CN101189011A - 治疗动脉粥样硬化、脂质异常和相关状况的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了治疗动脉粥样硬化的方法，其中将烟酸或其它烟酸受体激动剂和DP受体拮抗剂施用于患者。施用所述DP受体拮抗剂以减轻、预防或消除潮红，否则会发生潮红。

Description

治疗动脉粥样硬化、脂质异常和相关状况的方法

发明背景

尼克酸或烟酸(吡啶-3-羧酸)是一种可有效提高高密度脂蛋白(HDL)血清水平的公知药物。然而，烟酸常常与皮肤血管舒张、有时称为潮红(flushing)相伴随。该副作用是烟酸诱导的皮肤中前列腺素D2释放造成的，并且该副作用很严重，以至于许多患者会中断烟酸治疗。本发明涉及通过施用烟酸或其它烟酸受体激动剂和一种化合物治疗动脉粥样硬化、脂质异常(dyslipidemias)、糖尿病和相关状况，所述化合物能减少或消除皮肤血管舒张，否则就会发生皮肤血管舒张，这样该治疗可以达到无实质潮红。这在人类中通过施用烟酸或烟酸受体激动剂和一种拮抗DP受体的化合物达到。

不同亚型的受体与前列腺素D2相互作用。一种前列腺素D2受体称为“DP”，另一前列腺素D2受体称为“CRTH2”。本发明利用DP受体的拮抗预防、最小化或减少潮红，否则就可能发生潮红。

因此，本发明的一个目的是消除、抑制或减少实质潮红(频率和/或严重度)，该潮红是在人类用烟酸或其它烟酸受体激动剂治疗动脉粥样硬化、脂质异常、糖尿病和相关状况时的一种副作用。

本发明的另一目的是提供动脉粥样硬化的联合治疗，其普遍地将副作用减至最小。

再另一目的是提供一种供口服的固定联合药物组合物。

以下将根据本文提供的说明对这些和其它目的进行说明。

发明概要

公开了一种治疗需要动脉粥样硬化治疗的人类患者的动脉粥样硬化的方法，该方法包括向所述患者施用约1000mg烟酸和选自约5mg、10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg、50mg、75mg、100mg和150mg中的量的DP受体拮抗剂，所述的量对于治疗动脉粥样硬化是有效的，且不存在实质潮红。

附图说明

结合所附的附图说明本发明，其中：

图1是化合物D抑制小鼠中前列腺素D2诱导的血管舒张的图。

图2是化合物D抑制小鼠中烟酸诱导的血管舒张的图。

图3是其它所选择的化合物抑制小鼠中烟酸诱导的血管舒张的图。

发明详述

尼克酸或烟酸(吡啶-3-羧酸)是一种具有提高高密度脂蛋白(HDL)水平效果，以及其它有益地改变脂质状况效果(降低极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、甘油三酯类、游离脂肪酸类(FFA)和脂蛋白(a)[Lp(a)])的公知药物。当以治疗上的有效量例如每日约50mg至高达8g施用于人时，烟酸会提高HDL水平。然而，烟酸通常与还称作潮红的皮肤血管舒张相关联。潮红通常发生皮肤发红，其伴随有温热、搔痒或刺激。其可以令人非常不舒服，并且可能很严重，以至于许多患者会中断烟酸治疗。本发明涉及用烟酸或其盐或溶剂化物，或者其它烟酸受体激动剂治疗、预防或逆转动脉粥样硬化和本文所述的其它疾病和状况，而无实质潮红。这在人类中可通过施用烟酸或其盐或溶剂化物，或者其它烟酸受体激动剂和一种拮抗DP受体的化合物达到，由此在频率和/或严重度上预防、减少潮红，或将潮红减至最小。

至少有两种与前列腺素D2相互作用的受体，被称为“DP”和“CRTH2”。本发明主要涉及烟酸或烟酸受体激动剂，其与DP受体拮抗剂联合使用。

本发明有益的一个方面是治疗需要动脉粥样硬化治疗的人类患者的动脉粥样硬化的方法，该方法包括以有效地治疗动脉粥样硬化而不存在实质潮红的量向所述患者施用烟酸或其盐或溶剂化物，或者其它烟酸受体激动剂和一种DP受体拮抗剂。

本发明有益的另一方面涉及提高需要提高血清HDL水平的人类患者的血清HDL水平的方法，该方法包括向所述患者施用烟酸或其盐或溶剂化物，或者其它烟酸受体激动剂和一种DP受体拮抗剂，所述联合用药体系对提高所述患者的血清HDL水平有效，且不存在实质潮红。

本发明的另一方面涉及治疗需要脂质异常治疗的人类患者的脂质异常的方法，该方法包括以有效地治疗脂质异常而不存在实质潮红的量向所述患者施用烟酸或其盐或溶剂化物，或者其它烟酸受体激动剂和一种DP受体拮抗剂。

本发明有益的另一方面涉及降低需要降低血清VLDL或LDL水平的人类患者的血清VLDL或LDL水平的方法，其包括以有效地降低所述患者的血清VLDL或LDL水平而不存在实质潮红的量向所述患者施用烟酸或其盐或溶剂化物，或者其它烟酸受体激动剂和一种DP受体拮抗剂。

本发明有益的另一方面涉及降低需要降低血清甘油三酯水平的人类患者的血清甘油三酯水平的方法，该方法包括以有效地降低所述患者的血清甘油三酯水平而不存在实质潮红的量向所述患者施用烟酸或其盐或溶剂化物，或者其它烟酸受体激动剂和一种DP受体拮抗剂。

本发明有益的另一方面涉及降低需要降低血清Lp(a)水平的人类患者的血清Lp(a)水平的方法，该方法包括以有效地降低所述患者的血清Lp(a)水平而不存在实质潮红的量向所述患者施用烟酸或其盐或溶剂化物，或者其它烟酸受体激动剂和一种DP受体拮抗剂。本文的Lp(a)是指脂蛋白(a)。

本发明特别有益的一方面涉及上述各种方法，其中使用烟酸或其盐或溶剂化物。更加特别有益的是使用烟酸。在再进一步有益的方面，所述DP受体拮抗剂以对抑制、减少或预防所述患者的潮红反应(flushingeffect)有效的量选择性地调节所述DP受体。

本发明特别有益的另一方面涉及上述各种方法，其中使用烟酸，并且所述DP受体拮抗剂选择性地调节所述DP受体，而基本上不调节所述CRTH2受体。

本发明特别有益的另一方面涉及治疗需要动脉粥样硬化、脂质异常、糖尿病或相关状况治疗的人类患者的动脉粥样硬化、脂质异常、糖尿病或相关状况的方法，所述方法包括向所述患者施用烟酸或其盐或溶剂化物，或者其它烟酸受体激动剂和一种DP受体拮抗剂，所述联合用药体系以对治疗动脉粥样硬化、脂质异常、糖尿病或相关状况有效而基本上不发生潮红的量被施用。

本发明特别有益的另一方面涉及治疗需要动脉粥样硬化、脂质异常、糖尿病或相关状况治疗的人类患者的动脉粥样硬化、脂质异常、糖尿病或相关状况的方法，所述方法包括向所述患者施用a)对抑制尼克酸诱导的潮红反应有效的量的阿司匹林、b)烟酸或其盐或溶剂化物，或者其它烟酸受体激动剂和c)一种DP受体拮抗剂，所述联合用药体系以对治疗动脉粥样硬化、脂质异常、糖尿病或相关状况有效而不存在实质潮红的量被施用。

本发明有益的另一方面涉及治疗需要动脉粥样硬化、脂质异常、糖尿病、或相关状况治疗的人类患者的动脉粥样硬化、脂质异常、糖尿病或相关状况的方法，所述方法包括用对抑制或减小烟酸诱导的潮红反应有效的量的阿司匹林预治疗或治疗所述患者，以及向所述患者施用烟酸或其盐或溶剂化物，或者其它烟酸受体激动剂和一种DP受体拮抗剂，所述联合用药体系以对治疗动脉粥样硬化、脂质异常、糖尿病或相关状况有效而不存在实质潮红的量被施用。

本发明的一方面是DP受体拮抗剂化合物与烟酸或其盐或溶剂化物，或者与其它烟酸受体激动剂在治疗人类动脉粥样硬化而不存在实质潮红中的联合应用。

本发明特别有益的另一方面涉及上述方法，其中所述DP受体拮抗剂选自化合物A至AJ及其药学可接受的盐和溶剂化物。

对选择性拮抗DP受体和抑制潮红反应特别有用的化合物的实例包括如下化合物：

及其药学可接受的盐和溶剂化物。

本文所用的动脉粥样硬化是指一种血管疾病，其特征是含有胆固醇和脂质的粥样斑块沉积在大动脉和中等动脉壁的最内层。动脉粥样硬化包括相关医学领域的执业医生所认识和了解的血管疾病和状况。动脉粥样硬化性心血管疾病包括血管形成术后的再狭窄(restenosis)、冠心病(也称为冠状动脉疾病或缺血性心脏病)、包括多发性脑梗死性痴呆的脑血管疾病和包括勃起机能障碍的外周血管疾病，它们均为动脉粥样硬化的临床表现，因此包含在术语“动脉粥样硬化”和“动脉粥样硬化性疾病”中。

“脂质异常”是以一般的含义使用，是指血脂(plasma lipid)，例如HDL(低)、LDL(高)、VLDL(高)、甘油三酯类(高)、脂蛋白(a)(高)、FFA(高)和其它血清脂质或者它们的组合的水平异常。其可能是一种非并发的(uncomplicated)状况，或者是特别相关的疾病或状况例如糖尿病(糖尿病性脂质异常)、代谢综合症等的一部分。因此，非并发的脂质异常及与原发病症相伴随的脂质异常包含于本发明中。

术语“患者”包括哺乳动物，特别是人类，其使用本活性剂预防或治疗医学状况(medical condition)。向所述患者施用所述药物包括自己施用和通过别人向所述患者施用。该患者可以是需要治疗存在的疾病或医学状况，或者可以是期望预防性地治疗以防止动脉粥样硬化发生或减小动脉粥样硬化发生的风险。

术语“治疗有效量”意指产生期望的生物学或医学应答(medicalresponse)的药物量。例如，烟酸通常以每天约50mg至约8g的剂量施用，优选约0.5g至约3.0g/天。优选的烟酸剂量是约1-2g/天。

术语“预防有效量”和“有效预防量”是指可预防或降低要设法防止的生物或医学事件的发生风险的药物量。在许多情况下，所述预防有效量与治疗有效量相同。

描述于本文的本发明包括本文所述化合物或组合物的施用以预防或降低冠心病事件、脑血管事件和/或间歇性跛行的发生或可能存在的复发的风险。冠心病事件包括CHD死亡、心肌梗死(即，心脏病发作)和冠状动脉重建术。脑血管事件包括缺血性或出血性中风(还称为脑血管意外(cerebrovascular accident))和短暂性脑缺血发作。间歇性跛行是外周血管疾病的临床表现。用于本文的术语“动脉粥样硬化性疾病事件”包括冠心病事件、脑血管事件和间歇性跛行。以前经历过一种或多种非致命性动脉粥样硬化性疾病事件的人是有所述事件复发的可能的人。

相应地，本发明还提供预防或降低原发性(a first)或继发性(subsequent)动脉粥样硬化性疾病事件风险的方法，其包括将预防有效量的本文所述化合物施用于具有该事件风险的患者，同时预防实质潮红或使实质潮红降至最小。患者在施用时可能已经患有动脉粥样硬化性疾病，或者可能存在发生该病的风险。

所述方法进一步涉及预防或延缓新的粥样硬化病变(atheroscleroticlesion)或斑块形成，和预防或延缓存在的病变或斑块的发展，以及使存在的病变或斑块消退，同时防止实质潮红或使实质潮红减至最小。

因此，本发明的一方面涉及阻止或延缓动脉粥样硬化发展的方法，包括阻止或延缓粥样硬化斑块发展，该方法包括将治疗有效量的本文所述的任何DP拮抗剂与烟酸或其它烟酸受体激动剂联合施用于需要所述治疗的患者。该方法还包括阻止或延缓在治疗开始时即存在的粥样硬化斑块(即，存在的粥样硬化斑块)的发展，以及阻止或延缓动脉粥样硬化患者的新粥样硬化斑块的形成。

本发明另一方面涉及预防或降低粥样硬化斑块破裂的风险的方法，其包括向需要该治疗的患者施用预防有效量的任何本文所述化合物和烟酸或其它烟酸受体激动剂。本文使用的破裂是指可在血管内寄宿的斑块的破坏性释放(breaking losse)。本发明进一步的方面涉及预防或降低发生动脉粥样硬化的风险的方法，其包括向需要该治疗的患者施用预防有效量的本文所述化合物。

