CN102134207B

CN102134207B - 一种脲化合物及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN102134207B
Application number: CN 201110008315
Authority: CN
Inventors: 丘鹰昆; 吴振; 庄萍; 陈琳; 赵虎义; 吴福楷
Original assignee: Xiamen University
Current assignee: Xiamen University
Priority date: 2011-01-14
Filing date: 2011-01-14
Publication date: 2013-04-17
Anticipated expiration: 2031-01-14
Also published as: CN102134207A

Abstract

一种脲化合物及其制备方法和用途，涉及一种化合物。所述脲化合物的化学名为N-[2-羟基-2-(4-羟基苯基)乙基]-N-甲基脲，分子式为：C₁₀H₁₄N₂O₃，呈白色粉末，具水溶性将蟾皮以乙醇冷浸或加热回流提取，回收乙醇后得浓缩液；将浓缩液上大孔树脂柱，洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂，得富集物；将富集物上反相碳-18柱层析，洗脱后，收集产物，得脲化合物粗品；将脲化合物粗品进行高效液相制备，收集主峰，回收溶剂，干燥后即得脲化合物。经试验，所述脲化合物具有对荷瘤小鼠的生命延长作用，可在制备治疗抗肿瘤药物中应用。从蟾皮中提取分离得到一种具有水溶性的脲化合物，该化合物能显著延长肿瘤小鼠的生存时间。

Description

一种脲化合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种化合物，尤其是涉及一种脲化合物及其制备方法与用途。

背景技术

蟾蜍属动物有250多种，分布于世界各地。我国有近10种，主要分布的3种分别是：大蟾蜍华西亚种(Bufo bufo andrewsi Schmidt)、大蟾蜍中华亚种(Bufo bufo gargarizans Cantor)以及黑眶蟾蜍(Bufo melanostitus Schneider)。蟾蜍之名首载于《名医别录》，早在《神农本草经》就载有“虾蟆”的性味与主治。《本草蒙筌》：“味辛、气凉、微毒”，《本草再新》：入心、肝、脾、肺四经。古今验方广泛应用蟾蜍拔毒消肿、定痛杀虫、强心利尿。

以蟾蜍为基原的常用中药材有蟾酥、蟾皮、干蟾，其化学成分相当复杂，可分为蟾蜍二烯内酯类(蟾毒配基类、蟾蜍毒素类)、水溶性吲哚生物碱类。目前研究较多的成分为脂溶性甾族类，该类化合物具有较强的杀灭肿瘤细胞的作用。但同时该类成分属于强心苷类，是引起心脏毒性等诸多不良反应的主要原因。

现已有蟾酥镇痛膏、蟾酥注射液、华蟾素注射液和复方蟾皮胶囊等制剂应用于临床抗肿瘤、镇痛、利水消肿、增强机体免疫力。蟾蜍制剂在临床上用于肿瘤的辅助治疗具有标本兼治的优点，能够显著抑制肿瘤的转移、提高机体免疫力，与化疗药物相比，具有能够减轻肿瘤患者痛苦，显著改善生活质量，延长生命周期的特点，同时也能够与化疗药物联合使用增强疗效。然而，目前的蟾蜍制剂，都是以粗提取物入药，成分极为复杂，除含有蟾毒配基、蟾蜍毒素、吲哚类生物碱(如5-羟色胺，蟾蜍色胺、蟾蜍噻咛等)外，还含有氨基酸、还原糖、甾类、肽类等多种类型的化学成分。因此，在临床使用中，蟾蜍制剂具有以下两个主要缺点：①心脏毒性，②出现过敏反应，血管刺激症状，消化道等不良反应的发生率高，这是由于制剂中含有较多的蟾蜍二烯内酯类成分，同时其他的无效、不良反应成分也未能很好地消除。

中国专利CN101600707公开一种用于治疗癌症的脲化合物，涉及吡唑脲化合物、包含它们的药物组合物以及使用它们治疗癌症的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种脲化合物及其制备方法和用途。

