CN101861162A - 通过粘膜给予白介素治疗癌症的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供治疗对象的癌症的方法，该方法包括粘膜给予该对象有效量的白介素或其片段或衍生物。

Description

通过粘膜给予白介素治疗癌症的方法

领域

本发明涉及用于治疗癌症的方法和组合物。具体地说，本发明涉及通过粘膜递送白介素，特别是白介素-2进行治疗的方法。

背景技术

世界卫生组织估计2002年有超过1千万的人发生恶性肿瘤，有超过六百七十万的人死于癌症。据估计，到2020年癌症发病率还将增加50％，达到每年一千五百万例新病例。除了破坏性的个人和社会影响外，癌症还有公共卫生和经济影响；据估计，癌症治疗的成本每年增长10％-20％。

全球最常见的癌症包括肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、结肠直肠癌、膀胱癌和胃癌。许多癌症的患病率正上升，包括，例如黑色素瘤、卵巢癌和宫颈癌。对于这些和其它癌症中的大多数(即使不是全部)，目前几乎没有有效的治疗方法。常采用放疗和化疗，但所得结果千差万别并且有许多不利的副作用，包括许多化疗剂有神经毒性。此外，不是所有的患者对化疗剂有相同的反应(例如，约30％的卵巢癌没反应)，对初始治疗确有反应的一些患者随后对药物产生抗性，当疾病复发时没有反应。

肝癌是亚洲最主要的癌症，在中国和日本的患病率最高。肝细胞癌是最常发的恶性肝癌，估计每年全球有超过一百万新病例，600,000例死亡。其是快速致死性的疾病，几乎没有治疗方法。未经治疗的平均存活率约为3个月，5年存活率不到5％。在一些病例中，接受包括肝脏切除、移植或经皮治疗在内的外科手术可增加存活率并减缓发病，但少有患者适合这种治疗。可采用肿瘤消融和化疗，这些方法利用包括顺铂、阿霉素、长春新碱、氟尿嘧啶、异环磷酰胺和依托泊苷在内的药物，但效果有限。肝癌常与肝硬化相关，因而限制了治疗选择。

因此，急需开发不仅可用于肝癌还通用于癌症的新治疗和控制方案。

对治疗一些感染性疾病、免疫疾病和癌症类型有希望的一类药物据信是细胞因子白介素-2(IL-2)。重组形式的白介素-2，阿地白介素()，现已经FDA批准用于经注射治疗转移性黑色素瘤和转移性肾细胞癌。

然而，迄今为止，将IL-2用于癌症治疗却因其给药相关的明显副作用而严重受阻，主要是因为所需的静脉内或皮下递送方法以及实现任何治疗益处所需的相关高剂量。接受全身性IL-2治疗的患者常经历流感样症状。低血压、贫血和血小板计数降低也与静脉内给药所需的高累积剂量有关。目前采用的静脉内或皮下IL-2给药相关的最严重毒性是该分子增加毛细血管通透性的能力所致，这可导致低血压、腹水、全身浮肿和肺水肿。毛细血管渗漏综合征最终可导致严重的低血压和血流减少、心脏和肝脏异常、液体潴流、精神改变、肾脏异常和/或胃肠道异常。这些作用可以是严重的并能导致死亡。由于IL-2能刺激免疫系统，它还能恶化某些疾病，例如关节炎、糖尿病和银屑病。

鉴于IL-2明显的毒性和较为适中的临床反应率，目前仔细评估了其在癌症治疗中的后续作用。然而，与预期相反，现在本发明人出乎意料地发现粘膜递送IL-2赋予显著的治疗益处，包括能以远低于目前所用的全身性递送所需剂量实现肿瘤缩小。藉此，本发明为癌症，包括对目前可用治疗方法不敏感的侵袭性癌症的治疗提供一种经济的、低成本效益的新选择方案。

发明概述

本发明的第一方面提供治疗对象中癌症的方法，该方法包括粘膜给予该对象有效量的白介素或其片段或衍生物。

所述粘膜给药通常是口腔粘膜给药，所述给药更常见是含服或舌下。白介素通常是重组人白介素。

癌症可以选自，例如肝癌、肺癌、肾癌、皮肤癌、膀胱癌、胃癌、乳腺癌或血癌。在一个实施方式中，所述癌症选自肝癌、肺癌、肾癌或皮肤癌。

可以适合于口服递送，特别是适合于舌下或含服递送的任何形式，例如固体或液体单位剂型来给予白介素。

该方法还可包括给予一种或多种抗癌剂。这种药剂可通过与白介素相同或不同的途径给予。所述给药可以是顺次进行或相伴进行。

本发明的第二方面提供了用于治疗癌症的粘膜给予的药物组合物。所述组合物包含白介素或其片段或衍生物，任选与一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂和/或稀释剂相组合。

