CN102186455A - 疏水蛋白在角蛋白非永久性染色中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及疏水蛋白在角蛋白和含角蛋白材料，尤其是毛发非永久性染色中的用途，以及用于角蛋白和含角蛋白材料，尤其是毛发非永久性染色的相应方法。本发明进一步涉及用于角蛋白和含角蛋白材料，尤其是毛发非永久性染色且包含疏水蛋白的器具。

Description

疏水蛋白在角蛋白非永久性染色中的用途

本发明涉及疏水蛋白在角蛋白和含角蛋白材料，尤其是毛发非永久性染色中的用途，以及用于角蛋白和含角蛋白材料，尤其是毛发非永久性染色的相应方法。本发明进一步涉及用于角蛋白和含角蛋白材料，尤其是毛发非永久性染色且包含疏水蛋白的器具。

背景技术

根据坚牢度对毛发染色组合物或毛发着色组合物分类。已知多种分类。在大多数情况下，细分为三类：仅维持一至两次毛发洗涤的暂时性毛发染色组合物(狭义上为着色剂)(第1类)、约6-10次毛发洗涤后必须重染的半永久性毛发染色组合物(第2类)和不能洗掉的永久性毛发染色组合物(狭义上为毛发染料)(第3类)。在另一种同样普通细分类中，可以洗掉并维持至多10次毛发洗涤的每种染色组合物归类为着色剂(第1类)，而第2类属于维持至多24次毛发洗涤的半永久性毛发染料，而第3类同样指永久性毛发染色组合物。此外，在文献中还发现细分为四类：着色剂(一至两次毛发洗涤)、半永久性染料(6-10次毛发洗涤)、部分永久性染料(至多24次毛发洗涤)和永久性染料(不能洗掉)。

在所有类别的第1类和第2类中的组合物具有可洗掉的共同点，因此下文归类为指可洗掉或非永久性染料。下文将半-和部分永久性染料归类为第2类染料，而在仅一至两次毛发洗涤后可洗掉的染料称为第1类着色剂。

用于永久性毛发染色的第3类所有工业品一方面包含通常为氧化性化学品的“显色剂”，而另一方面包含碱性组分作为染色浆部分，通常为氨水或氨水替代物，例如单乙醇胺。这些化合物具有使毛发纤维表皮变得对无色染料前体可渗透，促进毛发内部最终染料的显色，同时通过过氧化物的影响产生发光的功能。一旦使包含碱性成分的染色浆与显色剂接触，过氧化氢去质子化，通过表皮扩散并且到达发现黑色素的毛发内部。碱性过氧化物破坏黑色素并且氧化染料最初无色前体产生最终染料分子，其太大而无法离开毛发。因为这一化学方法，永久性毛发染色组合物还称为氧化性毛发染色组合物。原则上，通过大气氧氧化的所谓“自氧化染料”属于永久性毛发染料。

暂时性和半永久性毛发染色组合物(下文中简称为非永久性染色组合物)通常不会非氧化地作用。染料分子使其本身排列在角蛋白表面上或它们仅渗透毛发边缘距离。它们太大而无法完全渗透毛发。可通过用洗发水洗涤去除如此形成的染料层。

通常，对毛发仅具有低亲和性而相反沉积在毛发表面上的酸性染料在第1类暂时性毛发染色组合物(同义名：着色剂、直接染色组合物)中使用。

着色剂中的染料通常带正电荷，从而与毛发的带负电荷表面基团结合，或它们为可渗透表皮的小分子。暂时性毛发染料未渗透毛干本身。相反染料保持与表皮结合且通常可在单次毛发洗涤中除去。

相反，半永久性毛发染料(往往同称为着色剂、增强着色剂或直接染色剂)可渗入毛发，因为它们比暂时性毛发着色剂包含更小的染料分子。因此，半永久性毛发染料比暂时性着色剂维持更久且通常仅在8-10次毛发洗涤后必须重染。其染料更好渗透进入毛发的半永久性染料，维持明显更久，在大多数情况下为至多24次毛发洗涤。

基于它们的漂清性，半-以及部分永久性染料均被制造商称为着色剂，通常还称为第1类着色剂，但更适合将其划分为第2类。

毛发染色组合物通常以尽可能浓缩的水溶液或乳液形式出售，并且除包含实际染料，例如脂肪酸醇和/或其它油性组分外，还包含乳化剂以及表面活性剂和任选醇。着色剂和半永久性毛发染色组合物可以各种产品形式获得，尤其为膏、调理剂、香波、凝胶和喷雾。

非永久性毛发染色组合物比永久性毛发染料占有更小的市场份额。尽管如此，它们具有重要的经济利益，因为它们比永久性毛发染料更小影响毛发并且既不含漂白剂也不含氨水。另外，由于它们的某些成分，尤其是过氧化氢和氨水，永久性毛发染料已经被批评一段时间。在欧盟，未检查有关其相容性的永久性染料未来将被禁止。

此外，永久性毛发染色组合物影响毛发结构，因为它们必须渗透毛发的保护层。此外，怀疑永久性染料引起膀胱癌(A.Andres：Int J Cancer2004；109：第581-586页)。

这已经引起对非永久性替换永久性毛发染色组合物的兴趣日益增加。然而，消费者往往认为着色剂仅维持单次毛发洗涤和第2类染料在几次洗涤后褪色是缺点。

因此，需要作为在毛发非永久性着色中已经存在的组合物和方法的替换或改进的非永久性毛发染色组合物及其相应方法，并且尤其是允许染料对毛发的更稳定粘附，如果可能不会同时损坏毛发。

疏水蛋白为一类在长度上具有约100-150个氨基酸的小型富半胱氨酸蛋白质，其仅在丝状真菌中天然存在。它们为两亲性并且可在物体表面形成水不溶性层。它们的自然功能包括涂布真菌孢子阻止它们彼此粘着，涂布空气菌丝降低水的表面张力从而使得水更容易吸收，以及真菌和其环境之间的可能信号传输(Whiteford，J.F.Spanu，P.D.(2001)，Fungal Genet.Biol.32(3)：第159-168页；

等人(1999)Current Biol.19：1985-88；Bell等人(1992)，Genes Dev.6：第2382-2394页)。

1999年，首次在裂褶菌(Schizophyllum commune)中发现和提纯疏水蛋白。同时，疏水蛋白基因已经在子囊菌(ascomycetes)、半知菌(deuteromycetes)和担子菌(basidiomycetes)中确定。各种真菌包含多于一种疏水蛋白基因，例如裂褶菌、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)和构巢曲霉(Aspergillus nidulans)。

基于疏水蛋白在疏水性和生物物理性能中的差异，将它们划分为两类：I类和II类。互补实验已经表明，一类疏水蛋白在一定程度上可功能性替代另一类疏水蛋白。各种疏水蛋白看起来涉及真菌的不同发育阶段，而且似乎发挥不同功能(van Wetter等人(2000)Mol.Microbiol.36：201-210；Kershaw等人，(1998)Fungal Genet.Biol.23：第18-33页)。

一般而言，疏水蛋白具有8个半胱氨酸单元。它们可从天然资源分离，然而它们还可通过基因工程方法获得，例如在WO 2006/082251和WO2006/131564中所描述。

疏水蛋白在化妆品制剂中的用途本身已知。US 2003/0217419 A1描述了裂褶菌的疏水蛋白SC3在含角蛋白材料处理中的用途。因此，形成应抵制几次洗发水洗涤的化妆品。疏水蛋白与化妆品活性成分同时或之后施用，而不是施用化妆品活性成分之前。

WO 2006/136607A2描述了疏水蛋白和疏水蛋白偶联物在毛发护理用化妆品配制剂中的用途。根据WO 2006/136607，疏水蛋白可与半永久性或永久性毛发染料结合并且提高它们的浓度和影响皮肤和毛发。在永久性毛发染料的情况下，两种染料组分的一种与疏水蛋白结合，而在将偶联物施用至毛发后加入另一种组分。然后两组分的氧化偶联直接在毛发上发生。疏水蛋白与第1类暂时性毛发染色组合物一起的用途未描述在WO2006/136607中。

WO 2006/082251描述了疏水蛋白-蛋白质，它们的生产和它们在表面涂层中的用途。

WO 96/41882提出为了使疏水性表面变得亲水性，尤其使用疏水蛋白作为表面活性物质用于改进亲水性基质的耐水性，以及用于洗发水和调理剂的制备。

发明目的

本发明目的为提供支持角蛋白和含角蛋白材料(例如毛发、皮肤、指甲，以及羊毛、皮革和其它含角蛋白织物)，特别是毛发的非永久性染色，尤其是着色或半永久性染色的方法和组合物。

另一目的为提供角蛋白染色，尤其是毛发染色的方法，其中尽可能小地损坏角蛋白纤维。根据本发明，考虑到它们的坚牢度和/或颜色强度，角蛋白的染色优选为非永久性，然而它应当超越目前可获得的非永久性，尤其是暂时性毛发染料。

另一目的为改进通过常规非永久性染色组合物完成的角蛋白染色，尤其是提高颜色强度和/或着色或染色抵抗洗掉的坚牢度，而不需要施用氧化染料。优选地，这一目标为争取着色剂和半永久性染料。因此应该确立与这些染色组合物的缺点无关的永久性染料替换物。

根据独立权利要求解决可源于以下本发明说明书的这些和其它目的。本发明的具体实施方案可源于从属权利要求、说明书和实施例。此外，本发明还包括这些优选实施方案的组合。

发明简述

本发明涉及疏水蛋白和含疏水蛋白组合物在角蛋白或含角蛋白材料，特别是毛发非永久性染色中的用途。本发明进一步涉及用于角蛋白染色，特别是着色或半永久性染色的相应组合物。同样存在使用疏水蛋白使角蛋白染色的相应方法。

使用疏水蛋白优选导致染色的颜色强度提高和洗掉时间更长，其表明非永久性染料在角蛋白中/上的改进吸收和/或沉积。这特别是涉及亲水性染料。因此使得染色强度更高和/或维持更久。

