CN102145076A

CN102145076A - 地黄及其提取物的新用途

Info

Publication number: CN102145076A
Application number: CN2011100292059A
Authority: CN
Inventors: 吴祖泽; 卢兖伟; 崔春萍; 袁丽珍; 唐仲雄
Original assignee: BEIJING SANLY SCI Tech DEVELOP Inc Ltd
Current assignee: Academy Of Military Medicine Pla Academy Of Military Sciences; BEIJING SANLY SCI Tech DEVELOP Inc Ltd
Priority date: 2010-02-05
Filing date: 2011-01-27
Publication date: 2011-08-10
Anticipated expiration: 2031-01-27
Also published as: CN105362458A; CN102145076B

Abstract

本发明提供了地黄及其提取物的新用途。具体地说，本发明提供了地黄或其提取物在制备用于改善肝脏功能的药物或保健产品中的用途，以及地黄或其提取物在制备用于治疗和/或预防与肝脏相关的疾病和/或病症的药物或保健产品中的用途。结果表明，地黄或其提取物能够有效地改善肝脏功能例如修复肝细胞、提高肝细胞抗氧化能力、减少肝细胞内氧化自由基(ROS)的含量等。此外，地黄或其提取物能够有效地用于治疗和/或预防与肝脏相关的疾病和/或病症例如肝损伤、脂肪肝、肝炎、肝硬化、肝功能衰竭等。

Description

地黄及其提取物的新用途

技术领域

本发明属于医药保健产品技术领域，具体涉及地黄及其提取物的新用途。

背景技术

地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch的新鲜或干燥块根。秋季采挖，去除芦头、须根及泥沙，鲜用；或将地黄缓缓烘焙至约八成干。前者习称“鲜地黄”，后者习称“生地黄”。多年来《中国药典》一直收载有地黄及其炮制加工品熟地黄。可见其在中药材中的重要地位。

地黄的临床应用极为广泛。近年来，国内、外对地黄的化学成分及药理作用进行了很多研究。对于其药理作用，据报道其可用于免疫、内分泌、血液、心脑血管、神经系统等。

肝脏是人体最大、最重要的解毒脏器，具有强大的防御解毒功能。有害物质通过胃肠道、血液循环进入肝脏进行转化，因此，肝脏也容易受到这些毒性物质的损害，造成肝功能异常，脂肪肝，甚至继续发展为肝硬化、肝功能衰竭。例如，长期或间断性大量饮酒可引起肝损伤。导致酒精性肝炎、脂肪肝，直至肝硬化。

肝损伤的保健重在预防，尽量避免接触病因毒物，有效的预防和保护途径为通过抗氧化，减缓脂质过氧化反应，保护肝细胞结构。目前临床对于脂肪肝的治疗主要为去除病因，调整饮食，使用去脂药物等策略。

因此，目前本领域仍然迫切需要有改善肝脏功能例如修复肝细胞、提高肝细胞抗氧化能力等方面的新方法和产品，并且仍然需要有治疗和/或预防与肝脏相关的疾病和/或病症的新方法和产品，例如用于治疗和/或预防肝脏损伤如酒精性肝损伤以及脂肪肝、肝硬化等方面的新方法和产品。

发明内容

本发明人通过实验研究意外地发现，地黄或其提取物可用于修复肝细胞，增强肝细胞的抗氧化能力，防治肝脏损伤(如酒精性肝损伤)以及脂肪肝方面的变化。地黄或其提取物的上述作用例如防治肝损伤及脂肪肝的作用尚未见有文献报道。本发明基于上述发现而得以完成。

本发明的目的在于提供能改善肝脏功能以及治疗和/或预防与肝脏相关的疾病和/或病症的新方法。

在本发明的第一方面，提供了地黄或其提取物在制备用于改善肝脏功能的药物或保健产品中的用途。

根据本发明第一方面的用途，其中所述的改善肝脏功能包括但不限于修复肝细胞、提高肝细胞抗氧化能力、减少肝细胞内氧化自由基(ROS)的含量等。

在本发明的第二方面，提供了地黄或其提取物在制备用于治疗和/或预防与肝脏相关的疾病和/或病症的药物或保健产品中的用途。

根据本发明第二方面的用途，其中所述的与肝脏相关的疾病和/或病症包括但不限于因化学物质(包括但不限于酒精)引起的与肝脏相关的疾病和/或病症。进一步的，所述的与肝脏相关的疾病和/或病症包括但不限于肝损伤、脂肪肝、肝炎、肝硬化、肝功能衰竭等，例如因酒精等因素引起的肝损伤、脂肪肝、肝炎、肝硬化、肝功能衰竭等，特别是例如酒精性脂肪肝，更特别地是例如急性酒精性脂肪肝和慢性酒精性脂肪肝。

本发明第三方面提供了地黄或其提取物在制备用于改善哺乳动物(例如人)与运动平衡失调有关的病症或身体状态的药物或保健产品中的用途。在一个实施方案中，提供了地黄或其提取物在制备用于改善哺乳动物(例如人)与化学物质所致运动平衡失调有关的病症或身体状态的药物或保健产品中的用途。在一个实施方案中，所述的化学物质是乙醇。在一个实施方案中，提供了地黄或其提取物在制备用于改善哺乳动物(例如人)饮酒后运动平衡失调有关的病症或身体状态的药物或保健产品中的用途。

本发明第四方面提供了地黄或其提取物在制备用于改善哺乳动物(例如人)与缺氧有关的病症或身体状态或者用于抗与应激有关的病症或身体状态的药物或保健产品中的用途。在一个实施方案中，提供了地黄或其提取物在制备用于改善哺乳动物(例如人)与化学物质所致缺氧有关的病症或身体状态或者用于抗与化学物质所致应激有关的病症或身体状态的药物或保健产品中的用途。在一个实施方案中，所述的化学物质是乙醇。在一个实施方案中，提供了地黄或其提取物在制备用于改善哺乳动物(例如人)耐受缺氧有关的病症或身体状态或者用于抗与应激有关的病症或身体状态的药物或保健产品中的用途。

本发明第五方面提供了地黄或其提取物在制备用于改善哺乳动物(例如人)与免疫功能低下有关的病症或身体状态的药物或保健产品中的用途。在一个实施方案中，提供了地黄或其提取物在制备用于改善哺乳动物(例如人)与化学物质所致免疫功能低下有关的病症或身体状态的药物或保健产品中的用途。在一个实施方案中，所述的化学物质是乙醇。在一个实施方案中，提供了地黄或其提取物在制备用于改善哺乳动物(例如人)饮酒后免疫功能低下有关的病症或身体状态的药物或保健产品中的用途。

本发明第六方面提供了地黄或其提取物在制备用于改善哺乳动物(例如人)与脑功能损伤有关的病症或身体状态或者用于提高或改善记忆力的药物或保健产品中的用途。在一个实施方案中，提供了地黄或其提取物在制备用于改善哺乳动物(例如人)与化学物质所致脑功能损伤有关的病症或身体状态或者记忆力低下的药物或保健产品中的用途。在一个实施方案中，所述的化学物质是乙醇。在一个实施方案中，提供了地黄或其提取物在制备用于改善哺乳动物(例如人)饮酒后脑功能损伤或者记忆力低下有关的病症或身体状态的药物或保健产品中的用途。

