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CN102137934A - An3蛋白质复合物及其在植物生长促进中的用途 - Google Patents

An3蛋白质复合物及其在植物生长促进中的用途 Download PDF

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CN102137934A CN2009801333659A CN200980133365A CN102137934A CN 102137934 A CN102137934 A CN 102137934A CN 2009801333659 A CN2009801333659 A CN 2009801333659A CN 200980133365 A CN200980133365 A CN 200980133365A CN 102137934 A CN102137934 A CN 102137934A
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Abstract

本发明涉及基于AN3的蛋白质复合物。本发明还涉及所述复合物在促进植物生长中的用途，及通过过表达复合物的至少2个成员刺激复合物形成的方法。

Description

AN3蛋白质复合物及其在植物生长促进中的用途
本发明涉及基于AN3的蛋白质复合物。本发明还涉及所述复合物在促进植物生长中的用途，及通过过表达复合物的至少2个成员刺激复合物形成的方法。
对更多植物衍生产品的需求急剧增加。在不远的将来，农业将面临的挑战是以可持续发展的方式满足不断增长的对饲料和食物的需求。此外，植物开始发挥作为能量来源的重要作用。为了应对这些主要的挑战，必须在植物产量方面取得重大增长。生物质生产是一种多因子系统，其中将过剩的过程(process)提供给分生组织活性以得到新的细胞、组织和器官。尽管目前正在进行大量有关产量表现的研究，对支持产量的分子网络所知甚少(Van Camp，2005)。在拟南芥(Arabidopsis thaliana)中描述了许多基因，当其被突变或异位表达时导致较大结构的形成，例如叶或根。这些所谓的“内在产量基因”涉及许多不同的过程，这些过程之间的相互关系大部分未知。
在寻找GRF(生长调节因子)相互作用因子(interactor)(Kim和Kende，2004)的过程中，通过窄叶拟南芥突变体分析(Horiguchi等人，2005)中鉴定出这些“内在产量基因”之一的AN3(又称为GIF1)。AN3为人SYT(滑膜肉瘤易位)蛋白质的同系物，由拟南芥基因组中的小基因家族编码。SYT为转录辅激活因子，除了涉及在肿瘤发生中的染色体易位外，仍然不清楚其生物学功能(Clark等人，1994；de Bruijn等人，1996)。使用酵母GAL4系统，AN3显示具有反式激活活性(Kim和Kende，2004)。这与酵母双杂交和体外结合试验一起证明AN3与几种GRF的相互作用(Kim和Kende，2004；Horiguchi等人，2005)，提示AN3作为GRF的转录辅激活因子的作用。GRF(生长调节因子)基因存在于迄今为止检查的所有种子植物的基因组中并编码推定的在叶的生长和发育中起调节作用的转录因子(Kim等人，2003)。证实GRF和AN3转录激活子和辅激活因子复合物的是，grf和an3突变体展示了相似的表型，grf和an3突变的组合显示了协同效应(Kim和Kende，2004)。研究显示an3突变的窄叶表型为细胞数减少的结果。此外，AN3的异位表达导致具有更多细胞的较大叶转基因植物，表明AN3同时控制细胞数和器官大小(Horiguchi等人，2005)。尽管不知道AN3在植物生长调节中的功能，这些结果显示AN3满足“内在产量基因”的要求。