所述脲化合物的化学名为N-[2-羟基-2-(4-羟基苯基)乙基]-N-甲基脲，分子式为：C₁₀H₁₄N₂O₃，其结构式为：

呈白色粉末，具水溶性。

所述脲化合物的制备方法包括以下步骤：

1)将蟾皮以乙醇冷浸或加热回流提取，回收乙醇后得浓缩液；

在步骤1)中，所述乙醇的用量按质量比可为蟾皮的5～20倍；所述冷浸或加热回流提取的次数可为1～5次。

2)将浓缩液上大孔树脂柱，洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂，得富集物；

在步骤2)中，所述洗脱，可用水或浓度为1％～30％的乙醇洗脱。

3)将步骤2)所得的富集物上反相碳-18柱层析，洗脱后，收集产物，得脲化合物粗品；

在步骤3)中，所述洗脱，可采用浓度为10％～30％的甲醇洗脱。

4)将步骤3)所得的脲化合物粗品进行高效液相制备，收集主峰，回收溶剂，干燥后即得脲化合物。

经试验，所述脲化合物具有对荷瘤小鼠的生命延长作用，可在制备治疗抗肿瘤药物中应用。

本发明从蟾皮中提取分离得到一种具有水溶性的脲化合物，该化合物能显著延长肿瘤小鼠的生存时间。

附图说明

图1为脲化合物的氢谱。在图1中，横坐标的单位为ppm；从左至右各谱峰分别为9.30170，7.14510，7.12400，6.72990，6.72350，6.70230，6.69610，5.77620，5.40930，5.40040，4.63380，4.62500，4.61610，3.43860，3.39470，3.35550，3.31550，3.29580，3.27620，3.26010，3.24070，3.22480，321330，3.18920，3.17770，2.69680，2.51690，2.51260，2.50810，2.50360，2.49930；谱峰宽度从左至右分别为0.9015，1.9991，1.9855，1.9299，1.0000，1.0302，2.2380，2.9765。

图2为脲化合物的碳谱。在图1中，横坐标的单位为ppm；从左至右各谱峰分别为159.37360，156.29380，134.05600，127.03890，114.68370，72.43610，71.33540，63.04480，56.75910，40.09620，39.88800，39.67980，39.47100，39.26200，39.05320，38.84430，35.81440。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的描述，但不构成对本发明的任何限制。

实施例1

1)提取：取蟾皮10kg用95％的乙醇提取1次，用醇量为20倍，每次提取的时间为60min，过滤，滤液减压回收乙醇至无醇味，得浓缩液。

2)大孔树脂柱层析：步骤1)的浓缩液上D101型大孔树脂柱(5kg)，用水洗脱5个柱体积，收集洗脱液，减压浓缩，得到富集物。

3)反相碳-18柱层析：取步骤2)所得到的富集物50g，上反相碳-18柱，用10％甲醇洗脱，薄层层析检测，收集含有脲化合物的流份，减压回收溶剂，干燥得到蟾皮提取物7g，脲化合物含量为60.3％。

4)精制：取步骤3)所制得的粗品2.0g进行高效液相制备(Phenomenex LUNA C18，甲醇∶水为10∶90)，收集脲化合物色谱峰，回收溶剂，得到脲化合物1.03g，高效液相检测含量为98％。

实施例2

1)提取：取蟾皮10kg用95％的乙醇提取3次，用醇量为10倍，每次提取的时间为60min，过滤，合并滤液，滤液减压回收乙醇至无醇味，得浓缩液；

2)大孔树脂柱层析：步骤1)的浓缩液上HPD100型大孔树脂柱(5kg)，用1％乙醇洗脱5个柱体积，收集洗脱液，减压浓缩，得到富集物。

3)反相碳-18柱层析：取步骤2)所得到的富集物50g，上反相碳-18柱，用20％甲醇洗脱，薄层层析检测，收集含脲化合物的流份，减压回收溶剂，干燥得到蟾皮提取物82g，脲化合物含量为53.1％。

4)精制：取步骤3)所制得的粗品2.0g进行高效液相制备(Phenomenex LUNA C18，甲醇∶水为10∶90)，收集其中脲化合物色谱峰，回收溶剂，得到脲化合物0.96g，高效液相检测含量为97％。

实施例3

1)提取：取蟾皮10kg用95％的乙醇提取5次，用醇量为5倍，每次提取的时间为60min，过滤，合并滤液，滤液减压回收乙醇至无醇味，得浓缩液；

2)大孔树脂柱层析：步骤1)的浓缩液上AB-8型大孔树脂柱(5kg)，用30％乙醇洗脱5个柱体积，收集洗脱液，减压浓缩，得到富集物。

3)反相碳-18柱层析：取步骤2)所得到的富集物50g，上反相碳-18柱，用30％甲醇洗脱，薄层层析检测，收集含有脲化合物的流份，减压回收溶剂，干燥得到蟾皮提取物9.3g，脲化合物含量为50.8％。

