CN102124113A - Xvsap1基因的植物启动子 - Google Patents

Abstract

本文记述来自维柯萨(Xerophyta viscosa)的非生物胁迫诱导型启动子(SEQ ID NOs：1-3)，及其变体。还记述包含该启动子和与该启动子可操作连接的基因的载体，用该启动子和基因转化的植物或植物部分。

Description

XVSAP1基因的植物启动子

发明背景

本发明描述有效用于，例如，农业生物技术中的植物启动子。具体地，所述启动子在非生物胁迫条件下是可诱导的，且可以用于开发可以表达用于改善非生物胁迫的一些有害作用的基因的转基因植物。

为了表达转化载体中或DNA构建体中包括的给定基因的编码区，需要将启动子改造到编码序列的上游。现在可以选择启动子，以容许组成型基因表达或仅将基因表达限制于特定细胞类型中或响应特定环境刺激。存在对生成仅在胁迫条件下表达转基因的耐旱转基因植物的需要，因为该蛋白在组成型表达时的过量产生可能妨碍植物的正常生长。这将在有经济价值的农作物诸如玉米和烟草中特别有价值。

在组成型基因表达的过程中，存在始终高水平的基因表达。组成型启动子的实例包括35S RNA的花椰菜花叶病毒启动子和玉米泛蛋白启动子。已经报告了在正常生长条件下组成型表达蛋白有时妨碍转基因植物的正常生长，从而导致与野生型植物相比较小的表现型。转化植物的这种有害的矮化病可以归因于以高于正常的量和在不需要的阶段表达蛋白质。

一些基因编码仅在与植物发育阶段、环境胁迫或病原体攻击有关的特殊条件下所需要的产物。这些基因包含“诱导型启动子”，其可以由诱导剂迅速开启并在被再关闭以前活跃一段有限长的时间。在缺乏诱导剂的条件下，DNA序列或基因不会转录。诱导剂可以是化学试剂，或直接强加于植物的生理胁迫诸如冷、热、盐、毒素，或通过病原体或疾病媒介的作用强加于植物的生理胁迫。已经记述了许多可由缺氧胁迫、高温胁迫、低温胁迫和盐胁迫诱导的启动子。然而，已经发现大多数胁迫诱导型启动子在与组成型启动子相比较时，具有弱表达强度。

由于可诱导型启动子在与组成型启动子相比较时的弱表达强度，存在对开发胁迫响应启动子的需要，所述胁迫响应启动子容许增加表达，但对其诱导模式不具有任何负面作用。

本申请人已经确定了对提供能够表达用于改善非生物胁迫的有害作用的基因的转基因植物的需要，并且为了该目的已经分离了在非生物胁迫条件过程中诱导植物中蛋白表达的启动子。非生物胁迫是对植物的有害作用，其由非生物因素，诸如干旱、盐度、寒冷和极端温度导致，而生物约束通常归因于有生命的系统，如引起疾病的细菌、真菌、病毒和以植物为食的昆虫。

发明概述

本发明提供分离的核酸，其包括与以下各项至少80％相同的核苷酸序列：

(a)SEQ ID NOs：1-3中的任一种；

(b)SEQ ID NOs：1-3中的任一种的片段且起胁迫诱导型启动子的作用；

(c)在标准或严格条件下与SEQ ID NOs：1-3中的任一种的核苷酸序列杂交且起胁迫诱导型启动子的作用的序列；

(d)SEQ ID NOs：1-3中的任一种的互补序列(complement)(SEQ IDNOs：4-6)；

(e)在标准或严格条件下与SEQ ID NOs：1-3中的任一种的互补序列杂交且起胁迫诱导型启动子的作用的序列；

(f)SEQ ID NOs：1-3中的任一种的反向互补序列(SEQ ID NOs：7-9)；或

(g)SEQ ID NOs：1-3中的任一种的简并或等位基因变体。

更优选地，所述核苷酸序列可以与以上(a)-(g)任一项具有至少90％的同一性。

更优选地，所述核苷酸序列可以与以上(a)-(g)任一项具有至少95％的同一性。

甚至更优选地，所述核苷酸序列可以包括SEQ ID NO：1的核苷酸序列或其截短序列，诸如SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3。