为了破译支持产量提高机制的分子网络，采用以全基因组蛋白质为中心的方法在拟南芥细胞悬浮培养物中研究AN3的相互作用蛋白。串联亲和纯化(TAP)技术和基于质谱(MS)的蛋白质鉴定相组合，分离并鉴定了25个可能作用于植物生长调节的AN3相互作用蛋白(表2)。令人吃惊的，我们分离到几种属于多蛋白复合物的蛋白质。此外，许多相互作用因子完全没有被表征过。对少量AN3相互作用因子的报导显示它们涉及几种发育过程(Wagner & Meyerowitz，2002；Meagher等人，2005；Sarnowski等人，2005；Hurtado等人，2006；Kwon等人，2006)，但迄今为止鉴定的基因中没有一个与刺激植物生长相关。
本发明的一个方面为分离的基于AN3的蛋白质复合物，其至少包含蛋白质AN3p和一种或多种选自由AT4G16143，AT1G09270，AT3G06720，AT5G53480，AT3G60830，AT1G18450，AT2G46020，AT2G28290，AT1G21700，AT5G14170，AT4G17330，AT4G27550，AT1G65980，AT5G55210，AT3G15000，AT4G 35550，AT1G20670，AT1G08730，AT5G13030，AT2G18876，AT5G17510，AT1G05370，AT4G21540，AT1G23900和AT5G23690(基因列于表II)编码的蛋白质。优选的，所述基于AN3的蛋白质复合物至少包含蛋白质AN3p和一种或多种选自ARP4(AT1G18450)，ARP7(AT3G60830)，SNF2(AT2G46020)，SYD(AT2G28290)，SWI3C(AT1G21700)和SWP73B(AT5G14170)的蛋白质。更优选的，所述基于AN3的蛋白质复合物至少包含AN3p，选自ARP4和ARP7的肌动蛋白相关蛋白，选自SNF2(BRM)和SYD的ATP酶和含有SWIRM结构域的蛋白质。优选的，所述含有SWIRM结构域的蛋白质为SWI3C。如此处使用的基于AN3的蛋白质复合物指AN3p直接或间接的与复合物的其他蛋白质相互作用。直接的相互作用指这样的相互作用，其中AN3p的至少一个结构域与相互作用对象的一个或多个结构域相互作用。间接的相互作用指这样的相互作用，其中AN3p不通过其结构域之一与相互作用蛋白相互作用，但所述相互作用蛋白与和AN3p直接或间接相互作用的蛋白质相互作用。
本发明的另一个方面是根据本发明的蛋白质复合物在促进植物生长中的用途。优选的，所述用途为蛋白质复合物的过表达，通过过表达蛋白质复合物的至少2个成员进行。如此处使用的植物生长的促进，指与未使用复合物的相同植物相比，在相同条件生长下(除了使用复合物所需的条件，如果有的话)，使用蛋白质复合物的植物中的植物生物质的增加。作为非限制性示例，这些条件可能为加入一种或几种化合物以诱导编码复合物蛋白质的一种或多种基因的一种或多种启动子。可选的，相同的植物为未转化的亲本植物，与使用复合物的转化植物在相同的条件下生长。优选的，植物生长的促进导致提高的产量。此产量可为植物生物质的总体提高或例如但不限于种子产量、叶产量或根产量的产量的部分提高。
本发明的另一个方面是通过同时过表达复合物的至少2种蛋白质促进基于AN3的蛋白质复合物形成的方法。除了AN3p自身以外的复合物蛋白质列于表I I。优选的，所述过表达为AN3p和一种或多种选自ARP4(AT1G18450)，ARP7(AT3G60830)，SNF2(AT2G46020)，SYD(AT2G28290)，SWI3C(AT1G21700)和SWP73B(AT5G14170)的蛋白质的过表达。更优选的，所述过表达为至少AN3p，选自ARP4和ARP7的肌动蛋白相关蛋白质，选自SNF2(BRM)和SYD的ATP酶和含有SWIRM结构域的蛋白质的过表达。优选的，所述含有SWIRM结构域的蛋白质为SWI3C。
获得过表达的方法是本领域技术人员已知的，包含但不限于将待过表达的编码蛋白质的基因置于强启动子例如花椰菜花叶病毒35S启动子之后。如此处使用的同时过表达指所有待过表达的蛋白质在时间表上有重叠，由此当与未过表达对照相比时，所述蛋白质水平提高。不一定指所有基因应当同时被诱导。取决于信使RNA和/或蛋白质的周转，一种基因可在另一种基因被诱导之前或之后被诱导，只要两种蛋白质以高于普通(未过表达的)浓度的浓度在重叠的时间中存在。