本发明第七方面提供了地黄或其提取物在制备用于治疗、预防、和/或改善下列疾病、病症或身体状态的药物或保健产品中的用途：肝脏功能不全或损伤(例如，修复肝细胞、提高肝细胞抗氧化能力、减少肝细胞内氧化自由基(ROS)的含量)、与肝脏相关的疾病和/或病症(例如，因化学物质(包括但不限于酒精)引起的与肝脏相关的疾病和/或病症、肝损伤、脂肪肝、肝炎、肝硬化、肝功能衰竭、酒精性脂肪肝、急性酒精性脂肪肝、慢性酒精性脂肪肝)、与运动平衡失调有关的病症或身体状态(例如化学物质如乙醇所致，例如饮酒后的运动平衡失调)、缺氧有关的病症或身体状态(例如化学物质如乙醇所致，例如饮酒后的缺氧)、与应激有关的病症或身体状态(例如化学物质如乙醇所致，例如饮酒后的所致应激)、与免疫功能低下有关的病症或身体状态(例如化学物质如乙醇所致，例如饮酒后的免疫功能低下)、与脑功能损伤有关的病症或身体状态(例如化学物质如乙醇所致，例如饮酒后的脑功能损伤)、记忆力低下(例如化学物质如乙醇所致，例如饮酒后的记忆力低下)。在一个实施方案中，疾病、病症或身体状态与化学物质有关，即由化学物质所致。在进一步的实施方案中，所述的化学物质是乙醇或其与水的混合物，例如饮用酒类产品。

根据本发明第一方面至第七方面的任一项所述的用途，其中所述的药物或保健产品可用于哺乳动物尤其是人。

根据本发明第一方面至第七方面的任一项所述的用途，其中所述的药物或保健产品可用于哺乳动物尤其是人，并且该哺乳动物尤其是人(特别是成年人而言)每日使用该药物或保健产品的量相当于3～30g生地黄，优选相当于4～28g生地黄，更优选相当于5～24g生地黄，再更优选相当于7～20g生地黄，进一步优选相当于9～15g生地黄。

根据本发明第一方面至第七方面的任一项所述的用途，其中所述的地黄选自鲜地黄、生地黄、和熟地黄，优选生地黄、和熟地黄。

根据本发明第一方面至第七方面的任一项所述的用途，其中所述的地黄提取物中梓醇与低聚糖的含量比为1∶1～1∶9(重量/重量)，优选1∶1.2～1∶8，优选1∶1.5～1∶7，优选1∶2～1∶6，例如约1∶2、约1∶2.5、约1∶3、约1∶3.5、约1∶4、约1∶4.5、约1∶5、约1∶6。

根据本发明第一方面至第七方面的任一项所述的用途，其中所述的地黄提取物中梓醇的含量大于10％(重量百分数，以提取物总重量为基准计算)，优选10～40％、优选10～35％、优选10～30％、优选10～250％、优选10～20％，例如约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％。

根据本发明第一方面至第七方面的任一项所述的用途，其中所述的地黄提取物中低聚糖的含量大于40％(重量百分数，以提取物总重量为基准计算)，优选40～90％、优选40～85％、优选40～80％、优选40～75％、优选40～70％、优选40～65％、优选40～60％，例如约40％、约42％、约44％、约46％、约48％、约50％、约52％、约54％、约56％、约58％、约60％。

根据本发明第一方面至第七方面的任一项所述的用途，其中所述的地黄提取物中梓醇的含量大于10％(重量百分数，以提取物总重量为基准计算)，优选10～40％、优选10～35％、优选10～30％、优选10～250％、优选10～20％，例如约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％；并且低聚糖的含量大于40％(重量百分数，以提取物总重量为基准计算)，优选40～90％、优选40～85％、优选40～80％、优选40～75％、优选40～70％、优选40～65％、优选40～60％，例如约40％、约42％、约44％、约46％、约48％、约50％、约52％、约54％、约56％、约58％、约60％。

根据本发明第一方面至第七方面的任一项所述的用途，其中所述的药物或保健产品中还进一步含有其它的活性物质。在一个实施方案中，所述其它的活性物质选自牛膝、红景天或其组合。在一个实施方案中，所述药物或保健产品中含有地黄、牛膝、和红景天。在一个实施方案中，所述药物或保健产品中含有地黄、牛膝、和红景天，其重量配比为1∶(0.1～1)∶(0.1～1)，例如为1∶(0.1～0.5)∶(0.1～0.5)，例如约1∶0.25∶0.25。

根据本发明第一方面至第七方面的任一项所述的用途，其中所述的药物或保健产品中还任选地含有药学可接受的载体。

根据本发明第一方面至第七方面的任一项所述的用途，其中所述的药物或保健产品中的地黄或者其它活性物质(例如牛膝、红景天)可以是原药材或者其提取物(例如水提取物、醇提取物或醇-水混合物的提取物)。

根据本发明第一方面至第七方面的任一项所述的用途，其中所述的地黄提取物是通过包括水提取和乙醇沉淀的方法得到的；或者，其中所述的地黄提取物是地黄酒剂或乙醇浸膏。

根据本发明第一方面至第七方面的任一项所述的用途，其中所述的地黄提取物是通过包括如下步骤的方法制备得到的：将地黄粉碎成碎块，用水提取，将水提取液过滤、减压浓缩，向浓缩液中加入乙醇进行沉淀，过滤，将上清液减压浓缩并真空干燥。

根据本发明第一方面至第七方面的任一项所述的用途，其中所述的地黄提取物是通过包括以下的步骤得到的：

a)将地黄(例如鲜地黄、生地黄或熟地黄，优选例如鲜地黄)粉碎成约0.01～1cm³(例如0.02～0.8cm³，优选例如0.05～0.5cm³，优选例如0.08～0.2cm³，优选例如0.08～0.15cm³，优选例如0.1cm³)碎块，用水提取1～5次(例如1次、2次、3次、4次、5次)，每次加2～10倍量(例如约2倍量、约3倍量、约4倍量、约5倍量、约6倍量、约7倍量、约8倍量、约10倍量)的水，浸泡0.5～10小时(例如0.5～8小时，例如1～6小时，例如2～4小时，例如2小时、3小时、4小时)后，在35～80℃(例如35～80℃，例如40～70℃，例如45～60℃，例如45℃、50℃、55℃、60℃)下加热提取0.5～5小时(例如0.8～4小时，例如1～3小时，例如1小时、1.5小时、2小时、3小时)[特别是例如在50℃下搅拌提取1.5小时]；

b)合并每次的提取液，滤过，减压浓缩至每毫升含相当于0.5～3克(例如相当于0.5g、1g、1.5g、2.5g)药材；

c)将以上浓缩液加乙醇沉淀，使乙醇含量达到60％～90％(例如65％～90％，例如70％～85％，例如约70％、约75％、约80％、约85％)，放置，滤过，上清夜减压浓缩，真空干燥，即得。

根据本发明第一方面至第七方面的任一项所述的用途，其中所述的地黄提取物是通过包括以下步骤的方法得到的：将鲜地黄粉碎成约0.1cm³碎块，用水提取2次，第一次加5倍量水，浸泡2小时后，加热提取，50℃搅拌提取1.5小时；第二次加水5倍量，50℃搅拌提取1小时；合并两次提取液，滤过，减压浓缩至每毫升含1克药材，将浓缩液加乙醇沉淀，使乙醇含量达80％，放置24小时，滤过，上清夜减压浓缩真空干燥即得地黄提取物。

根据本发明第一方面至第七方面的任一项所述的用途，其中所述的药物或保健产品还可含有至少一种其它活性成分，所述其它活性成分选自中药、合成药物、矿物质、天然产物、提取物。在一个实施方案中，所述至少一种其它活性成分具有对地黄或其提取物产生辅助、协同、增效等的作用。在一个实施方案中，所述至少一种其它活性成分与地黄或其提取物具有君臣佐使的关系。在一个实施方案中，所述其它活性成分是本领域技术人员基于已有知识(例如根据中药组方原理)可以自行选择的，这些选择有助于使地黄或其提取物更充分地发挥本发明所期望的用途的作用。

根据本发明第一方面至第七方面的任一项所述的用途，其中所述的药物或保健产品还可以作为其它药物或保健产品的辅助组分，或者作为与该其它药物或保健产品共同施用于动物例如人的共同组分。