本发明另一方面涉及治疗或预防动脉粥样硬化、脂质异常或相关状况的方法，其包括用抑制或降低潮红有效量的DP受体拮抗剂对需要上述治疗的患者进行预治疗，然后以有效地治疗或预防所述动脉粥样硬化、脂质异常或相关状况而不存在实质潮红的量用烟酸、其盐或溶剂化物，或其它烟酸受体激动剂治疗所述患者。

本发明再另一方面涉及上述方法，其还包括用HMG Co-A还原酶抑制剂预治疗或治疗所述患者。

本发明另一方面涉及治疗或预防上述状况的方法，其中所述HMGCo-A还原酶抑制剂是辛伐他汀。

本文所述方法的一方面涉及以有效地达到本文所述结果的量的烟酸或其它烟酸受体激动剂化合物，和一种选择性调节所述DP受体而基本上不调节所述CRTH2受体的DP受体拮抗剂的应用。这样，所述DP受体拮抗剂对所述DP受体的亲和力(即，K_i)比其对所述CRTH2受体的亲和力至少高10倍(数值上较低的K_i值)。根据这些原则选择性地与DP相互作用的任何化合物被认为是“DP选择性的”。

短语“不存在实质潮红”是指当以治疗量施用烟酸时通常可见的副作用。当患者对治疗剂量的药物产生耐受时，烟酸的潮红反应通常发生率会降低，且严重度降低，但是该潮红反应在一定程度上仍然发生。因此，“不存在实质潮红”是指当发生潮红时潮红严重度降低，或者比发生的情况下少的潮红事件。优选潮红发生率至少减少约三分之一，更优选发生率减少一半，最优选潮红发生率减少约三分之二或更多。同样地，严重度优选至少降低约三分之一，更优选降低至少一半，最优选降低至少约三分之二。显然，潮红发生率和严重度的100％降低是最优选的，但不是必需的。

也可施用阿司匹林抑制或降低任何残留的潮红。用于抑制或降低任何残留的烟酸诱导的潮红反应的阿司匹林量通常不超过治疗剂量，并且通常更低，范围为低约20-25mg，高约650mg。特别地，用于本发明的阿司匹林量是这样的量，即对抑制或降低没有被所施用的DP受体拮抗剂抑制或降低的任何残留潮红是必需的或有用的量。

阿司匹林通常在烟酸之前施用，例如在施用烟酸和DP受体拮抗剂之前约30分钟至1小时，但是也可以与烟酸和DP受体拮抗剂一起施用。各剂量可以在烟酸和所述DP受体拮抗剂之前施用，例如在施用烟酸和DP受体拮抗剂之前约30分钟施用单个剂量，或者与烟酸和所述DP受体拮抗剂一起施用，并根据需要以对抑制或降低未被DP受体拮抗剂抑制的任何残留潮红反应是充分或有效的量反复施用多达约每4小时一次。

对于任何特定的患者，具体的给药方案和水平取决于多种因素，包括年龄、体重、健康状况、性别、饮食、施用时间、施用途径、排泄率、药物联合应用和患者状况的严重度。为了确定预防、抵制(counter)或阻止病症(condition)发展所需要的治疗有效或预防有效剂量，这些因素均在普通熟练的医生的考虑范围内。期望的是，本文所述化合物将以每日施用的方式持续适合治疗或预防与患者有关的医学状况的一段时间，包括持续数月、数年或患者终生的治疗过程。

特别有益的治疗方法的一方面涉及治疗需要动脉粥样硬化治疗的人类患者的动脉粥样硬化的方法，其包括向所述患者施用约1000mg烟酸和选自约5mg、10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg、50mg、75mg、100mg和150mg的量的DP受体拮抗剂，所述的量对治疗动脉粥样硬化有效，且不存在实质潮红。

特别有益的治疗方法的另一方面涉及治疗需要动脉粥样硬化治疗的人类患者的动脉粥样硬化的方法，其包括向所述患者施用约2000mg烟酸和选自约10mg、20mg、30mg、37.5mg、40mg、50mg、75mg、100mg、150mg、200mg和300mg的量的DP受体拮抗剂，所述量对治疗动脉粥样硬化有效且不存在实质潮红。当术语“约”用于修饰或描述剂量时，它以其通常的含义用于指可使用的合理近似值。例如，“约10mg”包括略微低于和高于10mg的量，例如，约9mg至约11mg。“约18.75mg”的剂量范围为低约17mg至高约20mg。“约20mg”的剂量与“约18.75mg”重叠，包括约19mg至约21mg的范围。

一种或多种附加(additional)活性剂可以与本文所述化合物一起施用。所述一种或多种附加活性剂可以是调脂化合物(lipid modifyingcompounds)或具有其它药学活性的药剂，或者是既有调脂作用又有其它药学活性的药剂。可以使用的附加活性剂的实例包括但不限于HMG-CoA还原酶抑制剂，其包括内酯化或二羟基开放酸形式(dihydroxyopen acid)的他汀类及其药学可接受的盐类和酯类，包括但不限于洛伐他汀(见美国专利No.4,342,767)、辛伐他汀(见美国专利No.4,444,784)、二羟基开放酸辛伐他汀特别是其铵或钙盐、普伐他汀特别是其钠盐(见美国专利No.4,346,227)、  氟伐他汀特别是其钠盐(见美国专利No.5,354,772)、阿托伐他汀特别是其钙盐(见美国专利No.5,273,995)、匹伐他汀也称为NK-104(见PCT国际公开号WO 97/23200)和还称为ZD-4522的罗苏伐他汀(rosuvastatin)(见美国专利No.5,260,440)；HMG-CoA合成酶抑制剂；角鲨烯环氧酶抑制剂；角鲨烯合成酶抑制剂(也称为角鲨烯合酶抑制剂)；酰基辅酶A；胆固醇酰基转移酶(ACAT)抑制剂，包括ACAT-1或ACAT-2的选择性抑制剂，以及ACAT-1和-2的双重抑制剂；微粒体甘油三酯转移蛋白(MTP)抑制剂；内皮脂肪酶抑制剂；胆汁酸螯合剂；LDL受体诱导剂；血小板聚集抑制剂例如糖蛋白IIb/IIIa纤维蛋白原受体拮抗剂和阿司匹林；人过氧化物酶体增殖体激活受体γ(human peroxisome proliferator activatedgamma，PPARγ)激动剂，包括通常称为格列酮类的化合物，例如吡格列酮和罗格列酮，还包括包含于称为噻唑烷二酮结构类中的那些化合物，以及不属于噻唑烷二酮结构类的那些PPARγ激动剂；PPARα激动剂例如氯贝丁酯、非诺贝特，包括微粉化的非诺贝特，和吉非贝齐；PPAR双重α/γ激动剂；维生素B₆(还称为吡哆辛)及其药学可接受的盐类例如HCl盐；维生素B₁₂(还称为氰钴胺)；叶酸或其药学可接受的盐或酯，例如钠盐和葡甲胺盐；抗氧化维生素类例如维生素C和E以及β-胡萝卜素；β-阻断剂；血管紧张素II拮抗剂例如氯沙坦；血管紧张素转化酶抑制剂例如依那普利和卡托普利；肾素抑制剂，钙通道阻断剂类例如尼非地平和地尔硫内皮缩血管肽抑制剂(endothelin antagonists)；ABCA1基因表达增强剂；胆固醇脂转移蛋白(CETP)抑制化合物，5-脂氧合酶激活蛋白蛋白(5-lipoxygenase activating protein)(FLAP)抑制化合物，5-脂氧合酶(5-LO)抑制化合物，类法尼醇(farnesoid)X受体(FXR)配体，包括拮抗剂和激动剂；肝X受体(LXR)-α配体，LXR-β配体，二膦酸盐化合物例如阿仑膦酸钠；环加氧酶-2抑制剂例如罗非考昔和塞来考昔；以及减轻血管炎症的化合物。

胆固醇吸收抑制剂也可用于本发明。该类化合物阻断胆固醇从肠腔至小肠壁的肠上皮细胞(enterocyte)的运动，由此降低血清胆固醇水平。胆固醇吸收抑制剂的实例描述于美国专利第5,846,966、5,631,365、5,767,115、6,133,001、5,886,171、5,856,473、5,756,470、5,739,321、5,919,672号中，以及PCT申请第WO 00/63703、WO 00/60107、WO00/38725、WO 00/34240、WO 00/20623、WO 97/45406、WO 97/16424、WO 97/16455和WO 95/08532中。最值得注意的胆固醇吸收抑制剂是依泽替米贝(ezetimibe)，还称为1-(4-氟苯基)-3(R)-[3(S)-(4-氟苯基)-3-羟基丙基)]-4(S)-(4-羟基苯基)-2-吖丁啶酮(azetidinone)，其描述于美国专利第5,767,115和5,846,966中。

胆固醇吸收抑制剂的治疗有效量包括每天约0.01mg/kg至约30mg/kg体重的剂量，优选约0.1mg/kg至约15mg/kg。

对于糖尿病患者，用于本发明的化合物可以与常规的糖尿病药一起施用。例如，如本文所述的接受治疗的糖尿病患者还可以服用胰岛素或者口服抗糖尿病药。用于本文的口服抗糖尿病药的一个实例是二甲双胍。

盐类

用于本文的烟酸是指吡啶-3-羧酸。但是，烟酸的盐和溶剂化物也可用于本发明，并且许多烟酸的药学可接受盐和溶剂化物可用于本发明。碱金属盐，特别是钠和钾，形成可如本文所述应用的盐。类似的，碱土金属盐，特别是钙和镁，形成可如本文所述应用的盐。各种胺类的盐，例如铵和取代的铵化合物也形成可如本文所述应用的盐。同样，烟酸的溶剂化形式可用于本发明。实例包括半水合物、单-、二-、三-和倍半水合物。用于本发明特别有益的是游离酸，吡啶-3-羧酸。

可如本文所述应用的烟酸剂量范围为低约50mg/天至高约8g/天，每日单次或分开给药。开始时可应用较低的剂量，并且增加剂量以进一步将潮红减至最小。

烟酸以外的烟酸受体激动剂的剂量可以在宽的范围内改变。一般地，可用于治疗动脉粥样硬化的烟酸受体激动剂以低约0.01mg/kg/天至高约100mg/kg/天的量、单次或分多次给药。典型的剂量是约0.1mg/天至约2g/天。

DP拮抗剂，如本文所述，用于降低或预防哺乳动物患者特别是人类的潮红反应，其剂量为低约0.01mg/kg/天至高约100mg/kg/天的范围，以每天单次或分多次给药。优选的剂量是约0.1mg/天至高约1.0g/天，以每天单次或分多次给药。

本文所述的化合物和剂量形式可以通过任何常规施用途径施用。优选的施用途径是口服。

烟酸，其盐或溶剂化物，或者其它烟酸受体激动剂以及DP拮抗剂可以一起或依次地每天单次或多次给药，例如每天两次(bid)、每天三次(tid)或每天四次(qid)，这并不脱离本发明的范围。如果需要特别长的持续释放，例如显示释放模式超过24小时的持续释放产品，剂量可以隔日施用。然而，每天单次给药是优选的。类似的，可以采用早晨和晚上给药，晚上给药是优选的。

药物组合物

本文所述的药物组合物通常包括烟酸或其它烟酸受体激动剂、DP受体拮抗剂和药学可接受的载体。

适合口服的组合物的实例包括片剂、胶囊剂、含片(troches)、锭剂(lozenges)、混悬剂、可分散的散剂或颗粒剂、乳剂、糖浆剂和酏剂。载体成分的实例包括稀释剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、香料、着色剂、防腐剂等。稀释剂的实例包括，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙和磷酸钠。造粒和崩解剂的实例包括玉米淀粉和海藻酸。粘合剂的实例包括淀粉、明胶和阿拉伯胶。润滑剂的实例包括硬脂酸镁、硬酸脂钙、硬脂酸和滑石粉。片剂可以是未包衣的，或者是用已知技术包衣的。该包衣可以延缓崩解以及因此延缓在胃肠道的吸收，从而提供在较长时间内的持续作用。

在本发明的一种实施方案中，烟酸、其盐或溶剂化物，或者其它烟酸受体激动剂是与所述DP受体拮抗剂和所述载体联合，形成固定联合产品。该固定联合产品可以是供口服使用的片剂或胶囊剂。

更特别的，在本发明的另一种实施方案中，烟酸或其盐或溶剂化物，或者其它烟酸受体激动剂(约1至约1000mg)和所述DP拮抗剂(约1至约500mg)是与药学可接受的载体联合，形成供口服使用的片剂或胶囊剂。

在烟酸药物组合物的制剂中，长时间持续释放(sustained release)可能是特别重要的。缓释片剂是特别优选的。例如，可以使用延时材料例如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。该剂型还可以通过美国专利第4,256,108、4,166,452和4,265,874中所述的技术包衣，形成控释渗透泵治疗片剂。

