CN101296701A - 用于治疗呼吸系统疾病,尤其是慢性阻塞性肺病(copd)和哮喘的化合物的组合 - Google Patents

Abstract

本发明披露药物组合物，包含糖皮质激素和其中m、R¹、R²、R³和R⁴如说明书中所定义的式化合物，以及它们在治疗中的用途。

Description

用于治疗呼吸系统疾病，尤其是慢性阻塞性肺病(COPD)和哮喘的化合物的组合

技术领域

本发明涉及用于治疗呼吸系统疾病，尤其是慢性阻塞性肺病(COPD)和哮喘的药学活性物质组合。

背景技术

肺的本质功能要求一种脆弱的结构广泛暴露于包括污染物、微生物、变应原和致癌物的环境中。起因于生活方式选择和遗传组成的相互作用的宿主因素影响了对这种暴露的响应。对肺的伤害或感染能够产生广泛的呼吸系统疾病(或呼吸疾病)。这些疾病中的多种具有巨大的公共卫生重要性。呼吸系统疾病包括急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、职业性肺部疾病、肺癌、结核、纤维变性、尘肺、肺炎、肺气肿、慢性阻塞性肺病(COPD)和哮喘。

最常见的呼吸系统疾病是哮喘。哮喘一般定义为气道的炎性疾患，临床症状由间歇性气流阻塞引起的。临床特征为喘鸣、呼吸困难和咳嗽的发作。它是一种慢性衰竭性疾患，其患病率和严重性似乎都在增加。据估计在发达国家的人口中，15％的儿童和5％的成人患有哮喘。因此，治疗应当针对控制症状，以便正常的生活成为可能，与此同时为治疗根本性炎症提供基础。

COPD是表示一大类能够干扰正常呼吸的肺病的术语。目前的临床准则将COPD定义为以不完全可逆的气流受限(airflow limitation)为特征的病症。气流受限通常既是进行性的，又与肺对有害颗粒和气体的异常炎性响应有关。这类颗粒和气体的最重要贡献来源至少在西方世界是吸烟。COPD患者具有多种症状，包括咳嗽、呼吸短促和痰生成过多；这类症状来源于大量细胞区室(包括嗜中性粒细胞、巨噬细胞和上皮细胞)的功能障碍。COPD涵盖的两种最重要的病症是慢性支气管炎和肺气肿。

慢性支气管炎是支气管的长期炎症，导致粘液生成增加以及其它变化。患者的症状为咳嗽和咳痰。慢性支气管炎能够引起更频繁和更严重的呼吸系统感染、支气管变窄和堵塞、呼吸困难和能力丧失。

肺气肿是影响肺泡和/或最小支气管末梢的慢性肺疾病。肺丧失其弹性，因此肺的这些区域变得肿大。这些肿大的区域困住陈旧的气体，不会有效地与新鲜空气交换。这导致呼吸困难，并且可能导致对血液的供氧不足。肺气肿患者的主要症状是呼吸短促。

用于治疗呼吸系统疾病的治疗剂包括糖皮质激素(glucocorticosteroid)。糖皮质激素(也称皮质类固醇或糖皮质类固醇)是强效的抗炎剂。尽管它们确切的作用机理尚不清楚，不过糖皮质激素治疗的最终结果是炎性细胞的数量、活性和向支气管粘膜下层的运动降低，引起气道反应性降低。糖皮质激素也可以导致支气管上皮衬层脱落减少、血管渗透性减少和粘液分泌减少。

尽管糖皮质激素治疗能够产生重要的益处，不过这些成分的功效经常远不能令人满意，特别是在治疗COPD中。而且，尽管类固醇的使用可以引起治疗效果，不过需要能够使用低剂量的类固醇，以最小化可能与常规给药有关的不期望的副作用的发生和严重性。最近的研究也已经突出了患有呼吸系统疾病的患者中类固醇耐药性获得的问题。例如，已经发现患有哮喘的吸烟者对短期吸入的皮质类固醇疗法不敏感，但是吸烟者与非吸烟者之间的响应差异似乎因高剂量吸入的皮质类固醇而减小(Tomlinson et al.，Thorax 2005；60：282-287)。因此，医学上迫切需要抗呼吸系统疾病例如COPD和哮喘的新疗法，特别是具有疾病缓和潜力的疗法。

WO01/98273和WO03/051839描述了具有药物活性，特别是趋化因子受体(尤其MIP-1α趋化因子受体)调节剂活性的化合物、其盐和药物制剂，以及它们在治疗各种疾病中的潜在用途。

MIP-1α趋化因子受体CCR1(趋化因子受体1)在不同自身免疫、炎性、增殖性、过度增殖性和免疫学介导的疾病(例如哮喘和慢性阻塞性肺病)的病患组织中高度表达。而且，炎性细胞(例如嗜中性粒细胞和单核细胞/巨噬细胞)由于分泌蛋白水解酶、氧化剂和药理介质而对呼吸系统疾病、例如COPD的发病有贡献。这些细胞依赖于CCR1在肺组织中募集和活化的功能。

令人惊奇的是，现已发现如果组合使用CCR1受体拮抗剂和糖皮质激素，在呼吸系统疾病的治疗中可以观察到意料不到的有益治疗效果。例如，根据本发明的组合被认为在减少炎性细胞流入肺中是特别有效的。当将两种活性物质同时(或者在单一的药物制备物中或者经由分开的制备物)或者依次或者分别经由分开的药物制备物给药时，可以观察到有益的效果。

发明内容

因而，本发明提供一种药物产品(pharmaceutical product)，其组合包含

(a)第一活性成分，其是式(I)化合物或其可药用盐

其中

m是0、1或2；

每个R¹独立地表示卤素或氰基；

R²表示氢原子或甲基；

R³表示C₁-C₄烷基；和

R⁴表示氢或卤素；和

(b)第二活性成分，其是糖皮质激素。

本发明的药物产品可以例如是混合包含第一和第二活性成分的药物组合物。或者，药物产品可以是例如试剂盒(kit)，其包含第一活性成分的制备物(preparation)和第二活性成分的制备物，和任选的说明书，所述说明书用于对有所述需要的患者同时、依次或分开给予所述制备物。

在本说明书的上下文中，烷基取代基或者取代基中的烷基部分可以是直链或支链的。

整数m优选地是1或2。

每个R¹独立地表示卤素(例如氯、氟、溴或碘)或氰基。

在本发明的一种实施方式中，m是1，R¹表示卤原子，特别是氯原子。

在进一步的实施方式中，m是1，R¹表示卤原子(例如氯)，其位于苯环上与连接基团CH₂连接的碳原子的4位。

R²表示氢原子或甲基。在本发明的一种实施方式中，R²表示甲基。

R³表示C₁-C₄烷基(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基)。通常，R³是甲基或乙基，特别是甲基。

R⁴表示氢或卤素(例如氟、氯、溴或碘)。在本发明的实施方式中，R⁴表示氢或氯。

式(I)化合物能够以立体异构形式存在。应当理解的是，本发明涵盖式(I)化合物的所有几何异构体与光学异构体，以及这些异构体的混合物，包括外消旋物的使用。互变异构体及其混合物的使用也构成本发明的一方面。优选的光学异构体是(S)-对映异构体(也就是在R²和OH连接的立体中心具有S构型的化合物)。

本发明的式(I)化合物可以利用WO01/98273和WO03/051839所述工艺合成。

式(I)化合物可以使用其可药用盐的形式，优选酸加成盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐、乙酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、富马酸盐、半富马酸盐(hemifumarate)、糠酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、草酸盐、昔萘酸盐(xinafoate)、甲磺酸盐或对-甲苯磺酸盐。可药用盐也包括内盐(两性离子)形式。任何对式(I)化合物或其盐的称谓也涵盖这类化合物的溶剂化物和这类盐的溶剂化物(例如水合物)。

应当理解的是，式(I)化合物及其盐可以作为两性离子存在。因而，尽管以羟基形式描绘和表示化合物，不过它们也可以以内盐(两性离子)形式存在。本发明式(I)和实施例的表示法涵盖羟基和两性离子形式及其任意比例的混合物。

在本发明的另一种实施方式中，式(I)化合物选自

N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺，

N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺，

N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺，

N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基丙基)氧基]-4-羟基苯基}丙酰胺，或者

N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}丙酰胺，

或其可药用盐。

在本发明的另一种实施方式中，式(I)化合物是N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺的盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐、乙酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、富马酸盐、半富马酸盐、糠酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、草酸盐、昔萘酸盐、甲磺酸盐或对-甲苯磺酸盐。具有特别良好的性质(例如有利的结晶度和适于例如配制在干粉制剂中给药至肺的其它物理性质)的盐是N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺的苯甲酸盐、富马酸盐或半富马酸盐，包括实施例中提到的盐的任何形式。

在本发明的实施方式中，式(I)化合物或其盐具有结晶性质，例如至少50％结晶度、至少60％结晶度、至少70％结晶度或至少80％结晶度。由常规的X-射线衍射技术可以估计结晶度。

在本发明的另一种实施方式中，式(I)化合物或其盐为50％、60％、70％、80％或者90％至95％、96％、97％、98％、99％或100％结晶度。

应当注意，本文在表达X-射线粉末衍射峰时(°2θ)，误差界限与美国药典关于X-射线衍射的总章(USP941)相一致——参见United StatesPharmacopeia Convention.X-Ray Diffraction，General Test<941>.UnitedStates Pharmacopeia，25th ed.Rockville，MD：United States PharmacopeialConvention；2002：2088-2089。

在本发明的实施方式中，式(I)化合物是N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺的半富马酸盐，它显示至少如下的特征X-射线粉末衍射峰(以°2θ表达)：

(1)6.2，10.7和12.5，或者

(2)6.2，10.7和18.8，或者

(3)6.2，10.7和18.0，或者

(4)6.2，10.7，12.5，18.0和18.8，或者

(5)6.2，10.7，12.5，18.0，18.8，19.7和19.8。

在本发明的另一种实施方式中，式(I)化合物是N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺的糠酸盐，它显示至少如下的特征X-射线粉末衍射峰(以°2θ表达)：

(1)6.3，11.0和12.7，或者

(2)6.3，10.7和12.7，或者

(3)6.3，11.0，12.7和15.9，或者

(4)6.3，10.7，11.0，12.7，13.9，14.2和15.9，或者

(5)6.3，10.7，11.0，12.7，15.9，17.7，19.1，19.7和25.5，或者

(6)6.3，10.7，11.0，12.7，13.9，14.2，15.9，17.7，19.1，19.7，19.9，21.6和25.5。

在本发明的另一种实施方式中，式(I)化合物是N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺的糠酸盐，它显示至少如下的特征X-射线粉末衍射峰(以°2θ表达)：

(1)6.7，11.0和13.4，或者

(2)6.7，10.4，11.0和13.4，或者

(3)6.7，10.4，12.4，13.4和13.7，或者

(4)6.7，10.4，13.4和20.9，或者

(5)6.7，10.4，11.0，12.4，13.4，13.7，15.6，16.0和17.6，或者

(6)6.7，10.4，11.0，12.4，13.4，13.7，15.6，16.0，16.1，17.6，18.0，18.6，18.9，20.1，20.9和23.4。

在本发明的另一种实施方式中，式(I)化合物是N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺的苯甲酸盐，它显示至少如下的特征X-射线粉末衍射峰(以°2θ表达)：

(1)6.1，10.7和19.3，或者

(2)6.1，12.2和14.1，或者

(3)6.1，10.7，12.2，14.1，18.1和19.3，或者

(4)6.1，10.7，12.2，14.1，15.7，18.1和19.3，或者

(5)6.1，10.7，12.2，14.1，15.1和19.3，或者

(6)6.1，10.7，12.2，14.1，15.1，15.7，18.1和19.3，或者

(7)6.1，10.7，12.2，14.1，15.1，15.7，18.1，19.3，21.2和24.6。

在本发明的另一种实施方式中，式(I)化合物是N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺的苯甲酸盐，它显示至少如下的特征X-射线粉末衍射峰(以°2θ表达)：

(1)6.5，9.3和10.5，或者

(2)6.5，9.3，17.6和17.8，或者

(3)6.5，9.3，10.5，12.0和12.4，或者

(4)6.5，9.3，10.5，12.0，12.4，13.0，13.6，15.5，17.6和17.8，或者

(5)6.5，13.0和20.2，或者

(6)6.5，9.3，10.5，12.0，12.4，13.0，13.6，15.5，17.6，17.8和19.2，或者

(7)6.5，9.3，10.5，12.0，12.4，13.0，13.6，15.5，17.6，17.8，19.2，20.2，22.8和26.0，或者

(8)6.5，9.3，10.5，12.0，12.4，13.0，13.6，15.5，17.6，17.8，19.2，20.2，22.8，24.2，26.0和30.7。

在本发明的进一步实施方式中，式(I)化合物是N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺的糠酸盐或苯甲酸盐。

本发明组合中的第二活性成分是糖皮质激素。本发明的糖皮质激素可以是任何合成的或天然存在的糖皮质激素。可以用于本发明的糖皮质激素的实例包括布地奈德、氟替卡松(例如作为丙酸酯)、莫米松(mometasone)(例如作为糠酸酯(furoate ester))、倍氯米松(beclomethasone)(例如作为17-丙酸酯或17，21-二丙酸酯)、环索奈德(ciclesonide)、氯替泼诺(loteprednol)(例如作为依碳酸酯(etabonate))、依替泼诺(etiprednol)(例如作为二氯乙酸酯)、曲安西龙(triamcinolone)(例如作为缩丙酮(acetonide))、氟尼缩松(flunisolide)、zoticasone、氟莫奈德(flumoxonide)、罗氟奈德(rofleponide)、布替可特(butixocort)(例如作为丙酸酯)、泼尼松龙(prednisolone)、泼尼松(prednisone)、替泼尼旦(tipredane)、根据WO 2002/12265、WO 2002/12266和WO2002/88167的类固醇酯类，例如6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾(androsta)-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟代甲基酯、6α，9α-二氟-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-17α-丙酰氧基-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-(2-氧代-四氢呋喃-3S-基)酯和6α，9α-二氟-11β-羟基-16α-甲基-17α-[(4-甲基-1，3-噻唑-5-羰基)氧基]-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟代甲基酯；类固醇酯如DE 4129535所述那些，类固醇如GSK870086、GSK685698、GSK799943和WO 2002/00679、WO 2005/041980的那些，等等。

在本说明书的上下文中，除非另有说明，任何对于糖皮质激素的称谓都包括可以从所述糖皮质激素生成的所有活性盐、溶剂化物或衍生物。糖皮质激素可能的盐或衍生物的实例包括：钠盐、磺基苯甲酸盐、磷酸盐、异烟酸盐、乙酸盐、丙酸盐、二氢磷酸盐、棕榈酸盐、特戊酸盐、富马酸盐和可药用酯(例如C₁-C₆烷基酯)。糖皮质激素及其活性盐或衍生物也可以为它们的溶剂化物形式，例如水合物形式。

在本发明的一种实施方式中，糖皮质激素是布地奈德。布地奈德的化学名称是16，17-[亚丁基双(氧基)]-11，21-二羟基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮。布地奈德及其制备例如描述于Arzneimittel-Forschung(1979)，29(11)，1687-1690、DE 2,323,215和US 3,929,768中。目前可用的布地奈德制剂是市售的‘Entocort’。

式(I)化合物当与糖皮质激素联用，特别是与布地奈德联用时呈现出特别惊人的作用。例如，体内动物实验表明，糖皮质激素与式(I)化合物的组合在两种组分单独没有显著影响肺部炎症的剂量水平时显著减少了炎性细胞流入(inflammatory cell influx)。对这种组合而言，细胞流入减少大于两种成分加和效果所预期的。当将这些成分组合时，所观察到的协同效果可用于例如降低类固醇的治疗剂量，或者以相同的剂量获得比单独使用类固醇时对炎症的增强效果。当需要较低剂量的类固醇时，例如在已经获得对这些类固醇耐药性的个体中，协同效果可以特别有利的。

本发明的药物产品可以进一步任选地包含作为第三活性成分的支气管扩张剂。支气管扩张剂是松弛和扩张支气管通道并且改善空气流通进入肺的药物。可以在本发明中使用的支气管扩张剂的实例包括β₂-激动剂或抗胆碱能化合物。

β₂-激动剂(也称beta2(β₂)肾上腺受体激动剂)可以用于通过松弛支气管平滑肌、减少气道阻塞、减少肺充气过度和降低呼吸短促来减轻呼吸系统疾病的症状。本发明的β₂-激动剂可以是任何能够刺激β₂-受体和充当支气管扩张剂的化合物或物质。可以在本发明中使用的β₂-激动剂的实例包括班布特罗(bambuterol)、比托特罗(bitolterol)、卡布特罗(carbuterol)、茚达特罗(indacaterol)、克伦特罗(clenbuterol)、非诺特罗(fenoterol)、福莫特罗、海索那林(hexoprenaline)、三丁喘宁(ibuterol)、吡布特罗(pirbuterol)、丙卡特罗(procaterol)、瑞普特罗(reproterol)、沙美特罗(salmeterol)、磺丁喘宁(sulphonterol)、特布他林(terbutaline)、托布特罗(tolubuterol)、TA 2005(化学鉴定为2(1H)-喹诺酮、8-羟基-5-[1-羟基-2-[[2-(4-甲氧基-苯基)-1-甲基乙基]-氨基]乙基]-单盐酸盐；[R-(R^*，R^*)]，也由Chemical Abstract Service RegistryNumber 137888-11-0确定并公开于美国专利4,579,854(＝CHF-4226)中)；GSK159797；甲酰苯胺衍生物，例如公开于WO 2002/76933中的3-(4-{[6-({(2R)-2-[3-(甲酰氨基)-4-羟基苯基]-2-羟基乙基}氨基)己基]氧基}-丁基)-苯磺酰胺；苯磺酰胺衍生物，例如公开于WO 2002/88167中的3-(4-{[6-({(2R)-2-羟基-2-[4-羟基-3-(羟基-甲基)苯基]乙基}氨基)-己基]氧基}丁基)苯磺酰胺；芳基苯胺受体激动剂，例如公开于WO 2003/042164和WO2005/025555中的芳基苯胺受体激动剂；以及吲哚衍生物，例如公开于WO2004/032921中的吲哚衍生物。

一方面，本发明的β₂-激动剂是长效β₂-激动剂，也就是活性持续12小时以上的β₂-激动剂。长效β₂-激动剂的实例包括福莫特罗、班布特罗和沙美特罗。

在本说明书的上下文中，除非另有说明，任何对于支气管扩张剂(包括β₂-激动剂、长效β₂-激动剂和抗胆碱能化合物)的称谓包括可以从所述支气管扩张剂生成的活性盐、溶剂化物或衍生物及其任意对映异构体，以及对映异构体的混合物，包括外消旋物。可能的盐或衍生物的实例是酸加成盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、1-羟基-2-萘羧酸盐、马来酸盐和可药用酯(例如C₁-C₆烷基酯)。支气管扩张剂(包括其盐和衍生物)也可以为溶剂化物的形式，例如水合物的形式。

抗胆碱能化合物的实例包括异丙托铵(ipratropium)(例如异丙托溴铵)、噻托铵(tiotropium)(例如噻托溴铵)、氧托铵(oxitropium)(例如氧托溴铵)、托特罗定(tolterodine)、AD-237(Arakis)和公开于US 2003/0055080中的喹核碱衍生物。

在本发明的实施方式中，支气管扩张剂是福莫特罗。福莫特罗的化学名称是N-[2-羟基-5-[(1)-1-羟基-2-[[(1)-2-(4-甲氧基苯基)-1-甲基乙基]氨基]乙基]苯基]-甲酰胺。福莫特罗的制备例如描述于WO 92/05147中。如上清楚地可知，术语“福莫特罗”意图包括其所有可药用盐。在这种实施方式的一方面中，支气管扩张剂是富马酸福莫特罗，例如富马酸福莫特罗二水合物。

正如上文强调的，应当理解的是，本发明涵盖福莫特罗的所有光学异构体及其混合物、包括外消旋物的使用。因而例如，术语“福莫特罗”涵盖N-[2-羟基-5-[(1R)-1-羟基-2-[[(1R)-2-(4-甲氧基苯基)-1-甲基乙基]氨基]乙基]苯基]-甲酰胺、N-[2-羟基-5-[(1S)-1-羟基-2-[[(1S)-2-(4-甲氧基苯基)-1-甲基乙基]氨基]乙基]苯基]-甲酰胺或者这些对映异构体的混合物，包括外消旋物。

在本发明的进一步实施方式中，支气管扩张剂是茚达特罗。如上清楚地可知，术语“茚达特罗”意图包括其所有可药用盐，例如包括马来酸茚达特罗和盐酸茚达特罗。

本发明的式(I)化合物或其可药用盐(第一活性成分)、糖皮质激素(第二活性成分)和任选的支气管扩张剂(第三活性成分)可以同时(simultaneously)、依次(sequentially)或分开(separately)给药，治疗呼吸系统疾病。“依次”是指活性成分按任意顺序给药，给药一种之后，立即给予给药另一种。如果将它们分开给药，则它们仍然具有所需的效果，但是在按这种方式给药时，它们的给药间隔一般小于4小时，更适宜地间隔小于2小时，更更适宜地间隔小于30分钟，最适宜地间隔小于10分钟。

可以采用常规的系统剂型(systemic dosage form)，例如片剂、胶囊剂、丸剂、粉剂、水性或油性溶液剂或混悬剂、乳液和无菌注射的水性或油性溶液剂或混悬剂，将本发明的活性成分口服或肠胃外(例如静脉内、皮下、肌内或关节内)给药。活性成分也可以以溶液剂、混悬剂、气雾剂和干粉制剂的形式局部给药(至肺和/或气道)。这些剂型通常将包括一种或多种可药用成分，它们可以选自例如辅料、载体、粘合剂、润滑剂、稀释剂、稳定剂、缓冲剂、乳化剂、粘度调节剂、表面活性剂、防腐剂、矫味剂和着色剂。正如本领域技术人员所理解的，给药活性成分的最适当方法取决于多种因素。

在本发明的一种实施方式中，活性成分是经由分开的药物制备物给药的。

因此，在一方面，本发明提供一种试剂盒，其包含第一活性成分的制备物，第一活性成分是式(I)化合物或其可药用盐，和第二活性成分的制备物，第二活性成分是糖皮质激素，和任选的说明书，所述说明书用于对有所述需要的患者同时、依次或分开给予所述制备物。试剂盒可以进一步任选地包含第三活性成分的制备物，其是支气管扩张剂。

在另一种实施方式中，活性成分可以经由单一的药物组合物给药。因此，本发明进一步提供药物组合物，其混合包含第一活性成分，其是式(I)化合物或其可药用盐，和第二活性成分，其是糖皮质激素。药物组合物可以进一步任选地包含第三活性成分，其是支气管扩张剂。本发明也提供制备药物组合物的方法，包括将第一活性成分与第二活性成分和任选的第三活性成分混合。

本发明的药物组合物可以如下制备：将第一活性成分和第二活性成分与可药用辅料、稀释剂或载体，以及任选的第三活性成分混合。因此，在本发明的进一步方面，提供制备药物组合物的方法，包括将式(I)化合物或其可药用盐与糖皮质激素和可药用辅料、稀释剂或载体，以及任选的支气管扩张剂混合。

应当理解的是，根据本发明，所给药的每种活性成分的治疗剂量随所采用的特定活性成分、给予活性成分的方式和所治疗的病症或疾患而异。

在本发明的一种实施方式中，本发明的第一活性成分、第二活性成分(和第三活性成分，如果存在的话)是各自吸入给药的。在这方面，活性成分是同时、依次或分开吸入的。

遍及本申请的说明书中，除非另有明确不同限定之外，所用活性成分的量是指单位剂量。

在吸入给药时，第一活性成分(式(I)化合物或其可药用盐)的剂量一般为如下的范围：0.1μg至10000μg、0.1至5000μg、0.1至1000μg、0.1至500μg、0.1至200μg、0.1至200μg、0.1至100μg、0.1至50μg、5μg至5000μg、5至1000μg、5至500μg、5至200μg、5至100μg、5至50μg、10至5000μg、10至1000μg、10至500μg、10至200μg、10至100μg、10至50μg、20至5000μg、20至1000μg、20至500μg、20至200μg、20至100μg、20至50μg、50至5000μg、50至1000μg、50至500μg、50至200μg、50至100μg、100至5000μg、100至1000μg或100至500μg。

第一活性成分(式(I)化合物或其可药用盐)也可以口服给药。口服给药的CCR1受体拮抗剂可以例如用在药物产品或试剂盒中，而其中其他活性成分是吸入给药的。

在吸入给药时，第二活性成分(糖皮质激素)的剂量一般为如下范围：从0.1μg至1000μg、0.1至500μg、0.1至200μg、0.1至100μg、0.1至50μg、0.1至5μg、5至1000μg、5至500μg、5至200μg、5至50μg、5至10μg、10至1000μg、10至500μg、10至200μg、10至100μg、10至50μg、20至1000μg、20至500μg、20至200μg、20至100μg、20至50μg、50至1000μg、50至500μg、50至200μg、50至100μg、100至1000μg或100至500μg。

在一种实施方式中，所用第一活性成分的量在1μg至200μg的范围内，第二成分的量在1μg至200μg的范围内。

剂量中第二活性成分与第一活性成分的摩尔比通常可以在1∶10至10∶1的范围内。优选地，该比例在1∶1至10∶1的范围内，进而优选地在5∶1至20∶1的范围内。

当存在时，第三活性成分(支气管扩张剂)可以适宜地经吸入给药，剂量一般为如下范围：0.1至100μg、0.1至50μg、0.1至40μg、0.1至30μg、0.1至20μg、0.1至10μg、5至100μg、5至50μg、5至40μg、5至30μg、5至20μg、5至10μg、10至100μg、10至50μg、10至40μg、10至30μg或10至20μg。在本发明的实施方式中，第三活性成分的剂量在1至30μg的范围内。

第一活性成分和第二活性成分(和第三活性成分，如果存在的话)的剂量一般为每天分1至4次给予，适宜地每天一次或两次，最适宜地每天一次。

在一种实施方式中，本发明提供一种药物产品，其组合包含第一活性成分，其是式(I)化合物或其可药用盐，和第二活性成分，其是糖皮质激素，和任选的第三活性成分，其是支气管扩张剂，其中每种活性成分被配制成吸入给药。

活性成分适宜地以溶液剂、混悬剂、气雾剂或干粉制剂的形式吸入给药(例如局部给药至肺和/或气道)。给药可以是经口吸入或鼻内吸入。活性成分优选地适合于从干粉吸入器、加压计量吸入器或雾化器中一起或分别给药。

活性成分可以与一种或多种可药用添加剂、稀释剂或载体混合使用。适合的稀释剂或载体的实例包括乳糖(例如一水合物)、葡聚糖、甘露糖醇或葡萄糖。

计量吸入装置可以用于给予分散在适合的推进剂中的活性成分，其中含有或没有额外的赋形剂(例如乙醇)、表面活性剂、润滑剂、抗氧化剂或稳定剂。适合的推进剂包括烃、氯氟碳和氢氟烷(例如七氟烷)推进剂，或者所述推进剂的任意混合物。优选的推进剂是P134a和P227，它们各自可以单独使用或者与其他推进剂和/或表面活性剂和/或其他赋形剂组合使用。也可以使用单位剂量或多剂量制剂形式的雾化含水混悬剂，或者优选为溶液剂，其中含有或没有适合的pH和/或张力调节剂。

干粉吸入器可以用于单独地给予活性成分或者给予活性成分与可药用载体的组合，在给予活性成分与可药用载体的组合情况时，以微细粉碎的粉末或者有序混合物的形式给药。干粉吸入器可以是单剂量或多剂量，并且可以采用干粉或含有粉末的胶囊。

当将各活性成分一起或分别经由雾化器给药时，它们可以是雾化的含水混悬剂或溶剂形式，其中含有或没有适合的pH或张力调节剂，为单剂量或多剂量装置。

计量吸入器、雾化器和干粉吸入装置是公知的，多种这类装置是可获得的。

在本发明的实施方式中，可将式(I)化合物或其可药用盐口服给药，而其他活性成分吸入给药。

本发明进一步提供在治疗中同时、依次或分开使用的本发明的药物产品、试剂盒或药物组合物。

本发明进一步提供根据本发明的药物产品、试剂盒或药物组合物在制备用于治疗呼吸系统疾病，尤其是慢性阻塞性肺病或哮喘的药物中的用途。

本发明更进一步提供治疗呼吸系统疾病的方法，包含对有此需要的患者同时、依次或分开给予：

(a)(治疗有效)剂量的第一活性成分，其是式(I)化合物或其可药用盐；和

(b)(治疗有效)剂量的第二活性成分，其是糖皮质激素；和任选的

(c)(治疗有效)剂量的第三活性成分，其是支气管扩张剂。

在本申请说明书的上下文中，除非另有相反的具体说明，术语“治疗”也包括“预防”。术语“治疗的”和“治疗地”也可相应地解释。

预防被认为与患有所述疾病或病症的先前发作的人员的治疗特别有关，或被认为与处于所述疾病或病症的增加危险之中的人员的治疗特别有关。处于形成具体疾病或病症的危险之中的人员，通常包括具有该疾病或病症的家族史的那些人员，或已经通过遗传学试验或筛选确定为对特别易患该疾病或病症的那些人员。

现在将参照下列说明性实施例进一步理解本发明，其中

图1显示使用本发明组合在LPS-刺激的大鼠中的细胞流入实验结果。

一般方法

在Varian Unity Inova 400或Varian Mercury VX 300上记录¹H NMR光谱，数据以δ值的形式引用，以相对于内标四甲基硅烷(TMS)的百万分之份数(ppm)给出。

使用氯仿-d(δ_H 7.27ppm)、丙酮-d₆(δH 2.05ppm)或DMSO-d₆(δ_H 2.50ppm)的中心溶剂峰作为内标。

在配有APCI/ESI电离室的Agilent MSD 1100LC-MS系统上记录低分辨率质谱和精确质量测定。

全部溶剂和商品试剂均为实验室级，并且按原样使用。

使用下列缩写：

DMSO    二甲基亚砜；

DMF    N-二甲基甲酰胺；

THF    四氢呋喃；

TFA    三氟乙酸

X-射线粉末衍射分析

可根据标准方法，对所制备的样品进行X射线粉末衍射(XRPD)分析(参见例如Giacovazzo et al.，eds.，Fundamentals of Crystallography，OxfordUniversity Press(1992)、Jenkins & Snyder，eds.，Introduction to X-Ray PowderDiffractometry，John Wiley & Sons，New York(1996)、Bunn，ed.，ChemicalCrystallography，Clarendon Press，London(1948)和Klug & Alexander eds.，X-ray Diffraction Procedures，John Wiley & Sons，New York(1974))。

如下所述得到在实施例1中描述的半富马酸盐(为无水形式)的X射线粉末衍射图：

将使用单色CuKα辐射(45kV和40mA)的Bragg-Brentano仲聚焦粉末X射线衍射仪用于该分析。第一光学器件包含Soller狭缝和自动发散狭缝(automatic divergence slit)。在测量期间旋转的零背景板(zero background plate)上制备扁平的样品。第二光学器件包含Soller狭缝、自动防散射狭缝、接收狭缝和单色器。衍射信号用成比例的氙气填充检测器检测。以连续的扫描模式，采集2°≤2θ≤40°之间的衍射图，扫描步幅为0.016°2θ，扫描速率为4°2θ/分钟。储存电子形式的原始数据。对原始或平滑处理过的衍射图进行评价。

将反射模式的Panalytical X’pert PRO MPDθ-θ衍射仪用于上述测量。本领域技术人员可设置粉末X射线衍射仪的仪器参数，从而使得能够采集与所提供的数据相当的衍射数据。

MIP-1α趋化因子受体拮抗剂的制备

实施例1(a)

N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺半富马酸盐(2∶1盐)的制备

历经15分钟，向搅拌的粗制N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺(24.0g，36.5mmol；如WO 03/051839实施例1所述在pH 9用三氟乙酸从相应的盐萃取得到)的甲醇(240ml)溶液中，加入富马酸(2.13g，18.3mmol)的甲醇(55ml)溶液。观察到在加入大约三分之二富马酸溶液时有沉淀开始生成。当加入全部富马酸溶液时，停止搅拌，使反应混合物在环境温度(20℃)于密封的烧瓶中过夜。经过滤漏斗分离沉淀，用甲醇洗涤(3x50ml)，在60℃真空干燥过夜，得到标题盐，为灰白色固体(14.0g，73％)。

¹H NMR(399.99MHz，dmso)δ8.91(s，1H)，7.48(d，J＝8.6Hz，1H)，7.38(d，J＝8.5Hz，2H)，7.31(d，J＝8.4Hz，2H)，6.50(s，1H)，6.42(d，J＝2.5Hz，1H)，6.31(dd，J＝8.6，2.5Hz，1H)，3.79(s，强偶联AB-系统，2H)，3.44(s，2H)，2.88(d，J＝12.2Hz，1H)，2.82-2.72(m，3H)，2.64-2.55(m，1H)，2.02(s，3H)，2.00-1.92(m，2H)，1.91-1.83(m，2H)，1.47-1.35(m，2H)，1.23(s，3H)

APCI-MS：m/z 462[MH+]

NMR证实碱与酸的化学计量比为2∶1。

半富马酸盐显示至少如下的特征X-射线粉末衍射(XRPD)峰(以°2θ表达)(误差界限与美国药典关于X-射线衍射的总章(USP941)相一致——参见United States Pharmacopeia Convention.X-Ray Diffraction，General Test<941>.United States Pharmacopeia，25th ed.Rockville，MD：United StatesPharmacopeial Convention；2002：2088-2089)：

(1)6.2，10.7和12.5，或者

(2)6.2，10.7和18.8，或者

(3)6.2，10.7和18.0，或者

(4)6.2，10.7，12.5，18.0和18.8，或者

(5)6.2，10.7，12.5，18.0，18.8，19.7和19.8。

实施例1(b)

N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺苯甲酸盐(1∶1盐)，A型的制备

(a)将N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺(可以由WO 03/051839所述方法制备；462mg，1.0mmol)的乙酸乙酯(10ml)热溶液和苯甲酸(244mg，2.0mmol)的乙酸乙酯(10ml)溶液混合。使所得混合物在密封的小瓶中冷却至环境温度(20℃)。发现有白色沉淀生成，没有浑浊。在环境温度放置过夜后，得到沉淀，用乙酸乙酯洗涤(3x10ml)沉淀，在60℃真空干燥过夜，得到标题盐，为灰白色固体(506mg，86％)。该盐含有痕量的乙酸乙酯。

¹H NMR(399.99MHz，丙酮-d₆)δ8.77(s，1H)，8.07-8.04(m，2H)，7.83(d，J＝8.7Hz，1H)，7.55-7.50(m，1H)，7.46-7.41(m，2H)，7.36-7.31(m，4H)，6.52(d，J＝2.6Hz，1H)，6.40(dd，J＝8.7，2.6Hz，1H)，3.97(d，J＝9.3Hz，1H)，3.89(d，J＝9.3Hz，1H)，3.48(s，2H)，3.29(d，J＝12.1Hz，1H)，2.94(d，J＝12.2Hz，1H)，2.91-2.77(m，3H)，2.09-2.00(m，4H)，1.98(s，3H)，1.72-1.59(m，2H)，1.30(s，3H)

APCI-MS：m/z 462[MH+]

NMR证实碱与酸的化学计量比为1∶1。

由下列方法制备更多量的标题盐：

(b)将N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺(4.0g，8.65mmol)的乙酸乙酯(75ml)热溶液和苯甲酸(1.16g，9.5mmol)的乙酸乙酯(75ml)溶液混合。当所得混合物已经冷却至环境温度(20℃)时，用如上(a)所得标题盐的颗粒对其进行种晶，在密封的烧瓶中过夜。所得到的沉淀用乙酸乙酯洗涤(3x50ml)，在60℃真空干燥过夜，得到标题盐，为灰白色固体(4.41g，87％)。该盐含有痕量的乙酸乙酯。

苯甲酸盐A型显示至少如下的特征X-射线粉末衍射(XRPD)峰(以°2θ表达)(误差界限与美国药典关于X-射线衍射的总章(USP941)相一致——参见United States Pharmacopeia Convention.X-Ray Diffraction，General Test<941>.United States Pharmacopeia，25th ed.Rockville，MD：United StatesPharmacopeial Convention；2002：2088-2089)：

(1)6.1，10.7和19.3，或者

(2)6.1，12.2和14.1，或者

(3)6.1，10.7，12.2，14.1，18.1和19.3，或者

(4)6.1，10.7，12.2，14.1，15.7，18.1和19.3，或者

(5)6.1，10.7，12.2，14.1，15.1和19.3，或者

(6)6.1，10.7，12.2，14.1，15.1，15.7，18.1和19.3，或者

(7)6.1，10.7，12.2，14.1，15.1，15.7，18.1，19.3，21.2和24.6。

N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺苯甲酸盐(1∶1盐)，B型的制备

(a)将由实施例1(b)方法制备的苯甲酸盐(A型，10至15mg)置于示差扫描量热盘中(带有卷曲盖)，以5K/min的加热速率进行加热，直至达到155℃的温度。一旦盐熔化(在所用条件下记录到起始熔化温度为146.5℃)，将熔化样品以5K/min的速率冷却至环境温度(20℃)。然后再次以5K/min的加热速率加热样品盘，直至达到151℃的温度，历经10分钟记录148℃的扫描等温线。然后将盘迅速冷却至环境温度，导致晶体的形成，随后经X-射线粉末衍射(XRPD)证实为N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺苯甲酸盐的新晶型(B型)。一些无定形苯甲酸盐可能形成为该方法的副产物。

(b)上述(a)中的B型盐也如下制备：在小瓶中，将20％w的由实施例1(b)方法制备的苯甲酸盐样品(A型)溶于溶剂，例如甲醇(＞20mg/ml)、乙醇(＞20mg/ml)、正丙醇(＞20mg/ml)、异丙醇(8.5mg/ml)或丙酮(9.6mg/ml)。括号内的数字表示所述盐在这些溶剂中的估计溶解度。然后密封小瓶，利用磁体在环境温度(20℃)均化悬浮液。保温搅拌至少7天，然后将所得产物样品干燥，进行XRPD测试。XRPD证实A型已经完全转化为B型。

(c)上述(a)中的B型盐也如下制备：在圆底烧瓶中将由实施例1(b)方法制备的苯甲酸盐(A型)(22.0g，37.7mmol)和苯甲酸(0.46g，3.8mmol)溶于热2-丙醇(190ml)中，得到微红色溶液。在40℃水浴上利用旋转蒸发器旋转烧瓶，直至溶液已经冷却至40℃，此时用一些B型盐的晶体对其进行种晶。使水浴缓慢冷却至环境温度过夜，同时旋转烧瓶，偶尔用一些B型盐的晶体对混合物进行种晶。抽吸分离所生成的粉红色沉淀，用2-丙醇洗涤(2x50ml)，在100℃真空干燥20小时，得到标题盐(经过XRPD证实)，为淡粉红色固体(18.5g，84％)。该盐含有痕量的2-丙醇。

¹H NMR(299.95MHz，DMSO-d6)δ8.87(s，1H)，7.96-7.91(m，2H)，7.59-7.52(m，1H)，7.49-7.47(m，1H)，7.46-7.42(m，2H)，7.36(d，J＝8.6Hz，2H)，7.29(d，J＝8.6Hz，2H)，6.39(d，J＝2.5Hz，1H)，6.29(dd，J＝8.5，2.5Hz，1H)，3.78-3.72(m，2H)，3.41(s，2H)，2.79-2.66(m，4H)，1.98(s，3H)，1.97-1.88(m，2H)，1.85-1.76(m，2H)，1.41-1.25(m，2H)，1.19(s，3H)

