CN101663301A

CN101663301A - 作为黑皮质素-4受体拮抗剂的取代的咪唑并吡啶衍生物

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Publication number: CN101663301A
Application number: CN200880010369A
Authority: CN
Inventors: G·梅斯; H·德普; U·艾贝尔; A·福伊里尔; I·奥特; S·诺德霍夫; M·泽伯德; B·霍夫曼-恩格尔; P·韦尔曼; H·西恩德; C·拉梅; M·特里尼克; M·亨尼博尔; H·赫茨尼; C·蒙达多利
Original assignee: Santhera Pharmaceuticals Schweiz GmbH
Current assignee: Santhera Pharmaceuticals Schweiz GmbH
Priority date: 2007-03-28
Filing date: 2008-03-28
Publication date: 2010-03-03
Anticipated expiration: 2028-03-28
Also published as: EP1974729A1; MX2009010429A; CA2682329C; CN101663301B; RU2451684C2; EP2144907A1; NZ579513A; RU2009134038A; WO2008116665A8; US20100093697A1; KR101128140B1; BRPI0809346A2; AU2008231977A1; WO2008116665A1; JP2010522224A; US8236818B2; IL200804A0; KR20090122309A; CA2682329A1; AU2008231977B2

Abstract

本发明涉及作为黑皮质素－4受体(MC－4R)调节剂、特别是作为黑皮质素－4受体拮抗剂的取代的咪唑并吡啶衍生物。所述拮抗剂可用于例如癌症恶病质、肌肉萎缩、厌食、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、焦虑和抑郁的障碍和疾病的治疗。

Description

作为黑皮质素-4受体拮抗剂的取代的咪唑并吡啶衍生物

技术领域

本发明涉及作为黑皮质素-4受体调节剂的取代的咪唑并吡啶衍生物。根据化合物的结构和立体化学，黑皮质素-4受体调节剂可为激动剂或拮抗剂。本发明的化合物为人类黑皮质素-4受体(MC-4R)的选择性拮抗剂。所述拮抗剂可用于例如癌症恶病质、肌肉萎缩、厌食、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、焦虑和抑郁的障碍和疾病的治疗。

背景技术

黑皮质素(MC)是阿片黑素促皮质素原(POMC)经过蛋白水解切割的产物。这些肽，促肾上腺皮质激素(ACTH)、α-促黑激素(α-MSH)、β-MSH和γ-MSH的大小为12个至39个氨基酸。中枢MC-4R激活的最重要内源激动剂似乎是十三肽α-MSH。在MC中，据报道α-MSH是脑中的神经递质或神经调质。MC肽特别是α-MSH对生物功能具有多种作用，所述生物功能包括进食行为、色素沉着和外分泌功能。α-MSH的生物学作用是由7-跨膜G蛋白偶联受体的亚家族蛋白介导的，称为黑皮质素受体(MC-R)。激活上述MC-R中的任一个都会刺激cAMP形成。

至今为止，已经识别了五种不同类型的MC受体亚型(MC-1R至MC-5R)，这些亚型在不同的组织中表达。

MC-1R最先发现于黑素细胞。已显示动物体内天然存在的MC-1R的无活性变体通过控制酪氨酸酶来控制褐色素(phaeomelanin)向真黑色素(eumelanin)的转化，来改变色素沉积并且继而使得毛皮颜色较浅。上述研究以及其他研究表明，MC-1R是一种在动物毛皮和人类皮肤的黑色素的产生过程中十分重要的调节剂。

MC-2R在肾上腺中表达，表现为ACTH受体的形式。MC-2R不是α-MSH的受体，而是促肾上腺皮质激素I(ACTHI)的受体。

MC-3R在脑中(主要位于下丘脑部位)和周围组织(例如肠和胎盘)中表达，敲除研究已经发现MC-3R与进食行为、体重和热量产生的变化有关。

MC-4R主要在脑中表达。有大量数据表明MC-4R在能量动态平衡中起作用。对动物体内的MC-4R进行基因敲除和药物调控的研究显示，激活MC-4R会导致体重减轻，拮抗MC-4R会导致体重增加(A.Kask、et al.，“Selective antagonist for the melanocortin-4receptor(HS014)increases food intake in free-feeding rats”Biochem.Biophys.Res.Commun.，245：90-93(1998))。

MC-5R在许多周围组织(包括白脂肪和胎盘)中都有广泛的表达，在脑中也有低水平的表达。但是，其表达水平在外分泌腺中最高。在小鼠体内将该受体的基因敲除会导致外分泌腺功能的改变，使得水分排出和体温调节发生变化。还发现MC-5R敲除小鼠的皮脂腺产生脂类的能力下降(Chen et al.，Cell、91：789-798(1997))。

最为引人关注的是关于MC-3R和MC-4R调节剂的研究，以及所述调节剂用于治疗体重障碍例如肥胖和厌食的用途。然而，已经发现MC肽除了对于色素沉积、进食行为和外分泌功能具有调节作用之外，还具有重要的生理作用。具体而言，最近发现α-MSH在急性和慢性炎症模型中均可以诱发强有力的抗炎效应，所述炎症模型包括炎性肠病、肾脏缺血/再灌注损伤和内毒素诱导的肝炎。在上述模型中给予α-MSH可使得炎症引发的组织损伤显著降低、白细胞浸润显著下降，以及在炎症中升高的细胞因子和其他介体的水平明显地下降至接近基线水平。最近的研究表明，α-MSH的抗炎作用是由MC-1R介导的。激动MC-1R而导致抗炎应答的机理似乎是通过抑制促炎性转录激活因子NF-κB而实现。NF-κB是促炎性级联反应中的关键物质，NF-κB的激活是引发许多炎性疾病的中心事件。此外，α-MSH的抗炎作用可能部分地由MC-3R和/或MC-5R的激活所介导。

可作为可用于控制肥胖的靶标的单一特异性MC-R还未被识别出来，但是有证据表明MC-4R信号传导对于进食行为的介导十分重要(S.Q.Giraudo et al.，“Feeding effects of hypothalamic injection of melanocortin-4receptor ligands，”Brain Research，80：302-306(1998))。其他表明MC-R与肥胖有关的证据包括：1)异位表达MC-1R、MC-3R和MC-4R拮抗剂的刺豚鼠(A^vy)表现出肥胖，这表明阻断上述三种MC-R的作用可以导致进食过量和代谢障碍；2)MC-4R基因敲除小鼠(D.Huszar et al.，Cell，88：131-141(1997))能够代表刺豚鼠的表型，并且这些小鼠表现出肥胖；3)对于几种啮齿类动物进食模型(NPY、ob/ob、刺豚鼠、禁食模型)，在脑室内(ICV)注射环状七肽melanotanin II(MT-II)(一种MC-1R、MC-3R、MC-4R和MC-5R的非选择性激动剂)可以使得食物摄取下降，而ICV注射SHU-9119(MC-3R和MC-4R拮抗剂；MC-1R和MC-5R激动剂)能逆转上述效果并可以诱导进食过量；4)已有报道称在12周的时间内使用一种α-NDP-MSH衍生物(HP-228)对Zucker肥胖大鼠进行持续腹膜内治疗，能够激活MC-1R、MC-3R、MC-4R和MC-5R，并降低食物摄入和体重(I.Corcos et al.，“HP-228 is a potent agonist of melanocortinreceptor-4 and significantly attenuates obesity and diabetes in Zucker fattyrats，”Society for Neuroscience Abstracts，23：673(1997))。

MC-4R似乎还在其他生理功能中起作用，所述其他生理功能即控制修饰行为、勃起和血压。勃起障碍是指阴茎不能实现成功性交所需的充分勃起的医学病症。经常使用术语“阳萎”来描述这种常见的病症。已经发现合成的黑皮质素受体激动剂能够引发患有心因性勃起障碍的男性的勃起(H.Wessells et al.，“Synthetic Melanotropic Peptide InitiatesErections in Men With Psychogenic Erectile Dysfunction：Double-Blind、Placebo Controlled Crossover Study，”J.Urol.，160：389-393，1998)。脑中的黑皮质素受体的激活似乎能够引起对性唤起的正常刺激。MC-R在雄性和/或雌性性功能障碍中的作用可详见于WO 00/74679。

糖尿病是这样一种疾病：由于哺乳动物将葡萄糖转化为糖原并储存于肌肉或肝细胞中的能力降低，从而使得所述哺乳动物调节血糖水平的能力受损。在I型糖尿病中，所述储存葡萄糖的能力下降是由于胰岛素产量下降而导致的。“II型糖尿病”或“非胰岛素依赖型糖尿病”(NIDDM)是指由下述原因导致的一类糖尿病：在胰岛素主要起作用的组织(肌肉、肝脏和脂肪组织)中对于胰岛素刺激或调节葡萄糖和脂类代谢的效应存在广泛的抵抗作用。这种对胰岛素应答的抵抗作用导致胰岛素对于肌肉中的葡萄糖摄取、氧化和储存的激活效应不足，以及胰岛素对于脂肪组织中的脂水解以及肝脏中的葡萄糖产生和分泌的抑制效应不足。在上述细胞对于胰岛素的效应不敏感时，机体会尝试通过产生异常高水平的胰岛素进行补偿，从而导致高胰岛素血症(hyperinsulemia)。高胰岛素血症会引发高血压和体重增加。由于胰岛素能促进对胰岛素敏感的细胞从血液中摄取葡萄糖、氨基酸和甘油三酯，因此对胰岛素不敏感会导致甘油三酯和LDL的水平上升，而甘油三酯和LDL是心血管疾病的危险因素。包括高胰岛素血症加高血压、体重上升、甘油三酯和LDL水平上升的这一系列症状的组合被称为X综合征。MC-4R激动剂可用于治疗NIDDM和X综合征。

在MC受体各亚型中，MC4受体还因其与应激以及对情感行为的调节有关而受到关注，这主要基于下述发现。应激会启动包括内分泌事件、生物化学事件和行为事件的复杂应答级联。上述应答中有许多都是通过促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)的释放而启动的(Owen MJ andNemeroff CB(1991)Physiology and pharmacology of corticotrophinreleasing factor.Pharmacol Rev 43：425-473)。除了激活脑CRF系统之外，还有许多证据表明黑皮质素(MC)(由对阿片促黑素细胞皮质素原的酶促加工生成)可介导许多对应激的重要行为应答和生物化学应答，因此介导应激诱导的障碍包括焦虑和抑郁((Anxiolytic-Like andAntidepressant-Like Activities of MCL0129(1-[(S)-2-(4-Fluoro-phenyl)-2-(4-isopropylpiperadin-1-yl)ethyl]-4-[4-(2-methoxy-naphthalen-1-yl)butyl]piperazine)，a Novel and Potent NonpeptideAntagonist of the Melanocortin-4 Receptor；Shigeyuki Chaki et al.J.Pharm.Exp.Ther.(2003)304(2)，818-26))。

由食欲下降和瘦体重下降共同导致的恶病质经常会引起慢性疾病，例如恶性肿瘤或感染。瘦体重的明显下降通常是由炎性过程引发，并且通常与细胞因子(例如TNF-α)的血浆水平上升相关，这会提高脑中的α-MSH产量。α-MSH激活下丘脑中的MC4受体会降低食欲并增加能量的消耗。对患有肿瘤的小鼠进行的实验表明，遗传性MC4受体敲除或MC4受体阻断可以防止或逆转恶病质。经过治疗的小鼠的体重增加是由于主要由骨骼肌组成的瘦体重的明显增加(Marks D.L.et al.Role of thecentral melanocortin system in cachexia.Cancer Res.(2001)61：1432-1438)。

临床观察表明，肌萎缩性侧索硬化症(ALS)的进程与体重成负相关关系(例如Ludolph AC，Neuromuscul Disord.(2006)16(8)：530-8)。因此，MC-4R抑制剂可用于治疗ALS患者。

现有文献已经描述过黑皮质素-4受体调节剂。例如，已经合成了取代的苯基哌啶衍生物并作为MC-4R激动剂和拮抗剂。

由于在上述各种疾病和障碍的治疗中仍有未解决的缺陷，本发明的一个目的是提供具有改进的穿过血脑屏障的能力并可用作黑皮质素-4受体拮抗剂的新化合物，以用于治疗癌症恶病质、肌肉萎缩、厌食、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、焦虑、抑郁以及其他与MC-4R相关的疾病。

出人意料的是，已发现根据式(I)所示的新的咪唑并吡啶化合物能够实现本发明的目的。

发明内容

本发明涉及结构式(I)的取代的咪唑并吡啶衍生物

其中R¹、R²、R³、A和X的定义如下所述。

结构式(I)的咪唑并吡啶衍生物可作为有效的黑皮质素受体调节剂，特别是作为有效的选择性黑皮质素-4受体(MC-4R)拮抗剂。因此，它们可用于治疗涉及MC-4R失活的障碍。所述拮抗剂可用于治疗例如癌症恶病质、肌肉萎缩、厌食、肌萎缩性侧索硬化症、焦虑和抑郁的障碍和疾病。

因此，本发明涉及用于治疗和/或预防癌症恶病质、肌肉萎缩、厌食、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、焦虑和抑郁的式(I)的化合物。

另一方面，本发明涉及式(I)的化合物用于制备治疗和/或预防癌症恶病质、肌肉萎缩、厌食、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、焦虑和抑郁的药物的用途。

本发明还涉及含有本发明的化合物以及可药用载体的药物组合物。

具体实施方式

本发明涉及取代的咪唑并吡啶衍生物，所述化合物可以作为黑皮质素受体调节剂，特别是选择性的MC-4R拮抗剂。

取代的N-苯甲基-N-甲基-2-苯基-5-二乙基酰胺基-3-甲基氨基-咪唑并[1，2-a]吡啶记载于WO-A-02/066478，其中描述了促性腺激素释放激素的拮抗剂。本发明涉及用作MC-4R拮抗剂的新的咪唑并吡啶化合物。