附图简述
图1.在转基因细胞悬浮培养物中，GS-标记的GFP和AN3的表达分析
培养2天的野生型与N-和C-端GS标记的GFP和AN3过表达培养物的总蛋白提取物(60μg)通过12％SDS-PAGE分离并进行免疫印迹。为检测GS标记的蛋白质，印迹与人血浆孵育，之后与偶联辣根过氧化物酶的抗人IgG孵育。通过化学发光检测显影蛋白质凝胶印迹。预期的GS-标记的GFP和AN3的重组分子量分别为52.8kDa和43.5kDa(用黑点指示)。
图2.TAP蛋白质洗脱液的分析
从转基因植物细胞悬浮培养物中纯化GS标记的蛋白质复合物，用TCA(25％，v/v)沉淀，在4-12％NuPAGE凝胶中分离，并用胶体考马斯G-250染色显像。用点指示诱饵蛋白质。
实施例
实施例的材料和方法
载体构建
将N-和C-端GS标记的GFP和AN3置于35S(CaMV)启动子的控制下的构建通过多位点Gateway LR反应进行。通过聚合酶链式反应(PCR)扩增不含(-)或含(+)终止密码子的编码区并克隆至Gateway pDONR221载体(Invitrogen)，得到pEntryL1L2-GFP(-)，pEntryL1L2-GFP(+)，pEntryL1L2-AN3(-)和pEntryL1L2-AN3(+)。含有Pro35S：GFP-GS-和Pro35S：AN3-GS-的植物转化载体分别通过pEntryL4R1-Pro35S，pEntryL1L2-GFP(-)或pEntryL1L2-AN3(-)，和pEntryR2L3-GS和目的载体pKCTAP之间的多位点Gateway LR反应得到(Van Leene等人，2007)。为得到Pro35S：GS-GFP和Pro35S：GS-AN3载体，在pEntryL4L3-Pro35S和pEntryL1L2-GFP(+)或pEntryL1L2-AN3(+)和pKNGSTAP间进行多位点Gateway LR重组。
所有输入和目的载体经序列分析检查。将表达载体通过电穿孔转化至根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株C58C1RifR(pMP90)。转化的细菌在含有100μg/mL利福平，40μg/mL庆大霉素和100μg/mL壮观霉素的酵母提取物肉汤平板上进行选择。
细胞悬浮培养
野生型和转基因拟南芥细胞悬浮PSB-D培养物在50mL MSMO培养基(4.43g/L MSMO，Sigma-Aldrich)，30g/L蔗糖，0.5mg/L NAA，0.05mg/L激动素，pH 5.7(用1M KOH调节)中于25℃黑暗中通过温和搅拌维持(130rpm)。每7天将细胞在新鲜的培养基中以1/10稀释进行继代培养。
细胞培养物转化
按前述(Van Leene等人，2007)通过土壤杆菌共培养转化拟南芥培养物。在YEB中指数生长的土壤杆菌培养物(OD600在1.0和1.5之间)通过离心(5000rpm 10min)用等体积MSMO培养基洗3次并重悬于细胞悬浮生长培养基直到OD600为1.0。继代培养2天后，3mL悬浮培养物与200μL洗过的土壤杆菌和200μM乙酰丁香酮(acetoseringone)在黑暗中于25℃孵育48h，并温和搅拌(130rpm)。共培养2天后，在细胞培养物中加入7mL含有3种抗生素混合物(25μg/mL卡那霉素，500μg/mL羧苄青霉素(carbenicellin)，和500μg/mL万古霉素)的MSMO并在标准条件下(25℃，130rpm和持续黑暗)进一步悬浮培养。在共培养后11和18天分别通过1∶5和1∶10比率在含有抗生素混合物的50mL新鲜MSMO培养基中连续稀释选择稳定的转基因培养物。反选择细菌之后，在50mL包含25μg/mL卡那霉素的MSMO中每周一次进一步继代培养转基因植物细胞2周。之后细胞在新鲜的培养基中以1/10稀释每周一次继代培养。