所述核酸可以是胁迫诱导型植物启动子，且所述胁迫可以是非生物胁迫诸如渗透压胁迫、脱水胁迫、干旱、盐度、冷、热、干燥或极端温度。

所述核酸可以源自维柯萨(Xerophyta viscosa)。

杂交可以发生在严格条件下，所述严格条件包括在约60-约65℃，在0.1SSC中洗涤。

本发明延伸到包含该启动子的植物载体。所述载体可以在该启动子下游包含基因。

重组载体可以是根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的T-来源的质粒构建体。

本发明还延伸到向其中转化了所述载体的宿主细胞。

所述宿主细胞可以是植物细胞。

本发明还延伸到用所述启动子转化的转基因植物或植物部分。所述转基因植物或植物部分也可以在该启动子的控制下用基因转化。所述基因可以是任何适合的基因，诸如XvSap1，XvPrx2或XvPer1。

所述植物可以是能够在胁迫条件下表达该基因。

所述转基因植物可以是单子叶植物或双子叶植物，诸如玉米、烟草、高粱、小麦、木薯、大麦、燕麦、黑麦、甘薯、大豆、苜蓿、烟草、向日葵、棉花、或油菜。

所述转基因植物部分可以选自由以下各项组成的组：细胞、原生质体、细胞组织培养物、胼胝体、细胞团、胚芽、花粉、胚珠、种子、花、籽粒(kernel)、耳穗、穗轴、叶、外壳、茎、根、根尖、花药、种子和穗丝。

本发明还提供用于增加植物胁迫耐受性的方法，所述方法通过向该植物中引入包含权利要求1的核酸的启动子和任选地也在该启动子控制下引入基因来完成。

附图简述

图1：启动子XvPsap1的核苷酸序列(2083bp，SEQ ID NO：1)。

图2：启动子XvPsap2的核苷酸序列(1577bp，SEQ ID NO：2)。

图3：启动子XvPsap3的核苷酸序列(1127bp，SEQ ID NO：3)。

图4：启动子XvPsap1的互补序列(2083bp，SEQ ID NO：4)。

图5：启动子XvPsap2的互补序列(1577bp，SEQ ID NO：5)。

图6：启动子XvPsap3的互补序列(1127bp，SEQ ID NO：6)。

图7：启动子XvPsap1的反向互补序列(2083bp，SEQ ID NO：7)。

图8：启动子XvPsap2的反向互补序列(1577bp，SEQ ID NO：8)。

图9：启动子XvPsap3的反向互补序列(1127bp，SEQ ID NO：9)。

图10：利用qRT-PCR分析的luc转录物表达概况曲线。A：用200mMNaCl处理72小时后在转基因BMS细胞中的表达概况。B：脱水处理转基因烟草植物8天后的表达概况。C：脱水处理转基因玉米后的表达概况。仅使用XvPsap1构建体转化玉米。方差分析以P＜0.05进行。

发明详述

驱动用于生成抗非生物胁迫的转基因植物的基因表达的非生物胁迫诱导型启动子记述在本文中。还记述了包含该启动子和与该启动子可操作连接的基因的载体，和用所述启动子和基因转化的植物或植物部分。

考虑到陆生植物中水利用的复杂性，尤其是在产生水不足的条件过程中的复杂性，本申请人意识到只有两种启动子与该植物生理学方面特别有关且可以通过商购获得。这些启动子源自大米和拟南芥。

启动子具有中心和调节区。所述调节区是区分启动子的区域。这些调节区一般由负调节元件、转录增强子、翻译增强子和其他调节元件组成。已经合成了三种长度的本发明的DNA启动子(SEQ ID NOs：1-3)。这些应该在调节区内不同。由此，它们的活性和效力在不同植物和在不同胁迫条件下可以不同。因此，各种所述的启动子可以被推荐用于经历不同胁迫的不同植物。

本发明的DNA启动子源自“复活植物”，即维柯萨，其可以经受住极端的干燥，在仅5％相对水含量的条件下存活数月。当向其浇水时，它可以在80小时内再水化。

维柯萨基因组尚未测序。因此，本发明的DNA启动子的碱基序列如果不被分离和克隆，则将不可确定。此外，本发明的DNA启动子是天然存在的启动子的截短形式。

本发明的DNA启动子不编码任何已知的功能蛋白。它们的生物学功能与蛋白的表达有关，其增加维柯萨的胁迫耐受性。所述启动子缺乏与这两种可商购获得的启动子或与任何其他已知启动子序列的任何显著同一性。