其它控释技术也可以使用，并且包含于本文中。可用于延缓缓释片剂中的烟酸的释放的典型成分包括各种纤维素类化合物，例如甲基纤维素、乙基纤维素、丙基纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙甲基纤维素、微晶纤维素、淀粉等。各种天然的和合成的材料也可用于缓释制剂中。实例包括海藻酸和各种藻酸盐、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶、槐豆胶、瓜尔胶、明胶、各种长链醇类例如鲸蜡醇和蜂蜡。

特别有益的缓释片剂将烟酸与一种或多种上述纤维素类化合物联合使用，压成缓释片剂以形成聚合物基质(polymer matrix)。所述DP拮抗剂化合物可以在压制前配合到该混合物中，或者可以包裹在所述基质的外表面。

在更有益的实施方案中，所述烟酸和基质形成材料被混合和压制，形成缓释核，再将所述DP拮抗剂化合物与一种或多种包衣剂混合并包裹在所述核的外表面。

可选择的并且甚至更有益的是上述的片剂，其进一步用HMG Co-A还原酶抑制剂例如辛伐他汀包裹。该特别的实施方案因此含有三种活性成分：基本上在服用后即释放的所述HMG Co-A还原酶抑制剂和所述DP拮抗剂、如上所述可以历经较长时间释放的所述烟酸。

根据本发明，缓释片剂的典型释放时间范围为约1至长约48小时，优选约4至约24小时，更优选约8至约16小时。

硬明胶胶囊为另一种口服固体剂型。该胶囊类似地包括与上述载体物质混合的活性成分。软明胶胶囊包括与和水可混溶的溶剂例如丙二醇、PEG和乙醇混合，或者与油例如花生油、液状石蜡或橄榄油混合的活性成分。

水性混悬剂也可能被考虑，其包含与适合制备水性混悬剂的赋形剂混合的活性物质。该赋形剂包括悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶；分散或润湿剂，例如卵磷脂；防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯或正丙酯，着色剂、香料、甜味剂等。

适合通过添加水制备水性混悬剂的可分散的散剂或颗粒剂提供与分散或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。适合的分散或润湿剂和悬浮剂是上述已列举的。

也可以配制成糖浆剂和酏剂。

特别有益的药物组合物是缓释片剂，其包括烟酸或其盐或溶剂化物、DP受体拮抗剂和药学可接受的载体。

特别有益的另一种药物组合物是缓释片剂，其包括烟酸或其盐或溶剂化物、DP受体拮抗剂、HMG Co-A还原酶抑制剂和药学可接受的载体。

更加特别有益的再另一种药物组合物是缓释片剂，其包括烟酸、DP受体拮抗剂、辛伐他汀和药学可接受的载体。

特别有益的再另一种药物组合物是缓释片剂，其包括烟酸、选自化合物A至AJ中的DP受体拮抗剂和药学可接受的载体。

更加有益的再另一种药物组合物包括烟酸、选自化合物A、B、D、E、X、AA、AF、AG、AH、AI和AJ中的DP拮抗剂化合物和药学可接受的载体。

特别有益的再另一种药物组合物包括烟酸、DP拮抗剂化合物A和药学可接受的载体。

更加有益的再另一种药物组合物包括烟酸、DP拮抗剂化合物B和药学可接受的载体。

更加有益的再另一种药物组合物包括烟酸、DP拮抗剂化合物D和药学可接受的载体。

更加有益的再另一种药物组合物包括烟酸、DP拮抗剂化合物E和药学可接受的载体。

更加有益的再另一种药物组合物包括烟酸、DP拮抗剂化合物X和药学可接受的载体。

更加有益的再另一种药物组合物包括烟酸、DP拮抗剂化合物AA和药学可接受的载体。

更加有益的再另一种药物组合物包括烟酸、DP拮抗剂化合物AF和药学可接受的载体。

更加有益的再另一种药物组合物包括烟酸、DP拮抗剂化合物AG和药学可接受的载体。

更加有益的再另一种药物组合物包括烟酸、DP拮抗剂化合物AH和药学可接受的载体。

更加有益的再另一种药物组合物包括烟酸、DP拮抗剂化合物AI和药学可接受的载体。

更加有益的再另一种药物组合物包括烟酸、DP拮抗剂化合物AJ和药学可接受的载体。

还更有益的再另一种药物组合物包括烟酸、上述DP拮抗剂化合物的一种、辛伐他汀和药学可接受的载体。

更加有益的再另一种药物组合物是缓释片剂，其包括烟酸、选自化合物A至AJ中的DP受体拮抗剂、辛伐他汀和药学可接受的载体。

特别有益的剂量形式(dosage form)含有约500mg、750mg或1000mg的烟酸，以选自约5mg、10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg、50mg、75mg、100mg和150mg的量存在的选自A、B、D、E、X、AA、AF、AG、AH、AI和AJ的DP拮抗剂，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，以选自5mg、10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg和50mg的量存在的选自A、B、D、E、X、AA、AF、AG、AH、AI和AJ的DP拮抗剂，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，5mg、10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg或37.5mg的选自A、B、D、E、X、AA、AF、AG、AH、AI和AJ的DP拮抗剂，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，5mg、10mg、15mg、20mg、25mg或37.5mg的选自A、B、D、E、X、AA、AF、AG、AH、AI和AJ的DP拮抗剂，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，5mg、10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物A，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，5mg、10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物B，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，5mg、10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物D，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，5mg、10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物E，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，5mg、10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物X，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，5mg、10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物AA，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，5mg、10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物AF，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，5mg、10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物AG，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，5mg、10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物AH，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，5mg、10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物AI，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，5mg、10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物AJ，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

再更特别有益的另一种药物组合物涉及缓释片剂，其包括烟酸，选自化合物A、B、D、E、X、AA、AF、AG、AH、AI和AJ的DP受体拮抗剂，辛伐他汀和药学可接受的载体。

特别有益的剂量形式含有约500mg、750mg或1000mg的烟酸，以选自约5mg、10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg、50mg、75mg、100mg和150mg的量存在的选自A、B、D、E、X、AA、AF、AG、AH、AI和AJ的DP拮抗剂，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀，和药学可接受的载体。

更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，以选自5mg、10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg和50mg的量存在的选自A、B、D、E、X、AA、AF、AG、AH、AI和AJ的DP拮抗剂，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，5mg、10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg或37.5mg的选自A、B、D、E、X、AA、AF、AG、AH、AI和AJ的DP拮抗剂，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的选自A、B、D、E、X、AA、AF、AG、AH、AI和AJ的DP拮抗剂，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物A，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物B或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物D，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物E，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物X，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物AA，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物AF，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物AG，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物AH，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物AI，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀，和药学可接受的载体。

还更特别的，有益的剂量形式含有1000mg的烟酸，10mg、15mg、18.75mg、20mg、25mg、37.5mg或50mg的化合物AJ，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀，和药学可接受的载体。

术语“组合物”，除了包括上述药物组合物外，还包括由混合、络合或聚集任何两种或多种所述成分、活性剂或赋形剂，或者由分离(dissociation)一种或多种成分，或者由一种或多种成分的其它类型的反应或相互作用而直接或间接地得到的任何产物。相应地，本发明所述药物组合物包括通过混合或以其它方式联合所述化合物、任意添加的活性成分(群)和药学可接受的赋形剂而得到的任意组合物。

本发明另一方面涉及烟酸或其盐或溶剂化物，或者其它烟酸受体激动剂和DP拮抗剂在制备药物中的用途。该药物具有本文所述的用途。

更特别的，本发明另一方面涉及烟酸或其盐或溶剂化物，或者其它烟酸受体激动剂、DP拮抗剂和HMG Co-A还原酶抑制剂例如辛伐他汀在制备药物中的应用。该药物具有本文所述的用途。

药物组合物的实例列举如下。

实施例1至5的操作

1、含有DP拮抗剂的层

在Diosna P10高速剪切混合制粒机中将化合物D、微晶纤维素、乳糖一水合物、交联羧甲基纤维素钠和黄氧化铁干混合。另外制备含有羟丙基纤维素的水溶液，加至该高速剪切混合制粒机中。将该混合物湿法制粒，再使用Strea-1流化床干燥器干燥。将该干颗粒研磨。将研磨的颗粒用硬脂酸镁在Apex 17L滚筒混合器中润滑，形成DP拮抗剂颗粒。

2、含有烟酸的层

将一部分烟酸与胶态二氧化硅预混合。将羟丙甲基纤维素、含有烟酸、胶态二氧化硅的混合物、微晶纤维素和其余烟酸加至合适的混合器中，干混合。将该混合物通过Alexanderwerk WP 120滚筒挤压机干法制粒，研磨。将研磨的颗粒用硬脂富马酸钠在Harbruc 65L混合机中润滑，形成烟酸颗粒。

3、压片操作

使用Riva双层压片机将上述研磨和润滑的颗粒压制成双层片。

实施例6的操作

1、含有DP拮抗剂的层1

根据以上实施例1-5所述操作将各组分混合并制粒。

2、含有烟酸的层

将羟丙甲基纤维素、烟酸和聚维酮加至Apex 17L混合机中，干混合。将该混合物用硬脂酸在Apex 17L滚筒混合机中润滑，形成烟酸混合物。

3、压片操作

使用Riva双层压片机将所述研磨和润滑的烟酸和DP拮抗剂混合物和颗粒压制成双层片。

注：IMS是“工业甲基化酒精”或用甲醇变性的乙醇，该甲醇在进一步使用之前被除去。

实施例7-11的操作

1、DP拮抗剂/辛伐他汀层

将化合物D、辛伐他汀、微晶纤维素、乳糖一水合物、交联羧甲基纤维素钠、黄氧化铁和羟丙甲基纤维素加至Diosna P-6高速剪切混合制粒机中，干混合。制备含有BHA和柠檬酸的含水酒精溶液(hydroalcoholic solution)，加至高速剪切混合机中，将混合物湿法制粒。使用Strea-1流化床干燥器将该颗粒干燥，研磨，再将研磨的颗粒用硬脂酸镁(已解聚集)在Apex 17L混合器中润滑。

2、烟酸层

该烟酸层如以上实施例1-5所述制备。

3、压片操作

使用Riva双层压片机将上述研磨和润滑的烟酸和DP拮抗剂/辛伐他汀颗粒压制成双层片。

实施例12的操作

1、DP拮抗剂层

根据以上实施例1-5所述操作将各组分混合并制粒。

2、烟酸层

将羟丙甲基纤维素、烟酸和聚维酮加至Apex 17L混合器中，干混合。将该混合物用硬脂酸在Apex 17L滚筒混合器中润滑，形成烟酸混合物。

3、压片操作

使用Riva双层压片机将所述研磨和润滑的烟酸和DP拮抗剂混合物和颗粒压制成双层片。

实施例13

实施例14A-14C

实施例13的操作

1、DP拮抗剂层

在Diosna P10高速剪切混合制粒机中将化合物E、微晶纤维素、乳糖一水合物和交联羧甲基纤维素钠干混合。另外制备含有羟丙基纤维素的水溶液，加至该高速剪切混合制粒机中。将该混合物湿法制粒，用Strea-1流化床干燥器干燥。将该干燥的颗粒研磨。在Apex 17L滚筒混合器中将研磨的颗粒用硬脂酸镁和硬脂富马酸钠润滑，形成DP拮抗剂颗粒。

2、烟酸层

如以上实施例1-5所述制备烟酸层。

3、压片操作

使用Riva双层压片机将研磨和润滑的烟酸和DP拮抗剂混合物和颗粒压成双层片。

实施例14A-14C的操作

1、DP拮抗剂/辛伐他汀层

将化合物E、辛伐他汀、微晶纤维素、乳糖一水合物、交联羧甲基纤维素钠、黄氧化铁、FDC蓝色2号和羟丙甲基纤维素加至Diosna P-6高速剪切混合制粒机中并干混合。制备含有BHA和柠檬酸的含水酒精溶液，加至高速剪切混合器中，将该混合物湿法制粒。使用Strea-1流化床干燥器将该颗粒干燥，研磨，在Apex 17L混合器中将该研磨的颗粒用硬脂酸镁和硬脂富马酸钠(其已被除去团块)润滑。

2.烟酸层

如以上实施例1-5所述制备烟酸层。

3、压片操作

使用Riva双层压片机将研磨和润滑的烟酸和DP拮抗剂/辛伐他汀颗粒压缩成双层片。

除了烟酸这种标准的烟酸受体激动剂外，许多烟酸受体激动剂已被公开。以下出版物公开了烟酸受体激动剂化合物：

Lorenzen，A.等人.Molecular Pharmacology 59：349-357(2001)，

Lorenzen，A.等人.Biochemical Pharmacology 64：645-648(2002)，

Soga，T.等人.Biochemical and Biophysical Research Comm.303：364-369(2003)，

Tunaru，S.等人.Nature Medicine 9：352-355(2003)，

Wise，A.等人.Journal of Biological Chemistry 278：9869-9874(2003)，和

Van Herk，T.等人.Journal of Medicinal Chemistry 46：3945-3951(2003)。

应指出，烟酸受体的部分激动剂，例如在Van Herk等人中公开的那些，包括于本组合物和治疗方法中。

此外，烟酸受体已在2002年10月24日公开的WO02/084298A2中以及在Soga，T等人、Tunaru，S.等人和Wise，A.等人(上述引用文献)中被鉴别和表征。