细胞悬浮培养物的表达分析
在从继代培养2天后收获的指数生长的细胞中得到的总蛋白质提取物中分析转基因的表达。等量的总蛋白质在12％SDS-PAGE凝胶中分离并将印迹转移至Immobilon-P膜(Millipore，Bedford，MA)。蛋白质凝胶印迹在溶于20mM Tris-HCl，pH 7.4，150mM NaCl，和0.1％Triton X-100的3％脱脂奶中封闭。为检测GS标记的蛋白质，将印迹与人血浆孵育，之后与偶联辣根过氧化物酶(HRP；GE-Healthcare)的抗人IgG孵育。通过化学发光检测(Perkin Elmer，Norwalk，CT)显影蛋白质凝胶印迹。
蛋白提取物的制备
在液氮中将细胞材料(15g)研磨均匀。在等体积(w/v)提取缓冲液(25mM Tris-HCl，pH 7.6，15mM MgCl2，5mM EGTA，150mM NaCl，15mM对硝基磷酸苯酯，60mMβ甘油磷酸，0.1％(v/v)Nonidet P-40(NP-40)，0.1mM钒酸钠，1mM NaF，1mM DTT，1mM PMSF，10μg/mL亮抑酶肽，10μg/mL抑肽酶，5μg/mL抗蛋白酶，5μg/mL胰凝乳蛋白酶抑制剂，5μg/mL胃蛋白酶抑制剂，10μg/mL大豆胰酶抑制剂，0.1mM苄脒，1μM反-环氧丁二酰基-L-亮氨酰胺基(4-胍基)丁烷(E64)，5％(v/v)乙二醇)中在4℃使用Ultfa-Turrax T25搅拌器(IKA Works，Wilmington，NC)制备粗蛋白提取物。通过36900g 20min和178000g 45min在4℃的两步离心得到可溶性蛋白部分。将提取物通过0.45μm滤器(Alltech，Deerfield，IL)，用蛋白质分析试剂盒(Bio-Rad，Hercules，CA)测定蛋白质含量。
串联亲和纯化
如Bürckstümmer等人(2006)描述的进行纯化，稍加修饰。简言之，200mg总蛋白提取物与100μL用3mL提取缓冲液预平衡的IgG琼脂糖6快流速微珠(GE-Healthcare，Little Chalfont，UK)于4℃在缓慢旋转下孵育1小时。将IgG琼脂糖凝胶微珠转移至1mL Mobicol柱(MoBiTec，Goettingen，Germany)并用10mL IgG清洗缓冲液(10mM Tris-HCl，pH 8.0，150mM NaCl，0.1％NP-40，5％乙二醇)和5mL烟草(Nicotiana tabacum L.)蚀纹病毒(TEV)缓冲液(10mM Tris-HCl，pH 8.0，150mM NaCl，0.1％(v/v)NP-40，0.5mM EDTA，1mM PMSF，1μM E64，5％(v/v)乙二醇)清洗。经AcTEV消化(2x 100U，Invitrogen)洗脱结合的复合物，16℃1h。洗脱的IgG部分与100μL用3mL TEV缓冲液预平衡的链霉抗生物素树脂(Stratagene，La Jolla，CA)于4℃在缓慢旋转下孵育1小时。将链霉抗生物素树脂装进Mobicol柱，用10mL TEV缓冲液清洗。用1mL链霉抗生物素洗脱缓冲液(10mM Tris-HCl，pH 8.0，150mM NaCl，0.1％(v/v)NP-40，0.5mM EDTA，1mM PMSF，1μM E64，5％(v/v)乙二醇，20mM脱硫生物素)洗脱结合的复合物，用TCA(25％v/v)沉淀。蛋白质沉淀用冰冷的含50mM HCl的丙酮清洗2次，重新溶解于样品缓冲液并在4-12％梯度NuPAGE凝胶(Invitrogen)中分离。用胶体考马斯亮蓝染色显像蛋白质。
蛋白质水解和肽分离