尽管本文中记述了具有SEQ ID NOs：1-3核苷酸序列的启动子，但是预期具有80％以上同一性且起启动子作用的序列也可以用于本发明中。还可以使用互补序列(SEQ ID NOs：4-6)、反向互补序列(SEQ ID NOs：7-9)和在标准或严格条件下与这些序列杂交的序列，条件是它们具有启动子活性(图4-9)。

例如，杂交可以以65℃，轻轻摇动条件下进行18h，以65℃在洗涤缓冲液A(0.5％SDS；2X SSC)中进行第一次洗涤12min，且以65℃在洗涤缓冲液B(0.1％SDS；0.5X SSC)中进行第二次洗涤10min。

所述DNA启动子可以在不施用化学制剂的条件下，由环境胁迫，诸如干旱来诱导。它们容许所需的蛋白或mRNA在施加所述刺激的短期内表达。

所述启动子可以插入到植物载体中。能够生成耐受非生物胁迫的转基因植物的基因，诸如XvSap1、XvPrx2或XvPer1，可以被克隆到所述启动子的下游。当将所述组合构建体引入转基因植物中时，该基因仅在植物经历非生物胁迫时表达。因此，可以生成易受非生物胁迫影响的植物，如玉米、烟草、高粱、小麦、木薯和甘薯，它们在非胁迫条件下生理正常。方法学

本发明通过以下方法学更加详细地描述，其不意欲以任何方式解释为对本发明精神或范围的限制。

使用splinkerette方案来获得XvSap1的上游基因组序列(AY100455)。该方案是由Devon等(1995)改良的。启动子的截短形式通过选择性扩增全长启动子区域来产生。

从维柯萨分离的干旱诱导型启动子XvPsap1(SEQ ID NO.1；图1)及其截短片段XvPsap2(SEQ ID NO.2；图2)和XvPsap3(SEQ ID NO.3；图3)的基因表达性能通过使用表达盒，土壤杆菌(Agrobacterium)介导的烟草(Nicotiana tabacum)转化和黑墨西哥甜玉米(BMS)细胞的转化来确定，所述表达盒包含单独驱动luc报告基因表达的截短启动子，所述luc报告基因后面是nos终止子。另外，将包含驱动luc报告基因表达的XvPsap1及随后的nos终止子的表达盒转化到玉米中。

为了确定这些启动子是否是胁迫诱导型，利用定量实时PCR(qPCR)对转基因细胞和植物进行响应盐和脱水胁迫的luc转录分析。转基因BMS细胞经历200mM NaCl盐胁迫。转基因烟草和玉米暴露于脱水处理。

BMS细胞的qPCR分析说明luc mRNA对于XvPsap1(5倍；P＜0.05)和XvPsap2(1.9倍；P＜0.05)，在盐胁迫24小时内上调，而在使用XvPsap3(1.9倍；P＜0.05)时，上调作用发生在48小时后(图10A)。对脱水烟草观察到类似的趋势，其中在开始脱水后72小时记录到最佳表达水平。XvPsap1活性在转基因烟草中很显著(7倍；P＜0.05)，而XvPsap2和XvPsap3分别表现出2.2和1.6倍的增加(图10B)。在脱水的玉米中，XvPsap1在第三天也表现出显著的活性峰，其具有4倍的luc表达(图10C)。总之，这些结果提示XvPsap1启动子最具活性且应该参与针对干旱的早期响应，因为其在转基因植物经历缺水后不久达到峰值。

这些发现由Garwe等(2003，2006)验证，他们分离XvSap1基因，其XvPsap1启动子在维柯萨中天然调节。他们发现XvSap1基因在模式植物中赋予针对脱水、高温和盐度的耐受性。更近期，Iyer等(2007)报告了关于脱水的维柯萨中XvSap1基因表达的类似趋势。他们注意到XvSap1mRNA在60％相对水含量时上调。随后，表达减少但在15％RWC时再次增加。该观察致使他们断定XvSap1可以参与针对脱水的保护响应的最初阶段和晚期阶段。

预期该胁迫耐受性玉米品系的基因表达可以在不需要施用化学制剂的条件下，由环境胁迫诸如干旱诱导，从而使得胁迫耐受性玉米维持其细胞膜完整性并幸免于干旱胁迫过程中经历的活性氧类别(ROS)的有害作用。

参考文献

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序列表

<110>开普敦大学

     玉米信托基金会

 