本发明的第三方面提供治疗对象中癌症的方法，所述方法包括粘膜给予该对象有效量的第二方面所述组合物。

本发明的第四方面提供白介素或其片段或衍生物在制备治疗癌症的药物中的应用，其中所述药物经粘膜给予。

根据本发明第一到第四任一方面的某一实施方式中，所述白介素选自：白介素2、白介素12、白介素15和白介素18，或它们的任何混合物。在一具体实施方式中，所述白介素的白介素2(IL-2)。

根据本发明第一到第四任一方面，可采用编码白介素的多核苷酸的形式给予所述白介素。所述多核苷酸可以位于遗传构建物中，与启动子操作性相连。

附图简述

现在将参考附图(仅是举例)来描述本发明的实施方式。

图1.胃肠外(INJ)或舌下(ORA)给予人IL-2后，异种移植H22肝脏肿瘤细胞的小鼠中肿瘤质量的减少(％)。描述了两项研究的结果(A和B)。

图2.胃肠外(INJ)或舌下(ORA)给予人IL-2后，异种移植肾脏肿瘤细胞的小鼠中肿瘤质量的减少(％)。描述了两项研究的结果(A和B)。

图3.胃肠外(INJ)或舌下(ORA)给予人IL-2后，异种移植B16黑色素瘤细胞的小鼠中肿瘤质量的减少(％)。描述了两项研究的结果(A和B)。

图4.胃肠外(INJ)或舌下(ORA)给予人IL-2后，异种移植肺肿瘤细胞的小鼠中肿瘤质量的减少(％)。

发明详述

除非上下文中另有要求，在本说明书和随后的权利要求书中，词语“包含”及其变型“包含的”或“含有”应理解为暗示了包括所述的元素、整数或步骤，或一组元素、整数或步骤，但不排除任何其它元素、整数或步骤，或一组元素、整数或步骤。

本文所用的冠词“一”和“一个”指一个或多个(即，至少一个)该冠词的语法对象。例如，“一个元素”表示一个元素或多个元素。

本文所用的术语“治疗有效量”在其含义内包括无毒但足以提供所需治疗作用的药剂或化合物的用量。所需的确切用量取决于例如所治疗物种、对象的年龄和总体状况、所治疗疾病的严重性、所给予的具体药剂和给药方式等因素而在对象之间有所不同。因此，不可能指定确切的“有效量”。然而，对于任何给定的病例，本领域普通技术人员只采用常规实验即可确定合适的“有效量”。

本文所用的术语“治疗”指以无论什么方式治疗疾病状态或症状，防止疾病产生或预防、阻止、延迟或逆转疾病进展或其它不良症状的任何和所有应用。因此，“治疗”不仅指设计用于治愈或除去个体症状的治疗方法，还指设计用于控制和抑制症状发生的正在施行的治疗。取决于任何给定个体的具体情况，治疗可以进行确定的时期，或者可根据正在施行的基础提供。

本文所用的术语“多肽”表示由通过肽键连接在一起的氨基酸构成的多肽。术语“多肽”和“蛋白质”在本文可互换使用，虽然出于本发明的目的，“多肽”可以构成全长蛋白质的一部分。本文所用的术语“多核苷酸”指脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸碱基或天然核苷酸的已知类似物或其混合物构成的单链或双链聚合物。

本发明依据本发明人出乎意料的发现，即在小鼠模型中，粘膜给予重组白介素(IL-2的形式)导致肿瘤负载有实质性且统计学显著的降低而没有明显的毒性。此外，如本文所举例的，这种粘膜给药是剂量依赖性的。这与现有技术中通过注射给药相反，注射需要较高剂量以达到相似的疗效，其中待给予的剂量因副作用和毒性的产生而受限。

因此，本发明为各种癌症提供低剂量的新型治疗选择，从而能消除或降低目前所用的全身性治疗通常观察到的副作用。迄今为止，用于治疗癌症的白介素治疗仅作了静脉内或皮下尝试。这种给药需要高剂量的白介素，其水平据称异常地高于例如IL-2等细胞因子天然介导细胞反应的水平。这些高剂量对患者导致显著副作用。

