观察值518.2436。¹H NMR (399 MHz, CDCl₃): δ 12.20 (s, 1 H)；9.45-9.31 (m, 1 H)；7.23 (dd, J = 7.5, 2.1 Hz, 1 H)；6.95-6.88 (m, 1 H)；5.17 (d, J = 14.1 Hz, 1 H)；4.56 (dd, J = 14.5, 6.6 Hz, 1 H)；4.46 (dd, J = 14.5, 6.3 Hz, 1 H)；3.39-3.29 (m, 4 H)；3.03 (s, 3 H)；3.00 (s, 3 H)；2.98 (s, 3 H)；2.24 (d, J = 1.9 Hz, 3 H)；2.22-2.16 (m, 1 H)；2.00-1.90 (m, 3 H)；1.12 (s, 3 H)。

化合物2B - 第三洗脱峰: 7-OMe反式连接到10-酰胺侧链上，下述绝对立体化学, LC-MS: M = 1 = 518.2。HR MS ESI: M + 1理论518.2409，观察值518.2435。¹H NMR与第二洗脱峰相同。

化合物2C - 第四洗脱峰: 7-OMe顺式连接到10-酰胺侧链上，未测定绝对立体化学，LC-MS: M + 1 = 518.2。HR MS ESI: M + 1理论518.2409，观察值518.2436。¹H NMR与第一洗脱峰相同。

化合物2D - 第一洗脱峰: 7-OMe顺式连接到10-酰胺侧链上，未测定绝对立体化学，LC-MS: M + 1 = 518.2, HR MS ESI: M + 1理论518.2409，观察值518.2437。¹H NMR (399 MHz, CDCl₃): δ 12.10 (s, 1 H)；9.28 (s, 1 H)；7.22 (d, J = 7.5 Hz, 1 H)；6.97-6.87 (m, 1 H)；5.35 (s, 1 H)；5.27 (dd, J = 14.9, 2.0 Hz, 1 H)；4.58 (dd, J = 14.5, 6.6 Hz, 1 H)；4.49-4.40 (m, 1 H)；3.36 (d, J = 14.8 Hz, 1 H)；3.20 (s, 3 H)；3.04-2.97 (m, 10 H)；2.24 (s, 3 H)；2.16 (d, J = 15.0 Hz, 2 H)；1.88 (d, J = 13.2 Hz, 1 H)；1.81-1.70 (m, 1 H)；1.46-1.24 (m, 3 H)。

结晶化合物2A

制备

将由上述色谱分离获得的非晶化合物2A材料溶解在完全溶解所需的最小量的沸腾纯乙醇中，并经槽纹滤纸过滤。使该热溶液缓慢冷却至环境温度，在此过程中从溶液中结晶出细针晶。将冷却的结晶混合物老化3小时，过滤分离该结晶化合物，用10毫升冰冷纯乙醇洗涤，并在真空下干燥。

表征

在带有PW3050/60控制台的Philips Analytical X’Pert PRO X-射线衍射系统上使用4至40度2θ (2 theta)的连续扫描产生结晶化合物2A的X-射线粉末衍射（XRPD）图。使用铜K-Alpha 1 (K_α1)和K-Alpha 2 (K_α2)辐射作为源。实验在环境条件下运行。参考2θ值为28.443度的硅标注衍射峰位置。该XRPD图显示在图1中。XRPD图中的2θ值和相应d-间距包括下列：

表2A

还用TA Instruments DSC Q 1000差示扫描量热计（DSC）在氮气氛中在敞口铝盘中以10℃/分钟的加热速率从25℃到350℃分析结晶化合物2A。DSC曲线显示吸热，具有197℃的开始温度和198℃的峰值温度。焓变化为84 J/g。该吸热被认为归因于熔融。

用TA Instruments TGA Q 500在氮气下以10℃/分钟的加热速率从25℃到350℃进行结晶化合物的热重分析（TGA）。TG曲线显示最多到100℃的0.21重量%的重量损失，表明不存在水合水和溶剂化溶剂。

在如上所述制成的结晶化合物2A上进行化合物2A的X-射线晶体学研究。使用受Oxford Diffraction CrysAlis Pro软件控制的来自Oxford Diffraction的CCD-基衍射计（辐射源：Enhance-Ultra Cu，检测器型号: Ruby）进行该研究。在100 K下进行使用Cu辐射的数据收集以限制热运动和动态无序以及改进衍射测量。所选晶体是总试样的代表。在100K下的晶体数据：

a = 5.49010(12) ? α = 90.00° V = 2467.40(11) ?³

b = 20.4635(6) β = 90.00 空间群 = P2₁2₁2₁, #19

c = 21.9624(6) γ = 90.00 Z = 4

测量总共20038个反射至0.84 ?^-1的分辨率，其产生4297个独特反射。使用所有4297个反射，使用SHELXL软件的精细化以R ₁ = 5.04%和wR ₂ = 13.6%结束。通过来自该分子中的6个氧原子的反常色散测得的C7和C10（见下列结构）处的绝对构型都是R。使用精细化的Flack参数-0.1(2)和Hooft参数-0.05(4)（两者都证实绝对构型的选择）进行反常色散效应的分析。相应地，化合物2A是N-((7R, 10R)-2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-7-甲氧基-7-甲基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-10-基)-N,N',N'-三甲基乙二酰胺。

考虑到指定给化合物2A的立体化学，通过排除过程，化合物2B是N-((7S, 10S)-2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-7-甲氧基-7-甲基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-10-基)-N,N',N'-三甲基乙二酰胺。

实施例3-1

外消旋-反式-N-(2-{[(3-氟-4-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-6-甲基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-10-基)-N,N',N'-三甲基乙二酰胺(化合物3A)

和

步骤1：6-甲基四氢-2H-吡喃-2-醇

将二异丁基氢化铝在二氯甲烷中的溶液（1M，420毫升）经1小时缓慢添加到δ-己内酯（40克，350毫摩尔）在二氯甲烷（1000毫升）中的-78℃溶液中。使所得白色稀悬浮液经2小时逐渐升温，在-40℃，获得清澈溶液。通过经30分钟缓慢逐份添加甲醇（105毫升），小心猝灭该反应混合物。随后将其搅拌15分钟，此后加入饱和酒石酸钾钠水溶液（350毫升）。随后使该反应混合物升温至室温整夜。除去有机相并用盐水洗涤，随后经硫酸镁干燥。用乙酸乙酯萃取水相，萃取物随后用盐水洗涤，也类似地干燥。过滤和浓缩产生无色油状的非对映体内半缩醛的混合物：¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) 非对映体A, δ 5.28 (s, 1H), 4.07 (m, 1H), 2.42 (br m, 1H), 1.13-1.87 (m, 6H), 1.11 (d, J = 6.2 Hz, 3H)。非对映体B, δ 4.70 (m, 1H), 3.56 (m, 1H), 2.86 (br m, 1H), 1.13-1.87 (m, 6H), 1.21 (d, J = 6.2 Hz, 3H)。

步骤2：6-羟基-2-(甲基氨基)庚烷腈

将6-甲基四氢-2H-吡喃-2-醇（42克，350毫摩尔）溶解在二氧杂环己烷（300毫升）中并用甲胺（40%在水中，32毫升，350毫摩尔），接着甲胺.HCl（19克，280毫摩尔），随后氰化钠（17克，350毫摩尔），接着水（50毫升）处理。在室温下搅拌整夜后，滗析出有机相并浓缩。将该残留物溶解在乙酸乙酯中。将水添加到初始水性悬浮液（已留下）中直至完全溶解，此后将两个相合并和萃取。将由此获得的有机相浓缩。水相用新鲜乙酸乙酯再萃取两次并将萃取物浓缩。将合并的残留物溶解在醚中并过滤除去残留固体。浓缩产生无色油状的产物：¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 3.81 (m, 1H), 3.46 (t, J = 7 Hz, 1H), 2.53 (s, 3H), 1.76 (m, 2H), 1.34-1.65 (m, 4H), 1.19 (d, J = 6.2 Hz, 3H)。

步骤3：(1-氰基-5-羟基己基)甲基氨基甲酸叔丁酯

将6-羟基-2-(甲基氨基)庚烷腈（76克）在乙酸异丙酯（350毫升）中的溶液升温至30℃，随后逐滴添加二碳酸二叔丁酯在乙酸异丙酯中的溶液（150毫升）。只要该反应的内部温度升至高于35℃，就停止加热并减慢添加速率以使内部温度保持在该设定点的几度内。总所需添加时间为大约1小时。随后继续加热并使温度在35℃下保持整夜。随后将反应混合物冷却至室温，用氯化铵（7克）、水（50毫升）和浓氨水（13克）处理，使所得混合物在室温下搅拌整夜。随后将该反应混合物冷却至0℃，分离有机相并用冷（0℃）1M NaOH、随后10%氯化铵、随后20% NaCl洗涤，随后经硫酸钠干燥。过滤和浓缩产生极稠不透明油状的产物，其含有未测定量的叔丁醇：¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.20 (m, 1H), 3.78 (br s, 1H), 2.87 (s, 3H), 1.81 (m, 2H), 1.25-1.63 (m, 4H), 1.45 (s, 9H), 1.18 (d, J = 6.2 Hz, 3H)。

步骤4：{1-[(Z)-氨基(羟基亚氨基)甲基]-5-羟基己基}甲基氨基甲酸叔丁酯

将含有未测定量的叔丁醇的(1-氰基-5-羟基己基)甲基氨基甲酸叔丁酯（129克）溶解在甲醇（250毫升）中并用50%羟胺水溶液（33毫升）处理。随后将该混合物加热至60℃ 3小时。随后冷却该反应混合物并真空除去溶剂。该残留物与甲苯（每次200毫升）共沸干燥两次，在50℃下真空干燥以产生被叔丁醇污染的极稠清澈油形式的产物：ES MS M+1 = 290.0。

步骤5：(2E)-2-[({(1Z)-1-氨基-2-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-6-羟基亚庚基}氨基)氧基]丁-2-烯二酸二甲酯

将{1-[(Z)-氨基(羟基亚氨基)甲基]-5-羟基己基}甲基氨基甲酸叔丁酯（161克，超重）溶解在甲醇（250毫升）中并冷却至-10℃。逐滴添加DMAD（65毫升），不允许反应温度升至高于-5℃，随后将反应混合物在冷冻器中在-10℃下储存2天。该反应混合物随后浓缩至干。其与甲苯共沸干燥两次，并在30℃下真空干燥至恒重以提供标题产物: ES MS M+1 = 431.9。

步骤6：2-{1-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-5-羟基己基}-5-羟基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸甲酯

将(2E)-2-[({(1Z)-1-氨基-2-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-6-羟基亚庚基}氨基)氧基]丁-2-烯二酸二甲酯（239克，超重）溶解在邻二甲苯（1000毫升）中，所得溶液在120℃下加热48小时。将所得深酒红色溶液冷却至室温，并真空浓缩溶剂。将稠深色残留物溶解在乙酸乙酯（400毫升）和二氯甲烷（100毫升）中，在冰浴中冷却并用1M氢氧化钠（400毫升）处理。将该混合物转移到分液漏斗中，但由于这两层的深棕色性质，难以看出任何分离。因此，抽出400毫升水相。残留混合物用1M氢氧化钠（100毫升）洗涤一次，随后流出300毫升液体。合并400毫升和300毫升流出物并用醚（300毫升）萃取。相之间的分离如今可见。分离出水相并在冰浴中冷却，在快速搅拌的同时，其用6M HCl（85毫升）酸化。所得混合物随后用二氯甲烷萃取和经硫酸钠干燥。浓缩和真空干燥产生粘稠棕色海绵状的标题产物（140克）：ES MS M+1 = 399.8。

步骤7：2-{1-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-5-[(甲基磺酰基)氧基]己基}-5,6-双[(甲基磺酰基)氧基]嘧啶-4-羧酸甲酯

来自步骤6的2-{1-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-5-羟基己基}-5-羟基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸甲酯与乙腈（500毫升）共沸干燥。将所得稠的酒红色胶质海绵（39克）再溶解在乙腈（500毫升）中并冷却至15-20℃。加入三乙胺（54毫升），接着经30分钟逐滴加入甲磺酰氯（27毫升）。在相同温度下再搅拌30分钟后，如通过LC-MS测得，已完全转化成三-甲磺酸酯与二-甲磺酸酯的2:1混合物。过滤该反应混合物以除去三乙胺氯化氢，滤饼用二氯甲烷充分洗涤。将滤液浓缩，随后在二氯甲烷与半饱和盐水之间分相。除去有机相并经硫酸钠干燥。过滤和浓缩产生深红色泡沫，其与乙腈（500毫升）共沸干燥并产生酒红色胶质，其是三-甲磺酸酯。

步骤8：反式-消旋-10-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-6-甲基-3-[(甲基磺酰基)氧基]-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-2-羧酸甲酯

和

将2-{1-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-5-[(甲基磺酰基)氧基]己基}-5,6-双[(甲基磺酰基)氧基]嘧啶-4-羧酸甲酯（62克，98毫摩尔）和碳酸铯（64克，196毫摩尔）在DMF（400毫升）中的混合物在100℃下加热整夜。将该反应混合物冷却至室温，随后进一步冷却至0℃。追加碳酸铯（60克），接着MsCl（10毫升），继续搅拌1小时。过滤该反应混合物以除去固体，随后用二氯甲烷洗涤该固体直至滤液变清澈。随后汽提滤液，最后在高真空下在35℃下以除去DMF。该稠的深红色残留淤渣用醚稀释并过滤。滤饼用醚洗涤。将所得乳白色固体溶解在二氯甲烷中，用冷半饱和盐水洗涤一次，溶液经硫酸钠干燥。过滤和浓缩产生通过NMR和LC-MS测得的外消旋反式非对映体：¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.74 (m, 1H), 5.41 (dd, J = 1.6, 13.5 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.50 (s, 3H), 2.95 (s, 3H), 1.60-2.94 (m, 6H), 1.57 (d, J = 7.3 Hz, 3H), 1.44 (s, 9H)。ES MS M+1 = 460.12。

步骤9：反式-消旋-6-甲基-10-(甲基氨基)-3-[(甲基磺酰基)氧基]-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-2-羧酸甲酯

和

向0℃的反式-消旋-10-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-6-甲基-3-[(甲基磺酰基)氧基]-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-2-羧酸甲酯（3.5克）在二氧杂环己烷（25毫升）中的溶液中加入在二氧杂环己烷中的4M HCl（25毫升）。在搅拌30分钟后，使该反应混合物升温至室温并搅拌4小时。汽提溶剂，将残留物溶解在水中并用过量碳酸钠处理。所得混合物用二氯甲烷，随后氯仿萃取，经硫酸钠干燥。过滤和浓缩产生深棕色粘稠油形式的胺。

步骤10：反式-消旋-10-[[(二甲基氨基)(氧代)乙酰基](甲基)氨基]-6-甲基-3-[(甲基磺酰基)氧基]-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-2-羧酸甲酯

和

将氯甲酸乙酯（0.4毫升）添加到在-15℃的二甲基草氨酸（0.49克）在四氢呋喃（15毫升）中的溶液中。在使温度保持低于-5℃的同时，逐份缓慢添加N-甲基吗啉（0.52毫升）。随着添加进行，胺盐以白色固体形式沉淀出来。继续搅拌90分钟，随后滤出盐，所得冷溶液直接使用。将来自步骤9的反式-消旋-6-甲基-10-(甲基氨基)-3-[(甲基磺酰基)氧基]-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂-2-羧酸甲酯溶解在THF（5毫升）中并在冷水浴中冷却的同时添加到如上制成的混合酐中。在添加完成时，使反应混合物逐渐升温至室温，此时沉淀乳白色固体。滤出固体沉淀物，用醚充分洗涤，随后在真空下干燥。所得白色固体是所需标题化合物：¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.69-5.79 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.51 (s, 3H), 3.12 (s, 3H), 3.03 (s, 3H), 3.00 (s, 3H), 1.82-2.14 (m, 6H), 1.61 (d, J = 7.3 Hz, 3H)。

步骤11：外消旋-反式-N-(2-{[(3-氟-4-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-6-甲基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂-10-基)-N,N',N'-三甲基乙二酰胺

将来自步骤10的反式-消旋-10-[[(二甲基氨基)(氧代)乙酰基](甲基)氨基]-6-甲基-3-[(甲基磺酰基)氧基]-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂-2-羧酸甲酯（50毫克）溶解在DMSO（2毫升）中并加入4-甲基-3-氟苄基胺（0.1毫升）。所得混合物在100℃下加热30分钟。通过LC-MS测得，完全转化成产物，其通过反相Gilson色谱法提纯：¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.46 (br s, 1H), 7.05 (m, 3H), 5.96 (m, 1H), 5.56 (br s, 1H), 4.47 (qd, J = 6.8, 14.5 Hz, 2H), 3.02 (s, 3H), 2.99 (s, 3H), 2.94 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 1.61-2.24 (m, 6H), 1.47 (d, J = 7.5 Hz, 3H)。ES MS M+1 = 487.8。

实施例3-2

N-(2-{[(3-氟-4-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-6-甲基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-10-基)-N,N',N'-三甲基乙二酰胺的离析的顺式对映体(化合物3B)

步骤1：顺式-10-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-6-甲基-3-[(甲基磺酰基)氧基]-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-2-羧酸甲酯

根据对实施例3-1，步骤8描述的程序制备该化合物，只是在此将反应混合物在100℃下加热4小时而非整夜。由于反应时间降低，产物以非对映体的外消旋顺式-反式混合物的形式离析。该混合物通过手性超临界流体色谱法分离成其四种非对映体纯的组分：¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) 具有未知绝对构型的顺式非对映体。δ 5.45 (m, 1H), 4.77 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.49 (s, 3H), 2.81 (s, 3H), 1.58-2.07 (m, 6H), 1.55 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.45 (s, 9H)。ES MS M+1 = 460.10。

步骤2：顺式-N-(2-{[(3-氟-4-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-6-甲基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-10-基)-N,N',N'-三甲基乙二酰胺

根据对实施例3-1，步骤8-11描述的程序将来自步骤1的顺式-10-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-6-甲基-3-[(甲基磺酰基)氧基]-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-2-羧酸甲酯转化成标题化合物。未测定绝对立体化学-- (6R,10S)或6S,10R)。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.66 (br s, 1H), 7.05 (m, 3H), 5.67 (br s, 1H), 5.00 (br s, 1H), 4.54 (qd, J = 6.6, 14.5 Hz, 2H), 3.06 (s, 3H), 3.01 (s, 3H), 2.83 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 1.92-2.23 (m, 6H), 1.49 (d, J = 6.3 Hz, 3H)。ES MS M+1 = 488.11。

实施例4-1

N-((6S,10S)-2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-6-甲基-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4H-嘧啶并[1,2-d][1,4]氧氮杂

-10-基)-N,N',N'-三甲基乙二酰胺(化合物4A)

(4A)

N-((6S,10R)-2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-6-甲基-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4H-嘧啶并[1,2-d][1,4]氧氮杂

-10-基)-N,N',N'-三甲基乙二酰胺. (化合物4B)

(4B)