<120>植物启动子

 

<130>PA143860/PCT

 

<150>ZA 2007/09551

<151>2007-10-06

 

<160>9

 

<170>PatentIn version 3.3

 

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<211>2083

<212>DNA

<213>维柯萨(Xerophyta viscose)

 

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<213>维柯萨

 

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<212>DNA

<213>维柯萨

 

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aaatcagtca aagttttttc tttttctatt gatactgcaa tctcaaacct taggtcagtt  720

taccttgaat aaaaaatcaa gtagtcttag ttgaactact ctaaaaaaca tgatctgtta  780

gtagaactta ctatctatcc cctgaatggt tagtcggggg gtataaaact ttgaaagttg  840

cgcggggagt tgtaaaaaga gaaagttgcg cgggaaggta gtgaaaagag aaaagtagcg  900

gggagggagt tgaaaaacca gcctgccttt atggagatat atataaagta gtaaagctgg  960

gggttttgtg gataaatctt cataaaaaac cttttttaaa attgtacttt caaaatctag  1020

aactactcta gatgttaaaa atacaacttt caaaaaggtt ttttatgaaa atctatctat  1080

aaaaccttga ggcttcacaa ttacccagct gggcgattga acgcctttat ctttttgtag  1140

ttctagatgt tgaaaataca actttcaaaa aagtttttta tgaagatcta tctataaact  1200

aaacattaaa attacaactt tcaaaaaagt tttttatgaa gatctatcta tgaaaccccg  1260

aggcctcaca attgttcata tccttataaa aacagacgtt ttttaattaa aaagcctgtt  1320

ctccggctag tcattcctta gaccagcctc cccgacaagc cgttatattc aagtctatcc  1380

tcttgactag cctataaaaa ggaattaaat taaggttaaa ctatgataat tcttactttt  1440

gtaggattat taacactggt gaaatatcgt ggtgtaaata aaattaaatt tagaaaattt  1500

agaatcttaa cctgtcccac gaatactatt gtttgaacaa ggatagttgt tgacgtacaa  1560

tctgtcgcgg cttaaatgtc aggatgaccc gcggtgaaaa gttgggtgta gtagttctac  1620

ttgtggtgca atagaagtag gcgaggttgg tgtaccaggt cgcggtgacc ggttctggcg  1680

gtcggtcggt ccggtaggtt gcaccacgta aaagattgtg aggtgcaagc gacatgccgt  1740

aataaagagg tcggtctttc tggctctgtc gctgcgacaa cccgcccggg cgccggacga  1800

gagagacgaa ggggtactct aagtgcccgt agcgaggagc gagcacggat gcgggcgcgg  1860

gcgcgggctg gcgcggccag gtgcactgca ccgcgtcgtt agcaagaatg atccgcgaac  1920

gtgcacagca agcgtacgct tcgcaggtgt gacggttgct ggaggaattt ataggaacac  1980

tataagcgga atgctagagt gtgaagcgtg cgtttccggt cagcgtctaa acccaactta  2040

aacgacgcaa aaccgtctaa aactcgctct ctataatccc ttc                    2083

 

<210>5

<211>1577

<212>DNA

<213>维柯萨

 