本发明第八方面提供一种组合物(例如药物组合物，例如可以作为药物或保健产品)，所述组合物包含改善、治疗和/或预防有效量的地黄或其提取物以及任选的药学可接受的载体和任选的其它活性物质。在一个实施方案中，所述组合物用于治疗、预防、和/或改善下列疾病、病症或身体状态：肝脏功能不全或损伤(例如，修复肝细胞、提高肝细胞抗氧化能力、减少肝细胞内氧化自由基(ROS)的含量)、与肝脏相关的疾病和/或病症(例如，因化学物质(包括但不限于酒精)引起的与肝脏相关的疾病和/或病症、肝损伤、脂肪肝、肝炎、肝硬化、肝功能衰竭、酒精性脂肪肝、急性酒精性脂肪肝、慢性酒精性脂肪肝)、与运动平衡失调有关的病症或身体状态(例如化学物质如乙醇所致，例如饮酒后的运动平衡失调)、缺氧有关的病症或身体状态(例如化学物质如乙醇所致，例如饮酒后的缺氧)、与应激有关的病症或身体状态(例如化学物质如乙醇所致，例如饮酒后的所致应激)、与免疫功能低下有关的病症或身体状态(例如化学物质如乙醇所致，例如饮酒后的免疫功能低下)、与脑功能损伤有关的病症或身体状态(例如化学物质如乙醇所致，例如饮酒后的脑功能损伤)、记忆力低下(例如化学物质如乙醇所致，例如饮酒后的记忆力低下)。在一个实施方案中，疾病、病症或身体状态与化学物质有关，即由化学物质所致。在进一步的实施方案中，所述的化学物质是乙醇或其与水的混合物，例如饮用酒类产品。

根据本发明第八方面的组合物，其中所述的改善肝脏功能包括但不限于修复肝细胞、提高肝细胞抗氧化能力、减少肝细胞内氧化自由基(ROS)的含量等。

根据本发明第八方面的组合物，其中所述的与肝脏相关的疾病和/或病症包括但不限于因化学物质(包括但不限于酒精)引起的与肝脏相关的疾病和/或病症。进一步的，所述的与肝脏相关的疾病和/或病症包括但不限于肝损伤、脂肪肝、肝炎、肝硬化、肝功能衰竭等，例如因酒精等因素引起的肝损伤、脂肪肝、肝炎、肝硬化、肝功能衰竭等，特别是例如酒精性脂肪肝，更特别地是例如急性酒精性脂肪肝和慢性酒精性脂肪肝。

根据本发明第八方面的组合物，其中所述的组合物可用于哺乳动物尤其是人。

根据本发明第八方面的组合物，其中所述的组合物可用于哺乳动物尤其是人，并且该哺乳动物尤其是人(特别是成年人而言)每日使用该药物或保健产品的量相当于3～30g生地黄，优选相当于4～28g生地黄，更优选相当于5～24g生地黄，再更优选相当于7～20g生地黄，进一步优选相当于9～15g生地黄。

根据本发明第八方面的组合物，其中所述的地黄和地黄提取物具有本发明第一方面至第七方面任一项所述用途的任意一项或多项的特征。

根据本发明，本发明的组合物特别是药物组合物或其提取物可通过口服或非肠道途径给药。适于口服给药的剂型举例讲有：片剂，胶囊，溶液，悬浮液，颗粒剂或丸剂等。适于非肠道途径如静脉，皮下或肌内给药的剂型举例讲有注射液。使用口服方式施用本发明的组合物或提取物是优选的方式。

根据本发明第八方面的组合物，其呈片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或口服液的形式。这些剂型的制备方法是本领域技术人员公知的。

根据本发明，其中的每一个方面的特征(如果不会造成与本发明精神相反的话)适用于本发明的其它任一方面。

根据本发明，本发明组合物特别是药物组合物中所述的术语“载体”指的是制药领域常用的药用赋形剂或药用辅料，如药用添加剂，稀释剂或崩解剂等。

根据本发明的任一方面以及各方面的任一具体实施方案，所述的术语“药物”、“提取物”、“组合物”、“药物组合物”、“保健产品”等，不但可以指代为一种具有药理和/或生理功能药品，还可以指代为一种具有药理和/或生理功能产品，例如健康产品，例如功能性食品或保健食品。因此，根据本发明各个方面的主题提及到术语“药物”、“提取物”、“组合物”、“药物组合物”、“保健产品”等，本领域技术人员可以理解，上述各术语均可以表示欲意用于改善肝脏功能包括但不限于修复肝细胞、提高肝细胞抗氧化能力、减少肝细胞内氧化自由基(ROS)的含量等；还可以表示欲意用于治疗和/或预防与肝脏相关的疾病和/或病症例如包括但不限于因化学物质(包括但不限于酒精)引起的与肝脏相关的疾病和/或病症，进一步的，所述的与肝脏相关的疾病和/或病症包括但不限于肝损伤、脂肪肝、肝炎、肝硬化、肝功能衰竭等，例如因酒精等因素引起的肝损伤、脂肪肝、肝炎、肝硬化、肝功能衰竭等，特别是例如酒精性脂肪肝，更特别地是例如急性酒精性脂肪肝和慢性酒精性脂肪肝。

在本发明中，所述的受试者是脊椎动物，优选是哺乳动物，更优选是人。根据本发明的任一方面以及各方面的任一具体实施方案，所述的术语“药材”、“中药材”、“中药”等，它们可以是一种天然来源(例如矿物或植物)材料，它们除了可以具有作为治疗的药理活性作用之外，还可以具有用于预防、调节生理功能的作用，当然还可以具有其它本文未列举的生理作用。根据本发明的任一方面以及各方面的任一具体实施方案，所述的术语“治疗”和“预防”通常分别是指针对已产生症状的疾病或尚未产生症状的状况进行“治疗”和“预防”。本发明所用的各个术语具有本领域技术人员所理解的一般含义。

本发明的地黄或其提取物能够有效地改善肝脏功能，例如能够有效地修复肝细胞、提高肝细胞抗氧化能力、减少肝细胞内氧化自由基(ROS)的含量等。此外，本发明发现，地黄或其提取物能够有效地用于治疗和/或预防与肝脏相关的疾病和/或病症，例如因化学物质(包括但不限于酒精)引起的与肝脏相关的疾病和/或病症，例如肝损伤、脂肪肝、肝炎、肝硬化、肝功能衰竭等，例如因酒精等因素引起的肝损伤、脂肪肝、肝炎、肝硬化、肝功能衰竭等，特别是例如酒精性脂肪肝，更特别地是例如急性酒精性脂肪肝和慢性酒精性脂肪肝。

具体实施方式

下面通过具体的实施例和实验例进一步说明本发明。这些实施例和实验例仅仅是用于更详细具体地举例说明本发明，而不应将其理解为以任何形式限制本发明。

下面的实施例和实验例中所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是对其中为实现本发明目的所必需的内容，本发明人仍然作尽可能详细的描述。在下面的实施例和实验例中，如未特别说明，所用的材料和操作方法是本领域公知的。

地黄提取物中梓醇含量的测定

可通过下面示例性的方法定量和定性测定本发明地黄提取物中的梓醇含量。

按照高效液相色谱法(中华人民共和国药典，2005年版一部，国家药典委员会编，化学工业出版社出版，附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅及为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸溶液(1∶90)为流动相；检测波长为210nm。理论板数按梓醇峰计算应不低于5000。

对照品溶液的制备：精密称取梓醇对照品适量，加流动相制成每1ml含10μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取提取物，经80℃减压干燥24小时后，研磨成细粉，精密称取约0.1g，置25ml量瓶中，加入甲醇适量，超声处理2小时，冷却，用甲醇定容。过滤，取续滤液用流动相稀释适当倍数(例如稀释至其中的梓醇含量与对照品溶液浓度相当)。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算梓醇占提取物重量的百分数，即得。

一、实施例

实施例1：地黄粉的制备

将地黄全药材(可市购)用水洗净，真空干燥，温度为60-90℃，粉碎，过60至100目筛，即得地黄全药材粉。该地黄粉为棕色结晶状粉未，溶于水，备用。

在本实施例中，所用地黄药材选用鲜地黄、生地黄或熟地黄。

实施例2：地黄提取物的制备

将鲜地黄粉碎成约0.1cm³碎块，用水提取2次，第一次加5倍量水，浸泡2小时后，加热提取，50℃搅拌提取1.5小时；第二次加水5倍量，50℃搅拌提取1小时；合并两次提取液，滤过，减压浓缩至每毫升含1克药材，将浓缩液加乙醇沉淀，使乙醇含量达80％，放置24小时，滤过，上清液减压浓缩真空干燥即得地黄提取物。