脱色后，在水中清洗凝胶片1小时，在25mL溶于50mM NH4HCO3的6,66mM DTT中还原多肽二硫键40min，之后在25mL 55mM溶于50mM NH4HCO3的IAM中烷基化硫醇基30min。用水清洗凝胶片3次后，将蛋白质凝胶的完整泳道切成薄片，用微滴定板收集，并基本上按稍加修饰的前述方法处理(Van Leene等人，2007)。每个微滴定板的孔中，脱水的凝胶颗粒在含有250ng胰酶(MS Gold；Promega，Madison，WI)，50mM NH4HCO3和10％CH3CN(v/v)的20μL消化缓冲液中于4℃再水化30min。在加入10μL含有50mMNH4HCO3和10％CH3CN(v/v)的缓冲液之后，在37℃消化蛋白质3小时。得到的肽用微柱固相吸头(PerfectPureTM C18吸头，200nL柱床体积；Eppendorf，Hamburg，Germany)浓缩和脱盐，用1.2μL用α-氰基-4-羟基肉桂酸饱和的50％CH3CN：0.1％CF3COOH溶液将肽直接洗脱至MALDI靶板(Opti-TOFTM384 Well Ins ert；Applied Biosystems，Foster City，CA)，并用20fmole/μL Glu1血纤维蛋白肽B(Sigma-Aldrich)，20fmole/μLdes-Pro2-Bradykinin(Sigma-Aldrich)，和20fmole/μL促肾上腺皮质激素片段18-39人(Sigma-Aldrich)进行加标(spike)。
质谱检测
使用MALDI串联MS仪器(4800Proteomics Analyzer；AppliedBiosystems)获取肽质量指纹和选定肽的1kV CID碎片谱。基本上使用如Van Leene等人(2007)中提出的设置获得肽质谱和肽序列谱。根据制造商的说明书校准各MALDI板。所有肽质量指纹(PMF)谱用m/z 963.516(des-Pro2-Bradykinin)，m/z 1570.677(Glu1-血纤维蛋白肽B)，and m/z2465，198(促肾上腺皮质激素片段18-39)的3个内部标准物进行内部校准，对分析的MALDI靶上的各个分析的肽点得到5ppm±10ppm的平均质量精度。使用个体PMF谱，将信噪比超过20的多达16种肽通过质量排除滤器后用于碎片分析。
基于MS的蛋白质同源性鉴定
使用随附的套装软件(GPS Explorer 3.6，Applied Biosystems)使用基本上如Van Leene等人(2007)描述的参数设置处理各个样品的PMF谱和肽序列谱。生成数据检索文件并通过本地数据库搜索引擎(Mascot 2.1，MatrixScience)进行蛋白质同源性鉴定。从9个公共数据库收集得到称为SNAPS拟南芥版本0.4(SNAPS＝蛋白质序列的简单非冗余集合(SimpleNonredundantAssembly of Protein Sequences)，77488序列条目(entry)，30468560残基；在http://www.ptools.ua.ac.be/snaps可获得)的内部非冗余拟南芥蛋白质数据库。保留相对得分超过95％概率的最高击中(top hit)(一级)的蛋白质同源性鉴定。当得分超过98％概率阈值时保留额外的阳性鉴定(二级或更高)。
实施例1：GS标记的GFP和AN3过表达细胞系的表达分析。
在进行TAP纯化前，在转基因的蛋白质表达水平筛选稳定转化的细胞悬浮培养物。来自野生型(PSB-D)培养物和GS-GFP，GFP-GS，GS-AN3和AN3-GS过表达细胞系的等量总蛋白提取物的蛋白质凝胶印迹显示了GS标记蛋白质的明显表达(图1)。
实施例2：野生型和GST标记的GFP过表达培养物的TAP纯化。
尽管在TAP纯化中进行了2次连续的纯化步骤，仍存在由于非特异性结合共纯化的背景蛋白质的问题。通过对野生型和过表达N-和C-端GS标记的核定位绿色荧光蛋白(GFP)的转基因培养物的纯化测定了由于实验背景造成的污染蛋白质。非特异性共纯化的蛋白质经沉淀、在凝胶中分离、染色(图2)、胰酶消化和经MALDI-TOF/TOF明确鉴定。大多数污染物为高丰度蛋白质，例如分子伴侣、细胞骨架蛋白、核糖体蛋白、代谢酶或蛋白质翻译因子(表1)。发现了与其他植物蛋白质-蛋白质相互作用研究中的常见污染物相同或相似的蛋白质(Rohila等人，2006；Van Leene等人，2007)。
实施例3：AN3相互作用蛋白质的TAP分离和MS鉴定。
为了鉴定AN3的体内相互作用对象，我们对转基因拟南芥悬浮培养物中处于组成型35SCaMV启动子控制下异位表达的AN3的N-和C-端GS融合蛋白进行了串联亲和纯化(TAP)。对在新鲜的培养基中继代培养2天后收集的AN3-GS和GS-AN3细胞系提取物进行了2次独立的TAP纯化。亲和纯化的蛋白质在4-12％NuPAGE凝胶中分离并用考马斯亮蓝染色。过表达AN3的转基因培养物的纯化谱显示于图2。将蛋白质条带切下来，在凝胶中用胰酶消化并用于MALDI-TOF/TOF质谱以鉴定蛋白质。去除通过实施例2中描述的对照纯化和在其他分析(GUS和胞浆GFP，Van Leene等人，2007)中鉴定的背景蛋白质后，从得到的击中列表中我们鉴定出25个AN3相互作用蛋白(表2)。这些可分为2组：14个蛋白质经试验确认，11个蛋白质仅在4次TAP试验中的1次中被鉴定。
实施例4：植物中的AN3相互作用SWI/SNF染色质重塑复合物的分离和亚基鉴定。
在试验确认的AN3相互作用因子中，6个蛋白质充当重塑染色质结构的大分子机器的亚基。数据库调查(ChromDB，Gendler等人，2008)显示它们均属于SWI/SNF ATP酶家族。SWI/SNF染色质重塑ATP酶在动植物界中为保守的，并相应内源和外源信号调节转录程序。这提示AN3的转录活性通过染色质重塑调节。与之一致的，人AN3同系物SYT也显示了与SWI/SNF复合物成分BRM和Brg1有相互作用(Thaete等人，1999；Perani等人，2003；Ishida等人，2004)。
尽管在拟南芥中已经研究了几种推定的SWI/SNF复合物成分的功能性作用，迄今为止没有分离和表征过完整的植物染色质重塑复合物。与AN3的共纯化首次证明了体内的植物SWI/SNF复合物的物理组成，其以前仅基于同源性分析和遗传学解释及体外的相互作用。
文献概述显示在拟南芥中SWI/SNF ATP酶亚基控制多个发育途径。2个分离的ATP酶SYD(At2g28290)和BRM(SNF2)(At2g46020)的无效突变体展示了多向性(pleiotropic)发育缺陷。2种突变体均生长缓慢且矮小，在子叶分离中具有缺陷，并展示减少的顶端优势(Wagner & Meyerowitz，2002；Farrona等人，2004；Hurtado等人，2006；Kwon等人，2006；Su等人，2006)。BRM(SNF2)的无效突变体还具有独特的根生长缺陷并为雄性不育的(Wagner & Meyerowitz，2002；Hurtado等人，2006；Kwon等人，2006)。核心复合物Swi3c(At1g21700)突变体与brm突变体极其相似(Sarnowski等人，2005)。附属成分ARP4和ARP7的突变体展示了多向性缺陷，与syd，brm和swi3c表型的相似较少(Meagher等人，2005)。ARP4的下调导致包括植物器官的组织改变、提前开花、延迟的花枯萎和部分不育的表型(Kandasamy等人，2005a)。ARP7击倒(knockdown)导致具有小莲座叶、根生长高度迟缓、花发育改变和降低的生育力的矮小植物(Kandasamy等人，2005b)。最后，RNAi介导的附属SWI/SNF复合物成分SWP73B(At5g14170)的沉默导致具有较短根的矮小植物(Crane & Gelvin，2007)。
实施例5：AN3相互作用因子的分离和鉴定
除了SWI/SNF染色质重塑复合物亚基以外，其他所有19个鉴定的AN3相互作用因子没有或很少被表征。表3给出了它们的GO生物学过程和分子功能的概述。