<400>5

gcagtgaaag gtaccccgtt taatgttgaa tccgaaatag aatcaaccat actagaatta  60

aaataatatg aaatttgttg aatagcgatt attaaaacaa aactaaatac gcggttaaca  120

tttatattta gcctatttaa acttgtaatt atgaaaatca gtcaaagttt tttctttttc  180

tattgatact gcaatctcaa accttaggtc agtttacctt gaataaaaaa tcaagtagtc  240

ttagttgaac tactctaaaa aacatgatct gttagtagaa cttactatct atcccctgaa  300

tggttagtcg gggggtataa aactttgaaa gttgcgcggg gagttgtaaa aagagaaagt  360

tgcgcgggaa ggtagtgaaa agagaaaagt agcggggagg gagttgaaaa accagcctgc  420

ctttatggag atatatataa agtagtaaag ctgggggttt tgtggataaa tcttcataaa  480

aaaccttttt taaaattgta ctttcaaaat ctagaactac tctagatgtt aaaaatacaa  540

ctttcaaaaa ggttttttat gaaaatctat ctataaaacc ttgaggcttc acaattaccc  600

agctgggcga ttgaacgcct ttatcttttt gtagttctag atgttgaaaa tacaactttc  660

aaaaaagttt tttatgaaga tctatctata aactaaacat taaaattaca actttcaaaa  720

aagtttttta tgaagatcta tctatgaaac cccgaggcct cacaattgtt catatcctta  780

taaaaacaga cgttttttaa ttaaaaagcc tgttctccgg ctagtcattc cttagaccag  840

cctccccgac aagccgttat attcaagtct atcctcttga ctagcctata aaaaggaatt  900

aaattaaggt taaactatga taattcttac ttttgtagga ttattaacac tggtgaaata  960

tcgtggtgta aataaaatta aatttagaaa atttagaatc ttaacctgtc ccacgaatac  1020

tattgtttga acaaggatag ttgttgacgt acaatctgtc gcggcttaaa tgtcaggatg  1080

acccgcggtg aaaagttggg tgtagtagtt ctacttgtgg tgcaatagaa gtaggcgagg  1140

ttggtgtacc aggtcgcggt gaccggttct ggcggtcggt cggtccggta ggttgcacca  1200

cgtaaaagat tgtgaggtgc aagcgacatg ccgtaataaa gaggtcggtc tttctggctc  1260

tgtcgctgcg acaacccgcc cgggcgccgg acgagagaga cgaaggggta ctctaagtgc  1320

ccgtagcgag gagcgagcac ggatgcgggc gcgggcgcgg gctggcgcgg ccaggtgcac  1380

tgcaccgcgt cgttagcaag aatgatccgc gaacgtgcac agcaagcgta cgcttcgcag  1440

gtgtgacggt tgctggagga atttatagga acactataag cggaatgcta gagtgtgaag  1500

cgtgcgtttc cggtcagcgt ctaaacccaa cttaaacgac gcaaaaccgt ctaaaactcg  1560

ctctctataa tcccttc                                                 1577

 

<210>6

<211>1127

<212>DNA

<213>维柯萨

 

<400>6

ctgggggttt tgtggataaa tcttcataaa aaaccttttt taaaattgta ctttcaaaat  60

ctagaactac tctagatgtt aaaaatacaa ctttcaaaaa ggttttttat gaaaatctat  120

ctataaaacc ttgaggcttc acaattaccc agctgggcga ttgaacgcct ttatcttttt  180

gtagttctag atgttgaaaa tacaactttc aaaaaagttt tttatgaaga tctatctata  240

aactaaacat taaaattaca actttcaaaa aagtttttta tgaagatcta tctatgaaac  300

cccgaggcct cacaattgtt catatcctta taaaaacaga cgttttttaa ttaaaaagcc  360

tgttctccgg ctagtcattc cttagaccag cctccccgac aagccgttat attcaagtct  420

atcctcttga ctagcctata aaaaggaatt aaattaaggt taaactatga taattcttac  480

ttttgtagga ttattaacac tggtgaaata tcgtggtgta aataaaatta aatttagaaa  540

atttagaatc ttaacctgtc ccacgaatac tattgtttga acaaggatag ttgttgacgt  600

acaatctgtc gcggcttaaa tgtcaggatg acccgcggtg aaaagttggg tgtagtagtt    660

ctacttgtgg tgcaatagaa gtaggcgagg ttggtgtacc aggtcgcggt gaccggttct    720

ggcggtcggt cggtccggta ggttgcacca cgtaaaagat tgtgaggtgc aagcgacatg    780

ccgtaataaa gaggtcggtc tttctggctc tgtcgctgcg acaacccgcc cgggcgccgg    840

acgagagaga cgaaggggta ctctaagtgc ccgtagcgag gagcgagcac ggatgcgggc    900

gcgggcgcgg gctggcgcgg ccaggtgcac tgcaccgcgt cgttagcaag aatgatccgc    960

gaacgtgcac agcaagcgta cgcttcgcag gtgtgacggt tgctggagga atttatagga    1020

acactataag cggaatgcta gagtgtgaag cgtgcgtttc cggtcagcgt ctaaacccaa    1080

cttaaacgac gcaaaaccgt ctaaaactcg ctctctataa tcccttc                  1127

 

<210>7

<211>2083

<212>DNA

<213>维柯萨

 