本发明人关于治疗有效的粘膜白介素给药的新发现为开发经济、无毒的治疗剂以替代目前使用的注射治疗剂打开了思路。

因此，本发明一方面提供治疗对象的癌症的方法，所述方法包括粘膜给予对象有效量的白介素或其片段或衍生物。

对于本发明的应用，白介素可选自，例如，IL-2、IL-12、IL-15或IL-18。在本发明的一个实施方式中，所述白介素是IL-2。

本发明方法和组合物中使用的白介素可以是天然、重组或合成的，可从合适来源通过纯化获得，或通过标准重组DNA技术产生，例如本领域技术人员熟知的那些技术，例如Sambrook等，《分子克隆：实验室手册》(MolecularCloning：a Laboratory Manual)，冷泉港实验室出版社(Cold Spring HarborLaboratory Press)(其内容通过引用纳入本文)描述的技术。本领域技术人员应该知道本发明所用白介素的精确序列可取决于许多因素而有所不同，例如待治疗的物种和/或癌症。述及“白介素”应理解为所有形式的这种分子及其功能衍生物、变体和同源物。这包括，例如所述白介素mRNA的另路剪接产生的任何同种型或这些蛋白质的功能突变体或多态性变体。本发明范围内还包括具有与全长成熟白介素相同的定性生物学活性的同源物或模拟物。此外，本发明不仅考虑了白介素多肽的应用，还考虑了编码它的多核苷酸。

白介素的“衍生物”包括天然或非天然来源的类似物、功能片段、部分或变体。非天然来源包括，例如重组或合成来源。“重组来源”表示收集所述分子的细胞来源经遗传学改变。“类似物”表示某多肽是白介素的衍生物，该衍生物包含一个或多个氨基酸的添加、缺失、取代，因而该多肽基本上保留与其所衍生的天然白介素相同的功能。可作出修饰从而增强白介素的生物学活性或表达水平，或者提高多肽的效力以实现所需结果。术语“保守性氨基酸取代”指用某氨基酸取代或替换某多肽链(蛋白质的一级序列)内具有相似特性的另一氨基酸。例如，用荷电氨基酸谷氨酸(Glu)取代相似荷电氨基酸天冬氨酸(Asp)是保守性氨基酸取代。氨基酸插入性衍生物(amino acid insertional derivative)还包括氨基和/或羧基末端融合以及序列内插入一个或多个氨基酸。插入性氨基酸序列变体是一个或多个氨基酸残基被引入蛋白质的预定位点的那些变体，但也可能是随机插入与对所得产物进行适当筛选联用。缺失性变体的特征在于从序列中除去一个或多个氨基酸。取代性氨基酸变体是序列中至少一个残基被除去而不同残基插入其位置的那些变体。

“片段”指全长白介素的某一部分的多肽。片段通常具有与全长白介素相同的定性生物学活性。片段可衍生自全长白介素多肽，或者可通过一些其它方式合成，例如化学合成。本文所用的白介素的“变体”表示序列与该白介素基本相似并表现出该白介素的至少一些功能活性的分子。变体可采取任何形式，可以是天然或非天然产生的。变体多肽通常可共有至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的序列相同性。

本文所用的“同源物”表示白介素所源自的物种不是根据本发明方法治疗的物种。例如，当确定以非治疗的物种生产某种形式的白介素，而该白介素显示与所治疗对象天然产生的白介素相似且合适的功能特征时，即是“同源物”。

根据本发明的一个实施方式，待给予的白介素是人IL-2。全长IL-2的氨基酸序列见SEQ ID NO：1(前体形式)或SEQ ID NO：2(成熟形式)，其天然形式是约15,500Da的糖基化蛋白质。

本发明的实施方式还提供以编码上述白介素多肽的多核苷酸形式给予白介素。所述多核苷酸通常编码人IL-2。例如，本发明的IL-2多核苷酸可具有如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。除了编码全长人多肽的多核苷酸外，本发明还考虑使用编码其同源物、片段和变体的多核苷酸。

在本发明的具体实施方式中，所述多核苷酸可以在载体中给予。所述载体可以是适合插入外来序列并引入真核细胞的质粒载体、病毒载体或任何其它合适的载体。载体通常是能指导编码所需多肽的多核苷酸的DNA序列转录成mRNA的表达载体。载体可以包括病毒控制和加工序列，例如启动子、增强子、核糖体结合位点、多腺苷酸化信号和转录终止序列。合适病毒表达载体的例子包括，例如E-B病毒-、牛乳头瘤病毒-、腺病毒-和腺伴随病毒-载体。载体可以是附加体。