使用疏水蛋白可进一步产生其它化妆品试剂(除了非永久性染料外)在角蛋白中/上的改进吸收和/或沉积。这优选涉及亲水性化妆品活性剂，例如泛醇。从而活性剂作用更强烈，因为其达到更高局部浓度和/或渗透角蛋白和/或直至这些试剂完全洗掉的时间延长。在其它方面，它可影响毛发厚度、撕裂强度(撕裂力改进)、梳理性、梳理力、柔软性和处理角蛋白的其它性能。单一化妆品试剂和应用领域决定了相关定量和定性效果。

尤其是由于存在疏水蛋白，着色剂/染色剂中除染料以外的其它组分，例如调理剂可作用更强烈。

具体而言，本发明分别涉及以下主题和实施方案：

(1)用于角蛋白或含角蛋白材料非永久性染色的方法，其包括将至少一种非永久性染料和至少一种结构式(I)的疏水蛋白施用至角蛋白或含角蛋白材料上；

(2)用于角蛋白或含角蛋白材料非永久性染色的组合物，其包含：

(i)至少一种结构式(I)的疏水蛋白，和

(ii)至少一种非永久性染料；

(3)用于角蛋白或含角蛋白材料非永久性染色的试剂盒，其包含两种单独化妆品组合物，即：

(i)包含至少一种式(I)疏水蛋白的组合物，和

(ii)包含至少一种非永久性染料的组合物；和

(4)结构式(I)的疏水蛋白在角蛋白或含角蛋白材料非永久性染色中提高非永久性染色强度和/或非永久性染色抵抗洗掉的坚牢度的用途。

定义

使用以下术语、定义和缩写：

常规3个或单个字母编号用于氨基酸和核苷酸。

在本发明上下文中，单数形式“一个(种)”还包括相应复数，因为上下文没有产生不同。因此，术语“疏水蛋白”还可包括多于一个疏水蛋白分子，即两个、三个、四个、五个等单一类型的疏水蛋白。

“至少一种”是指“一种或多种”，“至少”后面跟数值是指“这一数值或更高数值”。

数值范围内或在参数的上下限范围内的术语“约”或“大约”表示偏差范围，其中根据本领域技术人员的理解为仍然保证所述特征的技术效果。通常，该术语是指所示数值偏差为+/-10％，优选+/-5％。

如果没有特别注明的话，酸以它们的游离形式，作为游离酸或作为所述酸的部分或完全盐或作为该酸及其盐的混合物存在。相反地，碱，特别是胺可以游离碱形式或作为所述碱的部分或完全盐或作为该碱及其盐的混合物存在。

“自然的”为“野生型”和“自然(产生)的”的同义词。在两种多肽之间“自然”产生的键为如在大自然中，即例如在野生型蛋白质中发现的键。如果没有特别注明的话，野生型或自然蛋白质或多肽以所述蛋白质/多肽的通常产生形式提供。

在本发明上下文中，“重组”是指“借助或由于基因工程方法产生的”。

氨基酸序列的“片段”源于在各原始序列的N-和/或C-末端缺失一种或多种连续氨基酸。

本发明氨基酸序列的“同源物”为通过一个或多个氨基酸的替代而不同于原始序列的蛋白质或多肽。优选蛋白质的功能和/或构造不受所述替代的影响。特别优选地，氨基酸替代为保守的氨基酸交换，通过具有类似化学性能的氨基酸从而替代交换的氨基酸，例如由Ala替代Val。

特别优选保守氨基酸交换在以下种类成员之间产生：

-酸性氨基酸(天冬氨酸和谷氨酸)；

-碱性氨基酸(赖氨酸、精氨酸、组氨酸)；

-疏水性氨基酸(白氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、缬氨酸、丙氨酸)；

-亲水性氨基酸(丝氨酸、甘氨酸、丙氨酸、苏氨酸)；

-具有脂族侧链的氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、白氨酸、异亮氨酸)；

-具有羟基脂族侧链的氨基酸(丝氨酸、苏氨酸)；

-在侧链中具有酰胺基团的氨基酸(天冬酰胺酸、谷酰胺)；

-具有芳族侧链的氨基酸(苯基丙氨酸、酪氨酸、色氨酸)；

-在侧链中具有硫的氨基酸(半胱氨酸、蛋氨酸)。

特别优选的保守氨基酸交换为：

初始氨基酸替代物

Ala    Ser

Arg    Lys

Asn    Gln；His

Asp    Glu

Cys    Ser

Gln    Asn

Glu    Asp

Gly    Pro

His    Asn；Gln

Ile    Leu；Val

Leu    Ile；Val

Lys    Arg；Gln；Glu

Met    Leu；Ile

Phe    Met；Leu；Tyr

Ser    Thr

Thr    Ser

Trp    Tyr

Tyr    Trp；Phe

Val    Ile；Leu

术语“分离”是指“从初始有机体分离或提纯”。因此，分离的疏水蛋白不再为自然发现的真菌的部分。重组产生的疏水蛋白同样为“分离的”疏水蛋白。

“颜色强度”(同义词：“染色强度”)为可通过基于目测主观评价感知(任选与未染色标准比较)，或可在光学测量数据的对比中测定的观察颜色。

这种测量数据例如可用常规光度计或色度计，例如Konica MinoltaCR-300，CR-310，CR-311(Konica Minolta Sensing，Inc.，日本大阪)，优选使用CR-300测定。测量数据例如可根据a-b-L-体系(同义词：Lab-体系，CIELAB-体系；L：亮度；a：色调；b：饱和度)或根据L^＊a^＊b^＊-体系(CIE 1976)，优选根据L^＊a^＊b^＊-体系评价。根据L^＊a^＊b^＊-体系的评价例如描述在Konica Minolta CR-300、CR-310、CR-311(Konica Minolta Sensing，Inc.，日本大阪)的使用手册，德语版本，版本号527349/9.99中。

术语“非永久性染料”表示可通过单次或通过重复洗涤逆转角蛋白染色效果的染料，即用于角蛋白非永久性染色的染料。

在本发明上下文中，术语“非永久性/可洗染色”和“非永久性/可洗的(毛发)染料”分别包括用于角蛋白的着色剂、半-和部分永久性染色剂以及染料，即可分别从角蛋白洗掉并且不为永久性毛发染料的任何染色剂和染色组合物。

在本发明上下文中，术语“着色剂”用作“暂时性着色剂”、“暂时性染料”、“暂时性颜色”、“暂时性颜料”的同义词。由于制造商不统一的语言习惯(上文，背景资料)，在更广义上，它包括任何非永久性、可洗毛发染色组合物，还包括暂时性染色组合物(在合适词义中为着色剂)半-和部分永久性染色组合物。

在优选更狭义上，它包括着色剂和半永久性染色组合物，在最优选和最狭义上，它包括合适词义中的着色剂。在合适词义中，着色剂为用于可在一至两次毛发洗涤中洗掉的非永久性毛发染色的染色组合物。其它定义和说明见“背景资料”部分。

“ΔE”(同义词：“Delta E”)为分别在色标和对比色之间以及在两种颜色之间的颜色和色距中差异的量度(DIN 5033-1：1979-03)。ΔE可根据不同工业标准光度测定，通常根据标准DIN5033测量和按照DIN 6174计算ΔE。测量数据可根据a-b-L-体系(同义词：Lab-体系，CIELAB-体系；L：亮度；a：色调；b：饱和度)或根据L^＊a^＊b^＊-体系(CIE 1976)评价。优选方法为基于在CIE 1976中定义的L^＊a^＊b^＊颜色空间。对本发明而言，ΔE优选根据标准DIN 5033第一部分和DIN 6174测定，即基于L^＊a^＊b^＊颜色空间，例如借助色度计如Konica Minolta CR-300、CR-310、CR-311(Konica Minolta Sensing，Inc.，日本大阪)，优选用CR-300，并且根据在Konica MinoltaCR-300、CR-310、CR-311(Konica Minolta Sensing，Inc.，日本大阪)的使用手册，德语版本，版本号527349/9.99中根据实施例6中描述的方法。

通常，可察觉色差的ΔE值为2-5，在很好结果的情况下，它们大于5，这表示肉眼可见的明显色差(存在不同颜色)(http://de.wikipedia.org/wiki/Delta E)：

ΔE       等级评价

0.0...0.5 无或几乎无差别

0.5...1.0 训练眼睛可注意到差别

1.0...2.0 可注意到的色差

2.0...4.0 可察觉的色差

4.0...5.0 几乎不能容忍的明显色差

5.0以上   差别归为不同颜色。

术语“亲水性”和“疏水性”具有化学术语中通常特征含义。因而，“亲水性”染料为优选可溶于水或极性溶剂的染料。亲水性染料通常为离子性、具有偶极矩和/或包含负电性基团的极性化合物。另一方面，“疏水性”染料优选溶解于非极性介质中并且不具有离子性官能团和仅弱负电性官能团。

发明详述

本发明涉及疏水蛋白在角蛋白和含角蛋白材料非永久性染色中的用途，以及相应的含疏水蛋白化妆品组合物和试剂盒。

已经惊人地发现，当使用本发明疏水蛋白时，尤其是在实施方案(1)方法中使用时，与不用所述疏水蛋白的非永久性染色相比，非永久性染色的强度和/或非永久性染色抵抗洗掉的坚牢度提高。这尤其适用于在施用非永久性染料前用含疏水蛋白组合物预处理待染色角蛋白。疏水蛋白处理过和未处理的染发之间的色差表示为ΔE，优选根据DIN 5033测定和/或根据DIN6174计算，例如根据在Konica Minolta CR-300、CR-310、CR-311(Konica Minolta Sensing，Inc.，日本大阪)的使用手册，德语版本，版本号527349/9.99(参见“定义”和实施例6部分)中描述的方法，这里可为大于2，优选大于4，特别优选大于5。疏水蛋白的效果可能基于疏水蛋白可提高含角蛋白表面，尤其是毛发表面亲水性的事实。

实施方案(1)的方法，实施方案(2)和(3)的组合物以及实施方案(4)的用途优选仅用于角蛋白的化妆品染色，因此不是人体或动物体的治疗处理。

本发明主题在于角蛋白的染色。角蛋白可作为纯角蛋白存在或为含角蛋白材料的部分。优选的角蛋白和含角蛋白材料为皮肤、毛发、指甲、触角、羊毛、皮革、外皮、毛皮和羽毛。特别优选角蛋白纤维，尤其是毛发和羊毛。

特别优选地，实施方案(1)的方法用于毛发，尤其是头发染色，而实施方案(2)和(3)的组合物以及用途(4)适合于毛发，尤其是头发染色。

本发明染上颜色的角蛋白可为人类或动物来源且优选为人类来源。

本发明实施方案(1)的方法和实施方案(4)的用途需要在待染色的角蛋白上施用至少一种疏水蛋白。所述至少一种疏水蛋白优选为包含其它化妆品可接受成分的组合物的组分。

在本发明各实施方案的上下文中，术语“疏水蛋白”优选表示通式(I)的多肽：

X_n-C¹-x_1-50-C²-X_0-5-C³-X_1-100-C⁴-X_1-100-C⁵-X_1-50-C⁶-X_0-5-C⁷-X_1-50-C⁸-X_m(I)，其中X可表示20种天然氨基酸(Phe、Leu、Ser、Tyr、Cys、Trp、Pro、His、Gln、Arg、Ile、Met、Thr、Asn、Lys、Val、Ala、Asp、Glu、Gly)中任一种。此处，X残基可各自相同或不同。此处，X的下标表示在相应部分序列X中氨基酸的数目。

下标n和m彼此独立地表示自然数。一般而言，m和n不为0，而通常表示1或更高。例如m和n可彼此独立地表示1-500。优选m和n彼此独立地为15-300。

标明C¹-C⁸的氨基酸优选为半胱氨酸；然而它们还可被具有类似空间体积的不同氨基酸代替，优选丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、蛋氨酸或甘氨酸。然而，C¹-C⁸位置中至少4个，优选至少5个，特别优选至少6个，非常优选至少7个应为半胱氨酸。

在本发明蛋白质中，在C¹-C⁸位置的半胱氨酸可被还原或它们可彼此形成二硫桥。

优选分子间形成C-C桥，尤其是形成至少一个，优选两个，特别优选3个，非常特别优选4个分子间二硫桥。在半胱氨酸被具有类似空间体积的氨基酸交换中，所述形成二硫桥的C位置优选成对交换，假设半胱氨酸存在于相应位置时。

如果半胱氨酸、丝氨酸、丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸或苏氨酸也在X指定的位置存在，则疏水蛋白通式中单个C位置编号可相应改变。在X位置的其它半胱氨酸还能够形成二硫桥。

在本发明实施中，优选使用通式(II)的疏水蛋白：X_n-C¹-X_3-25-C²-X_0-2-C³-X_5-50-C⁴-X_2-35-C⁵-X_2-15-C⁶-X_0-2-C⁷-X_3-35-C⁸-X_m(II)，其中X和C以及X的下标具有如上含义。下标n和m表示包括0的自然数。一般而言，m和n不为0，而通常表示1或更高。例如m和n可各自独立地表示1-500。

优选m和n各自独立地为15-300。此外，优选至少6个标明C的残基为半胱氨酸，特别优选各残基C为半胱氨酸。特别优选这些半胱氨酸的至少一对形成二硫桥，且形成多于一个二硫桥，即最优选2、3或4个二硫桥。

特别优选在本发明进行中，使用通式(III)的疏水蛋白：X_n-C¹-X_5-9-C²-C³-X_11-39-C⁴-X_2-23-C⁵-X_5-9-C⁶-C⁷-X_6-18-C⁸-X_m(III)，其中X和C以及伴随X的下标具有如上含义。具体而言，下标n和m表示1-200的自然数。一般而言，至少6个标明“C”的残基为半胱氨酸。特别优选各残基C为半胱氨酸。非常特别优选这些半胱氨酸的至少一对形成二硫桥，且形成多于一个二硫桥，即最优选2、3或4个二硫桥。

在所有式(I)-(III)中命名为X_n和X_m的基团可为与其它天然疏水蛋白组分偶联的肽序列。它还可为不与其它天然疏水蛋白组分偶联的肽序列。其中，理解为其中肽序列在蛋白质中天然存在的那些基团X_n和/或X_m通过不在蛋白质中天然存在的肽序列延长。

基团X_n和/或X_m可包含未在疏水蛋白蛋白质中天然存在的全部或部分肽序列。

未在蛋白质中天然存在的其中基团X_n和/或X_m可部分或完全存在的肽序列下文中将命名为融合配偶体。通常，这些融合配偶体为至少20，优选至少35个氨基酸长度。它们例如可为20-500个，优选30-400个，特别优选35-100个氨基酸的序列。

合适的融合配偶体例如已在WO 2006/082251、WO 2006/082253、WO2006/131564和WO 2007/014897中公开。在本发明上下文中，这些融合配偶体为优选的融合配偶体。融合配偶体可选自多种蛋白质。仅有单个融合配偶体可与多肽的残基偶联，或多个融合配偶体可与融合蛋白质的残基偶联。例如，在X_n或X_m的一个位置的两个融合配偶体可与多肽的残基偶联，或一个或多个融合配偶体存在于两位置中的任一位置。

特别合适的融合配偶体为在微生物中，优选在原核生物中，特别是在大肠杆菌(Escherichia coli)或枯草杆菌(Bacillus subtilis)中天然存在的蛋白质。特别合适的融合配偶体实例为具有序列yaad(SEQ ID NO：16，在WO2006/082251中；SEQ ID NO分别为：15和16，在WO 2007/014897中)、yaae(SEQ ID NO：18，在WO2006/082251中)的多肽、泛素和硫氧还蛋白。特别合适的融合配偶体例如为本发明说明书和在WO 2006/082251以及WO2007/014897中描述的yaad和由其衍生的截断序列。非常特别合适的为yaad和yaad40。

仅包含连续部分，例如70-99％，优选5-50％，特别优选10-40％指定序列的氨基酸的特定序列的片段或同系物也是高度合适的，或与指定序列相比，其中各氨基酸，相应核苷酸已经改性，其中百分比指氨基酸的全部数目。优选的交换如在“定义”中所描述。

在其它优选实施方案中，疏水蛋白具有任选优选除已经提及的融合配偶体中的一个作为一个基团X_n或X_m或作为那些基团中一个的端基组分外，具有另外所谓的亲和域(亲和标记物)。这是指原则上已知且与定义的互补基团相互作用并且有助于容易提供和提纯蛋白质的结合团。这种亲和域的实例包括(His)_k-、(Arg)_k-、(Asp)_k-、(Phe)_k-或(Cys)_k-基团，其中k通常表示1-10的自然数。优选地，它为(His)_k-基团，其中k表示4-6中任一数。这里，基团X_n和/或X_m可仅由亲和域组成或由与多肽残基天然或不天然偶联的氨基酸或多肽和所述亲和域组成。

在其它优选实施方案中，疏水蛋白具有其它改性多肽序列，例如通过糖基化、乙酰化或通过与戊二醛化学交联。

疏水蛋白、它们的序列和它们的制备例如公开在WO 2006/082251中，其各自内容此处明确引入本发明。在WO 2006/082251所描述的疏水蛋白优选用于本发明中。在本发明实施中特别优选的疏水蛋白为dewA、rodA、hypA、hypB、sc3、basf1、basf2类型的疏水蛋白，非常特别为dewA(分别包含在融合蛋白质“疏水蛋白A”和“疏水蛋白B”的实例中)、hypA和hypB类型的疏水蛋白，特别为dewA类型的疏水蛋白。

这些疏水蛋白和它们的序列例如公开在WO 2006/082251和WO2007/014897中，其相应内容此处明确引入本发明。如果没有特别注明的话，以下序列名称和SEQ ID NO是指在WO 2006/082251中公开的序列。关于SEQ-ID号概述的表见WO 2006/082251中第20页。

根据本发明，疏水蛋白选自具有括号内所示多肽序列以及编号相同的核酸序列的yaad-Xa-dewA-his(SEQ ID NO：20)、yaad-Xa-rodA-his(SEQ IDNO：22)和yaad-Xa-basf1-his(SEQ ID NO：24)，尤其是根据SEQ ID NO的序列：19、21、23。特别优选可使用yaad-Xa-dewA-his(SEQ ID NO：20，在WO 2006/082251中，和SEQ ID NO：19和20，在WO 2007/014897中)。此外，基于在SEQ ID NO：20、22或24中所描述其保持初始蛋白质的生物性能为至少50％的多肽序列，由至少一个，优选至多5％的所有氨基酸，特别优选至多10个，非常特别优选至多5个氨基酸的替代、插入或缺失产生的蛋白质为特别优选的实施方案。在蛋白质的生物性能下，理解为在接触角中的改变和/或在下文所述角蛋白上的效果。

在本发明实施中特别合适的疏水蛋白还为通过截断yaad-融合配偶体而衍生自yaad-Xa-dewA-his(SEQ ID NO：20)、yaad-Xa-rodA-his(SEQ IDNO：22)或yaad-Xa-basf1-his(SEQ ID NO：24)的疏水蛋白。

有利地可使用截断yaad-残基代替294个氨基酸的完整yaad-融合配偶体(SEQ ID NO：16)。

然而，截断残基应该包含至少20个，优选至少35个yaad-序列的连续氨基酸。例如，可使用具有20-293个，优选25-250个，特别优选35-150个，非常特别优选35-100个氨基酸的截断残基。特别合适的蛋白质为yaad40-Xa-dewA-his(SEQ ID NO：25和26，在WO 2007014897中)，其具有截至40个氨基酸的yaad-残基。

融合配偶体与多肽残基之间的分裂位点可用于切断融合配偶体(例如，通过在蛋氨酸BrCN-分裂、基因Xa-、肠激酶-、凝血酶-、TEV-分裂等)。特别优选为Xa-分裂位点，例如在实施例中所使用的疏水蛋白的分裂位点。

如上所示，疏水蛋白为表面活性多肽。它们可从天然资源分离，或它们还可使用基因工程方法获得。原则上，这些来源的任何疏水蛋白适于进行本发明。

本发明所用疏水蛋白可为通过已知方法如肽合成，例如通过根据Merrifield的固相合成化学生产。

天然存在的疏水蛋白可从天然资源分离。例如可参考

等人，Eur.J Cell Bio.63，122-129(1994)或WO 96/41882。

用于从嗜热蓝状菌(Talaromyces thermophilus)的不包含融合配偶体的疏水蛋白的基因工程生产方法例如描述在US 2006/0040349中。

包含融合配偶体的疏水蛋白的生产优选可通过基因工程方法产生，其中一个核酸序列，尤其是DNA序列，使融合配偶体编号，而一个核酸序列，尤其是DNA-序列用于多肽残基编号，其通过合并核酸序列的基因表达在寄助物中生产所需蛋白质的方式结合。相应生产方法例如公开在WO2006/082251或WO 2006/082253中。融合配偶体使得疏水蛋白的生产显著更容易。在基因工程方法中，包含融合配偶体的疏水蛋白以比不包含融合配偶体的疏水蛋白显著更高的产率获得。

根据基因工程方法通过寄助物生产的疏水蛋白可通过原则上已知的方法进行，并且可通过已知的色谱法提纯。一般而言，分离，尤其是提纯疏水蛋白用于将本发明投入实践。

在优选实施方案中，可使用在WO 2006/082253，第11/12页中公开的简单制备和提纯方法。

为此，首先将发酵细胞从发酵液分离、分解并且使细胞碎片与内含体分离。后一步骤可通过离心有利地进行。最后，可使用原则上已知的方法，例如使用酸、碱和/或洗涤剂释放疏水蛋白使内含体分解。通常，可使用0.1M NaOH使具有本发明所用疏水蛋白的内含体完全溶解约1h。

任选在调节所需pH值后，可不用进一步提纯使用如此获得的溶液而将本发明投入实践中。可从溶液分离疏水蛋白，而且为固体。如在WO2006/082253中第12页所述，优选使用喷雾造粒或喷雾干燥进行分离。根据简单加工和提纯方法获得的产物除了包含细胞碎片残基外，通常包含约80-90重量％蛋白质。通常，取决于发酵条件，疏水蛋白的量基于蛋白质的总量为30-80重量％。

可将包含分离疏水蛋白的产物储存为固体。

当将本发明投入实践时，可将疏水蛋白直接或在分裂和分离融合配偶体后使用。分裂优选在分离内含体及其分解后进行。

如果表面，例如玻璃表面涂布疏水蛋白-蛋白质，疏水蛋白的生物性能为表面活性的改进，表面性能的改进例如可通过在用蛋白质涂布表面之前和之后测量水滴的接触角并且计算两次测量之间的差异而实验测定。

接触角测定法的实现原则上为本领域技术人员所已知。室温下用5μl水滴并且使用玻璃板作为基质进行测量。用于测量接触角的示范性合适方法的精确实验条件见WO 2006/136607的实施例10。

在本文提及的条件下，所用疏水蛋白可增加接触角。即各自分别与同等大小水滴的接触角以及非涂覆玻璃表面相比，疏水蛋白例如可增加至少20°、优选至少25°、特别优选至少30°；至少40°；至少45°；特别至少50°的接触角。

本发明涉及在毛发的着色剂和半永久性染料中疏水蛋白在染料粘附上的效果。可如实施例1-4(与WO 2006/136607中的实施例11-14相同)中记载的测试疏水蛋白对皮肤和毛发的粘附。

本发明实施方案(2)和(3)的组合物和实施方案(1)方法中对于用途(4)的组合物基于整个组合物，优选以0.001-5重量％，特别优选以0.005-3重量％，非常特别优选以0.01-1重量％的总疏水蛋白浓度包含疏水蛋白。最优选疏水蛋白的浓度为至多0.2重量％，尤其是0.01-0.05重量％，最优选0.025重量％。总疏水蛋白为组合物中一种或多种疏水蛋白分子的疏水蛋白分子总量。浓度范围还表示在实施方案(1)方法中疏水蛋白施用至角蛋白或含角蛋白材料时的优选浓度。

所指定的疏水蛋白浓度在实施方案(2)和(3)的组合物和本发明实施方案(1)方法中用于用途(4)的组合物中，或它们通过在使用组合物前稀释浓缩物获得。

对于本发明的用途，疏水蛋白有利地存在于优选还包含化妆品可接受的载体介质的组合物中。所述组合物可仅包含一种疏水蛋白，而且还可包含不同疏水蛋白的组合，例如包含两种或三种疏水蛋白的组合物。

本发明角蛋白的非永久性染色还需要向待染色的角蛋白施用至少一种非永久性染料，更具体而言非永久性角蛋白-染料。优选地，非永久性染料作为包含所述染料的组合物(染色剂)组分施用。实施方案(2)的组合物和实施方案(3)的试剂盒还涉及这种染色剂。

所述染色剂包含一种或几种非永久性染料，通常几种非永久性染料，优选2-20种，或各个介于其间的自然数，特别优选4-10种非永久性染料。在贸易中惯用着色剂和非永久性染色剂通常包含多于3种不同非永久性染料以达到预定色度(参见实施例中使用的染色剂)。

关于在本发明所适用染色剂中的非永久性染料，明确参考Ch.Zviak的专著，The Science of Hair Care，第7章(第248-250页；直接染色剂)，在丛书“Dermatology”(编辑：Ch.，Culnan和H.Maibach)中作为第7卷出版，Verlag Marcel Dekker Inc.，纽约，巴塞尔，1986，参考欧盟的在线数据库“Coslng”(http://ec.europa.eu/enterprise/cosmetics/cosing/)，其包括由欧盟编辑的“European Inventory of Raw materials in Cosmetics”，以及在所述数据库中，尤其是具有“染发”功能的化合物，还有由欧盟编辑的“European Inventory of Raw materials in Cosmetics”本身，其可从BundesverbandDeutscher Industrie-und Handelsunternehmen für Arzneimittel，Reformwaren and 

e.V.，Mannheim的光盘上获得。进一步明确参考1976年7月27日公开而在2007年8月30日更新的Annex IV，ECGuideline 76/768/EWG的第2部分中描述的所有半永久性毛发染色剂。在这些著作中提到的每种非永久性染料为将本发明投入实践的合适非永久性染料。本发明的非永久性染料优选为直接染色剂。在毛发染色中通常使用的每一种直接染料可被用作直接染色剂。这些直接染色剂通常为硝基苯二胺、硝基氨基苯酚、偶氮染料、蒽醌、三苯甲烷染料、靛苯胺或靛酚。

优选的直接染色剂分别为由它们的国际命名和商品名已知的化合物HC黄2、HC黄4、HC黄5、HC黄6、HC黄9、HC黄12、HC黄13、酸性黄1、酸性黄10、酸性黄23、酸性黄36、HC橙1、分散橙3、酸性橙7、HC红1、HC红3、HC红10、HC红11、HC红13、酸性红33、酸性红52、HC红BN、颜料红57:1、HC蓝2、HC蓝12、分散蓝3、酸性蓝7、酸性绿50、HC紫1、分散紫1、分散紫4、酸性紫43、分散黑9、酸性黑1和酸性黑52，以及1，4-二氨基-2-硝基苯、2-氨基-4-硝基苯酚、1，4-双(β-羟基乙基)氨基-2-硝基苯、3-硝基-4-(β-羟基乙基)氨基苯酚、2-(2’-羟基乙基)氨基-4，6-二硝基苯酚、1-(2’-羟基乙基)氨基-4-甲基-2-硝基苯、1-氨基-4-(2’-羟基乙基)氨基-5-氯-2-硝基苯、4-氨基-3-硝基苯酚、1-(2’-脲基乙基)氨基-4-硝基苯、4-氨基-2-硝基二苯胺-2’-甲酸、6-硝基-1，2，3，4-四氢喹喔啉、2-羟基-1，4-萘醌、苦氨酸及其盐、2-氨基-6-氯-4-硝基苯酚、4-乙基氨基-3-硝基苯甲酸和2-氯-6-乙基氨基-1-羟基-4-硝基苯。

其它优选的直接染色剂为阳离子直接染色剂。特别优选(a)阳离子三苯甲烷染料，例如碱性蓝7、碱性蓝26、碱性紫2和碱性紫14，(b)被季氮基团取代的芳族体系，例如碱性黄57、碱性红76、碱性蓝99、碱性棕16和碱性棕17，以及(c)包含具有至少一个季氮原子的杂环的直接染色剂，例如碱性黄87，碱性橙31和碱性红51。

以商标

命名的阳离子直接染色剂为本发明特别优选的阳离子直接染料。

在本发明实施方案(1)-(4)中非常特别优选的至少一种非永久性染料选自碱性红51、碱性红76、HC红10、HC红11、碱性紫2、羟基乙基-2-硝基对甲苯胺、HC蓝2、HC黄9、HC黄13、HC黄2、2-氨基-6-氯-4-硝基苯酚、HC蓝12、N，N-双(2-羟基乙基)-2-硝基对苯二胺、碱性蓝99、4-氨基-3-硝基苯酚、4-羟丙基氨基-3-硝基苯酚、3-硝基对羟基乙基氨基苯酚、HC蓝11、碱性棕17、HC红1、HC红7、HC红13、HC橙1和HC红3，特别是碱性紫2和羟基乙基-2-硝基对甲苯胺。最优选组合物包含几种特别优选染料的组合，尤其是在实施例中所用染料的选择(例如在实施例中多次使用的那些染料)或全部。

此外，本发明配制剂还可包含天然存在的染料，例如包含在红色指甲花、无色指甲花、黑色指甲花、甘菊花、檀香木、红茶、黑桤木树皮绉、鼠尾草、洋苏木，茜草、儿茶、香椿木(sedre)和紫朱草根中。

原则上，非永久性染料可为疏水性或亲水性。在本发明的优选方面中，在实施方案(1)-(4)中的非永久性染料为亲水性染料。疏水蛋白尤其是改进其与角蛋白表面的结合，因为它使角蛋白表面更加亲水。

另一方面，疏水性染料可渗透角蛋白表面上的一个疏水蛋白层而沉积在更深层中。这种稳定的疏水性染料在毛发上维持更久。因此它们作为非永久性染料的用途也为本发明的一个方面。

然而，优选在染色剂中使用至少一种亲水性染料。特别优选染色剂中大部分非永久性染料为亲水性(基于染料总量，大于50重量％)，非常特别优选染色剂中存在的所有非永久性染料为亲水性的。

本发明的染色剂和本发明所用的染色组合物基于染色剂的总重量，优选以0.001-20重量％，特别优选以0.001-10重量％，非常特别优选以0.1-5重量％的浓度包含非永久性染料。

非永久性染料不需要为均匀化合物。相反地，取决于各种染料的制备方法，本发明毛发染色组合物中可存在其它组分，只要这些未对染色结果产生不利影响，或它们因为其它原因，例如由于其毒性而必须排除。

适合于将本发明投入实践的组合物还可包含一种或几种永久性染料或其前体。然而，优选使用无这种永久性染料或其前体的组合物。

在实施方案(1)-(4)的优选方面中，非永久性染料为染色组合物，优选毛发染色组合物、皮肤染色组合物或指甲染色组合物的一部分，尤其是用于人发、皮肤或指甲的染色。特别优选染色组合物为毛发染色组合物，非常特别优选毛发着色剂、半-或部分永久性毛发染色组合物。最特别优选染色剂为着色剂或半永久性毛发染色剂。在方法(1)中，将非永久性染料作为这种组合物的组分施用至角蛋白或含角蛋白材料上。

除染料外，染色剂通常包含至少一种化妆品可接受的载体介质，另外可包含在化妆品中通常使用的其它成分。

如在贸易中惯例，染色剂可包含氨水或铵盐如NH₄Cl。对于其中使用疏水蛋白的本发明染色，氨水的存在不是绝对必需的。优选本发明组合物和用于实施方案(1)方法的组合物和实施方案(4)所用组合物各自不包含氨水和铵盐。

可将疏水蛋白和非永久性染料彼此独立地(在单独组合物中)或在单一组合物中作为组合施用至角蛋白。在实施方案(1)的方法中，疏水蛋白和非永久性染料优选彼此独立地或作为单独组合物施用。此外，疏水蛋白和非永久性染料可同时或依次施用至角蛋白或含角蛋白材料。优选它们依次施用。

实施方案(1)的方法可包括一个或多个步骤。优选方法(1)包括至少以下步骤：

(a)将至少一种结构式(I)的疏水蛋白施用至角蛋白上；和

(b)将至少一种非永久性染料施用至角蛋白上，其中步骤(a)和(b)同时或依次进行。

在两步中，疏水蛋白和非永久性染料各自包含在含有其它化妆品可接受成分的单独组合物中。

当步骤(a)和(b)同时进行时，仅将同时包含疏水蛋白和非永久性染料的一种组合物施用至毛发。该组合物可通过使两种单独组合物混合制备，其中一种包含疏水蛋白而另一种包含非永久性染料。

当步骤(a)和(b)依次(即步骤(a)在步骤(b)之前)进行时，首先将疏水蛋白优选以含疏水蛋白组合物形式施用至毛发。该组合物在角蛋白上作用一段接触时间。此后，将包含至少一种非永久性染料的组合物施用至毛发上。后一组合物的施用可直接在含疏水蛋白组合物的接触时间后，或在角蛋白处理中其它步骤(即一个或多个步骤)在步骤(a)和(b)之间进行。

所有这些其它步骤可为提供毛发修饰处理的步骤，因为它们既未除去疏水蛋白层，也未影响染色的最终结果。优选地，这些其它步骤选自：一次或多次角蛋白的洗涤，在室温下或通过使用热空气源如干发器施加热空气，例如温度≥30℃，优选为50℃±5℃的空气，干燥角蛋白一次或多次。

特别优选方法(1)的所述其它步骤包括在施用疏水蛋白后干燥角蛋白或含角蛋白材料。特别优选角蛋白在步骤(a)和(b)之间干燥。

在完成含疏水蛋白组合物接触时间的特别优选方面，通过使用热空气源(例如干发器或其它能够产生由干发器所生成温度的热空气源)施加热空气，例如温度为≥30℃，优选≥50℃±5℃的空气或在室温下干燥角蛋白。

非常特别优选在疏水蛋白的接触时间后直接用干发器干燥角蛋白，如在实施例5的方案(b)中将染料施用至毛发前的情况下。

在疏水蛋白接触时间结束后和施用染料前，在方法(1)的其它方面中，除去待染色的未与角蛋白结合的疏水蛋白部分，特别是通过洗涤。特别优选洗掉所施用含疏水蛋白组合物的残余以完成接触时间和/或在步骤(b)之前进行角蛋白的上述干燥。非常特别优选洗涤后干燥角蛋白，然而如有可能不加热(即例如在室温下干燥)并且仅在此后将含染料组合物施用至角蛋白。

在方法(1)的最优选方案中，在疏水蛋白接触时间后且进行下一步骤前直接干燥角蛋白。在这一方案中，通过使用热空气源，优选干发器施加热空气，例如温度为≥30℃，优选≥50℃±5℃的空气完成干燥。

以顺序规则((b)在(a)后)的步骤(a)结束和步骤(b)开始之间的时间间隔不需要通过附加步骤延长。优选，它最多占2h，特别优选2-70min，非常特别优选4-30min，最优选5-15min。

含疏水蛋白组合物的接触时间可占至多2h。优选它占2-90min，例如3-70min、4-30min、5-15min。

步骤(b)中的染色优选用根据制造商说明的商业惯用染色剂进行，而且还可用包含非永久性染料的不同组合物进行。

在染色阶段结束后，可洗涤并且干燥角蛋白。

方法(1)的步骤还可重复若干次。

实施例5中单独步骤的顺序和类型为实现本发明方法(1)的优选形式。此外还可从这些步骤中进行选择，只要它符合以上规定。

非永久性染料和疏水蛋白(单独或作为组合)均优选存在于组合物中。本发明组合物优选为化妆品组合物。除了疏水蛋白和/或非永久性染料以外，它们通常包含化妆品可接受介质以及支持化妆品效果的其它合适成分，尤其是赋形剂和添加剂。这些组分不应该不利影响染色结果。适合于这一目的的此类化妆品组合物和成分的基本配方为本领域技术人员熟知，并且参见化妆品手册，例如Schrader，Grundlagen and Rezepturen der Kosmetika，Hüthig Verlag，Heidelberg，1989，或Umbach，Kosmetik：Entwicklung，Herstellung and Anwendung kosmetischer Mittel，第2版，1995，Georg Thieme Verlag。

本发明组合物尤其制成化妆品配制剂，例如霜剂、乳液、凝胶以及含洗涤剂的发泡溶液，例如洗发水、泡沫气雾剂、和适合于施用至毛发的其它配制剂。

这种水性化妆品配制剂的常规组分例如为润湿剂和乳化剂，例如阴离子、非离子和两性表面活性剂，例如脂肪醇硫酸盐，烷基磺酸盐，α-烯烃磺酸盐，脂肪醇聚乙二醇醚硫酸盐，氧化乙烯与脂肪醇，脂肪酸和烷基酚的加成产物，失水山梨醇脂肪酸酯和脂肪酸偏甘油酯、脂肪酸链烷醇酰胺以及增稠剂，例如甲基-或羟基乙基纤维素、淀粉、脂肪醇、石蜡油、脂肪酸，还有香精油和毛发护理添加剂，例如水不溶性阳离子、两性和阴离子聚合物、蛋白质衍生物、泛酸、胆甾醇，着色剂，活性剂如泛酰醇、尿囊素、吡咯烷酮羧酸及其盐、植物提取物和维生素，光稳定剂，稠度调节剂如糖酯、多元醇酯或多元醇烷基醚，蜡如蜂蜡和褐煤蜡，络合剂如EDTA、NTA和膦酸，溶胀剂和渗透剂如甘油、丙二醇单乙醚、碳酸盐、碳酸氢盐、胍、脲以及一元、二元和三元磷酸酯，珠光剂如乙二醇单-和二硬脂酸酯，推进剂如丙烷和丁烷混合物、N₂O、二甲基醚、CO₂和空气以及抗氧化剂。水性化妆品的其它常规组分和配制剂为本领域技术人员所已知并且例如在Schrader，Grundlagen和Rezepturen der Kosmetika，Hüthig Buch Verlag，Heidelberg，第2版，1989和在WO 2007/063024以及在WO 2006/136607中描述为化妆品可接受的赋形剂和添加剂。这些明确引入本文参考。

为此，本发明组合物的制备中所用化妆品载体组分以常规量使用，例如乳化剂基于全部染色剂以0.5-30重量％的浓度使用，而增稠剂以0.1-25重量％的浓度使用。

不依赖化妆品配制剂类型，例如为霜剂、凝胶或洗发水，本发明组合物具有弱酸性、中性或碱性pH值。优选为6-8的pH范围。使用常规pH调节剂，但优选不用氨水或其它认为有害的化学品进行pH值调节。

在优选的方面中，除疏水蛋白和非永久性染料以外，还将其吸收和效果通过存在疏水蛋白而改进的至少一种其它化妆品活性成分施用至角蛋白。在所述优选的方面中，除疏水蛋白或非永久性染料或除两种成分的组合以外，本发明组合物此外还包含至少一种其吸收和效果通过存在疏水蛋白而改进的化妆品活性成分，或所述化妆品活性成分单独施用(以纯式或作为组合物的组分)。

其它化妆品活性成分优选为亲水性。

其吸收通过疏水蛋白改进的优选化妆品活性成分在WO 2006/136607中描述为“效应分子”，其相应段落明确引入本文供参考。

在本发明组合物中，效应分子可在一个实施方案中用作化妆品活性成分。

下文中效应分子理解为具有特殊可预见效果的分子。这些可为蛋白质分子如酶，或非蛋白质分子如染料、光稳定剂、维生素和脂肪酸、蔗糖或含金属离子的化合物。

在蔗糖中，优选葡聚糖，尤其是天然来源的蔗糖，例如来自蜂蜜或谷物的那些。

在蛋白质效应分子当中，优选酶、肽和抗体。

在酶中，优选以下效应分子：氧化酶、过氧化物酶、蛋白酶、酪氨酸酶、金属结合酶、乳过氧化物酶、溶菌酶、淀粉葡糖苷酶、葡萄糖氧化酶、超氧化物歧化酶、光裂化酶、过氧化氢酶。