本发明的化合物为结构式(I)的化合物及其对映异构体、非对映异构体、互变异构体、溶剂合物和可药用盐，

其中

A为-NH-、-CH₂-、-CH₂-CH₂-或一个键；

X为H，

苯基，

与饱和的五元或六元杂环稠合的苯基，其中所述杂环可含有1个或2个选自O和N的杂原子，并且其中所述杂环还可任选地被一个氧基取代，

含有1个或2个选自N、O和S的杂原子的4元至8元的饱和或不饱和的杂环基团

含有1个或2个选自N、O和S的杂原子的五元至六元杂芳基，或

-C(O)-R⁶，

其中每一个苯基、杂环基团和杂芳基任选地被1个至3个R¹⁴和/或1个R^4b和/或1个R⁵所取代；

R¹和R²彼此独立地选自：

H，

C_1-6烷基，

C_1-6亚烷基-O-C_1-6烷基，

C_1-3亚烷基-杂环基团，

C_1-6亚烷基-C_3-7环烷基，

其中每一个烷基、亚烷基、杂环基团和环烷基任选地被OH所取代，或者R¹和R²与它们所连接的氮原子一起形成一个五元至六元环，所述五元至六元环在环上可另外含有1个氧原子，并且所述五元环至六元环任选地被一个或多个选自下列的取代基所取代：OH、C_1-6烷基、O-C_1-6烷基、C_0-3亚烷基-C_3-5环烷基、C_1-6亚烷基-O-C_1-6烷基或(CH₂)_0-3-苯基；

R^4a为卤素，

CN，

任选地被一个或多个卤原子取代的C_1-6烷基，

任选地被一个或多个卤原子取代的O-C_1-6烷基，或

OH；

R^4b为C(O)NH₂，

C(O)OH，

C(O)NH-C_1-6烷基，

C(O)N-(C_1-6烷基)₂，

SO₂-C_1-6烷基，

C(O)NH-SO₂-C_1-6烷基，

氧基，由此使得所述环为至少部分饱和的，

NH₂，

NH-C_1-6烷基，

N-(C_1-6烷基)₂，

NH-SO₂-CH₃，或

NH-SO₂-CF₃；

R⁵为含有1至3个选自N、O和S的杂原子的5元至6元的饱和或不饱和的杂环基团，或

含有1至3个选自N、O和S的杂原子的5元至6元的杂芳基其中所述杂环和杂芳基任选地被1个或2个R¹⁴取代；

R⁶为H，

任选地被一个或多个卤原子取代的C_1-6烷基，

苯基，或

含有1至3个选自N、O和S的杂原子的4元至8元的饱和或不饱和的杂环基团，

其中每一个苯基或杂环基团任选地被1个至3个R¹⁴和/或1个R⁵所取代，

R³为-(CR⁸R⁹)_n-T；

R⁸和R⁹彼此独立地选自：

H，

OH，

卤素，

C_1-6烷基，和

O-C_1-6烷基；

n为1、2、3、4、5或6；

T为

或NR¹²R¹³；

R¹⁰为H，

NH₂，

OH，

C_1-6烷基，任选地被一个或多个选自卤素、OH和O-C_1-6烷基的取代基所取代，

O-C_1-6烷基、其中的烷基任选地被一个或多个选自卤素、OH和O-C_1-6烷基的取代基所取代，

卤素，

NH(C_1-6烷基)，

N(C_1-6烷基)₂，

苯基，或

杂芳基，

其中苯基和杂芳基任选地被1至3个R^4a所取代；

q为1或2；

Y为CH₂、NR¹¹或O；

R¹¹为H，

C_1-6烷基，或

(CH₂)_0-6-C_3-7环烷基；

R¹²和R¹³彼此独立地选自

H，

C_1-6烷基

C_2-6烯基，

C_2-6炔基，

(CH₂)_0-2-C_3-7环烷基，和

C_1-6亚烷基-O-C_1-6烷基，

其中C_1-6烷基、C_1-6亚烷基和C_3-7环烷基任选地被1个至3个R¹⁴所取代；

R¹⁴为卤素，

CN，

C_1-6烷基，任选地被一个或多个选自下列的取代基所取代：卤素、OH、O-C_1-6烷基、O-C_3-7环烷基、O-C(O)C_1-6烷基、O-C(O)C_3-7环烷基，

O-C_1-6烷基，任选地被一个或多个选自下列的取代基所取代：卤素、OH、O-C_1-6烷基、O-C_3-7环烷基、O-C(O)C_1-6烷基、O-C(O)C_3-7环烷基，或

OH。

在一个优选实施方案中，变量A代表-NH-或一个键。更优选地，A代表一个键。

另外优选地，R¹和R²彼此独立地代表C_3-6烷基，或者R¹和R²与它们所连接的氮原子一起形成一个5元至6元环，所述五元至六元环在环上可另外含有1个氧原子，并且所述五元环至六元环任选地被一个或多个选自下列的取代基所取代：OH、C_1-6烷基、C_0-3亚烷基-C_3-5环烷基、O-C_1-6烷基、C_1-6亚烷基-O-C_1-6烷基或(CH₂)_0-3-苯基。更优选地，R¹和R²彼此独立地代表C_3-6烷基。

在一个优选的实施方案中，变量T为NR¹²R¹³。其中优选地，变量R¹²和R¹³彼此独立地选自H、C_1-3烷基或(CH₂)_0-2-C_3-6环烷基，其中所述的烷基和环烷基任选地被1个至3个R¹⁴所取代。

在另一个优选的实施方案中，变量T选自

优选地，变量Y为CH₂或NR¹¹。优选地，R¹¹为氢。

另外优选地，R¹⁰选自H、NH₂、C_1-6烷基、NH(C_1-6烷基)或N(C_1-6烷基)₂。更优选地，R¹⁰为H、NH₂或C_1-6烷基。

关于变量X，所述变量优选地代表H，与饱和的六元杂环稠合的苯基，其中所述杂环可含有1个或2个选自O和N的杂原子，并且其中所述杂环还可任选地被一个氧基取代；或者X代表含有1个或2个选自N、O和S的杂原子的4元至8元的饱和或不饱和的杂环基团；其中每一个苯基和杂环基团均任选地被1个至3个R¹⁴和/或1个R^4b和/或1个R⁵所取代。

在一个同样优选的实施方案中，变量X代表苯基或者含有1个或2个选自N、O和S的杂原子的五元至六元杂芳基，其中每一个苯基和杂芳基任选地被1个至3个R¹⁴和/或1个R^4b和/或1个R⁵所取代。更优选地，X为苯基或吡啶基；最优选地，X为苯基。

本发明的目的还包括式(I)的化合物，其中一些或全部上述基团具有优选的或更优选的含义。

在上下文中，所用的术语具有如下所述的含义：

烷基为具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链的烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基或己基。

烯基为具有2、3、4、5或6个碳原子以及含有一至三个双键的直链或支链的烃基，优选地含有一个或两个双键，最优选地含有一个双键。C_2-6烯基基团的优选实例为乙烯基、1-丙烯基(prop-1-enyl)、2-丙烯基、1-异丙烯基、1-正丁烯基、2-正丁烯基、3-正丁烯基、1-异丁烯基、2-异丁烯基、1-正戊烯基、2-正戊烯基、3-正戊烯基、4-正戊烯基、1，3-正戊二烯基(n-pent-1，3-enyl)、1-异戊烯基、2-异戊烯基、1-新戊烯基、1-正己烯基(n-hex-1-enyl)、2-正己烯基、3-正己烯基、4-正己烯基、5-正己烯基、1，3-正己二烯基(n-hex-1，3-enyl)、2，4-正己二烯基、3，5-正己二烯基和1，3，5-正己三烯基(n-hex-1，3，5-enyl)。C_2-6烯基基团的更优选实例为乙烯基和1-丙烯基。

炔基为具有2、3、4、5或6个碳原子以及含有一至三个叁键的直链或支链的烃基，优选地含有一个或两个叁键，最优选地含有一个叁键。C_2-6炔基基团的优选实例为乙炔基、1-丙炔基(prop-1-inyl)、2-丙炔基、1-正丁炔基、2-正丁炔基、3-正丁炔基、1-正戊炔基、2-正戊炔基、3-正戊炔基、4-正戊炔基、1，3-正戊二炔基(n-pent-1，3-inyl)、1-异戊炔基、1-新戊炔基、1-正己炔基(n-hex-1-inyl)、2-正己炔基、3-正己炔基、4-正己炔基、5-正己炔基、1，3-正己二炔基(n-hex-1，3-inyl)、2，4-正己二炔基、3，5-正己二炔基和1，3，5-正己三炔基(n-hex-1，3，5-inyl)。C_2-6炔基基团的更优选实例为乙炔基和1-丙炔基。

环烷基为优选地含有3、4、5、6或最多7个碳原子的环状烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基，所述环烷基更优选地含有3、4、5或6个碳原子。

杂芳基为含有1、2、3、4或5个碳原子和至少一个选自O、N和/或S的杂原子的芳香性基团，所述杂芳基优选地选自噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、异噻唑基、异噁唑基、呋喃基和吲唑基，更优选地选自噻吩基、呋喃基、咪唑基、吡啶基和嘧啶基。

杂环基团为含有至少一个选自O、N和/或S的杂原子和1、2、3、4、5、6或7个碳原子的饱和或不饱和的环状基团。优选地，杂环基团为四元至八元环，并优选地选自四氢呋喃基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、吡喃基、吗啉基、硫代吗啉基，更优选地选自哌啶基和吡咯烷基。

卤素为选自F、Cl、Br和I的卤原子，优选地选自F、Cl和Br。

结构式(I)的化合物可有效地作为黑皮质素受体调节剂，特别是有效地作为MC-4R的选择性调节剂。它们可用于治疗和/或预防与MC-4R失活相关的障碍，例如癌症恶病质、肌肉萎缩、厌食、肌萎缩性侧索硬化症、焦虑、抑郁以及其他与MC-4R相关的疾病。

光学异构体-非对映异构体-几何异构体-互变异构体

结构式(I)的化合物具有一个或多个不对称中心，并可以以外消旋物和外消旋混合物、单独的对映异构体、非对映异构体混合物和单独的非对映异构体的形式存在。本发明意在包括结构式(I)的化合物的所有上述异构体形式。

可以通过以下方法将结构式(I)的化合物分离为单独的非对映异构体形式，例如从合适的溶剂(例如甲醇或乙酸乙酯或它们的混合物)中分级结晶，或通过使用旋光固定相的手性色谱。绝对立体化学可通过对结晶产物或衍生的结晶中间体的X射线晶体学确定，必要时还可以使用含有已知绝对构型的不对称中心的反应试剂。

或者，也可以使用具有已知绝对构型的光学纯的起始原料或反应试剂，通过立体化学特异性合成来获得通式(I)的化合物的任何立体异构体。

盐

术语“可药用盐”指的是使用可药用的无毒性的碱或酸制备的盐，所述碱或酸包括有机和或无机的碱或酸。来源于无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等等。特别优选的是铵盐、钙盐、锂盐、镁盐、钾盐和钠盐。来源于可药用的无毒性有机碱的盐包括由以下的有机碱形成的盐：伯胺、仲胺和叔胺，取代的胺(包括天然存在的取代胺)，环胺和碱性离子交换树脂，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N’-二苯甲基亚乙基二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、亚乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺(glucamine)、葡糖胺(glucosamine)、组氨酸、海巴胺(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基三丁醇等等。

当本发明的化合物为碱性时，可以使用可药用的无毒性酸(包括无机酸和有机酸)来制备盐。所述酸包括：乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、甲酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、氢氯酸、羟基乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、丙二酸、粘酸、硝酸、帕莫酸(parnoic)、泛酸、磷酸、丙酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸、三氟乙酸等等。特别优选的是柠檬酸、富马酸、氢溴酸、氢氯酸、马来酸、磷酸、硫酸和酒石酸。

应当理解的是，本文提及式(I)的化合物时也意在包括其可药用盐。

用途

式(I)的化合物为黑皮质素受体拮抗剂，因此可用于治疗、控制或预防与一种或多种黑皮质素受体的失活相关的疾病、障碍或病症，所述黑皮质素受体包括但不限于MC-1R、MC-2R、MC-3R、MC-4R或MC-5R。所述疾病、障碍或病症包括但不限于癌症恶病质、肌肉萎缩、厌食、肌萎缩性侧索硬化症、焦虑和抑郁。

式(I)的化合物还可用于治疗、控制或预防与一种或多种黑皮质素受体的失活相关的疾病、障碍或病症，所述黑皮质素受体包括但不限于MC-1R、MC-2R、MC-3R、MC-4R或MC-5R。所述疾病、障碍或病症包括但不限于高血压、高血脂症、骨关节炎、癌症、胆囊疾病、睡眠呼吸暂停、强迫症、神经症、失眠/睡眠障碍、药物滥用、疼痛、发热、炎症、免疫调节疾病、类风湿性关节炎、皮肤晒黑、痤疮和其他皮肤病，式(I)的化合物还可用于神经保护以及增强认知和记忆，包括治疗Alzheimer疾病。

给药和剂量范围

可以使用任何合适的给药途径来将有效剂量的本发明化合物给予哺乳动物，特别是人类。例如可以采用口服给药、直肠给药、局部给药、肠胃外给药、眼部给药、肺部给药、鼻内给药等等。剂型包括片剂、锭剂、分散剂、悬液、溶液、胶囊、霜剂、膏剂、气溶胶等等。优选地，式(I)的化合物通过口服或局部给药。

所采用活性成分的有效剂量可根据具体使用的化合物、给药模式、待治疗的病症和待治疗的病症的严重程度而有所变化。所述剂量范围可以由本领域技术人员容易地确定。

当治疗癌症恶病质、肌肉萎缩或厌食时，为获得满意的治疗效果，本发明的化合物通常的日给药剂量为每千克体重约0.001毫克至约100毫克，优选地以单剂量给药或分为每日二至六次的分开剂量给药，或以缓释形式给药。对于一个体重70kg的成年而言，每日总剂量通常为约0.07毫克至约3500毫克。也可以调整上述剂量方案以提供优化的治疗效果。