APCI-MS：m/z 462[MH+]

NMR证实碱与酸的化学计量比为1∶1。

苯甲酸盐B型显示至少如下的特征X-射线粉末衍射(XRPD)峰(以°2θ表达)(误差界限与美国药典关于X-射线衍射的总章(USP941)相一致——参见United States Pharmacopeia Convention.X-Ray Diffraction，General Test<941>.United States Pharmacopeia，25th ed.Rockville，MD：United StatesPharmacopeial Convention；2002：2088-2089)：

(1)6.5，9.3和10.5，或者

(2)6.5，9.3，17.6和17.8，或者

(3)6.5，9.3，10.5，12.0和12.4，或者

(4)6.5，9.3，10.5，12.0，12.4，13.0，13.6，15.5，17.6和17.8，或者

(5)6.5，13.0和20.2，或者

(6)6.5，9.3，10.5，12.0，12.4，13.0，13.6，15.5，17.6，17.8和19.2，或者

(7)6.5，9.3，10.5，12.0，12.4，13.0，13.6，15.5，17.6，17.8，19.2，20.2，22.8和26.0，或者

(8)6.5，9.3，10.5，12.0，12.4，13.0，13.6，15.5，17.6，17.8，19.2，20.2，22.8，24.2，26.0和30.7。

实施例1(c)

N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺糠酸盐(1∶1盐)，A型的制备

(a)在小瓶中，向搅拌的N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺(可以由WO 03/051839所述方法制备；46mg，0.1mmol)与糠酸(23mg，0.2mmol)的甲醇(0.2ml)溶液中，加入乙醚(5ml)，密封小瓶。将所得混合物搅拌3天，分离所生成的沉淀，用乙醚洗涤，在真空干燥，得到灰白色固体(38mg)。该固体含有标题盐，为结晶物质，以及一些无定形盐。标题盐含有痕量的乙醚。

¹H NMR(299.946MHz，DMSO-d₆)δ8.92(s，1H)，7.75-7.73(m，1H)，7.46(d，J＝8.6Hz，1H)，7.37(d，J＝4.4Hz，2H)，7.29(d，J＝4.4Hz，2H)，6.97-6.94(m，1H)，6.54(dd，J＝3.4，1.7Hz，1H)，6.40(d，J＝2.4Hz，1H)，6.29(dd，J＝8.6，2.4Hz，1H)，3.78(s，2H)，3.43(s，2H)，2.93(d，J＝12.1Hz，1H)，2.84-2.71(m，3H)，2.70-2.58(m，1H)，1.99(s，3H)，1.96-1.83(m，4H)，1.51-1.34(m，2H)，1.22(s，3H)

APCI-MS：m/z 462[MH+]

NMR证实碱与酸的化学计量比为1∶1。

由下列方法制备更多量的标题盐：

(b)向在小瓶中含有的N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺(230mg，0.5mmol)的甲醇(0.5ml)溶液中，加入糠酸固体(62mg，0.55mmol)。摇动混合物，直至得到溶液。将溶液用乙酸乙酯(6ml)稀释，用如上(a)所得标题盐的颗粒对其进行种晶，在密封的小瓶中放置过夜。将所得沉淀用乙酸乙酯洗涤，在60℃真空干燥过夜，得到标题盐，为灰白色固体(200mg，70％)。标题盐含有痕量的乙酸乙酯。

¹H NMR(299.946MHz，DMSO-d₆)δ8.94(s，1H)，7.73-7.71(m，1H)，7.47(d，J＝8.6Hz，1H)，7.37(d，J＝8.4Hz，2H)，7.30(d，J＝8.4Hz，2H)，6.94-6.91(m，1H)，6.52(dd，J＝3.3，1.8Hz，1H)，6.40(d，J＝2.2Hz，1H)，6.30(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，3.78(s，2H)，3.43(s，2H)，2.97(d，J＝11.9Hz，1H)，2.87-2.61(m，4H)，1.98(s，3H)，1.96-1.85(m，4H)，1.53-1.38(m，2H)，1.23(s，3H)

APCI-MS：m/z 462[MH+]

NMR证实碱与酸的化学计量比为1∶1。

糠酸盐A型显示至少如下的特征X-射线粉末衍射(XRPD)峰(以°2θ表达)(误差界限与美国药典关于X-射线衍射的总章(USP941)相一致——参见the United States Pharmacopeia Convention.X-Ray Diffraction，General Test<941>.United States Pharmacopeia，25th ed.Rockville，MD：United StatesPharmacopeial Convention；2002：2088-2089)：

(1)6.3，11.0和12.7，或者

(2)6.3，10.7和12.7，或者

(3)6.3，11.0，12.7和15.9，或者

(4)6.3，10.7，11.0，12.7，13.9，14.2和15.9，或者

(5)6.3，10.7，11.0，12.7，15.9，17.7，19.1，19.7和25.5，或者

(6)6.3，10.7，11.0，12.7，13.9，14.2，15.9，17.7，19.1，19.7，19.9，21.6和25.5。

N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺糠酸盐(1∶1盐)，B型的制备

(a)B型如下制备：在小瓶中，将20％w的由实施例1(b)方法制备的糠酸盐样品(A型)溶于溶剂，例如乙醇(16mg/ml)或2-丁醇(8mg/ml)。括号内的数字表示所述盐在这些溶剂中的估计溶解度。然后密封小瓶，利用磁体在环境温度(20℃)均化悬浮液。保温搅拌至少7天，然后将所得产物样品干燥，进行XRPD测试。XRPD证实A型已经完全转化为B型。

由下列方法制备更多量的标题盐：

(b)将N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺(46mg，0.10mmol)的2-丁醇(0.5ml)溶液和糠酸(12.5mg，0.11mmol)的2-丁醇(0.5ml)溶液混合，用一些B型晶体进行种晶。将混合物在环境温度、在密封的小瓶中放置3天。将所得沉淀用2-丁醇洗涤，在60℃真空干燥过夜，得到标题盐，为灰白色固体。该盐含有痕量的2-丁醇。

NMR证实碱与酸的性质和化学计量比为1∶1。

糠酸盐B型显示至少如下的特征X-射线粉末衍射(XRPD)峰(以°2θ表达)(误差界限与美国药典关于X-射线衍射的总章(USP941)相一致——参见the United States Pharmacopeia Convention.X-Ray Diffraction，General Test<941>.United States Pharmacopeia，25th ed.Rockville，MD：United StatesPharmacopeial Convention；2002：2088-2089)：

(1)6.7，11.0和13.4，或者

(2)6.7，10.4，11.0和13.4，或者

(3)6.7，10.4，12.4，13.4和13.7，或者

(4)6.7，10.4，13.4和20.9，或者

(5)6.7，10.4，11.0，12.4，13.4，13.7，15.6，16.0和17.6，或者

(6)6.7，10.4，11.0，12.4，13.4，13.7，15.6，16.0，16.1，17.6，18.0，18.6，18.9，20.1，20.9和23.4。

实施例2

N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}丙酰胺二-三氟乙酸盐.

(i)N-(2-羟基-4-甲氧基苯基)丙酰胺

向冰-冷却的2-羟基-4-甲氧基苯胺·HCl(600mg，3.4mmol)与三乙胺(3当量)的二氯甲烷(25mL)溶液滴加丙酸酐(1.1当量)。将溶液在环境温度放置5h。用水淬灭反应，分离各层，有机相用1N NaOH(水溶液)萃取(3x25mL)。将水相的pH用浓HCl调节至5，用二氯甲烷萃取(3x25mL)。有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，真空除去，得到小标题化合物，为褐色固体(555mg，83％)。

¹H NMR(300MHz，CDCl₃-d₆)δ7.04(b)，6.83(d，J＝8.4，1H)，6.58(d，J＝2.8，1H)，6.43(dd，J₁＝8.4，J₂＝2.8，1H)，3.77(s，3H)，2.49(q，J＝7.6，2H)，1.29(t，J＝7.5，3H)；APCI-MS：m/z 196[MH⁺].