在一个实施方式中，本发明的方法和组合物特别适合于治疗肝癌(原发性和继发性)，例如肝细胞癌。然而，本领域技术人员能理解本发明不限于此，还适用于治疗对经粘膜递送活性剂易感的任何肿瘤或癌症。例如，本发明的方法和组合物还适用于治疗各种器官中的肿瘤。例如，所述癌症可以是前列腺癌、乳腺癌、肺癌、胃癌、肠癌、膀胱癌、卵巢癌、宫颈癌、食道癌、胰腺癌、肾癌或脑癌、头颈部肿瘤、黑色素瘤或淋巴瘤。所述癌症可以是原发性或继发性癌症。所述癌症可以是肉瘤，例如脂肪肉瘤。

本发明提供粘膜递送白介素的方法和组合物。粘膜给予白介素优选口服给药，虽然也考虑了其它鼻内给药，例如吸入给药。口服给药通常包括舌下或含服给药，藉此使得组合物在舌下或在颊囊中与颊粘膜接触，从而活性剂可通过吸收而直接进入血流。口腔给药的合适形式包括固体、液体、乳液、凝胶和悬液。在一具体实施方式中，给予固体单位剂型的本发明组合物，例如片剂、胶囊、囊片或锭剂的形式。在一个实施方式中，所述给药可包括给予至鼻、面颊或舌下区域的凝胶。如果白介素在给定液体中不稳定，可通过将冻干的白介素粉末溶解在稀释剂中来克服，所述稀释剂是，例如水加蜂蜜或羧甲基纤维素、葡聚糖、麦芽糖糊精、树胶、白蛋白、糖类，例如葡萄糖、麦芽糖、甘露醇等。蜂蜜因含有有助于白介素免疫反应的许多抗原而特别有用。

总之，可根据本领域技术人员已知的方法制备合适组合物，这些组合物包含药学上可接受的稀释剂、佐剂和/或赋形剂。鉴于要和组合物中的其它成分相容，稀释剂、佐剂和赋形剂必须是“可接受的”并且对其受者无害。

药学上可接受的稀释剂的例子是脱矿物质水或蒸馏水；盐水溶液；植物油，例如花生油、红花油、橄榄油、棉籽油、玉米油、芝麻油、花生油(arachis oil)或椰油；硅油，包括聚硅氧烷，例如甲基聚硅氧烷、苯基聚硅氧烷和甲苯基聚硅氧烷；挥发性硅酮；矿物油，例如液体石蜡、软石蜡或角鲨烷；纤维素衍生物，例如甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或羟丙基甲基纤维素；低级烷醇，例如乙醇或异丙醇；低级芳烷醇；低级聚亚烷基二醇或低级亚烷基二醇，例如聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇、丙二醇、1，3-丁二醇或甘油；脂肪酸酯，例如棕榈酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯或油酸乙酯；聚乙烯吡咯烷酮；琼脂；角叉藻聚糖；黄蓍胶或阿拉伯胶，和石油凝胶。稀释剂可以是99％水配制的葡聚糖、海藻糖、羧甲基纤维素、白蛋白、丙二醇。一种或多种载体通常占组合物重量的10％-99.9％。

在本发明的具体实施方式中，白介素，例如IL-2，以固体单位剂型形式，例如适合口服，最常见是舌下给药的片剂、胶囊或锭剂给予。合适的固体组合物包括快速崩解组合物，其包含药学上可接受的水溶性或水可分散性载体材料配制的白介素。这些组合物在口腔中置于舌下或插入颊囊中后可崩解或溶解。可将组合物配制成能快速或立即释放白介素，或者配制成能延迟释放或控释。实现活性剂的延迟释放或控释的技术和方法是本领域技术人员熟知的。

本领域技术人员熟知制备这些剂型的许多方法，本发明考虑了这些方法。例如，可通过以下方法治疗合适的制剂，包括真空下冻干、超临界流体干燥、采用加热的喷雾干燥和流化床喷雾干燥。就本发明的具体实施方式而言，涉及包括微囊化的方法，藉此将活性成分包衣到颗粒、片剂或微粒上，通常要利用有机溶剂。一种特别合适的方法涉及使用流化床喷雾干燥方法，该方法有助于在室温下用水溶性包衣将包含多肽的活性剂包衣到颗粒上，例如国际专利申请公布号WO 02/058735所述(其内容通过应用全文纳入本文)。因此，可包衣微粒，例如水溶性成凝胶颗粒，或者可喷雾包衣空白片剂、锭剂或胶囊芯体。本领域还知道制备口服组合物的方法，所述组合物包含发泡剂作为透过增强剂以提高活性剂穿过面颊和舌下粘膜的渗透性(参见，例如美国专利号6,974,590，其内容通过引用全文纳入本文)。本发明考虑的其它递送方式包括利用生物粘合剂、粘膜粘合剂和脂质体。