根据上述地黄提取物中梓醇的定性和定量方法测定所得地黄提取物中的梓醇含量，以及根据本领域技术人员公知的方法，例如色谱法测定所得地黄提取物中的低聚糖含量。

结果，本实施例获得的提取物的梓醇含量大于10％(w/w)，低聚糖含量大于50％(w/w)。

实施例3：地黄提取物的制备-酒剂或浸膏剂(1号方)

1号方酒(地黄酒)配制：吸取17.7％乙醇溶液20ml，加实施例1得到的地黄粉0.4g，得1号方酒剂，为地黄酒21.06ml。该酒剂可以短期或长期放置后饮用，或者可以在短期或长期浸渍后，浓缩，得稠膏，作为本发明的提取物。上述酒剂在本文中可称为1号方酒，在下文试验中，“1号方”和“1号方酒”除了后者是用乙醇配制的外，二者在主成分上可理解为相同的。

实施例4：地黄提取物的制备-粉剂、酒剂或浸膏剂(3号方)

3号方粉剂由地黄、牛膝、红景天组成(处方比例为4∶1∶1)，由本室中药组提供，呈棕色结晶状粉末，在本文中可称为3号方粉剂，其可溶于水。动物试验中其用量可为0.4g/kg或2g/kg。3号方酒配制：吸取17.7％乙醇溶液20ml，加3号方粉0.4g，得3号方酒剂21.06ml。该酒剂可以短期或长期放置后饮用，或者可以在短期或长期浸渍后，浓缩，得稠膏，作为本发明的提取物。在本文中可称为3号方酒或称为3号方，在下文试验中，“3号方”和“3号方酒”除了后者是用乙醇配制的外，二者在主成分上可理解为相同的。

实施例5：包含黄粉或地黄提取物的胶囊剂

分别将实施例1或2的地黄粉或地黄提取物加入适量淀粉，混合均匀，装胶囊壳，得到地黄粉或地黄提取物的胶囊剂，每粒胶囊剂可以相当于生地黄0.05g、0.1g、0.15g、0.2g、0.25g、0.3g、0.35g、0.4g、0.45g、0.5g或0.6g。

实施例6：包含黄粉或地黄提取物的片剂

分别将实施例1或2的地黄粉或地黄提取物加入适量的一种或几种常用片剂辅料(如淀粉、糊精、乳糖、糖粉、硫酸钙、微晶纤维素、甘露醇、硬脂酸镁、明胶浆、阿拉伯胶浆、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚维酮、海藻酸钠、聚乙二醇、交联羧甲基纤维素那、羧甲基淀粉钠、滑石粉、微粉硅胶等)按照常规片剂制备方法制成片剂。每片片剂可以相当于生地黄0.05g、0.1g、0.15g、0.2g、0.25g、0.3g、0.35g、0.4g、0.45g、0.5g或0.6g。

实施例7：包含黄粉或地黄提取物的颗粒剂

分别将实施例1或2的地黄粉或地黄提取物加入适量的一种或几种常用颗粒剂辅料(如糊精、枸橼酸、柠檬酸钠等)按照常规颗粒剂制备方法制成颗粒剂。每单位包装的颗粒剂可以相当于生地黄0.05g、0.1g、0.15g、0.2g、0.25g、0.3g、0.35g、0.4g、0.45g、0.5g、0.6g、0.7g、0.8g、0.9g、1.0g、1.2g、1.5g或2.0g。

二、实验例

实验例1：地黄提取物对急性酒精性脂肪肝的保护作用

实验药物为实施例2得到的地黄提取物。

30只状态良好的Balbc小鼠，50％乙醇，按4克/千克体重一次性灌胃给药，随机分成6组：正常组；I组为生理盐水对照组；II组为预防组(于酒精给药前2天灌胃给予地黄提取物)灌胃给药0.4克/千克体重的地黄提取物(注：“0.4克/千克体重”是指动物每千克体重给予的提取物相当于生地黄0.4克，下文也具有类似含义)；III组灌胃给药0.5克/千克体重的地黄提取物；IV组灌胃给药1克/千克体重的地黄提取物；V组灌胃给药2克/千克体重的地黄提取物。于16小时后观察血液和肝脏中甘油三酯变化，并作病理学检测。结果显示对照组小鼠血清中TG水平明显升高，肝组织细胞部分出现脂肪变性，少数细胞坏死。但地黄提取物治疗组小鼠TG值均有所恢复(结果见表1)，坏死肝细胞明显减少，肝损伤程度明显减轻。提示地黄提取物对酒精引起的急性肝损伤具有防护作用。

表1、地黄提取物对急性酒精性脂肪肝的保护作用

分组	甘油三酯(TG)
		正常	1.204±0.2498088
I组	1.74±0.3695583
		II组	1.17±0.3506644
III组	1.31±0.6069313
		IV组	1.23±0.3906746
V组	1.27±0.4074051

实验例2：地黄提取物对慢性酒精性脂肪肝的保护作用

实验药物为实施例2得到的地黄提取物。

50只状态良好的Wistar大鼠随机分为4组，I、II、III和IV组的动物数分别为10、12、14和14。I组为正常对照组；II组为模型组，即50％乙醇，按每天2克/千克体重连续灌胃给药60天，建立慢性酒精性肝损伤模型；III组为低剂量地黄提取物治疗组，即在模型建立的基础上每日灌胃给药0.5克/千克地黄提取物；IV组为高剂量地黄提取物治疗组，即在模型建立的基础上每日灌胃给药1克/千克地黄提取物。于60天后取血和肝组织观察血清甘油三酯和肝脏组织病理变化。结果显示对照组小鼠血清中TG水平明显升高，肝细胞出现大量脂肪变性，少数细胞坏死，并伴随肝成纤维细胞增生，但地黄提取物治疗组小鼠TG值均有所恢复(结果见表2)，坏死肝细胞明显减少，肝损伤程度明显减轻。提示地黄提取物对酒精引起的慢性肝损伤具有保护作用。

表2、地黄提取物对慢性酒精性脂肪肝的保护作用

分组	甘油三脂
		I组	0.77±0.17
II组	1.49±0.42
		III组	1.02±0.15
IV组	0.95±0.05

实验例3：小鼠灌胃1号方酒对协调平衡运动的影响

1试验目的

通过转轮试验装置，使动物被动活动，评价1号方酒对动物的共济协调、平衡运动、肌力及神经系统的影响。

2试验材料

2.1试验品

无水乙醇，含量99.7％，密度(20℃)为0.789-0.791g/mL(平均值为0.790g/mL)，批号：20090203，国药集团化学试剂有限公司产品。

1号方酒为实施例3得到的地黄酒，其给药用量为0.4克/千克体重。

2.2实验动物

KM小鼠，性别、体重雌、雄各半，体重18-22g，由军事医学科学院实验动物中心提供，日龄35-40天，实验动物合格证编号为医动字ScXK-(军)2007-004。

动物饲养在军事医学科学院实验动物中心小鼠实验室，室温22-24℃，湿度30％RH左右，光照良好，定时通风，动物实验条件合格证编号为SyXK(军)2007-005。动物饲以军事医学科学院实验动物中心专为小鼠生产的块料，自由进食和饮水。

3试验方法

3.1转轮实验装置和实验方法：转轮直径为3.5cm、长度为60cm，用塑料圆板间隔成相等的5个隔断，隔断间隔10cm，通过差速电动机以14次/min进行匀速旋转。每次实验时最多放置5只动物。

本试验中，小鼠灌服乙醇溶液或地黄酒，给药容积为0.2ml/10g体重，药后20min，将小鼠置于转棒上，记录5min内从转棒上跌落的动物数及每只跌落动物跌落时间。