(ii)N-(5-氯-2-羟基-4-甲氧基苯基)丙酰胺

向冰-冷却的N-(2-羟基-4-甲氧基苯基)丙酰胺(500mg，2.6mmol)与二甲基甲酰胺盐酸盐(1当量)的DMF(5mL)溶液逐份加入MCPBA(70％，1当量)。将反应混合物再搅拌5分钟，然后用1M NaHCO₃(水溶液)(50mL)淬灭。水相用乙酸乙酯(50mL)洗涤。将有机相用水洗涤(3x25mL)，干燥，真空除去，得到小标题化合物，为紫色固体(408mg，71％)。

¹H NMR(300MHz，丙酮-d₆)δ9.68(b，1H)，9.12(b，1H)，7.37(s，1H)，6.62(s，1H)，3.83(s，3H)，2.49(q，J＝7.7，2H)，1.18(t，J＝7.5，3H)；APCI-MS：m/z 229[M⁺].

(iii)N-(5-氯-4-甲氧基-2-{[(2S)-甲基环氧乙烷-2-基]甲氧基}苯基)丙酰胺

将N-(5-氯-2-羟基-4-甲氧基苯基)丙酰胺(202mg，0.88mmol)、[(2S)-2-甲基环氧乙烷-2-基]甲基3-硝基苯磺酸酯(1当量)与碳酸铯(1.2当量)在DMF(4mL)中的悬浮液于室温搅拌4h。用水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)分离混合物。将有机相用水洗涤(2x30mL)，干燥，真空除去，得到小标题化合物，为灰白色固体(249mg，95％)。

¹H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.43(s，1H)，7.80(b，1H)，6.61(s，1H)，4.14(m，1H)，3.98(m，1H)，3.85(s，3H)，2.94(m，1H)，2.79(m，1H)，2.42(q，J＝7.6，2H)，1.47(s，3H)，1.25(t，J＝7.5，3H)；APCI-MS：m/z 299[MH+].

(iv)N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙 基)氧基]-4-羟基苯基}丙酰胺二-三氟乙酸盐

向1-(4-氯苄基)-哌啶-4-基胺(50mg，0.2mmol)与N-(5-氯-4-甲氧基-2-{[(2S)-甲基环氧乙烷-2-基]甲氧基}苯基)丙酰胺(1当量)的乙腈(5mL)溶液加入高氯酸锂(10当量)。使反应混合物回流18h。将反应混合物倾倒在MEGABE-SCX柱上(Bond Elut

，5g，20mL)。该柱首先用甲醇洗涤(3x10mL)，随后用氨/甲醇混合物洗涤(1/20，3x10mL)。汇集碱性层，真空除去溶剂，得到N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基丙基)氧基]-4-甲氧基苯基}丙酰胺，为浅褐色油(100mg，86％)，重新溶于二氯甲烷(4mL)。将溶液冷却至0℃，滴加1M BBr₃的二氯甲烷溶液(1mL)。将反应混合物搅拌18h，然后用甲醇淬灭。真空除去溶剂，残余物经过反相制备型HPLC纯化(使用含有0.1％TFA的乙腈和水梯度作为移动相)。冷冻干燥所汇集的级分，得到标题产物，为无定形白色固体(38mg，39％)。

¹H NMR(300MHz，丙酮-d6)δ8.66(宽峰)，8.09(3，1H)，7.60(d，J＝8.4，4H)，7.47(d，J＝8.4，4H)，6.78(s，1H)，4.41(s，2H)，4.10-3.93(m，2H)，3.70-3.65(m，4H)，3.44-2.39(m，1H)，3.20(m，2H)，2.52-2.37(m，6H)，1.38(s，3H)，1.10(t，J＝7.5，3H)；APCI-MS：m/z 510[MH+].

实施例3

N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺二-三氟乙酸盐.

合成类似于实施例2所述，但是其中使2-羟基-4-甲氧基苯胺·HCl与乙酸酐(1.1当量)反应。

¹H NMR(300MHz，丙酮-d₆)δ8.77(s，1H)，8.06(s，1H)，7.61(d，J＝8.2Hz，2H)，7.47(d，J＝8.6Hz，2H)，6.79(s，1H)，4.43(s，2H)，4.08(d，J＝9.9Hz，1H)，3.94(d，J＝9.9Hz，1H)，3.79-3.61(m，3H)，3.68(d，J＝12.5Hz，1H)，3.42(d，J＝12.7Hz，1H)，3.32-3.13(m，2H)，2.63-2.48(m，2H)，2.49-2.29(m，2H)，2.08(s，3H)，1.38(s，3H)；APCI-MS：m/z 496[MH⁺].

实施例4

N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺二-三氟乙酸盐.

合成类似于实施例3所述，但是其中使N-(5-氯-2-羟基-4-甲氧基苯基)乙酰胺与S-(+)-缩水甘油基硝基苯磺酸酯(1当量)反应。

¹H NMR(300MHz，丙酮-d₆)δ8.64(宽峰，NH)，8.21(s，1H)，7.59(d，J＝9.0Hz，2H)，7.47(d，J＝9.0Hz，2H)，6.74(s，1H)，4.41-4.35(m，3H)，4.13-4.01(m，2H)，3.69-3.40(m，5H)，3.14(m，2H)，2.55-2.47(m，2H)，2.31(m，2H)，2.09(s，3H)；APCI-MS：m/z 482[MH⁺].

实施例5

N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基丙基)氧基]-4-羟基苯基}丙酰胺二-三氟乙酸盐.

合成类似于实施例2所述，但是其中使N-(5-氯-2-羟基-4-甲氧基苯基)乙酰胺与S-(+)-缩水甘油基硝基苯磺酸酯(1当量)反应。

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ10.05(宽峰)，9.78(宽峰)，9.79(宽峰)，9.00(宽峰)，8.88(宽峰)，7.79(m，1H)，7.62-7.50(m，4H)，6.63(s，1H)，5.98(宽峰)，4.29(m，2H)，4.16(m，1H)，3.95-3.88(m，2H)，341-2.97(m，7H)，2.35-2.22(m，4H)，1.82-1.75(m，2H)，1.07(m，3H)；APCI-MS：m/z 496[MH⁺].

人CCR1结合测定

膜

使用稳定表达重组人CCR1的HEK293细胞(HEK-CCR1)(获自ECACC)，制备包含CCR1的细胞膜。将膜贮存在-70℃。将每批次的膜浓度调整为10％特异性结合的33pM[¹²⁵I]MIP-1α。

结合测定

将HEK-CCR1膜稀释在添加有17500单位/L杆菌肽(Sigma，Cat NoB1025)的测定缓冲液pH 7.4(137mM NaCl(Merck，Cat No 1.06404)、5.7mM葡萄糖(Sigma，Cat No G5400)、2.7mM KCl(Sigma，Cat No P-9333)、0.36mMNaH₂PO₄×H₂O(Merck，Cat No 1.06346)、10mM HEPES(Sigma，Cat NoH3375)、0.1％(w/v)明胶(Sigma，Cat No G2625))中，将100μL此稀释液加至96孔过滤板(0.45μm不透明的Millipore cat no MHVB N4550)的每个孔中。添加12μL化合物的测定缓冲液(包含10％DMSO)，使最终化合物浓度为1×10^-5.5至1×10^-9.5M。某些孔(没有化合物)中包含12μl冷的人重组MIP-1α(270-LD-050，R&D Systems，Oxford，UK)(在补充有10％DMSO的测定缓冲液中的最终浓度为10nM)，作为非特异性结合对照(NSB)。将12μl具有10％DMSO的测定缓冲液加至某些孔(没有化合物)，以检测最大结合(B0)。