本发明组合物还可以脂质体的形式给予。脂质体可以衍生自磷脂或其它脂质，由分散在水性介质中的单层或多层水合液晶形成。用于将组合物给予或递送至靶细胞的脂质体的具体例子是DODMA、合成胆固醇、DSPC、PEG-cDMA、DLinDMA，或任何其它能形成脂质体的无毒、生理上可接受和可代谢的脂质。脂质体形式的组合物可含有稳定剂、防腐剂和/或赋形剂。制备脂质体的方法是本领域熟知的，例如参见《细胞生物学方法》(Methodsin Cell Biology)，第XIV卷，学术出版社(Academic Press)，纽约州纽约(1976)，第33页及其后，其内容通过引用纳入本文。

本发明组合物还可以微粒的形式给予。可使用由聚交酯(PLA)、乙交酯-丙交酯共聚物(PLGA)和ε-己内酯形成的生物可降解的微粒。

本发明组合物可掺入由蔗糖乙酸异丁酸酯(sucrose acetate isobutyrate)(SAIB)和有机溶剂或有机溶剂的混合物组成的控释基质。可加入聚合物添加剂以进一步增加粘度，从而降低释放速度。

本领域技术人员不难理解制备本发明的合适口服组合物有许多合适的方法和技术，本发明不限于任一具体的方法或技术。

口服给药的固体形式可含有在人或兽用药学实践中可接受的粘合剂、甜味剂、崩解剂、稀释剂、调味剂、包衣剂、防腐剂、润滑剂和/或延时剂。合适的粘合剂包括阿拉伯胶、明胶、玉米淀粉、黄蓍胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素或聚乙二醇。合适的甜味剂包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、阿斯巴甜或糖精。合适的崩解剂包括玉米淀粉、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、瓜尔胶、黄原胶、膨润土、海藻酸或琼脂。合适的稀释剂包括乳糖、山梨醇、甘露醇、右旋糖、高岭土、纤维素、碳酸钙、硅酸钙或磷酸氢钙。合适的调味剂包括薄荷油、冬青油、樱桃油、橙油或红莓调味油。合适的包衣剂包括丙烯酸和/或甲基丙烯酸和/或它们的酯、蜡、脂肪醇、玉米朊、虫胶或亚硫酸氢钠的聚合物或共聚物。合适的润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸、油酸钠、氯化钠或滑石粉。合适的延时剂包括单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。

除上述试剂外，用于口服给予的液体形式可含有液体载体。合适的液体载体包括水，油，例如橄榄油、花生油、芝麻油、葵花子油、红花油、花生油(arachisoil)、椰油，液体石蜡，乙二醇，丙二醇，聚乙二醇，乙醇，丙醇，异丙醇，甘油，脂肪醇，甘油三酯或它们的混合物。

用于口服给药的悬液还可包含分散剂和/或悬浮剂。合适的悬浮剂包括羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸钠或乙酰醇(acetyl alcohol)。合适的分散剂包括卵磷脂、脂肪酸，如硬脂酸的聚氧乙烯酯类，聚氧乙烯山梨醇单-或二-油酸酯、-硬脂酸酯或-月桂酸酯，聚氧乙烯山梨聚糖单-或二油酸酯、-硬脂酸酯或-月桂酸酯等。

口服给药的乳液还可包含一种或多种乳化剂。合适的乳化剂包括以上示例的分散剂或天然树胶，例如瓜尔胶、阿拉伯胶或黄蓍胶。

对于任何特定的患者，本发明组合物的治疗有效剂量水平取决于各种因素，包括以下一种或多种：所治疗癌症的类型和癌症的阶段；所用活性剂的活性；所用的组合物；患者的年龄、体重、总体健康状况、性别和饮食；给药的时间；化合物的螯合率(the rate of sequestration)；治疗的持续时间；与该治疗联用或同时使用的药物；以及医学领域熟知的其它相关因素。