<400>7

cttccctaat atctctcgct caaaatctgc caaaacgcag caaattcaac ccaaatctgc    60

gactggcctt tgcgtgcgaa gtgtgagatc gtaaggcgaa tatcacaagg atatttaagg    120

aggtcgttgg cagtgtggac gcttcgcatg cgaacgacac gtgcaagcgc ctagtaagaa    180

cgattgctgc gccacgtcac gtggaccggc gcggtcgggc gcgggcgcgg gcgtaggcac    240

gagcgaggag cgatgcccgt gaatctcatg gggaagcaga gagagcaggc cgcgggcccg    300

cccaacagcg tcgctgtctc ggtctttctg gctggagaaa taatgccgta cagcgaacgt    360

ggagtgttag aaaatgcacc acgttggatg gcctggctgg ctggcggtct tggccagtgg    420

cgctggacca tgtggttgga gcggatgaag ataacgtggt gttcatcttg atgatgtggg    480

ttgaaaagtg gcgcccagta ggactgtaaa ttcggcgctg tctaacatgc agttgttgat    540

aggaacaagt ttgttatcat aagcaccctg tccaattcta agatttaaaa gatttaaatt    600

aaaataaatg tggtgctata aagtggtcac aattattagg atgttttcat tcttaatagt    660

atcaaattgg aattaaatta aggaaaaata tccgatcagt tctcctatct gaacttatat    720

tgccgaacag cccctccgac cagattcctt actgatcggc ctcttgtccg aaaaattaat    780

tttttgcaga caaaaatatt cctatacttg ttaacactcc ggagccccaa agtatctatc    840

tagaagtatt ttttgaaaaa actttcaaca ttaaaattac aaatcaaata tctatctaga  900

agtatttttt gaaaaaactt tcaacataaa agttgtagat cttgatgttt ttctatttcc  960

gcaagttagc gggtcgaccc attaacactt cggagttcca aaatatctat ctaaaagtat  1020

tttttggaaa aactttcaac ataaaaattg tagatctcat caagatctaa aactttcatg  1080

ttaaaatttt ttccaaaaaa tacttctaaa taggtgtttt gggggtcgaa atgatgaaat  1140

atatatagag gtatttccgt ccgaccaaaa agttgaggga ggggcgatga aaagagaaaa  1200

gtgatggaag ggcgcgttga aagagaaaaa tgttgagggg cgcgttgaaa gtttcaaaat  1260

atggggggct gattggtaag tcccctatct atcattcaag atgattgtct agtacaaaaa  1320

atctcatcaa gttgattctg atgaactaaa aaataagttc catttgactg gattccaaac  1380

tctaacgtca tagttatctt tttctttttt gaaactgact aaaagtatta atgttcaaat  1440

ttatccgatt tatatttaca attggcgcat aaatcaaaac aaaattatta gcgataagtt  1500

gtttaaagta taataaaatt aagatcatac caactaagat aaagcctaag ttgtaatttg  1560

ccccatggaa agtgacggaa cacatttgtg ttcttttggg gggaaaaaaa atagaatata  1620

cttaaaatag ctaatgaatg tataatcata ttgtatccac attcaacttt tttttagaaa  1680

aaaaatacat tagctcttat tctagtctta tttactcatt tcagaaaaga acactcggga  1740

gaaaaatcaa agaatgcacg tgaactttct tactttcggt atacacattg gtatacgttg  1800

gatatcttgg ggtaattctt tggatcatct taatattttg gagaaagtct tgagctccaa  1860

ccttttgttt cagatcgaat gctattgatc ctgtcgtgtt tcatgctttt tttttctggg  1920

agctgtacct gcacatggat gccatgaagt cctctttttt ttaaataagt aaaactctga  1980

ccaagttttt tagtcaggtc taggataaaa tgagtgaaag accgaattag ggtgatgatc  2040

catgaatttc ttacgtctct atattgccag ctacccagac agt                    2083

 

<210>8

<211>1577

<212>DNA

<213>维柯萨

 

