CN101405021A - 神经干细胞增殖试剂和神经干细胞分化试剂的连续给药方案 - Google Patents

Abstract

本发明提供了神经干细胞增殖试剂的有效给药方案，包含神经干细胞增殖试剂的有效给药方案的试剂盒，和其用途。特别是，与短期内高剂量给药相反，神经干细胞增殖试剂例如hCG、催乳素和EPO在几天内以连续方式低剂量递送给哺乳动物受试者。

Description

神经干细胞增殖试剂和神经干细胞分化试剂的连续给药方案

相关申请的交叉参考

[0001]本申请主张2006年3月17日提交的美国临时申请No.60/783,500，2006年4月5日提交的美国临时申请No.60/789,132，和2006年10月24日提交的美国临时申请No.60/862,669的优先权和权益，其全文在此引入作为参考。

背景

[0002]分离和体外培养多潜能神经干细胞的技术的发展(例如，见美国专利No.5,750,376；5,980,885；5,851,832)显著改进了神经变性疾病和病症的治疗前景。已经发现胎儿脑可用于分离和体外培养多潜能神经干细胞。而且，与长期以来认为胎儿脑细胞是不能复制或再生的脑细胞的观点相反，已经发现神经干细胞也可从成体哺乳动物脑中分离。这些干细胞，不管是来自胎儿还是成体脑中，是能够自我复制的。子代细胞可再增殖或分化为神经细胞系中的任何细胞，包括神经元、星形胶质细胞和少突神经胶质细胞。因此，这些发现不仅提供了可用于移植的神经细胞的来源，还证实了成体脑中多潜能神经干细胞的存在，和从这些干细胞中原位产生神经元或神经胶质细胞的可能性。

[0003]已经发现某些分子在体外或体内可增加神经干细胞的数量(见例如，美国专利申请公开No.20050245436、20040136967、20040092448、20030095956、20030054998、20030054551、20030049838、20030049837)。所述增加的机理可能包括刺激增殖，抑制分化，和/或防止神经干细胞的死亡。这些分子可因此用于在需要这些细胞的受试者中产生神经干细胞，由此产生神经元和神经胶质细胞。

概述

[0004]此处提供的是用于神经干细胞增殖试剂和分化试剂的有效给药方案、其试剂盒和用途。特别是，与短期内给予高剂量相反，神经干细胞增殖试剂以连续方式低剂量递送给哺乳动物受试者。所述物质的组合物和方法可短期利用(例如，在神经伤害或神经症状发作之后的数天内)或可长期利用(例如，对于持续的神经伤害或发生中的神经症状)。

[0005]相应的，此处提供了最优化有效量的神经干细胞增殖试剂对于增加哺乳动物中神经干细胞数量的效率的方法和试剂盒，包含将神经干细胞增殖试剂连续给予哺乳动物一段时期，任选通过使用试剂盒，其中在所述时期内给予的神经干细胞增殖试剂的总剂量等于有效量，并且其中所述时期是至少三天。

[0006]此处还提供了最优化有效量的神经干细胞增殖试剂对于治疗或改善哺乳动物中神经变性疾病或病症的效率的方法和试剂盒，包含将神经干细胞增殖试剂连续给予哺乳动物一段时期，任选通过使用试剂盒，其中在所述时期内给予的神经干细胞增殖试剂的总剂量等于有效量，并且其中所述时期是至少三天。

[0007]在此进一步提供了治疗或改善哺乳动物中神经变性疾病或病症的方法和试剂盒。所述方法包含将有效量的神经干细胞增殖试剂连续给予哺乳动物一段时期，任选通过使用试剂盒，其中所述时期是至少三天。

[0008]此处另外提供了治疗或改善哺乳动物的神经变性疾病或病症的进一步的方法。所述方法包含将神经干细胞增殖试剂和神经干细胞分化试剂给予哺乳动物，其中神经干细胞增殖试剂在第一治疗期内全身连续给药至少三次，并且其中神经干细胞分化试剂在第二治疗期内给药，任选通过使用试剂盒。神经干细胞增殖试剂和神经干细胞分化试剂可连续或间歇给药。例如，神经干细胞增殖试剂可在第一治疗期的第1、2和3天连续给药，然后神经干细胞分化试剂可在第二治疗期的第1、2和3天连续给药。

[0009]在本方法和试剂盒中，治疗期可以是，例如，至少3天。任选地，本方法可包含在第二治疗期内连续给予哺乳动物神经干细胞增殖试剂，任选通过利用试剂盒，其中第二治疗期开始于第一治疗期结束后，间隔至少一天，并且其中第二治疗期是至少三天。第二治疗期，像第一治疗期一样，可例如是至少三天。本治疗计划可重复几次或多次，具有第二、第三、第四、第五等治疗期。不管是给药一次、两次、几次、或多次，本治疗计划可采取一种或多种试剂盒的形式，其中提供了用于给予一个特定治疗期或多个治疗期的有效量的神经干细胞增殖试剂和任选的神经干细胞分化试剂。

[0010]本方法和试剂盒的细节在附图和下面的说明书中阐述。本方法和试剂盒的其它特征，目标和优点将从说明书和附图和权利要求中明显地表现出来。

附图描述

[0011]图1.在雄性大鼠中以10，15和20倍于脑室内输注的浓度皮下输注催乳素六天。展现了来自每只动物的8个切片的室下区(SVZ)中溴脱氧尿苷阳性(BrdU+)细胞的总量。在用15倍剂量时(170μg/天6天)观察到了SVZ增殖水平的最佳增长。(10倍＝113μg/天；20倍＝226μg/天；对照＝仅仅用大鼠血清白蛋白(RSA))。相对于对照的显著性：10x＝*p＜0.05；15x＝**p＜0.01；20x＝p＜0.05；对于所有条件n＝3；用Tukeyposthoc测试进行单因素方差分析(ANOVA)。

[0012]图2.在雄性大鼠中利用单次每天腹膜内注射的催乳素给药。展现了对于每种给药方案的每个切片的BrdU+细胞总量。(A)用高的3天剂量时观察到SVZ增殖的小的增加。(B)增加SVZ增殖水平的最强剂量条件利用低的170μg/天剂量6天。显著性是相对于RSA对照的。n＝3；*p＜0.05；**p＜0.01；单因素ANOVA，然后进行Tukey posthoc测试。

[0013]图3.在中风发作后第1，3和5天单次肌肉内注射hCG显著增加了前脑SVZ的增殖。在1000μg剂量条件下(n＝3；*p＜0.05；用Tukeyposthoc进行单因素ANOVA)观察到每脑室磷酸-组蛋白H3阳性(pHH3)细胞数量的显著增加。图像显示了相对于1000μghCG给药动物的RSA软膜条对照大鼠的侧脑室背外侧角中核标记Hoechst和pHH3的表达，显示出在1000μg给药动物中总细胞量和SVZ中pHH3表达的增加。

[0014]图4.在中风后第1，3和5天每天单次肌肉内注射1000μg的hCG引发了前脑SVZ中增加的神经发生(中风＝第0天)。对给药大鼠中doublecortin+神经元数量进行量化，在1000μg剂量动物中该数量翻倍。(n＝3；**p＜0.01)