3.2预试：其目的寻找一个小鼠灌服适宜的乙醇剂量，使其在转轮实验装置上旋转5min跌落70-80％只小鼠。预试结果见表3-1。

表3-1.小鼠灌服不同浓度乙醇对协调平衡运动的影响

注：乙醇密度以0.79g/ml计算；给药容积0.2ml/10g.b.w.，其中b.w.表示体重。

预试结果显示：小鼠灌服2.80克/千克乙醇，约有80％左右的动物失去平衡协调运动的能力。故在正式实验时采用灌服2.80克/千克乙醇的剂量。

3.3实验分组及给药方法：实验分为正常对照组、乙醇2.8克/千克组(3.54ml/kg)和地黄酒组(0.4克/千克体重)。灌服后20min记录5min内从转棒上跌落的动物数和跌落动物跌落时间。

3.4乙醇溶液及1号方酒配制方法

3.4.1乙醇溶液的配制：正式试验乙醇剂量为2.80克/千克，配制40ml乙醇溶液时，吸取无水乙醇7.08ml，加双蒸水至40.00ml，乙醇浓度为17.7％。每只小鼠灌服容积为0.2ml/10g.b.w.。

3.4.21号方酒的配制：通过实施例3的方法制备得到。每只小鼠给药容积为0.2ml/10g.b.w.。

4数据处理

实验数据以均数±标准差表示，用t检验和X²测定进行显著性检验。

5实验结果

小鼠灌服2.80克/千克乙醇约2分钟后，呈兴奋亢进状态，步态失调，随后进入相对抑制状态。小鼠灌服1号方酒，上述症状有所减轻。灌服20分钟后，将小鼠置於转棒上，以14次/分钟进行匀速旋转，以观察小鼠平衡协调能力及跌落时间，结果见表3-2。

表3-2.小鼠(雌雄各半)灌服1号方酒对协调平衡运动的影响

组别

剂量(g/kg)

动物数(只)

跌落物数(只)

跌落时间(秒)

正常对照	饮用水	20	0	＞300
					乙醇	2.80	20	15	30.0±13.5
1号方酒	乙醇2.80+地黄0.4	20	6	73.0±42.8^＊＊

注：^＊与乙醇组比较：^＊＊P＜0.01。

实验结果显示，小鼠灌服乙醇或1号方酒均能使动物的协调平衡能力降低，但灌服1号方酒小鼠比单纯灌服乙醇小鼠协调平衡运动有明显的改善，主要表现在动物跌落动物数明显减少及开始跌落时间明显后延。提示1号方有改善酒后协调平衡运动平衡失调的作用。

实验例4：小鼠灌胃3号方酒对协调平衡运动的影响

1试验目的

通过转轮试验装置，使动物被动活动，评价3号方对动物的共济协调、平衡运动、肌力及神经系统的影响。

2试验材料

2.1试验品

2.1.1无水乙醇，含量99.7％，密度(20℃)0.789-0.791g/mL(平均值为0.790g/mL)，批号：20090203，国药集团化学试剂有限公司产品。

2.1.23号方酒由实施例4制备得到，其用量为0.4克/千克体重。

2.2实验动物

KM小鼠，性别、体重雌、雄各半，体重18-22g，每组20只，由军事医学科学院实验动物中心提供，日龄35-40天，实验动物合格证编号为医动字ScXK-(军)2007-004。

3试验方法

本试验中，小鼠灌服乙醇溶液或3号方酒，给药容积为0.2ml/10g体重，药后20min，将小鼠置于转棒上，记录5min内从转棒上跌落的动物数及每只跌落动物跌落时间。

3.2预试：其目的寻找一个小鼠灌服适宜的乙醇剂量，使其在转轮实验装置上旋转5min跌落70-80％只小鼠。预试结果见表4-1。

表4-1小鼠灌服不同浓度乙醇对协调平衡运动的影响(预试)

注：乙醇密度以0.79g/ml计算；给药容积为0.2ml/10g.b.w.；

预试结果显示，小鼠灌服2.80克/千克乙醇约有70-80％的动物失去平衡协调运动的能力。故在正式实验时采用灌服2.80克/千克乙醇的剂量。灌服后20min，记录5min内从转棒上跌落的动物数和跌落动物跌落时间。

3.3实验分组及给药方法：实验分为正常对照组、乙醇2.8克/千克组和3号方酒组。灌服后20min记录5min内从转棒上跌落的动物数和跌落动物跌落时间。

3.4乙醇溶液及3号方酒配制方法

1.乙醇溶液的配制：正式试验乙醇剂量为2.80克/千克(3.54ml/Kg)，配制40ml乙醇溶液时，吸取无水乙醇7.08ml，加双蒸水至40.00ml，乙醇浓度为17.7％。

2.3号方酒的配制：根据实施例4的方法制备3号方酒。每只小鼠给药容积为0.2ml/10g.b.w.

4数据处理

5实验结果

小鼠灌服2.80克/千克乙醇约2分钟后，呈兴奋亢进状态，步态失调。小鼠灌服1号方酒，上述症状有所减轻。灌服20分钟后，将小鼠置於转棒上，以14次/min进行匀速旋转，以观察小鼠平衡协调能力，结果见表4-2。

表4-2.小鼠(雌雄各半)灌服3号方酒对协调平衡运动的影响

组别	剂量(g/kg)	动物数(只)	跌落物数(只)	跌落时间(秒)
					正常对照	饮用水	20	0	＞300
乙醇	2.80	20	15	30.0±13.5
					3号方酒	乙醇2.80+3号方粉0.4	20	5^＊	78.3±34.7^＊＊＊

注：^＊与乙醇组比较：^＊P＜0.05，^＊＊＊P＜0.001。

结果显示，小鼠灌服乙醇或3号方酒均能使动物的协调平衡能力降低。但灌服3号方酒小鼠比单纯灌服乙醇小鼠协调平衡运动有明显的改善，主要表现在动物跌落动物数明显减少及开始跌落时间明显后延。不同性别小鼠灌服3号方酒对跌落动物数减少及开始跌落时间没有明显差异。提示3号方有改善酒后协调平衡运动平衡失调的作用。

实验例5：1号方酒对乙醇引起小鼠平衡协调运动失调的影响

1试验目的：

通过转轮试验装置，使动物被动活动，评价1号方酒对乙醇引起小鼠平衡协调运动失调的影响。

2试验材料：

2.1试验品

无水乙醇，含量99.7％，密度(20℃)0.789-0.791g/mL(平均值为0.790g/mL)，批号：20090203，国药集团化学试剂有限公司产品。

1号方酒根据实施例3的方法制备得到，其用量为0.4克/千克或2克/千克。每只小鼠灌服容积为0.2ml/10g.b.w.。

2.2动物

KM小鼠，性别、体重雌、雄各半，体重18-22g，由军事医学科学院实验动物中心提供，日龄40-45天，实验动物合格证编号为医动字ScXK-(军)2007-004。

3试验方法

3.2观察指标：(1).药后20min，将小鼠置于转棒上，记录5min内从转棒上跌落的动物数；(2).记录每只动物开始跌落的时间。

3.3预试：其目的寻找一个小鼠灌服适宜的乙醇剂量，使其在转轮实验装置上旋转5min跌落70-80％只小鼠。预试结果见表5-1。表5-1小鼠灌服不同浓度乙醇对协调平衡运动的影响

注：1.乙醇密度以0.79g/ml计算；2.给药容积为0.2ml/10g.b.w.；

预试结果显示，小鼠灌服2.80克/千克乙醇约有80％左右的动物失去平衡协调运动的能力。故在正式实验时采用灌服2.80克/千克乙醇的剂量。灌服后20min，记录5min内从转棒上跌落的动物数和跌落动物跌落时间。

3.3.实验分组及给药方法：实验分为正常对照组、乙醇2.8克/千克组和1号方酒组。

3.4.乙醇溶液及1号方酒的配制方法同实验例3。

3.5.实验分组及给药方法：见表5-2

表5-2.实验分组及给药方法

组别	给药剂量(g/kg)	动物数(只)	给药方法
				正常对照	饮用水	10	1次，药后20分，灌胃
乙醇	2.8	10	1次，药后20分，灌胃
				1号方酒	乙醇2.8+1号方粉0.4	10	1次，药后20分，灌胃