<400>8

cttccctaat atctctcgct caaaatctgc caaaacgcag caaattcaac ccaaatctgc    60

gactggcctt tgcgtgcgaa gtgtgagatc gtaaggcgaa tatcacaagg atatttaagg    120

aggtcgttgg cagtgtggac gcttcgcatg cgaacgacac gtgcaagcgc ctagtaagaa  180

cgattgctgc gccacgtcac gtggaccggc gcggtcgggc gcgggcgcgg gcgtaggcac  240

gagcgaggag cgatgcccgt gaatctcatg gggaagcaga gagagcaggc cgcgggcccg  300

cccaacagcg tcgctgtctc ggtctttctg gctggagaaa taatgccgta cagcgaacgt  360

ggagtgttag aaaatgcacc acgttggatg gcctggctgg ctggcggtct tggccagtgg  420

cgctggacca tgtggttgga gcggatgaag ataacgtggt gttcatcttg atgatgtggg  480

ttgaaaagtg gcgcccagta ggactgtaaa ttcggcgctg tctaacatgc agttgttgat  540

aggaacaagt ttgttatcat aagcaccctg tccaattcta agatttaaaa gatttaaatt  600

aaaataaatg tggtgctata aagtggtcac aattattagg atgttttcat tcttaatagt  660

atcaaattgg aattaaatta aggaaaaata tccgatcagt tctcctatct gaacttatat  720

tgccgaacag cccctccgac cagattcctt actgatcggc ctcttgtccg aaaaattaat  780

tttttgcaga caaaaatatt cctatacttg ttaacactcc ggagccccaa agtatctatc  840

tagaagtatt ttttgaaaaa actttcaaca ttaaaattac aaatcaaata tctatctaga  900

agtatttttt gaaaaaactt tcaacataaa agttgtagat cttgatgttt ttctatttcc  960

gcaagttagc gggtcgaccc attaacactt cggagttcca aaatatctat ctaaaagtat  1020

tttttggaaa aactttcaac ataaaaattg tagatctcat caagatctaa aactttcatg  1080

ttaaaatttt ttccaaaaaa tacttctaaa taggtgtttt gggggtcgaa atgatgaaat  1140

atatatagag gtatttccgt ccgaccaaaa agttgaggga ggggcgatga aaagagaaaa  1200

gtgatggaag ggcgcgttga aagagaaaaa tgttgagggg cgcgttgaaa gtttcaaaat  1260

atggggggct gattggtaag tcccctatct atcattcaag atgattgtct agtacaaaaa  1320

atctcatcaa gttgattctg atgaactaaa aaataagttc catttgactg gattccaaac  1380

tctaacgtca tagttatctt tttctttttt gaaactgact aaaagtatta atgttcaaat  1440

ttatccgatt tatatttaca attggcgcat aaatcaaaac aaaattatta gcgataagtt  1500

gtttaaagta taataaaatt aagatcatac caactaagat aaagcctaag ttgtaatttg  1560

ccccatggaa agtgacg                                                 1577

 

<210>9

<211>1127

<212>DNA

<213>维柯萨

<400>9

cttccctaat atctctcgct caaaatctgc caaaacgcag caaattcaac ccaaatctgc    60

gactggcctt tgcgtgcgaa gtgtgagatc gtaaggcgaa tatcacaagg atatttaagg    120

aggtcgttgg cagtgtggac gcttcgcatg cgaacgacac gtgcaagcgc ctagtaagaa    180

cgattgctgc gccacgtcac gtggaccggc gcggtcgggc gcgggcgcgg gcgtaggcac    240

gagcgaggag cgatgcccgt gaatctcatg gggaagcaga gagagcaggc cgcgggcccg    300

cccaacagcg tcgctgtctc ggtctttctg gctggagaaa taatgccgta cagcgaacgt    360

ggagtgttag aaaatgcacc acgttggatg gcctggctgg ctggcggtct tggccagtgg    420

cgctggacca tgtggttgga gcggatgaag ataacgtggt gttcatcttg atgatgtggg    480

ttgaaaagtg gcgcccagta ggactgtaaa ttcggcgctg tctaacatgc agttgttgat    540

aggaacaagt ttgttatcat aagcaccctg tccaattcta agatttaaaa gatttaaatt    600

aaaataaatg tggtgctata aagtggtcac aattattagg atgttttcat tcttaatagt    660

atcaaattgg aattaaatta aggaaaaata tccgatcagt tctcctatct gaacttatat    720

tgccgaacag cccctccgac cagattcctt actgatcggc ctcttgtccg aaaaattaat    780

tttttgcaga caaaaatatt cctatacttg ttaacactcc ggagccccaa agtatctatc    840

tagaagtatt ttttgaaaaa actttcaaca ttaaaattac aaatcaaata tctatctaga    900

agtatttttt gaaaaaactt tcaacataaa agttgtagat cttgatgttt ttctatttcc    960

gcaagttagc gggtcgaccc attaacactt cggagttcca aaatatctat ctaaaagtat    1020

tttttggaaa aactttcaac ataaaaattg tagatctcat caagatctaa aactttcatg    1080

ttaaaatttt ttccaaaaaa tacttctaaa taggtgtttt gggggtc                  1127

Claims (28)