制剂

优选地，在给药之前将式(I)的化合物配制为制剂。因此，本发明还包括含有式(I)的化合物和合适的药用载体的药物组合物。

本发明的药物组合物可使用熟知的和容易获得的成分制备。在制备本发明的制剂时，活性成分(式(I)的化合物)通常与载体相混合、被载体稀释或包封于载体内，所述载体的形式可为胶囊、药袋、纸或其他容器。当载体作为稀释剂时，所述载体可为能够作为活性成分的运载体、赋形剂或介质的固体、半固体或液体物质。因此，所述组合物的形式可为片剂、丸剂、粉剂、锭剂、囊剂、扁囊剂、酏剂、悬液、乳液、溶液、糖浆、气溶胶(固体形式或在于液体介质中)、软明胶胶囊和硬明胶胶囊、栓剂、无菌注射液和无菌包装粉剂。

合适的载体、赋形剂和稀释剂的一些实例包括：乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、黄芪胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯比咯烷酮、纤维素、糖水、甲基纤维素、甲基苯甲酸盐和丙基羟基苯甲酸盐、滑石、硬脂酸镁和矿物油。所述制剂还可包括润滑剂、润湿剂、乳化剂和悬浮剂、防腐剂，甜味剂或香味剂。可以配制本发明的组合物以使其在被给予所述患者后提供活性成分的快速的、持续的释放或延迟的释放。

本发明化合物的制备

当式(I)的化合物以非对映异构体混合物的形式存在时，可以通过从合适的溶剂(例如甲醇或乙酸乙酯或它们的混合物)中分级结晶的方法将它们分离为对映异构体的非对映异构体对。然后可以使用具有旋光活性的酸作为拆解试剂，通过常规的方法将如上所述获得的对映异构体对分离为单独的立体异构体。或者，也可以使用具有已知绝对构型的光学纯的起始原料或反应试剂，通过立体化学特异性合成来获得式(I)化合物的任意对映异构体。

本发明的式(I)的化合物可以根据下述反应路线和实施例的方法使用合适的材料制备，并且通过下述实施例中进一步加以举例说明。此外，通过使用本文所述的方法，结合本领域的公知常识，可以容易地制备出本发明要求保护的其他化合物。因此，实施例中所述的化合物并不应被理解为本发明所包括的全部类别。实施例更详细地说明了本发明化合物的制备。本领域技术人员可以容易地理解，可以使用下述制备方法中的条件和工艺的已知变化方案来制备本发明的化合物。如上所述，本发明的化合物通常以其可药用盐的形式被分离。与所分离的盐相对应的游离胺类碱可以通过下述过程生成：使用合适的碱(使用例如碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠和氢氧化钾水溶液)进行中和反应；并用有机溶剂萃取所释放的胺类游离碱，然后进行蒸发。可以通过将以上述方式分离的胺类游离碱溶于有机溶剂中，加入合适的酸并随后进行蒸发、沉淀或结晶，从而将所述的胺类游离碱转化为另一种可药用盐。所有的温度均以摄氏度表示。

在下述反应路线、制备例和实施例中，各种试剂符号和缩写具有如下所示的含义。

AcOH 乙酸

Ac₂O 乙酸酐

Boc 叔丁氧基羰基

bp 沸点

CDI 1，1，-羰基二咪唑

DCE 1，2-二氯乙烷

DCM 二氯甲烷

DIEA 乙基二异丙胺

DMF N，N-二甲基甲酰胺

DMSO 二甲亚砜

EDC 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride)

Et₂O 乙醚

EtOAc 乙酸乙酯

HATU O-(7-偶氮苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯

HOAt 1-羟基-7-偶氮苯并三唑

HOBt 1-羟基苯并三唑

h 小时

MeCN 乙腈

MeLi 甲基锂

MeOH 甲醇

Ms 甲磺酰基

NMM N-甲基吗啉

MW 分子量

PG 保护基团

RT 室温

TEA 三乙胺

TFAA 三氟乙酸酐

THF 四氢呋喃

TMSI 三甲基碘硅烷

t_R(min) HPLC保留时间

Ts 甲苯磺酰基

Z 苯甲氧基羰基

反应路线1：

2-磺酰基氨基-吡啶-5-羧酸酰胺的合成

如反应路线1所示，在合适的温度下，在存在偶联试剂例如EDC的条件下，使任选取代的胺和2-氨基-吡啶-5-羧酸在有机溶剂例如DMF或DCM中进行酰胺偶联反应。然后，使所生成的酰胺与磺酰氯在溶剂(例如吡啶或其他合适的溶剂)和有机碱(例如三乙胺)中进行反应，得到相应的磺酰基氨基酰胺。

反应路线2：

2-磺酰基氨基-吡啶-5-羧酸甲酯的合成

或者，如反应路线2所示，2-氨基-吡啶-5-羧酸甲酯可在上述条件下进行反应，从而得到相应的磺酰基氨基-酯。

反应路线3：

咪唑并[1，2-a]吡啶的合成

如反应路线3所示，可以在合适的温度下，通过使相应的酮与例如溴化铜(II)在溶剂(例如乙酸乙酯和氯仿的混合物)中反应一段给定的时间，获得任选取代的ω-烷氧基羰基-α-溴代酮。然后，可以存在合适的碱(例如DIEA)的条件下，使所得的α-溴代酮与磺酰基氨基-酰胺在溶剂(例如MeCN)中进行反应，从而得到N-烷基化的磺酰基氨基-酰胺。接着，可以在合适的温度下以及合适的溶剂(例如DCM或1，2-二氯乙烷)中，通过使用TFAA对这些中间体处理一段给定的时间，使其进一步环化为相应的咪唑并[1，2-a]吡啶。可以在碱性条件下和合适的溶剂(例如水、THF和MeOH的混合物)中，使用反应试剂(例如一水合氢氧化锂)来水解任选取代的咪唑并[1，2-a]吡啶的酯官能团。

可以在存在合适的碱(例如N-甲基吗啉)的条件下以及在合适的溶剂(例如THF)中，使用反应试剂例如氯甲酸异丁酯或CDI活化所得的酸；然后在合适的溶剂(例如THF和水的混合物)中，使用还原试剂例如硼氢化钠将活化的酸还原为相应的醇。可以在存在合适的碱(例如TEA)的条件下在合适的溶剂(例如DCM和THF的混合物)中，使用反应试剂(例如甲磺酰氯或苯甲磺酰氯)将所述醇官能团转化为离去基团。然后可以在合适的溶剂(例如MeCN)中用胺T-H处理上述反应的产物从而得到目的分子。

反应路线4：

咪唑并[1，2-a]吡啶的合成

如反应路线4所示，可以在合适的溶剂(例如甲醇)中，使用反应试剂(例如硼氢化钠)将任选取代的咪唑并[1，2-a]吡啶的甲酯官能团还原为相应的醇。可以如反应路线3所述，用所得的醇进一步反应生成目的分子。

反应路线5：

咪唑并[1，2-a]吡啶的合成

如反应路线5所示，可以如上所述地由相应的酮获得在ω-位带有缩醛官能团的任选取代的α-溴代酮，并可将其转化为相应的任选取代的咪唑并[1，2-a]吡啶。可以在水中使用反应试剂例如6N HCl切割所述缩醛而形成相应的醛。然后在存在还原试剂(例如三乙酰氧基硼氢化钠(sodiumtriacetoxyborohydride))的条件下以及在合适的溶剂(例如DCE)中，使用胺T-H对所述任选取代的醛进行还原性氨基化反应。

反应路线6：

咪唑并[1，2-a]吡啶的合成

如反应路线6所示，可以在存在合适的碱(例如DIEA)的条件下和在溶剂(例如MeCN)中，使任选取代的N-保护的ω-氨基-α-溴代酮与磺酰基氨基-酰胺反应，从而得到N-烷基化的磺酰基氨基-酰胺。可以在合适的温度下以及在合适的溶剂(例如DCM或1，2-二氯乙烷)中，通过使用TFAA对所得的中间体处理一段给定的时间，使其被进一步环化为相应的咪唑并[1，2-a]吡啶。在存在Z-保护基团的情况下，可以在合适的溶剂(例如MeCN)中，使用反应试剂(例如TMSI)对侧链胺官能团进行脱保护。可以在合适的溶剂(例如乙酸乙酯)中使用水合肼切割邻苯二甲酰亚胺(Phthalimids)。可以直接对在侧链上带有伯胺基团的任选取代的咪唑并[1，2-a]吡啶进行生物学测试或将其进一步衍生化。例如，可以在存在合适的碱(例如DIEA)的条件下以及在合适的溶剂(例如1，2-二氯乙烷)中，使它与1，5-二溴戊烷反应生成相应的哌啶衍生物。

反应路线7：

咪唑并[1，2-a]吡啶的合成

如反应路线7所示，可以在升高的温度下，在存在合适的碱(例如氢化钠)的条件下以及在合适的溶剂(例如甲苯)中，使用烷基酯——烷基OC(O)A-X对任选取代的内酯进行酰基化。可以通过在浓盐酸中加热所述酰基化的内酯而使其转化为ω-氯代酮。在合适的温度下以及在合适的溶剂(例如乙酸乙酯和氯仿的混合物)中，使任选取代的ω-氯代酮与例如溴化铜(II)反应一段给定的时间，可以生成相应的ω-氯-α-溴代酮。然后，可以在存在合适的碱(例如DIEA)的条件下以及在合适的溶剂(例如MeCN)中，使所述ω-氯-α-溴代酮与磺酰基氨基-酰胺反应，从而得到N-烷基化的磺酰基氨基-酰胺。然后通过可以在合适的温度下以及在合适的溶剂(例如DCM或1，2-二氯乙烷)中，使用TFAA对所得的中间体处理一段给定的时间，使其被进一步环化为相应的咪唑并[1，2-a]吡啶。可以在合适的溶剂(例如MeCN)中，使用封端基团T-H与氯烷基取代的咪唑并[1，2-a]吡啶进行反应，从而插入封端基团T。当所使用的T-H为氢氯化物(hydrochloride)的形式时，还要加入合适的碱例如DIEA以便释放游离的胺T-H。

反应路线8：

咪唑并[1，2-a]吡啶的合成

如反应路线8所示，还可以在存在合适的碱(例如DIEA)的条件下以及在合适的溶剂(例如MeCN)中，使任选取代的ω-氯-α-溴代酮与磺酰基氨基-酯反应，从而得到N-烷基化的磺酰基氨基-酯。可以通过在合适的温度下以及在合适的溶剂(例如DCM或1，2-二氯乙烷)中，使用TFAA对所得的中间体处理一段给定的时间，使其被进一步环化为相应的咪唑并[1，2-a]吡啶。可以在合适的溶剂(例如MeCN)中，使用封端基团T-H与氯烷基取代的咪唑并[1，2-a]吡啶进行反应，从而插入封端基团T。当所用的T-H为氢氯化物的形式时，还要加入合适的碱例如DIEA以便释放游离的胺T-H。可以碱性条件下以及在合适的溶剂(例如水、THF和MeOH的混合物)中，使用反应试剂(例如一水合氢氧化锂)水解任选取代的咪唑并[1，2-a]吡啶的酯官能团。该皂化反应的产物可以以锂盐或相应的酸的形式被分离。或者，可以在酸性条件下使用反应试剂(例如盐酸水溶液)切割所述酯官能团。酯切割的产物可以以酸或锂盐的形式进入下一步反应。可以使用标准的肽偶联方法形成酰胺。可以在存在EDC/HOBt、EDC/HOAt、HATU、例如二异丙基乙胺的碱和例如二氯甲烷的溶剂的条件下使所述酸与胺HNR¹R²偶联。该偶联步骤中可以使用合适的溶剂，例如DCM、DMF、THF或上述溶剂的混合物。合适的碱包括：三乙胺(TEA)、二异丙基乙胺(DIEA)、N-甲基吗啉(NMM)、三甲吡啶或2，6二甲吡啶。当使用EDC/HOBt时可以不需要碱。

反应路线9：

氯吡啶的水解

如反应路线9所示，在合适的温度下，可以使用反应试剂(例如盐酸水溶液)将含有氯吡啶或溴吡啶作为-A-X残基部分的任选取代的咪唑并[1，2-a]吡啶转化为相应的吡啶酮。同时，也水解了酯官能团。所述酸可以如上所述地与胺HNR¹R²偶联。

反应路线10：

α-溴代酮的合成

如反应路线10所示，从羧酸开始，经过三步反应可以获得任选取代的溴代酮。可以在存在合适的碱(例如NMM)的情况下以及在合适的溶剂(例如DCM)中，使用N，O-二甲基羟胺盐酸盐和偶联试剂(例如EDC)将所述羧酸转化为相应的Weinreb酰胺。可以在合适的温度下以及在惰性溶剂(例如THF)中，使用反应试剂(例如甲基锂)将所述Weinreb酰胺转化为相应的甲基酮。可以使用溴和溴化氢的混合物，在乙酸中实现溴化。

反应路线11：

咪唑并[1，2-a]吡啶的合成

如反应路线11所示，可以在例如MeCN的溶剂中，通过使如反应路线1所示制备的任选取代的氨基吡啶-酰胺与α-溴代酮进行反应，生成咪唑并[1，2-a]吡啶6-羧酸酰胺。这一反应可以在烧瓶中在回流的溶剂中或在任何温度下进行，或者在微波反应体系中进行。所述反应产物可以通过标准过程纯化，也可以在冷却时从溶液中直接沉淀出来，这样就可以不必进行进一步的纯化而直接用于后续的反应中。

反应路线12：

Mannich反应

如反应路线12所示，反应路线11的产物——任选取代的咪唑并[1，2-a]吡啶酸酰胺可以经过Mannich反应而生成3-氨基甲基-咪唑并[1，2-a]吡啶6-羧酸酰胺，所述反应是在例如乙酸的溶剂中，将所述咪唑并[1，2-a]吡啶6-羧酸酰胺与合适的胺和足量甲醛溶液反应。可以用酸(例如HCl溶于二噁烷的溶液或TFA溶于DCM的溶液)处理含有一个氮保护基团的二胺，从而对所述化合物进一步脱保护。然后，上述化合物可通过标准纯化方法例如快速色谱或制备型HPLC进行纯化。