许多DP受体拮抗剂化合物已被公开并且可以用于本发明的方法、包括于本发明的方法中。例如，DP受体拮抗剂可以根据2001年10月25日公开的WO01/79169、2003年5月2日公开的EP 1305286、2002年11月28日公开的WO02/094830和2003年7月31日公开的WO03/062200而获得。化合物AB可以根据2001年9月13日公开的WO01/66520A1的描述合成；化合物AC可以根据2003年3月20日公开的WO03/022814A1中的描述合成，化合物AD和AE可以根据2003年9月22日公开的WO03/078409中的描述合成。用于本发明的其它代表性DP拮抗剂化合物可以根据下面提供的实施例合成。

实施例1

[5-[(4-氯苯基)硫代]-4-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b] 中氮茚-6-基]乙酸(化合物G)

步骤1  4-氯烟碱醛

如F.Marsais等人，J.Heterocyclic Chem.，25，81(1988)所述制备标题化合物。

步骤2  4-(甲硫基)因碱醛

向NaSMe(9.5g，135mmol)在MeOH(250mL)中的溶液中加入在MeOH(250mL)中的步骤1的4-氯烟碱醛(13.5g，94.4mmol)。将该反应混合物维持在60℃达15min。将该反应混合物倾入到NH₄Cl和EtOAc中。分离有机相，用H₂O洗涤，再用Na₂SO₄干燥。将该化合物在硅胶上用50％EtOAc的己烷溶液纯化，得到该标题化合物。

步骤3  甲基(2Z)-2-叠氮基-3-[4-(甲硫基)吡啶-3-基]丙-2 -烯酸酯

在-12℃下将4-(甲硫基)烟碱醛(4.8g，31mmol)和叠氮基乙酸甲酯(9.0g，78mmol)在MeOH(50mL)中的溶液加至25％NaOMe在MeOH(16.9mL，78mmol)中的溶液中。在30min的添加期间监测内部温度并使其维持在-10℃至-12℃。然后将所得混合物在冰浴中搅拌数小时，接着在冷室的冰浴中过夜。然后将该混悬液倾入到冰和NH₄Cl的混合物中，搅拌10min后将该浆料过滤。产物用冷H₂O洗涤，然后在真空中干燥，得到米黄色固体形式的标题化合物(7.4g)，其含有部分盐类。然后将该化合物用EtOAc在硅胶上纯化。

步骤4  4-(甲硫基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2-甲酸甲酯

将步骤3的化合物(0.40g，1.6mmol)在二甲苯(16mL)中的混悬液缓缓加热至140℃。在140℃下15min的时间之后，将该黄色溶液冷却至室温。必需注意，原因是可能由于氮形成而放热。然后将该混悬液冷却至0℃，过滤，再用二甲苯洗涤，得到该标题化合物。

步骤5  4-(甲硫基)-6-氧代-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]中氮茚 -7-甲酸乙酯

在0℃下向步骤4的化合物(0.35g，1.6mmol)在DMF(20mL)中的溶液中加入NaH(1.2当量)。5min后，加入nBU₄NI(0.10g)和4-溴丁酸乙酯(0.40mL)。在室温下1h后，将该反应混合物倾入到饱和NH₄Cl和EtOAc中。分离有机相，用H₂O洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发之后将粗制产物通过快速色谱法纯化。然后将该二酯溶于THF(7.0mL)中，再在0℃下加入1.06M的叔丁醇钾的THF溶液(2.2mL)。在室温下1h后，将该反应混合物倾入到饱和NH₄Cl和EtOAc中。分离有机相，用Na₂SO₄干燥，减压蒸干，得到该标题化合物，其为乙酯和甲酯的混合物。

步骤6  4-(甲硫基)-8，9-二氢吡啶并[3，2-b]中氮茚-6(7H)-酮

向步骤5的化合物(0.32g)中加入EtOH(8.0mL)和浓HCl(2.0mL)。将所得的混悬液回流5h。将该反应混合物在EtOAc和Na₂CO₃之间分配。分离有机相，蒸发，得到该标题化合物。

步骤7  (2E，2Z)-4-(甲硫基)-8，9-二氢吡啶并[3，2-b]中氮茚- 6(7H)-亚基]乙酸乙酯

向膦酰乙酸三乙酯(0.45g，2.17mmol)的DMF溶液(12mL)中加入80％NaH(0.06g，2.00mmol)和步骤6的化合物(0.22g，1.00mmol)。在55℃下4h之后，将该反应混合物倾入到饱和NH₄Cl和EtOAc中。分离有机相，减压蒸发。将该粗制产物通过快速色谱法纯化，得到标题化合物。

步骤8  4-(甲硫基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]中氮茚-6-基] 乙酸乙酯

通过加热使步骤7的化合物溶于MeOH-THF中。在室温下向前面冷却的溶液中加入PtO₂，再在氢气的一个大气压下将所得混合物维持18h。使用CH₂Cl₂将该反应混合物小心地经硅藻土(Celite)过滤。减压蒸发滤液，得到该标题化合物。或者，可以将步骤7的化合物用Pd(OH)₂在EtOAc中在40PSI的H₂下氢化18h。

步骤9  [4-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]中氮茚-6 -基]乙酸乙酯

向在MeOH(3.0mL)中的步骤8的化合物(0.08g，0.27mmol)中加入Na₂WO₄(0.10g)和30％H₂O₂(600μL)。1h后，将该反应混合物在H₂O和EtOAc之间分配。用H₂O洗涤有机相，分离，蒸发。通过快速色谱法将该标题化合物纯化。

步骤10  [5-[(4-氯苯基)硫代]-4-甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡 啶并[3，2-b]中氮茚-6-基]乙酸乙酯

向4，4′-二氯二苯基二硫化物(0.24g)的1，2-二氯乙烷溶液(2.0mL)中加入SO₂Cl₂(50μL)。向在DMF(2.0mL)中的步骤9的化合物(0.05g)中加入前面的混合物(≈180μL)。接着用¹H NMR监测，并使该反应维持在室温下直至无起始原料残余。将该反应混合物倾入到饱和NaHCO₃和EtOAc中。分离有机相，蒸发，再用快速色谱法纯化标题化合物。

步骤11  [5-[(4-氯苯基)硫代]-4-甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡 啶并[3，2-b]中氮茚-6-基]乙酸

向溶于1/1的THF-MeOH混合物中的步骤10的化合物中加入1NNaOH。在室温下18h以后，将该反应混合物在饱和NH₄Cl和EtOAc之间分配。分离有机相，用Na₂SO₄干燥，蒸发，得到该标题化合物。

¹H NMR(500MHz，丙酮-d₆)δ11.00(bs，1H)，8.60(d，1H)，7.80(d，1H)，7.20(d，2H)，7.00(d，2H)，4.65(m，1H)，4.20(m，1H)，3.75(m，1H)，3.35(s，3H)，2.80至2.10(m，6H).

实施例2

[5-[(4-氯苯基)硫代]-4-(甲硫基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]中 氮茚-6-基]乙酸(化合物H)

该标题化合物可以通过实施例1的步骤10和11所述类似方法从实施例1步骤8的化合物制备。

m/z 418。

实施例3

[5-[(3，4-二氯苯基)硫代]-4-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶并 [3，2-b]中氮茚-6-基]乙酸(化合物I)

如实施例1所述使用步骤10中的二(3，4-二氯苯基)二硫化物制备该标题化合物。

¹H NMR(500MHz，丙酮-d₆)δ8.55(d，1H)，7.85(d，1H)，7.35(d，1H)，7.15(s，1H)，6.95(d，1H)，4.60(m，1H)，4.15(m，1H)，3.80(m，1H)，3.40(s，3H)，2.80至2.10(m，6H).

m/z484.

在25cm×20mm Chiralecel OD柱上使用含30％异丙醇、17％乙醇、0.2％乙酸的己烷，流速8ml/min将对映异构体分离。在25cm×4.6mmChiralecel OD柱上使用含35％异丙醇、0.2％乙酸的己烷，流速1.0ml/min，验证它们的纯度。较大保留性的对映异构体Tr＝9.7min，较大保留性的对映异构体Tr11.1min。

实施例4

[5-(4-氯苯甲酰基)-4-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b] 中氮茚-6-基]乙酸(化合物J)

步骤1  [5-(4-氯苯甲酰基)-4-(甲硫基)-6，7，8，9-四氢吡啶并 [3，2-b]中氮茚-6-基]乙酸乙酯

向4-氯苯甲酰氯(0.30g，1.7mmol)在1，2-二氯乙烷(6.0mL)中的溶液中加入AlCl₃(0.24g，1.8mmole)。5min以后，将实施例1步骤8的[4-(甲硫基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]中氮茚-6-基]乙酸乙酯(0.15g，0.47mmol)在1，2-二氯乙烷(6.0mL)中的溶液加至前面的混合物中。在80℃下4h以后，将该反应混合物在EtOAc和NaHCO₃之间分配。分离有机相，用Na₂SO₄干燥，蒸发。通过快速色谱法将该标题化合物纯化。

步骤2  [5-(4-氯苯甲酰基)-4-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶 并[3，2-b]中氮茚-6-基]乙酸乙酯

向[5-(4-氯苯甲酰基)-4-(甲硫基)-6，7，8-9-四氢吡啶并[3，2-b]中氮茚-6-基]乙酸乙酯(0.12g，0.27mmol)在MeOH(5.0mL)中的溶液中加入Na₂WO₄(0.1g)和30％H₂O₂(300μL)。在55℃下将该反应混合物搅拌1h。然后将该反应混合物在H₂O和EtOAc之间分配。用H₂O洗涤有机相，用Na₂SO₄干燥，蒸发。通过快速色谱法将该标题化合物纯化。

步骤3  [5-(4-氯苯甲酰基)-4-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶 并[3，2-b]中氮茚-6-基]乙酸

将[5-(4-氯苯甲酰基)-4-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]中氮茚-6基]乙酸乙酯如实施例1步骤11所述进行处理，得到该标题化合物。

¹H NMR(500MHz，丙酮-d₆)δ8.55(d，1H)，7.90(d，2H)，7.65(d，1H)，7.45(d，2H)，4.55(m，1H)，4.25(m，1H)，3.45(m，1H)，3.20(s，3H)，2.05至3.00(m，6H).

m/z446.

实施例5

[5-(4-溴苯基)硫代]-4-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b] 中氮茚-6-基]乙酸(化合物K)

如实施例1所述使用4，4′-二溴二苯基二硫化物制备该标题化合物。

¹H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.60(d，1H)，7.80(d，1H)，7.35(d，2H)，7.00(d，2H)，4.65(m，1H)，4.20(m，1H)，3.80(m，1H)，3.35(s，3H)，2.80至2.10(m，6H).