通过常规实验，本领域技术人员将能确定治疗适用肿瘤所需的有效、无毒剂量。这些剂量常要按照具体病例加以决定。

在本发明的具体实施方式中，白介素，例如IL-2的优选剂量是每天约1IU到约1百万IU的数量级，但也考虑该范围以上和以下的剂量。本发明的一个特征是与现有技术方法可能的相比，粘膜给予白介素能明显降低所用白介素的剂量，而仍能保持治疗益处。因此，本领域技术人员可测定本发明可用的白介素的最低剂量，只要该剂量足以实现治疗益处。考虑到诸如本文所述的那些因素，本领域技术人员也能测定最大剂量。例如，在一些情况中，最高每天几百万IU的剂量可能合适。本发明所用白介素的剂量通常为每天约1IU-约100,000IU，每天约10IU-约50,000IU，每天约100IU-约20,000IU，或每天约500IU-约10,000IU。按照本文所述的各种因素，包括待治疗癌症的性质和严重性，给予有此需要的患者的每日剂量可以是约100IU、200IU、300IU、400IU、500IU、600IU、700IU、800IU、900IU、1,000IU、2,000IU、3,000IU、4,000IU、5,000IU、6,000IU、7,000IU、8,000IU、9,000IU、10,000IU、11,000IU、12,000IU、13,000IU、14,000IU、15,000IU、18,000IU、20,000IU、25,000IU、30,000IU、35,000IU、40,000IU、45,000IU和约50,000IU的数量级。

本领域普通技术人员还应明白通过所治疗癌症的性质和程度，给药的形式、途径和部位以及所治疗特定个体的性质可以确定各剂量的最佳量和间隔。还可通过本领域技术人员已知的常规技术测定这些最佳条件。例如，可一天一次给予一个单位剂型，或一天两次给予两个单位剂型来给予对象所需的每日剂量。

本领域普通技术人员还应明白本领域技术人员可采用常规疗程测定检验来确定最佳疗程，例如在一定的天数期间，每天给予的组合物的剂量数。

本发明方法和组合物可与治疗癌症所用的其它治疗联用。例如，按照本发明进行的IL-2治疗可与化疗或放疗联合实施或可作为外科手术的辅助治疗。IL-2还可与一种或多种其它疗剂联用，包括，例如其它免疫调节剂。这种免疫调节剂可包括其它细胞因子或趋化因子，例如白介素或干扰素。本领域普通技术人员知道可与本发明组合物联用的合适药剂。

对于这种联合治疗，该联合的各组分可在同一时间给予，或以任何顺序顺次给予，或在不同时间给予，从而提供所需疗效。当分开给予时，优选以同一给药途径给予诸组分，但不是必须这样做。或者，可将诸组分一起配制在一个剂量单位中，例如组合产品。

本说明书述及的所有出版物通过引用纳入本文。本说明书中述及任何在先出版物(或源自其的信息)，或任何已知的事情并非、也不应视作承认或认可或以任何形式暗示该在先出版物(或源自其的信息)或已知事情构成本说明书所涉及领域的公知常识。

本领域技术人员应知道本发明可作出许多变化和/或改进而不脱离本发明广泛描述的构思或范围。因此，无论从哪方面来看，现有的这些实施方式应视作说明性而非限制性的。

现在将参考以下具体实施例进一步详细描述本发明，这些实施例不应理解成以任何方式限制本发明的范围。

实施例

实施例1-粘膜给予的重组人IL-2和肝癌

为测定粘膜给予IL-2在癌症治疗中的效力，利用异种移植了肝癌细胞系的小鼠。

用生理盐溶液将成熟、有毒力和有活性的H22肿瘤细胞稀释至1×10⁷细胞/毫升的浓度。在腋窝下给所有小鼠(昆明鼠科清洁类型(Kunming MurineClean type)18-22g雌性小鼠)皮下接种0.2毫升细胞。第2天将这些小鼠随机分成10组，每组10只，如下表1所示。随机分组后在同一天开始治疗。对于粘膜给药，给予每只小鼠10ul液体，每天两次，9天。重组人IL-2和重组人IFN-α2b分别购自中华人民共和国北京市的北京SL医药有限公司(Beijing SL Pharmaceutical Co.，Ltd.)和中华人民共和国天津市的天津华丽达生物技术有限公司(Tianjin Hualida Biotechnology Co.，Ltd.)。这些物质作为冻干材料保存在小瓶中，然后在使用前稀释至所需浓度。对于腹膜内给药，用磷酸缓冲盐溶液配制的牛血清白蛋白(0.5％w/w BSA/PBS)稀释rHuIFNα2b。在第10天，处死小鼠。记录体重和所提取肿瘤的重量。如下所示计算肿瘤抑制百分比。

(对照组的平均肿瘤重量-治疗组的平均肿瘤重量)/对照的平均肿瘤重量×100％

结果在表1中以肿瘤减小％显示。

表1

组	治疗	HuIFN-α2b1	HuIL21	肿瘤减小％
					1	阴性对照	-	-	0
2	粘膜给予的安慰剂液体	-	-	02
					3	粘膜给予的HuIFN-α2b液体	10,000IU		19.8
4	腹膜内HuIFN-α2b液体	10,000IU		8.8
					5	粘膜白介素(Hu IL2)液体		10,000IU	44.5
6	粘膜白介素(Hu IL2)液体		1,000IU	42.9
					7	粘膜白介素(Hu IL2)液体		100IU	42.6
8	粘膜给予的HuIFN-α2b+HuIL2液体	10,000IU	10,000IU	43.7
					9	粘膜给予的HuIFN-α2b+HuIL2液体	10,000IU	1,000IU	33.2
10	粘膜给予的HuIFN-α2b+HuIL2液体	10,000IU	100IU	33.8

1.表示为每天的IU

2.在安慰剂组中，提取的肿瘤重3g。

如上所示，在H22异种移植小鼠中，粘膜给予重组人IL-2证明以不依赖剂量的方式(100IU、1,000IU和10,000IU)有效降低肿瘤负荷。在接受粘膜给予10,000IU重组人IL-2和粘膜给予10,000IU重组人IFN-α2b联合用药的组中观察到类似的肿瘤减小水平。

在单独粘膜给予IL-2或与IFN-α2b一起粘膜给予IL-2的组中未观察到毒性证据(数据未显示)。此外，如下表2所示，各治疗组的小鼠在治疗期间体重增加的速度类似于安慰剂组中的小鼠和未接受治疗的那些小鼠。

表2

实施例2-重组人IL-2的舌下给药和肝癌

除以上实施例1所述实验外，采用相同方案进行其它实验以比较舌下递送重组人IL-2(如以上实施例1所述进行)与皮下递送BSA/PBS溶液配制的重组人IL-2的效力。治疗组和剂量如下表3所示。其它参数如实施例所示。

表3

组	治疗	重组人IL2每日	肿瘤质量降低％
				1	重组人IL2.舌下递送	1000IU	60
2	BSA/PBS配制的重组人IL2.皮下递送	1000IU	43
				3	BSA/PBS安慰剂	0	15

组	治疗	重组人IL2每日	肿瘤质量降低％
				4	中国葡聚糖10ug.口服递送	0	32
5	阴性对照	0	0

如上表3所示，以每天1,000IU舌下递送重组人IL-2导致肿瘤负荷减小60％，相比之下，皮下给予相同剂量的重组人IL-2只导致肿瘤负荷减小43％。

采用舌下给予较低浓度的人IL-2(1IU-500IU)进行随后的实验(如上所述)。对于舌下给药，每天给予小鼠两剂量，各含1、10、100或500IU的每日剂量的一半。图1A和1B显示了两个这种实验的示范性数据，可以看出，与胃肠外注射浓度高10倍(100IU)的IL-2相比，舌下给予10IU导致肿瘤质量降低更多。舌下给予100IU观察到肿瘤质量降低甚至更多。

实施例3-重组人IL-2的舌下给药和肾癌

采用实施例1和2所述的方案，给昆明鼠科清洁类型18-22g雌性小鼠异种移植Renca肾肿瘤细胞，测定重组人IL-2给药对随后肿瘤质量的影响。接种前，取出生长良好的肾癌团块，用生理盐溶液分离成单细胞悬液(10⁷细胞/毫升)。通过背部区域的皮下注射给所有小鼠接种2×10⁶癌细胞(0.2ml)。第二天，将这些小鼠随机分成以下7组(每种治疗方案10只)：用舌下给予1IU、10IU、100IU或500IU IL-2治疗；皮下注射100IU IL-2治疗；未治疗阴性对照；和只用安慰剂治疗。各小鼠每天两次给予10μl液体，15天。在第21天处死小鼠。记录体重和提取的肿瘤重量。如实施例1所述计算肿瘤抑制百分比。

图2显示了两项独立研究的结果。在第一项研究中，粘膜给予10IU、100IU、500IU rhIL-2的肿瘤生长抑制率分别是37.05％、44.68％和32.60％。粘膜给予100IU rhIL-2显示肿瘤生长抑制效率优于皮下给药(抑制率为34.48％)。在第二项研究中，粘膜给予10IU、100IU、500IU rhIL-2的肿瘤生长抑制率分别是40.89％、47.66％和17.85％。粘膜给予100IU和500IUrhIL-2(一天两次共15天)显示肿瘤生长抑制效率优于皮下给药(抑制率为32.32％)。这些结果表明rhIL-2明显抑制移植小鼠的肾癌生长。