高度合适的蛋白质效应分子还有植物和动物来源的蛋白质水解产物，例如海洋来源的蛋白质水解产物、牛奶或丝蛋白质水解产物。

特别高度合适的有在抗老化剂中使用的规定肽，例如Matrixyl(INCI，甘油-水-丁二醇-卡波姆-失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚月桂酸酯-棕榈酰五肽-4)、Argireline(INCI命名：水、乙酰基六肽-3)、Rigin(INCI命名：水(和)-甘油(和)硬脂基聚氧乙烯(20)醚(和)棕榈酰四肽-7)，Eyeliss(INCI命名：水-甘油-橙皮苷甲基查尔酮-硬脂基聚氧乙烯(20)醚-二肽-2-棕榈酰四肽-7)Regu-Age(INCI命名：氧化还原酶-大豆肽-水解米糠提取物)和Melanostatin-5(INCI命名：水-葡聚糖-九肽-1)。

在非蛋白质效应分子中，非蛋白质抗老化剂如咖啡因和抗氧化剂优选作为效应分子。抗氧化剂，又名自由基清除剂，能够中和所谓自由基。这些为在许多代谢反应中和在能量生成中生理学产生的侵略性化合物。它们在主体防御反应中很重要，但它们也能诱发细胞膜和主体蛋白质遗传物质(DNA)的损坏。这些损坏可导致早期组织老化、组织坏死和癌症。对于抗氧化剂，包括类胡萝卜素、抗坏血酸(维生素C，E 300)以及L-抗坏血酸钠(E 301)和L-抗坏血酸钙(E 302)；抗坏血酸棕榈酸酯(E 304)；丁基羟基苯甲醚(E 320)；丁基羟基甲苯(E 321)；钙-二钠-EDTA(E 385)；没食子酸酯如没食子酸丙酯(E 310)、没食子酸辛酯(E 311)和没食子酸十二酯(没食子酸月桂酯)(E 312)；异抗坏血酸(E 315)以及三抗坏血酸钠(E 316)；卵磷脂(E322)；乳酸(E 270)；多磷酸盐如二磷酸盐(E 450)、三磷酸盐(E 451)和聚磷酸盐(E 452)；二氧化硫(E 220)以及亚硫酸钠(E 221)、亚硫酸氢钠(E 222)、焦亚硫酸钠(E 223)、亚硫酸钾(E 224)、亚硫酸钙(E 226)、亚硫酸氢钙(E 227)和亚硫酸氢钾(E 228)；硒；生育酚(维生素E，E 306)以及α-生育酚(E 307)、γ-生育酚(E 308)和δ-生育酚(E 309)；氯化亚锡II(E 512)；柠檬酸(E 330)以及柠檬酸钠(E 331)和柠檬酸钾(E 332)；L-谷胱甘肽、L-半胱氨酸、多酚、酚醛酸、类黄酮、植物雌激素、谷胱甘肽和抗氧化酶过氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶。

根据本发明，抗氧化剂为至少一种选自以上抗氧化剂的化合物。

其它合适的效应分子为类胡萝卜素。根据本发明，类胡萝卜素理解为单独或作为混合物的以下化合物：β-胡萝卜素、番茄红素、叶黄素、虾青素、玉米黄质、隐黄质、柠檬黄质、斑蝥黄、胭脂树橙、β-脱辅基-4-胡萝卜醛、β-脱辅基-8-胡萝卜醛、β-脱辅基-8-胡萝卜素酸酯。优选使用的类胡萝卜素为β-胡萝卜素、番茄红素、叶黄素、虾青素、玉米黄质、柠檬黄质和斑蝥黄。

在本发明上下文中，术语“类视色素”表示维生素A醇(视黄醇)及其衍生物如维生素A醛(视黄醛)、维生素A酸(视黄酸)和维生素A酯(例如乙酸视黄酯、丙酸视黄酯和棕榈酸视黄酯)。因此术语视黄酸包括全反式视黄酸和13-顺式视黄酸。

术语视黄醇和视黄醛优选包括全反式化合物。作为优选的类视黄醇，使用下文也称为视黄醇的全反式视黄醇。

其它优选的效应分子为维生素，尤其是维生素A及其酯。

维生素为不在动物和人体中产生或仅为不足量的重要有机化合物。基于这一定义，将13种组分或13类组分归类为维生素。维生素A(视黄醇)、维生素D(钙化醇)、维生素E(生育酚，生育三烯酚)和维生素K(叶绿醌)属于脂溶性维生素类。

维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B6(吡哆醛类)、维生素B12(钴胺素)、维生素C(L-抗坏血酸)、泛酸、生物素、叶酸和烟酸属于水溶性维生素。

A、C、E和F类维生素、前维生素和维生素前体，尤其是3，4-二脱氢视黄醇、β-胡萝卜素(维生素A的前维生素)、抗坏血酸(维生素C)以及抗坏血酸的棕榈酸酯、葡糖苷或磷酸盐，生育酚，尤其是α-生育酚及其酯，例如乙酸酯、烟酸酯、磷酸酯和琥珀酸酯；还有维生素F，其理解为必需脂肪酸，尤其是亚油酸、亚麻酸和花生四烯酸。

维生素E为现有8种具有抗氧化和非抗氧化效果的脂溶性物质类的集合术语。维生素E为每种动物细胞薄膜的组分，然而，它仅在光合活性有机体如植物和蓝细菌中形成。8种已知维生素E类型的4种称为生育酚(α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚)。其余当前已知的4种类型维生素E称为生育三烯酚(α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚和δ-生育三烯酚)。此外，这些物质的衍生物如α-生育酚乙酸酯可为有利的。

维生素A及其衍生物和前维生素有利地显示特别的皮肤润滑效果。

对于维生素B类的维生素、前维生素或维生素前体或其衍生物以及2-呋喃酮衍生物，尤其包括：

维生素B1，俗名硫胺素，化学名称3-[(4’-氨基-2’-甲基-5’-嘧啶基)甲基]-5-(2-羟基乙基)-4-甲基噻唑

氯化物。

维生素B2，俗名核黄素，化学名称7，8-二甲基-10-(1-D-核糖醇基)-苯并[g]蝶啶-2，4(3H，10H)-二酮。核黄素例如在乳清中以游离形式出现，而其它核黄素衍生物可从细菌和酵母中分离出。在本发明上下文中，同样适合的核黄素的立体异构体为来苏黄素，其可从鱼粉或肝脏中分离出并且带有D-阿拉伯糖醇残基而不是D-核糖醇基。

维生素B3。以该名称经常指化合物烟酸和烟酰胺(尼克酰胺)。根据本发明优选烟酰胺。

维生素B5(泛酸和泛醇)。优选使用泛醇。本发明泛醇衍生物尤其是泛醇的酯和醚，以及阳离子衍生化的泛醇。在本发明的其它优选实施方案中，除了泛酸或泛醇以外，可使用2-呋喃酮的衍生物。特别优选的衍生物为市场上可获得的化合物。俗名为泛内酯(Merck)的二氢-3-羟基-4，4-二甲基-2(3H)-呋喃酮、4-羟甲基-γ-丁内酯(Merck)、3，3-二甲基-2-羟基-γ-丁内酯(Aldrich)和2，5-二氢-5-甲氧基-2-呋喃酮(Merck)，其中明显包括所有的立体异构体。

这些化合物有利地赋予本发明组合物润湿和润滑皮肤性能。

维生素B6，其中理解为不涉及均一物质，而是已知俗名为吡哆醇、吡哆胺和吡哆醛的5-羟基甲基-2-甲基吡啶-3-醇的衍生物。

维生素B7(生物素)，也称为维生素H或“皮肤维生素”。生物素表示(3aS，4S，6aR)-2-氧代六氢噻吩并[3，4-d]咪唑-4-戊酸。

维生素B9和维生素B12。

根据本发明，可同样使用合适的维生素衍生物(盐、酯、糖、核苷酸、核苷、肽和脂)。

此外，核酸如DNA和RNA也可为合适的效应分子，例如为增湿剂。

优选该组的亲脂性、油溶性抗氧化剂为生育酚及其衍生物，五倍子酸酯、类黄酮和类胡萝卜素，以及丁基羟基甲苯/苯甲醚。水溶性抗氧化剂优选为氨基酸，例如酪氨酸和半胱氨酸及其衍生物，以及鞣酸，尤其是植物来源的那些。三萜，尤其是三萜酸如熊果酸、迷迭香酸、白桦脂酸、乳香酸和泻根酸。

其它优选的效应分子优选为低剂量的水果酸(α-羟基酸)，例如苹果酸、柠檬酸、乳酸、酒石酸、乙醇酸。这些可基于组合物的总重量以0.1-35％，优选0.1-10％，特别是1-10％，1-5％的浓度存在。

其它优选的效应分子为脲及其衍生物，因为它们营养头皮。它们可以基于组合物的总重量以0.1-25％，优选0.1-10％，特别是1-10％，1-5％的浓度存在。脲及其衍生物不等同于氨水，氨水优选未在本发明组合物和方法中使用。

其它优选效应分子为UV防晒滤光剂，尤其是在WO 2006/136607中提到的UV滤光剂。

特别优选的其它化妆品活性成分为角蛋白护理剂和护肤剂，尤其是水溶性维生素、抗氧化剂、UV滤光剂、葡聚糖、类黄酮和咖啡因。

在水溶性维生素组中，优选一种或多种以下维生素：维生素C、维生素B1、维生素B2、尼亚新(烟酸、维生素B3)、泛酸和泛醇(维生素B5)、维生素B6、生物素(维生素B7、维生素H)、维生素B9(叶酸)和维生素B12或其衍生物。

泛醇、泛内酯、烟酰胺、抗坏血酸基磷酸钠和生物素为本发明特别优选的。

在UV滤光剂组中，优选水溶性UV滤光剂，特别优选Uvinul MS 40、Uvinul P 25、Uvinul DS 49和Z-COTE，非常特别优选Uvinul MS 40和P 25。