4)精制：取步骤3)所制得的粗品2.0g进行高效液相制备(Phenomenex LUNA C18，甲醇∶水为10∶90)，收集其中脲化合物色谱峰，回收溶剂，得到脲化合物111g，高效液相检测含量为99％。

脲化合物的理化测定数据如下：白色粉末，m.p.168～170℃；

(c＝1.0，MeOH)；ESI-MS：m/z 211(M+H)⁺，233[M+Na]⁺；

nm(logε)(MeOH)：224.6(3.81)；IR_maxKBr3432，2925，2855，1642，1542cm^-1；氢谱(DMSO-d₆，400MHz)：9.30(1H，br.s，4’-OH)，7.13(2H，d，J＝8.4Hz，H-2’，6’)，6.73(2H，d，J＝8.4Hz，H-3’，5’)，5.78(2H，br.s，-NH₂)，5.40(1H，d，J＝3.6Hz，2-OH)，4.63(1H，m，H-2)，[327(1H，dd，J＝14.2，7.8Hz)&320(1H，dd，J＝14.2，4.6Hz)，H-1]及2.70(3H，s，N-CH₃)，如图1所示；碳谱(DMSO-d₆，100MHz)：159.4(＝CO)，156.3(C-4′)，134.0(C-1′)，127.0(C-2′，6′)，114.7(C-3′，5′)，71.3(C-2)，56.8(C-1)，35.8(N-CH₃)，如图2所示。

试验例1对荷瘤小鼠的生命延长作用

材料：

NIH小鼠；

实施例1制备得到的化合物；

华蟾素注射液。

方法NIH性成熟雄性小鼠，分别按常规方法接种S180肉瘤细胞(徐叔云，等。药理实验方法学(第二版)北京：人民卫生出版社，1991，1423)。瘤龄10d的瘤源小鼠拉断脊椎处死，无菌剖取瘤块，取粉红色瘤组织部位，用灭菌生理盐水灭菌制成匀浆，调成1×10⁷个/mL浓度的瘤细胞悬液，拌种于实验小鼠右前肢腋下皮下，0.2mL/只。NIH小鼠分别按体重随机分组。按剂量给药。接种后按同样方法给药，标准条件喂养，任其生长，记录每只小鼠的死亡时间，计算存活时间和寿命延长率，利用学生t测验进行组间比较。

结果如表1所示，脲化合物1～100mg/kg灌胃给药，能够延长S180荷瘤小鼠的寿命，且有一定的量效关系，其作用强度比华蟾素注射液强。

表1.蟾皮提取物对小鼠寿命的影响(

n＝10)

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种脲化合物，其特征在于其化学名为N-[2-羟基-2-(4-羟基苯基)乙基]-N-甲基脲，分子式为：C₁₀H₁₄N₂O₃，其结构式为：

呈白色粉末，具水溶性。

2.如权利要求1所述的一种脲化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）将蟾皮以乙醇冷浸或加热回流提取，回收乙醇后得浓缩液；

2）将浓缩液上大孔树脂柱，洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂，得富集物，所述大孔树脂柱选自D101型、HPD100型、AB-8型大孔树脂柱中的一种；

3）将步骤2）所得的富集物上反相碳-18柱层析，洗脱后，收集产物，得脲化合物粗品；

4）将步骤3）所得的脲化合物粗品进行高效液相制备，收集主峰，回收溶剂，干燥后即得脲化合物。

3.如权利要求2所述的一种脲化合物的制备方法，其特征在于在步骤1）中，所述乙醇的用量按质量比为蟾皮的5～20倍。

4.如权利要求2所述的一种脲化合物的制备方法，其特征在于在步骤1）中，所述冷浸或加热回流提取的次数为1～5次。

5.如权利要求2所述的一种脲化合物的制备方法，其特征在于在步骤2）中，所述洗脱，是用水或浓度为1%～30%的乙醇洗脱。

6.如权利要求2所述的一种脲化合物的制备方法，其特征在于在步骤3）中，所述洗脱，是采用浓度为10%～30%的甲醇洗脱。

7.如权利要求1所述的一种脲化合物在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。