实施例6方法-1

[9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-(甲基磺酰基)-7，8-二氢-6H-吡啶 并[3，4-b]吡咯里嗪(pyrrolizin)-8-基]乙酸(化合物L)

步骤1  2-(甲硫基)因碱醛

除了溶液在55℃下加热2hr外，如实施例1步骤2所述，使用2-溴烟碱醛(A.Numata Synthesis 1999p.306)制备该标题化合物。

步骤2  (2Z)-2-叠氮基-3-[2-(甲硫基)吡啶-3-基]丙-2-烯 酸甲酯

如实施例1步骤3所述制备该标题化合物。

步骤3  4-(甲硫基)-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲酸甲酯

将(2Z)-2-叠氮基-3-[2-(甲硫基)吡啶-3-基]丙-2-烯酸甲酯(1.00g，4.00mmol)在均三甲苯(50mL)中的溶液在160℃下加热1h。将该反应混合物冷却至室温，然后冷却至0℃，过滤沉淀物，再用冷均三甲苯洗涤，得到该标题化合物。

步骤4  1-(甲硫基)-8-氧代-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡 咯里嗪-7-甲酸甲酯

向4-(甲硫基)-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲酸甲酯(0.30g，1.35mmol)在THF(3mL)-甲苯(12.0mL)中的混悬液中加入1.06M的叔丁醇钾(1.42mL/1.41mmol)的THF溶液和丙烯酸甲酯(300μL)。将所得混合物在80℃下加热18h。将该混合物在EtOAc和NH₄Cl之间分配，通过硅藻土过滤。分离有机相，用Na₂SO₄干燥，过滤，得到该标题化合物。

步骤5  1-(甲硫基)-6，7-二氢-8H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8 -酮

如实施例1步骤6所述将1-(甲硫基)-8-氧代-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-7-甲酸甲酯转化成标题化合物。

步骤6  [8-羟基-1-(甲硫基)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡 咯里嗪-8-基]乙酸甲酯

将1-(甲硫基)-6，7-二氢-8H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8-酮(0.15g，0.68mmol)、溴乙酸甲酯(0.34mL)、Zn-Cu(0.226g)在THF(3.0mL)中的混合物超声2h。然后将该混合物在60℃加热5min，直至反应完全。将该反应混合物在EtOAc和NH₄Cl之间分配。分离有机相，用Na₂SO₄干燥，过滤，减压蒸发，得到该标题化合物。通过快速色谱法将该化合物纯化。

步骤7  [1-(甲硫基)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8 -基]乙酸甲酯

向NaI(0.300g)的CH₃CN(3.2mL)溶液中加入TMSCl(0.266mL)。在水浴中将该混合物加至[8-羟基-1-(甲硫基)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8-基]乙酸甲酯(0.15g，0.515mmol)在CH₃CN(1.5mL)中的混悬液中。0.5h以后，将该反应混合物在EtOAc和NaHCO₃之间分配。分离有机相，用硫代硫酸钠洗涤，用MgSO₄干燥，蒸发。通过快速色谱法将该标题化合物纯化。

步骤8  [1-(甲基磺酰基)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡咯里 嗪-8-基]乙酸甲酯

如实施例1步骤9所述将[1-(甲硫基)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8-基]乙酸甲酯转化成标题化合物。

步骤9  [9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-(甲基磺酰基)-7，8-二氢- 6H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8-基]乙酸

如实施例1步骤10和11所述，使用步骤10中的二(3，4-二氯苯基)二硫化物，将[1-(甲磺酰基)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8-基]乙酸甲酯转化成标题化合物。

¹H NMR(500MHz，丙酮-d₆)δ8.35(d，1H)7.80(d，1H)，7.35(d，1H)，7.15(s，1H)，6.95(d，1H)，4.55(m，1H)，4.35(m，1H)，3.90(m，1H)，3.30(s，3H)，3.15(m，1H)，3.05(m，1H)，2.80(m，1H)，2.50(m，1H).

实施例6方法-2

[9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-(甲基磺酰基)-7，8-二氢-6H-吡啶 并[3，4-b]吡咯里嗪-8-基]乙酸

步骤1 1-(甲硫基)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8 -醇

在0℃下向实施例6方法-1步骤5的1-(甲硫基)-6，7-二氢-8H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8-酮(0.55g，2.2mmol)在EtOH(10mL)-THF(1mL)中的混悬液中加入NaBH₄(0.10g，2.6mmol)。在室温下30min以后，通过添加丙酮将该反应猝灭。将溶剂减压蒸发，再将EtOAC和H₂O加至残渣中。分离有机相，用MgSO₄干燥，蒸发。用EtOAc/己烷洗涤该标题化合物，并过滤。

步骤2  2-[1-(甲硫基)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪 -8-基]丙二酸二甲酯

在-78℃下向1-(甲硫基)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8-醇(0.54g，2.1mmol)在THF(10mL)中的混悬液中加入1MNaHMDS的THF(2.35mL，2.4mmol)溶液和氯磷酸二苯酯(0.53mL，2.6mmol)。30min以后，加入丙二酸二甲酯(0.73mL，6.4mmol)和1MNaHMDS的THF(6.8mL，6.8mmol)溶液。将反应混合物恢复到0℃然后再到室温。然后将该混合物在ETOAc和NH₄Cl之间分配。用MgSO₄干燥有机相，过滤，蒸发。通过快速色谱法将标题化合物纯化。

步骤3 [1-(甲硫基)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8 -基]-乙酸甲酯

向2-[1-(甲硫基)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8-基]丙二酸二甲酯(0.59g，2.17mmol)和DMSO(4mL)的混合物中加入在H₂O(0.45mL)中的NaCl(0.45g)。在150℃下18h之后，将该反应混合物在ETOAc和H₂O之间分配。分离有机相，用Na₂SO₄干燥，蒸发。然后通过快速色谱法将该标题化合物纯化。

步骤4  [9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-(甲基磺酰基)-7，8-二氢- 6H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8-基]乙酸

如实施例6方法-1的步骤8至9所述，从[1-(甲硫基)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8-基]乙酸甲酯获得该标题化合物。

实施例7

[10-[(3，4-二氯苯基)硫]-1-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，4 -b]中氮茚-9-基]乙酸(化合物M)

步骤1  [1-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，4-b]中氮茚-9 -基]乙酸乙酯

以与实施例1步骤5至9所述同样的方法由实施例6步骤3的产物制备该标题化合物。

步骤2  [10-[(3，4-二氯苯基)硫]-1-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢 吡啶并[3，4-b]中氮茚-9-基]乙酸

以如实施例1步骤10-11同样方法使用步骤10中的二(3，4-二氯苯基)二硫化物，将步骤1的产物转化成标题化合物。

MS M+1＝485。

实施例8

(4-(甲基磺酰基)-5-{[4-(三氟甲基)苯基]硫}-6，7，8，9-四氢吡啶并 [3，2-b]中氮茚-6-基)乙酸(化合物N)

如实施例1所述使用二[4-(三氟甲基)苯基]二硫化物制备该标题化合物。

¹H NMR(500MHz，丙酮-d₆)δ8.55(d，1H)，7.75(d，1H)，7.45(d，2H)，7.15(d，2H)，4.55(m，1H)，4.15(m，1H)，3.80(m，1H)，3.30(s，3H)，2.80至2.10(m，6H).

m/z 513(M+1).

实施例9

[5-[(2-氯-4-氟苯基)硫代]-4-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶 并[3，2-b]中氮茚-6-基]乙酸(化合物O)

如实施例1所述使用二(2-氯-4-氟苯基)二硫化物制备该标题化合物。

m/z 469(M+1)。

实施例10

[4-(甲基磺酰基)-5-(2-萘硫基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]中氮 茚-6-基]乙酸(化合物P)

如实施例1所述使用二(2-萘基)二硫化物制备该标题化合物。

M/z 467(M+1)。

实施例11

[5-[(2，3-二氯苯基)硫代]-4-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶并 [3，2-b]中氮茚-6-基]乙酸(化合物Q)

如实施例1所述使用二(2，3-二氯苯基)二硫化物制备该标题化合物。

¹H NMR(500MHz，丙酮-d₆)δ8.85(d，1H)，7.80(d，1H)，7.30(d，1H)，7.00(t，1H)，6.60(d，1H)，4.60(m，1H)，4.20(m，1H)，3.80(m，1H)，3.40(s，3H)，2.80至2.10(m，6H).

实施例12

[5-[(4-甲基苯基)硫代]-4-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2 -b]中氮茚-6-基]乙酸(化合物R)

如实施例1所述使用对甲苯基二硫化物制备该标题化合物。

¹H NMR(500MHz，丙酮-d₆)δ8.55(d，1H)，7.80(d，1H)，6.95(m，4H)，4.60(m，1H)，4.15(m，1H)，3.80(m，1H)，3.35(s，3H)，2.80至2.10(m，6H).

实施例13

[4-(甲基磺酰基)-5-(苯硫基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]中氮茚 -6-基]乙酸(化合物S)

如实施例1所述使用二苯基二硫化物制备该标题化合物。

¹H NMR(500MHz，丙酮-d₆)δ8.55(d，1H)，7.80(d，1H)，7.15 to 6.90(m，5H)，4.60(m，1H)，4.15(m，1H)，3.75(m，1H)，3.30(s，3H)，2.80至2.10(m，6H).

实施例14

[5-[(2，4-二氯苯基)硫代]-4-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶并 [3，2-b]中氮茚-6-基]乙酸(化合物T)

如实施例1所述使用二(2，4-二氯苯基)二硫化物制备该标题化合物。该二硫化物是使用Br₂的醚溶液由2，4-二氯噻吩制备的。

¹H NMR(500MHz，丙酮-d₆)δ8.55(d，1H)，7.85(d，1H)，7.35(s，1H)，7.00(d，1H)，6.65(d，1H)，4.55(m，1H)，4.15(m，1H)，3.80(m，1H)，3.35(s，3H)，2.80至2.10(m，6H).

实施例15

[5-[(4-氯苯基)硫代]-4-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[4，3-b] 中氮茚-6-基]乙酸(化合物U)

如实施例1所述从3-氯烟碱醛(Heterocycles p.151，1993)制备该标题化合物，除了最终成环(terminal cyclization)是在回流下通过添加叠氮化物至萘烷进行外。

¹H NMR(500MHz，丙酮-d₆)δ9.20(s，1H)，8.85(s，1H)，7.20(d，2H)，7.00(d，2H)，4.70(m，1H)，4.30(m，1H)，3.75(m，1H)，3.35(s，3H)，2.80至2.10(m，6H).

实施例16

[9-[(4-氯苯基]硫代]-1-(甲基磺酰基)-7，8-二氢-6H-吡啶并 [3，4-b]吡咯里嗪-8-基]乙酸(化合物V)

如实施例1步骤10和11说明的操作，使用步骤10中的二(4-氯苯基)二硫化物，从实施例6方法1步骤8的产物制备该标题化合物。

¹H NMR(500MHz，丙酮-d₆)δ8.25-8.3(m，1H)，7.71-7.75(m，1H)，7.12-7.17(m，2H)，6.97-7.04(m，2H)，4.45-4.51(m，1H)，4.32-4.39(m，1H)，3.73-3.80(m，1H)，3.29(s，3H)，3.15-3.21(m，1H)，2.99-3.08(m，1H)，2.66-2.73(m，1H)，2.46-2.54(m，1H).

实施例17

(-)-[(4-氯苄基)-7-氟-5-甲磺酰基)-1，2，3，4-四氢环戊[b]吲哚 -3-基]乙酸(化合物E)

步骤1：(+/-)-(7-氟-1，2，3，4-四氢环戊[b]吲哚-3-基)乙酸乙 酯。

在N₂气氛下，用迪安-斯达克分离器(Dean-Stark trap)将10.00g4-氟-2-碘苯胺、6.57g2-(2-氧代环戊基)乙酸乙酯和121mg对甲苯磺酸在100ml苯中的溶液回流24h。此后，蒸馏除去苯。然后加入60ml的DMF，再在接连地加入19ml的Hunig′s碱和405mg的Pd(OAc)₂之前将该溶液脱气。将该溶液加热至115℃维持3h，然后冷却至室温。加入300ml的1N HCl和200ml的乙酸乙酯以猝灭该反应，再通过硅藻土将该混合物过滤。相分离，再将酸性相用200ml的乙酸乙酯萃取2次。合并有机层，用盐水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，通过硅藻土过滤，浓缩。通过快速色谱法用100％甲苯洗脱将该粗制物质进一步纯化，得到该标题化合物。

¹H NMR(丙酮-d₆)δ9.76(brs，1H)，7.34(dd，1H)，7.03(d，1H)，6.78(td，1H)，4.14(q，2H)，3.57(m，1H)，2.85-2.55(m，5H)，2.15(m，1H)，1.22(t，3H).

步骤2：(+/-)-(7-氟-1，2，3，4-四氢环戊[b]吲哚-3-基)乙酸

在室温下，向步骤1的1.24g酯在14mL四氢呋喃(THF)中的溶液中加入7mL的MeOH，接着加入7mL的2N NaOH。2.5小时之后，将该反应混合物倾入到含有乙酸乙酯(EtOAc)/1N HCl的分液漏斗中。相分离，再将酸性相用EtOAc萃取2次。合并有机层，用盐水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，蒸发至干，得到粗制的油，将其直接用于下一步骤(＞90％纯度)。

¹H NMR(丙酮-d₆)δ10.90(br s，1H)，9.77(br s，1H)，7.34(dd，1H)，7.04(dd，1H)，6.79(td，1H)，3.56(m，1H)，2.90-2.50(m，5H)，2.16(m，1H).MS(-APCI)m/z 232.2(M-H)^-.

步骤3：(+/-)-(5-溴-7-氟-1，2，3，4-四氢环戊[b]吲哚-3-基) 乙酸

在-40℃下向来自步骤2的2.20g酸(＞90％纯度)在30mL吡啶中的溶液中加入6.85g三溴吡啶(90％纯度)。在0℃下将该混悬液搅拌10min，再温热至室温维持30min。然后在高真空下不加热除去溶剂。将该粗制物质溶于40mL AcOH中，再在0℃下将2.88g Zn粉分批加至该冷却的溶液中。在15℃下将此混悬液搅拌15min，加热至室温再维持15min。此时，通过添加1N HCl将该反应混合物猝灭，再将该混合物倾入到含有盐水/EtOAc的分液漏斗中。层分离，再将有机层用水、盐水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，浓缩。该物质未经进一步纯化即用于下一步骤。

¹H NMR(丙酮-d₆)δ10.77(br s，1H)，9.84(br s，1H)，7.09(m，2H)，3.60(m，1H)，2.95-2.65(m，4H)，2.56(dd，1H)，2.19(m，1H).