4数据处理

5实验结果

小鼠灌服2.80克/千克乙醇约2分钟后，呈兴奋亢进状态，步态失调。小鼠灌服1号方酒，上述症状有所减轻。灌服20分钟后，将小鼠置於转棒上，以14次/min进行匀速旋转，以观察小鼠平衡协调能力，结果见表5-3。

表5-3.小鼠灌服1号方酒对协调平衡运动的影响

组别	剂量(g/kg)	动物数(只)	跌落动物数(只)	开始跌落时间(秒)
					正常对照	饮用水	20	0	＞300
乙醇	2.8	20	14	30.0±14.5
					1号方	乙醇2.8+1号方0.4	20	7^＊	73.0±42.8^＊＊

注：^＊与乙醇组比较：^＊P＜0.05 ^＊＊＊P＜0.001。

结果显示，小鼠灌服乙醇或1号方酒均对动物的协调平衡能力降低。但灌服1号方酒小鼠比单纯灌服乙醇小鼠协调平衡运动有明显的改善，主要表现在动物跌落数减少及开始跌落时间明显后延。提示1号方有改善酒后协调平衡运动失调的作用。

实验例6：1号方酒对乙醇引起小鼠耐缺氧的影响

1.实验目的：缺氧是一种紧张性刺激，可引起机体产生各种应激性反应，本试验目的是观察1号方对乙醇引起小鼠缺氧是否具有改善作用。

2.材料与方法：

2.1.受试试验品：无水乙醇，同实验例3；1号方酒，同实验例3。

2.2.实验动物：KM小鼠，雌性，体重18-22g。

2.3.实验方法：将体重相差不超过2g的小鼠随机分组，于给药后30分钟，分别将小鼠放入容积相同(250ml)的密闭广口瓶内，瓶内装有相等量的钠石灰(10g)，以吸收水分和二氧化碳。瓶口涂以凡±林，放入小鼠后将瓶口密封。以秒表观察小鼠呼吸停止时间。计算各组死亡时间平均数±标准差，作t测验比较组间显著性。

2.4.实验分组及给药方法：见表6-1。

表6-1.实验分组及给药方法

组别	给药剂量(g/kg)	动物数(只)	给药方法
				正常对照	饮用水	10	1次，药后30分，灌胃
乙醇	2.8	10	1次，药后30分，灌胃
				1号方酒	乙醇2.8+1号方粉0.4	10	1次，药后30分，灌胃

3.实验结果：见表6-2

表6-2.1号方酒对小鼠耐缺氧的影响

组别	给药剂量(g/kg)	动物数(只)	耐缺氧时间(分)
				正常对照	饮用水	10	38.5±4.9
乙醇	2.8	10	36.8±5.0
				1号方酒	乙醇2.8+1号方粉0.4	10	43.9±6.9^＊

注：^＊与乙醇组比：^＊P＜0.05

结果显示，小鼠灌服2.8克/千克乙醇后，耐缺氧时间比正常对照动物有所降低，服用1号方酒的小鼠耐缺氧时间比乙醇组显著延长，差异显著(P＜0.05)。以示1号方有明显增加动物耐缺氧能力，具有抗应激作用。

实验例7：1号方酒对乙醇所致免疫功能低下小鼠单核细胞吞噬作用的影响

常用一些颗状异物，如胶体碳、印度墨汁、中华墨汁、⁵¹Cr标记的异种红细胞等静脉注入小鼠或家兔血循环后，迅速被单核吞噬细胞所清除，主要被定居在肝和脾脏的巨噬细胞中。若将异物量恒定，则从血流中消除的速率可以反映单核吞噬细胞的吞噬功能。

1.实验目的：观察1号方酒对乙醇所致免疫功能低下小鼠单核细胞吞噬作用的影响。

2.材料与方法

2试验材料：

2.1试验品：无水乙醇，同实验例3；1号方酒，同实验例3。

2.2.试剂印度墨汁(炭黑墨水)，市售，北京化学试剂公司产品。批号：0070920。

2.3.实验动物：同前，KM小鼠，雄性，体重18-22g。

2.4.免疫功能低下模型的制备小鼠灌服浓度为17.7％的乙醇，灌服容积为0.2ml/10g.b.w(其量为2.80克/千克乙醇)，服后约2分钟后，动物呈兴奋、亢进、步态失调，约有80％左右的动物失去平衡协调运动的能力。上述症状约1小时左右渐消夫，随后转入抑制状态，活动减少。灌服后3-4小时恢复正常。每天灌服1次，共服14天。

2.5.实验分组与给药方法见表7-1

表7-1.实验分组及给药方法

2.6.吞噬指数K和吞噬活性α测定方法首先按印度墨汁∶生理盐水＝1∶9稀释，每1ml稀释液中加入1％肝素20μl。于末次给药30min后，尾静脉注射印度墨汁0.10ml/10g体重，注射后不同时间(2min和20min)用吸管(预先用肝素溶液湿润)分别从眼眶后静脉丛取血20μl，溶于3.0ml 0.1％Na₂CO₃溶液中，置Unic紫外分光光度计在600nm波长下比色，测定光密度(OD)。最后将小鼠颈椎脱臼处死，分别称取肝、脾和胸腺重量。按下列公式计算吞噬(廓清)指数K和吞噬活性α。

K＝(logOD₁-logOD₂)/(t₂-t₁)

α＝K^1/3×体重/(肝重+脾重)

OD₁、OD₂为不同时间所取血样的光密度，t₂-t₁为取两血样的时间差。当K、α值增加时，则说明有免疫增强作用，用此法可观察试验品是否具有免疫增强或抑制作用。

3.实验结果

3.1对小鼠体重和免疫器官重量的影响(见表7-2)

表7-2.1号方对乙醇所至免疫功能低下小鼠

胸腺和脾脏指数的影响

注：#与正常组比：#P＜0.05；^＊与乙醇组比：^＊P＜0.05。

表7-2所示：小鼠灌服乙醇2.8克/千克，连续灌服14天，体重和胸腺指数明显下降，与正常对照组比差异显著(P＜0.05)；灌服1号方酒的小鼠，连续灌服14天，体重和胸腺指数与乙醇组比明显增加，差异显著(P＜0.05)。

3.2.对吞噬指数的影响(见表7-3)

表7-3所示：小鼠灌服乙醇2.8克/千克，连续灌服14天，吞噬指数和吞噬活性显著降低，与正常对照组比差异显著(P＜0.05-0.01)；灌服1号方酒的小鼠，在服用14天后，吞噬指数和吞噬活性与乙醇组比显著提高，两者差异显著(P＜0.05-0.001)

表7-3.1号方对乙醇所至免疫功能低下小鼠

单核细胞吞噬指数和吞噬活性的影响

注：#与正常组比：^##P＜0.01；^＊与乙醇组比：^＊P＜0.05，^＊＊P＜0.01。

从以上结果可见，乙醇能显著降低小鼠体重和胸腺指数，1号方酒与乙醇组比，能明显提高小鼠体重和胸腺指数，两者差异显著(P＜0.01)。乙醇能显著降低单核细胞吞噬指数和吞噬活性，1号方能抑制乙醇所致单核细胞吞噬指数和吞噬活性的降低。结果表明，1号方对乙醇所致免疫功能低下动物有提高免疫功能的作用。

实验例8：1号方酒对乙醇引起小鼠学习记忆障碍的改善作用

1.试验目的：酒精中毒可引起高级神经活动障碍和神经细胞兴奋转化过程转化变慢，表现为形成条件反射的潜伏期延长，不能形成痕迹条件反射，灵活性差，反应迟钝，动作协调性差，注意力不易集中，学习记忆出现减退。本试验应用水迷宫行为学测试方法，观察1号方对乙醇引起小鼠学习记忆障碍是否具有改善作用。