实施例4-重组人IL-2的舌下给药与皮肤癌和肺癌

采用上述实施例1-3的方案，给昆明鼠科清洁类型18-22g雌性小鼠异种移植B16黑色素瘤细胞或Lewis肺肿瘤细胞，测定重组人IL-2给药对随后肿瘤质量的影响。

如图3(黑色素瘤)和4(肺)所示，每日剂量为10IU和100IU IL-2的舌下给药导致的肿瘤质量降低高于胃肠外注射100IU IL-2所达到的水平。

实施例5-治疗组合物

根据本文所述的本发明实施方式，IL-2通常以适合口服，最常见是以适合舌下给药的药物组合物形式给予。下文概述了本发明组合物的例子。下文应理解成只是说明性的例子，而不是以任何方式限制本发明的范围。

实施例5A-片剂形式的口服给药组合物

可将IL-2掺入薄膜中，并将该薄膜包衣到空白片剂芯体上制备含IL-2的片剂形式组合物，所述薄膜含有明胶、麦芽糖糊精、羧甲基纤维素、葡萄糖、卡波姆中的一种或多种，所述芯体由已知的药学上可接受的成分制成，所述药学上可接受的成分选自：淀粉、磷酸钙、羧甲基乙基纤维素、甘露醇、麦芽糖、滑石粉和硬脂酸镁。

实施例5B-胶囊形式的口服给药组合物

可用粉末形式的IL-2、100mg乳糖、35mg滑石粉和10mg硬脂酸镁填充标准的两件式硬明胶胶囊来制备含IL-2的胶囊形式组合物。

序列表

 

<110>T.郭(Ko，Thomas)

 

<120>治疗癌症的方法

 

<130>20169069

<160>3

 

<170>PatentIn version 3.1

 

<210>1

<211>153

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

 

<400>1

Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu

1               5                   10                  15

Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu

            20                  25                  30

Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile

        35                  40                  45

Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe

    50                  55                  60

Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu

65                  70                  75                  80

Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys

                85                  90                  95

Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile

            100                 105                 110

Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala

        115                 120                 125

Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe

    130                 135                 140

Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

145                 150

 

<210>2

<211>133

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

 

<400>2

Met Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1               5                   10                  15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

            20                  25                  30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

        35                  40                  45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

    50                  55                  60

Pro Leu Lys Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65                  70                  75                  80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

                85                  90                  95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

            100                 105                 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile

        115                 120                 125

Ile Ser Thr Leu Thr

    130

 

<210>3

<211>405

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

 

<400>3

atgcctactt caagttctac aaagaaaaca cagctacaac tggagcattt actgctggat

60

ttacagatga ttttgaatgg aattaataat tacaagaatc ccaaactcac caggatgctc

120

acatttaagt tttacatgcc caagaaggcc acagaactga aacatcttca gtgtctagaa

180

gaagaactca aacctctgaa ggaagtgcta aatltagctc aaagcaaaaa ctttcactta

240

agacccaggg acttaatcag caatatcaac gtaatagttc tggaactaaa gggatctgaa

300

acaacattca tgtgtgaata tgctgatgag acagcaacca ttgtagaatt tctgaacaga

360

tggattacct tttctcaaag catcatctca acactgactt gataa

405

Claims (18)

1.一种治疗对象的癌症的方法，该方法包括粘膜给予该对象有效量的白介素或其片段或衍生物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述粘膜给予是口服给予。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述给予是含服或舌下给予。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述白介素是重组人白介素。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述白介素的IL-2。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，所述癌症选自：肝癌、肺癌、肾癌、皮肤癌、膀胱癌、胃癌、乳腺癌或血癌。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述癌症选自：肝癌、肺癌、肾癌或皮肤癌。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，以编码所述白介素的多核苷酸的形式给予所述白介素，所述多核苷酸任选位于遗传构建物中，与启动子操作性相连。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其特征在于，还包括给予一种或多种抗癌剂。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，给予剂量约每天1IU-100,000IU的所述白介素。

11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其特征在于，给予剂量约每天1IU-10,000IU的所述白介素。

12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其特征在于，给予剂量约每天100IU-10,000IU的所述白介素。

13.一种通过粘膜给药治疗癌症的药物组合物，该组合物包含白介素或其片段或衍生物，任选还包含一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂和/或稀释剂。

14.如权利要求13所述的组合物，其特征在于，所述白介素是IL-2。

15.一种治疗对象的癌症的方法，该方法包括粘膜给予该对象有效量的权利要求13或14所述的组合物。

16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述白介素是IL-2。

17.白介素或其片段或衍生物在制备治疗癌症的药物中的应用，其中所述药物经粘膜给予。

18.如权利要求17所述的应用，其特征在于，所述白介素是IL-2。

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