反应路线13：

与α，β-不饱和醛的Michael加成

如反应路线13所示，在升高的温度下以及在例如乙酸和乙酸酐的混合物的溶剂中，任选取代的咪唑并[1，2-a]吡啶6-羧酸酰胺可以与α，β-不饱和醛发生Michael加成反应。所述反应也可以在微波反应器中进行。可以在合适的溶剂(例如水和甲醇的混合物)中，使用碱(例如碳酸氢钠)对上述反应的产物进行处理从而得到相应的醛；在存在合适的还原试剂(例如三乙酰氧基硼氢化钠)以及在合适的溶剂(例如DCE)中，所述醛可以与胺T-H发生还原性氨基化反应。

或者，任选取代的咪唑并[1，2-a]吡啶6-羧酸酯也可被用作起始原料。在这种情况下，先使用反应路线8所述的方法引入侧链-CH₂CHR⁸CH₂T，然后再将所述酯官能团转化为酰胺。

反应路线14：

与α，β-不饱和酮的Michael加成

如反应路线14所示，也可以使用反应路线13所述的反应条件，使用α，β-不饱和酮与任选取代的咪唑并[1，2-a]吡啶6-羧酸酰胺进行Michael加成反应。在这种情况下，可以直接对所述Michael加成反应的产物进行还原性氨基化反应。

反应路线15：

侧链烷基化

如反应路线3所述制备的产物——在侧链上带有羧酸官能团的任选取代的咪唑并[1，2-a]吡啶——可在合适的溶剂(例如DCM)中被例如CDI的反应试剂所激活；然后在存在合适的碱(例如DIEA)的条件下，使所得的化合物与N，O-二甲基羟胺盐酸盐反应。该反应的产物与例如甲基锂的反应试剂在合适的溶剂(例如THF或乙醚)中进行反应，生成相应的酮；可以在存在还原剂(例如三乙酰氧基硼氢化钠)的条件下以及在合适的溶剂(例如DCE)中，使用胺T-H对所述酮进行还原性氨基化。

反应路线16：

与胺的氯吡啶反应

如反应路线16所示，带有2-氯吡啶取代基的任选取代的咪唑并[1，2-a]吡啶可以与胺发生反应。氯吡啶可以与纯胺(neat amine)HR^4b在升高的温度下反应，从而得到相应的2-氨基吡啶。该反应也可以在微波反应器中进行。在合适的温度下以及在例如DCM的惰性溶剂中，使用例如三氟甲磺酸的反应试剂处理N-苯甲基化的2-氨基吡啶可以除去苯甲基保护基团。

反应路线17：

与醇的氯吡啶反应

如反应路线17所示，带有2-氯吡啶取代基的任选取代的咪唑并[1，2-a]吡啶可以与醇盐反应，形成相应的烷氧基吡啶。可以使用合适的碱(例如氢化钠)以及在合适的溶剂(例如DMF)中，由相应的醇HR¹⁴制备所述醇盐。在升高的温度下进行所述醇盐与氯吡啶的反应。

反应路线18：

吡啶酮烷基化

如反应路线18所示，带有吡啶酮部分的任选取代的咪唑并[1，2-a]吡啶可被N-烷基化。可以在合适的温度下，在存在碱(例如碳酸铯或碳酸钾)的条件下以及在合适的溶剂(例如丙酮)中，使用溴代烷Br-R¹⁴将吡啶酮部分中的氮原子烷基化。可以以例如酯的形式保护残基R¹⁴上的醇取代基。在烷基化反应之后，可以通过在合适的溶剂(例如水和THF的混合物)中使用例如一水合氢氧化锂的反应试剂水解所述酯而获得游离的醇。

分析性LC-MS

使用分析性LC-MS分析本发明的根据式(I)的化合物。所述条件概括如下。

分析性条件概述：

LC10Advp-Pump(Shimadzu)，装配有SPD-M10Avp(Shimadzu)UVNis二极管阵列检测器和QP2010 MS检测器(Shimadzu)，以ESI+模式在214、254和275nm进行UV检测；

柱：Waters XTerra MS C18，3.5μm，2.1×100mm，

乙腈水溶液(0.15％HCOOH)的线性梯度，方法D和E(曲线梯度)除外。

流速为0.4ml/min；

流动相A：水(0.15％HCOOH)

流动相B：乙腈(0.15％HCOOH)

方法为：

A：5％至95％乙腈水溶液(0.1％HCOOH)的线性梯度

0.00min 5％B

5.00min 95％B

5.10min 99％B

6.40min 99％B

6.50min 5％B

8.00min 停泵

B：10％至90％乙腈水溶液(0.1％HCOOH)的线性梯度

0.00min 10％B

5.00min 90％B

5.10min 99％B

6.40min 99％B

6.50min 5％B

8.00min 停泵

C：5％至95％乙腈水溶液(0.1％HCOOH)的线性梯度

0.00min 5％B

10.00min 95％B

10.10min 99％B

11.40min 99％B

11.50min 5％B

13.00min 停泵

D：起始浓度为1％乙腈

9.00 B.Conc 30

10.00 B.Curve 3

12.00 B.Conc 99

15.00 B.Conc 99

15.20 B.Conc 1

18.00 停泵

E：起始浓度为10％乙腈

10.00 B.Conc 60

11.00 B.Curve 2

12.00 B.Conc 99

15.00 B.Conc 99

15.20 B.Conc 10

18.00 停泵

F：起始浓度15％乙腈

12.00 B.Conc 99

15.00 B.Conc 99

15.20 B.Conc 15

18.00 停止0

下面描述了可以通过反应路线1至18制备的本发明的具体实施例。

表1：

表2

表3：

表4：

表5：

表6：

表7：

提供下述实施例以说明本发明，而并不以任何方式限制本发明的范围。

实施例9的合成：

中间体9a)：

将CuBr₂(1071mg)悬于EtOAc(10ml)中的悬液加热至回流，加入5-(3-甲氧基-苯基)-5-氧代-戊酸甲酯(913mg)溶于CHCl₃所得的溶液。使反应混合物回流过夜。再一次性加入CuBr₂(300mg)，使混合物再回流4h。将反应混合物用硅藻土过滤以除去铜盐，真空除去溶剂至干燥。将残留物用快速色谱(EtOAc/环己烷)纯化从而得到题述化合物。

中间体9b)：

向6-氨基-烟酸(3g)溶于DMF/DCM(80/20)的溶液中加入二异戊基胺(4.1g)、EDC(5g)、HOBt(3.52g)和DIEA(4.54ml)。将反应混合物在50℃下搅拌过夜。将该溶液在真空条件下蒸发至干燥。将残留物再次溶解于少量DMF中，然后加入缓冲液(pH 7)。收集所得的沉淀物，用水洗涤并干燥从而得到题述化合物。

中间体9c)：

向中间体9b)(1g)溶于吡啶(25ml)的溶液中一次性加入p-甲苯磺酰氯(756mg)。将反应混合物在85℃下加热16h。将溶液在真空条件下蒸发至干燥，并将H₂O加入到残留物中。将所得的浆液搅拌30min、然后过滤并用甲苯洗涤。收集残留的固体并干燥，从而得到黄色固体状的题述化合物。

中间体9d)：

向中间体9c)(1781mg)和DIEA(1.198ml)溶于MeCN(50ml)的温溶液中加入中间体9a)(1084mg)。将反应混合物在100℃下加热4h。将溶液在真空条件下蒸发至干燥，并将残留物用快速色谱(EtOAc/环己烷)纯化从而得到题述化合物。

中间体9e)：

将中间体9d)(1.372g)溶解在DCM(50ml)中，并向反应物中充入氩气。向该溶液中加入TFAA(2ml)，并将反应物搅拌16h。将溶液在真空条件下蒸发至干燥，并将残留物用快速色谱(DCM/MeOH)纯化，从而得到无色泡沫状的题述化合物。

中间体9f)：

将中间体9e)(568mg)溶解于THF(40ml)中，并加入甲醇(4ml)。将溶液加热至回流，然后加入硼氢化钠(87mg)。接着，分几次加入硼氢化钠并继续回流。用丙酮终止反应，并在真空下除去溶剂。将残留物用快速色谱(DCM/MeOH 98：2)纯化从而得到题述化合物。

中间体9g)：

向中间体9f)溶于无水DCM(10ml)的溶液中充入氩气，并冷却至0℃。向该溶液中加入TEA(170μl)和甲磺酰基氯(95μl)，并且使反应混合物回温。继续搅拌3h。将反应混合物用H₂O和饱和NaHCO₃溶液洗涤。将有机层通过Na₂SO₄干燥，并在真空下蒸发至干燥，从而得到题述化合物，不进行进一步纯化而直接用于下一步骤。

实施例9：

向吡咯烷(pyrrolidine)(168mg)溶于无水MeCN(5ml)的溶液中加入中间体9g)(86mg)溶于无水MeCN的溶液。将反应物加热至75℃，持续14h。将溶液在真空条件下蒸发至干燥，并将残留物用制备型HPLC纯化，从而得到无色固体状的题述化合物。

实施例17的合成：

中间体17a)：

按照合成中间体9e)时所述的方法进行合成。

中间体17b)：

在0℃下，向中间体17a)(370mg)溶于THF(15ml)的溶液中加入2M氢氧化锂水溶液(0.74ml)。然后，移去冰浴，并将反应物在室温下搅拌2天。将混合物用乙酸乙酯和盐水稀释，并用3％的柠檬酸溶液将pH值调至pH值＝6。在分层后，将有机层用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。在减压下除去溶剂从而得到题述化合物，不进行进一步纯化而直接用于下一步骤。

中间体17c)：

将中间体17b)(315mg)溶解于THF(20ml)中，并加入羰基二咪唑(162mg)。将混合物在室温下搅拌1h，然后冷却至0℃。加入硼氢化钠(38mg)水溶液并持续搅拌10min。用丙酮终止反应并在真空下除去溶剂。将残留物置于乙酸乙酯和水中。在分层后，用5％的柠檬酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤有机层。在用硫酸钠干燥后，在真空中除去溶剂，并将残留物用快速色谱(DCM/MeOH)纯化从而得到题述化合物。

中间体17d)：

将中间体17c)(100mg)溶解于二氯甲烷(10ml)中，并在0℃下加入甲磺酰基氯(0.026ml)和三乙胺(0.046ml)。移去冰浴，并将混合物在室温下搅拌，然后加入额外的甲磺酰基氯(0.007ml)和三乙胺(0.012ml)，并持续再搅拌一小时。将混合物用二氯甲烷稀释，并用水/饱和碳酸氢钠和水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，并在真空下除去溶剂从而得到题述化合物，所述混合物可不进行进一步纯化而直接用于下一步骤。

实施例17：

向吡咯烷(78mg)溶于无水MeCN(1.5ml)的溶液中加入中间体17d)(55mg)溶于无水氰化甲烷(acetonitrile)的溶液。将反应物加热至50℃过夜。将混合物在真空条件下蒸发至干燥，并将残留物用快速色谱(DCM/MeOH)纯化从而得到题述化合物。将游离碱转变为相应的盐酸盐。

实施例21的合成：

中间体21a)：

在0℃下，向中间体9e)(300mg)溶于THF(12ml)中的溶液加入2M氢氧化锂水溶液(0.61ml)。然后移去冰浴，并将反应物在室温下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯和盐水稀释，并用3％的柠檬酸溶液将pH值调至pH值＝6。在分层后，将有机层用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。在减压下除去溶剂从而得到题述化合物，不进行进一步纯化而直接用于下一步骤。

中间体21b)：

将中间体21a)(275mg)溶解于二氯甲烷并加入羰基二咪唑(102mg)。将混合物在室温下搅拌30min，然后加入N，O-二甲基羟胺盐酸盐(62mg)和二异丙基乙胺(0.110ml)。继续搅拌过夜。将混合物用二氯甲烷稀释，并用5％的柠檬酸溶液、碳酸氢钠溶液和盐水洗涤有机相，然后用硫酸钠干燥，并在真空下除去溶剂。用快速色谱(DCM/MeOH)进行纯化生成题述化合物。

中间体21c)：

在-78℃下，向中间体21b)(100mg)溶于无水四氢呋喃的溶液中加入甲基锂溶液(1.5M溶于乙醚，0.12ml)。将混合物搅拌30min然后用饱和氯化铵溶液水解(hydrolyze)。在用乙醚稀释并分层后，用乙醚萃取两次水层。合并有机层并用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并在真空下除去溶剂。通过快速色谱纯化以得到题述化合物。

实施例21：

将中间体21c)(65mg)和吡咯烷(0.013ml)溶解于二氯乙烷(2ml)中，并随后加入冰乙酸(0.008ml)和三乙酰氧基硼氢化钠(42mg)。将混合物在室温下搅拌3天。在减压下除去溶剂，并将残留物用快速色谱(DCM/MeOH)纯化从而得到题述化合物。游离碱被转变为盐酸盐。

实施例25的合成：

实施例25：

向实施例17(407mg)溶于叔丁醇(8ml)的溶液中加入氢氧化钾(240mg)细粉末，并将混合物加热至70℃持续4小时。然后将混合物分配于盐水和乙酸乙酯中。用乙酸乙酯萃取水相三次。合并有机层并用硫酸钠干燥。在减压下除去溶剂，得到题述化合物，并用制备型HPLC纯化。

实施例27的合成：

中间体27a)：

将溴化铜(547mg)悬于乙酸乙酯(13ml)中并加热至回流。然后加入4’-氰基-3-(1，3-二噁烷-2-基)苯丙酮(500mg)溶于氯仿(13ml)中的溶液。将反应混合物回流2h。分两次加入另外340mg的溴化铜，然后回流2小时。将混合物在室温下搅拌过夜，然后用硅藻土过滤。在减压下蒸发溶剂并将产物用色谱纯化。

中间体27b)：

将甲苯磺酸酯中间体9c)(700mg)和二异丙基乙胺(0.52ml)的混合物溶于乙腈(20ml)的溶液加热至50℃。然后加入中间体27a)(480mg)溶于乙腈的溶液，并在50℃下搅拌反应混合物30min，在室温下过夜。在减压下除去溶剂。将混合物用快速色谱纯化从而得到题述化合物。