2.材料与方法：

2.2.动物：KM小鼠，雌性，体重18-22g。

2.3.学习记忆障碍模型制备：参照上文实验，当一次灌服乙醇2.8克/千克1-2小时内有80％小鼠失去平衡协调的能力；通过水迷宫测试，灌服乙醇2.8克/千克小鼠，在服后24小时有90％的小鼠寻台失败，并经3天训练无明显长进。

2.4.水迷宫测试：用药至2周，开始进行学习记忆能力测试。Morris水迷宫实验装置为直径120cm圆形水池，高50cm；内设一平面直径6cm的白色站台，高度2cm，其圆心距水池圆心30cm，距池壁30cm，没于水下0.5cm；池壁上4个等距离点，将水池分为4个象限。水池围参照物保持不变，水温为25±1℃，导找90秒内寻找水下平台的时间，作为定位学习记忆的成绩。

2.5.实验分组及给药方法(见表8-1)。

表8-1.实验分组及给药方法

^＊药后24小时进行水迷宫测试。

2.6.观察指标：(1.)记录小鼠放入水中，寻找到达平台所需时间(寻台时间)；(2.)小鼠放入水中寻台失败的次数(水迷宫测试错误)。

3.统计分折：实验数据以均数±标准差表示，用t检验或X²进行显著性检验。

4.实验结果

4.1.对寻台时间的影响

小鼠每天灌服2.8克/千克乙醇，连续灌服14天，每次于服后24小时，进行水迷宫测试，其结果见表8-2

表8-2.1号方酒对小鼠水迷宫测试寻台时间的影响

注：#与正常对照组比：#P＜0.05；^＊与乙醇组比：^＊P＜0.05。

由表8-2所示：水迷宫测试第4、6和8天乙醇组小鼠寻台时间明显延长，与对照组比差异显著(P＜0.05)；1号方酒动物在测试过程中寻台时间均明显低于乙醇组，其中第4、6、8天差异显著，与乙醇组比有统计学差异(P＜0.05)。

4.2.对水迷宫测试寻台失败的动物数(见表8-3)

表8-3.1号方对小鼠水迷宫测试寻台失败次数的影响

表8-3显示，水迷宫测试动物寻台失败的次数进行组间比较，虽无统计学差异，但乙醇组失败次数与正常组比明显增多，1号方酒与乙醇组比有减少的趋势。

上述结果显示，长期饮酒有害脑功能健康，灵活性差，反应迟钝，动作协调性差，注意力不易集中，学习记忆出现减退。1号方对乙醇脑功能损害有一定的减轻作用，对促进学习记忆能力是有益的。

由以上试验研究结果可见，灌服1号方酒小鼠比单纯灌服乙醇小鼠协调平衡运动有明显的改善，主要表现在动物跌落数减少及开始跌落时间明显后延，这表明地黄或其提取物有改善酒后协调平衡运动平衡失调的作用。此外，地黄或其提取物有明显增加动物耐缺氧能力的作用，具有抗应激作用；对乙醇所致免疫功能低下动物有提高免疫功能的作用；以及对乙醇脑功能损害有一定的减轻作用，对促进学习记忆能力是有益的。

实验例9：3号方酒对乙醇引起小鼠缺氧的影响

1.实验目的：缺氧是一种紧张性刺激，可引起机体产生各种应激性反应，本试验目的是观察3号方对乙醇小鼠缺氧是否具有改善作用。

2.材料与方法：

2.1.受试试验品：无水乙醇，同实验例4；3号方酒，同实验例4。

2.2.动物：KM小鼠，雌性，体重18-22g。

2.3.实验方法：将体重相差不超过2g的小鼠随机分组，于末次给药后30分钟，分别将小鼠放入容积相同(250ml)的密闭广口瓶内，瓶内装有相等量的钠石灰(10g)，以吸收水分和二氧化碳。瓶口涂以凡士林，放入小鼠后将瓶口密封。以秒表观察小鼠呼吸停止时间。计算各组死亡时间平均数±标准差，作t测验比较组间显著性。

2.4.实验分组及给药方法：见表9-1。

表9-1.实验分组及给药方法

组别	给药剂量(g/kg)	动物数(只)	给药方法
				正常对照	饮用水	10	1次，药后30分钟，灌胃
乙醇	2.8	10	1次，药后30分钟，灌胃
				3号方酒	乙醇2.8+3号方粉0.4	10	1次，药后30分钟，灌胃

3.实验结果：见表9-2。

表9-2.3号方对小鼠耐缺氧的影响

组别	给药剂量(g/kg)	动物数(只)	耐缺氧时间(分)
				正常对照	饮用水	10	38.5±4.9
乙醇	2.8	10	36.8±5.0
				3号方酒	乙醇2.8+3号方粉0.4	10	44.9±5.8^＊

注：^＊与乙醇组比：^＊P＜0.05。

结果显示，小鼠灌服2.8克/千克乙醇后，耐缺氧时间比正常对照动物有所降低，服用3号方酒的小鼠耐缺氧时间比乙醇组显著延长，差异显著(P＜0.05)。以示3号方有明显增加动物耐缺氧能力，具有抗应激作用。

实验例10：3号方酒对乙醇所致免疫功能低下小鼠单核细胞吞噬作用的影响

常用一些颗状异物，如胶体碳、印度墨汁、中华墨汁、⁵¹Cr标记的异种红细胞等静脉注入小鼠或家兔血循环后，迅速被单核吞噬细胞所清除，主要被定居在肝和脾脏的巨噬细胞。若将异物量恒定，则从血流中消除的速率可以反映单核吞噬细胞的吞噬功能。

1.实验目的：观察3号方对乙醇所致免疫功能低下小鼠单核细胞吞噬作用的影响。

2.材料与方法

2试验材料：

2.1试验品名称

无水乙醇和3号方酒的制备和使用同实验例4。

2.3.动物同前，KM小鼠，雄性，体重18-22g。

2.5免疫功能低下模型的制备小鼠灌服浓度为17.7％的乙醇，灌服容积为0.2ml/10g.b.w(其量为2.80克/千克乙醇)，服后约2分钟后，动物呈兴奋、亢进、步态失调，约有80％左右的动物失去平衡协调运动的能力。上述症状约1小时左右渐消夫，随后转入抑制状态，活动减少。灌服后3-4小时恢复正常。每天灌服1次，共服14天。

2.5.实验分组与给药方法见表10-1。

表10-1.实验分组及给药方法

2.6.吞噬指数K和吞噬活性测定方法首先按印度墨汁∶生理盐水＝1∶9稀释，每1ml稀释液中加入1％肝素20μl。于末次给药30min后，尾静脉注射印度墨汁0.10ml/10g体重，注射后不同时间(2min和20min)用吸管(预先用肝素溶液湿润)分别从眼眶后静脉丛取血20μl，溶于3.0ml 0.1％Na₂CO₃溶液中，置Unic紫外分光光度计在600nm波长下比色，测定光密度(OD)。最后将小鼠颈椎脱臼处死，分别称取肝、脾和胸腺重量和胸腺。接下列公式计算吞噬(廓清)指数K和吞噬活性α。

K＝(logOD₁-logOD₂)/(t₂-t₁)

α＝K^1/3×体重/(肝重+脾重)

OD₁、OD₂为不同时间所取血样的光密度，t₂-t₁为取两血样的时间差。当K、α值增加时，则说明有免疫增强作用，用此法可观察药物是否具有免疫增强或抑制作用。

3.实验结果

3.1对小鼠体重和免疫器官重量的影响(见表10-2)

表10-2.3号方对乙醇所至免疫功能低下小鼠

胸腺和脾脏指数的影响

注：#与正常组比：#P＜0.05；^＊与乙醇组比：^＊P＜0.05，^＊＊P＜0.01。

如表10-2所示：小鼠灌服乙醇2.8克/千克，连续灌服14天，体重和胸腺指数明显下降，与正常对照组比差异显著(P＜0.05)；灌服3号方酒的小鼠，连续灌服14天，体重和胸腺指数与乙醇组比明显增加，差异显著(P＜0.05)。

