CN102095816A - 一种咖啡酊中生物碱的测定方法 - Google Patents
一种咖啡酊中生物碱的测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102095816A CN102095816A CN 201110002936 CN201110002936A CN102095816A CN 102095816 A CN102095816 A CN 102095816A CN 201110002936 CN201110002936 CN 201110002936 CN 201110002936 A CN201110002936 A CN 201110002936A CN 102095816 A CN102095816 A CN 102095816A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- water
- standard
- minutes
- mobile phase
- sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
一种咖啡酊中生物碱的测定方法，其特征在于：以水为样品稀释溶剂，甲醇与0.1%甲酸水溶液的混合液为流动相采用高效液相色谱法同时对咖啡酊中的咖啡因、胡芦巴碱和尼古丁酸进行检测，其中检测器是二极管阵列检测器。以水为样品稀释溶剂以及以0.1%甲酸水为流动相是本方法的关键。以水为样品稀释溶剂，不仅能够减小样品中色素进入色谱柱中的量，有效保护色谱柱，而且样品前处理溶剂环保无毒，并且对生物碱的色谱峰形没有影响。与纯水为流动相相比，0.1%甲酸水为流动相能有效改善尼古丁酸的色谱峰形，有利于尼古丁酸的准确定量。本方法前处理简单，重复性和回收率好，适用于大批量样品的分析。
Description
技术领域
本发明涉及生物碱的检测方法，具体是一种咖啡酊中生物碱的测定方法，可同时检测咖啡酊中咖啡因、胡芦巴碱和尼古丁酸3种生物碱。
背景技术
咖啡酊是用一定浓度的乙醇自经烘烤处理后的咖啡种子浸提而制得。产品会有多种生物碱和其它杂环化合物，还含有糠醇、硫衍生物和少量挥发酸。具有典型的芳香和苦的香味等感官特性，添加到卷烟中能增浓香气，增加烘烤香，味变苦。
咖啡豆中的主要植物碱为咖啡因，在生咖啡豆中的含量随品种的不同而变化，其具有明显的苦味，对人体具有显著的生理作用。胡芦巴碱和烟碱酸是咖啡豆中另外两种生物碱。胡芦巴碱具有低程度的生理作用，在焙炒过程中会分解生成多种化合物，包括烟碱酸。烟碱酸在生咖啡豆中的含量很少，在焙烧过程中来自胡芦巴碱的分解，其本身也会继续分解。
目前，咖啡酊中这3种生物碱的同时测定尚未见报道。
发明内容
本发明的目的正是基于上述状况而提供的一种咖啡酊中三种生物碱的测定方法，填补了咖啡酊中同时分析检测咖啡因、胡芦巴碱和尼古丁酸3种生物碱的空白。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：咖啡酊中生物碱的测定方法如下：以水为样品稀释溶剂，甲醇与0.1%甲酸水溶液的混合液为流动相采用高效液相色谱法同时对咖啡酊中的咖啡因、胡芦巴碱和尼古丁酸进行检测，其中检测器是二极管阵列检测器。
具体测定步骤如下：
（1）标准工作曲线制定：在4.25×10-4-0.17mg/mL范围内用甲醇配制胡芦巴碱标准品的至少五个浓度的标准溶液，在3.33×10-4-0.26mg/mL范围内用甲醇配制尼古丁酸标准品的至少五个浓度的标准溶液，在2.75×10-4-0.22mg/mL范围内用甲醇配制咖啡因标准品的至少五个浓度的标准溶液，再利用高效液相色谱仪分别对上述所有浓度的标准溶液中的三种标准品的含量进行检测，并根据三种标准品的峰面积和相应的浓度分别绘制三种标准品的标准工作曲线并计算得到其回归方程；
（2）样品制备：称取0.100g咖啡酊剂于10mL容量瓶中用水稀释定容，超声5min，经0.45μm水相滤膜过滤后使用，再利用高效液相色谱仪采用与步骤（1）相同的条件分别对样品溶液进行检测，并根据得到的峰面积分别带入标准工作曲线的回归方程中，计算出样品中的咖啡因、胡芦巴碱和尼古丁酸含量。
高效液相色谱分析条件如下：
色谱柱： waters C18分析柱（250 mm × 4.6 mm, 5 μm）；
流动相：流动相A为0.1%甲酸水，流动相B为甲醇；
梯度洗脱条件：2%B开始，5min后10%B,12min后50%B,15min后100%B,保持5min,21min以2%B平衡柱子4min。分析时间共25min；
流速1mL/min；柱温30℃；检测波长：265nm。
在上述条件中，以水为样品稀释溶剂以及以0.1%甲酸水为流动相是本方法的关键。以水为样品稀释溶剂，不仅能够减小样品中色素进入色谱柱中的量，有效保护色谱柱，而且样品前处理溶剂环保无毒，并且对生物碱的色谱峰形没有影响。与纯水为流动相相比，0.1%甲酸水为流动相能有效改善尼古丁酸的色谱峰形，有利于尼古丁酸的准确定量。
本方法前处理简单，咖啡酊剂直接用水稀释定容，超声5min，经0.45μm水相滤膜过滤后使用，无需进一步进行样品净化步骤。利用本发明方法对咖啡酊中三种生物碱进行测定，重复性和回收率好，适用于大批量样品的分析。
附图说明
图1为咖啡因、胡芦巴碱和尼古丁酸标样色谱图。
图2为咖啡酊样品色谱图。
图中：1为胡芦巴碱，2为尼古丁酸，3为咖啡因。
具体实施方式：
下面通过实施实例对本发明进行进一步说明：