步骤4：(+/-)-[5-溴-4-(4-氯苄基)-7-氟-1，2，3，4-四氢环 戊[b]吲哚-3-基]-乙酸

向来自步骤3的2.13g酸在10mL THF中的溶液中，加入过量的重氮甲烷的醚溶液，直至在TLC上监测到酸完全消耗。然后在真空下除去溶剂。在-78℃下向这样形成的粗制甲酯在20mL DMF中的溶液中加入539mg NaH的混悬液(60％在油中)。在0℃下将该混悬液搅拌10min，再次冷却至-78℃，用1.70g 4-氯苄基溴处理。5min后，将温度升至0℃，将该混合物搅拌20min。此时，通过添加2mL AcOH将反应猝灭，再将该混合物倾入到含有1N HCl/EtOAc的分液漏斗中。层分离，用盐水洗涤有机层，用无水Na₂SO₄干燥，浓缩。使用步骤2所述操作将该烷基化物质水解。通过与EtOAc/己烷研磨将该粗制物质进一步纯化，得到该标题化合物。

¹H NMR(丙酮-d₆)δ10.70(br s，1H)，7.31(d，2H)，7.18(d，1H)，7.06(d，1H)，6.92(d，2H)，5.90(d，1H)，5.74(d，1H)，3.61(m，1H)，3.00-2.70(m，3H)，2.65(dd，1H)，2.39(dd，1H)，2.26(m，1H).MS(-APCI)m/z 436.3，434.5M-H)^-.

步骤5：(+)-[5-溴-4-(4-氯苄基)-7-氟-1，2，3，4-四氢环戊[b] 吲哚-3-基]乙酸

在80℃下向步骤4的2.35g酸在130mL EtOH中的溶液中加入780μL(S)-(-)-1-(1-萘基)乙胺。将该溶液冷却至室温并搅拌过夜。将回收的盐(1.7g)用200mL EtOH重结晶。过滤后，将获得的白色固体盐用1N HCl中和，并将产物用EtOAc萃取。用盐水洗涤有机层，用无水Na₂SO₄干燥，浓缩。通过用EtOAc洗脱将该物质经SiO₂垫过滤，生成标题对映体。两个对映体的保留时间分别为7.5min和9.4min[ChiralPakAD柱，己烷/2-丙醇/乙酸(95∶5∶0.1)]。较大极性对映体为98％ee。ee＝98％；保留时间＝9.4min[ChiralPak AD柱：250×4.6mm，己烷/2-丙醇/乙酸(75∶25∶0.1)]；[α]_D ²¹＝+39.2°(c 1.0，MeOH)。

步骤6：(-)-[4-(4-氯苄基)-7-氟-5-(甲磺酰基)-1，2，3，4- 四氢环戊[b]-吲哚-3-基]乙酸和钠盐

将来自步骤5的酸(15.4g)先用重氮甲烷酯化。通过将由此形成的酯在N-甲基吡咯烷酮(N-methylpyrrolidinone)中与16.3g甲磺酸钠盐和30.2g的CuI(I)混合而完成磺化反应。在N₂流下将该混悬液脱气，加热至150℃，搅拌3h，然后冷却至室温。加入500ml乙酸乙酯和500ml己烷以猝灭反应，通过用EtOAc洗脱将该混合物经SiO₂垫过滤。浓缩有机相。用EtOAc溶解粗制油，用水洗涤3次，用盐水洗涤1次，用无水Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。通过快速色谱法使用100％甲苯至50％甲苯/EtOAc的梯度洗脱将该粗制物质进一步纯化，得到14g磺酸化的酯，其使用步骤2所述操作水解。在两次连续的重结晶之后获得标题化合物：乙酸异丙酯/庚烷，接着是CH₂Cl₂/己烷。

¹H NMR(500MHz丙酮-d₆)δ10.73(br s，1H)，7.57(d，2H，J＝8.8Hz)，7.31(m，1H)，7.29(m，1H)，6.84(d，2H，J＝8.8Hz)，6.29(d，1H，J_AB＝17.8Hz)，5.79(d，1H，J_AB＝17.8Hz)，3.43(m，1H)，2.98(s，3H)，2.94(m，1H)，2.85-2.65(m，3H)，2.42(dd，1H，J₁＝16.1Hz，J₂＝10.3Hz)，2.27(m，1H).¹³C NMR(125MHz丙酮-d₆)δ173.0，156.5(d，J_CF＝237Hz)，153.9，139.2，133.7，133.3，130.0(d，J_CF＝8.9Hz)，129.6，128.2，127.5(d，J_CF＝7.6Hz)，122.2(d，J_CF＝4.2Hz)，112.3(d，J_CF＝29.4Hz)，111.0(d，J_CF＝22.6Hz)，50.8，44.7，38.6，36.6，36.5，23.3.MS(-APCI)m/z 436.1，434.1(M-H)^-.

ee＝97％；保留时间＝15.3min[ChiralCel OD柱：250×4.6mm，己烷/2-丙醇/乙醇/乙酸(90∶5∶5∶0.2)]；[α]D²¹＝-29.3°(c1.0，MeOH)。Mp 175.0℃。

钠盐通过用14.80mL 1N NaOH水溶液处理在EtOH(100mL)中的6.45g(14.80mmol)上述酸化合物而制备。在真空下除去有机溶剂，再在回流下将粗制固体溶于1.2L异丙醇中。通过蒸馏溶剂将终体积减小至500mL。通过冷却至室温而将钠盐结晶。将该结晶钠盐混悬于H₂O中，用干冰浴冷冻，再在高真空下冷冻干燥，得到标题化合物的钠盐。

¹H NMR(500MHz DMSO-d₆)δ7.63(dd，1H，J₁＝8.5Hz，J₂＝2.6Hz)，7.47(dd，1H，J₁＝9.7Hz，J₂＝2.6Hz)，7.33(d，2H，J＝8.4Hz)，6.70(d，2H，J＝8.4Hz)，6.06(d，1H，J_AB＝17.9Hz)，5.76(d，1H，J_AB＝17.9Hz)，3.29(m，1H)，3.08(s，3H)，2.80(m，1H)，2.69(m，1H)，2.55(m，1H)，2.18(m，2H)，1.93(dd，1H，J₁＝14.4Hz，J₂＝9.7Hz).

实施例17A

(+/-)-[5-溴-4-(4-氯苄基)-7-氟-1，2，3，4-四氢环戊[b]吲哚- 3-基]乙酸(实施例17，步骤4)的另选操作

步骤1：(+/-)-7-氟-1，2，3，4-四氢环戊[b]吲哚-3-基]乙酸二环 己胺(DCHA)盐

将0.526M的2-溴-4-氟苯胺在二甲苯中的溶液与(2-氧代环戊基)乙酸乙酯(1.5当量)和硫酸(0.02当量)一起加热回流20小时。用迪安-斯达克仪(Dean-Stark apparatus)将水共沸除去。然后通过NMR监测，20小时之后，观察到转化为所需的亚胺中间体，转化率为80-85％。用1M碳酸氢钠(0.2体积)将该反应洗涤15min，将有机部分蒸发。将剩余的浆状物在真空下(0.5mm Hg)蒸馏。在30℃将残余的二甲苯蒸馏，然后在50-110℃回收过量的酮和未反应的苯胺；从110-180℃馏份回收亚胺，其为具有83％纯度的淡棕色澄清液体。

然后将该亚胺中间体加至脱气了的乙酸钾(3当量)、四正丁基氯化铵一水合物(1当量)、乙酸钯(0.03当量)和N，N-二甲乙酰胺的混合物中(亚胺的终浓度＝0.365M)。将反应混合物加热至115℃维持5小时，再使之冷却至室温。然后加入3N KOH(3当量)，将该混合物在室温搅拌1小时。将反应混合物用水(1.0体积)稀释，用甲苯(3×0.75体积)洗涤。用3NHCl将水相酸化至pH1，再用叔丁基甲基醚(2×0.75体积)萃取。用水(0.75体积)洗涤合并的有机部分。向该澄清淡棕色溶液中加入二环己胺(1当量)，再将溶液在室温下搅拌16小时。将盐过滤，用乙酸乙酯、叔丁基甲基醚洗涤，再使之干燥，得到标题化合物。分析：94A％。

1H NMR(500mHz，CDCl3)：δ9.24(s，1H)，7.16-7.08(m，2H)，6.82(t，1H)，6.2(br，2H)，3.6-3.5(m，1H)，3.04-2.97(m，2H)，2.88-2.70(m，3H)，2.66(dd，1H)，2.45-2.37(m，1H)，2.13-2.05(m，2.05)，1.83(d，4H)，1.67(d，2H)，1.55-1.43(m，4H)，1.33-1.11(m，6H).

步骤2：(+/-)-(5-溴-7-氟-1234-四氢环戊[b]吲哚-3-基) 乙酸

将来自上面步骤1的DCHA盐在二氯甲烷中的浆料(0.241M溶液)冷却至-20至-15℃。一次性加入吡啶(2当量)，将温度保持在-20℃～15℃的同时向该浆料中用30至45分钟滴加溴(2.5当量)。(在添加约1/3的溴时，反应混合物是粘稠的，必需充分搅拌。最终，在添加约1/2的溴时，该混合物再次变“松(loose)”)。添加完毕后，在-15℃下将反应混合物再老化1小时。然后用5分钟添加乙酸(3.04当量)，再分批添加锌粉(3.04当量)。(在-15℃下加入部分锌粉，再将该混合物老化约5分钟，以确保进行放热(约-15℃至-10℃))。用约5次加锌历经约30min重复该操作。当观察不到放热时，较快地加入剩余的锌。整个操作用约30至45分钟。

添加完毕后，将该批料温热至室温，老化1小时，浓缩。将反应混合物转移至甲基叔丁基醚(MTBE，0.8体积)中，再加入10％乙酸水溶液(0.8体积)。将该混合物(盐类的结晶，例如吡啶鎓(pyridium))在室温下老化1小时，再通过solka-floc过滤。将solka-floc垫用MTBE(大约0.2体积)冲洗，再将滤液(双相的，MTBE/水相)转移至萃取器中。用水(0.8体积)洗涤有机相。将MTBE萃取物浓缩，再转移至异丙醇(IPA，0.25体积)，结晶化合物。加入水(0.25体积)，再将该批料老化1小时。用1小时加入水(0.33体积)。加水完毕后，将该批料再老化1小时，过滤，用30/70的IPA/水(0.15体积)冲洗。在+45℃在烘箱中干燥结晶的溴酸。

步骤3：(+/-)-[5-溴-4-(4-氯苄基)-7-氟-1，2，3，4-四氢环 戊[b]吲哚-3-基]-乙酸

将步骤2的溴酸溶于二甲基乙酰胺(0.416M溶液)中，再一次性加入碳酸铯(2.5当量)。向该浆料中一次性加入4-氯苄基氯(2.5当量)，再将该批料加热至50℃维持20h。将该批料冷却至室温，并用5分钟加入氢氧化钠5N(4.00当量)(温度升至+40℃)。在50℃将反应老化约3小时，冷却至室温，再转移至L萃取器中。用乙酸异丙酯(IPAc，2体积)稀释该溶液，再冷却至+15℃。用5N HCl将溶液酸化至pH～2。层分离，有机层用水(2×2体积)洗涤。将IPAc溶液浓缩，再转移至IPA(0.8体积)以结晶产物。用2小时加入水(8L)，再过滤本批料，得到标题化合物。该批料可以在烘箱中+40℃干燥24小时。

实施例18

(+/-)-{4-[1-(4-氯苯基)乙基]-7-氟-5-甲磺酰基-1，2，3，4-四 氢环戊[b]吲哚-3-基}-乙酸(化合物X)

根据2003年7月30日公开的PCT WO03/062200中提供的说明来合成该标题化合物。

实施例19

(+/-)-[9-(4-氯苄基)-6-氟-甲磺酰基-2，3，4，9-四氢-1H-咔 唑-1-基]乙酸(化合物Y)

根据2003年7月30日公开的PCT WO03/062200中提供的说明来合成该标题化合物。

实施例20

[4-(4-氯苄基)-7-氟-5-甲磺酰基-1-氧代-1，2，3，4-四氢环戊 [b]吲哚-3-基]乙酸(化合物Z)

根据2003年7月30日公开的PCT WO03/062200中提供的说明来合成该标题化合物。

实施例21

{9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-异丙基-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4 -b]吡咯里嗪-8-基}乙酸(对映体A和对映体B)(化合物AA)