在抗氧化剂组中，优选类黄酮、酚酸和多酚。

最优选一种或多种化妆品活性成分选自泛醇、抗坏血酸及其衍生物、水溶性UV滤光剂、咖啡因。

水果和草本植物的水性提取物，尤其是植物提取物、水果提取物或草本提取物，例如葡萄、酸橙、葡萄柚、燕麦、小麦、稻谷、大豆、人参、薄荷等也可为本发明组合物的组分。

本发明的具体实施方案为试剂盒(3)。所述试剂盒包含两种单独化妆品组合物，即

(i)包含如上所述式(I)疏水蛋白的组合物，和

(ii)包含如上所述用于角蛋白非永久性染色的染料的组合物。

当与单独施用组合物(ii)相比时，同时施用或按照两种组合物(i)和(ii)的顺序(i)-(ii)使用导致着色剂的颜色强度和/或颜色坚牢度增加。

在所述试剂盒中，组合物(ii)优选为用于毛发着色、半-或部分永久性染色的常规染色剂。

在优选方面中，试剂盒中的组合物(i)或(ii)或两种组合物进一步包含其吸收和/或效果通过存在疏水蛋白而改进的化妆品活性成分。

作为选择或另外，试剂盒可进一步包含含有这种化妆品活性成分的其它组合物(iii)。

试剂盒中所包含物质的细节，尤其是有关疏水蛋白和染料的优选方面如上所述。

在实施方案(4)中，疏水蛋白用于提高角蛋白或含角蛋白材料的非永久性染色效果。在这种情况下，所用疏水蛋白定义如在以上实施方案中所描述。所用非永久性染料同样如上所定义。

本发明的单独实施方案在以下实施例中详细描述。这些实施例仅用于说明本发明，而不应当认为限制本发明主题。

实施例

在以下实施例中，使用标准方法评价毛发染色剂。如果没有特别注明的话，所用的所有配方具有最高可能的商购纯度并且根据制造商的说明使用每种商购的毛发、着色剂、试剂、装置、抗体和试剂盒。

实施例中所用疏水蛋白根据WO 2007/014897的A部分中的实施例生产。

实施例中所用“疏水蛋白A”的序列描述在WO 2007/014897的SEQ IDNO：19和20中。所述“疏水蛋白A”对应与蛋白质yaad融合的疏水蛋白dewA。此外，该结构还包含Xa-分裂位点和His标记(yaad-Xa-dewA-his)。

实施例中所用“疏水蛋白B”的序列描述在WO 2007/014897的SEQ IDNO：25和26中。所述“疏水蛋白B”对应与截断蛋白质yaad融合的疏水蛋白dewA。此外，该结构还包含Xa-分裂位点和His标记(yaad40-Xa-dewA-his)。

实施例1：皮肤粘附性(定性)

开发了目视定性测试以测定疏水蛋白是否与皮肤粘附。

所用溶液：

封闭溶液：在TBS中稀释的DIG洗涤+缓冲液组合1585762 BoehringerMA(10×溶液)

TBS：20mM Tris；150mM NaCl pH 7.5

TTBS：TBS+0.05％吐温20

第一步为将皮肤的外部角蛋白层转移到稳定载体上。为此，将透明胶带牢牢固定在人脱毛皮肤上，然后除去。该测试可直接在透明胶带上进行，或粘附角蛋白层可通过重新固定转移到载玻片上。如下进行粘附测试：

-转移至Falcon管中，用不同试剂进行培育

-任选加入乙醇脱脂，除去乙醇并且干燥载玻片

-在室温下用封闭缓冲液培育1h

-用TTBS洗涤2×5min

-用TBS洗涤1×5min

-在室温下，分别用在TBS/0.05％吐温20中的待测试的疏水蛋白(结合有标记-例如His₆、HA等)和对比蛋白质培育2-4h

-除去上清液

-用TBS洗涤三次

-在室温下，用在TBS+0.01封闭液中稀释1∶2000的单克隆抗聚组氨酸抗体培育1h

-用TTBS洗涤2×5min

-用TBS洗涤1×5min

-在室温下，用在TBS+0.01％封闭液中稀释1∶5000的抗小鼠IgG碱性磷酸酶偶联物培育1h

-用TTBS洗涤2×5min

-用TBS洗涤1×5min

-加入磷酸酶基质(NBT-BCIP；Boehringer MA 1片/40ml水2.5min；加水停止)

-用肉眼或用显微镜光学检测颜色沉积。蓝色沉积表明疏水蛋白已经粘附至皮肤。

可类似测定对指甲的粘附性，其中用指甲表面直接培育待研究的疏水蛋白并且相应测量。

实施例2：皮肤粘附性(定量)

开发了定量测试，其中将疏水蛋白与非特殊蛋白质的皮肤粘附强度进行比较(图2)。使用5mm开塞钻通过从解冻的没有毛发(人或猪)的皮肤干片上钻出一片(任选在表面测试中，将一片皮肤放入Falcon管的盖子中)。将皮肤样品制成2-3mm厚度以除去可能存在的组织。随后将皮肤样品转移至Eppendorf管中(蛋白质低结合)以进行结合测试(也参见图2)：

-用PBS/0.05％吐温20洗涤两次

-加入1ml在PBS中的1％BSA并在室温下培育1h，轻微旋转运动(900rpm)。

-除去上清液

-加入100μg在PBS+0.05％吐温20中的疏水蛋白；在室温下培育2h并轻微旋转运动(900rpm)。

-除去上清液

-用PBS/0.05％吐温20洗涤三次

-在室温下，用1ml具有过氧化物酶偶联物的单克隆小鼠抗标记(His₆或HA或特殊KBD)抗体(在PBS/0.05％吐温20中1∶2000)[单克隆抗聚组氨酸过氧化物酶偶联物，在小鼠中产生，冻干成粉末，Firma Sigma]培育2-4h，轻微旋转运动(900rpm)

-用PBS/0.05％吐温20洗涤三次

-加入过氧化物酶基质(1ml/Eppendorf管；组成参见下文)

-使反应继续直至出现蓝色着色(大约1∶30min)。

-使用100μl 2M H₂SO₄停止反应。

-在405nm测量吸收度。

过氧化物酶基质(临用前准备)：

-0.1ml TMB溶液(DMSO中42mM TMB)

-+10ml基质缓冲液(0.1M乙酸钠，pH 4.9)

-+14.7μl H₂O₂(3％)

与未包含疏水蛋白的样品相比吸收度增加表明疏水蛋白与皮肤结合。背景资料参见实施例3。

类似地，可评价对粘膜的粘附，其中借助透明胶带取出粘膜(例如人粘膜)，则可分析有关粘合效果。

实施例3：对毛发的粘附(定量)

为了证明同样与其它蛋白质相比对毛发的粘合力，开发了定量测定(WO 2006/136607中图2)。对于这一测试，首先用疏水蛋白培育毛发并且洗掉过量疏水蛋白。随后经由疏水蛋白His标记结合抗体过氧化物酶偶联物。再次洗掉未结合的抗体过氧化物酶偶联物。结合的抗体过氧化物酶偶联物[单克隆抗聚组氨酸过氧化物酶偶联物，在小鼠中产生，冻干成粉末，Sigma]能够将无色基质(TMB)转化为可在405nm光度测量的有色产物。吸收力分别表明结合的疏水蛋白和对比蛋白质的量。选择对比蛋白质，例如枯草杆菌(B.subtilis)的YaaD，其同样具有该测试所必需的用于检测的His标记。代替His标记，可使用与过氧化物酶偶联的不同特殊抗体。

将5mg毛发(人)切成5mm长度的片并转移到Eppendorf管(蛋白质低结合)以进行结合力测试：

-加入1ml乙醇用于脱脂

-离心，除去乙醇并用H₂O洗涤毛发

-加入1ml在PBS中的1％BSA并在室温下培育1h，轻微旋转运动-离心，除去上清液

-分别加入在1ml PBS/0.05％吐温20中的待测试疏水蛋白(结合有标记，例如His₆、HA等)和对比蛋白质。在4℃下培育16h(或在室温下至少2h)，并轻微旋转运动

-离心，除去上清液

-用PBS/0.05％吐温20洗涤三次

-在室温下，用1ml具有过氧化物酶偶联物的单克隆小鼠抗标记(分别His₆和HA)抗体(在PBS/0.05％吐温20中1∶2000)[单克隆抗聚组氨酸过氧化物酶偶联物，在小鼠中产生，冻干成粉末，Sigma]培育2-4h，轻微旋转运动

-用PBS/0.05％吐温20洗涤三次

-加入过氧化物酶基质(1ml/Eppendorf管)

-使反应继续直至出现蓝色着色(大约2min)

-用100μl 2M H₂SO₄停止反应。

-在405nm测量吸收度。

过氧化物酶基质(临用前新制备)：

0.1ml TMB-

(DMSO中42mM TMB)

+10ml基质缓冲液(0.1M乙酸钠，pH 4.9)

+14.7μl H₂O₂(3％)

BSA＝牛血清白蛋白

PBS＝磷酸盐缓冲盐水

吐温20＝失水山梨醇聚氧乙烯醚单月桂酸酯，n为约20

TMB＝3，5，3’，5’-四甲基联苯胺

对疏水蛋白的示例性粘附测试显示与对比蛋白质YaaD明显较低的粘附性相比，疏水蛋白对毛发的粘附性具有显著优势。

表1：定量的疏水蛋白活性测试毛发：1)缓冲液；2)对比蛋白质yaad；3)疏水蛋白。该表显示在405nm的吸收值。

1	缓冲液	A405nm＝0.05
			2	对比蛋白质yaad	A405nm＝0.12
3	疏水蛋白	A405nm＝1.43

实施例4：用染料“Alexa”衍生疏水蛋白和对毛发的粘附性

染料可经由半胱氨酸残基的SH-基团偶联至疏水蛋白。在染料AlexaFluor 532偶联前，切去疏水蛋白的二硫桥：

Alexa Fluor 532

1mg疏水蛋白

0.5ml缓冲液(75mM Tris pH 8.0，2.5mM EDTA，1mM DTT)在37℃下培育30min

根据制造商的说明进行染料的偶联(Alexa 532蛋白标记试剂盒；分子探针；MP-A-10236)。

如下进行用Alexa偶联的疏水蛋白涂布人发：

-在室温下，分别用在TBS缓冲液中的50μg/ml Alexa疏水蛋白和对比蛋白质yaad以及非偶联染料Alexa 532培育10mg人发24h。

-用TBS/0.05％吐温20洗涤两次

-用TBS洗涤一次

-用TBS/1％SDS洗涤一次

-用荧光显微镜检测(WO 2006/136607中图4)