中间体27c)：

将中间体27b)(620mg)溶解于无水二氯甲烷(16ml)中。将混合物用冰浴冷却至0℃。然后加入三氟乙酸酐(1.62ml)。将混合物在0℃下搅拌30分钟然后在室温下搅拌2小时。

在减压下除去溶剂。将未经纯化的产物中间体27c)用于下一个步骤。

中间体27d)：

将中间体27c)(460mg)溶解于四氢呋喃(16ml)中，并将溶液冷却至0℃。加入6M的HCl(0.46ml)，然后将反应混合物在60℃下搅拌过夜。加入另外3个当量的6N HCl，并将混合物在60℃下持续搅拌。将混合物用碳酸钠中和并将产物用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥。在减压下除去溶剂，并将混合物用快速色谱纯化从而得到题述化合物。

实施例27：

将中间体27d)(19mg)溶解于二氯乙烷(0.3ml)中，加入1-甲基哌嗪(5μl)，搅拌反应混合物30min。在加入三乙酰氧基硼氢化钠(12mg)后，将混合物在室温下搅拌过夜。加入水，并用二氯甲烷萃取水相两次。合并有机层并用硫酸钠干燥，在减压下除去溶剂。将题述化合物用制备型HPLC纯化。

实施例47的合成：

中间体47a)：

在氩气气氛下，向悬于乙酸乙酯(100ml)中的溴化铜(ll)(9.523g)搅拌悬液中加入溶于氯仿(100ml)的2-(5-氯代戊酰)噁唑(4.000g)溶液。将所得的混合物在回流温度下搅拌过夜。将反应混合物通过硅藻土过滤，并将滤出物蒸发至干燥。将粗产物用柱色谱纯化。

中间体47b)：

在50℃下，向溶于乙腈(75ml)中的中间体47a)(2665mg)的搅拌溶液中加入DIEA(3658μl)。将所得的溶液搅拌15分钟，然后加入溶于乙腈(75ml)的中间体9c)。将所得的溶液在50℃下搅拌3h。除去挥发物，将产物用柱色谱纯化。

中间体47c)：

在0℃下，向溶于无水DCM(45ml)的中间体47b)(4.65g)的搅拌溶液中加入TFAA(5ml)。将反应混合物回温至室温并搅拌3h。将反应混合物用NaHCO₃饱和溶液中和，然后分离各相。将有机层用NaHCO₃饱和溶液萃取两次。合并水层并用DCM反萃取。合并有机层并用盐水洗涤、用Na₂CO₃干燥、过滤并除去挥发物。将粗产物用柱色谱纯化。

实施例47：

将中间体47c)(1068mg)溶解于乙腈(100ml)中。加入吡咯烷(2003μl)，将反应混合物在70℃下搅拌8h。除去挥发物，并将粗产物用制备型LC-MS纯化。将纯化的化合物置于乙酸乙酯中，并用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤。将水相用乙酸乙酯萃取三次。合并有机层并用盐水洗涤、用硫酸钠干燥并除去溶剂。将所得的油溶解于乙酸乙酯(10ml)中，并加入溶于乙醚(2ml)中的1M的HCl。除去挥发物，获得乳白色粉末状的产物。

实施例50的合成：

实施例50：

将实施例25(422mg)溶解于浓缩的盐酸中，并回流2小时。在减压下除去溶剂，从而得到题述化合物，再用制备型HPLC纯化。

实施例54的合成：

中间体54a)：

将2-(3-甲氧基-苯基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-6-羧酸甲酯(1000mg)、异丁烯醛(990mg)、乙酸酐(5.5ml)和冰乙酸(14.5ml)的混合物在180℃下用微波辐射的方式加热75分钟。然后在减压下除去挥发物。然后加入甲醇和1N的碳酸氢钠水溶液，并将混合物搅拌2h。除去溶剂，并将残留物溶解于乙酸乙酯和水中。将有机层分离，并用硫酸钠干燥。在减压下除去溶剂，从而得到题述化合物，将未经进一步纯化的题述化合物带入到下一步骤中。

中间体54b)：

将中间体54a)(450mg)溶解于二氯甲烷(27ml)中，加入吡咯烷(0.11ml)，并在室温下将混合物搅拌30分钟。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(360mg)，并将反应物搅拌过夜。加入水，将水相用二氯甲烷萃取两次。合并有机层并用硫酸钠干燥，在减压下除去溶剂。将产物用快速色谱纯化。

中间体54c)：

将中间体54b)(78mg)溶解于四氢呋喃(3.5ml)中，冷却至0℃。然后加入氢氧化锂(0.19ml，2N水溶液)，然后将混合物静置使其回温至室温，并搅拌2天。加入乙酸乙酯和盐水。通过加入数滴柠檬酸(5％)将白色沉淀物溶解。将有机层分离，并用硫酸钠干燥。在减压下将溶剂除去从而得到中间体54c)。

实施例54：

将中间体54c)(38mg)溶解于DMF(5ml)中。然后加入O-(7-偶氮苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU，44mg)、二异丙基乙胺(20μl)和二异戊基胺(24μl)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将溶剂蒸发。然后将产物溶解于乙酸乙酯中。将有机层用盐水洗涤，然后用饱和的碳酸氢钠洗涤，并再次用盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥、过滤，并将溶剂蒸发。将产物用制备型HPLC纯化从而得到实施例54。

实施例58的合成：

中间体58a)：

在0℃下，向溶于DCM(25ml)的5-甲基-吡啶-2-羧酸(1000mg)中加入EDC(1608mg)。将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，然后加入N，O-二甲基羟胺盐酸盐(818mg)，然后加入NMM(922μl)。将反应物回温至室温并搅拌过夜。将反应混合物用DCM(25ml)稀释，然后用NaHCO₃饱和溶液(2x25ml)萃取。将水层用DCM(25ml)反萃取。合并有机层并用盐水洗涤、用Na₂SO₄干燥、过滤，并除去溶剂。将粗产物用柱色谱纯化。

中间体58b)：

在-78℃下、氩气气氛中，向溶于无水THF(10ml)的中间体58a)(1270mg)搅拌溶液中小心地加入甲基锂(1.6M溶于Et₂O的溶液、13.2ml)。将反应混合物在-78℃下搅拌90分钟，然后用NH₄Cl饱和溶液(10ml)水解。将反应混合物用乙醚(50ml)稀释。将水层用乙醚(2x10ml)反萃取。合并有机层并用盐水洗涤、用Na₂SO₄干燥、过滤，小心地除去溶剂。将产物用Kugelrohr蒸馏(10mbar、130℃)纯化。

中间体58c)：

在室温下，向溶于AcOH(10ml)的中间体58b)(541mg)的搅拌溶液中加入溶于AcOH(2ml)的33％的HBr，然后加入溴(53μl)。在30分钟之后，再加入溴(50μl)，并将反应混合物搅拌90分钟。将反应混合物在真空下浓缩，然后倒入饱和的NaHCO₃水溶液。用乙酸乙酯将其萃取三次。合并有机层并用Na₂SO₄干燥、过滤，并小心地除去溶剂。将粗产物用柱色谱纯化。

中间体58d)：

将中间体58c)(350mg)和中间体9b)(522mg)溶解于MeCN(10ml)中，然后用微波辐射加热至180℃持续30分钟。除去挥发物，并将粗产物用柱色谱纯化。

中间体58e)：

将丙烯醛(acroleine)(233μl)加入到溶于冰乙酸(6ml)的中间体58d)(381mg)溶液中，接着加入乙酸酐(2ml)，并将混合物在微波反应器中在180℃下加热30分钟。将反应混合物注入到饱和碳酸氢钠水溶液(100ml)和饱和碳酸钠水溶液(50ml)的混合物中，以达到碱性pH值，然后用乙酸乙酯(2x50ml)进行萃取。将有机层用盐水洗涤、用Na₂SO₄干燥、过滤，并除去溶剂。将1M碳酸氢钠水溶液(10ml)加入到溶于甲醇(50ml)中的粗产物中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物在真空中浓缩，然后分配到饱和NaHCO₃水溶液和DCM中。将水层用DCM萃取两次。合并有机层并用盐水洗涤、用Na₂SO₄干燥、过滤，并除去溶剂。

实施例58：

将溶于THF(463μl)的中间体58e)(83mg)和2M的二甲基胺溶解于1，2-二氯乙烷(5ml)中。1小时后在室温下搅拌，加入三乙酰氧基硼氢化钠(782mg)。将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用1M的NaHCO₃(2x2ml)萃取。将水层用DCE(2ml)反萃取。合并有机层并用盐水洗涤、用Na₂SO₄干燥、过滤，并在真空中蒸发至干燥。将粗产物用制备型LC-MS纯化。

实施例59的合成：

中间体59a)：

在氩气气氛下，向悬于乙酸乙酯(200ml)中的溴化铜(ll)(19.36g)搅拌悬液中加入溶于氯仿(200ml)的6-氯-3-(5-氯戊酰)-吡啶(10.06g)溶液。将所得的混合物在回流下搅拌20小时。将反应混合物通过硅藻土过滤，并在真空中浓缩。

将过滤后的残留物用乙腈洗涤，并将滤出物在真空下浓缩。将残留物置于乙酸乙酯(500ml)中，并用饱和的碳酸氢钠溶液(500ml)洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次。将有机层与第一分离批次合并，并用饱和碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤、用MgSO₄干燥、过滤，并在减压下除去溶剂。

中间体59b)：

在氩气气氛下向溶于无水吡啶(400ml)的6-氨基烟酸甲酯(20.09g)溶液中加入甲苯磺酰氯(28.94g)。将反应混合物在85℃下搅拌16h。在减压下除去溶剂，将残留物置于水中，并搅拌2h。形成浅褐色沉淀物。将其过滤、用水洗涤两次，并用Sicapent干燥。

中间体59c)：

将溶于乙腈(300ml)的中间体59b)(9.74g)和中间体59a)(10.24g)的混合物用乙基二异丙基胺(6654μl)进行处理，并在50℃下搅拌过夜。在减压下除去溶剂。将产物用快速色谱纯化。

中间体59d)：

将中间体59c)(15.07g)溶解于无水DCM(180ml)中，并冷却至0℃。加入三氟乙酸酐(20ml)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用DCM(200ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠溶液小心地萃取。将水层用DCM萃取两次。合并有机层并用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并在减压下除去溶剂。

中间体59e)：

将中间体59d)(5.0g)、乙腈(120ml)和吡咯烷(10.9ml)在70℃下搅拌过夜。在减压下除去溶剂。将产物在丙酮中研磨、过滤并在真空烘箱中干燥过夜。

中间体59f)：

将中间体59e)(4.6g)溶解于3M的HCl水溶液中(150ml)，并将反应混合物在120℃下搅拌36h。在减压下除去溶剂，并将残留物与甲苯共同蒸发两次，并将产物在高真空度下干燥2天。将产物不进行进一步的纯化而直接用于下一步骤。

实施例59：

将中间体59f)(1000mg)溶解于DMF(10ml)中，然后加入EDC(525mg)、HOAt(373mg)和DIEA(1431μl)。将反应混合物搅拌1h。加入二异戊基胺(562μl)并将反应混合物搅拌过夜。除去挥发物，并将残留物溶解于乙酸乙酯(200ml)中。将有机层用饱和NaHCO₃溶液(2x100ml)洗涤，然后合并水层并用乙酸乙酯(100ml)反萃取。合并有机层并用盐水洗涤、用Na₂SO₄干燥、过滤，并在减压下除去溶剂。将粗产物用制备型LC-MS纯化。

实施例64的合成：

实施例64：

将溶于二甲基甲酰胺(4ml)的实施例50(200mg)、O-(7-偶氮苯并三唑)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU、185mg)和二异丙基乙胺(1.95ml)在室温下搅拌15分钟，然后加入溶于四氢呋喃(0.28ml)的甲基胺2N溶液，并持续搅拌过夜。加入乙酸乙酯。将有机层用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，并用硫酸钠干燥。在减压下除去溶剂，从而得到题述化合物，并用制备型HPLC纯化。

实施例79的合成：

中间体79a)：

在50℃下，向悬于乙腈(15ml)中的中间体59a)(679mg)搅拌悬液中加入DIEA(806μl)。将所得的溶液搅拌10分钟，然后加入溶于乙腈(15ml)中的中间体9c)(993mg)。将所得的溶液在50℃下搅拌2h。将溶剂除去并所得到的油状物用柱色谱纯化。

中间体79b)：

在0℃下，向悬于无水DCM(18ml)中的中间体79a)(1.35g)搅拌悬液中加入TFAA(2ml)。然后将反应混合物回温至室温并搅拌过夜。除去挥发物并将所得到的油用柱色谱纯化。

中间体79c)：

将中间体79b)(100mg)、乙腈(5ml)和吡咯烷(167μl)在70℃下搅拌过夜。在减压下除去溶剂。将产物用柱色谱纯化。

实施例79：

在氩气气氛下，向悬于DMF(5ml)的氢化钠(31mg)悬液中加入乙二醇(22μl)。将反应混合物在室温下搅拌30min，然后加入溶于DMF(5ml)的中间体79c)(70mg)。将混合物在140℃下搅拌过夜。将混合物冷却并用水进行水解。将溶剂蒸发，并将残留物置于乙酸乙酯中。将有机层用水和盐水萃取，并在减压下除去溶剂。将粗产物用制备型LC-MS纯化。

实施例90的合成：

中间体90a)：

将2-(2-氯-吡啶-3-基)-3-(3-吡咯烷-1-基-丙基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-6-羧酸双-(3-甲基-丁基)-酰胺(100mg)和苯甲基胺(0.5ml)用微波在150℃下加热2h。将混合物用快速色谱纯化从而得到题述化合物。

实施例90：

将三氟甲烷磺酸(300mg)在0℃下滴加到溶于无水二氯甲烷(1.5ml)的中间体90a)(78mg)中。然后将混合物加热到40℃持续3小时。将混合物再次冷却至0℃，再加入300mg的三氟甲烷磺酸，接着加热至回流2小时。将溶剂在减压下蒸发。在用制备型HPLC纯化后获得题述化合物。