其中4个相互作用因子(At4g16143，At1g09270，At3g06720和At5g53480)涉及核质运输，这鉴定了AN3为植物核转运蛋白的靶之一。事实上准确的细胞定位对蛋白质功能是非常重要的，核定位对转录因子的功能是关键的。在植物中，核质运输在不同生物学过程中起关键作用(Meier，2007；Xu & Meier，2008)，已显示核转运蛋白涉及调节植物发育中的不同信号转导途径(Bollman等人，2003)和在植物中对生物(Palma等人，2005)和非生物压力(Verslues等人，2006)的应答。
另一个尚未表征的AN3相互作用因子是海藻糖磷酸酶/合成酶4(TPS4)。在植物中的一些研究暗示海藻糖生物合成在植物生长、发育和压力耐受中的重要作用(Grennan，2007)。在拟南芥TPS1的情况中，敲除突变体展示了胚胎致死表型，提示此基因在植物发育中的作用(Eastmond等人，2002)。此外，TPS1的过表达显示其作为葡萄糖、脱落酸和压力信号传导的调节子作用(Avonce等人，2004)。后一个研究和最近的对大米TPS在过表达时触发非生物压力应答基因诱导的分析(Ge等人，2008)提示TPS基因在调节转录信号传导途径中的可能作用。
其他鉴定的相互作用因子提示AN3功能与多个过程的联系。一些研究证明了鞘氨醇激酶涉及植物细胞信号转导(Coursol等人，2003；Coursol等人，2005；Worral等人，2008)，然而对肌球蛋白同系物(homologue)的研究暗示运输蛋白和细胞器在植物发育中的作用。以后研究这些基因、其他鉴定的相互作用因子和AN3之间的联系将是非常有趣的。
表1.在未转化细胞培养物和异位表达核定位GFP的培养物的TAP试验中共纯化的蛋白质列表
Figure BDA0000048121280000131
表2.MS鉴定的AN3共纯化蛋白列表。最后一列显示了在4次独立实验中相互作用因子被鉴定出的次数。
Figure BDA0000048121280000141
Figure BDA0000048121280000151
表3.
Figure BDA0000048121280000161
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Claims (6)

1.分离的基于AN3的蛋白质复合物，其至少包含蛋白质AN3p和一种或多种选自由AT4G16143，AT1G09270，AT3G06720，AT5G53480，AT3G60830，AT1G18450，AT2G46020，AT2G28290，AT1G21700，AT5G14170，AT4G17330，AT4G27550，AT1G65980，AT5G55210，AT3G15000，AT4G35550，AT1G20670，AT1G08730，AT5G13030，AT2G18876，AT5G17510，AT1G05370，AT4G21540，AT1G23900和AT5G23690编码的蛋白质。
2.分离的基于AN3的蛋白质复合物，其至少包含蛋白质AN3p和一种或多种选自ARP4(AT1G18450)，ARP7(AT3G60830)，SNF2(AT2G46020)，SYD(AT2G28290)，SWI3C(AT1G21700)和SWP73B(AT5G14170)的蛋白质。
3.根据权利要求2的分离的基于AN3的蛋白质复合物，其中所述蛋白质复合物至少包含AN3p，选自ARP4和ARP7的肌动蛋白相关蛋白质，选自SNF2(BRM)和SYD的ATP酶和含有SWIRM结构域的蛋白质。
4.根据权利要求3的分离的基于AN3的蛋白质复合物，其中所述含有SWIRM结构域的蛋白质为SWI3C。
5.根据前面权利要求中任一项的蛋白质复合物在促进植物生长中的用途。
6.促进基于AN3的蛋白质复合物形成的方法，通过同时过表达所述复合物的至少2种蛋白质进行。
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Kristiansen UNIVERSITY OF OSLO 08/2009

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