步骤1：2(R)-1-(烯丙氧基)丙-2-醇

分4份经30分钟向在冰浴中冷却的烯丙醇（55.0克，947毫摩尔）在300毫升无水N,N-二甲基甲酰胺中的搅拌溶液中加入氢化钠的60%油分散体（37.9克，947毫摩尔）。使该混合物升温至环境温度并在30分钟后，该混合物在冰浴中冷却，经30分钟缓慢加入(R)-1,2-环氧丙烷（50克，861毫摩尔）。使反应混合物升温至室温并搅拌72小时。该应混合物在冰浴中冷却，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取（4X）。合并的有机萃取物用水（3X）、盐水（1X）洗涤，经无水硫酸镁干燥。在降低的真空下浓缩产生油状粗产物，其不经提纯即用于下一步骤: ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 5.92 (ddt, J = 17.2, 10.4, 5.6 Hz, 1 H)；5.26 (dq, J = 17.2, 1.6 Hz, 1 H)；5.20 (dq, J = 10.3, 1.3 Hz, 1 H)；4.03 (dt, J = 5.6, 1.4 Hz, 2 H)；3.95 (m, 1 H)；3.4-3.5 (m, 1 H)；3.24 (dd, J = 9.4, 8.2 Hz, 1 H)；2.4 (br s, 1 H)；1.15 (d, J = 6.4 Hz, 3 H)。

步骤2：6(R)-6-甲基-1,4-二噁烷-2-醇：

将臭氧流分散到2(R)-1-(烯丙氧基)丙-2-醇（84克，723毫摩尔）在二氯甲烷（400毫升）中的冷（最初T = -78℃）搅拌溶液中直至留下蓝色（需要4小时）。用氮气吹扫该溶液直至获得清澈、无色溶液。加入二甲硫（134毫升，1.8摩尔）和三乙胺（302毫升，2.17摩尔）。使该搅拌的混合物经60分钟升温至室温。用湿淀粉碘化物试纸进行的过氧化物试验为阴性。在环境温度下减压浓缩该混合物以提供粗制标题产物，其不经提纯即直接用于下一步骤。

步骤3：(1-氰基-2-{[(2)-2-羟丙基]氧基}乙基)甲基氨基甲酸叔丁酯：

向6(R)-6-甲基-1,4-二噁烷-2-醇（100克，847毫摩尔）在二氧杂环己烷和水（3:1，400毫升）中的搅拌溶液中加入甲胺盐酸盐（114克，1.69摩尔）和氰化钠（83克，1.69摩尔）。将该溶液搅拌72小时。将产物萃取到乙酸乙酯中（3X），合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并减压除去溶剂。将残留物溶解在乙酸乙酯（100毫升）并向该溶液中加入二碳酸二叔丁酯（369克，1.69摩尔）。该溶液在室温下搅拌18小时，用乙酸乙酯稀释并用水（1X）和盐水（1X）洗涤。经硫酸钠干燥后，将该粗产物溶液过滤并减压浓缩。通过在硅胶上使用己烷中30-50%乙酸乙酯梯度的中压色谱法提纯产生标题产物。

¹H NMR (399 MHz, CDCl₃): δ 5.5-5.1 (br m, 1 H)；3.9 (m, 1 H)；3.8 (m, 2 H)；3.53 (td, J =9.5, 3.0 Hz, 1 H)；3.34 (ddd, J = 14.1, 9.5, 7.4 Hz, 1 H)；2.96 (s, 1.5 H)；2.96 (s, 1.5 H)；1.48 (s, 9 H)；1.16 (d, J = 6.4 Hz, 3 H)。

步骤4：[(2)-2-氨基-1-({[(2R)-2-羟丙基]氧基}甲基)-2-(羟基亚氨基)乙基]-甲基氨基甲酸叔丁酯:

向(1-氰基-2-{[(2)-2-羟丙基]氧基}乙基)甲基-氨基甲酸叔丁酯（20克，77毫摩尔）在甲醇（100毫升）中的溶液中加入50%羟胺水溶液（5.63克，85毫摩尔），并在40℃下搅拌该混合物18小时。将该溶液减压浓缩，残留物通过在硅胶上使用己烷中10-90%乙酸乙酯梯度的中压色谱法提纯，产生黄色油状的标题产物。ES MS = 292.2 (M+1)。

步骤5：(2)-2-{[((1)-1-氨基-2-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-3-{[(2R)- 2-羟丙基]氧基}亚丙基)氨基]氧基}丁-2-烯二酸二甲酯

向0℃的[(2)-2-氨基-1-({[(2R)-2-羟丙基]氧基}甲基)-2-(羟基亚氨基)乙基]-甲基氨基甲酸叔丁酯（123.5克，424毫摩尔）在甲醇中的搅拌溶液中加入二甲基乙炔二甲酯（52.4毫升，424毫摩尔）。在该添加后，使反应混合物升温至室温。继续搅拌18小时。减压除去溶剂。粗产物通过在硅胶上使用己烷中10-85%乙酸乙酯梯度的中压色谱法提纯，以提供标题产物。ES MS = 435.4 (M+1)。

步骤6：2-(1-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-2-{[(2R-)-2-羟丙基]氧基}乙基)-5,6-二羟基嘧啶-4-羧酸甲酯

将(2)-2-{[((1)-1-氨基-2-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-3-{[(2R)- 2-羟丙基]氧基}亚丙基)氨基]氧基}丁-2-烯二酸二甲酯（140克，323摩尔）在邻二甲苯（1000毫升）中的溶液在120℃下加热18小时。随后将溶液温度升至140℃ 6小时以转化最后的底物。使该混合物冷却至环境温度并减压浓缩。该粗制残留物通过在硅胶上用己烷中的40%乙酸乙酯的中压液相色谱法提纯以除去低极性组分，产物随后用在二氯甲烷中的10%乙醇洗脱以提供标题产物。ES MS = 402.4 (M+1)。

步骤7：(1-(4-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-5,6-二羟基嘧啶-2-基)-2-{[(2)-2-羟丙基]氧基}乙基)甲基氨基甲酸叔丁酯

在两个并行操作中，向2-(1-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-2-{[(2R-)-2-羟丙基]氧基}乙基)-5,6-二羟基嘧啶-4-羧酸甲酯（40克，100毫摩尔）在2-丙醇（400毫升）中的搅拌溶液中加入4-氟-3-甲基苄基胺（20.8克，149毫摩尔）。将该混合物加热至60℃ 16小时。通过LC-MS测得留下一些底物酯，将加热浴的温度提高至80℃3小时。冷却并合并溶液，减压除去溶剂。将粗产物溶解在乙酸乙酯中并用10%柠檬酸水溶液（2X）、饱和碳酸氢钠（1X）和盐水（1X）洗涤。分离有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤，并减压除去溶剂。该粗产物不经进一步提纯即用于下一步骤: ES MS = 509.5 (M+1)。

步骤8：(6S,10S)和(6S, 10R)叔丁基((6,10)-2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-6-甲基-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4-嘧啶并[1,2-][1,4]氧氮杂

-10-基)甲基氨基甲酸酯

在两个并行操作中将(1-(4-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-5,6-二羟基嘧啶-2-基)-2-{[(2)-2-羟基丁基]氧基}乙基)甲基氨基甲酸叔丁酯（40克，79毫摩尔）溶解在无水乙腈（200毫升）中并在冰浴中在氮气下冷却。向该搅拌溶液中加入三乙胺（99毫升，472毫摩尔），接着逐滴添加在73毫升无水二氯甲烷中的甲磺酰氯（36.8毫升，472毫摩尔）。将该混合物搅拌30分钟，随后用去离子水处理。合并混合物并用氯仿萃取。分离有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩。该残留物在340 g Biotage SNAP筒上用己烷中10%至90%乙酸乙酯梯度色谱分离2遍以提供粗制三甲磺酸酯：ES MS: m/z = 743.5 (M+1)。

三甲磺酸酯（25克，33.7毫摩尔）在二甲基乙酰胺（500毫升）中的搅拌溶液用氮气吹扫10分钟，用碳酸铯（43.9克，135毫摩尔）处理并在100℃油浴中剧烈搅拌15小时。使反应混合物冷却至环境温度并过滤。滤液用水稀释和用乙酸乙酯萃取。有机层用水（3X）、盐水（1X）洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩。将粗产物悬浮在醚（200毫升）中，搅拌30分钟，并通过过滤除去不可溶的深色材料。将这种材料再悬浮在醚中（600毫升），搅拌48小时并过滤。将合并的滤液减压浓缩以提供粗产物。¹H NMR分析显示顺式: 反式非对映体的1:2混合物。ES MS = 491.2 (M+1)。

步骤9：(6S,10S)和(6S,10R)-N-(4-氟-3-甲基苄基)-3-羟基-6-甲基-10-(甲基氨基)-4-氧代-6, 7,9,10-四氢-4-嘧啶并[1,2-][1,4]氧氮杂

-2-羧酰胺盐酸盐

和

将来自前一步骤的顺式和反式非对映体的混合物(6S, 10S)和(6S, 10R)叔丁基((6,10)- 2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-6-甲基-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4-嘧啶并[1,2-][1,4]氧氮杂

-10-基)甲基氨基甲酸酯（13.5克，27.5毫摩尔）溶解在二氧杂环己烷中的4M HCl（206毫升）中。在30分钟后，过滤收集沉淀固体并在真空下干燥。该固体的¹H NMR分析表明标题产物的3:2 反式:顺式非对映体混合物。发现滤液主要含有反式非对映体。ES MS: m/z = 391.2 (M+1)。

步骤10：N-((6S,10S)-2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-6-甲基-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4H-嘧啶并[1,2-d][1,4]氧氮杂

-10-基)-N,N',N'-三甲基乙二酰胺(化合物4A)和N-((6S,10R)-2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-6-甲基-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4H-嘧啶并[1,2-d][1,4]氧氮杂

-10-基)-N,N',N'-三甲基乙二酰胺(化合物4B)。

将来自前一步骤的非对映体混合物(6S,10S)和(6S, 10R)-N-(4-氟-3-甲基苄基)-3-羟基-6-甲基-10-(甲基氨基)-4-氧代-6, 7,9,10-四氢-4-嘧啶并[1,2-][1,4]氧氮杂

-2-羧酰胺盐酸盐 (3.5克，9.0毫摩尔）、乙基-(二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐（5.16克，26.9毫摩尔）、1-羟基-7-氮杂苯并三唑（3.66克，26.9毫摩尔）、N,N-二甲基草氨酸（1.58克，13.5毫摩尔）和三乙胺（2.56毫升，44.8毫摩尔）在无水二氯甲烷（10毫升）中的溶液在室温下搅拌18小时。该混合物用水（6X）和用盐水（1X）洗涤。水洗液用氯仿反萃（3X），合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩。粗产物首先通过在Xterra (Waters) Prep MS C18 OBD 50X250 mm 柱上使用流速85毫升/分钟的10-75% CH₃CN/H₂O (0.1% TFA) 45分钟梯度的反相制备HPLC提纯。减压浓缩产生非晶白色固体状的反式:顺式非对映体的3:2混合物。使用在OJ-H 柱（Chiralcel）上用在二氧化碳中的15%乙醇作为流动相的超临界流体色谱法分离这种材料以产生顺式-(6S, 10S)和反式-(6S, 10R)标题非对映体。第一洗脱峰是反式非对映体，第二洗脱峰是顺式非对映体:

化合物4A - 顺式非对映体(标题化合物, (6S, 10S)): ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 9.59 (t, J = 6.4 Hz, 1 H)；7.21 (dd, J = 7.5, 2.1 Hz, 1 H)；7.20-7.13 (m, 1 H)；6.91 (t, J = 9.0 Hz, 1 H)；5.81 (s, 1 H)；4.99-4.90 (m, 1 H)；4.51 (d, J = 6.5 Hz, 2 H)；4.46 (t, J = 10.6 Hz, 1 H)；4.31 (d, J = 14.1 Hz, 1 H)；4.15 (dd, J = 11.8, 2.5 Hz, 1 H)；4.05 (dd, J = 14.1, 5.3 Hz, 1 H)；3.07 (s, 3 H)；3.02 (s, 3 H)；2.87-2.84 (m, 3 H)；2.28-2.21 (m, 3 H)；1.62 (d, J = 6.9 Hz, 3 H)。HR MS: ESI = 490.2086 (M+1)；计算值490.2096 (M+1)。

化合物4B - 反式非对映体(6S, 10R): ¹H NMR (作为旋转异构体的2:1混合物存在) (400 MHz, CDCl₃): δ 12.6-12.2 (br m, 1H)；9.7-9.5 (m, 1 H)；7.2 (m, 2 H)；6.9 (t, J = 9.0 Hz, 1 H)；5.8-5.7 (m, 2 H)；4.5-4.1 (m, 5 H)；3.8-3.6 (m, 2 H)；3.1 (s, 3 H)；3.1(s, 3 H)；3.0-2.8 (m, 3 H)；2.2 (d, J = 1.8 Hz, 3 H)；1.6-1.5 (m, 2 H)。

HR MS: ESI = 490.2086 (M+1)；计算值490.2096 (M+1)。

替代程序

步骤1：采用在Xterra (Waters) Prep MS C18 OBD 50X250 mm 柱上用10-75% CH₃CN/H₂O (0.1% TFA) 45分钟梯度以85毫升/分钟流速洗脱的反相液相色谱法分离步骤8中的非对映体混合物。含第一和第二洗脱产物的馏分的冻干分别产生褐色非晶固体状的顺式和反式非对映体：

顺式非对映体(6S, 10S): ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 12.2-11.8 (br.s, 1 H), 7.77 (br s, 1 H)；7.12 (m, 2 H)；6.97 (t, J = 8.9 Hz, 1 H)；5.3-.5.0 (br m, 1H)；4.90 (t, J = 6.5 Hz, 1 H)；4.51 (d, J = 6.4 Hz, 2 H)；4.36 (t, J = 9.5 Hz, 1 H)；4.12 (m, 2 H)；4.01 (dd, J = 13.9, 5.5 Hz, 1H)；2.80 (br s, 3 H)；2.23 (d, J = 1.8 Hz, 3 H)；1.62 (d, J = 6.9 Hz, 3 H)；1.27 (s, 9 H): ES MS: m/z = 491.1 (M+1)。

反式非对映体(6S, 10R): ¹H NMR (作为旋转异构体的2:1混合物存在) (400 MHz, CDCl₃): δ 12.2-11.8 (br.s, 1 H), 7.83 (br s, 2/3 H)；7.59 (br s, 1/3 H)；7.14 (m, 2 H)；6.98 (m, 1 H)；5.65 (m, 4/3H)；5.38 (m, 2/3H)；4.47 (m, 大约2 H)；4.29-4.10 (m, 大约2 H)；3.59(d, J = 13.4 Hz, 大约2H)；2.79 (s) 2.76 (s) (3H)；2.26 (s, 3 H)；1.56 (d, J = 7.3 Hz, 1 H)；1.50 (d, J = 7.1 Hz, 2 H)；1.29 (s, 3H)；1.25 (s, 6H): ES MS = 491.2 (M+1)。

步骤2：将来自前一步骤的顺式异构体(6S,10S) ((6,10)- 2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-6-甲基-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4-嘧啶并[1,2-][1,4]氧氮杂

-10-基)甲基氨基甲酸叔丁酯（1.7克，3.5毫摩尔）溶解在乙酸乙酯（69毫升）中，在搅拌下在冰浴中冷却，该溶液经5分钟用无水HCl气体饱和。在冰浴中搅拌该混合物1小时，随后减压浓缩。将残留物溶解在乙酸乙酯中并从中再浓缩两次，随后在真空下干燥以产生固体状的(6S,10S)-N-(4-氟-3-甲基苄基)-3-羟基-6-甲基-10-(甲基氨基)-4-氧代-6, 7,9,10-四氢-4-嘧啶并[1,2-][1,4]氧氮杂

-2-羧酰胺盐酸盐。

¹H NMR (399 MHz, d6DMSO): δ 12.45 (s, 1 H)；9.95 (t, J = 6.5 Hz, 1 H)；9.54 (br d, J = 24.7 Hz, 2 H)；7.21 (m, 2 H)；7.10 (t, J = 9.0 Hz, 1 H)；5.03 (s, 1H)；4.75 (td, J = 6.8, 2.7 Hz, 1 H)；4.47 (d, J = 6.4 Hzm, 2 H)；4.1 (m, 2 H)；3.88 (m, 2 H)；2.65 (s, 3 H)；2.21 (d, J = 1.6 Hz, 3 H)；1.53 (d, J = 6.8 Hz, 3 H): ES MS: m/z = 391.1 (M+1)。

步骤3：将(6S,10S)-N-(4-氟-3-甲基苄基)-3-羟基-6-甲基-10-(甲基氨基)-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4-嘧啶并[1,2-][1,4]氧氮杂

-2-羧酰胺盐酸盐（1.38克，3.2毫摩尔）、乙基-(二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐（1.24克，6.5毫摩尔）、1-羟基-7-氮杂苯并三唑（0.44克，3.2毫摩尔）、N,N-二甲基草氨酸（0.57克，4.9毫摩尔）和N-甲基吗啉（1.42毫升，12.9毫摩尔）在无水N,N-二甲基甲酰胺（32毫升）中的溶液在室温下搅拌18小时。该混合物用乙酸乙酯和5%硫酸氢钾水溶液稀释。分离层，水层用乙酸乙酯萃取（4X）。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，并减压浓缩。通过在Xterra (Waters) Prep MS C18 OBD 50x250 mm 柱上用10-75% CH₃CN/H₂O（0.1% TFA）45分钟梯度以85毫升/分钟流速洗脱的反相制备HPLC提纯该粗产物。合并产物馏分并冻干整夜以产生化合物4A（顺式-(6S, 10S)非对映体）。

化合物4A的结晶

将使用上述色谱分离程序制成的非晶化合物4A再溶解在二氯甲烷中并用水（用NaHCO₃调节至pH 3）分相。水层用二氯甲烷萃取3次。合并的有机物经Na₂SO₄干燥，过滤，并减压浓缩。将所得固体溶解在温MeOH中，经尼龙注射过滤器过滤到玻璃管瓶中。使该溶液的管瓶敞开静置在含EtOAc的烧杯中。在MeOH底部形成大晶体整夜。该固体用冰冷MeOH，随后Et₂O洗涤以提供结晶固体状的化合物4A。

表征. 在带有PW3050/60控制台的Philips Analytical X’Pert PRO X-射线衍射系统上使用4至40度2θ的连续扫描产生结晶化合物4A的XRPD图。使用铜K_α1和K_α2辐射作为源。实验在环境条件下运行。参考2θ值为28.443度的硅标注衍射峰位置。该XRPD图显示在图3中。XRPD图中的2θ值和相应d-间距包括下列：

表4A

还用TA Instruments DSC Q 1000差示扫描量热计在氮气氛中在敞口铝盘中以10℃/分钟的加热速率从25℃到350℃分析结晶化合物4A。DSC曲线显示吸热，具有139℃的开始温度和144℃的峰值温度。焓变化为67 J/g。该吸热被认为归因于熔融。

用TA Instruments TGA Q 500在氮气下以10℃/分钟的加热速率从25℃到350℃进行结晶化合物的TGA。TG曲线显示最多到100℃的0.03重量%的重量损失，表明不存在水合水和溶剂化溶剂。

实施例4-2

N-((6R,10R)-2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-6-甲基-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4H-嘧啶并[1,2-d][1,4]氧氮杂

