CN101477024A - 一种有形成份计数池及其制作方法和使用方法 - Google Patents

Abstract

一种有形成份计数池，包括底部固相支撑平面(1)，其上设有用来控制计数深度的三个或三个以上支撑部件(2)。其制作方法包括如下步骤：清洗支撑部件；将支撑部件干燥；将高度真空硅酮酯与支撑部件按体积比2～15∶1充分混匀；将支撑部件设置于底部固相支撑平面，形成至少3个支撑点。使用方法：待测标本(4)加于计数池底部固相支撑平面的支撑部件之间；盖予盖片(3)，将盖片压至最低位置；计数池置于显微镜下计数，计算公式为：有形成份密度＝平均每视野有形成份个数÷(支撑部件高度×显微镜视野面积)。本发明计数深度可据检测需要调整支撑部件高度来获得。成本低，制作简单，使用方便，有效期长，一次性使用可减少传染性标本对健康的威胁。

Description

一种有形成份计数池及其制作方法和使用方法

技术领域

本发明涉及有形成份计数装置，特别是涉及一种有形成份计数池及其制作方法和使用这种计数池来检测有形成份密度的方法。

背景技术

实验室对细胞、精子或其他细小有形成份密度进行测定时，通常需要使用专业计数池(板)。由于不同类型标本中的待测有形成份密度存在分布差异，为保证检测结果的可靠性，因此不同类型的标本需要使用相对应的专业化计数池，如检测血液标本中的红、白细胞密度需要使用血细胞计数池、测定精液标本中的精子密度需要使用精子计数池等等。但是并不是所有类型的标本都可以获得与之测定需求相匹配的商品化计数池。细胞密度相对较低的标本，需要更深的计数深度与更多的计数视野；反之，细胞密度相对较高的标本，则需要更浅计数深度的计数池。而且商品化的专业计数池价格相对较高，尤其是诸如精子计数池等特殊用途的计数池。一般说来，这些商品化的专业计数池是反复使用的，需要人工多次擦洗计数池内具有潜在感染性的标本，这势必对操作者的健康造成威胁。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种简单易行、深度可根据检测需要而调整的有形成份计数池；本发明还提供其制作方法和使用这种有形成份计数池来检测有形成份密度的方法。

为解决上述技术问题，本发明提供一种有形成份计数池，其特征在于，包括底部固相支撑平面，在所述底部固相支撑平面上间隔设有用来控制计数深度的三个或三个以上支撑部件。

所述支撑部件顶部盖有盖片。

所述支撑部件为微球。

所述支撑部件以粘稠度高、难挥发性的材料粘附在底部固相支撑平面上。

所述支撑部件为四个；所述支撑部件以粘稠度高、难挥发性的真空硅酮脂质材料粘附在底部固相支撑平面上；所述支撑部件为玻璃或金属或塑料材质；所述底部固相支撑平面为玻片或塑料载片。

每一个计数池内的支撑部件高度相同，所述支撑部件高度根据有形成份计数池所需的深度而定。

本发明还提供一种制作所述有形成份计数池的方法，包括如下步骤：

步骤一：清洗支撑部件；

步骤二：将支撑部件干燥；

步骤三：将高度真空硅酮脂与支撑部件按体积比2～15:1充分混匀；

步骤四：将支撑部件设置于底部固相支撑平面，形成至少3个支撑点。

所述步骤一中洗涤支撑部件的方法为：

A.以无水乙醇或丙酮浸泡50ml微球，置于磁力搅拌器搅拌，倾去乙醇或丙酮。如此重复洗涤2次。用蒸馏水冲洗5次。

B.用1mol/L HCl浸泡微球，置于磁力搅拌器搅拌30分钟，倾去盐酸。用蒸馏水冲洗5次。

C.用去离子水洗涤10次，每次磁力搅拌2分钟。

当支撑部件为微球时，所述步骤四中将支撑部件设置于底部固相支撑平面上的方法为点样法，具体步骤如下：

A.拔出10ml注射器的针栓，将所述步骤三的脂质与微球混合物加入其中，装上针栓；

B.排尽注射器中的空气，将10号钝针头装在注射器上，待用；

C.推动装有脂质与微球混合物的注射器针栓，将脂质与微球混合物推压出钝针头尖少许，在底部固相支撑平面点样，每个计数池点四个呈方形排列的支撑点，四个支撑点点样的范围不得超过盖片的覆盖范围。