3.2.对吞噬指数的影响(见表10-3)

表10-3所示：小鼠灌服乙醇2.8克/千克，连续灌服14天，吞噬指数和吞噬活性显著降低，与正常对照组比差异显著(P＜0.05-0.01)；灌服3号方酒的小鼠，在服用14天后，吞噬指数和吞噬活性与乙醇组比显著提高，两者差异显著(P＜0.05-0.001)。

表10-3.3号方对乙醇所至免疫功能低下小鼠

单核细胞吞噬指数和吞噬活性的影响

组别	给药剂量(g/kg)	动物数(只)	吞噬指数(K)	吞噬活性(α)
					正常对照	饮用水	10	0.0303±0.0073	5.0556±0.5908
乙醇	2.8	10	0.0159±0.0073^###	4.1534±0.4482^##
					3号方酒	乙醇2.8+3号方粉0.4	10	0.0275±0.0085^＊＊	4.6610±0.3334^＊

从结果可见，乙醇能显著降低小鼠体重和胸腺指数，3号方酒与乙醇组比，能明显提高小鼠体重和胸腺指数，两者差异显著(P＜0.01)。乙醇显著降低单核细胞吞噬指数和吞噬活性，3号方能抑制乙醇所致单核细胞吞噬指数和吞噬活性降低。表明3号方对乙醇所致免疫功能低下动物有提高免疫功能的作用。

实验例11：3号方对乙醇引起小鼠学习记忆障碍的改善作用

1.试验目的：酒精中毒可引起高级神经活动障碍和神经细胞兴奋转化过程转化变慢，表现为形成条件反射的潜伏期延长，不能形成痕迹条件反射，灵活性差，反应迟钝，动作协调性差，注意力不易集中，学习记忆出现减退。本试验应用水迷宫行为学测试方法，观察3号方对乙醇引起小鼠学习记忆障碍是否具有改善作用。

2.材料与方法：

2.1.受试药物：无水乙醇和3号方酒的制备和使用同实验例4。

2.2.动物：KM小鼠，雌性，体重18-22g同前。

2.3.学习记忆障碍模型制备：参照上文实验，当一次灌服乙醇2.8克/千克1-2小时内有80％小鼠失去平衡协调的能力；通过水迷宫测试，灌服乙醇2.8克/千克小鼠，在服后24小时有90％的小鼠寻台失败，并经3天训练无无明显长进。

2.4水迷宫测试：用药至2周，开始进行学习记忆能力测试。Morris水迷宫实验装置为直径120cm圆形水池，高50cm；内设一平面直径6cm的白色站台，高度2cm，其圆心距水池圆心30cm，距池壁30cm，没于水下0.5cm；池壁上4个等距离点，将水池分为4个象限。水池围参照物保持不变，水温为25±1℃，导找90秒内寻找水下平台的时间，作为定位学习记忆的成绩。

2.5实验分组及给药方法(见表11-1)

表11-1.实验分组及给药方法

^＊药后24小时进行水迷宫测试。

2.6观察指标：(1.)记录小鼠放入水中，寻找到达平台所需时间(寻台时间)；(2.)小鼠放入水中寻台失败的次数(水迷宫测试错误)。

3.统计分析：实验数据以均数±标准差表示，用t检验或X²进行显著性检验。

4.实验结果

4.1.对寻台时间的影响

小鼠每天灌服2.8克/千克乙醇，连续灌服14天，每次于服后24小时，进行水迷宫测试，其结果见表11-2。

表11-2.3号方酒对小鼠水迷宫测试寻台时间的影响

由表11-2可见，水迷宫测试第4、6和8天乙醇组小鼠寻台时间明显延长，与对照组比差异显著(P＜0.05)；3号方酒动物在测试过程中均明显低于乙醇组，其中第4、6天差异显著，与乙醇组比有统计学差异(P＜0.05)

4.2.对水迷宫测试寻台失败的动物数(见表11-3)

表11-3.3号方酒对小鼠水迷宫测试寻台失败次数的影响

由表11-3所示，水迷宫测试动物寻台失败的次数进行组间比较，虽无统计学差异，但乙醇组失败次数与正常组比明显增多，3号方酒与乙醇组比有减少的趋势。

上述结果表明，长期饮酒有害脑功能健康，灵活性差，反应迟钝，动作协调性差，注意力不易集中，学习记忆出现减退。3号方酒对乙醇脑功能损害有一定的减轻作用，对促进学习记忆能力是有益的。

由以上试验研究结果可见，灌服3号方酒小鼠比单纯灌服乙醇小鼠协调平衡运动有明显的改善，主要表现在动物跌落数减少及开始跌落时间明显后延。这提示3号方有改善酒后协调平衡运动失衡的作用；有明显增加动物耐缺氧能力，具有抗应激作用；对乙醇所致免疫功能低下动物有提高免疫功能的作用；以及对乙醇脑功能损害有一定的减轻作用，对促进学习记忆能力是有益的。

Claims

1.地黄或其提取物在制备用于改善肝脏功能的药物或保健产品中的用途。

2.地黄或其提取物在制备用于治疗和/或预防与肝脏相关的疾病和/或病症的药物或保健产品中的用途。

3.地黄或其提取物在制备用于改善哺乳动物(例如人)与运动平衡失调有关的病症或身体状态的药物或保健产品中的用途。

4.地黄或其提取物在制备用于改善哺乳动物(例如人)与缺氧有关的病症或身体状态或者用于抗与应激有关的病症或身体状态的药物或保健产品中的用途。

5.地黄或其提取物在制备用于改善哺乳动物(例如人)与免疫功能低下有关的病症或身体状态的药物或保健产品中的用途。

6.地黄或其提取物在制备用于改善哺乳动物(例如人)与脑功能损伤有关的病症或身体状态或者用于提高或改善记忆力的药物或保健产品中的用途。

7.地黄或其提取物在制备用于治疗、预防、和/或改善下列疾病、病症或身体状态的药物或保健产品中的用途：肝脏功能不全或损伤(例如，修复肝细胞、提高肝细胞抗氧化能力、减少肝细胞内氧化自由基(ROS)的含量)、与肝脏相关的疾病和/或病症(例如，因化学物质(包括但不限于酒精)引起的与肝脏相关的疾病和/或病症、肝损伤、脂肪肝、肝炎、肝硬化、肝功能衰竭、酒精性脂肪肝、急性酒精性脂肪肝、慢性酒精性脂肪肝)、与运动平衡失调有关的病症或身体状态(例如化学物质如乙醇所致，例如饮酒后的运动平衡失调)、缺氧有关的病症或身体状态(例如化学物质如乙醇所致，例如饮酒后的缺氧)、与应激有关的病症或身体状态(例如化学物质如乙醇所致，例如饮酒后的所致应激)、与免疫功能低下有关的病症或身体状态(例如化学物质如乙醇所致，例如饮酒后的免疫功能低下)、与脑功能损伤有关的病症或身体状态(例如化学物质如乙醇所致，例如饮酒后的脑功能损伤)、记忆力低下(例如化学物质如乙醇所致，例如饮酒后的记忆力低下)。

8.根据权利要求1～7任一项的用途，其中所述的药物或保健产品可用于哺乳动物尤其是人，并且该哺乳动物尤其是人每日使用该药物或保健产品的量相当于3～30g生地黄，优选相当于4～28g生地黄，更优选相当于5～24g生地黄，再更优选相当于7～20g生地黄，进一步优选相当于9～15g生地黄。

9.根据权利要求1～8任一项的用途，其中所述的地黄提取物具有以下一项或多项特征：

梓醇与低聚糖的重量/重量含量比为1∶1～1∶9，优选1∶1.2～1∶8；

梓醇的含量大于10％，优选10～40％；

低聚糖的含量大于40％，优选40～90％；

梓醇的含量大于10％，并且低聚糖的含量大于40％。

10.根据权利要求1～9任一项的用途，其中所述的药物或保健产品中还进一步含有其它的活性物质，优选地，所述其它的活性物质选自牛膝、红景天或其组合。