将12μl[¹²⁵I]MIP-1α加至所有孔中，使其在测定缓冲液中稀释至各孔中的最终浓度为33pM。然后，在室温将带有盖的板孵育1.5小时。孵育之后，真空过滤(MultiScreen Resist Vacuum Manifold System，Millipore)清空各孔，用200μl测定缓冲液洗涤一次。洗涤之后，所有孔接受额外的50μL闪烁液(OptiPhase“Supermix”，Wallac Oy，Turko，Finland)。使用Wallac Trilux1450MicroBeta计数器，测量结合的[¹²⁵I]MIP-1α。窗设置(windows setting)：低5-高1020，1分钟计数/孔。

计算置换百分比和IC₅₀

将以下方程式用于计算置换百分比。

置换百分比＝1-((cpm test-cpm NSB)/(cpm B0-cpm NSB))

其中

cpm test＝含有膜和化合物及[¹²⁵I]MIP-1α的一式两份孔中的平均cpm(每分钟的计数)；

NSB＝含有膜和MIP-1α及[¹²⁵I]MIP-1α(非特异性结合)的孔中的平均cpm；

B0＝含有膜和测定缓冲液及[¹²⁵I]MIP-1α(最大结合)的孔中的平均cpm。

使用基于Excel的程序XLfit(2.0.9版)，将数据拟合成4-参数logistics函数，推导出产生50％置换的化合物摩尔浓度(IC₅₀)。

全部实施例1至5化合物都具有小于20nM的IC₅₀值。

LPS-刺激大鼠中的炎性细胞流入实验

通过监测对用脂多糖(LPS)气管内(i.t.)刺激的大鼠支气管肺泡灌洗(BAL)液中总细胞数的作用，测定CCR1受体拮抗剂(N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺半富马酸盐(2∶1盐)，这里称为化合物A)、布地奈德，以及它们的组合对炎性细胞流入的作用(N＝10只大鼠/处置组)。

方法

LPS滴注：将大鼠用恩氟烷(Efrane)麻醉，以仰卧位置于倾斜30°的板上，头朝上。利用改性金属套管i.t.给予LPS(脂多糖B.E.coli 026：B6)(2.5μg/ml)的盐水(0.9％NaCl)溶液或单独的盐水(阴性对照)，体积为200μL。使大鼠保持这种体位直至苏醒。

溶液的制备：将经过均化的布地奈德溶于乙醇，然后与0.9％NaCl溶液混合，最终浓度为0.002mg布地奈德/mL。将化合物A溶于0.9％NaCl溶液，最终浓度为0.034mg化合物A/mL。如下制备布地奈德/化合物A混合制剂，将化合物A溶于布地奈德悬浮液，最终浓度为0.034mg化合物A/mL和0.002mg布地奈德/mL。

处置：向动物气管内滴注布地奈德/化合物A(0.002/0.034mg/kg)或者单独的布地奈德(0.002mg/kg)或者单独的化合物A(0.34mg/kg)或者盐水的溶液(1mL/kg)(阴性和阳性对照动物)。在轻微麻醉(Efrane)下进行处置，以保证溶液达到肺。在LPS滴注之前30min，给予药物。

终止：LPS刺激后4小时，向大鼠腹膜内注射戊巴比妥(60mg/ml，Apoteksbolaget，Sweden)与PBS的混合物(1∶1)(0.3mL)达1-2min。

支气管肺泡灌洗(BAL)：终止后，用PBS进行两次BAL。将BAL液离心，将细胞沉淀重新悬浮在PBS中。在SYSMEX细胞计数器中计数BAL细胞的总数。

实验结果如图1所示。图1中，“盐水/盐水”大鼠表示用盐水处理和用盐水刺激的阴性对照大鼠。“盐水/LPS”动物表示用盐水处理和用LPS刺激的阳性对照大鼠。其余三组全部用指定药物处理和用LPS刺激。

Claims (35)

1.药物产品，其组合包含

(a)第一活性成分，其是式(I)化合物或其可药用盐

其中

m是0、1或2；

每个R¹独立地表示卤素或氰基；

R²表示氢原子或甲基；

R³表示C₁-C₄烷基；和

R⁴表示氢或卤素；和

(b)第二活性成分，其是糖皮质激素。

2.权利要求1的产品，其中R¹是卤素。

3.权利要求1或权利要求2的产品，其中R⁴是氢或氯。

4.权利要求1或权利要求2的产品，其中R⁴是氢。

5.上述权利要求中任一项的产品，其中R³是甲基或乙基。

6.上述权利要求中任一项的产品，其中所述第一活性成分选自

N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺；

N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺；

N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺，

N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基丙基)氧基]-4-羟基苯基}丙酰胺，或者

N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}丙酰胺，

或其可药用盐。

7.上述权利要求中任一项的产品，其中所述第一活性成分是盐，所述盐选自N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺的苯甲酸盐、糠酸盐或半富马酸盐。

8.上述权利要求中任一项的产品，其中糖皮质激素是布地奈德。

9.上述权利要求中任一项的产品，其进一步包含第三活性成分，其是支气管扩张剂。

10.权利要求9的产品，其中所述第三活性成分是β₂-激动剂。

11.权利要求10的产品，其中所述第三活性成分选自福莫特罗或茚达特罗。

12.权利要求11的产品，其中所述第三活性成分是福莫特罗。

13.权利要求12的产品，其中所述第三活性成分是富马酸福莫特罗二水合物。

14.上述权利要求中任一项的产品，其是适合于吸入给药的形式。

15.上述权利要求中任一项的产品，其用于治疗。

16.上述权利要求中任一项的产品在制备用于治疗呼吸系统疾病的药物中的用途。

17.权利要求16的用途，其中所述呼吸系统疾病是慢性阻塞性肺病。

18.权利要求16的用途，其中所述呼吸系统疾病是哮喘。

19.治疗呼吸系统疾病的方法，该方法包含对有所述需要的患者同时、依次或分开给予：

(a)(治疗有效)剂量的第一活性成分，其是如权利要求1至7中任一项所定义的式(I)化合物或其可药用盐；

(b)(治疗有效)剂量的第二活性成分，其是糖皮质激素；和任选地

(c)(治疗有效)剂量的第三活性成分，其是支气管扩张剂。

20.一种试剂盒，其包含第一活性成分的制备物，第一活性成分是如权利要求1至7中任一项所定义的式(I)化合物或其可药用盐，和第二活性成分的制备物，第二活性成分是糖皮质激素，和任选的说明书，所述说明书用于对有所述需要的患者同时、依次或分开给予所述制备物。

21.权利要求20的试剂盒，其中所述第一活性成分选自

N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺；

N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺；

N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺，

N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基丙基)氧基]-4-羟基苯基}丙酰胺，或者

N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}丙酰胺，

或其可药用盐。

22.权利要求20或权利要求21的试剂盒，其中糖皮质激素是布地奈德。

23.权利要求20至21中任一项的试剂盒，其进一步包含第三活性成分的制备物，第三活性成分是支气管扩张剂。

24.权利要求23的试剂盒，其中所述第三活性成分是β₂-激动剂。

25.权利要求24的试剂盒，其中所述第三活性成分是福莫特罗或茚达特罗。

26.权利要求25的试剂盒，其中所述第三活性成分是福莫特罗。

27.权利要求26的试剂盒，其中所述第三活性成分是富马酸福莫特罗二水合物。

28.药物组合物，其混合包含第一活性成分，其是如权利要求1至7中任一项所定义的式(I)化合物或其可药用盐，和第二活性成分，其是糖皮质激素。

29.权利要求28的组合物，其中所述第一活性成分选自

N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺；

N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺；

N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺，

N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基丙基)氧基]-4-羟基苯基}丙酰胺，或者

N-{5-氯-2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}丙酰胺，

或其可药用盐。

30.权利要求28或权利要求29的组合物，其中糖皮质激素是布地奈德。

31.权利要求29至30中任一项的组合物，进一步包含第三活性成分的制备物，第三活性成分是支气管扩张剂。

32.权利要求31的组合物，其中所述第三活性成分是β₂-激动剂。

33.权利要求31的组合物，其中所述第三活性成分是福莫特罗或茚达特罗。

34.权利要求32的组合物，其中所述第三活性成分是福莫特罗。

35.权利要求34的组合物，其中所述第三活性成分是富马酸福莫特罗二水合物。