本发明还提供一种使用所述有形成份计数池检测有形成份密度的方法，包括如下步骤：

A.取带有支撑部件的底部固相支撑平面，将待测标本加于支撑部件之间的区域；

B.在几个支撑部件上盖予盖片，并自盖片上向下轻轻施压，直至最低位置；

C.将装有标本的计数池置于显微镜下计数若干个视野，计算平均每个视野待测有形成份的个数，并按公式计算有形成份密度：有形成份密度＝平均每视野有形成份的个数÷计数池的计数体积＝平均每视野有形成份的个数÷(计数池深度×显微镜视野面积)＝平均每视野有形成份个数÷(支撑部件高度×显微镜视野面积)。

本发明的有益效果在于：(1)以几个微小的支撑部件控制底部固相支撑平面与顶部盖片的距离，可以根据实际检测应用的需要，通过更换不同高度的支撑部件(进一步方案中是更换不同直径的微球)来实现对计数池深度的自由控制，制作十分简单。(2)将待测标本加于几个支撑点之间，根据支撑部件高度从而获得计数池的理论计数深度，并由此可计算出待测标本中有形成份的密度，使用非常方便。(3)所用材质易于获得且成本十分低廉；(4)所制作的有形成份计数池可为一次性使用装置，大大减少了传染性标本对健康的潜在威胁。

进一步技术方案中将微球包埋在粘稠度高、难挥发性真空硅酮脂质材料内，通过点样的方式轻松建立支撑点，且不易从底部固相支撑平面上脱落，在室温条件下有效期至少可达3年。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明进行进一步详细说明。

图1为本发明的计数池底部平面上粘附四个微球支撑点示意图。

图2为本发明的计数池池内加入待计数标本示意图。

图3为本发明的计数池池内加入待计数标本后加盖盖片并施压示意图。

具体实施方式

请参阅图1～图3所示，本发明的有形成份计数池，由底部固相支撑平面1、中部四个控制计数深度的支撑部件2——微球和顶部的盖片3组成，四个微球在底部固相支撑平面上形成方形的容纳待检测标本的区域。所述的微球以粘稠度高、难挥发性的真空硅酮脂质材料粘附在底部固相支撑平面上，不易脱落。每一个计数池内的4个微球直径相同，因此支撑部件高度相同，形成均一的计数池深度。但不同需要的计数池，如果所需的计数深度不同，则可通过选取不同直径的微球而实现所需。

所述支撑部件可以是玻璃或金属材质，也可以是塑料材质；所述底部固相支撑平面为玻片或塑料载片，还可以是其他表面平整的固相材料。支撑部件的形状采用微球制作和使用简便，但也可以采用其他形状，诸如圆柱体等。微球的个数也可以采用三个，也能稳定的支撑出计数池的深度。

本发明的有形成份计数池的制作可采用如下方法：

一、微球准备

1.以无水乙醇或丙酮浸泡50ml微球，置于磁力搅拌器搅拌，倾去乙醇或丙酮。如此重复洗涤2次。用蒸馏水冲洗5次。

2.用1mol/L HCl浸泡微球，置于磁力搅拌器搅拌30分钟，倾去盐酸。用蒸馏水冲洗5次。

3.用去离子水洗涤10次，每次磁力搅拌2分钟。

4.将微球倾倒铺展于托盘或其他平底容器内在烘箱中烘干(使用塑料微球时注意控制烘烤温度防止微球变形)，待用。

5.将高度真空硅酮脂与上述处理后的微球按体积比2～15:1倒入烧杯，并充分混匀，其中，优选体积比为5:1。

6.拔出10ml注射器的针栓，将步骤5处理后的脂质与微球混合物加入其中，装上针栓。

7.排尽注射器中的空气，将10号钝针头装在注射器上，待用。

二、点样与贮藏

8.推动装有脂质与微球混合物的注射器针栓，将脂质与微球混合物推压出钝针头尖少许，在玻片或其他平整固相材料表面点样，每个计数池点四个呈方形排列的支撑点(参见图1)，四个支撑点点样的范围不得超过盖片的覆盖范围。

9.将点样后的玻片竖直贮存在玻片盒内，以使玻片间保持一定的距离，从而防止粘附在玻片上的支撑点与另一张玻片粘连。室温保存，有效期至少可达3年。

结合显微镜，使用本发明的有形成份计数池检测有形成份密度的方法，包括如下步骤：

1.检测标本中有形成份的密度时，取上述步骤9制备的玻片一块，将待测标本加于微球形成的四个支撑点之间(参见图2)。

2.将盖片覆盖在4个支撑点上，并以手指在盖片上向下轻轻施压，直至最低位置(参见图3)，即装配成可供检测应用的计数池。此步骤中通过对盖片轻轻按压，使包埋在脂质材料内的微球处于同一高度(即微球直径的距离)。