[0015]图5.中风后24小时开始每天单次肌肉内注射hCG7天(中风＝第0天)。(A)每天330μg/注射的给药方案相对于所有其它给药条件和对照显著增加了SVZ中增殖的数量(pHH3+细胞)(n＝3；*p＜0.01；用Tukey posthoc的单因素ANOVA)。(B)对于给药大鼠的运动皮层的缺血性损伤的观察揭示了接受每天330μg/注射的给药方案的动物展现出新的组织生长，并且用组织填料(tissue plug)填充病变位点。

[0016]图6.通过BrdU+细胞计数确认的每天330μg/注射hCG给药动物的SVZ中的增加的增殖。每脑室的BradU+细胞数量在330μg/注射条件下相对于对照和100μg/注射显著增加(p＜0.01；n＝3；用Tukey posthoc分析的单因素ANOVA)。这些结果进一步证实了用pHH3染色观察到的增殖的增加。

[0017]在不同图中相同的参考标记表示相同的内容。

详细描述

[0018]目前没有临床上批准用于治疗神经系统疾病或病症的神经干细胞增殖和分化试剂。这些试剂对于治疗神经系统疾病和病症是有用的，因而需要有利用这些试剂的有效给药方案。在此提供了对于神经干细胞增殖试剂的有效给药方案，包含对于神经干细胞增殖试剂的有效给药方案的试剂盒，和它们的用途。特别是，与在短期内以高剂量给药相反，以连续方式低剂量将神经干细胞增殖试剂递送给哺乳动物受试者。例如，对于给定的总有效剂量，包含每天递送1/6总量进行六天的给药方案比每天递送1/3总量进行三天的给药方案更有效。

[0019]在进一步详细描述方法和试剂盒之前，本申请的术语如下定义，除非另外指明。此处的标题仅为了组织目的，不意味着限制此处提供的说明书或所附的权利要求。

定义

[0020]神经干细胞或NSC是神经细胞系中的干细胞。干细胞是能够自我复制的细胞。换句话说，产生于干细胞分裂的子细胞包括干细胞。神经干细胞能够最终分化为神经细胞系的所有细胞类型，包括神经元、星形胶质细胞和少突神经胶质细胞(星形胶质细胞和少突神经胶质细胞统称为神经胶质或神经胶质细胞)。因而，此处提到的神经干细胞是多潜能神经干细胞。

[0021]神经干细胞增殖试剂是能够增加神经干细胞数量的物质，例如，通过刺激增殖、抑制分化、和/或防止神经干细胞死亡。

[0022]神经干细胞分化试剂是能够选择性增强神经元形成或神经胶质细胞形成的物质。

[0023]连续对受试者递送(deliver)或给予(administer)物质意味着将该物质在一段时期内至少一天一次或直到贯穿连续数天的递送或给予。例如，可通过注射(例如，IM或皮下)或口服至少每天一次全身给药，或通过以引起每天递送到受试者的组织或血流中的方式输注给药。任选的，该物质通过输注或输注以外的方式递送。如此处所用的，“全身”一词不包括大脑内脑室输注。该物质连续递送或给予的持续期或治疗期可持续三天到几年，甚至在患者剩余的生命中持续。例如，持续期可以是3-6天、3-14天、3-21天、3-28天、1-4个月、1-6个月、1-9个月、1-12个月、1-2年、1-3年、1-5年、1-10年等。对于进一步的实施例，持续递送的治疗期可以是至少大约三天、至少大约四天、至少大约五天、至少大约六天、至少大约七天、或至少大约十四天。而且，该物质可在给药期第1、2和3天连续递送。

[0024]神经变性疾病或病症是与神经元丧失或功能障碍相关的疾病或医疗状况。神经变性疾病或病症的例子包括神经变性疾病，中枢神经系统损伤或功能障碍。神经变性疾病包括，例如，阿尔茨海默氏病或其它痴呆(dimentia)、多发性硬化症(MS)、精神分裂症、黄斑变性、青光眼、糖尿病性视网膜病、外周神经病、亨廷顿舞蹈病、肌萎缩性侧索硬化症、和帕金森氏症。CNS损伤包括，例如，脑血管事件，如中风(例如，出血性中风、局部缺血性中风或全脑缺血性中风)、眼缺血、和硬脑膜窦血栓；创伤性脑或脊髓损伤(例如，由脑或脊髓外科手术或人身事故导致的损伤)；震荡；由药物导致的损伤(例如，化疗、消闲性药物(recreational drugs)、和精神抑制药)；冠状动脉旁路移植术(CABG)；和分娩中的缺血症。CNS功能障碍包括，例如，抑郁症、癫痫症、神经机能病和精神病。神经变性病症的例子包括衰老。室下区的神经干细胞数量在年老小鼠中显著降低。相应的，与衰老问题有关问题的改善通过根据本发明方法和试剂盒给予神经干细胞增殖试剂和任选的神经干细胞分化试剂而获得。

[0025]治疗和改善表示减少或完全去除疾病或医疗状况的一种或多种症状。所述治疗或改善可包括当对有疾病或医疗状况风险的患者给药时延迟或消除一种或多种症状的发作。

[0026]与天然因子具有基本序列相似性的多肽与天然因子在氨基酸水平上具有至少大约30％同一性。多肽与天然因子在氨基酸水平上的同一性优选至少大约40％，更优选至少大约60％，甚至更优选至少大约70％，并且最优选至少大约80％。因而，基本相似性可在大约30-99％同一性之间。

[0027]类似物或变体与天然因子的同一性百分比或同一性％的表述指当比对两个序列时也在类似物或变体中发现的天然因子中的氨基酸序列的百分比。同一性百分比可通过本领域已经建立的方法或算法确定，例如，LALIGN或BLAST。

[0028]如果多肽能够结合天然因子的受体或被针对天然因子的多克隆抗体识别，则该多肽具有天然因子的生物活性。优选地，多肽能够在受体结合测试中特异性结合天然因子的受体。

[0029]天然因子的功能激动剂是结合并活化天然因子的受体的化合物，尽管它不必要与天然因子具有基本序列相似性。

[0030]促黄体素或LH是一种蛋白，其(1)包含与天然哺乳动物LH具有基本序列类似性的多肽，优选天然人LH；和(2)具有天然哺乳动物LH生物学活性。天然哺乳动物LH是由垂体前叶分泌的促性腺激素。LH是由非共价结合的α和β亚基组成的异源二聚体。α亚基在LH，FSH和HCG中是共同的，β亚基对于每种激素是特异的。在本方法和试剂盒中有用的LH可以具有天然α亚基，和与天然哺乳动物LH具有基本序列类似性的β亚基。可选的，LH可具有天然β亚基，和与天然哺乳动物LH具有基本序列类似性的α亚基。LH也可同时具有与天然相应的亚基具有基本序列类似性的α亚基和β亚基。因而，LH的术语包括LH类似物，其包含天然LH亚基的缺失、插入、或取代突变体。而且，术语LH包括来自其它物种的LHs和其天然存在的变体。另外，LH类似物也可以是天然哺乳动物LH受体的功能性激动剂。

[0031]人绒毛膜促性腺激素或hCG是一种蛋白，其(1)包含与天然hCG具有基本序列类似性的多肽；和(2)具有天然hCG的生物学活性。天然hCG是由非共价结合的α和β亚基组成的异源二聚体。α亚基在LH、FSH和hCG中是共同的，β亚基对于每种激素是特异的。然而，hCG和LH的β亚基之间具有85％的序列类似性。本发明和试剂盒中有用的hCG可具有天然α亚基，和与天然hCG具有基本序列类似性的β亚基。可选的，hCG可具有天然β亚基，和与天然hCG具有基本序列类似性的α亚基。hCG也可同时具有与天然相应的亚基具有基本序列类似性的α亚基和β亚基。因而，术语hCG包含了hCG类似物，其包含天然hCG亚基的缺失、插入、或取代突变体。而且，术语hCG包括了来自其它物种的hCG相似物和其天然存在的变体。另外，hCG类似物也可以是天然哺乳动物hCG/LH受体的功能性激动剂。

[0032]催乳素是一种多肽，其(1)与天然哺乳动物催乳素具有基本序列类似性，优选天然人催乳素；和(2)具有天然哺乳动物催乳素的生物学活性。天然人催乳素是主要在垂体腺中合成的199个氨基酸的多肽。因而，催乳素的术语包括了催乳素类似物，其是天然催乳素的缺失、插入、或取代的突变体。而且，术语催乳素包括了来自其它物种的催乳素和其天然存在的变体。

[0033]另外，催乳素也可能是天然哺乳动物催乳素受体的功能性激动剂。例如，功能性激动剂可以是美国专利No.6,333,031中公开的催乳素受体的活化氨基酸序列；具有催乳素受体激动剂活性的金属复合受体配体(美国专利No.6,413,952)；G120RhGH，其是人生长激素类似物但作为催乳素激动剂(Mode et al.，1996)；或美国专利No.5,506,107和5,837,460中描述的催乳素受体配体。

[0034]表皮生长因子或EGF表示天然EGF或与天然EGF具有基本氨基酸序列类似性，并具有天然EGF的至少一种生物学活性的任何EGF类似物、或变体，所述生物学活性例如与EGF受体的结合。特别包括在内的作为EGF的是任何物种的天然EGF、TGFα，或重组修饰的EGF。特别的例子包括但不限于，具有两个C末端氨基酸的缺失和位点51的中性氨基酸取代的重组修饰的EGF(特别是EGF51 gln51；美国专利申请公开No.20020098178A1)、位点16的His残基被中性或酸性氨基酸取代的EGF突变蛋白(EGF-X₁₆)(美国专利No.6,191,106)、缺乏天然EGF的氨基末端残基的EGF的52-氨基酸缺失突变体(EGF-D)、N-末端残基以及两个C-末端残基(Arg--Leu)被删掉的EGF缺失突变体(EGF-B)、位点21的Met残基被氧化的EGF-D(EGF-C)、位点21的Met残基被氧化的EGF-B(EGF-A)、肝素结合性EGF样生长因子(HB-EGF)、β-细胞素、双调蛋白、神经调节蛋白、或包括任何上述蛋白的融合蛋白。其它有用的EGF类似物、变体和片段描述于美国专利申请公开No.20020098178A1，和美国专利No.6,191,106和5,547,935。

[0035]另外，EGF也可以是天然哺乳动物EGF受体的功能性激动剂。例如，功能性激动剂可以是公开于美国专利No.6,333,031中的EGF受体的活化氨基酸序列，或具有EGF受体激动剂活性的抗体(Fernandez-Pol，1985和美国专利No.5,723,115)。

[0036]垂体腺苷酸环化酶活化多肽或PACAP表示天然PACAP或任何PACAP类似物或变体，所述PACAP类似物或变体与天然PACAP具有基本氨基酸序列类似性并具有天然PACAP的至少一种生物学活性，例如与PACAP受体的结合。有用的PACAP类似物和变体包括但不限于，PACAP的38氨基酸和27氨基酸变体(分别为PACAP38和PACAP27)，公开于例如美国专利No.5,128,242；5,198,542；5,208,320；5,326,860；5,623,050；5,801,147和6,242,563中的类似物和变体。

[0037]另外，PACAP也可以是天然哺乳动物PACAP受体的功能性激动剂。例如，功能性激动剂可以是maxadilan，一种作为PACAP 1型受体的特异性激动剂的多肽(Moro et al.，1997)。

[0038]红细胞生成素或EPO是天然EPO或任何EPO类似物或变体，所述EPO类似物或变体与天然EPO具有基本氨基酸序列相似性，并具有天然EPO的至少一种生物学活性，例如与EPO受体的结合。EPO类似物或变体公开于，例如，美国专利NO.6048971和5614184。

[0039]另外，EPO也可以是天然哺乳动物EPO受体的功能性激动剂。例如，功能性激动剂可以是EPO模拟肽1(EMP1；Johnson et al.，2000)；描述于Wrighton et al.，1996和美国专利No.5,773,569的一种EPO的短肽模拟物；公开于Kaushansky，2001的任何小分子EPO模拟物；描述于美国专利No.5,885,574、WO 96/40231、WO 97/48729、Fernandez-Pol，1985或美国专利No.5,723,115的活化EPO受体的抗体；公开于美国专利No.6,333,031的EPO受体的活化氨基酸序列；具有EPO受体的激动剂活性的金属复合受体配体(美国专利No.6,413,952)，或描述于美国专利No.5,506,107和5,837,460的EPO受体配体。

[0040]LH/hCG-诱导试剂是当给予动物时能够增加动物中的LH或hCG量的物质。例如，LH-释放激素(LHRH)刺激LH的分泌。

[0041]信息素是作为对相同物种的另一动物的信号的物质，所述动物通常为相反性别。哺乳动物信息素可以是蛋白或小分子。优选地，信息素选自2-仲-丁基-4，5-二氢噻唑(SBT)、2，3-脱氢-外-brevicomin(DHB)，α和β法呢烯，6-羟基-6-甲基-3-庚酮，2-庚酮，反式-5-庚烯-2-酮，反式-4-庚烯-2-酮，n-戊基乙酸酯，顺式-2-戊烯-1-基-乙酸酯，2，5-二甲基吡嗪，十二烷基丙酸酯，和(Z)-7-十二烯-1-基乙酸酯(见，例如，Dulac et al.，2003)。

[0042]有效量是足以获得期望目的的治疗剂的量。例如，增加神经干细胞数量的LH或hCG的有效量是如该情况下可能成为的足以在体内或体外导致神经干细胞数量增加的量。LH或hCG治疗或改善神经变性疾病或病症的有效量是足以降低或去除神经变性疾病或病症的一种或多种症状的LH/hCG的量。给定的治疗剂的有效量将随着例如试剂性质、给药途径、接受治疗剂的动物大小和物种、以及给药目标的因素而改变。本领域熟练技术人员可根据本领域已经建立的方法根据经验确定每个个体病例中的有效量。

[0043]神经干细胞增殖试剂的等效量是获得与另一种神经干细胞增殖试剂相同或等效的效果所需要的神经干细胞增殖试剂的量。等效量可以通过等效量的相对水平或结果而详细说明。因而，等效量或等效剂量可以是获得与另一种特定神经干细胞增殖试剂相同的血清或脑脊髓液水平所需要的神经干细胞增殖试剂的量或剂量。

[0044]药物递送装置是适于给予有效量的神经干细胞增殖试剂或分化试剂的物品。药物递送装置可影响通过本领域已经建立的任何方法的神经干细胞增殖试剂或分化试剂的给药，所述方法包括例如，静脉内、动脉内、结肠内(intracolonical)、气管内、腹膜内、鼻内、血管内、鞘内、颅内、骨髓内、胸膜内、皮内、皮下、肌肉内、腹膜内、口服、局部给药、肺部给药、或其任何组合。药物递送装置可以是可植入装置或泵，包括例如，渗透泵。任选地，药物递送装置是输注装置或其元件，或可选的，为输注之外的装置。

连续递送

[0045]为改进催乳素的给药方案，每天给予大鼠不同量的催乳素，进行6天，检查对于神经干细胞数量的效果(实施例1)。结果显示170μg/天在此给药计划中是最佳量。这种给药方案，170μg/天6天，然后通过缩短给药期而改变(170μg/天3天)或将更高的每天剂量与缩短时期组合以获得类似总剂量(396μg/天3天)。结果显示在更长时期内连续递送更低剂量比更高剂量和更短递送时间的组合是更有效的。

[0046]相应地，此处提供了最优化有效量神经干细胞增殖试剂对于增加哺乳动物神经干细胞数量的功效的方法，包含在一段时期内连续给予哺乳动物神经干细胞增殖试剂，其中在所述时期内给予的神经干细胞增殖试剂的总剂量等于有效量，并且其中所述时期是至少三天。

[0047]提供了最优化有效量的神经干细胞增殖试剂对于治疗或改善哺乳动物中的神经变性疾病的功效的方法，其中该方法包含连续给予哺乳动物神经干细胞增殖试剂一段时期，其中在所述时期内给予哺乳动物的神经干细胞增殖试剂总剂量等于有效量，并且其中所述时期是至少三天。

[0048]还提供了治疗或改善哺乳动物中神经变性疾病的方法，包含连续给予哺乳动物有效量的神经干细胞增殖试剂一段时期，其中所述时期是至少三天。

[0049]此处还提供了治疗或改善哺乳动物中神经变性疾病或病症的进一步的方法。该方法包含给予哺乳动物神经干细胞增殖试剂和神经干细胞分化试剂，其中神经干细胞增殖试剂在第一治疗期内连续全身给药至少三次，并且其中神经干细胞分化试剂在第二治疗期内给药。

[0050]此处提供的方法，例如，可通过给予具有神经变性疾病或病症的受试者有效量的增殖试剂，利用增殖试剂催乳素、hCG、LH、G-CSF、GM-CSF、信息素或VEGF治疗神经变性疾病或病症。举例来说，增殖试剂hCG和LH结合相同的受体，并可互换地在此处提供的特定实施例中以等效剂量利用。作为进一步的实施例，增殖试剂hCG可以大约120-200IU/kg/天的剂量肌肉内(IM)给药，然后静脉内(IV)给予大约570-950IU/kg/天的EPO。对于进一步的实施例，可以160IU/kg/天的剂量肌肉内给予hCG，然后静脉内给予765IU/kg/天的EPO。所述神经干细胞试剂的给药可紧接着数天的给予例如EPO的分化试剂。等效剂量的其它神经干细胞增殖试剂也可被用于类似的方案中。

[0051]此处还提供了试剂盒，所述试剂盒提供有效量的神经干细胞增殖试剂，包含用于整个治疗期的一种剂量的所述神经干细胞增殖试剂，和该试剂盒的使用说明书，其中在所述治疗期内给予的神经干细胞增殖试剂总剂量等于有效量，并且所述治疗期是至少三天。

[0052]试剂盒可进一步提供用于整个治疗期的一种剂量的分化试剂，其中在所述治疗期内给予的分化试剂总剂量等于有效量，并且其中所述治疗期是至少三天。

[0053]试剂盒中各神经干细胞增殖试剂、分化试剂、或其它试剂每种的总剂量可在一个容器中、多个容器中、或在其任何组合中提供。例如，一种或多种神经干细胞增殖试剂的总剂量可在一个适于提供计量的剂量或适于提取剂量的容器中，所述提取例如是被待治疗的人或被另外的人例如护理者进行。一种或多种神经干细胞增殖试剂可存在于多个容器中而不是单个容器中，所述多个容器提供适于每天、每周、每月等给药的等分量的剂量。用于分化试剂或其它试剂的单个容器或多个容器可类似地在该试剂盒中提供。也可包括组合，其中试剂盒中可包含一个容器的神经干细胞增殖试剂，多个容器的分化试剂，或相反。而且，用于第一治疗期的神经干细胞增殖因子的总剂量可以在单个容器中或多个容器中，第二治疗期的总剂量可以在单个容器中或多个容器中，或其组合。

[0054]试剂盒可进一步包含监视患者中的血细胞比容水平的装置或设备或从患者中取一定量的血液的适当的装置或同时包括监视装置和血液采样装置。血液采样和监视是需要的，因为血细胞比容水平可能上升到高于可接受的水平。可接受的血细胞比容水平可以通过任何本领域已建立的标准确定。

[0055]试剂盒适用于健康护理机构，例如住院患者护理机构或紧急护理机构。健康护理机构包括例如医院。试剂盒还适于在离开住院患者护理机构之后或没进入时使用。以试剂盒形式的包装有利于患者早日离开健康护理机构，通过允许在长期护理机构中或在家中的患者治疗，例如，通过自我治疗、门诊患者治疗、或通过护理者或健康护理提供者在家中或长期护理机构中等的治疗。

[0056]在本方法和试剂盒中，时期(也就是，治疗期)可以是例如至少大约3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、14、21、28天，或在3到28天之间的任何天数。任选的，本方法和试剂盒可包含在第二治疗期中连续给予哺乳动物神经干细胞增殖试剂，其中第二治疗期开始于该时期结束后，并且其中第二治疗期是至少三天。第二治疗期，类似第一治疗期，可以是，例如至少大约3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、14、21或28天。第一治疗期和接下来的治疗期之间的间隔也可以是例如至少大约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、14、21或28天。这种治疗日程可重复几次或多次。用于第二或后来的治疗期的神经干细胞增殖试剂可以与用于第一治疗期或其它治疗期中使用的神经干细胞增殖试剂相同或不同。而且，在单个治疗期中可利用一种以上神经干细胞增殖试剂。因而，本方法中有用的试剂盒可包含用于一个或多个治疗期的一种或多种神经干细胞增殖试剂。

[0057]神经干细胞增殖试剂可通过本领域已经建立的任何方法给药，例如，通过静脉内、动脉内、结肠内、气管内、腹膜内、鼻内、血管内、鞘内、颅内、髓内、胸膜内、皮内、皮下、肌肉内、口服、局部给药、肺给药、或其任意组合。任选的，用于给药的药物递送装置或其元件可包括在包含了神经干细胞增殖试剂的试剂盒中。

[0058]此处描述的方法还可包括监测哺乳动物生物液中神经干细胞增殖试剂或神经干细胞分化试剂的水平。监测的生物液可以是，例如，脑脊髓液或血液。例如，血清中的hCG(或另一种神经干细胞增殖试剂或神经干细胞分化试剂)水平可在治疗期之中或之后给药后测量。等效水平的不同神经干细胞增殖试剂或神经干细胞分化试剂都可在生物液中确定和监测。

[0059]特定的剂量单元(也就是，在治疗期内一系列给药中单次给药的量)可对用于此处公开的方法的神经干细胞增殖或分化试剂而特定化。这些剂量单元可在此处特定化的特定剂量和剂量范围之中。剂量单元可根据必须给予以获得受试者中期望水平的神经干细胞增殖或分化试剂的量而限定。例如，提供在血清中0.03IU/L到5,000,000IU/L的水平的神经干细胞增殖或分化试剂的神经干细胞增殖试剂剂量单元。或者，作为进一步的实施例，提供在脑脊髓液中大约0.003IU/L到大约5,000IU/L的增殖试剂水平的神经干细胞增殖或分化试剂剂量单元。

[0060]在本方法和本试剂盒的使用说明中，神经干细胞增殖试剂全身递送，更优选全身给药至少一天一次。在一些实施方式中，神经干细胞增殖试剂不通过输注递送。

[0061]神经干细胞增殖试剂可以是能够在体外或在体内增加哺乳动物神经干细胞数量的任何物质。此处所用的促进试剂与增殖试剂具有相同含义。可增加神经干细胞数量的试剂包括但不限于：

1.促卵泡激素(FSH)，其经常与LH的作用相合作，并且诱导LH受体表达，因而增强LH信号传导的效果。

2.生长激素(GH)，其可刺激神经干细胞增殖。

3.胰岛素生长因子(IGFs)，包括IGF-1，其是从响应于GH的许多组织中释放并且介导GH的许多生长增殖效应的生长调节素(somatomedians)，并且其刺激神经干细胞增殖。

4.生长激素释放激素(GHRH)，其从下丘脑分泌，并且诱导GH从垂体前叶释放，引起循环GH的增加的水平。。

5.催乳素(PRL)，其从垂体前叶中分泌并且促进神经干细胞增殖。

6.催乳素释放肽(PRP)，其引发催乳素的释放。

7.成纤维细胞生长因子(FGF)，神经干细胞的促有丝分裂试剂。

8.雌激素，其促进神经干细胞的增殖，包括例如在海马中。

9.血清素，其促进海马中神经干细胞的增殖。

10.表皮生长因子(EGF)，神经干细胞的促有丝分裂试剂。

11.转化生长因子α(TGFα)，神经干细胞的促有丝分裂试剂。

12.促性腺激素释放激素(GnRH)，其引发LH的释放。

13.睫状神经营养因子(CNTF)和白血病抑制因子(LIF)，其通过一种信号传导途径通过gp130亚基传导信号，所述信号传导途径促进神经干细胞自我更新，因而扩增脑神经干细胞群体。

14.粒细胞集落刺激因子(G-CSF)。

15.粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。

16.血管内皮生长因子(VEGF)。

17.促黄体素(LH)。

18.人绒毛膜促性腺激素(hCG)。

19.信息素。

[0062]而且，可给予神经细胞分化试剂以选择性增强神经元形成或神经胶质细胞形成。这些分化试剂也可根据给药方案和试剂盒递送。示例性的分化试剂包括但不限于：

1.红细胞生成素(EPO)，其增进神经干细胞定型为神经细胞谱系，并且对于治疗小鼠和大鼠的中风模型是有用的。

2.源自脑的神经营养因子(BDNF)，其是一种已知的促进神经谱系的存活因子和分化试剂。

3.转化生长因子β和骨形态发生蛋白(BMPs)，其是促进神经谱系和特定神经表型(例如，脊髓中的感觉中间神经元)的产生的分化试剂。

4.甲状腺激素(TH，包括T3和T4形式)，一种促进少突神经胶质细胞的成熟和产生的分化试剂，见例如Rodriguez-Pena，1999。

5.甲状腺刺激激素(TSH)和甲状腺释放激素(TRH)，其促进TH从垂体前叶中释放，产生增加水平的循环TH。这种试剂可与LH或hCG组合使用以促进从神经干细胞的少突神经胶质细胞发生。

6.音猬蛋白(sonic hedgehog)(SHH)，一种在发育过程中使发育的CNS成形的形态发生素，并且以不同的浓度促进特定类型的神经元(例如，脊髓中的运动神经元)和少突神经胶质细胞的产生。这种试剂可与LH或hCG组合使用以促进从神经干细胞的神经发生和/或少突神经胶质细胞发生。

7.血小板源生长因子(PDGF)，其促进少突神经胶质细胞从神经干细胞的产生和分化。这种试剂可与LH或hCG组合使用以促进从神经干细胞的少突神经胶质细胞发生。

8.环AMP和增强cAMP途径的试剂，例如垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)和血清素，其选择性促进神经元的产生。

[0063]任何方法和试剂盒可包含多种神经干细胞增殖试剂和/或神经细胞分化试剂。因而，一种或多种神经干细胞增殖试剂可共同或相继给药，并且可通过分别的组合物或组合在单个组合物中的形式给药。而且，一种或多种神经干细胞增殖试剂和一种或多种神经干细胞分化试剂可共同或相继给药，并且可通过分别的组合物或组合在单个组合物中的形式给药。例如，PRL和LH或hCG可组合使用以使神经干细胞增殖最大化；PRP可与LH或hCG组合以使神经干细胞增殖最大化；GnRH可与LH或hCG组合使用或代替其使用以增加LH的循环水平并且增强神经干细胞增殖；并且CNTF和LIF可与LH或hCG组合使用以促进神经干细胞增殖和增加CNS中神经干细胞群的大小。进一步例如，催乳素可与EPO一起使用，LH可与EPO一起使用，hCG可与EPO一起使用。没有明确阐述的所有其它组合也可使用。

[0064]这些因子的适当的剂量可根据本领域已经建立的方法确定。例如，催乳素的剂量范围为可以是从大约0.510IU/kg/天到大约100,000IU/kg/天，例如，大约0.510-90,000；0.510-75,000；0.510-50,000；0.510-25,000；0.510-10,000；100-5,000；100-2,000；500-2,000；1,000-2,000；100-1,000；200-800IU/kg/天。hCG的剂量范围可以是从大约0.5IU/kg/天到大约3,000,000IU/kg/天，例如，大约0.5-2,000,000；0.5-1,000,000；0.5-500,000；0.5-250,000；0.5-100,000；0.5-50,000；10-25,000；10-10,000；240-216,000；1,200-2,000；2,160；或1,600IU/kg/天。hCG也可以10,000IU/天的剂量提供。LH的剂量范围可以是从大约0.5IU/kg/天到大约500,000IU/kg/天，例如，大约0.5-300,000；0.5-200,000；0.5-100,000；0.5-50,000；0.5-25,000；24-21,600；1,000；120-200；216；或160IU/kg/天。LH也可以10,000IU/天的剂量提供。EPO的剂量范围可以是从大约100IU/kg/天到大约2000IU/kg/天，例如，大约100-1500；100-1000；160-1000；570-950；765；或1020IU/kg/天。EPO也可以30,000IU/天的剂量提供。可利用等效剂量的其它试剂。除非另外说明，此处的剂量指每天递送的平均剂量。

[0065]神经干细胞增殖试剂和分化试剂可任选的包装在试剂盒中，以使试剂盒中包含治疗期中待递送的神经干细胞增殖试剂和分化试剂的总量。试剂盒可任选包含其它成分或其它成分的组合物，包括例如血液取样装置或其组件。

[0066]分化试剂可通过本领域已经建立的任何方法给药，例如通过静脉内、动脉内、结肠内(intracolonical)、气管内、腹膜内、鼻内、血管内、鞘内、颅内、骨髓内、胸膜内、皮内、皮下、肌肉内、口服、局部给药、或其任何组合。任选地，包含分化试剂的试剂盒可包括用于给药的药物递送装置。

[0067]神经干细胞增殖试剂可以在大约14天内(例如，0到大约14天)给予中枢神经系统(CNS)损伤、症状发作、或诊断的哺乳动物。如此处所用的，0天指CNS损伤、症状发作、或诊断的时间。任选的，神经干细胞增殖试剂可在CNS损伤、症状发作、或诊断后大约13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、或1天(例如，0到大约5天)给予。任选的，神经干细胞增殖试剂可在CNS损伤、症状发作、或诊断的大约24小时内给予哺乳动物。任选的，神经干细胞增殖试剂可在CNS损伤、症状发作、或诊断的大约12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1小时内给予哺乳动物。

[0068]利用此处描述的方法和试剂盒治疗的哺乳动物可以是任何年龄的，包括儿童，青少年或成体。

实施例

[0069]在下面的实施例中，下述缩写具有下述意思。没有定义的缩写具有一般所接受的意思。

℃＝摄氏度

hr＝小时

min＝分钟

μM＝微摩尔

mM＝毫摩尔

M＝摩尔每毫升(molar ml milliliter)

μl＝微升

mg＝毫克

μg＝微克

FBS＝胎牛血清

PBS＝磷酸盐缓冲盐水

DMEM＝Dulbecco’s改良Eagle’s medium

MEM  ＝改良的Eagle’s medium

EGF＝表皮生长因子

NSC＝神经干细胞

SVZ＝室下区

PACAP＝垂体腺苷酸环化酶活化多肽

BMP＝骨形态发生蛋白

RSA＝大鼠血清白蛋白

实施例1

催乳素的连续给药

[0070]在两个催乳素给药实验中利用雄性大鼠(250-350g)。一天一次皮下微渗透泵输注(Alzet微泵)给予催乳素。催乳素原液稀释于碳酸氢盐缓冲液中并且原液在注射用盐水中1mg/ml的大鼠血清白蛋白(RSA)中进一步稀释。大鼠不接受缺血性损伤。在第六天动物在10小时内接受6次BrdU注射(Sigma-Aldrich)(60mg/kg，i.p.)，并在最后的BrdU注射之后30分钟处死。大脑被冷冻切割，利用每动物8个切片量化SVZ中的BrdU+细胞。如图例所示，结果表示为SVZ中的BrdU+细胞总量或表示为每切片的平均数。

实验#1：

[0071]大鼠以如下剂量给药6天并接受皮下输注RSA(对照)或大鼠催乳素(National Hormone and Peptide Program，Torrance，CA)(每组3只大鼠)：

*10x＝99ul/泵(2mg/0.25ml PRL)-113μg/天

**15x＝148.5ul/泵(2mg/0.25ml PRL)-170μg/天

***20x＝198ul/泵(2mg/0.25ml PRL)-226μg/天

其中

*10x＝10倍于脑室内输注给予的剂量(大约11μg/天)。

**15x＝15倍于脑室内输注给予的剂量。

***20x＝20倍于脑室内输注给予的剂量。

结果：

[0072]如图1所示，170μg/天产生前脑SVZ中增殖(BrdU+细胞数量)的最大增加。

实验#2：

[0073]大鼠以以下剂量给药3天并且接受每天单次腹膜内注射RSA或大鼠催乳素(National Hormone and Peptide Program，Torrance，CA)(每组3只大鼠)。

70μg/天3天

396μg/天3天

170μg/天6天

结果：

[0074]如图2所示，170μg/天递送6天产生前脑SVZ中增殖(BrdU+细胞数量)的最大增加。

实施例2

hCG的连续给药

[0075]本研究的目的是确定使成体雄性大鼠前脑胚带的细胞增殖和组织再生最大化的hCG剂量，所述大鼠已经受到运动皮层的软膜条(pialstrip)血行阻断缺血性损伤。

方法

动物和外科手术

[0076]250-350g雄性大鼠如先前所述受到运动皮层的软膜条血行阻断缺血性损伤(Gonzalez and Kolb.A comparison of different modelsof stroke on behaviour and brain morphology.Eur J Neurosci.2003.18(7)：1950-1962)。对于戊巴比要钠麻醉(60mg/kg)的动物，从前卤点向前/向后+4到-2mm和从中线横向1.5到4.5mm钻一个矩形洞。去除硬脑膜并且利用无菌盐水浸泡的棉签从皮层表面擦拭软脑膜和附着的血管。

给药

[0077]中风后1天开始(24小时后)，动物接受单次肌肉内(i.m.)注射人绒毛膜促性腺激素。给予的剂量如表1所述，并且在5天内三次注射(在第1，3和5天给药)或一周内每天注射并且在每天9:00am给药。对照大鼠接受盐水中的大鼠血清白蛋白注射(RSA；Sigma，1mg/ml)。在最后给药的当天，动物在10小时内接受6次BrdU注射，hCG注射后30分钟开始。BrdU(Sigma-Aldrich)以60mg/kg的剂量，ip给药。动物用4％多聚甲醛透心输注。切割大脑，在蔗糖中冷冻保存并冷冻切割。以14微米冷冻切割为两系列的8个切条，每个切条具有8个切片。利用兔抗-磷酸组蛋白H3(phosphohistone H3)(抗pHH3；1∶100；Upstate Biotechnologies)、大鼠抗-BrdU(1∶100；Seralab)、山羊抗-doublecortin(DCX；1∶100；Santa Cruz Biotechnologies)进行免疫染色。每个动物的侧脑室周围的前脑室下区(SVZ)中的磷酸组蛋白H3(phosphohistone H3)(pHH3-一种有丝分裂-活性细胞标记物)、BrdU、和doublecortin(DCX-不成熟神经元的标记物)阳性细胞数量在8个切片中量化，并且表示为每个侧脑室的阳性细胞平均数量。

统计

[0078]数值是平均值+平均值标准误差(SEM)。显著性使用单因素方差分析然后进行Tukey HSD posthoc测试(*p＜0.05；**p＜0.01)而确定。每组中包括三只动物。