实施例91和92的合成：

实施例91和92：

将实施例59)(100mg)溶解于丙酮(5ml)中，然后加入碳酸钾(41mg)和3-溴-1-丙醇(20μl)。将反应混合物在60℃下搅拌过夜，过滤，并在减压下除去溶剂。将产物用制备型LC-MS分离。

实施例98的合成：

中间体98a)：

在使用之前，在减压下(bp 106℃/22mbar)将δ-戊内酯蒸馏。在回流条件下，向悬浮于无水甲苯(100ml)中的氢化钠(60％溶于油的溶液，2.66g)的搅拌悬液中滴加溶于无水甲苯(50ml)中的四氢-2H-吡喃-4-碳酸甲酯(8.87ml)和δ-戊内酯(6.34g)的混合物。在加入后，将反应混合物在回流温度下搅拌过夜。在冷却至室温后，将反应混合物注入冰水(300ml)中。用水(150ml)和甲苯(50ml)回收烧瓶中的固体。在相分离后，用AcOH(5ml)使水层酸化，并用乙酸乙酯(3x150ml)萃取。合并有机层并用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥、过滤，并除去挥发物。将粗产物用柱色谱纯化。

中间体98b)：

在80℃下将中间体98a)(1.86g)在浓盐酸(10ml)中搅拌1h。将反应混合物注入到饱和Na₂CO₃(300ml)中，并用DCM(3x100ml)萃取。合并有机层并用盐水洗涤、用Na₂SO₄干燥、过滤，并除去挥发物。

中间体98c)：

在氩气气氛下，向悬于乙酸乙酯(25ml)的溴化铜(ll)(1965mg)搅拌悬液中加入溶于氯仿(25ml)的中间体98b)(934mg)。将所得的混合物在回流下搅拌过夜。将反应混合物用硅藻土过滤，并将硅藻土衬垫(Celite pad)用乙酸乙酯彻底洗涤。将有机层用饱和NaHCO₃溶液萃取两次。将水层用乙酸乙酯反萃取。合并有机层并用盐水洗涤、用Na₂SO₄干燥、过滤，并除去挥发物。

中间体98d)：

在50℃下，向悬于乙腈(50ml)的9c)(1994mg)的搅拌悬液中加入DIEA(1610μl)。将所得的溶液在50℃下搅拌15分钟，然后加入溶于乙腈(50ml)的中间体98c)(1.25g)。将所得的反应混合物在50℃下搅拌过夜。除去挥发物并用柱色谱纯化粗产物。

中间体98e)：

在氩气气氛下，向溶于DCE(9ml)的中间体98d)(525mg)溶液中加入TFAA(1ml)，并将反应混合物在室温下搅拌4天。另外加入TFAA(1ml)和DCE(9ml)，并将反应混合物加热至回流过夜。除去挥发物，将残留物置于乙酸乙酯(50ml)中。将有机层用饱和Na₂CO₃(25ml)萃取两次。合并水层并用乙酸乙酯(25ml)反萃取。合并有机层并用盐水洗涤、用Na₂SO₄干燥、过滤，并除去挥发物。将粗产物用柱色谱纯化。

实施例98：

向溶于MeCN(10ml)的中间体98e)(85mg)的搅拌溶液中加入吡咯烷(172μl)，将反应混合物在50℃下在密封管中搅拌2天。除去挥发物，并将粗产物用制备型LC-MS纯化。

实施例109的合成：

中间体109a)：

在0℃下，向溶于DCM(100ml)的环丙基乙酸(2002mg)的溶液中加入EDC(3834mg)和HOBt(3063mg)。将反应混合物在0℃下搅拌30min。加入环丙基乙胺(1703mg)和DIEA(10.45ml)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用1.0N的HCl(100ml)、饱和NaHCO₃(100ml)、水(100ml)和盐水(100ml)萃取。将有机层用Na₂SO₄干燥，并在真空中蒸发至干燥。

中间体109b)：

在氩气气氛下，在室温下向悬于无水THF(60ml)的氢化铝锂(1389mg)的悬液中，加入溶于无水THF(40ml)的中间体109a)(2448mg)溶液。将反应混合物加热至回流温度，并再搅拌2天。通过在0℃下加入10％的KOH水溶液(100ml)对反应混合物进行水解。在室温下搅拌20分钟后，将反应混合物过滤并用乙醚(100ml)洗涤固体物质。将两相滤出物转移到分离漏斗中，并将有机层用水和盐水洗涤。合并水层并用乙醚(2x100ml)洗涤两次。合并有机层并用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并在减压下除去溶剂。

中间体109c)：

将中间体59d)(2.0g)、乙腈(30ml)和2-甲基-吡咯烷(1.27ml)在70℃下搅拌过夜。加入DIEA(500μl)，并将混合物在70℃下搅拌20h。在减压下除去溶剂，并将残留物置于乙酸乙酯中，用饱和的碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤两次。将有机层用硫酸钠干燥、过滤、并在减压下除去溶剂。将粗产物用柱色谱纯化。

中间体109d)：

将中间体109c)(1.7g)溶解于3M的HCl水溶液(100ml)中，将反应混合物在120℃下搅拌24h。在减压下除去溶剂，将残留物用甲苯共同蒸发两次，将产物在高真空中干燥3h，然后在40℃的炉内内并且在减压下干燥3天。将产物用于下一步骤而不进行进一步的纯化。

实施例109：

将中间体109d)(600mg)溶解于DMF(5ml)中，然后加入EDC(299mg)、HOAt(212mg)和DIEA(815μl)。将反应混合物搅拌1h。加入中间体109b)(239mg)并将反应混合物搅拌过夜。除去挥发物，然后将残留物溶解于乙酸乙酯(100ml)中。将有机层用饱和NaHCO₃溶液(2x50ml)洗涤，然后合并水层并用乙酸乙酯(50ml)反萃取。合并有机层并用盐水洗涤、用Na₂SO₄干燥、过滤，并在减压下除去溶剂。将粗产物用制备型LC-MS纯化。

实施例110的合成：

实施例110：

将实施例109(230mg)溶解于丙酮(7ml)中，然后加入碳酸铯(222mg)和乙酸2-溴乙酯(55μl)。将反应混合物在60℃下搅拌过夜、过滤、并在减压下除去溶剂。将N-和O-烷基化的产物用制备型LC-MS分离。

实施例111和112的合成：

实施例111和112：

将实施例110和O-烷基化的副产物(纯化前的粗产物)(116mg)的混合物溶解于THF(10ml)中并冷却至0℃。加入溶于水(2ml)的一水合氢氧化锂(30mg)，并且将反应混合物在0℃下搅拌30min，并在室温下搅拌2.5h。将反应混合物浓缩，然后分配于乙酸乙酯和水之间。将水层用乙酸乙酯萃取三次。合并有机层并用盐水洗涤、用硫酸钠干燥，并在减压下除去溶剂。将产物用制备型LC-MS分离。

实施例114的合成：

中间体114a)：

向溶于MeCN(2ml)的6-氨基-N，N-二-(3-甲基-丁基)-烟酰胺(100mg)溶液中加入溶于MeCN(2ml)的2-溴-3’-甲氧基苯乙酮，并将混合物在170℃下用微波辐射加热40min。将溶剂蒸发，并将粗混合物用快速色谱(EtOAc/环己烷)纯化，从而得到题述化合物。

实施例114：

向溶于HOAc和甲醛(37％水溶液，8.2μl)的4-二甲基氨基-哌啶(14.1mg)溶液中加入溶于HOAc的中间体114a)(30mg)，并将混合物在60℃下加热16h。在溶剂蒸发之后，将粗反应混合物用制备型HPLC纯化，从而得到题述化合物

实施例119的合成：

中间体119a)：

向溶于MeCN(10ml)的6-氨基-N，N-二-(3-甲基-丁基)-烟酰胺(1000mg)溶液中加入溶于MeCN(10ml)的2-溴-4’-氯苯乙酮，并将混合物在160℃下用微波辐射加热15min。在冷却时收集并干燥所形成的沉淀物，从而得到题述化合物。

实施例119：

向溶于HOAc和甲醛(37％水溶液，13.5μl)的[1，4]二氮杂草-1-羧酸叔丁基酯([1，4]diazepane-1-carboxylic acid tert-butyl ester)(22.3mg)溶液中加入溶于HOAc的中间体119a)(30mg)，并将混合物在60℃下加热16小时。在蒸发了溶剂后，将粗反应混合物用快速色谱(DCM/MeOH)纯化。然后将所得的Boc-保护的中间体用4M的HCl/二氧杂环乙烷(dioxane)处理1小时，从而得到题述化合物。

实施例143的合成：

中间体143a)：

将2-环丙基-乙胺盐酸盐(700mg)悬于二氯甲烷(14ml)中。将溶液冷却至0℃，接着加入异戊酰氯(0.84ml)和三乙胺(1.60ml)。将反应回温至室温，并将反应混合物搅拌4h。将溶剂蒸发，并将残留物分配到乙酸乙酯(50ml)和饱和NaHCO₃(40ml)中。将水层用乙酸乙酯(50ml)萃取两次，并合并有机相然后用盐水(40ml)洗涤。将有机层用Na₂SO₄干燥、过滤、并在减压下除去溶剂。将粗产物用制备型LC-MS纯化。

中间体143b)：

将中间体143a)(838mg)用硼烷-四氢呋喃复合物(溶于THF的1M溶液，14.9ml)处理，并将反应混合物在回流下搅拌6h。然后将反应混合物冷却至0℃，并小心地加入甲醇(7ml)。将反应混合物回流5h并冷却至0℃。加入溶于DCM(7ml)的二碳酸二叔丁酯，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。除去挥发物，并将残留物溶解于乙酸乙酯(100ml)中。将有机层用水(60ml)和盐水(60ml)洗涤。将有机层用Na₂SO₄干燥、过滤，并在减压下除去溶剂。直接使用所述粗产物而不进行纯化。

中间体143c)：

将中间体143b)(1.26g)溶解于DCM(30ml)中，并加入溶于二氧杂环乙烷(1.48ml)的4M HCl。将反应混合物在室温下搅拌14h。将溶剂蒸发，并将所得的白色固体用乙醚粉碎，再将产物通过过滤的方式收集，用乙醚洗涤并进行高真空干燥。直接使用所得固体而不进行另外的纯化。

中间体143d)：

在氩气气氛下，向悬于乙酸乙酯(60ml)的溴化铜(ll)(3.62g)搅拌悬液中加入溶于氯仿(60ml)的5-氯-1-(4-氰基苯基)-1-氧戊烷(3.00g)。将所得的混合物回流搅拌过夜。另外加入溴化铜(ll)(0.60g)，并将反应物回流3h。将反应混合物用硅藻土过滤、用乙酸乙酯洗涤，并在真空中浓缩。将产物用快速色谱纯化。

中间体143e)：

将中间体143d)(3.00g)溶解于乙腈(80ml)中。加入二异丙基乙胺(3.2ml)，并在85℃下加热反应混合物。加入溶解于乙腈(20ml)的中间体59b)(2.80g)，并将反应混合物回流1h。在减压下除去溶剂。将产物用快速色谱纯化。

中间体143f)：

将中间体143e)(4.67g)溶解于无水DCM(90ml)中，并冷却至0℃。加入三氟乙酸酐(12ml)，并将反应混合物在室温下搅拌6h。在减压下除去溶剂。将残留物溶解于乙酸乙酯(200ml)中，并注入饱和碳酸氢钠溶液中，将所得的白色沉淀物滤出，用水洗涤并在高真空下干燥。

中间体143g)：

将中间体143f)(1.50g)、乙腈(40ml)和吡咯烷(3.5ml)在70℃下搅拌6h。在减压条件下除去一半溶剂，并将剩余的溶液用冰浴冷却2h。将所得的固体过滤，并用冷却的乙腈洗涤。将产物在高真空下干燥。

中间体143h)：

将中间体143g)(313mg)溶解于THF(10ml)中，加入2M LiOH水溶液(0.92ml)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。另外加入THF(1.5ml)和2MLiOH水溶液(0.1ml)，并将反应混合物在室温下搅拌3h。将所得的固体过滤，用冷却的THF洗涤并在高真空下干燥。将产物直接用于下一步骤而不进行进一步的纯化。

实施例143：

将中间体143h)(40mg)溶解于DMF(3ml)中，然后加入HATU(49mg)、DIEA(22μl)和中间体143c)(23mg)。将反应混合物搅拌1h。由于反应并未完成，因此另外加入中间体143c)(10mg)和DIEA(22μl)，并将反应混合物搅拌2h。除去挥发物，然后将残留物溶解于乙酸乙酯(50ml)中。将有机层用盐水(40ml)、饱和NaHCO₃溶液(40ml)和盐水(40ml)洗涤。将有机层用Na₂SO₄干燥、过滤，并在减压下除去溶剂。将粗产物用制备型LC-MS纯化。

生物学测定

A.结合测定

使用膜结合测定来识别荧光标记的NDP-α-MSH与表达人类黑皮质素受体的HEK293细胞膜制品之间结合的竞争性抑制剂。

将测试化合物或未标记的NDP-α-MSH按照不同的浓度分散在384孔的微量滴定板上。再将单一浓度的荧光标记的NDP-α-MSH分散至板上，然后再加入膜制品。将所述板在室温下孵育5小时。

使用荧光偏振微量滴定板读数仪来测定荧光偏振的角度。

B.功能测定

在基于均一膜的测定中测定了人类黑皮质素受体的激动活性。通过荧光偏振的结果可以看出，未标记的cAMP和固定量的荧光标记cAMP互相竞争性地结合cAMP特异性抗体上的限定数量的结合位点。

将测试化合物或未标记的NDP-α-MSH按照不同的浓度分散在384孔的微量滴定板上。再加入来源于表达人类黑皮质素受体的HEK293细胞的膜制品。在经过短暂的预孵育之后，加入合适量的ATP、GTP和cAMP抗体，并将板再次孵育，然后加入荧光标记的cAMP缀合物。将板置于4℃下孵育2小时，然后在荧光偏振微量滴定板读数仪上读数。将对测试化合物应答产生的cAMP的量与由于NDP-α-MSH刺激产生的cAMP的量进行比较。