步骤1  2-氯烟碱醛

在-40℃下向二异丙基胺(110mL，780mmol)在THF(500mL)中的溶液中加入2.5M的n-BuLi己烷溶液(300mL，750mmol)。5min后，将该反应混合物冷却至-95℃，然后连续加入DMPU(15mL)和2-氯吡啶(50mL，532mmol)。然后将所得混合物温热，在-78℃下搅拌4h。此后，在加入DMF(70mL)之前将黄色混悬液再次冷却至-95℃。将终反应混合物温热至-78℃，并在该温度下搅拌1.5h。将反应混合物倾入到冷的HCl水溶液(3N，800mL)中，搅拌5min。加入浓NH₄OH水溶液调节pH至7.5。将水层用EtOAc萃取3次。合并的有机层用NH₄Cl水溶液和盐水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。通过硅胶垫用100％己烷至100％EtOAc的梯度洗脱，将该粗制物质进一步纯化，再在冷己烷中将产物结晶，产生浅黄色固体的标题化合物。

步骤2  (2Z)-2-叠氮基-3-(2-氯吡啶-3-基)丙-2-烯酸甲酯

在-20℃将2-氯烟碱醛(20.0g，139.9mmol)和叠氮基乙酸甲酯(32.2mL，349.7mmol)在MeOH(168mL)中的溶液加至25％NaOMe在MeOH(80mL，349mmol)中的溶液中。监测内部温度并在30min的加样期间使其维持在～-20℃。然后将所得混合物在冰浴中搅拌数小时，接着在冷室的冰浴中过夜。然后将该混悬液倾入到冰和NH₄Cl的混合物中，在搅拌10min后将该浆料过滤。产物用冷H₂O洗涤，然后在真空中干燥。将粗制物质溶于CH₂Cl₂中，再加入MgSO₄。通过硅胶垫过滤此混悬液，用CH₂Cl₂洗涤。减压浓缩滤液，获得标题产物，为米黄色沉淀(20g)。

步骤3  4-氯-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲酸甲酯

将(2Z)-2-叠氮基-3-[2-氯吡啶-3-基]丙-2-烯酸甲酯(21g，88mmol)在均三甲苯(880mL)中的溶液在回流下加热1h。将该反应混合物冷却至室温，然后冷却至0℃，过滤沉淀，再用冷己烷洗涤。将该物质在1∶20EtOAc/己烷中搅拌过夜，过滤后得到标题化合物，其为浅黄色固体(13.2g)。

步骤4  1-氯-8-氧代-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪 -7-甲酸甲酯

向4-氯-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲酸甲酯(12.5g，59mmol)在THF(116mL)-甲苯(460mL)中的混悬液中加入1.0M叔丁醇钾的THF溶液(64mL，64mmol)和丙烯酸甲酯(55mL，611mmol)。再将所得混合物在100℃下加热18h。此后，将该混悬液冷却至室温，再将其倾入到饱和NH₄Cl水溶液(400mL)和己烷(400mL)的混合物中。将固体倾析，过滤，再用H₂O和己烷洗涤，得到该标题化合物。

步骤5  1-氯-6，7-二氢-8H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8-酮

向前面步骤的化合物中加入异丙醇(8.0mL)和浓HCl(2.0mL)，并在100℃下加热1h。将该反应混合物在EtOAc和Na₂CO₃之间分配。分离有机相，蒸发，得到该标题化合物。

步骤6  1-异丙烯基-6，7-二氢-8H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8 -酮

向1-氯-6，7-二氢-8H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8-酮(5.0g，24.3mmol)、三(二亚苄基丙酮)合二钯(0)(1.0g，1.09mmol)和三苯基胂(2.70g，8.82mmol)在DMF(100mL)中的混合物中加入三丁基异丙烯基锡烷(9.60g，29.00mmol)。将所得混合物脱气，并在78℃下加热18h。在减压下蒸发溶剂。将CH₂Cl₂和硅藻土加至所得混合物中，然后经硅藻土将其过滤。通过快速色谱法(50％至100％EtOAc/己烷)纯化标题化合物。

步骤7  (2E)-(1-异丙烯基-6，7-二氢-8H-吡啶并[3，4-b]吡咯 里嗪-8-亚基)乙酸乙酯

在-78℃下向1-异丙烯基-6，7-二氢-8H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8-酮(0.60g，2.8mmol)和膦酰乙酸三乙酯(1.00g，4.46mmol)在THF(24mL)中的溶液中加入80％NaH(0.12g，4.00mmol)，将该反应混合物温热至0℃，然后至室温。将该反应混合物倾入到饱和NH₄Cl和EtOAc中。分离有机相，用Na₂SO₄干燥，蒸发。通过快速色谱法(40％EtOAc/己烷)纯化该标题化合物。

步骤8  (1-异丙基-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8 -基)乙酸乙酯

向(2E)-(1-异丙烯基-6，7-二氢-8H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8-亚基)乙酸乙酯(0.40g，1.4mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中加入Pd(OH)₂(0.20g)。在1atm的H₂下将该混合物搅拌3h。用硅藻土过滤该混合物，蒸发，得到该标题化合物。

步骤9  {9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-异丙基-7，8-二氢-6H- 吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8-基}乙酸乙酯

向二(3，4-二氯苯基)二硫化物(0.24g，0.67mmol)在CH₂Cl₂(5.6mL)中的溶液中加入SO₂Cl₂(0.036mL)。将所得黄色混合物在室温下搅拌1h。在0℃下将该溶液加至(1-异丙基-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8-基)乙酸乙酯(0.15g，0.52mmol)在DMF(5.6mL)中的溶液中。在0℃下1.5h之后，将该反应混合物倾入到饱和NaHCO₃和EtOAc中。分离有机相，用Na₂SO₄干燥，过滤，蒸发。通过快速色谱法(30％至40％EtOAc/己烷)纯化该标题化合物。

步骤10  {9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-异丙基-7，8-二氢-6H- 吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8-基}乙酸

向{9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-异丙基-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡咯里嗪-8-基}乙酸乙酯(0.23g，0.50mmol)在THF(5mL)和MeOH(2.5mL)中的溶液中加入1.0M NaOH(1.5mL，1.5mmol)。在室温下搅拌18h后，加入HOAc(0.25mL)，再蒸干溶剂。将残渣用EtOAc/H₂O溶解，有机层用H₂O和盐水洗涤。干燥(Na₂SO₄)之后，将溶液过滤，蒸发。残渣与1∶1EtOAc∶己烷搅拌，过滤后得到标题化合物，为白色固体。

¹H NMR(MeOH-d₄)δ1.14-1.26(m，6H)，2.47-2.56(m，1H)，2.56-2.64(m，1H)，2.94-3.05(m，2H)，3.81-3.89(m，1H)，4.22-4.30(m，1H)，4.33-4.44(m，2H)，6.93-6.99(m，1H)，7.14-7.19(m，1H)，7.33-7.39(m，1H)，7.54-7.59(m，1H)，8.16-8.21(m，1H).

使用CH₂N₂将步骤10的产物转化成其甲酯，再将该酯在手性固定相(chiralcel OD柱2×25cm)上用12％2-丙醇/己烷以6mL/min的流速洗脱，进行HPLC分离。对映体A(较小极性)的保留时间为31.9min，对映B(较大极性)的保留时间为35.5min。A和B均按照实施例17步骤10水解，得到标题化合物的对映体A和B。

实施例22

((1R)-6-氟-8-(甲基磺酰基)-9-{(1S)-1-[4-(三氟甲基)苯基] 乙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸(化合物AJ)

步骤1：2-(2-溴-4-氟苯基)肼氯化物

在-10℃下向2-溴-4-氟苯胺在浓HCl(1.5M)中的混悬液中缓缓加入10.0M的NaNO₂水溶液(1.1当量)。在0℃下将该混合物搅拌2.5小时。然后在维持内部温度低于10℃的同时缓缓加入SnCl₂(3.8M)在浓HCl中的冷(-30℃)溶液。在10℃下将所得混合物机械搅拌20min，然后在室温下搅拌1hr。过滤该粘稠的浆料，再将固体过夜风干。将该固体重新混悬于冷HCl中，再次过滤。将干燥的物质混悬于Et₂O，搅拌10min，过滤，过夜风干，得到该标题化合物，其为米黄色固体。

步骤2：(+/-)-(8-溴-6-氟-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基) 乙酸乙酯

向步骤1的化合物(1当量)在AcOH中的混悬液(0.5M)中加入(2-氧代环己基)乙酸乙酯(1当量)。在回流下将该混合物搅拌16小时，冷却，再减压蒸发除去AcOH。残渣用EtOAc稀释，再用水和饱和NaHCO₃水溶液洗涤。有机层用Na₂SO₄干燥，浓缩。然后将残渣在硅胶垫上用甲苯洗脱纯化。将滤液浓缩，并在己烷中搅拌，过滤后得到该标题化合物，其为白色固体。MS(+APCI)m/z 354.2(M+H)⁺。

步骤3：(+/-)-[6-氟-8-(甲基磺酰基)-2，3，4，9-四氢-1H-咔 唑-1-基]-乙酸乙酯

向步骤2的化合物(1当量)在无水DMSO(0.28M)中的溶液中加入甲亚磺酸钠(sodium methanesulphinate，3当量)和碘化铜(3当量)。将N₂通入至该混合物中5min，然后将该反应在100℃和N₂气氛下搅拌。12小时后，加入更多的甲亚磺酸钠(2当量)和碘化铜(2当量)。在100℃下再将该混合物搅拌12小时，冷却，用EtOAc稀释，加入1N HCl酸化该混合物。将该混悬液搅拌30min，通过硅藻土过滤。滤液用水洗涤，用Na₂SO₄干燥，浓缩。通过硅胶垫过滤该残渣，先用甲苯洗脱以除去非极性杂质，然后用己烷/EtOAc的2∶1混合物洗脱所需产物。将用己烷/EtOAc混合物洗脱的滤液浓缩，得到标题化合物，其为浅黄色固体。MS(-APCI)m/z 352.1(M-H)^-。

步骤4：[(1R)-6-氟-8-(甲基磺酰基)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑 -1-基]乙酸乙酯

通过制备型HPLC在chiralpak AD制备柱上用15％iPrOH/己烷的混合物洗脱将来自步骤3的外消旋混合物拆分。根据最终产物的活性，确定较大极性的对映体(较长保留时间)为标题化合物。

步骤5：[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲基 磺酰基)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯

用10min向步骤4的化合物(1当量)、三苯膦(1.5当量)和(1R)-1-(4-氯苯基)乙醇(1.5当量，参照实施例1中所述操作制备)在THF(0.175M)中的溶液中加入偶氮二甲酸二叔丁酯溶液(2.1M在THF中，1.5当量)。在室温下将该混合物搅拌2hr，浓缩。通过硅胶快速色谱法使用7％EtOAc/甲苯洗脱，将残渣纯化，得到需要的产物(～90％纯度)，将其直接用于下一反应。

步骤6：[(1R)-9-[(S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲基 磺酰基)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸和[(1S)-9-[(1S)-1 -(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲基磺酰基)-2，3，4，9-四氢-1H- 咔唑-1-基]乙酸

向步骤5的化合物在THF和甲醇(0.1M)的2∶1混合物的溶液中加入1N LiOH水溶液(3当量)。在室温下将该混合物搅拌2hr，加入AcOH，再蒸发除去溶剂。将残渣溶解于EtOAc/H₂O中，有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。将残渣转移到30％EtOAc的己烷溶液中，再将该产物混悬于乙醚中，超声45min，过滤，在高真空度下在50℃干燥24hr，得到标题化合物，其为白色固体。MS(-APCI)m/z 462.1(M-H)。

或者，将(+/-)[6-氟-8-(甲基磺酰基)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯用于步骤5的烷基化反应，得到2个非对映异构体的混合物：[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲基磺酰基)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯和[(1S)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲基磺酰基)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯。使用以下操作通过选择性水解拆分该非对映异构体混合物，得到需要的[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲基磺酰基)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸。

拆分：

将[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲基磺酰基)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯和[(1S)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲基磺酰基)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯的非对映异构体混合物(1当量)溶于THF/MeOH的3.5/1混合物(0.25M)并在0℃下冷却。缓缓加入LiOH水溶液1N(1当量)，再在0℃下将该混合物搅拌12h，或者直到[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲基磺酰基)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯几乎完全水解，另一个非对映异构体在这些条件下仅轻微水解。加入AcOH，蒸发除去溶剂。将残渣溶解于EtOAc/H₂O中，用盐水洗涤有机层，用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。通过快速色谱法用含有1％AcOH的40％EtOAc的己烷溶液洗脱，将[(1S)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲基磺酰基)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯和[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺酰基)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸分离，得到需要的de＞90％的[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲基磺酰基)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸，将其转移到30％EtOAc的己烷溶液中，得到需要的化合物，其为de＞95％的白色固体。

步骤7：[(1R)-6-氟-8-(甲磺酰基)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑- 1-基]乙酸甲酯

向[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲基磺酰基)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸(在MeOH中[α]_D＝-226°)在MeOH(0.1M)的溶液中加入10％钯炭(10％wt/wt)。将N₂通入至该混合物5min。在室温和H₂气氛(气球)将反应搅拌24小时，再通过硅藻土垫用CH₂Cl₂洗脱过滤。减压蒸发除去溶剂，残渣转移到MeOH中，得到化合物[(1R)-6-氟-8-(甲基磺酰基)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸甲酯。

步骤8：((1R)-6-氟-8-(甲基磺酰基)-9-{(1S)-1-[4-(三氟 甲基)苯基]乙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸(化合物AJ)

用20min向步骤7的化合物(1当量)、三苯膦(1.5当量)和(1R)-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙醇(1.5当量)在THF(0.2M)中的溶液中加入偶氮二甲酸二叔丁酯(1M在THF中，1.5当量)。在室温下将该混合物搅拌2hr，浓缩。通过硅胶快速色谱法使用10％EtOAc/甲苯洗脱将残渣纯化，得到((1R)-6-氟-8-(甲基磺酰基)-9-{(1S)-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸甲酯(～90％纯度)，将其直接用于下一步反应。

在0℃下向上面的酯(1当量)在THF/MeOH的3.5/1混合物(0.25M)中的溶液中缓缓加入LiOH水溶液1N(1当量)，再在0℃下将该混合物搅拌16h，或者直到酯几乎完全水解；在这些条件下，另一较少的非对映异构体的水解速率缓慢的多。加入AcOH，并在真空下除去溶剂。将残渣溶解于EtOAc/H₂O中，再用盐水洗涤有机层，用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。为了除去未反应的甲酯，将该残渣通过硅胶垫过滤，先用10％EtOAc/甲苯洗脱，然后用含有1％的AcOH的60％EtOAc/甲苯洗脱。将残渣转移到30％EtOAc/己烷中，再在高真空和50℃下干燥16h，得到标题化合物，其为de和ee＞95％(手性HPLC检测)的白色固体。MS(-APCI)m/z 496.0(M-H)^-。在MeOH中[α]_D＝-181°。

生物学

发挥选择性DP拮抗剂功能的用于本发明的化合物代表性地表现出对DP的亲和力(K_i)，其比对CRTH2受体的亲和力(K_i)至少高约10倍(数字上较低的K_i值)。用于本发明的典型的DP拮抗剂对DP受体的选择性至少是对CRTH2受体选择性的约10倍。更特别的，该选择性DP受体拮抗剂对DP受体的选择性相对于CRTH2受体而言至少是约100倍。还更特别的，DP选择性拮抗剂化合物对DP受体的选择性高于对CRTH2受体至少约800-1000倍，即，对DP受体的亲和力(K_i)比对CRTH2受体的亲和力(K_i)高800-1000倍。

如本文使用的，当化合物“选择性调节所述DP受体”时，该化合物以在治疗剂量下可达到的浓度结合于并拮抗所述DP受体，而在该治疗可达到的浓度下基本上不调节所述CRTH2受体。

一般地，用于本文的DP拮抗剂对CRTH2受体的亲和力(K_i)约为0.5mmol或更高。对CRTH2具有约0.5mmol或更高的结合亲和力、对DP受体选择性比对CRTH2高至少约10倍的化合物可用于抑制当施用烟酸而不施用所述选择性DP拮抗剂时可见的潮红反应。

化合物对重组人DP和CRTH2受体的亲和力和选择性的测定

化合物对DP和CRTH2受体的亲和力和选择性是使用AbramovitzM，等人.Biochem.Biophys.Acta(2000)1483：285-293和Sawyer N，等人.Br.J.Pharmacol.(2002)；137：1163-1172中所述放射性配体结合试验测定的。简而言之，使用人胚胎肾(HEK)293EBNA(Epstein Barr virusnuclear Antigen)细胞(命名为HEK293E细胞系)建立单独表达人DP和CRTH2受体的稳定的细胞系。从这些重组细胞系制备的膜级分被用于平衡竞争放射性配体结合试验，以测定化合物对DP和CRTH2受体的亲和力和选择性。

与全长编码序列相对应的DP和CRTH2cDNAs被亚克隆到哺乳动物表达载体pCEP4(Invitrogen)的适当位点，并且在HEK293E细胞中表达。膜是通过差速离心制备的(1000xg、10min，然后160,000xg、30min，全部在4℃下)，接着在冰上，在蛋白酶抑制剂(2mM AEBSF、10μM E-64、100μM亮肽素和0.05mg/mL胃蛋白酶抑制剂)存在下，通过在800psi下氮空穴(nitrogen cavitation)30min进行细胞溶解。通过Dounce匀浆(Dounce A；10次操作)，以约5至10mg/mL蛋白质将160,000xg颗粒混悬于10mM的含有1mM EDTA的HEPES/KOH(pH7.4)中，在液氮中冷冻，并贮藏于-80℃。受体结合试验是在含有1mM EDTA、10mMMnCl₂和0.7nM[³H]PGD₂(200Ci/mmol)的10mM HEPES/KOH(pH7.4)中以0.2mL最终培养体积进行的。该反应是通过添加来自160,000xg级分的膜蛋白(约30μg DP和10μg CRTH2)而开始的。将配体加至在整个培养中保持恒定在1％(v/v)的二甲亚砜(DMSO)中。非特异性结合是在10μM的非放射性PGD₂存在下测定的。在室温下在小轨道振动器(mini-orbital shaker)中培养60min。使用Tomtec Mach III 96-孔半自动细胞收集器，该结合试验是经穿过在无EDTA的试验培养缓冲液中预润湿的96-孔Unifilter GF/C(Canberra Packard)快速过滤(在4℃下)而终止的。将该滤器用3至4mL的相同缓冲溶液洗涤，在55℃下干燥90min，并使用1450MicroBeta(Wallac)计数器，添加50μL Ultima Gold F(CanberraPackard)，通过闪烁计数测定结合于各个滤器的残余放射性。

最大特异性结合定义为总结合减去不存在竞争剂时的非特异性结合。在化合物的各浓度下测定特异性结合，并且表示为最大特异性结合的百分率。S形的平衡竞争曲线是通过把最大特异性结合百分率表达为试验化合物浓度的函数而构成的，并应用基于四参数方程的单纯驱动(simplex driven)非线性最小二乘法曲线拟合程序，通过一用户设计软件包分析以测定拐点(InPt)。试验化合物的结合亲和力是由方程K_i＝InPt/1+([放射性配体]/K_d)，通过计算平衡抑制常数(K_i)来测定的，其中K_d是放射性配体-受体相互作用的平衡解离常数。当InPt不能被测定时使用IC₅₀(即抑制最大特异性结合的50％所需的试验化合物浓度)。

一般地，用于本发明的化合物对DP受体显示出大约低为约0.4nM至高为约16.3nM的K_i。同样地，用于本发明的化合物一般地对CRTH2受体显示出低为约180nM至高为约22,000nM或者甚至更高的K_i。

化合物对小鼠烟酸诱导的血管舒张的影响

本文所述的选择性DP拮抗剂的效能可以使用人烟酸诱导潮红的鼠类模型，测定潮红抑制作用而证明。在小鼠耳中的血流(血管舒张测定，一种人类潮红的明显要素)是在给小鼠施用烟酸后测定的，该小鼠已经用介质(作为对照)或DP拮抗剂预处理。具体地，在该研究中使用雄性C57BL/6小鼠(～25g)。在各试验组中使用5只小鼠。用水稀释戊巴比妥至终浓度为5mg/ml，向每只小鼠腹膜内注射0.3ml。将DP拮抗剂以5mg/ml终浓度溶于5％羟丙基-β-环糊精中，将该化合物以0.2ml/小鼠(～40mpk)的体积腹膜内给药。将烟酸以12.5mg/ml终浓度溶于5％羟丙基-β-环糊精中。用2N NaOH将烟酸贮备溶液pH调节至7.4，并以0.2ml/小鼠皮下给药(～100mpk)。

小鼠耳皮肤的灌注是使用激光Doppler灌注成像仪(PeriScan PIMII，Perimed，Sweden)，在给予烟酸之前5分钟开始，每30秒钟监测一次，监测15分钟。计算在介质或烟酸施用后历经10分钟的平均灌注(mean perfusion)百分变化率，并对每只动物作出平均灌注百分变化率对时间的图。然后从各图计算平均灌注(％Δxmin)的曲线下面积(AUC)，每组的结果以平均AUC±SEM表示。

化合物D抑制小鼠PGD-2诱导的血管舒张(图1)。所试验的DP拮抗剂抑制小鼠烟酸诱导的血管舒张；所选择的化合物的数据提供于图2和3。

关于阿司匹林对烟酸、或其盐或溶剂化物，或者其它烟酸受体激动剂的潮红反应的抑制作用，在烟酸诱导血管舒张的小鼠模型中试验，人类潮红的关联性，其中小鼠遗传性缺乏DP受体(DP1)，显示可能发生某些烟酸诱导的血管舒张，尽管血管舒张的强度低于具有DP受体的小鼠。因此，部分烟酸诱导的血管舒张可能不依赖于该DP受体。该DP-非依赖性血管舒张可以通过向小鼠施用或预先施用阿司匹林，一种COX-1/COX-II抑制剂而被抑制。人类剂量范围为约20-25mg至高为约650mg，在施用烟酸之前约1小时至约30分钟施用，直至同时施用，并且根据需要重复直至每4小时一次。这样，DP受体拮抗剂和阿司匹林的联合用药在人类中对于抑制烟酸诱导的潮红，减弱部分或全部未被DP受体或阿司匹林单独抑制的潮红是特别有效的。

引用于本文的所有专利、专利申请和出版物在此以其整体通过引用并入本文。尽管某些优选的实施方案已被详细地描述于本文，许多另选的实施方案被认为落入本发明的范围内。

Claims (31)

1.治疗需要动脉粥样硬化治疗的人类患者的动脉粥样硬化的方法，其包括向所述患者施用约1000mg的烟酸和选自约18.75mg、20mg、37.5mg、50mg、75mg、100mg和150mg的量的DP受体拮抗剂，所述的量对于治疗动脉粥样硬化是有效的，且不存在实质潮红。

2.治疗需要动脉粥样硬化治疗的人类患者的动脉粥样硬化的方法，其包括向所述患者施用约2000mg的烟酸和选自约37.5mg、75mg、100mg、150mg、200mg和300mg的量的DP受体拮抗剂，所述的量对治疗动脉粥样硬化是有效的，且不存在实质潮红。

3.药物组合物，其包括约1000mg烟酸和以选自18.75mg、20mg、37.5mg、50mg、75mg、100mg和150mg的量存在的选自A、B、D、E、X、AA、AF、AG、AH、AI和AJ中的DP拮抗剂，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

4.权利要求3所述的药物组合物，其包括1000mg烟酸和20mg、75mg、100mg或150mg的选自A、B、D、E、X、AA、AF、AG、AH、AI和AJ中的DP拮抗剂，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

5.权利要求4所述的药物组合物，其包括1000mg的烟酸和20mg选自A、B、D、E、X、AA、AF、AG、AH、AI和AJ中的DP拮抗剂，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

6.权利要求5所述的药物组合物，其包括1000mg烟酸，20mg化合物A，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

7.权利要求5所述的药物组合物，其包括1000mg烟酸，20mg化合物B，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

8.权利要求5所述的药物组合物，其包括1000mg烟酸，20mg化合物D，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

9.权利要求5所述的药物组合物，其包括1000mg烟酸，20mg化合物E，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

10.权利要求5所述的药物组合物，其包括1000mg烟酸，20mg化合物X，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

11.权利要求5所述的药物组合物，其包括1000mg烟酸，20mg化合物AA，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

12.权利要求5所述的药物组合物，其包括1000mg烟酸，20mg化合物AF，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

13.权利要求5所述的药物组合物，其包括1000mg的烟酸，20mg化合物AG，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

14.权利要求5所述的药物组合物，其包括1000mg烟酸，20mg的化合物AH，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

15.权利要求5所述的药物组合物，其包括1000mg烟酸，20mg化合物AI，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

16.权利要求5所述的药物组合物，其包括1000mg烟酸，20mg化合物AJ，或它们的药学可接受的盐或溶剂化物，和药学可接受的载体。

17.权利要求3所述的药物组合物，其还包括约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀。

18.权利要求4所述的药物组合物，其还包括约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀。

19.权利要求5所述的药物组合物，其还包括约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀。

20.权利要求6所述的药物组合物，其还包括约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀。

21.权利要求7所述的药物组合物，其还包括约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀。

22.权利要求8所述的药物组合物，其还包括约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀。

23.权利要求9所述的药物组合物，其还包括约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀。

24.权利要求10所述的药物组合物，其还包括约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀。

25.权利要求11所述的药物组合物，其还包括约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀。

26.权利要求12所述的药物组合物，其还包括约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀。

27.权利要求13所述的药物组合物，其还包括约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀。

28.权利要求14所述的药物组合物，其还包括约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀。

29.权利要求15所述的药物组合物，其还包括约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀。

30.权利要求16所述的药物组合物，其还包括约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀。

31.权利要求17所述的药物组合物，其还包括约10mg、20mg或40mg的辛伐他汀。

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