3.将装有标本的计数池置于显微镜下计数若干个视野，计算平均每个视野待测有形成份的个数，并按公式计算有形成份密度：有形成份密度＝平均每视野有形成份的个数÷计数池的计数体积＝平均每视野有形成份的个数÷(计数池深度×显微镜视野面积)＝平均每视野有形成份个数÷(微球直径×显微镜视野面积)。

计算例：若微球直径100μm，显微镜采用40倍物镜和10倍广角视野目镜(孔径为20mm)，平均每个视野检测到的细胞数为10个，则有形成份密度(/mm³)＝10÷{0.1×[(20/40)÷2]²×π}＝509个细胞/mm³。

Claims (10)

1、一种有形成份计数池，其特征在于，包括底部固相支撑平面(1)，在所述底部固相支撑平面上间隔设有用来控制计数深度的三个或三个以上支撑部件(2)。

2、根据权利要求1所述的有形成份计数池，其特征在于，所述支撑部件顶部盖有盖片(3)。

3、根据权利要求1或2所述的有形成份计数池，其特征在于，所述支撑部件(2)为微球。

4、根据权利要求1或2所述的有形成份计数池，其特征在于，所述支撑部件(2)以粘稠度高、难挥发性的材料粘附在底部固相支撑平面(1)上。

5、根据权利要求1或2所述的有形成份计数池，其特征在于，所述支撑部件(2)为四个；所述支撑部件以粘稠度高、难挥发性的真空硅酮脂质材料粘附在底部固相支撑平面(1)上；所述支撑部件为玻璃或金属或塑料材质；所述底部固相支撑平面为玻片或塑料载片。

6、根据权利要求1或2所述的有形成份计数池，其特征在于，每一个计数池内的支撑部件高度相同，所述支撑部件高度根据有形成份计数池所需的深度而定。

7、一种制作权利要求1所述的有形成份计数池的方法，包括如下步骤：

步骤一：清洗支撑部件(2)；

步骤二：将支撑部件干燥；

步骤三：将高度真空硅酮脂与支撑部件按体积比2～15:1充分混匀；

步骤四：将支撑部件设置于底部固相支撑平面(1)，形成至少3个支撑点。

8、根据权利要求7所述的制作有形成份计数池的方法，其特征在于，所述步骤一中洗涤支撑部件的方法为：

A.以无水乙醇或丙酮浸泡50ml微球，置于磁力搅拌器搅拌，倾去乙醇或丙酮。如此重复洗涤2次。用蒸馏水冲洗5次。

B.用1mol/L HCl浸泡微球，置于磁力搅拌器搅拌30分钟，倾去盐酸。用蒸馏水冲洗5次。

C.用去离子水洗涤10次，每次磁力搅拌2分钟。

9、根据权利要求7所述的制作有形成份计数池的方法，其特征在于，当支撑部件为微球时，所述步骤四中将支撑部件设置于底部固相支撑平面上的方法为点样法，具体步骤如下：

A.拔出10ml注射器的针栓，将所述步骤三的脂质与微球混合物加入其中，装上针栓；

B.排尽注射器中的空气，将10号钝针头装在注射器上，待用；

C.推动装有脂质与微球混合物的注射器针栓，将脂质与微球混合物推压出钝针头尖少许，在底部固相支撑平面点样，每个计数池点四个呈方形排列的支撑点，四个支撑点点样的范围不得超过盖片的覆盖范围。

10、使用权利要求1或7所述的有形成份计数池检测有形成份密度的方法，包括如下步骤：

A.取带有支撑部件(2)的底部固相支撑平面(1)，将待测标本(4)加于支撑部件之间的区域；

B.在几个支撑部件上盖予盖片(3)，并自盖片上向下轻轻施压，直至最低位置；

C.将装有标本的计数池置于显微镜下计数若干个视野，计算平均每个视野待测有形成份的个数，并按公式计算有形成份密度：有形成份密度＝平均每视野有形成份的个数÷计数池的计数体积＝平均每视野有形成份的个数÷(计数池深度×显微镜视野面积)＝平均每视野有形成份个数÷(支撑部件高度×显微镜视野面积)。

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