测试了本发明的代表性化合物，发现它们与黑皮质素-4受体结合。所述化合物与黑皮质素-4受体结合的IC₅₀值通常小于2μM。还在功能测定中测试了本发明的代表性化合物，发现它们通常不会激活黑皮质素-4受体。

表8：本发明各实例的生物学数据

在下表中列出了hMC-4R结合测定的IC₅₀值和功能测定的EC₅₀值。将所述IC₅₀和EC₅₀值分为三类：a：小于0.1μM；b：大于0.1μM并小于等于1.0μM；c：大于1.0μM。

实例	hMC-4R结合测定IC₅₀/μM	hMC-4R功能测定EC₅₀/μM	功能测定中的激活％
实例	hMC-4R结合测定IC₅₀/μM	hMC-4R功能测定EC₅₀/μM	功能测定中的激活％	SHU-9119	a	-	7
NDP-α-MSH	a	a	100	SHU-9119	a	-	7
NDP-α-MSH	a	a	100	1	b	-	0
2	a	-	0	1	b	-	0
2	a	-	0	3	b	-	0
4	b	-	0	3	b	-	0
4	b	-	0	5	b	-	0
6	a	-	0	5	b	-	0

7	b	-	0
7	b	-	0	8	a	-	0
9	a	-	0	8	a	-	0
9	a	-	0	10	c	-	0
11	a	-	0	10	c	-	0
11	a	-	0	12	a	-	0
13	c	-	0	12	a	-	0
13	c	-	0	14	a	-	0
15	b	-	0	14	a	-	0
15	b	-	0	16	a	-	0
17	a	-	0	16	a	-	0
17	a	-	0	18	b	-	0
19	a	-	0	18	b	-	0
19	a	-	0	20	b	a	-18
21	a	-	0	20	b	a	-18
21	a	-	0	22	b	-	0
23	b	-	0	22	b	-	0
23	b	-	0	24	c	-	0
25	a	-	0	24	c	-	0
25	a	-	0	26	b	-	0
27	c	-	0	26	b	-	0
27	c	-	0	28	b	-	0
29	a	-	0	28	b	-	0
29	a	-	0	30	a	-	0
31	a	-	0	30	a	-	0
31	a	-	0	32	b	-	0
33	a	a	-22	32	b	-	0
33	a	a	-22	34	a	a	-18
35	a	-	0	34	a	a	-18
35	a	-	0	36	c	-	0
37	a	-	0	36	c	-	0
37	a	-	0	38	c	-	0

39	a	-	0
39	a	-	0	40	b	-	0
41	a	-	0	40	b	-	0
41	a	-	0	42	a	-	0
43	a	-	0	42	a	-	0
43	a	-	0	44	a	-	0
45	a	-	0	44	a	-	0
45	a	-	0	46	b	-	0
47	a	-	0	46	b	-	0
47	a	-	0	48	a	-	0
49	a	-	0	48	a	-	0
49	a	-	0	50	b	-	-1
51	a	-	0	50	b	-	-1
51	a	-	0	52	b	-	0
53	b	-	3	52	b	-	0
53	b	-	3	54	b	-	0
55	b	-	0	54	b	-	0
55	b	-	0	56	a	-	0
57	a	-	0	56	a	-	0
57	a	-	0	58	c	-	0
59	a	-	0	58	c	-	0
59	a	-	0	60	b	-	0
61	b	-	0	60	b	-	0
61	b	-	0	62	b	-	0
63	b	-	0	62	b	-	0
63	b	-	0	64	a	-	0
65	a	-	0	64	a	-	0
65	a	-	0	66	b	-	0
67	a	-	0	66	b	-	0
67	a	-	0	68	b	-	0
69	a	-	0	68	b	-	0
69	a	-	0	70	b	-	0

71	b	-	0
71	b	-	0	72	b	-	2
73	b	-	-3	72	b	-	2
73	b	-	-3	74	b	-	1
75	a	-	1	74	b	-	1
75	a	-	1	76	b	-	4
77	a	-	4	76	b	-	4
77	a	-	4	78	a	-	2
79	a	-	11	78	a	-	2
79	a	-	11	80	b	b	-35
81	a	-	-9	80	b	b	-35
81	a	-	-9	82	a	a	-17
83	a	-	-1	82	a	a	-17
83	a	-	-1	84	a	-	-8
85	a	-	-2	84	a	-	-8
85	a	-	-2	86	a	-	-11
87	c	-	0	86	a	-	-11
87	c	-	0	88	b	-	-2
89	a	a	-25	88	b	-	-2
89	a	a	-25	90	b	c	-41
91	b	b	-29	90	b	c	-41
91	b	b	-29	92	b	a	-31
93	b	-	0	92	b	a	-31
93	b	-	0	94	c	-	-13
95	a	-	0	94	c	-	-13
95	a	-	0	96	a	-	0
97	a	-	1	96	a	-	0
97	a	-	1	98	b	-	-8
99	a	-	4	98	b	-	-8
99	a	-	4	100	a	-	-22
101	a	-	-25	100	a	-	-22
101	a	-	-25	102	a	-	-15

103	a	-	-20
103	a	-	-20	104	a	-	-15
105	b	-	-24	104	a	-	-15
105	b	-	-24	106	b	-	0
107	b	-	-17	106	b	-	0
107	b	-	-17	108	b	-	-19
109	a	-	-23	108	b	-	-19
109	a	-	-23	110	b	-	-23
111	b	-	-25	110	b	-	-23
111	b	-	-25	112	a	-	-9
113	b	-	0	112	a	-	-9
113	b	-	0	114	b	-	0
115	b	-	0	114	b	-	0
115	b	-	0	116	b	-	0
117	b	-	0	116	b	-	0
117	b	-	0	118	b	-	0
119	b	-	0	118	b	-	0
119	b	-	0	120	c	-	0
121	c	-	0	120	c	-	0
121	c	-	0	122	b	-	0
123	c	-	0	122	b	-	0
123	c	-	0	124	b	-	0
125	b	-	0	124	b	-	0
125	b	-	0	126	c	-	0
127	b	-	0	126	c	-	0
127	b	-	0	128	c	-	0
129	c	-	0	128	c	-	0
129	c	-	0	130	c	-	0
131	a	-	0	130	c	-	0
131	a	-	0	132	b	-	0
133	b	-	0	132	b	-	0
133	b	-	0	134	b	-	0

135	c	-
135	c	-	136	b	-	0
137	b	-	136	b	-	0
137	b	-	138	b	-	0
139	b	-	138	b	-	0
139	b	-	140	b	-	0
141	b	-	140	b	-	0
141	b	-	142	a	-	0
143	a	-	142	a	-	0
143	a	-	144	b	-	0
145	a	-	144	b	-	0
145	a	-	146	b	-	0
147	c	-	146	b	-	0
147	c	-	148	b	-	-12
149	b	-	148	b	-	-12
149	b	-	150	b	-	0

C.体内食物摄入模型

1.自发进食模式

在使用测试化合物对大鼠腹腔注射(i.p.)或口服(p.0.)给药后，测量食物摄入情况(参见例如：Chen，A.S.et al.Transgenic Res 2000 Apr；9(2)：145-54)。

2.LPS-诱导的厌食和肿瘤诱导的恶病质的模型

在使用测试化合物对大鼠i.p.或p.o.给药后，测量所述化合物对于通过给予脂多糖(LPS)诱导的厌食或肿瘤生长诱导的恶病质的预防或缓解作用(参见例如：Marks，D.L.；Ling，N and Cone，R.D.Cancer Res 2001 Feb 15；61(4)：1432-8)。

D.体外ADME测定

1.微粒体稳定性

实验方法

制备混合的人类肝微粒体(混合男性与女性)以及混合的大鼠肝微粒体(雄性Sprague Dawley大鼠)。将微粒体贮藏于-80℃下直至使用前。

将微粒体(终浓度为0.5mg/ml)、0.1M磷酸缓冲液(pH7.4)和测试化合物(底物终浓度＝3μM；DMSO终浓度＝0.25％)一起置于37℃下预孵育，然后加入NADPH(终浓度＝1mM)启动反应。最终的孵育体积为25μl。对于每种测试化合物均设置对照，所述对照是加入0.1M磷酸缓冲液(pH7.4)而不加入NADPH(NADPH-)。对于每一种类包含两种对照化合物。对于每种测试化合物均分别进行孵育。

将每种化合物分别孵育0、5、15、30和45min。对照(即NADPH-)样本仅孵育45min。在合适的时间点，通过加入含有内标的50μl甲醇溶液终止反应。将培养板在4℃下以2,500rpm离心20min以沉淀蛋白。

定量分析

在沉淀蛋白后，合并样本上清液，并且使用通用LC-MS/MS条件进行分析，质谱上样管(cassette)的每管中最多含4种测试化合物。

数据分析

绘制峰面积比(化合物峰面积/内标峰面积)相对于时间的图线，并从该图中测定线的斜率。然后使用下述公式计算半衰期和固有清除率：

清除速度常数(k)＝(-斜率)

半衰期(t_1/2)(min)＝0.693/k

固有清除率(CL_int))(μl/min/mg蛋白)＝0.693×V/t_1/2

其中V＝孵育体积μl/mg微粒体蛋白。

在测试中包括两个对照化合物，如果对照化合物的测试结果没有落在指定范围内，则本次测试结果作废，并重新进行实验。

2.肝细胞稳定性

实验方法

使用冷藏的肝细胞悬液进行人类肝细胞稳定性测定(来源于3个个体的混合物)。所有的冷藏肝细胞购自In Vitro Technologies、Xenotech或TCS。

对于测试化合物或对照化合物，均以3μM的浓度置于细胞密度为0.5x10⁶活细胞/mlL的条件下进行培养。培养液中的DMSO终浓度为0.25％。还如上所述地进行对照培养，但是其中不加入细胞以测量任何非酶促的降解。

在培养进行至0、5、10、20、40和60分钟时从培养混合物中取出平行的两份样本(50μl)(对于对照仅在60分钟时取样)，并向样本中加入含有内标的甲醇(100μl)以终止反应。

使用甲苯磺丁脲、7-羟基香豆素和睾酮作为对照化合物。

将样本在4℃下以2500rpm离心20min，并将每个时间点的样本的上清液混合后通过使用通用方法的LC-MS/MS进行分析。

数据分析

清除速度常数(k)＝(-斜率)

半衰期(t_1/2)(min)＝0.693/k

固有清除率(CL_int))(μl/min/10⁶细胞)＝0.693×V/t_1/2

其中V＝孵育体积(μl)/细胞数。

3.Caco-2通透性(双向)

实验方法

所使用的Caco-2细胞为获自ATCC的第27代细胞。将细胞(传代数为40-60)以1×10⁵cells/cm²的密度接种于Millipore Multiscreen Caco-2板上。在DMEM培养基中培养细胞20天，每2或3天更换一次培养基。在第20天时进行通透性研究。

通透性研究中使用37℃的Hanks平衡盐缓冲液(HBSS)pH7.4(含25mM HEPES作为缓冲剂以及10mM葡萄糖)作为培养基。在5％CO₂气氛中和95％相对湿度的条件下进行培养。

在第20天时，通过用37℃的HBSS润洗基底侧和上表面两次，以制备细胞单层。然后用HBSS在上部区室和基地侧区室中培养细胞40分钟，以使得生理参数稳定化。

然后移去上部区室中的HBSS并用测试化合物给药溶液替代。所述溶液为用DMSO溶解测试化合物至10mM浓度、然后用HBSS稀释为10μM终浓度(DMSO的终浓度为1％)。在所述给药溶液中还含有荧光完整性标记——荧光黄。使用给药溶液配制分析标准品。平行测定两次测试化合物的通透性。在每块板上使用具有已知通透性的化合物进行同样的测试以作为对照。

然后将上部区室的插板(insert)置于含有新鲜HBSS的“配对”板中。为了进行基底部至上部(B-A)的通透性测定，通过替换插板中的缓冲液并将其置于含有给药溶液的配对板中来开始实验。在120min后取出配对板，并将上部样本和基地侧样本稀释后进行LC-MS/MS分析。通过上部和基底侧的浓度计算起始浓度(C₀)和实验性回收率。

通过使用荧光分析监测荧光黄的通透，从而检测单层在整个实验中的完整性。如果单层未受到破坏，则荧光黄的通透性会很低。使用合适的样本稀释液，通过采用5点校准法的LC-MS/MS分析对测试化合物和对照化合物进行定量。使用通用的分析条件。

如果一个单独的测试化合物孔中的荧光黄P_app值高于QC限，则报告为n＝1的结果。如果两个平行的测试化合物孔中的荧光黄P_app值均高于QC限，则需要重新进行测定。对某种具体的化合物而言，如果在两个特定化合物孔中的荧光黄通透性均很高，则表明该化合物具有毒性。在这种情况下就不再进行以后的测试。

数据分析

使用下述公式计算每种化合物的通透系数(P_app)：

P_{app} = \frac{dQ / dt}{C_{0} \times A}

其中dQ/dt为药物穿过细胞的通透速度，C₀为在0时间时供体区室中的浓度，A为细胞单层的面积。通过在培养期结束时对供体和受体区室进行分析而获得C₀。假定在120分钟的培养后所测量到的所有测试化合物起初在0分钟时全部存在于供体区室内。不对称指数(Al)按照下式计算：

Al = \frac{P_{app} (B - A)}{P_{app} (A - B)}

上述的不对称指数总体显示了从Caco-2细胞的外流，这表明化合物可能在体内会有潜在的吸收问题。

将测试化合物的表观通透性(P_app(A-B))值与对照化合物氨酰心安和心得安进行比较，上述两种对照化合物在人体内的吸收分别为约50％和90％(Zhao，Y.H.，et al.，(2001).Evaluation of Human Intestinal Absorption Dataand Subsequent Derivation of a Quantitative Structure-ActivityRelationship(QSAR)with the Abraham Descriptors.Journal ofPharmaceutical Sciences.90(6)、749-784)。还使用了他林洛尔(一种已知的P-gp底物(Deferme，S.，Mols，R.，Van Driessche，W.，Augustijns，P.(2002).Apricot Extract Inhibits the P-gp-Mediated Efflux of Talinolol.Journal ofPharmaceutical Sciences.91(12)、2539-48))作为对照化合物，以评估在Caco-2细胞单层中是否存在功能性的P-gp。

4.细胞色素P450抑制(5种亚型的IC₅₀测定)

实验方法

CYP1A抑制

在存在探针底物乙氧基试卤灵(0.5μM)的情况下，将六种测试化合物浓度(0.05、0.25、0.5、2.5、5、25μM溶于DMSO；DMSO终浓度＝0.35％)与人类肝微粒体(0.25mg/ml)和NADPH(1mM)一起在37℃培养5分钟。使用选择性CYP1A抑制剂α-萘黄酮作为阳性对照与测试化合物一起进行筛选。

CYP2C9抑制

在存在探针底物甲苯磺丁脲(tolbutamide)(120μM)的情况下，将六种测试化合物浓度(0.05、0.25、0.5、2.5、5、25μM溶于DMSO；DMSO终浓度＝0.25％)与人类肝微粒体(1mg/ml)和NADPH(1mM)一起在37℃培养60分钟。使用选择性CYP2C9抑制剂磺胺苯吡唑作为阳性对照与测试化合物一起进行筛选。

CYP2C19抑制

在存在探针底物美芬妥英(mephenytoin)(25μM)的情况下，将六种测试化合物浓度(0.05、0.25、0.5、2.5、5、25μM溶于DMSO；DMSO终浓度＝0.25％)与人类肝微粒体(0.5mg/ml)和NADPH(1mM)一起在37℃培养60分钟。使用选择性CYP2C19抑制剂反苯环丙胺作为阳性对照与测试化合物一起进行筛选。

CYP2D6抑制

在存在探针底物右美沙芬(5μM)的情况下，将六种测试化合物浓度(0.05、0.25、0.5、2.5、5、25μM溶于DMSO；DMSO终浓度＝0.25％)与人类肝微粒体(0.5mg/ml)和NADPH(1mM)一起在37℃培养30分钟。使用选择性CYP2D6抑制剂奎尼定作为阳性对照与测试化合物一起进行筛选。

CYP3A4抑制

在存在探针底物咪达唑仑(2.5μM)的情况下，将六种测试化合物浓度(0.05、0.25、0.5、2.5、5、25μM溶于DMSO；DMSO终浓度＝0.26％)与人类肝微粒体(0.25mg/ml)和NADPH(1mM)一起在37℃培养5分钟。使用选择性CYP3A4抑制剂酮康唑作为阳性对照与测试化合物一起进行筛选。

对于CYP1A培养，通过加入甲醇终止反应，通过荧光(激发波长＝535nm，发射波长＝595nm)监测代谢物试卤灵的形成。对于CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4培养，通过加入含有内标的甲醇终止反应。然后将样本离心，合并上清液，并通过LC-MS/MS同时分析4-羟基甲苯磺丁脲、4-羟基美芬妥英、右啡烷和1-羟基咪达唑仑以及内标。使用通用的LC-MS/MS条件。在分析前向最终样本中加入含有甲酸(终浓度＝0.1％)的去离子水。通过与载体对照相比的代谢物形成的下降来计算IC₅₀值(产生50％抑制的测试化合物浓度)。

5.血浆蛋白结合(10％)

实验方法

在缓冲液(pH 7.4)和10％血浆(在缓冲液中的v/v浓度)中制备测试化合物的溶液(5μM，DMSO终浓度为0.5％)。使用被半透膜分隔的两个区室的平衡透析进行所述实验。将缓冲溶液加到膜的一边，将血浆溶液加到膜的另一边。用血浆和缓冲液制备标准品并在37℃下培养。使用LC-MS/MS分析每种化合物的相应溶液。

定量分析

在达到平衡后，从膜的两侧取样本。将每一批次的化合物的溶液合并为两组(无血浆组和含血浆组)，然后进行LC-MS/MS分析，分析中分别使用分别针对于上述两组的两个系列的校准标准品(无血浆组是7个点，含血浆组是6个点)。使用通用的LC-MS/MS条件。使用在等价矩阵中制得的标准曲线对样本进行定量。对每种化合物平行测定两次。在每一实验中均包括对照。

数据分析

fu = \frac{1 - ((PC - PF))}{(PC)}

fu＝未结合部分

PC＝含蛋白侧的样本浓度

PF＝不含蛋白侧的样本浓度

使用下述公式将10％血浆浓度下的fu转化为100％血浆浓度下的fu：

{fu}_{100 %} = \frac{{fu}_{10 %}}{10 - (9 \times {fu}_{10 %})}

药物组合物的实例

作为本发明化合物的口服组合物的一个具体实施方案，将33mg的实施例9与充分研细的乳糖配制成总量为580至590mg并填充至0号硬明胶胶囊中。

作为本发明化合物的口服组合物的另一个具体实施方案，将37mg的实施例17与充分研细的乳糖配制成总量为580至590mg并填充至0号硬明胶胶囊中。

虽然上文中参照某些优选的实施方案对本发明进行了描述和说明，但是本领域技术人员能够理解的是，在不背离本发明精神和范围的前提下可以进行各种变化，改动和替换。例如，可以根据观察到的具体药物学反应、具体使用的化合物、制剂的类型以及所使用的给药模式，应用本文所述的优选范围之外的有效剂量，这种根据本发明的目的和实践能够预见到的变化和区别方案也在本发明的考虑范围之内。因此，本发明应仅由后附的权利要求的范围所限定，并且所述权利要求应被合理地解释为尽可能宽的范围。

Claims

1.根据式(I)的化合物及其对映异构体、非对映异构体、互变异构体、溶剂合物和可药用盐，

其中

A为-NH-、-CH₂-、-CH₂-CH₂-或一个键；

X为H，

苯基，

含有1个或2个选自N、O和S的杂原子的五元至六元杂芳基，

或

-C(O)-R⁶，

R¹和R²彼此独立地选自：

H，

C_1-6烷基，

C_1-6亚烷基-O-C_1-6烷基，

C_1-3亚烷基-杂环基团，和

C_1-6亚烷基-C_3-7环烷基，

其中每一个烷基、亚烷基、杂环基团和环烷基任选地被OH所取代，

或者R¹和R²与它们所连接的氮原子一起形成一个五元至六元环，所述五元至六元环在环上可另外含有1个氧原子，并且所述五元环至六元环任选地被一个或多个选自下列的取代基所取代：

OH、C_1-6烷基、O-C_1-6烷基、C_0-3亚烷基-C_3-5环烷基、C_1-6亚烷基-O-C_1-6烷基或(CH₂)_0-3-苯基；

R^4a为卤素，

CN，

任选地被一个或多个卤原子取代的C_1-6烷基，

任选地被一个或多个卤原子取代的O-C_1-6烷基，或

OH；

R^4b为C(O)NH₂，

C(O)OH，

C(O)NH-C_1-6烷基，

C(O)N-(C_1-6烷基)₂，

SO₂-C_1-6烷基，

C(O)NH-SO₂-C_1-6烷基，

氧基，由此使得所述环为至少部分饱和的，

NH₂，

NH-C_1-6烷基，

N-(C_1-6烷基)₂，

NH-SO₂-CH₃，或

NH-SO₂-CF₃；

R⁵为含有1至3个选自N、O和S的杂原子的5元至6元的饱和或

不饱和的杂环基团，或

含有1至3个选自N、O和S的杂原子的5元至6元的杂芳基，

其中所述杂环和杂芳基任选地被1个或2个R¹⁴取代；R⁶为H，

任选地被一个或多个卤原子取代的C_1-6烷基，

苯基，或

R³为-(CR⁸R⁹)_n-T；

R⁸和R⁹彼此独立地选自：

H，

OH，

卤素，

C_1-6烷基，和

O-C_1-6烷基；

n为1、2、3、4、5或6；

T为

或NR¹²R¹³；

R¹⁰为H，

NH₂，

OH，

O-C_1-6烷基，其中的烷基任选地被一个或多个选自卤素、OH和O-C_1-6烷基的取代基所取代，

卤素，

NH(C_1-6烷基)，

N(C_1-6烷基)₂，

苯基，或

杂芳基，

其中苯基和杂芳基任选地被1至3个R^4a所取代；

q为1或2；

Y为CH₂、NR¹¹或O；

R¹¹为H，

C_1-6烷基，或

(CH₂)_0-6-C_3-7环烷基；

R¹²和R¹³彼此独立地选自

H，

C_1-6烷基

C_2-6烯基，

C_2-6炔基，

(CH₂)_0-2-C_3-7环烷基，和

C_1-6亚烷基-O-C_1-6烷基，

R¹⁴为卤素，

CN，

OH。

2.根据权利要求1的化合物、其中

A为-NH-、-CH₂-、-CH₂-CH₂-或一个键；

X为H，

苯基，

与饱和的六元杂环稠合的苯基，其中所述杂环可含有1个或2个选自O和N的杂原子，并且其中所述杂环还可任选地被一个氧基取代，

含有1个或2个选自N、O和S的杂原子的五元至六元杂芳基，

或

-C(O)-R⁶，

R¹和R²彼此独立地选自：

H，

C_1-6烷基，

C_1-6亚烷基-O-C_1-6烷基，

C_1-3亚烷基-杂环基团，和

C_1-6亚烷基-C_3-7环烷基，或者

R¹和R²与它们所连接的氮原子一起形成一个五元至六元环，所述五元至六元环在环上可另外含有1个氧原子，并且所述五元环至六元环任选地被一个或多个选自下列的取代基所取代：OH、C_1-6烷基、O-C_1-6烷基、C_0-3亚烷基-C_3-5环烷基、C_1-6亚烷基-O-C_1-6烷基或(CH₂)_0-3-苯基；

R^4a和R¹⁴彼此独立地选自：

卤素，

CN，

任选地被一个或多个卤原子取代的C_1-6烷基，

任选地被一个或多个卤原子取代的O-C_1-6烷基，或

OH；

R^4b为C(O)NH₂，

C(O)NH-C_1-6烷基，

C(O)N-(C_1-6烷基)₂，

SO₂-C_1-6烷基，

C(O)NH-SO₂-C_1-6烷基，

NH₂，

NH-C_1-6烷基，

N-(C_1-6烷基)₂，

NH-SO₂-CH₃，或

NH-SO₂-CF₃；

R⁵为含有1至3个选自N、O和S的杂原子的5元至6元的饱和或不饱和的杂环基团，

或含有1至3个选自N、O和S的杂原子的5元至6元的杂芳基，

其中所述杂环和杂芳基任选地被1个或2个R¹⁴取代；R⁶为H，

任选地被一个或多个卤原子取代的C_1-6烷基，

苯基，或

R³为-(CR⁸R⁹)_n-T；

R⁸和R⁹彼此独立地选自：

H，

OH，

卤素，

C_1-6烷基，和

O-C_1-6烷基；

n为1、2、3、4、5或6；

T为

或NR¹²R¹³；

R¹⁰为H，

NH₂，

C_1-6烷基，

卤素，

NH(C_1-6烷基)，

N(C_1-6烷基)₂，

苯基，或

杂芳基，

其中苯基和杂芳基任选地被1至3个R^4a所取代；

Y为CH₂、NR¹¹或O；

R¹¹为H，

C_1-6烷基，或

(CH₂)_0-6-C_3-7环烷基；

R¹²和R¹³彼此独立地选自

H，

C_1-6烷基

(CH₂)_0-2-C_3-7环烷基，和

C_1-6亚烷基-O-C_1-6烷基，

其中C_1-6烷基、C_1-6亚烷基和C_3-7环烷基任选地被1个至3个R¹⁴所取代。

3.根据权利要求1或2的化合物，其中A为-NH-或一个键。

4.根据权利要求1至3任一项的化合物，其中R¹和R²彼此独立地为C_3-6烷基，或者R¹和R²与它们所连接的氮原子一起形成一个五元环至六元环，所述五元环至六元环在环上还可另外含有1个氧原子，并且所述五元环至六元环可任选地被一个或多个选自下列的取代基所取代：OH、C_1-6烷基、C_0-3亚烷基-C_3-5环烷基、O-C_1-6烷基、C_1-6亚烷基-O-C_1-6烷基或(CH₂)_0-3-苯基。

5.根据权利要求1至4任一项的化合物，其中T为NR¹²R¹³。

6.根据权利要求5的化合物，其中R¹²和R¹³彼此独立地选自H、C_1-3烷基和(CH₂)_0-2-C₃-6环烷基，其中烷基和环烷基任选地被1至3个R¹⁴所取代。

7.根据权利要求1至4任一项的化合物，其中T选自：

8.根据权利要求7的化合物，其中Y为CH₂或NR¹¹，并且R¹⁰为H、NH₂、C_1-6烷基、NH(C_1-6烷基)或N(C_1-6烷基)₂。

9.根据权利要求1至8任一项的化合物，其中

X为H，

与饱和的六元杂环稠合的苯基，其中所述杂环可含有1个或2个选自O和N的杂原子，并且其中所述杂环还可任选地被一个氧基取代，或

其中每一个苯基或杂环基团均任选地被1个至3个R¹⁴和/或1个R⁵所取代；

10.根据权利要求1至8任一项的化合物，其中X为苯基或含有1个或2个选自N、O和S的杂原子的五元至六元杂芳基，其中每一个苯基和杂芳基任选地被1个至3个R¹⁴和/或1个R^4b和/或1个R⁵所取代。

11.根据权利要求10的化合物，其中X为苯基。

12.根据权利要求10的化合物，其中X为吡啶基。

13.根据权利要求1至12任一项的化合物，用作药物。

14.根据权利要求1至12任一项的化合物，作为黑皮质素-4受体拮抗剂。

15.根据权利要求1至12任一项的化合物，用于治疗或预防与黑皮质素-4受体的失活相关的哺乳动物障碍、疾病或病症。

16.根据权利要求15的化合物用于治疗或预防癌症恶病质、肌肉萎缩、厌食、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、焦虑和/或抑郁。

17.一种药物组合物，含有根据权利要求1至12任一项的化合物和可药用的载体。