1.分离的核酸，其包括与以下各项至少80％相同的核苷酸序列：

(a)SEQ ID NOs：1-3中的任一种；

(b)SEQ ID NOs：1-3中的任一种的片段，所述片段起胁迫诱导型启动子的作用；

(c)(a)中的任一种的互补序列(SEQ ID NOs：4-6)；

(d)(a)中的任一种的反向互补序列(SEQ ID NOs：7-9)；

(e)在标准条件下与(a)中的任一种的核苷酸序列杂交并起胁迫诱导型启动子的作用的序列；

(f)在标准条件下与(a)中的任一种的互补序列(SEQ ID NOs：4-6)杂交并起胁迫诱导型启动子的作用的序列；或

(g)SEQ ID NOs：1-3中的任一种的简并或等位基因变体，所述变体起胁迫诱导型启动子的作用。

2.按照权利要求1的核酸，其与序列(a)-(g)中的任一种至少90％相同。

3.按照权利要求1的核酸，其与序列(a)-(g)中的任一种至少95％相同。

4.按照权利要求1的核酸，其包括SEQ ID NO：1的核苷酸序列。

5.按照权利要求1的核酸，其包括SEQ ID NO：2的核苷酸序列。

6.按照权利要求1的核酸，其包括SEQ ID NO：3的核苷酸序列。

7.按照权利要求1-6中任一项的核酸，其是胁迫诱导型植物启动子。

8.按照权利要求7的核酸，其中所述胁迫是非生物胁迫。

9.按照权利要求8的核酸，其中所述非生物胁迫归因于寒冷条件。

10.按照权利要求8的核酸，其中所述非生物胁迫归因于渗透胁迫条件。

11.按照权利要求10的核酸，其中所述渗透胁迫选自由热、干旱、干燥、冷冻和高盐组成的组。

12.按照权利要求1-11中任一项的核酸，其源自维柯萨(Xerophytaviscosa)。

13.按照权利要求1-12中任一项的核酸，其中杂交发生在严格条件下，所述严格条件包括在约60-约65℃，在0.1SSC中洗涤。

14.包含按照权利要求1-13中任一项的第一核酸的载体。

15.按照权利要求14的载体，其包括与所述第一核酸可操作连接的第二核酸，其中所述第一核酸能够起始连接的核酸在用所述载体转化的植物中的转录。

16.按照权利要求15的载体，其中所述第二核酸是能够增强所述植物胁迫耐受性的基因。

17.按照权利要求16的载体，其中所述基因选自由XvSapl、XvPrx2或XvPerl组成的组。

18.按照权利要求14-17中任一项的载体，其是根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的T-来源的质粒构建体。

19.宿主细胞，其中已转化有按照权利要求14-18中任一项的载体。

20.按照权利要求19的宿主细胞，其是植物细胞。

21.转基因植物或植物部分，其由权利要求14-18中任一项的载体稳定转化。

22.按照权利要求21的转基因植物或植物部分，其中所述植物部分选自由以下各项组成的组：细胞、原生质体、细胞组织培养物、胼胝体、细胞团、胚芽、花粉、胚珠、种子、花、籽粒、耳穗、穗轴、叶、外壳、茎、根、根尖、花药和穗丝。

23.按照权利要求21或22的转基因植物或植物部分，其是单子叶植物或双子叶植物或植物部分。

24.按照权利要求21-23中任一项的转基因植物或植物部分，其选自由下列各项组成的组：玉米、大麦、燕麦、黑麦、烟草、高粱、小麦、木薯、大米、甘薯、大豆、苜蓿、烟草、向日葵、棉花、和油菜。

25.权利要求21-24中任一项的转基因植物的种子。

26.用于增强植物胁迫耐受性的方法，其通过将包含权利要求1-13中任一项的核酸的启动子引入到所述植物中来完成。

27.按照权利要求26的方法，其中还向所述植物中引入在所述启动子的控制下的基因。

28.按照权利要求27的方法，其中所述基因增强所述植物的胁迫耐受性。

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