实施例5：疏水蛋白处理毛发的半永久性染色剂中染料的改进吸收和粘附性

在这一测试中，使用德国Kerling International Haarfabrik GmbH公司的欧洲人天然金发。

测试用于毛发半永久性染色的两种商购产品(第2类)，即：-Londa，Londeston“Easy Colors 45，红色火焰”，可洗，根据制造商数据支持6-8次毛发洗涤(第2类)。包括染料碱性红76、HC红10、HC红11、碱性紫2、羟基乙基-2-硝基对甲苯胺。

-Schwarzkopf，Brillance Colorationscreme“T872 intensivrot”，可洗，根据制造商数据显示“在10次洗涤后颜色强度仍然高达90％”(第2类)。包括染料HC蓝2、HC黄13、HC黄2、羟基乙基-2-硝基对甲苯胺、2-氨基-6-氯-4-硝基苯酚、HC蓝12、N，N-双(2-羟基乙基)-2-硝基对苯二胺、碱性蓝99、4-氨基-3-硝基苯酚、4-羟丙基氨基-3-硝基苯酚、3-硝基对羟基乙基氨基苯酚、HC蓝11、碱性棕17、HC红1、HC红7、HC红13、HC橙1、碱性紫2、HC红3。

测试如下进行：

1)制备在50mM NaH₂PO₄(pH 7.5)中包含0.00625-0.2重量％“疏水蛋白A”或“疏水蛋白B”(在WO 2007/014897中，SEQ ID NO分别为：20和26)的溶液。在室温下使用磁力搅拌器搅拌溶液1h。

2)另外，制备无疏水蛋白的对比溶液。

3)在32℃下，在已制备溶液中培育毛发1h。

4)方案(a)：未干燥毛发进一步进行。方案(b)：使用干发器在50℃干燥毛发。

5)用自来水漂洗毛发，随后在室温下干燥毛发。

6)根据制造商的说明施用毛发着色剂。

7)使用“Penaten Baby-Shampoo”溶液(1％)反复洗涤(1min洗发，1min漂洗，在室温下干燥)，随后目测评估干燥状态的毛发。重复洗涤步骤3-8次。

在毛发评价中，与已经用无疏水蛋白的对比溶液处理过的那些毛发进行对比。特别是在测试方案(b)中，可认为用疏水蛋白A和B处理过的毛发颜色强度更高，其表明与对比溶液相比，染料的改进粘附性以及毛发的染料吸收。甚至在多次洗涤后，染料比在无疏水蛋白处理的毛发中持续更久。

在测试方案(a)中，多次洗涤后，同样认为染料比在无疏水蛋白处理的毛发中持续更久。

与用对比溶液处理过的毛发相比，在测试方案(a)中颜色强度同样更高。

在具有8次洗涤且疏水蛋白浓度为0.2重量％、0.1重量％和0.05重量％的测试中，对于染色结果最好浓度为0.05重量％。

在具有3次洗涤且疏水蛋白浓度为0.05重量％、0.025重量％和0.0125重量％的测试中，对于染色结果最好浓度为0.025重量％。

在具有3次洗涤且疏水蛋白浓度为0.025重量％、0.0125重量％和0.00625重量％的测试中，具有疏水蛋白的各染色结果比无疏水蛋白的更好。

在前段内容中，术语“更好”是指在多次洗涤步骤后，毛发中染料持续更久和/或颜色强度高于对比浓度。在大多数情况下，同时观察到两种效果。

实施例6：

染色的光度评价

在这一测试中，程序如实施例5中，包括用干发器干燥。使用0.1重量％的“疏水蛋白B”。

使用L′Oreal Si-Naturelle，Schaumcoloration Nr.01(组合物：水、月桂基聚氧乙烯(12)醚、山嵛基三甲基氯化铵、二甲醚、鲸蜡硬脂醇、异丁烷、乙二醇二硬脂酸酯、氨基二甲聚硅氧烷、丁烷、丙烷、HC红3、羟基乙基纤维素、羟基蒽醌氨丙基甲基吗啉

甲基硫酸盐、HC蓝2、月桂基硫酸钠、碱性红51、碱性蓝99、十三烷基聚氧乙烯(12)醚、对羟基苯甲酸甲酯、HC黄9、十六烷基三甲基氯化铵、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸丙酯、香精)对疏水蛋白B(在WO2007/014897中，SEQ ID NO：26)处理的和未处理的毛发进行着色。

随后，干燥毛发并且用眼睛和根据光度计制造商的说明(使用手册Chroma-Meter CR-300/CRP-310/CR-331，minolta，德语版本，版本号：527349/9.99)借助Minolta CR 300和Process-Unit-Minolta DP-301(Konica Minolta Sensing，Inc.，日本大阪)光度测定毛发颜色强度。为此，将毛发放置在光度计的测量区域以覆盖测量区域的全部宽度。随后，使用光度计进行颜色测量。当测量另一毛发样品用于对比时，直接用光度计计算ΔE值。目测结果：可认为疏水蛋白预处理的毛发染色更强。

光度计结果：

1)色彩测量

疏水蛋白处理的    未处理的

L^＊    35.68             40,66

a^＊    +28.45            +22.17

b^＊    +19.49    +17.45

根据CIE 1976使用L^＊a^＊b^＊-体系可识别明显差别。

2)疏水蛋白处理和未处理毛发之间的色差测量：

ΔE＝5.15

ΔE为根据CIE 1976，DIN5033、DIN6174测量和计算的在色标和对比色之间的色距(同义词：色差)量度。ΔE值是用根据Chroma-MeterCR-300/CR-310/CR-331，Minolta，德语版本，版本号：527 349/9.99的制造商手册使用的CR-300光度计根据制造商说明全自动测定。

通常，可察觉色差的ΔE值为2-5，对于非常好的结果，它们大于5，符合肉眼可注意到的明显色差(存在不同颜色)(http://de.wikipedia.org/wiki/Delta E)：

ΔE        等级评价

0.0...0.5  无或几乎无差别

0.5...1.0  训练眼睛可注意到差别

1.0...2.0  可注意到的色差

2.0...4.0  可察觉的色差

4.0...5.0  几乎不能容忍的明显色差

5.0以上    差别归为不同颜色。

因此，当使用疏水蛋白时，注意到色差明显增加。

Claims (21)

1.一种用于角蛋白或含角蛋白材料非永久性染色的方法，其包括将至少一种非永久性染料和至少一种结构式(I)的疏水蛋白施用至角蛋白或含角蛋白材料上。

2.根据权利要求1的方法，其中所述疏水蛋白和非永久性染料以单独组合物施用。

3.根据权利要求1或2的方法，其中所述疏水蛋白和非永久性染料同时或依次施用至角蛋白或含角蛋白材料上。

4.根据权利要求3的方法，其中所述疏水蛋白在第一步骤(a)中施用，所述非永久性染料在第二步骤(b)中施用。

5.根据权利要求4的方法，其中所述角蛋白或含角蛋白材料在步骤(a)和(b)之间干燥。

6.根据权利要求3-5中任一项的方法，其中将未与角蛋白或含角蛋白材料结合的疏水蛋白洗掉。

7.根据权利要求1-6中任一项的方法，其中所述含角蛋白材料为毛发。

8.根据权利要求1-7中任一项的方法，其中所述疏水蛋白以0.001-5重量％的浓度施用至角蛋白上。

9.根据权利要求1-8中任一项的方法，其中所述疏水蛋白选自dewA、rodA、hypA、hypB、sc3、basf1和basf2类型的疏水蛋白，优选dewA、hypA或hypB类型的疏水蛋白。

10.根据权利要求1-9中任一项的方法，其中所述疏水蛋白为融合蛋白质组分，且其中融合配偶体优选yaad(SEQ ID NO：16，在WO 2007/014897中)或截断yaad。

11.根据权利要求10的方法，其中所述疏水蛋白选自yaad-Xa-dewA-his(SEQ ID NO：20，在WO 2006/082251中)、yaad-Xa-rodA-his(SEQ ID NO：22，在WO 2006/082251中)、yaad-Xa-basf1-his(SEQ ID NO：24，在WO 2006/082251中)和衍生自截断yaad-融合配偶体(SEQ ID NO：16，在WO 2006/082251中)的疏水蛋白，尤其是yaad40-Xa-dewA-his(SEQ ID NO：26，在WO 2007/014897中)。

12.根据权利要求1-11中任一项的方法，其中所述非永久性染料为亲水性的。

13.根据权利要求12的方法，其用于毛发着色、半-或部分永久性染色，其中所述非永久性染料作为毛发着色、半-或部分永久性毛发染色组合物的组分施用。

14.根据权利要求1-13中任一项的方法，其中施用至少一种其吸收和/或功能通过存在疏水蛋白而改进的其它化妆品活性成分。

15.一种用于角蛋白或含角蛋白材料非永久性染色的组合物，其包含如下组分：

(i)至少一种如权利要求1和8-11中任一项所定义的具有结构式(I)的疏水蛋白，和

(ii)至少一种如权利要求1或12所定义的非永久性染料。

16.根据权利要求15的组合物，其还包含至少一种其吸收和/或功能通过存在疏水蛋白而改进的化妆品活性成分。

17.一种用于角蛋白或含角蛋白材料非永久性染色的试剂盒，其包含两种单独化妆品组合物，即

(i)包含至少一种如权利要求1和8-11中任一项所定义的式(I)疏水蛋白的组合物，和

(ii)包含至少一种如权利要求1或12所定义的非永久性染料的组合物。

18.根据权利要求17的试剂盒，其中所述组合物(i)或(ii)或两种组合物还包含其吸收和/或功能通过存在疏水蛋白而改进的化妆品活性成分。

19.根据权利要求17或18的试剂盒，其还包含含有至少一种其吸收和/或功能通过存在疏水蛋白而改进的化妆品活性成分的组合物(iii)。

20.结构式(I)的疏水蛋白在用非永久性染料对角蛋白或含角蛋白材料非永久性染色中提高非永久性染色强度和/或非永久性染色抵抗洗掉的坚牢度的用途。

21.根据权利要求20的用途，其中所述疏水蛋白和非永久性染料分别如权利要求9-11和12中任一项所定义。