结果

[0079]本研究检查了肌肉内注射hCG促进中风后成体前脑室下区(SVZ)中的神经干细胞和祖细胞的增殖的能力。动物进行了软膜条血行阻断外科手术以诱导运动皮层的局部缺血性损伤，治疗在24小时后开始。在弹丸浓注的高剂量策略中，如表1所概括的，动物在五天内第1(中风后24小时)，3和5天接受3剂量的hCG。为分析前脑SVZ的增殖水平，第5天处死动物。如表2和图3所示，这种方案与接受了RSA对照注射的中风动物相比在增加增殖上是有效的。在1000μg的剂量中，增殖提高了几乎2.5倍，并且如图4所示，这些动物SVZ中新生成的doublecortin阳性(DCX+)神经元数量类似地显著增加。

[0080]在另一项研究中，如表1所概括的，动物每天接受hCG给药，进行7天，中风后24小时开始，在第7天给予动物BrdU 10小时，然后处死。如图5A所示，如通过Phh3免疫反应性显示的，SVZ中分裂细胞数量在330μg/注射的组中相对于所有其它组显著增加。这种增加通过相对于RSA对照量化这些动物SVZ中BrdU+细胞数量而确认(图6)。相对于软膜条RSA对照，在100μg治疗组中存在增加的趋势(图5A和6)。注意到图5中未治疗动物没有接受注射并且没有软膜条中风。作为内部对照，一个组接受了与330μg/注射的组相同的总剂量(见表1)，但hCG以在第1，3和5天接受770μg/注射的三次注射，动物在第5天处死。基于此研究，以每天330μg/注射的低的常规剂量的hCG给药对于增加脑缺血性损伤之后前脑SVZ中的增殖是最有效的。

[0081]为确定是否任何给药方案可能产生新的皮层组织的生长，我们分析了hCG治疗动物的皮层中的损害位点。组织再生长在每天330μg/注射的低的常规给药方案给药的动物组中是特别明显的(图5B)。

实施例3

hCG然后是EPO的连续给药

[0082]遭受神经变性疾病或病症的哺乳动物可用三个每天一次IM剂量的hCG(10000IU/天)在第1，2和3天治疗，然后是一天的洗出期(第4天)，然后进行三个每天一次的I.V.剂量的EPO(30000IU/天)在第5，6和7天的治疗。第一个IM hCG剂量可在神经变性病症发作后24到48小时之间递送，所述神经变性病症例如中到重度中风事件。患者可以在治疗过程中几个点以及中风发作后6周和3个月进行检查。基线评价可包括临床/安全、神经学、血液学、和血管状态，以及脑MRI。临床/安全、神经学、血液学、和血管状态的评价将在完成治疗后第1天、15天和80天重复。脑MRI将为对比目的在完成治疗(神经疾病或病症发作或诊断之后大约90天)之后80天重复。

[0083]任何在说明书中提到的专利或公开文献都表示了本发明涉及领域的熟练技术人员的水平。这些专利和公开文献在此全文引入作为参考，如同每篇单独文献特别并单独的引入作为参考一样。

[0084]本发明不限于实施例中公开的实施方式的范围，实施例只是意图作为本发明的某些方面的例证，任何功能等同的实施方式在本发明的范围内。在此展示和描述之外的本发明的多种修饰对于本领域熟练技术人员来说是明显的，并且落在所附权利要求的范围内。而且，尽管只有在此公开的组合物的某些代表性组合在上述实施方式中进行了特别讨论，组合物的其它组合对于本领域熟练技术人员来说是明显的，并且也落在所附权利要求的范围内。因而步骤或组合物的组合可在此明确提及；然而，步骤或组合物的其它组合尽管没有明确阐述也包括在内。

表1.hCG给药策略。大鼠在中风后24小时开始接受5天内三次肌肉内(I.M.)hCG注射或7天内每天注射。对照大鼠仅仅接受RSA注射。

表2.对于软膜条血行阻断中风后24小时用hCG给药的动物相对于对照的pHH3+，BrdU+和DCX+细胞的量化，表示为每侧脑室阳性细胞平均数量的实际值±SEM。

Claims (77)

1.提供给哺乳动物有效量的神经干细胞增殖试剂的方法，包含在第一治疗期内连续给予哺乳动物神经干细胞增殖试剂，其中在所述第一治疗期内给予的神经干细胞增殖试剂总剂量等于有效量，并且其中所述第一治疗期是至少三天。

2.权利要求1的方法，其中第一治疗期的持续时间选自至少四天、至少五天、至少六天、至少七天、和至少十四天。

3.权利要求1的方法，进一步包含在第二治疗期内连续给予哺乳动物神经干细胞增殖试剂，其中第二治疗期开始于第一治疗期结束之后，并且其中第二治疗期是至少三天。

4.权利要求1、2或3的方法，其中神经干细胞增殖试剂通过每天至少一次全身注射而给药。

5.权利要求1、2或3的方法，其中神经干细胞增殖试剂不是通过输注给药。

6.权利要求1、2或3的方法，其中神经干细胞增殖试剂选自催乳素、hCG、生长激素、IGF-1、LH、CSF、GM-CSF、VEGF和信息素。

7.权利要求1的方法，其中神经干细胞增殖试剂是hCG。

8.权利要求7的方法，其中给予哺乳动物的hCG的量是0.5IU/kg/天到大约3,000,000IU/kg/天。

9.权利要求7的方法，其中给予哺乳动物的hCG的量是大约10,000IU/天。

10.权利要求1的方法，其中神经干细胞增殖试剂是催乳素。

11.权利要求10的方法，其中给予哺乳动物的催乳素的量的范围是0.510IU/kg/天到大约100,000IU/kg/天。

12.权利要求1的方法，进一步包含给予哺乳动物神经干细胞分化试剂。

13.权利要求12的方法，其中神经干细胞分化试剂选自EPO、PACAP、TH、TSH和PDGF。

14.权利要求1的方法，其中哺乳动物是成体。

15.提供有效量的神经干细胞增殖试剂以治疗或改善哺乳动物中的神经变性疾病或病症的方法，包含在第一治疗期内连续给予哺乳动物神经干细胞增殖试剂，其中在所述第一治疗期内给予的神经干细胞增殖试剂的总剂量等于有效量，并且其中所述第一治疗期是至少三天。