色谱条件：Agilent 1200液相色谱，配置二极管阵列检测器，检测波长265nm。色谱柱：waters C18分析柱（250 mm × 4.6 mm, 5 μm）。流动相：0.1%甲酸水（A）,甲醇(B)；梯度洗脱，2%B开始，5min后10%B,12min后50%B,15min后100%B,保持5min,21min以2%B平衡柱子4min。流速1mL/min。分析时间共25min。柱温30℃。
1）标准工作曲线的制定：
胡芦巴碱、尼古丁酸和咖啡因用甲醇配制标准曲线，母液的浓度分别为1.7mg/mL、13.3mg/mL和11.0mg/mL。胡芦巴碱的标准曲线范围4.25×10-4-0.17mg/mL, 标准曲线方程为y=20234x+0.0806，R2 =1；尼古丁酸的标准曲线范围3.33×10-4-0.26mg/mL，标准曲线方程为y=29622x-13.269, R2 =1；咖啡因的标准曲线范围2.75×10-4-0.22mg/mL，标准曲线方程为y=32505x+5.484,R2 =1；y为色谱峰面积，x为生物碱浓（mg/mL）。每个校正曲线含有7个校正点。
2）样品检测：
称取0.100g咖啡酊剂于10mL容量瓶中用水稀释定容，超声5min。 经0.45 μm水相滤膜过滤后使用。
标准样品色谱图如图1所示，样品谱图如图2所示：
按照实验部分所述方法平行5次测定咖啡酊样品中咖啡因、尼古丁酸和胡芦巴碱含量，相对标准偏差（RSD）均见表1。
在咖啡酊的实际样品中加入三个水平的生物碱标样，按照实验部分所述方法测定三种生物碱含量，如表2所示，回收率均在93%-108%之间。
该方法前处理简单，重复性好，回收率高，能满足大批量咖啡酊样品中胡芦巴碱、尼古丁酸和咖啡因三种生物碱的同时检测。
Claims (3)
1.一种咖啡酊中生物碱的测定方法，其特征在于：以水为样品稀释溶剂，甲醇与0.1%甲酸水溶液的混合液为流动相采用高效液相色谱法同时对咖啡酊中的咖啡因、胡芦巴碱和尼古丁酸进行检测，其中检测器是二极管阵列检测器。
2.根据权利要求1所述的咖啡酊中生物碱的测定方法，其特征在于：具体测定步骤如下：
（1）标准工作曲线制定：在4.25×10-4-0.17mg/mL范围内用甲醇配制胡芦巴碱标准品的至少五个浓度的标准溶液，在3.33×10-4-0.26mg/mL范围内用甲醇配制尼古丁酸标准品的至少五个浓度的标准溶液，在2.75×10-4-0.22mg/mL范围内用甲醇配制咖啡因标准品的至少五个浓度的标准溶液，再利用高效液相色谱仪分别对上述所有浓度的标准溶液中的三种标准品的含量进行检测，并根据三种标准品的峰面积和相应的浓度分别绘制三种标准品的标准工作曲线并计算得到其回归方程；
（2）样品制备：称取0.100g咖啡酊剂于10mL容量瓶中用水稀释定容，超声5min，经0.45μm水相滤膜过滤后使用，再利用高效液相色谱仪采用与步骤（1）相同的条件分别对样品溶液进行检测，并根据得到的峰面积分别带入标准工作曲线的回归方程中，计算出样品中的咖啡因、胡芦巴碱和尼古丁酸含量。
3.根据权利要求1所述的咖啡酊中生物碱的测定方法，其特征在于：高效液相色谱分析条件如下：
色谱柱： waters C18分析柱（250 mm × 4.6 mm, 5 μm）；
流动相：流动相A为0.1%甲酸水，流动相B为甲醇；
梯度洗脱条件：2%B开始，5min后10%B,12min后50%B,15min后100%B,保持5min,21min以2%B平衡柱子4min；
分析时间共25min；
流速1mL/min；柱温30℃；检测波长：265nm。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201110002936 CN102095816B (zh) | 2011-01-08 | 2011-01-08 | 一种咖啡酊中生物碱的测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201110002936 CN102095816B (zh) | 2011-01-08 | 2011-01-08 | 一种咖啡酊中生物碱的测定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102095816A true CN102095816A (zh) | 2011-06-15 |
| CN102095816B CN102095816B (zh) | 2013-02-13 |
Family
ID=44128996
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 201110002936 Active CN102095816B (zh) | 2011-01-08 | 2011-01-08 | 一种咖啡酊中生物碱的测定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102095816B (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102353739A (zh) * | 2011-09-01 | 2012-02-15 | 湖北中烟工业有限责任公司 | 一种烟草中烟碱的快速检测方法 |
| CN102539612A (zh) * | 2012-01-04 | 2012-07-04 | 北京知蜂堂蜂产品有限公司 | 一种瓜拉那果粉中天然咖啡因的高效液相色谱(hplc)定量测定方法 |
| CN103323419A (zh) * | 2013-06-15 | 2013-09-25 | 广东医学院 | 一种烟草及烟草制品中尼古丁生物碱的检测方法 |