-10-基)-N,N',N'-三甲基乙二酰胺(化合物4C)

(4C)

N-((6R,10S)-2-{[(4-氟-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-6-甲基-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4H-嘧啶并[1,2-d][1,4]氧氮杂

-10-基)-N,N',N'-三甲基乙二酰胺(化合物4D)

(4D)

使用实施例4-1中阐述的程序制备标题化合物，只是在步骤1中使用(S)-1,2-环氧丙烷代替(R)-1,2-环氧丙烷。

顺式非对映体(6R, 10R): ¹H NMR (399 MHz, CDCl₃): δ 12.6-12.1 (br s, 1H) 9.60 (t, J = 5.9 Hz, 1 H)；7.21 (d, J = 7.5, Hz, 1 H)；7.20-7.16 (m, 1 H)；6.91 (t, J = 9.0 Hz, 1 H)；5.81 (s, 1 H)；4.94 (m, 1 H)；4.51 (d, J = 6.4 Hz, 2 H)；4.45 (t, J = 10.7 Hz, 1 H)；4.31 (d, J = 14.1 Hz, 1 H)；4.15 (dd, J = 11.7, 2.4 Hz, 1 H)；4.04 (dd, J = 14.1, 5.3 Hz, 1 H)；3.07 (s, 3 H)；3.02 (s, 3 H)；2.85 (s, 3 H)；2.24 (d, J = 1.5 Hz, 3 H)；1.62 (d, J = 6.8 Hz, 3 H)。

HR MS: ESI = 490.2088(M+1)；计算值490.2096 (M+1)。

反式非对映体(6R, 10S): ¹H NMR (作为旋转异构体的2:1混合物存在) (399 MHz, CDCl₃): δ 9.7 (br s, 1/3 H)；9.54 (br s, 2/3 H)；7.21 (d, J = 7.3 Hz, 1 H)；7.19-7.15 (m, 1 H)；6.91 (t, J = 8.9 Hz, 1 H)；5.80 (br d, J = 6.4 Hz 2/3 H) 5.69 (br s, 4/3 H)；4.58-4.36 (m, 大约3 H)；4.27 (d, J=11.7 Hz, 大约1 H)；4.15 (m, 大约1H)；3.78-3.60 (m, 2 H)；3.07 (s, 3 H)；3.02 (s, 3 H)；3.97-2.82 (m, 3 H)；2.24 (d, J = 1.8 Hz, 3 H)；1.56 (m, 2 H)。

HR MS: ESI = 490.2098(M+1)；计算值490.2096 (M+1)。

实施例5-1

N-((6S,10S)-6-乙基-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4-嘧啶并[1,2-][1,4]氧氮杂

-10-基)- N N' N'-三甲基乙二酰胺(化合物5A)

(5A)

步骤1：2(R)-1-(烯丙氧基)丁-2-醇

向烘干的一升圆底烧瓶中加入氢化钠（30.5克，763毫摩尔）和DMF（433毫升）。该混合物在冰浴中冷却并逐滴加入烯丙醇（51.9毫升，763毫摩尔），使温度保持低于6℃。在添加完成后，在保持在冰浴中的同时搅拌该反应混合物15分钟，随后在室温下45分钟。该混合物随后再在冰浴中冷却并经30分钟以DMF（30毫升）溶液形式缓慢加入(R)-1,2-环氧丁烷（50克，760毫摩尔）。使反应混合物升温至室温并搅拌72小时。随后冷却该反应混合物并用水（500毫升）和醚（200毫升）稀释。分离层，用二乙醚（200毫升）从水层中再萃取两次产物。合并的有机萃取物经无水硫酸钠干燥。浓缩产生黄色油。该粗产物不经提纯即用于下一步骤: ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 5.92 (ddt, J = 17.2, 10.4, 5.6 Hz, 1 H)；5.28 (dq, J = 17.2, 1.6 Hz, 1 H)；5.20 (dq, J = 10.4, 1.3 Hz, 1 H)；4.03 (dt, J = 5.6, 1.3 Hz, 2 H)；3.76-3.68 (m, 1 H)；3.48 (dd, J = 9.5, 3.0 Hz, 1 H)；3.29 (dd, J = 9.5, 8.0 Hz, 1 H)；2.34 (d, J = 3.3 Hz, 1 H)；1.56-1.41 (m, 2 H)；0.97 (t, J = 7.5 Hz, 3 H)。

步骤2：6(R)-6-乙基-1,4-二噁烷-2-醇：

将臭氧流分散到2(R)-1-(烯丙氧基)丁-2-醇（50克，384毫摩尔）在甲醇（200毫升）中的冷（最初T = -78℃）搅拌溶液中直至留下蓝色（需要2小时）。该溶液用氮气吹扫10分钟直至获得清澈、无色溶液。加入二甲硫（45.5毫升，615毫摩尔）和三乙胺（30毫升）。使该搅拌的混合物经60分钟升温至室温。（用湿淀粉碘化物试纸进行的过氧化物试验为阴性。）在环境温度下减压浓缩该混合物以提供粗制标题产物，其不经提纯即直接用于下一步骤。

步骤3：(1-氰基-2-{[(2)-2-羟基丁基]氧基}乙基)甲基氨基甲酸叔丁酯:

向6(R)-6-乙基-1,4-二噁烷-2-醇（50克，378毫摩尔）在甲醇和水（1:1，300毫升）中的搅拌溶液中加入甲胺盐酸盐（51克，757毫摩尔）和氰化钠（28克，568毫摩尔）。将该溶液搅拌24小时。用饱和碳酸钠溶液（50毫升）使该溶液呈碱性（pH= 9）。将产物萃取到乙酸乙酯（3 x 200毫升）中。合并乙酸乙酯层，用盐水（100毫升）洗涤，经无水硫酸镁干燥。减压除去溶剂。将残留物溶解在二氯甲烷（300毫升）中并向该搅拌溶液中加入二碳酸二叔丁酯（83克，378毫摩尔）。该溶液在室温下搅拌18小时，随后用盐酸（50毫升，1M）酸化。分离有机层，用水（50毫升）和盐水溶液（50毫升）洗涤。有机层经硫酸镁干燥，过滤，并减压除去溶剂。通过在硅胶上（750 g料筒）使用己烷中5-50%乙酸乙酯梯度的快速色谱法提纯产生所需产物（Rf = 0.5, 40% EtOAc/己烷）。

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 5.44-5.37 (m, 1 H)；3.77 (dd, J = 10.6, 10.5 Hz, 1 H)；3.76 (dd, J = 13.4, 6.6 Hz, 2 H)；3.61-3.53 (m, 1 H)；3.39 (ddd, J = 14.1, 9.5, 7.4 Hz, 1 H)；2.96 (s, 3 H)；1.51-1.47 (m, 2 H), 1.48 (s, 9 H)；0.97 (t, J = 7.5 Hz, 3 H). ES MS = 273.3 (M+1)。

步骤4：[(2)-2-氨基-1-({[(2R)-2-羟基丁基]氧基}甲基)-2-(羟基亚氨基)乙基]-甲基氨基甲酸叔丁酯：

向(1-氰基-2-{[(2)-2-羟基丁基]氧基}乙基)甲基-氨基甲酸叔丁酯（5.1克，18.7毫摩尔）在甲醇（80毫升）中的溶液中加入50%羟胺水溶液（1.62毫升，26.4毫摩尔）并将该混合物在60℃下搅拌18小时。将该溶液减压浓缩并与甲醇（2 x 50毫升）共沸干燥以除去痕量羟胺和水。该粗产物不经提纯即用于下一步骤：ES MS = 306.2 (M+1)。

步骤5：(2)-2-{[((1)-1-氨基-2-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-3-{[(2R)- 2-羟基丁基]氧基}亚丙基)氨基]氧基}丁-2-烯二酸二甲酯

在氮气下在-20℃下向[(2)-2-氨基-1-({[(2R)-2-羟基丁基]氧基}甲基)-2-(羟基亚氨基)乙基]-甲基氨基甲酸叔丁酯（5.7克，18.7毫摩尔）在甲醇（100毫升）中的搅拌溶液中加入二甲基乙炔二甲酯（2.5毫升，20.6毫摩尔）。将反应混合物在-20℃下搅拌2小时，随后在搅拌下使其升温至室温18小时。减压除去溶剂。该粗产物与甲苯（50毫升）共沸干燥且不经提纯即用于下一步骤：ES MS = 448.2 (M+1)。

步骤6：2-(1-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-2-{[(2R-)-2-羟基丁基]氧基}乙基)-5,6-二羟基嘧啶-4-羧酸甲酯

在氮气下向(2)-2-{[((1)-1-氨基-2-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-3-{[(2R)-2-羟基丁基]氧基}亚丙基)氨基]氧基}丁-2-烯二酸二甲酯（8.4克，18.7摩尔）在邻二甲苯（700毫升）中的搅拌溶液中加入二异丙基乙基胺（4.9毫升，28毫摩尔）。将该混合物在120℃下加热24小时。将该溶液冷却并用EtOAc（500毫升）、水（100毫升）和盐酸（30毫升，1 M）稀释。分离水层并用乙酸乙酯萃取（2 x 100毫升）。合并有机层，用50毫升乙腈稀释以溶解颗粒物，经无水硫酸钠干燥，过滤，并减压除去溶剂。将粗产物溶解在醚中，并通过添加己烷来沉淀产物。过滤和减压干燥产生红色固体（7.4克，95%）：ES MS = 416.2 (M+1)。

步骤7：(1-(4-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-5,6-二羟基嘧啶-2-基)-2-{[(2)-2-羟基丁基]氧基}乙基)甲基氨基甲酸叔丁酯

向2-(1-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-2-{[(2R-)-2-羟基丁基]氧基}乙基)-5,6-二羟基嘧啶-4-羧酸甲酯（7.4克，18毫摩尔）在2-丙醇（160毫升）中的搅拌溶液中加入4-氟苄基胺（8.1毫升，71毫摩尔）。将该混合物加热至60℃ 24小时。将该溶液冷却并减压除去溶剂。将粗产物溶解在乙酸乙酯（150毫升）中并用盐酸水溶液（2 x 50毫升，0.5M）和盐水（50毫升）洗涤。分离有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，并减压除去溶剂。粗产物不经提纯即用于下一步骤: ES MS = 509.1 (M+1)。

步骤8：(6S,10S)和(6S, 10R)叔丁基((6,10)-6-乙基-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4-嘧啶并[1,2-][1,4]氧氮杂

-10-基)甲基氨基甲酸酯

将(1-(4-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-5,6-二羟基嘧啶-2-基)-2-{[(2)-2-羟基丁基]氧基}乙基)甲基氨基甲酸叔丁酯（7.7克，15毫摩尔）溶解在干燥乙腈（150毫升）中并在冰浴中在氮气下冷却。向该搅拌溶液中加入三乙胺（8.4毫升，60毫摩尔），接着甲磺酰氯（3.9毫升，50毫摩尔）。将该混合物搅拌1小时，随后减压除去溶剂。将粗产物溶解在乙酸乙酯（200毫升）中并用盐酸水溶液（50毫升，0.5M）、碳酸氢钠水溶液（50毫升）和盐水（50毫升）洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩。残留物在甲苯（500毫升）中搅拌，其溶解大多数这种材料。过滤未溶解的固体，用甲苯（2 x 100毫升）漂洗。浓缩该甲苯溶液以产生粗制三甲磺酸酯：ES MS: m/z = 743.1 (M+1)。

用氮气吹扫三甲磺酸酯（9.4克，12.6毫摩尔）在二甲基乙酰胺（190毫升）中的搅拌溶液。在各含碳酸钾（615 毫克，4.5毫摩尔）的10个微薄反应容器之间分配这种溶液。搅拌各反应容器并在微波炉中加热至140℃ 7分钟。合并所有10个反应容器中的反应混合物并用乙酸乙酯（400毫升）和水稀释。有机层用盐酸水溶液（2 x 100毫升，0.5 M）、盐水（50毫升）洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩。将粗产物悬浮在醚（700毫升）中并搅拌18小时。过滤除去黑色沉淀物。减压浓缩滤液溶剂，且残留物通过反相HPLC (C18, Xterra)用含0.1% TFA的水:乙腈流动相梯度（30-75%乙腈，经40分钟，85毫升/分钟）提纯。含有第一和第二洗脱产物的馏分的冻干分别产生白色非晶固体状的顺式和反式非对映体: 顺式非对映体(6S, 10S) ¹H NMR (399 MHz, CDCl₃): δ 11.80 (br.s, 1 H), 7.80 (s, 1 H)；7.31 (dd, J = 8.4, 5.3 Hz, 2 H)；7.04 (t, J = 8.4 Hz, 2 H)；5.25 (br. s, 1H)；4.62-4.54 (m, 3 H)；4.33 (m, 1 H)；4.16 (dd, J = 14.1, 5.9 Hz, 1 H)；4.08 (dd, J = 12.2, 3.1 Hz, 1 H)；4.02 (d, J = 14.8 Hz, 1 H)；2.82-2.75 (m, 3 H)；2.17-1.80 (m, 2 H)；1.27 (m, 9 H)；1.12 (t, J = 7.4 Hz, 3 H): ES MS: m/z = 491.2 (M+1)。

反式非对映体(6S, 10R) ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 11.90 (br.s, 1 H), 7.90-7.60 (m, 1 H)；7.33 (m, 2 H)；7.04 (m, 2 H)；5.50-5.30 (m, 2H)；4.55 (m, 2 H)；4.25 (m, 2 H)；3.55 (d, J = 13.3 Hz, 2 H)；2.75 (m, 3 H)；2.10-1.85 (m, 2 H)；1.28 (m, 9 H)；0.98 (m, 3 H)。ES MS = 491.2 (M+1)。

步骤9：(6S,10S)-6-乙基-(4-氟苄基)-3-羟基-10-(甲基氨基)-4-氧代-6, 7,9,10-四氢-4-嘧啶并[1,2-][1,4]氧氮杂

-2-羧酰胺盐酸盐

将(6S,10S)叔丁基((6,10)-6-乙基-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4-嘧啶并[1,2-][1,4]氧氮杂

-10-基)甲基氨基甲酸酯（1.8克，3.67毫摩尔）溶解在HCl-二氧杂环己烷（50毫升，4 M）中。在3小时后，将该溶液减压浓缩，随后与甲醇和甲苯共沸干燥。该粗产物在高真空下干燥且不经提纯即用于下一步骤: ES MS: m/z = 391.2 (M+1)。

步骤10：N-((6S,10S)-6-乙基-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4-嘧啶并[1,2-][1,4]氧氮杂-10-基)- N N' N'-三甲基乙二酰胺。

在氮气下向(6S,10S)-6-乙基-(4-氟苄基)-3-羟基-10-(甲基氨基)-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4-嘧啶并[1,2-][1,4]氧氮杂-2-羧酰胺盐酸盐（200 毫克，0.46毫摩尔）、EDC（99 毫克，0.51毫摩尔）在干燥二氯甲烷（5毫升）中的搅拌溶液中加入HOAT（70 毫克，0.51毫摩尔）、N,N-二甲基草氨酸（82 毫克，0.71毫摩尔）和N-甲基吗啉（155微升，1.4毫摩尔）。该反应在室温下搅拌1小时，随后用1M HCl（5毫升）猝灭。用二氯甲烷（3 x 20毫升）萃取水层。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩。粗产物通过反相HPLC (C18, Xterra)用含0.1% TFA的水:乙腈流动相梯度（20-70%乙腈，经30分钟，50毫升/分钟）提纯。浓缩产生非晶白色固体状的所需产物：¹H NMR (399 MHz, CDCl₃): δ 11.90 (br.s, 1 H)；9.62 (t, J = 6.2 Hz, 1 H)；7.37 (dd, J = 8.4, 5.5 Hz, 2 H)；6.98 (d, J = 8.6 Hz, 2 H)；5.83 (m, 1 H)；4.63 (m, 1 H)；4.54 (d, J = 6.4 Hz, 2 H)；4.43 (t, J = 10.4 Hz, 1 H)；4.21 (d, J = 3.3 Hz, 2 H)；4.13 (dd, J = 11.8, 2.8 Hz, 1 H)；3.07 (s, 3 H)；3.02 (s, 3 H)；2.84 (s, 3 H)；2.07 (m, 1 H)；1.83 (m, 1 H)；1.14 (t, J = 7.3 Hz, 3 H)。HR MS: ESI = 490.2119 (M+1)；计算值490.2096 (M+1)。

化合物5A的形式I的结晶

将可如上所述获得的溶解在二氯甲烷中的非晶化合物5A的溶剂换成异丙醇以提供每毫升异丙醇含有大约150-200毫克化合物5A的混合物。随后将该混合物加热至60℃以形成棕色均匀溶液。随后使该热溶液冷却至室温，在此过程中，该溶液形成浆料。过滤该浆料，所得晶体先用异丙醇和正庚烷（1:1）的混合物洗涤，随后用庚烷洗涤，在真空下干燥以提供化合物5A的晶形I。

表征. 在带有PW3050/60控制台的Philips Analytical X’Pert PRO X-射线衍射系统上使用2至40度2θ的连续扫描产生结晶化合物5A的晶形I的XRPD图。使用铜K_α1和K_α2辐射作为源。实验在环境条件下运行。参考2θ值为28.443度的硅标注衍射峰位置。该XRPD图显示在图3中。XRPD图中的2θ值和相应d-间距包括下列：

表5A-1

用TA Instruments DSC 2920差示扫描量热计在氮气氛中在封闭铝盘中以10℃/分钟的加热速率从25℃到350℃分析结晶化合物5A的晶形I。DSC曲线显示吸热，具有142℃的开始温度和149℃的峰值温度。焓变化为52 J/g。该吸热被认为归因于熔融。

用Perkin Elmer TGA 7在氮气下以10℃/分钟的加热速率从25℃到300℃进行结晶化合物的TGA。TG曲线显示最多到80℃的0.3重量%的重量损失和最多到174℃的0.4重量%的第二重量损失，归因于熔融时的异丙醇损失。

DSC和TGA结果表明晶形I是无水的。

化合物5A的形式II的结晶

将如上所述获得的非晶化合物5A再溶解在二氯甲烷中并用水（用NaHCO₃调节至pH 3）分相。水层用二氯甲烷萃取3次。合并的有机物经Na₂SO₄干燥，过滤，并减压浓缩。将所得固体以70毫克/毫升的浓度溶解在热异丙醇中。使该热溶液缓慢冷却至环境温度，在此过程中从溶液中结晶出细针晶。将冷却的结晶混合物老化整夜，过滤分离该结晶化合物，用异丙醇洗涤，并在真空下干燥。

表征. 在带有PW3050/60控制台的Philips Analytical X’Pert PRO X-射线衍射系统上使用2至40度2θ的连续扫描产生结晶化合物5A的晶形II的XRPD图。使用铜K_α1和K_α2辐射作为源。实验在环境条件下运行。参考2θ值为28.443度的硅标注衍射峰位置。该XRPD图显示在图4中。XRPD图中的2θ值和相应d-间距包括下列：

表5A-2

用TA Instruments DSC 2920差示扫描量热计在氮气氛中在封闭铝盘中以10℃/分钟的加热速率从25℃到250℃分析晶形II。DSC曲线显示吸热，具有149℃的开始温度和155℃的峰值温度。焓变化为73 J/g。该吸热被认为归因于熔融。

用Perkin Elmer TGA 7在氮气下以10℃/分钟的加热速率从25℃到300℃进行结晶化合物的TGA。TG曲线显示最多126℃的0.1重量%的重量损失和最多到171℃的0.1重量%的第二重量损失，归因于熔融时的异丙醇损失。

DSC和TGA结果表明晶形II是无水的。

实施例5-2

N-((6S,10R)-6-乙基-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4H-嘧啶并[1,2-d][1,4]氧氮杂

-10-基)-N N' N'-三甲基乙二酰胺(化合物5B)

(5B)

根据如实施例5-1，步骤9和10中描述的程序使用来自实施例5-1，步骤8的(6S, 10R)叔丁基((6,10)-6-乙基-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4-嘧啶并[1,2-][1,4]氧氮杂

-10-基)甲基氨基甲酸酯异构体产生N-((6S,10R)-6-乙基-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4H-嘧啶并[1,2-d][1,4]氧氮杂-10-基)- N N' N'-三甲基乙二酰胺: ¹H NMR (399 MHz, CDCl₃): δ 11.90 (br. s, 1 H)；9.82-9.55 (m, 1 H)；7.38 (dd, J = 8.4, 5.5 Hz, 2 H)；6.98 (t, J = 8.7 Hz, 2 H)；5.82-5.43 (m, 2 H)；4.62-4.20 (m, 4 H)；3.78-3.52 (m, 2 H)；3.06 (s, 3 H)；3.01 (s, 3 H)；2.87 (m, 3 H)；2.13-1.80 (m, 2 H)；0.99 (t, J = 7.5 Hz, 3 H)。 HR MS: ESI = 490.2119 (M+1)；计算值490.2096 (M+1)。

实施例5-2A

化合物 5A和5B的替代制备程序

实施例5-1的步骤8中获得的粗产物不分离成单独的顺式和反式非对映体，而是作为非对映体混合物经过如实施例5-1中描述的步骤9和10。在步骤9中，用如上所述的在二氧杂环己烷中的4N HCl处理该混合物。在通过LC-MS评定反应完成时，加入醚，这造成棕色固体沉淀。过滤收集该固体并在2:1 MeOH-水中搅拌。过滤收集未溶解的褐色固体并在真空下干燥以提供反式:顺式非对映体的3:2混合物。该固体随后使用步骤10中的程序与N,N-二甲基草氨酸偶联。在ChiralPak AD柱上使用含0.1% TFA的乙醇作为流动相分离该产物混合物。第一洗脱峰是反式非对映体（化合物5B），第二洗脱峰是顺式非对映体（化合物5A）。

实施例5-3

N-((6R,10R)-6-乙基-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4H-嘧啶并[1,2-d][1,4]氧氮杂

-10-基)- N N' N'-三甲基乙二酰胺(化合物5C)

(5C)

采用对实施例5-1描述的程序以(S)-1, 2-环氧丁烷开始合成(6R,10R)异构体。来自实施例5-1的步骤8的相应顺式中间体(6R, 10R)如步骤9和10中那样进一步精制并产生所需产物。HR MS: ESI = 490.2107 (M+1)；计算值490.2096 (M+1)。

实施例5-4

N-((6R,10S)-6-乙基-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-6,7,9,10-四氢-4H-嘧啶并[1,2-d][1,4]氧氮杂

-10-基)- N N' N'-三甲基乙二酰胺(化合物5D)

(5D)

采用对实施例5-1描述的程序以(S)-1,2-环氧丁烷开始合成(6R,10S)异构体。来自实施例5-1的步骤8的相应反式中间体(6R, 10S)如步骤9和10中那样进一步精制并产生所需产物。HR MS: ESI = 490.2112 (M+1)；计算值490.2096 (M+1)。

实施例6-1

N-乙基-N-((7S,10R)-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-7-甲氧基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-10-基)-N',N'-二甲基乙二酰胺(化合物6A)

步骤1：(2S)-1-(苄氧基)己-5-烯-2-醇

在0℃下(2S)-2-[(苄氧基)甲基]环氧乙烷（50克，305毫摩尔）在THF（1500毫升）中的溶液中加入溴化铜（4.37克，30.5毫摩尔）。所得溶液在0℃下搅拌10分钟并加入烯丙基溴化镁（1M在THF中，335毫升，335毫摩尔）。将该反应在0℃下搅拌2小时，随后在0℃下用饱和NH₄Cl水溶液猝灭并用DCM稀释。该混合物在环境温度下搅拌20分钟并过滤除去不可溶材料。滤液用DCM萃取（3x），合并的有机相经MgSO₄干燥，过滤，并真空浓缩。用10至40%EtOAc/己烷洗脱的快速柱色谱法提供(2S)-1-(苄氧基)己-5-烯-2-醇。¹H NMR (400 MHz, CDCl₂): δ 7.37-7.26 (m, 5 H)；5.88-5.74 (m, 1 H)；5.08-4.93 (m, 2 H)；4.54 (s, 2 H)；3.83 (s, 2 H)；3.53-3.44 (m, 1 H)；3.33 (dd, J = 9.1, 8.2 Hz, 1 H)；2.49 (s, 1 H)；2.30-2.00 (m, 2 H)；1.64-1.39 (m, 2 H)。

步骤2：({[(2S)-2-甲氧基己-5-烯-1-基]氧基}甲基)苯

经30分钟向在0℃的(2S)-1-(苄氧基)己-5-烯-2-醇（71克，344毫摩尔）在DMF（500毫升）中的搅拌溶液中逐份加入氢化钠（16.52克，413毫摩尔）。所得悬浮液在0℃下搅拌15分钟，随后在环境温度下搅拌15分钟。将该混合物冷却至0℃并加入甲基碘（43毫升，688毫摩尔）。将反应混合物在环境温度下搅拌整夜。将该混合物冷却至0℃并用水猝灭。用DCM萃取该混合物（3x）。合并有机层并用水洗涤（2x），经MgSO₄干燥，过滤，并真空浓缩。该粗制残留物不经进一步提纯即用于下一反应。¹H NMR (400 MHz, CDCl₂): δ 7.34 (s, 5 H)；5.85-5.74 (m, 1 H)；5.06-4.89 (m, 2 H)；4.55 (s, 2 H)；3.49 (d, J = 4.7 Hz, 2 H)；3.41 (s, 3 H)；3.37 (m, 1 H)；2.16-2.04 (m, 2 H)。

步骤3：(4S)-5-(苄氧基)-4-甲氧基戊醛

将臭氧流分散到({[(2S)-2-甲氧基己-5-烯-1-基]氧基}甲基)苯（40克，182毫摩尔）在二氯甲烷（1800毫升）中的冷（最初T = -78℃）搅拌溶液中直至留下蓝色。用氮气吹扫该溶液直至获得清澈、无色溶液。加入二甲硫（67.2毫升，908毫摩尔）和三乙胺（76毫升，545毫摩尔。使该搅拌的混合物经60分钟升温至室温。（用湿淀粉碘化物试纸进行的过氧化物试验为阴性。) 减压浓缩该混合物以提供粗制标题产物，其不经提纯即用于下一步骤。

步骤4：[(4S)-5-(苄氧基)-1-氰基-4-甲氧基戊基]乙基氨基甲酸叔丁酯

在室温下向(4S)-5-(苄氧基)-4-甲氧基戊醛（109克，490毫摩尔）在二氧杂环己烷（500毫升）中的溶液中加入EtNH₂.HCl（60克，736毫摩尔）、NaCN（36克，736毫摩尔）和H₂O（500毫升）。将该反应混合物搅拌2天，随后用饱和NaHCO₃水溶液稀释并用EtOAc萃取（3x）。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤，并真空浓缩。向该粗制残留物在EtOAc（500毫升）中的溶液中加入(Boc)₂O（107克，492毫摩尔）。所得混合物在40℃下搅拌2天。将该反应混合物冷却至环境温度，用水稀释，并用EtOAc萃取（3x）。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤，并真空浓缩。用在己烷中的10至40% EtOAc洗脱的快速柱色谱法提供[(4S)-5-(苄氧基)-1-氰基-4-甲氧基戊基]乙基氨基甲酸叔丁酯。LC-MS: 377.4 (M+1)。

步骤5：{(4S)-5-(苄氧基)-1-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-4-甲氧基戊基}乙基氨基甲酸叔丁酯

向[(4S)-5-(苄氧基)-1-氰基-4-甲氧基戊基]乙基氨基甲酸叔丁酯（74克，197毫摩尔）在EtOH（1000毫升）中的溶液中加入TEA（54.8毫升，393毫摩尔）和NH₂OH（50%在水中，14.45毫升，236毫摩尔）。将所得溶液在40℃下搅拌整夜，随后真空浓缩。将残留物溶解在MeOH中并减压除去溶剂（3x）以除去水。该粗制残留物不经进一步提纯即用于下一反应。LC-MS: 410.5 (M+1)。

步骤6：2-{(4S)-5-(苄氧基)-1-[(叔丁氧基羰基)(乙基)氨基]-4-甲氧基戊基}-5-羟基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸甲酯

在0℃下向{(4S)-5-(苄氧基)-1-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-4-甲氧基戊基}乙基氨基甲酸叔丁酯（72.6克，177毫摩尔）在MeOH（1773毫升）中的溶液中加入二甲基乙炔二甲酯（26.3毫升，213毫摩尔）。将反应混合物在环境温度下搅拌整夜，随后真空浓缩。将残留物溶解在甲苯中并真空浓缩（3x）以除去MeOH。粗产物不经提纯即用于下一反应。LC-MS: 553.5 (M+1)。

将来自前一步骤的粗制材料（104克，189毫摩尔）在邻二甲苯（500毫升）中的溶液加热至回流11小时，随后冷却并真空浓缩。该粗制残留物不经进一步提纯即用于下一步骤。LC-MS: 520.5 (M+1)。

步骤7：2-{(4S)-1-[(叔丁氧基羰基)(乙基)氨基]-5-羟基-4-甲氧基戊基}-5-羟基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸甲酯

向2-{(4S)-5-(苄氧基)-1-[(叔丁氧基羰基)(乙基)氨基]-4-甲氧基戊基}-5-羟基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸甲酯（13克，25.02毫摩尔）在EtOAc（30毫升）和MeOH（30毫升）中的溶液中加入乙酸（20毫升）和载钯碳（Degussa，10质量%，13克，122毫摩尔）。该反应混合物在Parr装置上在氢气（50 psi）下摇振4天，随后经硅藻土垫过滤。用MeOH洗涤该滤饼。将滤液真空浓缩。该粗制残留物不经进一步提纯即用于下一反应。LC-MS: 429.89 (M+1)。

步骤8：乙基[(4S)-1-(4-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-5-羟基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-2-基)-5-羟基-4-甲氧基戊基]氨基甲酸叔丁酯

向2-{(4S)-1-[(叔丁氧基羰基)(乙基)氨基]-5-羟基-4-甲氧基戊基}-5-羟基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸甲酯（48克，112毫摩尔）在MeOH（1118毫升）中的溶液中加入4-氟-苄基胺（28克，224毫摩尔）和三乙胺（31.2毫升，224毫摩尔）。密封所得混合物并在80℃下加热整夜。将该反应混合物冷却至环境温度，用10%柠檬酸（～100毫升）稀释，并用DCM萃取（3x）。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤，并真空浓缩。将该粗制残留物溶解在乙腈中并减压浓缩（3x）以除去MeOH。该残留物在高真空下干燥2天且不经提纯即用于下一反应。LC-MS: 523.5 (M+1)。

步骤9：2-{(4S)-1-[(叔丁氧基羰基)(乙基)氨基]-4-甲氧基-5-[(甲基磺酰基)氧基]戊基}-6-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}嘧啶-4,5-二基二甲磺酸酯

在0℃下向乙基[(4S)-1-(4-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-5-羟基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-2-基)-5-羟基-4-甲氧基戊基]氨基甲酸叔丁酯（30克，57.4毫摩尔）在AcCN（500毫升）中的搅拌溶液中加入TEA（48毫升，344毫摩尔），接着逐滴添加MsCl（22.37毫升，287毫摩尔）在DCM（15毫升）中的溶液。所得混合物在0℃下搅拌30分钟，随后用H₂O（～100毫升）稀释并用EtOAc萃取（3x）。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤，并真空浓缩。该粗制残留物不经进一步提纯即用于下一步骤。LC-MS: 757.5 (M+1)。

步骤10：(7S)-10-[(叔丁氧基羰基)(乙基)氨基]-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-7-甲氧基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-3-基甲磺酸酯

向来自前一步骤的三甲磺酸酯（21.8克，28.8毫摩尔）在DMF（288毫升）中的溶液中加入Cs₂CO₃（28.2g, 86毫摩尔）。将该搅拌的反应混合物加热至100℃ 1小时，随后冷却至0℃，加入MsCl（6.73毫升，86毫摩尔）并将该混合物在0℃下搅拌20分钟。该混合物用DCM稀释，并过滤除去不可溶材料。将滤液真空浓缩。残留物用水稀释并用DCM萃取（3x）。合并有机层，经Na₂SO₄干燥，过滤，并真空浓缩。快速柱色谱法用在己烷中的30至70% EtOAc洗脱。

第一洗脱峰：是7,10-反式异构体：(7S,10S)-10-[(叔丁氧基羰基)(乙基)氨基]-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-7-甲氧基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-3-基甲磺酸酯（1.5克），¹H NMR (599 MHz, DMSO, 50℃): δ 8.34 (t, J = 6.1 Hz, 1 H)；7.35 (dd, J = 8.3, 5.5 Hz, 2 H)；7.13 (t, J = 8.7 Hz, 2 H)；5.17 (d, J = 10.0 Hz, 1 H)；4.96 (d, J = 14.0 Hz, 1 H)；4.50-4.35 (m, 2 H)；3.72-3.61 (m, 1 H)；3.49 (s, 3 H)；3.60-3.10 (m, 1 H)；3.22 (s, 3 H)；3.19-3.07 (m, 2 H)；2.09 (d, J = 11.3 Hz, 2 H)；2.02-1.93 (m, 1 H)；1.91-1.82 (m, 1 H)；1.27 (s, 9 H)；1.13-1.04 (m, 3 H)。

第二洗脱峰是7,10-顺式异构体：(7S,10R)-10-[(叔丁氧基羰基)(乙基)氨基]-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-7-甲氧基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-3-基甲磺酸酯（935毫克）。¹H NMR (599 MHz, DMSO, 50℃): δ 8.44 (t, J = 6.1 Hz, 1 H)；7.35-7.29 (m, 2 H)；7.13-7.04 (m, 2 H)；5.23 (dd, J = 15.0, 5.7 Hz, 1 H)；4.46-4.39 (m, 1 H)；4.35 (dd, J = 15.1, 5.9 Hz, 1 H)；3.79 (d, J = 14.9 Hz, 1 H)；3.70-3.63 (m, 1 H)；3.43 (s, 3 H)；3.33-3.28 (m, 1 H)；3.18 (s, 3 H)；3.13-3.08 (m, 1 H)；1.98-1.85 (m, 3 H)；1.23 (s, 9 H)；1.10-1.04 (m, 3 H)。

步骤11：(7S,10R)-10-(乙基氨基)-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-7-甲氧基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-3-基甲磺酸酯

在0℃下向来自前一步骤的第二洗脱组分(7S,10R)-10-[(叔丁氧基羰基)(乙基)氨基]-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-7-甲氧基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂-3-基甲磺酸酯（9克，15.45毫摩尔）在EtOAc（154毫升）中的搅拌溶液中鼓入HCl（g）5分钟。将该反应混合物在室温下搅拌10分钟并真空浓缩。该残留物用饱和NaHCO₃水溶液稀释并用DCM萃取（3x）。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤，并真空浓缩。用在DCM中的0至7% MeOH洗脱的快速柱色谱法提供(7S,10R)-10-(乙基氨基)-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-7-甲氧基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂-3-基甲磺酸酯。LC-MS: 483.4 (M+1)。¹H NMR (599 MHz, CDCl?): δ 7.84 (s, 1 H)；7.32 (dd, J = 13.0, 6.9 Hz, 2 H)；7.03 (t, J = 8.6 Hz, 2 H)；5.26 (dd, J = 14.3, 6.9 Hz, 1 H)；4.62 (dd, J = 14.9, 6.3 Hz, 1 H)；4.52 (dd, J = 14.9, 5.6 Hz, 1 H)；4.00 (d, J = 14.3 Hz, 1 H)；3.81 (d, J = 8.1 Hz, 1 H)；3.54 (s, 3H)；3.46 (d, J = 7.8 Hz, 1H)；3.35 (s, 3 H)；2.59 (q, J = 7.1 Hz, 2 H)；2.11-2.03 (m, 1 H)；1.95-1.83 (m, 3H)；1.04 (t, J = 7.1 Hz, 3 H)。

步骤12：(7S,10R)-10-[[(二甲基氨基)(氧代)乙酰基](乙基)氨基]-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-7-甲氧基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂-3-基甲磺酸酯

在室温下向(7S,10R)-10-(乙基氨基)-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-7-甲氧基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-3-基甲磺酸酯（4.8g, 9.99毫摩尔）在DCM（100毫升）中的溶液中加入TEA（8.35毫升，59.9毫摩尔）、N,N-二甲基草氨酸（2.34克，19.98毫摩尔）、EDC（5.74克，30毫摩尔）和HOAt（4.62克，30毫摩尔）。所得混合物在室温下搅拌整夜，随后用H₂O稀释并用DCM萃取（3x）。将合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤，并真空浓缩。在0℃下向粗制材料（8克，15.89毫摩尔）在ACN（159毫升）中的溶液中逐滴加入TEA（6.64毫升，47.7毫摩尔）和MsCl（3.64克，31.8毫摩尔）。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，随后用水稀释并用EtOAc萃取（3x）。将合并的有机萃取物真空浓缩，残留物通过用在DCM中的0至7% MeOH洗脱的快速柱色谱法提纯以提供(7S,10R)-10-[[(二甲基氨基)(氧代)乙酰基](乙基)氨基]-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-7-甲氧基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-3-基甲磺酸酯，LC-MS: 582.5 (M+1)。

步骤13：N-乙基-N-((7S,10R)-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-7-甲氧基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-10-基)-N',N'-二甲基乙二酰胺(化合物6A)

向(7S,10R)-10-[[(二甲基氨基)(氧代)乙酰基](乙基)氨基]-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-7-甲氧基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-3-基甲磺酸酯（1克，1.72毫摩尔）在2-丙醇（17毫升）中的搅拌溶液中加入2M NaOH（2.58毫升，5.16毫摩尔）。将所得混合物在环境温度下搅拌30分钟，用HCl（1M，5.16毫升，5.16毫摩尔）猝灭，并用EtOAc萃取（3x）。并列进行相同规模的另外三个反应。将来自所有四个反应的合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤，并真空浓缩。该残留物通过使用含有0.5%TFA的水/乙腈流动相梯度的反相HPLC（C18 Sunfire 柱）或通过从水中沉淀来提纯以提供N-乙基-N-((7S,10R)-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-7-甲氧基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-10-基)-N',N'-二甲基乙二酰胺。LC-MS: 504.5 (M+1)。¹H NMR (599 MHz, DMSO, 50℃): δ 11.89 (s, 1 H)；9.45 (s, 1 H)；7.37-7.30 (m, 2 H)；7.14-7.08 (m, 2 H)；5.22 (dd, J = 15.0, 5.4 Hz, 1 H)；4.93 (bs, 1 H)；4.50-4.42 (m, 2 H)；3.71-3.66 (m, 2 H)；2.92 (s, 3 H)；2.88 (s, 3 H)；2.05-1.99 (m, 1 H)；1.97-1.86 (m, 2 H)；1.08 (t, J = 7.1 Hz, 3 H). LC-MS: HRMS: 计算值: 504.2253, 实测值: 504.2273。

化合物6A的重结晶

将通过以上述步骤13中所述的方式（即在经反相HPLC提纯之前）浓缩有机层而获得的残留油性材料溶解在最小量的温无水甲醇中。将所得溶液在保持在-10℃的冷冻器中放置几天，随后使其缓慢升温至环境温度。过滤分离由此获得的细针晶，用无水甲醇洗涤并在真空下干燥。

表征. 在带有PW3050/60控制台的Philips Analytical X’Pert PRO X-射线衍射系统上使用4至40度2θ的连续扫描产生结晶化合物6A的XRPD图。使用铜K_α1和K_α2辐射作为源。实验在环境条件下运行。参考2θ值为28.443度的硅标注衍射峰位置。该XRPD图显示在图5中。XRPD图中的2θ值和相应d-间距包括下列：

表6A

还用TA Instruments DSC Q 1000差示扫描量热计在氮气氛中在敞口铝盘中以10℃/分钟的加热速率从25℃到350℃分析结晶化合物6A。DSC曲线显示吸热，具有170℃的开始温度和173℃的峰值温度。焓变化为84 J/g。该吸热被认为归因于熔融。

用TA Instruments TGA Q 500在氮气下以10℃/分钟的加热速率从25℃到350℃进行结晶化合物的TGA。TG曲线显示最多到100℃的0.05重量%的重量损失，表明不存在水合水和溶剂化溶剂。

实施例6-2

N-乙基-N-((7S,10S)-2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-7-甲氧基-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢嘧啶并[1,2-a]氮杂

-10-基)-N',N'-二甲基乙二酰胺(化合物6B)

使用实施例6-1中的步骤11-13中给出的程序由实施例6-1中的步骤10中的第一洗脱峰制备标题化合物。¹H NMR (599 MHz, DMSO, 50℃): δ 12.45-11.65 (m, 1 H)；9.47 (s, 1 H)；7.39-7.31 (m, 2 H)；7.18-7.09 (m, 2 H)；5.05 (bs, 1 H)；4.94 (d, J = 13.9 Hz, 1 H)；4.51-4.42 (m, 2 H)；3.58 (dd, J = 16.6, 11.1 Hz, 1 H)；3.44-3.26 (s, 3 H)；3.34-3.26 (m, 3 H)；3.19 (t, J = 9.7 Hz, 1 H)；2.95 (s, 3 H)；2.91 (s, 3 H)；2.30 (d, J = 13.7 Hz, 1 H)；2.23-2.18 (m, 1 H)；2.11 (d, J = 13.3 Hz, 1 H)；1.85-1.77 (m, 1 H)；1.10 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。LC-MS: HRMS: 计算值: 504.2253. 实测值: 504.2271。

实施例7

HIV-1整合酶检测：重组整合酶催化的链转移

对重组整合酶而言，根据WO 02/30930进行整合酶的链转移活性检测。本发明的代表性化合物在该检测中表现出链转移活性的抑制。例如，在该整合酶检测中测试实施例1至5中制成的化合物，并发现具有表B中的IC₅₀值。（在该检测中未测试化合物 6A和6B）

表B

关于使用预组装复合物进行该检测的进一步描述可见于Wolfe, A.L.等人, J. Virol. 1996, 70: 1424-1432, Hazuda等人, J. Virol. 1997, 71: 7005-7011；Hazuda等人, Drug Design and Discovery 1997, 15: 17-24；和Hazuda等人, Science 2000, 287: 646-650。

实施例8

HIV-1复制抑制的检测

根据Vacca, J.P.等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1994, 91: 4096进行T-淋巴样细胞的急性HIV-1感染的抑制的检测。本发明的代表性化合物在该检测（在本文中也称作“spread assay”）中表现出HIV复制的抑制。例如，在该检测中测试实施例1至6的化合物并发现具有表C中的IC₉₅值。

表C

实施例9

HIV整合酶突变体病毒复制抑制的检测

使用Joyce等人, J. Biol. Chem. 2002, 277: 45811, Hazuda等人, Science 2000, 287: 646,和Kimpton等人, J. Virol. 1992, 66: 2232中描述的方法进行在单周期感染性检测中测量HeLa P4-2细胞的急性HIV感染的抑制的检测。通过定点突变生成编码在整合酶基因（N155H、Q148R、Y143R、E92Q或G140S/Q148H）中含有特定突变的病毒的前病毒质粒，并通过用适当的前病毒质粒转染293T细胞来产生病毒。本发明的代表性化合物在该突变体检测中表现出HIV复制的抑制。例如，实施例1至6的化合物被发现在这些检测中具有表D中所示的IC₅₀值。

实施例10

细胞毒性

通过spread assay中各孔中的细胞的显微检查，测定细胞毒性，其中受训练的分析员观察各培养物的与对照培养物相比的任何下列形态变化：pH失衡、细胞异常、细胞生长抑制、细胞病变或结晶（即该化合物在该孔中不可溶或形成晶体）。为给定的化合物指定的毒性值是观察到上述变化之一时该化合物的最低浓度。检查该spread assay中测试的本发明的代表性化合物（见实施例8）的细胞毒性至高达0.5微摩尔浓度的浓度，且没有表现出细胞毒性。特别地，实施例1至6中阐述的化合物在高达0.5微摩尔浓度的浓度下都没有表现出细胞毒性。

实施例11

化合物4A的制备

步骤1：炔丙基化反应

向配有热电偶、氮气流、冷却浴和置顶搅拌器的100升容器中装入固体t-BuOK（7.40千克，65.9摩尔）和THF（44升）。在环境温度下搅拌该浆料直至所有固体溶解。使用丙酮/干冰浴将该溶液冷却至大约-20℃。在使内部温度保持低于-10℃的同时缓慢加入Solketal（9.58千克，72.5摩尔）。在使该反应混合物在大约-20℃下老化45分钟后，在使内部温度保持低于-10℃的同时经190分钟缓慢加入炔丙基溴（7.31升，80%甲苯溶液）。在添加炔丙基溴后，使该反应混合物在大约-25℃下老化1小时。随后从该浴中沥出丙酮，并使反应混合物缓慢升温至环境温度整夜。在环境温度下老化整夜后，如TLC合GC所示，反应完全。向该反应混合物中加入水（24.5升）和饱和NaHCO₃水溶液（24.5升）。将该溶液转移到170升萃取器中并用乙酸乙酯（2 x 24.5升）萃取。合并的有机层用另外的水（2 x 24.5升）和盐水（1 x 24.5升；注：在水洗下，相分离缓慢，因此每次洗涤另外使用盐水（8.0升）以助于加速相分离）洗涤。将该溶液在真空下浓缩以提供所需炔丙基化产物作为粗制油。该材料不经进一步提纯即用于后继步骤。

步骤2：solketal的脱保护

向配有热电偶、氮气流和置顶搅拌器的100升容器中装入步骤1的粗制炔丙基化化合物（10.7千克）、MTBE（10.7升）、水（32.1升）和5.0 N HCl（1.26升）。在环境温度下老化6小时后，如GC和TLC（30% EtOAc/己烷）所示，反应完全。在反应完全后，追加MTBE（16.1升），总计26.8升。在环境温度下老化1小时后，将该溶液转移到100升萃取器中并分离层。用另外的水（1 x 32.1升）萃取有机层。使用固体K₃PO₄（1.0千克）将合并的水层的pH从pH = 1.2调节至pH = 6.9。所需二醇的经由GC的检测收率为6.96千克（85%）。

步骤3：醛形成

向配有热电偶、氮气入口、冷却浴和置顶搅拌器的100升容器中装入步骤2中制成的二醇水溶液（pH ～ 7）（3.42千克，26.3摩尔）。将该溶液冷却至大约10℃并分4份向该冷溶液中加入NaIO₄（8.43千克，39.4摩尔）。在添加NaIO₄后，将反应混合物缓慢升温至环境温度。在环境温度下2小时后，如TLC（30% EtOAc/己烷）和GC（起始二醇的< 1 A%）所示，反应完全。在过滤前，将该浆料冷却至大约5℃并老化1小时。将该浆料过滤，用水（1 x 3.4升）漂洗滤饼。所得醛溶液直接用于下一步骤。

步骤4：氰醇形成

向配有热电偶、氮气入口、冷却浴、两个加料漏斗和置顶搅拌器的100升容器中装入步骤3的醛的水溶液（pH ～ 4）（2.25千克，22.94摩尔）并将该溶液冷却至大约6℃。在使内部温度保持低于15℃的同时，向该冷溶液中同时加入乙酸（2.76升，48.2摩尔）和8.0升KCN水溶液（2.99千克，45.9摩尔）。在添加乙酸和KCN水溶液后，将该反应混合物升温至环境温度并老化。在环境温度下老化1小时后，如TLC（50% EtOAc/己烷）和GC（起始醛的1 A%）所示，反应完全。将该反应混合物冷却至大约10℃并用饱和NaHCO₃（11.5升）缓慢猝灭。该添加后，将该批料升温至环境温度并老化1小时。将该溶液转移到100升萃取器中并用乙酸乙酯（2 x 12升）萃取。合并的有机层用25%盐水（6 x 12升）洗涤。所得氰醇溶液直接用于下一步骤。

步骤5：甲硅烷基化反应

在配有热电偶、蒸汽浴和置顶搅拌器的100升容器中，将步骤4的氰醇的乙酸乙酯溶液（假定前一步骤中100%收率，2.87千克理论量的氰醇）在真空下浓缩并用另外的乙酸乙酯（54升）冲洗至30升最终体积。在浓缩后，将蒸汽浴换成冷却浴并连接氮气入口。将该溶液冷却至大约5℃并向该冷溶液中一次性加入TBS-Cl（3.63千克，24.08摩尔）。随后分两份加入咪唑（观察到大约8℃放热）。使该批料缓慢升温至环境温度整夜。在环境温度下老化整夜后，如GC和TLC（30% EtOAc/己烷）所示，反应完全。该反应用水（6.0升）缓慢猝灭并转移到100升萃取器中。加入总共15.0升中的另外的水（9.0升），接着乙酸乙酯（6.0升）。分离层，有机层用饱和Na₂CO₃（1 x 15升）和水（2 x 15升）洗涤。所得的所需甲硅烷氧基腈以如GC测得的4.74千克（85.8%）检测收率获得。

使用2.95千克氰醇处理第二批，从而以4.79千克（86.3 %）检测收率提供所需甲硅烷氧基腈。

步骤6：偕胺肟制备

100升烧瓶配有置顶搅拌器、热电偶、带有在线过滤器的入口管和分批浓缩器。装入来自前一步骤的在乙酸乙酯中的溶液形式的甲硅烷基化羟基腈（37.1摩尔；总体积59.7升）。在浓缩过程中，加入甲醇（60升）并将该批料浓缩至大约9升体积（通过NMR，乙酸乙酯含量～1.5%）。加入甲醇（17.8升）。移除分批浓缩器并换成冷凝器和氮气入口。在18℃的初始内部温度下经1小时加入羟胺溶液（50%在水中，2.96升，48.3摩尔，1.3当量）。在添加完成后，反应温度升至39℃。继续搅拌30分钟，接着在50℃下加热90分钟。将反应混合物转移到含MTBE（71升）和水（44升）的170升萃取器中。在分相后，有机层用水洗涤两次（每次44升）。第一水相损失 = 0.29% (pH = 8), 第二水相损失 = 0.07% (pH = 7), 第三水相损失 = 0.08% (pH = 6)。通过HPLC测得有机层中偕胺肟产物的检测收率为10.05千克（99%）。该溶液直接用于后继反应。

步骤7：DMAD加合物形成

向配有热电偶、蒸汽浴和置顶搅拌器的100升容器中装入偕胺肟在MTBE中的溶液（9.86千克检测量（assay），36.2摩尔），在真空下浓缩和用另外的MTBE（54.0升）冲洗以提供液体状的纯偕胺肟产物。在浓缩后，将蒸汽浴换成冷却浴并连接氮气入口。向该纯偕胺肟中加入二甲苯（29.6升）和DABCO（41克，0.362摩尔，0.01当量）并使用丙酮/干冰浴将该溶液冷却至大约-20℃。在使批料温度保持低于-10℃的同时，向该冷溶液中缓慢加入作为在二甲苯（19.7升）中的溶液的DMAD（5.14千克）。在大约-10℃下老化1小时后，留下起始偕胺肟的3.6 A%，因此追加纯DMAD（0.05 eq. = 257 g）（总计5.40千克DMAD，38.0摩尔，1.05当量）。在大约-10℃下再老化1小时后，如HPLC所示，反应完全。将该批料升温至大约-5℃并用1% H₃PO₄（30升）缓慢猝灭。在老化1小时后，将该批料转移到100升萃取器中，分离层，有机层用水（2 x 40升）洗涤。所得的所需DMAD加合物以15.0千克（100%）检测收率获得，1:5.2比率偏向于所需异构体。HPLC表明在水洗液中没有可检出的产物损失。

步骤8：环化反应

将邻二甲苯（30升）装入配有热电偶、氮气流、加热罩、加料漏斗、蒸馏装置和置顶搅拌器的100升容器。将该邻二甲苯加热至135℃。在使内部温度保持高于125℃的同时，经由加料漏斗向该热的邻二甲苯溶液中加入作为在二甲苯中的溶液的DMAD加合物（30千克溶液 = 7.5千克加合物，18.09摩尔）。在大约137℃下老化2小时后，如HPLC所示，反应完全。停止加热并使将该批料缓慢冷却至环境温度。在大约80℃下，加入Darco KB-G木炭（2.1千克，30重量%）并继续冷却至环境温度整夜。该溶液经Solka Floc过滤，用邻二甲苯（1 x 15升）漂洗滤饼。将该溶液转移到170升萃取器中并向该溶液中加入水（37.5升）、庚烷（37.5升）和三乙胺（7.6升，54.3摩尔，3.0当量）。分离层，有机层用水（1 x 22.5升）反萃。合并的水层随后用MTBE（1 x 22.5升）洗涤。水层（pH = 10.2）用MTBE（37.5升）稀释并用85%磷酸（2.0升）酸化至pH = 3.9。分离层，水层用MTBE（1 x 22.5升）反萃。在水层中没有显著损失（<1 %）。该有机溶液在真空下浓缩并用另外的MTBE（72.0升）冲洗至大约22.0升的最终体积。将该溶液加热至大约53℃以溶解所有固体并向该热溶液中缓慢加入庚烷（60.0升）。在添加庚烷后，将该浆料缓慢冷却至环境温度整夜。在过滤前，用冰/水将该浆料冷却至大约5℃并老化1小时。过滤该浆料，用MTBE:庚烷（1 x 16.0升）和庚烷（1 x 16.0升）的1:3 混合物洗涤该滤饼。滤饼在滤罐中在氮气吹扫和高真空下在环境温度下干燥一周末。所得的所需嘧啶酮以3.80千克（54.9%）获得，95.6重量%和97.3 LCAP。HPLC显示母液和洗液中大约4.2 %产物损失。使用7.5千克（30千克溶液）DMAD加合物处理第二批，从而以4.06千克（58.7%）、 94.7重量%和97.9 LCAP提供所需嘧啶酮。

步骤9：羟胺化

催化剂的制备：在带有置顶搅拌器的5升3颈RB烧瓶中装入AuCl（63.9克，0.275摩尔）和DCM（2.75升）。向该搅拌的悬浮液中一次性加入叔丁基-Xphos（即，2-二-叔丁基膦基-2',4',6'-三异丙基联苯基）（117克，0.275摩尔）。将该混合物剧烈搅拌1小时以形成催化剂溶液。

Ag盐溶液的制备：在带有磁搅拌棒的8升玻璃瓶中装入AgSbF₆（118克，0.343摩尔）和DCE (4.3升）。将该混合物搅拌30分钟。

反应：在配有热电偶、置顶搅拌器、蒸汽浴、冷水冷凝器和氮气吹扫的100升烧瓶中装入DCM（63升）和嘧啶酮（3.66千克，3.5千克检测量，9.15摩尔）。随后在室温下向该溶液中加入催化剂溶液（2.75升，0.275摩尔）和AgSbF₆溶液（4.3升，0.343摩尔）。将该反应混合物加热至40℃，在40℃下老化5小时。通过HPLC监测反应以证实原材料完全消耗。在冷却至室温后，将该烧瓶连接至分批浓缩器。真空浓缩该混合物（～11℃，以Hg计22）。在蒸馏～55升溶剂混合物后，将该混合物的溶剂换成MeOH（总共使用24升MeOH，最终体积为～14升）。产物的MeOH溶液（40:1比率的7- vs 8-元环）原样用于下一反应步骤。

步骤10：TBS脱保护

将来自前一反应的原材料（～3.5千克，～9.15摩尔）在MeOH（～14升）中的溶液置于带有置顶搅拌器、热电偶、蒸汽浴和冷水冷凝器的5升RB烧瓶中。在室温下向该混合物中加入浓HCl（83毫升，1.01摩尔）。将该混合物加热至45℃，并在45℃下老化6小时。在反应过程中，沉淀出产物以形成浆料。在6小时后，停止加热。该混合物在环境温度下搅拌整夜。通过HPLC监测反应以证实原材料消耗（99%转化）。随后向该混合物中逐滴加入IPA（6升）。该混合物在室温下老化3小时。过滤固体，用MeOH-IPA（3:1，4升）漂洗，随后用氮气流干燥以提供灰白色固体状的产物（2.29千克净量，2.20千克检测量，8.20摩尔，90%离析收率，经2步骤）。

步骤11：酰胺形成

在带有置顶搅拌器、热电偶和冷水冷凝器的30升RB加套筒形容器中装入原材料酯（2.12千克检测量，7.89摩尔）、MeOH（11升）、3-甲基-4-氟苄基胺（1.428千克，10.26摩尔）和TEA（1.198千克，11.84摩尔）。将该混合物在55～57℃下加热整夜（～21小时）。通过HPLC监测反应以证实原材料消耗（98%转化）。随后经在线过滤器（孔径1微米）热（～55℃）过滤该混合物以将沉淀物去除到带有置顶搅拌器、热电偶和蒸汽浴的50升RB烧瓶中。将该混合物从38℃加热回45℃。随后逐滴添加乙酸（0.904升）。将该混合物冷却至室温，在此过程中经1.5小时逐滴添加水（9升）以使产物结晶。将该混合物进一步冷却至室温。过滤固体，用MeOH-H₂O（3:2，7升）漂洗，随后用氮气流干燥以提供灰白色固体状的酰胺（2.88千克净量，2.79千克检测量，7.43摩尔，94%离析收率）。

步骤12：苯磺酰基保护

为50升四颈烧瓶配备置顶搅拌器、热电偶、加料漏斗和氮气入口，接着装入醇底物（2.698千克，6.96摩尔）。加入DMF（8.1升）。在经5分钟加入固体磷酸钾（4.43千克，20.9摩尔，3当量）时，在21℃的内部温度下搅拌所得悬浮液，使用氮气罩（tent）使该磷酸盐保持为无水固体。内部温度在该添加过程中升至27℃。使用干冰/丙酮浴将该反应混合物冷却至-10℃。在达到-10℃时，经1小时逐滴添加苯磺酰氯（897毫升），在整个添加过程中保持-7℃的内部温度。在添加完成后，将该反应搅拌20分钟。HPLC分析显示产物的LCAP为92，原材料为5，双磺酰基化副产物为1。追加苯磺酰氯（44毫升，总计7.30摩尔，1.05当量）并继续搅拌40分钟。HPLC分析测得反应完全。将该反应转移到含有48升1 N H₃PO₄和10升二氯甲烷的100升萃取器中。使用另外的二氯甲烷（14.3升）以完成从该反应容器中转移。在分相后，水相的pH为7。用水（3×48升）洗涤有机层。为50升烧瓶配备热电偶、带有0.45微米在线过滤器的入口；置顶搅拌器和分批浓缩器。将二氯甲烷溶液经过滤器管送入该烧瓶并浓缩批料直至留下大约7升。加入甲醇（10.8升），继续浓缩批料直至留下大约10升甲醇。在搅拌溶液时，进行引晶。在发生温和放热（最大温度 = 27℃）和继续结晶时，继续搅拌90分钟。使用冰水浴将该批料冷却至5℃。将该批料搅拌整夜（14小时），同时升温至12℃。母液损失的HPLC分析显示3.3%。用冰水浴将该批料冷却至5℃，并过滤该批料。用3.5升冷（5℃）甲醇洗涤滤饼。分析母液和滤饼洗液的损失（母液中2.1%，滤饼洗液中0.64%）。滤饼在氮气罩下在施加真空下干燥72小时。回收3.60千克（94%）灰白色固体。NMR分析表明形成甲醇溶剂合物（存在大约0.9当量甲醇）。

¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) 1.05 (1H；br s)；2.27 (s, 3H)；3.49 (s, 2.9甲醇溶剂合物)；3.63-3.66 (m, 1H)；3.98-4.06 (m, 2H)；4.18 (m, 1H)；4.24-4.27 (d, 1H)；4.55 (m, 2H)；4.87-4.92 (m, 1H)；5.57 (s, 1H)；5.93 (s, 1H)；6.94-6.99 (t, 1H J=8.8 Hz)；7.11-7.15 (m, 1H)；7.18-7.20 (d,1H J=7.2 )；7.42 (m,1H)；7.55-7.59 (t, 2H J=7.9 Hz)；7.68-7.72 (t,1H J=7.4 Hz)；8.07-8.09 (d, 2H J=7.9 Hz)。

步骤13：不对称氢化

在O₂ < 5 ppm的氮气吹扫手套箱中，将四氟硼酸双(降冰片二烯)铑(I)（6.24克，16.68毫摩尔）、(+)-1,2-双((2R, 5R)-2,5-二异丙基phospholano)-苯 ((R,R)-iPr-DuPhos)（7.33克，17.52毫摩尔）和二氯甲烷（85毫升）添加到250毫升圆底烧瓶中。将该催化剂混合物搅拌1小时，并经套管转移到150毫升不锈钢容器中，接着15毫升二氯甲烷漂洗。将100毫升甲醇添加到第二个150毫升不锈钢容器中，密封该催化剂装料装置并从手套箱中取出。

在8.5升二氯甲烷中制备原材料（1.72千克，3.34摩尔）的溶液，随后经真空抽入10加仑搅拌高压釜中。以类似方式向该高压釜中装入8.5升甲醇并经由挠性管路连接该催化剂装料组装件。用三次氮气/真空吹扫钝化该高压釜并将该高压釜置于部分真空下。将催化剂溶液抽入该高压釜，接着甲醇漂洗。对该高压釜施以三次氢气吹扫，恒温至25℃，并用氢气加压至100 psig。将该反应混合物在600 rpm下搅拌18小时。HPLC分析证实>99%转化成所需产物，具有96% ee和～1:1 dr。该产物的所得浆料直接用于下一步骤。

非对映体的1:1混合物的¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz): 8.02-8.09 (m, 4H), 7.79 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 7.67-7.74 (m, 2H), 7.53-7.62 (m, 4H), 7.47 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 7.06-7.19 (m, 4H), 6.94 (td, J = 9.2, 4.3 Hz, 2H), 5.32-5.40 (m, 1H), 5.01-5.09 (m, 1H), 4.92 (dd, J = 10.3, 3.6 Hz, 1H), 4.84 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 4.44-4.52 (m, 3H), 4.37 (dd, J = 14.7, 5.8 Hz, 1H), 4.18 (dt, J = 12.5, 3.8 Hz, 2H), 4.13 (dd, J = 14.0, 3.8 Hz, 1H), 4.05 (dd, J = 13.8, 3.6 Hz, 1H), 3.65-3.73 (m, 2H), 3.59 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 3.41 (dd, J = 12.1, 8.9 Hz, 1H), 3.15 (br s, 2H), 2.26 (s, 6H), 1.62 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.48 (d, J = 7.3 Hz, 3H)。

步骤14：甲磺酰化

将两个来自前一氢化步骤的批料与～50升二氯甲烷（总检测量3.13千克，6.05摩尔）合并在一起。所得清澈溶液在100升圆底烧瓶中使用115升2-甲基四氢呋喃浓缩以将MeOH含量降至原材料的4摩尔%（通过HNMR）。该浓缩溶液的最终体积为～20升。将该溶液在冰浴中冷却至+3℃。形成稀悬浮液。经～5分钟加入TEA（1.26升，9.07摩尔）（从+2至+4℃放热）。在+10℃下经1小时加入MsCl（0.566升，7.26摩尔）。在1小时后，反应完全，用2升水猝灭该混合物（从+5至+7℃放热）。加入1M H₃PO₄水溶液（9.4升）。将该混合物转移到100升萃取器中，用15.5升Me-THF漂洗。追加22升水，分离相。用31升水洗涤有机层。有机层含有3.57千克检测量（99%）的产物并直接用于下一步骤。非对映体的1:1混合物的1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): 8.49 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 7.99-8.08 (m, 4H), 7.76 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.65-7.72 (m, 2H), 7.50-7.58 (m, 4H), 7.04-7.17 (m, 4H), 6.89-6.96 (m, 2H), 5.75 (dd, J = 10.0, 3.1 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.37-5.47 (m, 1H), 5.08-5.18 (m, 1H), 4.32-4.49 (m, 5H), 4.21 (dd, J = 12.1, 3.1 Hz, 1H), 4.13 (dd, J = 14.1, 3.4 Hz, 1H), 4.06 (dd, J = 13.9, 3.7 Hz, 1H), 3.16 (s, 3H), 3.11 (s, 3H), 2.24 (s, 6H), 1.56 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.48 (d, J = 7.3 Hz, 3H)。

步骤15：甲磺酸酯置换

将来自前一步骤的甲磺酸酯溶液（～1:1 dr, 3.45千克，5.79摩尔）在75 L RB烧瓶中用35升2-甲基四氢呋喃浓缩至6.9升体积。加入MeOH（24升）（通过H-NMR，13:1摩尔比的MeOH/MeTHF）。将所得浆料冷却至-15℃。在低于-15℃经1小时加入MeNH₂在EtOH中的33%溶液（7.2升，57.9摩尔）。将该浆料在-10至-8℃下搅拌7小时，随后至+14℃搅拌15小时。所得清澈溶液用17.2升MeOH浓缩至～10升体积，在冰水浴中冷却，并用3.5升水和6.9升MTBE处理。在低于+22℃加入1M H₃PO₄水溶液（23.2升）。将该混合物转移到100升筒形容器中并与24升MTBE和4升水合并。分离层，水相用31升MTBE再萃取。将水相与31升二氯甲烷合并，用4.3升5M KOH水溶液中和至pH 5-6（二氯甲烷层中2.04千克检测量或90%收率的游离碱，98:2 dr）。二氯甲烷相在75升烧瓶中用20升MeOH浓缩至～13.5升体积。将所得细浆过滤以除去125克外消旋产物，用2.3升MeOH洗涤滤饼。使用2.3升MeOH将滤液转移回75升烧瓶中。在18至21℃下经1小时加入0.638千克(-)-樟脑酸（3.19摩尔）在3.4升MeOH中的溶液并将该混合物引晶。追加1.1升MeOH，在+20℃下继续搅拌3小时。过滤该悬浮液，用2×7.0升1:1 MeOH/水洗涤滤饼，并在氮气下干燥以提供2.16千克灰白色粉末状的产物（76%收率），根据HNMR为2:1盐，通过HPLC为99.6:0.4 dr，通过API衍生化后的手性HPLC为>99.8% ee。

1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): 7.88 (br t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.12-7.21 (m, 2H), 7.02 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 5.22-5.31 (m, 1H), 4.63 (dd, J = 14.8, 6.6 Hz, 1H), 4.51 (dd, J = 14.8, 5.9 Hz, 1H), 4.13-4.22 (m, 2H), 3.84 (dd, J = 3.4, 1.2 Hz, 1H), 3.63-3.73 (m, 2H), 2.87 (t, J = 9.2 Hz, 0.5H), 2.52-2.63 (m, 0.5H), 2.38 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.14-2.26 (m, 0.5H), 1.82-1.92 (m, 0.5H), 1.69 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.52-1.60 (m, 0.5H), 1.34 (s, 1.5H), 1.38 (s, 1.5H), 0.94 (s, 1.5H)。

步骤16：最终偶联

在视觉清澈的50升筒形容器中装入倒数第二个盐（1.95千克，3.98摩尔）、DCM（20升）、0.75 M pH 6.8磷酸钾缓冲剂（20升）。将该混合物搅拌30分钟以使盐破碎，随后使其沉降。分离有机层并转移回该容器，其中装有相同缓冲剂（20升）。将该混合物搅拌10分钟，随后使其沉降。将有机层与水层分离并转移到带有置顶搅拌器和热电偶的视觉清澈的4-颈50 L RB烧瓶中。加入N,N-二甲基草氨酸（0.745千克，6.36摩尔）并搅拌10分钟。经10分钟将EDC（1.143千克，5.96摩尔）逐份添加到该混合物（内部温度保持低于～30℃），接着添加另一份EDC（0.20千克，1.29摩尔）。在25分钟后，通过HPLC监测反应混合物以证实原材料消耗（>99%转化）。将该混合物转移到视觉清澈的50升筒形容器中，其中装有GMP-水（20升）。随后用DCM（1升）和GMP-水（1升）漂洗该烧瓶。将该混合物在室温下搅拌30分钟，随后使其沉降。分离有机层，转移回该容器，再用水（20升）洗涤30分钟，收集在polyjugs中。第二天，经由在线过滤器将有机层抽吸到配有置顶搅拌器、分批浓缩器、热电偶和蒸汽浴的视觉清澈的50升RB烧瓶中以便浓缩。浓缩该混合物/在真空中将溶剂换成EtOH（EtOH的最终体积，10升，总计～12升）。将晶种在～45℃下添加到该混合物。将该混合物冷却至室温，在室温下老化整夜。过滤固体，随后用EtOH（5升）洗涤，用氮气流干燥整夜以提供灰白色固体状的所需产物（1.796千克净量，99重量%，91%离析收率）。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃, ppm): 12.35 (br s, 1 H), 9.60 (t, J = 6.3 Hz, 1 H), 7.22 (dd, J = 7.4, 1.9 Hz, 1 H), 7.20-7.16 (m, 1 H), 6.91 (dd, J = 9.5, 8.6 Hz 1 H), 5.81 (br s, 1 H), 4.96-4.91 (m, 1 H), 4.51 (d, J = 6.5 Hz, 2 H), 4.46 (t, J = 11.1 Hz), 4.31 (d, J =14.1 Hz, 1 H), 4.15 (dd, J = 11.8, 2.5 Hz, 1 H), 4.04 (dd, 14.1, J = 5.4 Hz, 1 H), 3.07 (s, 3 H), 3.02 (s, 3 H), 2.86 (s, 3 H), 2.24 (d, J = 1.9 Hz, 3 H), 1.61 (d, J = 6.9 Hz, 3 H)。

使用IKA磨机将该产物湿研磨至使用Microtrac粒度分析仪以激光衍射技术测得的大约18微米的平均粒度和大约0.5至大约100微米的粒度范围。该磨碎产物可用于生物研究，如该化合物在动物或人中的药物动力学的测定。

实施例12

化合物5A的制备

步骤1：TBS醚形成

在室温下在75升3颈RB烧瓶中装入THF（27.5升）和t-BuOK（95重量%，6.10千克，51.6摩尔）以产生浓稠但易搅拌的白色浆料。经0.5小时以纯液体形式加入顺式-2-丁烯-1,4-二醇（4.55千克，51.6摩尔），使温度保持低于20℃。将所得稀浆料在室温下老化30分钟并经0.5小时加入溶解在THF（3.5升）中的TBS-Cl（7.00千克，46.5摩尔），使温度保持低于+30℃。将反应混合物在室温下老化1-2小时并反猝灭到含有水（25升）和MTBE（25升）的萃取器中。分离层，用5% NH₄Cl（18升）和5%盐水（2x18升）洗涤有机层。将MTBE层浓缩至干（油）并用庚烷（20升）冲洗以提供粗制油形式的TBS醚 [>10千克，含有大约12 A% (=经由GC得出的面积百分比)双-OTBS]，不经进一步提纯即用于下一步骤。

步骤2：丙烯腈添加

在室温下在50升3颈RB烧瓶中装入单-TBS 醇（9.187千克，45.4摩尔）、丙烯腈（68.1摩尔，4.46升）和DBU（0.684升，4.54摩尔）并将该反应混合物加热至+60℃ 16小时。将该反应冷却至室温，用MTBE（25升）稀释，转移到100升萃取器中并用5% KH₂PO₄水溶液（20升）洗涤。分离层，用水（2x18升）洗涤有机物并浓缩。将该溶液的溶剂换成MeOH以提供在MeOH溶液（30升总体积）形式的偶联腈（通过检测，10.5千克），其原样用于下一步骤。

步骤3：偕胺肟形成

在75升3颈RB烧瓶中装入步骤2的偶联腈溶液（10.42千克，40.8摩尔，在30升MeOH中）。在室温下一次性加入羟胺（50%水溶液，2.75升，44.9摩尔）并将所得溶液加热至+60℃ 6小时（大约99.8A%转化）。将该反应混合物冷却至室温, 转移到含有MTBE（35升）和水（35升）的萃取器中。分离层（pH～9），用5%盐水（2x18升）洗涤有机相。用MTBE（15升）反萃水相部分。将合并的有机层浓缩成油并将溶剂换成甲醇（大约3 L/kg溶液）以提供偕胺肟溶液，其原样用于下一步骤。

步骤4和5：嘧啶酮形成

在75升3颈RB烧瓶中装入步骤3的偕胺肟溶液（10.95千克，38摩尔，在27升MeOH中）。将该反应混合物冷却至-20℃并经45分钟加入DMAD（4.67升，38摩尔），使温度保持低于+5℃。浓缩反应混合物并将溶剂换成邻二甲苯以制造50重量%溶液。在100升3颈RB烧瓶中装入邻二甲苯（55升）并加热至143-145℃（温和回流）。将在二甲苯中的DMAD加合物（7.4千克检测量，大约50重量%邻二甲苯溶液）经2小时添加到该热邻二甲苯溶液中。在添加完成时将该反应混合物再老化3小时，使其略微冷却至大约+130℃并在部分减压（内部温度大约120-130℃）下蒸馏邻二甲苯（15升）。使反应混合物冷却至室温以产生结晶嘧啶酮的浆料。将该浆料在室温下老化整夜。经2小时加入庚烷（大约45升），随后老化2小时。过滤该浆料，用1/1甲苯/庚烷（15升）和随后用庚烷（10升）洗涤滤饼。将滤饼在真空和氮气流下在室温下干燥3天以产生TBS-嘧啶酮（3.75千克，>97 A%，85重量%，47%收率）。

步骤6：苯磺酸化

将如步骤4和5中所述制成的TBS嘧啶酮（7.2千克，～85重量%）装入100升RB烧瓶中。在室温下加入吡啶（10.5千克），接着经30分钟加入苯磺酰氯（3.70千克），同时使温度保持在25-30℃。将该溶液在25-30℃下搅拌2小时。将该批料冷却至20℃并加入甲醇（21升），接着水（17.5升）。将该浆料在28-30℃下搅拌30分钟。在20-25℃下加入水（17.5升）。将该浆料老化30分钟。过滤浆料并用MeOH/水（3:5 v/v, 30升）洗涤滤饼。滤饼在过滤罐上在氮气流中干燥整夜以产生TBS苯磺酸盐（10.3千克，71重量%，88%收率）。

步骤7：De-TBS和乙酸盐-苯磺酸盐形成

将步骤6的TBS苯磺酸盐（9.9千克，71重量%）装入50 L RB并加入乙腈（18升）。加入Conc-HCl（95毫升）并将该溶液在15-18℃下搅拌1小时。用庚烷（2 x 9升）洗涤该混合物。将乙腈层装入72 L RB并加入吡啶（190毫升）。将该溶液浓缩至大约15升并用乙腈（18升）冲洗。加入乙酸酐（4.5千克）并将该溶液升温至75℃ 3小时。加入IPA（30升）并将该批料减压浓缩（50℃）以除去大约20升溶剂。在50℃下添加IPA以获得55升最终体积。用DARCO-G60（活性炭，900克）处理该溶液，在50℃下搅拌1小时并经小solka-floc垫温过滤到100 L RB中。滤饼在50℃下用IPA（10升）洗涤。将合并的滤液搅拌，冷却至30℃并用产物（1克）引晶。使该浆料经1小时冷却至20℃，随后冷却至2℃并老化1小时。过滤该浆料并用IPA（10升）和庚烷（10升）洗涤。将滤饼干燥以产生乙酸盐-苯磺酸盐（5.2千克，>98重量%，86%收率）。

步骤8：分子内烯丙基化

将步骤7的乙酸盐苯磺酸盐（2.50千克）和四丁基溴化铵（173克）在DCM（20升）中的溶液用氮气脱气。将脱气的DCM（6.8升）添加到Pd₂dba₃（37克）和(R,R)-萘基Trost配体(1R,2R)-(+)-1,2-二氨基环己烷-N,N'双(2-二苯基膦基-1-萘甲酰基，CAS Registry No. 174810-09-4)（134克）的混合物中。在搅拌10分钟后，将该催化剂溶液转移到搅拌的反应容器中。将反应混合物老化大约8小时，定期取样以测定反应终点。添加固体Pd(OAc)₂（60克）以猝灭该反应。将所得烯丙基化产物的溶液送入下一步骤。在相同规模下运行两批。

步骤9：氢化

将5% Pd (S)/C（828克）添加到步骤8的烯丙基化产物的DCM溶液（2.03千克，假定100%收率）中。将该浆料装入10加仑搅拌高压釜中。反应容器用氢气加压至45 psi并在30℃下加热直至氢气吸收表明完全转化。这在第二批上重复。

合并这两个氢化批料，加入MTBE（2.5升），该混合物随后与MgSO₄（0.8千克）和K₂HPO₄（0.8千克）一起搅拌30分钟。该混合物经二氧化硅（6千克）过滤。用9:1 DCM/MTBE（25升）洗涤该二氧化硅垫。将合并的滤液浓缩并将溶剂换成乙酸异丙酯（大约13升）。经1小时将该混合物冷却至22℃。所得浆料在二氧化硅垫（0.25千克）上过滤并用iPrOAc（4升）洗涤外消旋物滤饼以在干燥时产生外消旋的乙基oxepanopyrimidinone（0.17千克，10-20% ee）。浓缩滤液并将溶剂换成IPA（13升）。在80℃下用Darco G60（0.3千克）处理该混合物1小时。该混合物经Solkafloc垫热过滤，并用热IPA（4升）和丙酮（1.3升）洗涤。在60-80℃下将合并的滤液的溶剂换成IPA并经3小时冷却至23℃。经2小时将该浆料冷却至10℃并过滤。在10℃下用IPA（3升）洗涤滤饼。在氮气流下干燥该滤饼以产生乙基oxepanopyrimidinone（3.186千克，95重量%纯度）。

步骤10：溴化

在100 L 4-颈RB烧瓶中将步骤10的乙基oxepanopyrimidinone（4.08千克，10摩尔）悬浮在乙酸（30升）中。加入NBS（5.3千克，30摩尔），接着浓硝酸（3升）。经30分钟将该混合物升温至75℃并使所得均匀的橙色混合物在72-80℃下保持3小时。在反应中释放少量溴蒸气。在真空（50 Torr，在50℃下）下浓缩该混合物以除去5升橙色馏出物，留下浅黄色残留溶液。将该混合物冷却至20℃，加入DCM（15升）和水（20升）。分离有机层，水相用DCM（5升）反萃。合并的有机相用水（20升）和1.67M K₂HPO₄水溶液（30升）洗涤。合并的DCM萃取物经MgSO₄（100克）干燥，过滤并浓缩。将残留物的溶剂换成大约10升THF，产生二-溴/单-溴产物的4:3混合物，其直接用于下一步骤。

步骤11：单-溴化物形成

向来自前一步骤的二-溴/单-溴oxepanopyrimidinone的大约4:3混合物（4.8千克）中加入MeOH（20升）、NMM（708克，7摩尔）和亚磷酸二乙酯（967克，7摩尔）。将该混合物在25-40℃下搅拌1小时。在将该混合物逐渐冷却至10℃的同时，经2小时逐滴添加水（20升）。将所得浆料过滤，用1:1 MeOH/水（10升）洗涤滤饼并干燥以提供顺式/反式-单溴化物的非对映体混合物。顺式单溴化物：¹H NMR (CD₃CN 400 MHz) 7.94 (m, 2H), 7.78 (m, 1H), 7.63 (m, 2H), 5.33 (dd, 1H, J=2.7, 1.6), 4.88 (m, 1H), 4.25 (dd, 1H, J=14.3, 3.4), 4.14 (dd, 1H, J=14.3, 2.9), 4.07 (dd, 1H, J=14.3, 1.6), 3.73 (s, 3H), 3.70 (m, 1H), 2.39 (m, 1H), 1.99 (m, 1H), 0.87 (t, 2H, J=14.9)；反式单溴化物¹H NMR (CD₃CN 400 MHz) 7.94 (m, 2H), 7.78 (m, 1H), 7.62 (m, 2H), 5.47 (dd, 1H, J=10.0, 2.8), 5.03 (m, 1H), 4.36 (dd, 1H, J=12.4, 2.8), 4.07 (dd, 1H, J=14.0, 4.3), 3.82 (dd, 1H, J=12.4, 10.0), 3.74 (s, 3H), 3.72 (m, 1H), 1.98 (m, 1H), 1.86 (m, 1H), 0.85 (t, 2H, J=14.9)。

步骤12：酰胺化

在50升圆底烧瓶中装入DCM（10.5升）。加入4-氟苄基胺（578克，4.62摩尔），该浅黄色溶液用N₂脱气大约60分钟。经60分钟将Me₃Al（2M，在己烷中，2.3升，4.62摩尔）缓慢添加到苄胺溶液中。该溶液在室温下老化75分钟。经20分钟将溶解在DCM（6升）中的步骤11的溴化物产物（1.5千克，3.08摩尔）添加到胺-Al络合物溶液中。用冰浴控制轻微放热。该反应混合物在室温下老化60分钟。在完全反应后，将该混合物泵入在10℃下的含有1N HCl（15升）的50升筒形容器。通过将该混合物缓慢添加到HCl水溶液中，控制相对较大的放热和快速气体释放。在室温下用1N HCl（2 x 15升）、饱和NaHCO₃（15升）和饱和盐水（15升）洗涤有机物。将含有酰胺产物（通过HPLC检测，1.69千克，95%）的有机层浓缩并将溶剂换成甲醇。该MeOH溶液的最终体积为大约25升，且该酰胺溶液不经进一步提纯即用于下一步骤。

LCMS: (M+H)+ = 582.0。

在相同规模下运行两批。

步骤13：甲胺置换

在配有冷却护套、置顶搅拌器、温度探针的100升筒形容器中装入在甲醇中的原材料溶液（通过HPLC，2.80千克）。批料体积为28升。将该批料冷却至5℃。经15分钟加入在乙醇中的甲胺溶液（33重量%，8 M，3.15升）。观察到轻微放热且批料温度变成11℃。老化30分钟后，经1小时将该批料升温至20℃。单独地，通过混合一水合p-TSA（3.67千克）和16升水，制备PTSA的1 M溶液。在添加甲胺后4小时，将该溶液装入该批料。由于放热，批料温度变成28℃。将该批料引晶。在搅拌3.5小时后，形成稠浆。经45分钟将水（45升）添加到该批料中。将该批料在20℃下老化整夜（9小时）。过滤收集固体产物，并用2/1水/MeOH（3 x 5升）和水（10升）洗涤湿滤饼。该湿滤饼在过滤罐上用氮气流干燥整夜，随后在35-40℃真空炉中用氮气流干燥3天。粗产物在乙酸乙酯（27升）中制浆，搅拌2小时并过滤。用乙酸乙酯（13升）洗涤湿滤饼，随后在过滤罐上用氮气流和真空抽吸干燥整夜以产生胺p-TSA盐（2.15千克，79%）。非对映体过量为在置换反应中97:3，在以甲磺酸盐形式离析后98.5/1.5。LC-MS M+1 391

NMR数据: ¹H NMR (500.1 MHz, CD₃OD) δ 7.63 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.37 (m, 2H), 7.18 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.04 (m, 2H), 4.97 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 4.60 (m, 1H), 4.54 (s, 2H), 4.13 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 4.06 (dd, J = 12.9, 7.8 Hz, 1H), 3.84 (dd, J = 12.8, 3.0 Hz, 1H), 2.85 (s, 3H), 2.36 (s, 3H), 2.19 (m, 1H), 1.96 (m, 1H), 1.07 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。

步骤14：酰化

在50升烧瓶中装入二甲基草氨酸（0.64千克）、DCM（16升）和NMM（1.12千克）。将该混合物冷却至15℃。加入特戊酰氯（0.62千克）并在室温下老化2小时。一次性加入步骤13的胺PTSA盐（2.01千克）并老化2小时。用水（12升）和5M HCl（0.21升）猝灭该混合物。分离下方有机层并用水（2 x 12升）洗涤。将该溶液浓缩至低体积并加入IPA（8升）。将该溶液加热至55-60℃，引晶（24克化合物5A，晶形II），通过添加IPA，在55-60℃下继续更换溶剂以使体积保持在大约10升。将该浆料在55-60℃下老化4.5小时，冷却至室温并过滤。用IPA/庚烷（2 x 8升）和庚烷（2 x 4.5升）洗涤滤饼并在室温下真空干燥以提供白色结晶固体状的标题化合物（1.6千克，>98重量%纯度，91%收率）。LCMS: (M+H)⁺ 490.1；¹H NMR (500 MHz, CDCl₃): δ 12.32 (br.s, 1 H)；9.63 (t, J = 6.1 Hz, 1 H)；7.40 (m, 2 H)；6.98 (m, 2 H)；5.85 (br s, 1 H)；4.64 (m, 1 H)；4.56 (d, J = 6.5 Hz, 2 H)；4.45 (t, J = 10.4 Hz, 1 H)；4.22 (d, J = 3.1 Hz, 2 H)；4.15 (dd, J = 11.8, 2.8 Hz, 1 H)；3.09 (s, 3 H)；3.04 (s, 3 H)；2.87 (s, 3 H)；2.08 (m, 1 H)；1.85 (m, 1 H)；1.16 (t, J = 7.3 Hz, 3 H)。

使用针（pin）磨机将该标题产物干研磨至使用Microtrac粒度分析仪以激光衍射技术测得的大约23微米的平均粒度和大约0.9至大约160微米的粒度范围。该磨碎产物可用于生物研究，如该化合物在动物或人中的药物动力学的测定。

实施例13

化合物6A的制备

步骤1：乙烯基醇的制备

向400升hastalloy容器中装入在THF中的1M乙烯基氯化镁（372千克）。乙烯基氯化镁经过滤器转移到玻璃衬里容器中。将该试剂冷却至-10℃，随后在氮气氛下加入氯化铜（I）（4.82千克）。

将(S)-(+)-苄基glycidal醚（40千克）装入玻璃衬里容器，接着THF（177.8千克），并将该溶液冷却至0℃。在使反应温度保持低于0℃的同时经3小时将该溶液添加到乙烯基氯化镁中。将该混合物老化10分钟，此时HPLC表明反应完全。随后在使温度保持低于25℃并同时控制乙烯排放物的同时通过经2小时添加甲醇（19.5千克）来猝灭该反应混合物。在甲醇猝灭后，经45分钟加入2N HCl（412千克），随后将该批料在室温下搅拌整夜。随后分离水层和有机层，水层用MTBE（148千克）反萃，合并的有机物相继用1N HCl（98千克）、水（50千克）、Na₂S₂O₃（10%，在100千克水中）和水（200千克）洗涤。随后将该批料浓缩至80升体积，随后加入DMAC（83千克），接着庚烷（800升），将该溶液蒸馏至大约170升以提供醇溶液（150升总量；44.86千克检测量；96%收率）。

步骤2：甲基化

将步骤1的醇的DMAC溶液＋DMAC洗液（50千克）装入玻璃衬里容器中并将该溶液冷却至0℃。分六份装入叔丁醇钠（32.3千克）并将该混合物老化15分钟，随后再冷却至0℃。随后在保持小于25℃的内部温度的同时经40分钟加入硫酸二甲酯（40.9千克）。随后将该反应混合物在20℃下老化30分钟。随后将2N HCl（145千克水和34.2千克浓HCl）经30分钟添加到反应混合物中，接着MTBE（133.2千克）。除去下方水性酸性层，有机物用5重量%LiCl溶液洗涤两次（200升，接着150升），接着水（150千克）。在使内部温度保持小于35℃的同时将该有机物浓缩至50-60升。随后在使内部温度保持小于35℃的同时装入庚烷（200升）并浓缩至50-60升。用庚烷（140升）稀释该浓缩溶液并过滤到干净的塑料衬里的钢鼓（总计227升；47.02千克检测量；96%检测收率和KF 79ppm）中。

步骤3：硼氢化以产生伯醇

将步骤2的甲基醚（23.5千克，在庚烷中，29.5重量%）在惰性气体下装入玻璃衬里的钢容器，将该溶液冷却至0℃，随后在使温度保持小于20℃的同时经30分钟装入在THF中的1M硼烷（51.2千克）。随后将该混合物老化15分钟，此后HPLC证实完全反应。通过在使温度保持小于20℃的同时经20分钟小心加入2M NaOH（61.4千克），猝灭反应。将该批料再冷却至0℃，吹扫反应器顶空以除去任何残留H₂。

一旦猝灭完成，在使温度保持小于20℃的同时经50分钟装入H₂O₂（11.63千克），接着老化1小时。将该批料再冷却至0℃，通过在使温度保持小于20℃的同时经1小时加入10% Na₂S₂O₃（94千克），猝灭反应。再吹扫顶空以除去任何痕量氧。

使该双相混合物沉降，并除去下方有机相。水相用MTBE（89.4千克）反萃两次。将合并的有机物浓缩至50升体积。将庚烷（100千克）添加到该浓缩有机物中并将批料再蒸馏至50升。加入DCM（67.5千克），并将该批料投入干净的塑料衬里鼓中。用DCM（67.5千克）漂洗该容器以获得产物的最终DCM:庚烷溶液（169.8千克；23.41千克产物，91%）。

步骤4：氧化成醛

将NaHCO₃（3.07千克）和KBr（1.86千克）装入玻璃衬里的钢容器。用N₂吹扫容器后，加入水（70千克）。将步骤3的在DCM:庚烷中的醇（169.8千克，13.79重量%）经过滤器装入该容器，将该混合物冷却至0℃。随后加入TEMPO（0.49千克），接着在使温度保持小于20℃的同时经1小时加入次氯酸钠（95千克）。HPLC表明在10分钟老化后反应未完全，并追加次氯酸钠（20千克）以完成该反应。通过在使温度保持小于20℃的同时经20分钟添加10% Na₂S₂O₃水溶液（51.5千克），猝灭该反应。除去含产物的下方有机相，并用MTBE（58.4千克）萃取水层。将合并的有机流装入干净的塑料衬里的钢鼓（22.04千克产物，作为在MTBE/DCM中的溶液；9.87重量%，95%）。

步骤5：亚硫酸氢盐加合物的制备

将焦亚硫酸钠（11.9千克）和水（55.1千克）装入玻璃衬里的钢容器，接着添加步骤4的醛（223.4千克，9.87重量%），随后将该混合物升温至28℃。老化10分钟后，HPLC证实形成该亚硫酸氢盐加合物。使该双相混合物分离，除去含产物的水层。有机层用水（55.2千克）洗涤，随后合并两个水相，并用MTBE（55.1千克）洗涤。将水层置于干净的塑料衬里的钢鼓（在水中的31.2千克亚硫酸氢盐加合物；21.75重量%）中。

步骤6：Boc-保护的Strecker加合物制备

将乙胺·HCl（11.69千克）和NaCN（7.03千克）装入含1% NaOCl和1M NaOH（250升）的配有洗涤器的400升玻璃衬里的钢容器。使用真空/N₂周期再钝化该容器，此后加入水（106.1千克），接着甲醇（74.04千克）。将该溶液搅拌5分钟，随后装入步骤5的亚硫酸氢盐加合物水溶液（143.4千克，21.75重量%）。随后在使温度保持小于30℃的同时经15分钟装入TEA（29.22千克）。随后将该混合物老化总共3小时。HPLC表明不完全反应，因此追加NaCN（0.703千克，0.15当量）和乙胺.HCl（1.17千克，0.15当量），接着TEA（2.9千克，0.3当量）。随后将MTBE（69.4千克）添加到反应混合物中。除去含氰化物残留物的水相，随后用5% NaHCO₃溶液（93.6千克）洗涤该有机相。

将Boc酐（22.95千克）装入预升温至30℃的玻璃衬里的钢容器。在容器上的真空/N₂周期后，将Boc酐溶解在MTBE（46.24千克）中，将所得溶液冷却至25℃，并经10分钟将该冷却溶液添加到该Strecker加合物溶液中。随后将该批料在25℃下老化总共48小时。HPLC表明不完全反应，因此进一步装入Boc-酐（13.72千克，1.3当量），将该混合物在25℃下搅拌16小时，随后将该批料升温至50℃ 5小时。随后加入10% NaHCO₃溶液（93.6千克）。除去水相，并将该有机物浓缩至63升体积。加入甲醇（123.4千克）并将该批料浓缩至63升。加入甲醇（123.4千克）并将该溶液置于干净的塑料衬里的钢鼓（30.6千克作为甲醇溶液形式的Boc Strecker加合物；27.8重量%，90%）中。

步骤7：偕胺肟形成

将步骤6的腈的甲醇溶液（30.6千克，110千克，27.7重量%）、MeOH（47千克）和水（30千克）装入玻璃衬里容器并在25℃下搅拌该混合物。在使批料温度保持在40℃或更低的同时经30分钟将羟胺（10.7千克）添加到该反应混合物中。将所得搅拌溶液加热至50℃，并在此温度下老化14小时。随后将该反应混合物冷却至25 ℃，并加入MTBE（89千克）。加入AcOH水溶液（9.7千克在150千克水中），将该反应混合物搅拌15分钟。除去水层，接着有机物。水层用MTBE（57千克，随后77千克）反萃两次。分析合并的有机萃取物的残留羟胺含量。使用部分真空将该批料浓缩至～200升的体积。将该偕胺肟的MTBE溶液在氮气下在5℃下储存在塑料衬里的钢鼓中以供随后使用。

步骤8：DMAD加合物形成

将步骤7的偕胺肟在MTBE中的溶液装入玻璃衬里容器，接着添加MeOH（26千克）。将所得溶液冷却至0℃，随后在使温度保持在10℃或更低的同时经15分钟加入DMAD（12.12千克）。将该溶液升温至20℃并在此温度下老化16小时。将NaHCO₃水溶液（6.6千克在132千克水中）添加到该批料中并搅拌15分钟。除去水层并用水（60千克）洗涤有机层。使用部分真空将该批料浓缩至大约80升的体积。将甲苯（173千克）添加到该批料中，并使用部分真空浓缩至大约190升的体积。这提供DMAD加合物的24.3重量%溶液（总计159.4千克；38.74千克检测量；87%收率，经2步骤），其在氮气下在5℃下储存在塑料衬里的钢鼓中以供随后使用。

步骤9：嘧啶酮形成

将步骤8的在甲苯中的DMAD加合物溶液（158.6千克，24.46重量%）经2小时转移到大约140℃的含回流二甲苯（137.6千克，160升）的玻璃衬里的钢容器中。在该加合物转移过程中使甲苯和MeOH馏出。将第二份二甲苯（86千克，100升）装入该容器，并继续蒸馏直至实现260升的最终体积。经7小时将该批料冷却至25℃，此后HPLC表明完全反应。将该反应流过滤，并用二甲苯（2 x 17.2千克）洗涤以提供15.67重量%嘧啶酮溶液（总计148.7千克；15.7重量%，23.3千克检测量；66%），将其在氮气下在5℃下储存在塑料衬里的钢鼓中以供随后使用。

步骤10：酰胺形成

将步骤9的嘧啶酮甲酯的二甲苯溶液（23.3千克的15.7重量%二甲苯溶液；148.7千克）装入含1N HCl（200升）的配有洗涤器的玻璃衬里容器。该二甲苯溶液随后经蒸馏浓缩至50升最终体积（2.15体积）。随后将甲醇（184.5千克）装入该容器，接着TEA（9.08千克）和4-氟苄基胺（7.5千克）。将该容器内容物加热至63℃并在此温度下老化16小时。将该批料冷却至低于40℃并追加4-氟苄基胺（4.88千克，0.5当量）。将该批料在62℃下再放置16小时，随后冷却至环境温度并再老化48小时。随后将该批料再加热至温和回流3小时。将该容器内容物浓缩至80升的最终体积，随后加入MTBE（148千克）。该有机流相继用5% NaHCO₃溶液（100千克）、10% AcOH溶液（100千克）、1N HCl（50千克）和水（100千克）洗涤。将该有机物浓缩至50升的最终体积。加入乙醇（78.9千克）并将该有机流浓缩至138升的最终体积。将该容器的内容物转移到干净的塑料衬里的钢鼓中（18重量%，23.23千克酰胺，90%）。

步骤11：脱苄基化

将在乙醇（总计93.4升；86.2千克+ 乙醇洗液(10升）)中的起始酰胺溶液（15.5千克）添加到含20% Pd/C（3.10千克）的反应容器中，接着添加1N HCl水溶液（3.1升）。排空该容器并用氮气吹扫，将该混合物调节至大约20℃的温度。随后排空该容器，随后设定至4.1 Barg的氢压。该反应混合物在搅拌下升温至40℃直至氢吸收停止。随后将反应混合物经solka floc过滤，用乙醇（40.4千克）洗涤并收集在干净的钢塑料衬里鼓（总计137升；12.56千克检测量；95%检测收率）中。进行第二次运行。

将来自这两个运行的醇在乙醇中的批料合并（182.8千克，10.28重量%）装入玻璃衬里容器并将该溶液浓缩至50升的最终体积。加入MTBE（111.6千克，151升），接着TEA（7.35千克，2当量）和水（150.7千克）。将所得混合物搅拌15分钟。除去含产物的水层，接着有机物。用MTBE（2 x 41.8千克）洗涤水相。合并的MTBE馏分用TEA（0.73千克，0.2当量）在水（56.5千克）中的溶液洗涤。除去下方水相并与之前的水相（都含有产物）合并。向含产物的该水相中加入MTBE（112千克），接着1N HCl（98千克）。将该混合物搅拌30分钟，随后除去下方水层。将含产物的有机流浓缩至40升体积，随后用THF（178千克）冲洗并浓缩至94升。这提供醇的THF溶液（18.45千克检测量；98%回收率），将其在氮气下在5℃下储存在塑料衬里的钢鼓中以供随后使用。

步骤12：七元环的甲磺酰化和环化

将步骤11的产物的THF溶液装入玻璃衬里容器，随后冷却至0℃，此后在使温度保持在10℃或更低的同时经15分钟加入TEA（19.6千克）。在使温度保持在10℃或更低的同时经35分钟加入MsCl（16千克）。将该溶液在10℃下老化10分钟。随后加入水（53千克），接着2N HCl水溶液（3.85千克在50千克水中），加入MTBE（111千克，150升）并将该批料搅拌15分钟。除去水层，接着有机层。用MTBE（37千克）反萃水馏出物，并用水（40千克）洗涤合并的有机物。使用部分真空将该批料浓缩至大约80升的体积。将甲苯（87千克）添加到该批料中，并使用部分真空浓缩至大约60升体积（KF = 1437 ppm）。该甲磺酸盐溶液随后用DMSO（58千克）稀释并转移到玻璃衬里容器中。

将NaHCO₃（20.7千克）装入单独的玻璃衬里容器中，接着DMSO（117千克），将该溶液加热至35℃，此后经1小时将甲磺酸盐溶液转移到其中。将所得混合物加热至80℃。将反应混合物在80℃下加热16小时，此时HPLC分析表明反应完全。将该批料冷却至25℃。在该批料中加入EtOAc（89千克），接着2N HCl水溶液（14千克在95千克水中）。除去水层，接着有机层。用EtOAc（82千克）反萃水馏出物，并用水（90千克）洗涤合并的有机物。使用部分真空将该批料浓缩至～54升的体积（KF = 138 ppm）以提供环化产物的18.67重量%溶液（总计83.7千克；15.63千克检测量；88%收率，经2步骤），将其在氮气下在5℃下储存在塑料衬里的钢鼓中以供随后使用。

步骤13：苯磺酸盐的形成

将步骤12的在乙酸乙酯中的酚（15.5千克；83.6千克，18.5重量%）装入玻璃衬里的钢容器，并将该溶液冷却至5℃。随后在使批料温度保持小于10℃的同时加入TEA（6.84千克），接着经10分钟加入苯磺酰氯（10.85千克）。随后将该批料在小于10℃的温度下老化1小时，随后升温至20℃，随后将该批料在此温度下搅拌16小时。加入EtOAc（13.9千克），接着水（31千克）和TEA（300克，0.1当量）。将该混合物升温至50℃并老化2小时，随后冷却至25℃，加入DCM（104.6千克）。加入1N HCl（38.6千克）并将该混合物搅拌15分钟。除去有机相，用DCM萃取（21千克）水层。用5% NaHCO₃溶液（129千克）洗涤合并的有机物，其随后用DCM（21千克）反萃。将合并的有机物在部分真空下浓缩至120升的体积。加入乙酸乙酯（50千克）并将有机物浓缩至170升的最终体积并直接用于下一步骤。

步骤14：Boc-脱保护

将步骤13的在EtOAc中的Boc-胺溶液（170升，16.8千克）装入玻璃衬里容器并将该溶液冷却至15℃。在使温度保持小于30℃的同时经20分钟加入甲磺酸（7.51千克）。将该混合物小心加热至60℃的内部温度并老化3小时。随后将该混合物冷却至10℃并在使温度保持小于20℃的同时加入1 M K₂CO₃溶液（K₂CO₃ [10.8千克]在水 [78千克]中）。除去水层，接着有机层。用EtOAc（30.2千克）反萃水馏出物。用水（56千克）洗涤合并的有机物并随后浓缩至56升的最终体积。添加EtOAc（89千克）以将该溶液稀释至140升以提供胺溶液（总计140升；16.58千克检测量；99%收率，经2步骤），将其在氮气下在5℃下储存在塑料衬里的钢鼓中以供随后使用。

步骤15：烯胺的形成

将步骤14的胺的EtOAc溶液（总计140升；16.58千克检测量)和叔丁醇（1.13千克）装入玻璃衬里容器，接着添加叔丁醇（1.13千克）。将所得溶液冷却至5℃，随后在使温度保持在10℃或更低的同时经10分钟加入乙酸（2.01千克）。在使温度保持在10℃或更低的同时经40分钟加入次氯酸钠（40.9千克）。将该溶液在5℃下老化20分钟。追加次氯酸钠（11千克，0.3当量），该批料老化10分钟。将该批料升温至20℃并停止搅拌。除去水层，用5% NaCl水溶液（2.25千克在45千克水中）洗涤有机层。将该批料冷却至5℃，随后在使温度保持在10℃或更低的同时经20分钟加入DBU（5.1千克）。将该批料在10℃下老化20分钟，此时HPLC分析表明该反应>98%转化成烯胺。

将水（85千克）添加到该批料中，将该混合物搅拌15分钟。除去水层，接着有机物。用EtOAc（46千克）反萃水馏出物，随后用亚硫酸钠（1.92千克在16千克水中），随后NaCl水溶液（1千克在51千克水中）洗涤合并的有机物。使用部分真空将该批料浓缩至～50升的体积。将MTBE（89千克）经20分钟添加到该批料中，将该浆料冷却至15℃并老化整夜。将该批料过滤，用MTBE（27千克）洗涤滤饼，随后在过滤器上使用氮气正压干燥（检测收率为74%）。

随后将该烯胺固体装入玻璃衬里容器，接着ACN（59千克），将所得浆料加热至50℃直至所有固体溶解。随后将水（75千克）经20分钟添加到该批料中。经1小时将该批料冷却至5℃，过滤，所得湿滤饼用ACN（6千克）和水（8千克）的1:1混合物洗涤三次，随后在该炉中在真空下在50℃下干燥整夜以提供黄色固体形式的烯胺，8.8千克，75%（来自粗制烯胺）。

¹H NMR: (400 MHz, d6-DMSO): δ 9.15 (1H, t, J = 6.0 Hz), 7.94-7.91 (2H, m), 7.80 (1H, t, J = 7.6 Hz), 7.65 (2H, t, J = 7.6 Hz), 7.35-7.30 (2H, m), 7.18-7.11 (2H, m), 5.15 (1H, t, J = 5.4 Hz), 4.80 (1H, t, J = 8.0 Hz), 4.35 (1H, dd, J = 13.6, 3.6 Hz), 4.31 (2H, d, J = 6.0 Hz), 3.92-3.86 (1H, m), 3.77 (1H, dd, J = 13.6 Hz, 4.0 Hz), 3.26 (3H, s), 2.93-2.86 (2H, m), 2.32-2.25 (1H, m), 1.90-1.82 (1H, m), 1.15 (3H, t, J = 7.0 Hz)。

步骤16：不对称氢化

在O₂ < 5 ppm的氮气吹扫手套箱中，将四氟硼酸双(降冰片二烯)铑(I)（345 毫克，0.922毫摩尔）、(S)-1-[(R)-2-(二-2-呋喃基膦基)二茂铁基]乙基二-叔丁基膦（505 毫克，0.968毫摩尔）和二氯甲烷（4.6毫升）添加到20毫升管瓶中。将该催化剂混合物搅拌30分钟，并借助10毫升2,2,2-三氟乙醇（TFE）转移到25毫升不锈钢容器中。将10毫升TFE添加到第二个25毫升不锈钢容器中，密封该催化剂装料装置并从手套箱中取出。

在350毫升TFE中制备12.16毫升（147毫摩尔）二氯乙酸溶液。在剧烈搅拌下缓慢加入55毫升(184毫摩尔）异丙醇钛(IV)，并搅拌至该混合物均匀。借助50毫升TFE添加原料烯胺（100克，184毫摩尔）并搅拌产生深红橙色溶液。借助追加的80毫升TFE将该溶液经真空抽入1升搅拌高压釜。经由挠性管路连接该催化剂装料组装件。用三次氮气/真空吹扫钝化该高压釜并置于部分真空下。将催化剂溶液抽入该高压釜，接着TFE漂洗。对该高压釜施以三次氢气吹扫，恒温至25℃，并用氢气加压至100 psig。将该反应混合物在1000 rpm下搅拌18小时。LC-MS: (M+H)⁺= 545.0。

该粗制反应溶液用1.5升IPAC稀释，随后在室温下加入乙醇酸钾（在水中的1升5M溶液），将该混合物老化2小时。该反应混合物随后用5重量%NaHCO₃水溶液，和随后用5重量% NaCl水溶液洗涤。有机层经Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩至0.5升，在50-60℃下将浓缩的有机物与一水合PTSA（30.3克）、一水合对甲苯磺酸在0.9升IPAc中在2%晶种存在下混合。将该浆料在室温下老化12小时，过滤，用0.1升IPAC和随后用200毫升IPAc/正庚烷（1:1混合物）洗涤，固体在室温下真空干燥以提供胺PTSA盐（105.9克，92.2重量%，73%收率）。

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 9.31 (br s, 1 H), 9.01 (br s, 1H), 7.98-7.96 (m, 2 H), 7.68-7.65 (m, 1 H), 7.56-7.50 (m, 4H), 7.20 (dd, J = 8.3, 5.5 Hz, 2H), 7.07 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.86 (t, J = 9.7 Hz, 2H), 5.25 (dd, J = 15.0, 5.7 Hz, 1 H), 4.51 (dd, J = 14.6, 6.4 Hz, 1 H), 4.37 (br s, 1 H), 4.23 (dd, J = 14.6, 5.8 Hz, 1H), 3.55 (br s, 1 H), 3.37-3.26 (m, 2H), 3.18 (s, 3H), 3.14-3.09 (m, 1H), 2.32 (s, 3 H), 2.28-2.20 (m, 1 H), 2.17-2.04 (m, 2H), 1.90 (br s, 1H), 1.83-1.70 (m, 1 H), 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3 H)。

随后可用适当量的碱（例如，NaOH或甲胺）处理该胺PTSA盐，随后可以与实施例6-1的步骤12中所述类似的方式用N,N-二甲基草氨酸将所得游离胺酰化以提供化合物6A，其可以例如以实施例6-1的最后描述的方式重结晶。

实施例14

实施例13的步骤15中烯胺的替代制备

步骤1：酮的形成

在带有置顶搅拌器的150毫升RB中将醇原材料（4.1克，7.92毫摩尔）溶解在乙腈（30毫升）和水（15毫升）中。加入三水合三氯化钌（0.041克，0.158毫摩尔），接着在室温下一次性加入溴酸钠（0.7克，4.64毫摩尔），导致经10分钟从18℃温和且逐渐放热至25℃。该反应混合物在室温下老化1小时，随后加入水（15毫升）并将该浆料在室温下老化30分钟。随后过滤该浆料，用60/40水/乙腈（25毫升）漂洗，在真空炉中在45℃下干燥4小时以提供白色结晶固体状的所需酮（3.3克，83%收率）。

步骤2：烯胺的形成

将乙胺（2.0M在THF中，2.91毫升）添加到硫酸钠（331毫克）和乙酸（384毫克）在MeCN（6毫升）中的混合物中，并将所得浆料老化5分钟，此后加入在MeCN（6毫升）中的原料酮（600毫克）。该反应混合物随后在35℃下老化3小时，冷却至室温，过滤，并浓缩至6毫升。将所得混合物添加到1M NaHCO3水溶液（40毫升）中并过滤固体，用水洗涤并在35℃下真空干燥12小时以提供黄色固体（530毫克，82%收率）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9.16 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 7.93-7.91 (m, 2H), 7.80 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.34-7.31 (dd, J = 8.6, 5.6 Hz, 2H), 7.18-7.11 (m, 2H), 5.15 (br s, 1H), 4.79 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 4.36-4.33 (m, 1H), 4.31 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.92-3.86 (m, 1H), 3.77 (dd, J = 13.6 Hz, 4.0 Hz, 1H), 3.26 (s, 3H), 2.90 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.32-2.25 (m, 1H), 1.89-1.84 (m, 1H), 1.15 (t, J = 7.0 Hz, 3H)。

尽管上述说明书教导了本发明的原理并提供实施例以供举例说明，但本发明的实践包括落在下列权利要求的范围内的所有常见变动、调节和/或修改。

Claims

1.式I的化合物：

(I),

或其可药用盐，其中：

Y是CH₂或O；

R^1A是H或C_1-3烷基；

R^1B是H、C_1-3烷基或O-C_1-4烷基；

R²是H或C_1-3烷基；且

R³是C_1-3烷基；

且条件是：

（C）当Y是O时，则R^1A和R^1B都是 H且R²是C_1-3烷基；和

（D）当Y是CH₂时，则

（i）R²是H，R^1A是C_1-3烷基且R^1B是C_1-3烷基或O-C_1-4烷基；

（ii）R²是C_1-3烷基，R^1A是H，且R^1B是H；或

（iii）R²是H，R^1A是H，且R^1B是O-C_1-4烷基。

2.根据权利要求1的化合物或其可药用盐，其中：

X¹是F或CH₃；

X²是H、F或CH₃，且条件是：

（A）当X¹是F时，则X²是H或CH₃，和

（B）当X¹是CH₃时，则X²是F；

Y是CH₂或O；

R^1A是H或CH₃；

R^1B是H、CH₃或OCH₃；

R²是H、CH₃或CH₂CH₃；且

R³是CH₃或CH₂CH₃；

且条件是：

（C）当Y是O时，则R^1A和R^1B都是H，R²是CH₃或CH₂CH₃，且R³是CH₃；和

（D）当Y是CH₂时，则

（i）R²是H，R³是CH₃，R^1A是CH₃且R^1B是CH₃或OCH₃；

（ii）R²是CH_3，R³是CH₃，R^1A是H，且R^1B是H；或

（iii）R²是H，R³是CH₂CH₃，R^1A是H，且R^1B是OCH₃。

3.根据权利要求2的化合物或其可药用盐，其中该化合物是式II的化合物：

(II),

条件是：

（C）当Y是O时，则R^1A和R^1B都是H且R²是CH₃或CH₂CH₃；和

（D）当Y是CH₂时，则

（i）R²是H，R^1A是CH₃且R^1B是CH₃或OCH₃，或

（ii）R²是CH₃，且R^1A是H，且R^1B是H。

4.根据权利要求2的化合物或其可药用盐，其中该化合物是式III的化合物：

(III),

其中R²是H。

5.根据权利要求1至4任一项的化合物或其可药用盐，其中该化合物是立体异构体纯的化合物。

6.根据权利要求1的化合物或其可药用盐，其中该化合物是化合物1A、化合物1B、化合物2A、化合物2B、化合物2C、化合物2D、化合物3A、化合物3B、化合物4A、化合物4B、化合物4C、化合物4D、化合物5A、化合物5B、化合物5C、化合物5D、化合物6A或化合物6B。

7.根据权利要求6的化合物或其可药用盐，其中该化合物是化合物1A、化合物2A、化合物2D、化合物4A、化合物4B、化合物4C、化合物5A、化合物5B或化合物6A。

8.根据权利要求7的化合物或其可药用盐，其中该化合物是化合物1A。

9.根据权利要求7的化合物或其可药用盐，其中该化合物是化合物2A。

10.根据权利要求9的化合物，其是化合物2A的晶形，其中该结晶化合物2A以包含在大约8.5、9.3、13.3、17.0、18.8和20.8度的2θ值的使用铜K_α辐射获得的X-射线粉末衍射图为特征。

11.根据权利要求7的化合物或其可药用盐，其中该化合物是化合物2D。

12.根据权利要求7的化合物或其可药用盐，其中该化合物是化合物4A。

13.根据权利要求12的化合物，其是化合物4A的晶形，其中该结晶化合物4A以包含在大约6.1、10.4、12.9、13.7、19.4和22.9度的2θ值的使用铜K_α辐射获得的X-射线粉末衍射图为特征。

14.根据权利要求7的化合物或其可药用盐，其中该化合物是化合物4B。

15.根据权利要求7的化合物或其可药用盐，其中该化合物是化合物4C。

16.根据权利要求7的化合物或其可药用盐，其中该化合物是化合物5A。

17.根据权利要求16的化合物，其是化合物5A的晶形，其中该结晶化合物5A以包含在大约8.4、8.6、18.0、20.5、20.8、25.2、26.1和27.2度的2θ值的使用铜K_α辐射获得的X-射线粉末衍射图为特征。

18.根据权利要求16的化合物，其是化合物5A的晶形，其中该结晶化合物5A以包含在大约8.4、8.6、18.0、20.4、20.8、25.9、26.2和27.1度的2θ值的使用铜K_α辐射获得的X-射线粉末衍射图为特征。

19.根据权利要求7的化合物或其可药用盐，其中该化合物是化合物5B。

20.根据权利要求7的化合物或其可药用盐，其中该化合物是化合物6A。

21.根据权利要求20的化合物，其是化合物6A的晶形，其中该结晶化合物6A以包含在大约10.6、14.2、17.4、18.8和20.4度的2θ值的使用铜K_α辐射获得的X-射线粉末衍射图为特征。

22.根据权利要求7至21任一项的化合物，其中该化合物是立体异构体纯的。

23.包含有效量的根据权利要求1至22任一项的化合物或其可药用盐和可药用载体的药物组合物。

24.在需要其的对象中治疗或预防HIV感染或治疗AIDS、预防AIDS或延迟AIDS发作或发展的方法，包括给予该对象有效量的根据权利要求1至22任一项的化合物或其可药用盐。

25.根据权利要求1至22任一项的化合物或其可药用盐，其用于制备在需要其的对象中抑制HIV整合酶、治疗或预防HIV感染或治疗AIDS、预防AIDS或延迟AIDS发作或发展的药物。