16.权利要求15的方法，其中第一治疗期的持续时间选自至少四天、至少五天、至少六天、至少七天、和至少十四天。

17.权利要求15的方法，进一步包含在第二治疗期内连续给予哺乳动物神经干细胞增殖试剂，其中第二治疗期开始于第一治疗期结束之后，并且其中第二治疗期是至少三天。

18.权利要求15、16或17的方法，其中神经干细胞增殖试剂通过每天至少一次全身注射而给药。

19.权利要求15、16或17的方法，其中神经干细胞增殖试剂不是通过输注给药。

20.权利要求15、16或17的方法，其中神经干细胞增殖试剂选自催乳素、hCG、生长激素、IGF-1、LH、G-CSF、GM-CSF、VEGF和信息素。

21.权利要求15的方法，其中神经干细胞增殖试剂是催乳素。

22.权利要求21的方法，其中给予哺乳动物的催乳素的量的范围是1μg/kg/天到大约300,000μg/kg/天。

23.权利要求15的方法，其中神经干细胞增殖试剂是hCG。

24.权利要求23的方法，其中给予哺乳动物的hCG的量是1μg/kg/天到大约300,000μg/kg/天。

25.权利要求23的方法，其中给予哺乳动物的hCG的量是大约1000μg/天。

26.权利要求15的方法，进一步包含给予哺乳动物神经干细胞分化试剂。

27.权利要求26的方法，其中神经干细胞分化试剂选自EPO、PACAP、TH、TSH和PDGF。

28.权利要求15、16或17的方法，其中哺乳动物是成体。

29.权利要求15、16或17的方法，其中神经变性疾病选自阿尔茨海默氏病、亨廷顿舞蹈病、肌萎缩性侧索硬化、帕金森氏症、CNS损伤、多发性硬化、和精神分裂症。

30.权利要求15、16或17的方法，其中神经干细胞增殖试剂的第一剂量在神经变性疾病或病症的症状发作或诊断的14天内给予哺乳动物。

31.权利要求15、16或17的方法，其中神经干细胞增殖试剂的第一剂量在神经变性疾病或病症的症状发作或诊断的5天内给予哺乳动物。

32.治疗或改善哺乳动物的神经变性疾病或病症的方法，包含在第一治疗期内连续给予哺乳动物有效量的神经干细胞增殖试剂，其中所述第一治疗期是至少三天。

33.权利要求32的方法，其中第一治疗期的持续时间选自至少四天、至少五天、至少六天、至少七天、和至少十四天。

34.权利要求32的方法，进一步包含在第二治疗期内连续给予哺乳动物神经干细胞增殖试剂，其中第二治疗期开始于第一治疗期结束之后，并且其中第二治疗期是至少三天。

35.权利要求32、33或34的方法，其中神经干细胞增殖试剂通过每天至少一次全身注射而给药。

36.权利要求32、33或34的方法，其中神经干细胞增殖试剂不是通过输注给药。

37.权利要求32、33或34的方法，其中神经干细胞增殖试剂选自催乳素、hCG、生长激素、IGF-1、LH、G-CSF、GM-CSF、VEGF和信息素。

38.权利要求32的方法，其中神经干细胞增殖试剂是hCG。

39.权利要求38的方法，其中给予哺乳动物的hCG的量是1μg/kg/天到大约300,000μg/kg/天。

40.权利要求38的方法，其中给予哺乳动物的hCG的量是大约1000μg/天.

41.权利要求32的方法，其中神经干细胞增殖试剂是催乳素。

42.权利要求41的方法，其中给予哺乳动物的催乳素的量的范围是1μg/kg/天到大约300,000μg/kg/天。

43.权利要求32的方法，进一步包含给予哺乳动物神经干细胞分化试剂。

44.权利要求43的方法，其中神经干细胞分化试剂选自EPO、PACAP、TH、TSH和PDGF。

45.权利要求32、33或34的方法，其中哺乳动物是成体。

46.权利要求32、33或34的方法，其中神经变性疾病选自阿尔茨海默氏病、亨廷顿舞蹈病、肌萎缩性侧索硬化、帕金森氏症、CNS损伤、多发性硬化、和精神分裂症。

47.权利要求32、33或34的方法，其中神经干细胞增殖试剂的第一剂量在神经变性疾病或病症的症状发作或诊断的14天内给予哺乳动物。

48.权利要求32、33或34的方法，其中神经干细胞增殖试剂的第一剂量在神经变性疾病或病症的症状发作或诊断的5天内给予哺乳动物。

49.权利要求43的方法，其中神经干细胞分化试剂是EPO。

50.权利要求49的方法，其中给予哺乳动物的EPO的量是大约100-2000IU/kg/天。

51.权利要求49的方法，其中给予哺乳动物的EPO的量是大约570-950IU/kg/天。

52.权利要求49的方法，其中给予哺乳动物的EPO的量是765IU/kg/天。

53.权利要求49的方法，其中给予哺乳动物的EPO的量是大约30,000IU/天。

54.提供有效量的神经干细胞增殖试剂的试剂盒，包含：

(a)用于在第一治疗期内连续给药的所述神经干细胞增殖试剂的剂量，其中在所述第一治疗期内待给予的神经干细胞增殖试剂总剂量等于治疗或改善哺乳动物神经变性疾病的有效量，并且其中所述第一治疗期是至少三天；和

(b)使用该试剂盒的使用说明。

55.权利要求54的试剂盒，其中第一治疗期的持续时间选自至少七天和至少二十八天。

56.权利要求54的试剂盒，进一步包含用于在第二治疗期内连续给药的神经干细胞增殖试剂的第二剂量，其中在所述第二治疗期内待给予的神经干细胞增殖试剂总剂量等于有效量，并且其中所述第二治疗期是至少三天。

57.权利要求54、55或56的试剂盒，进一步包含至少一种药物递送装置。

58.权利要求54、55或56的试剂盒，其中所述神经干细胞增殖试剂选自催乳素、hCG、生长激素、IGF-1、LH、G-CSF、GM-CSF、VEGF和信息素。

59.权利要求54的试剂盒，进一步包含有效量的分化试剂。

60.权利要求59的试剂盒，其中分化试剂选自EPO、PACAP、TH、TSH和PDGF。

61.权利要求59的试剂盒，其中分化试剂是EPO。

62.权利要求54、55或56的试剂盒，进一步包含监视血细胞比容水平的装置。

63.权利要求54、55或56的试剂盒，进一步包含从受试者中取血样的装置。

64.权利要求54、55或56的试剂盒，其中所述试剂盒用于健康护理机构。

65.权利要求54、55或56的试剂盒，其中所述试剂盒在离开健康护理机构之后使用。

66.权利要求54、55或56的试剂盒，其中神经干细胞增殖试剂的总剂量在单个容器中。

67.权利要求54、55或56的试剂盒，其中神经干细胞增殖试剂的总剂量在多个容器中。

68.权利要求54、55或56的试剂盒，其中分化试剂的总剂量在单个容器中。

69.权利要求54、55或56的试剂盒，其中分化试剂的总剂量在多个容器中。

70.提供有效量的神经干细胞增殖试剂的试剂盒，包含：

(a)用于在第一治疗期内连续给药的所述神经干细胞增殖试剂的剂量，其中在所述第一治疗期内待给予的神经干细胞增殖试剂的总剂量等于增加哺乳动物中神经干细胞数量的有效量，并且其中所述第一治疗期为至少三天；和

(b)使用该试剂盒的使用说明。

71.权利要求70的试剂盒，其中第一治疗期的持续时间选自至少七天和至少二十八天。

72.权利要求70的试剂盒，进一步包含在第二治疗期内连续给药的神经干细胞增值试剂的第二剂量，其中在所述第二治疗期内待给予的神经干细胞增殖试剂的总剂量等于有效量，并且其中所述第二治疗期为至少三天。

73.权利要求70、71、72的试剂盒，进一步包含至少一种药物递送装置。

74.权利要求70的试剂盒，其中所述神经干细胞增殖试剂选自催乳素、hCG、生长激素、IGF-1、LH、G-CSF、GM-CSF、VEGF和信息素。

75.权利要求69的试剂盒，进一步包含有效量的分化试剂。

76.权利要求75的试剂盒，其中分化试剂选自EPO、PACAP、TH、TSH和PDGF。

77.权利要求75的试剂盒，其中分化试剂是EPO。

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