| CN111999398A (zh) * | 2020-07-09 | 2020-11-27 | 武汉迈特维尔生物科技有限公司 | 咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法 |
-
2011
- 2011-01-08 CN CN 201110002936 patent/CN102095816B/zh active Active
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 《Food Chemistry》 20001231 S. Casal，et al HPLC/diode-array applied to the thermal degradation of trigonelline, nicotinic acid and caffeine in coffee 第482页第2.2节－第2.4节 1－3 第68卷, * |
| 《饮料工业》 20031231 蔡瑞玲等 焙炒条件对咖啡风味影响的研究 参见的33页左栏第1.2节第2－4段 3 第6卷, 第6期 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102353739A (zh) * | 2011-09-01 | 2012-02-15 | 湖北中烟工业有限责任公司 | 一种烟草中烟碱的快速检测方法 |
| CN102353739B (zh) * | 2011-09-01 | 2013-05-15 | 湖北中烟工业有限责任公司 | 一种烟草中烟碱的快速检测方法 |
| CN102539612A (zh) * | 2012-01-04 | 2012-07-04 | 北京知蜂堂蜂产品有限公司 | 一种瓜拉那果粉中天然咖啡因的高效液相色谱(hplc)定量测定方法 |
| CN103323419A (zh) * | 2013-06-15 | 2013-09-25 | 广东医学院 | 一种烟草及烟草制品中尼古丁生物碱的检测方法 |
| CN111999398A (zh) * | 2020-07-09 | 2020-11-27 | 武汉迈特维尔生物科技有限公司 | 咖啡因及其代谢物的液质联用分析方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102095816B (zh) | 2013-02-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105067733B (zh) | 一种超高效合相色谱法测定食品中维生素e含量的方法 | |
| Ruan et al. | Extraction of total alkaloids, peimine and peiminine from the flower of Fritillaria thunbergii Miq using supercritical carbon dioxide | |
| CN102004132A (zh) | 一种烟草及烟草制品中生物碱的测定方法 | |
| CN102095816B (zh) | 一种咖啡酊中生物碱的测定方法 | |
| CN108445131B (zh) | 一种食用槟榔中主要成分的检测方法 | |
| CN104198621A (zh) | 一种纸和纸板中多类防腐剂特定迁移量的同时测定方法 | |
| CN104330482A (zh) | 一种利用hplc同时测定茶叶中17种特征成分的方法 | |
| CN104345111A (zh) | 一种中药组合物制剂中多种活性成分含量的测定方法 | |
| Wang et al. | Determination of amantadine and rimantadine using a sensitive fluorescent probe | |
| CN102641407B (zh) | 瓜蒌薤白颗粒的制备方法及检测方法 | |
| CN104569194A (zh) | 一种电子烟烟气中氨含量的离子色谱测定方法 | |
| CN108693265A (zh) | 金钗石斛总生物碱的提取及纯化和含量测定方法 | |
| CN102890126B (zh) | 一种同时测定杜仲中多种活性成分含量的方法 | |
| CN103792326B (zh) | 一种评价茶末混合均匀性的方法 | |
| CN102095817A (zh) | 胡芦巴酊中胡芦巴碱的测定方法 | |
| CN103424499B (zh) | 一种苦木中苦木碱含量的检测方法 | |
| CN103940942B (zh) | 一种肠炎宁制剂的检测方法 | |
| CN104090042A (zh) | 一种测定卷烟主流烟气中黄樟素的方法 | |
| CN103163265A (zh) | 采用spe-gc/ecd测定烟草中腈菌唑残留量的方法 | |
| CN103592385B (zh) | 一种贞芪扶正制剂中芒柄花素的含量测定方法 | |
| CN111323496A (zh) | Hplc检测管萼山豆根中4种生物碱含量的方法 | |
| CN106153761B (zh) | 同时检测无籽刺梨果实中3种黄酮类成分的方法 | |
| CN104777256A (zh) | 同时测定烤烟中6种多酚含量的分析方法 | |
| CN111337592B (zh) | 一种同时测定凹叶景天中多组分含量的方法 | |
| CN101285801A (zh) | 茶叶中八氯二丙醚(s-421)残留量的测定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |