CN109846907A

CN109846907A - 含有大肠杆菌和粪肠球菌的皮肤病组合物

Info

Publication number: CN109846907A
Application number: CN201811443346.3A
Authority: CN
Inventors: 汉斯-约尔格·米勒; 托马斯·米夏埃尔·施米茨; 库尔特·齐默尔曼; 福尔克尔·鲁施
Original assignee: Symbiogruppe GmbH and Co KG
Current assignee: Symbiogruppe GmbH and Co KG
Priority date: 2017-11-29
Filing date: 2018-11-29
Publication date: 2019-06-07
Also published as: ES2861306T3; JP2019099560A; DK3492089T3; PL3492089T3; KR20190063422A; RU2018142254A; US10933103B2; RU2018142254A3; US20190160116A1; EP3492089B1; EP3492089A1; CA3024590A1

Abstract

本发明公开了一种用于治疗、支持性治疗或预防皮肤病症和疾病的组合物，其包含有效量的灭活大肠杆菌和粪肠球菌的混合物以及药学上可接受的赋形剂和/或载体。

Description

含有大肠杆菌和粪肠球菌的皮肤病组合物

背景技术

皮肤最重要的功能是其屏障功能，即保护生物体免于干燥和外部影响的功能。外皮层(表皮)在这种功能中自然发挥了作用。其是与外部环境之间的界面，需要始终保持柔软顺滑。皮肤保湿在这方面发挥了极其显著的作用。在由脂质和蛋白质结构组成的系统中，皮肤中的水分在表皮中充当柔软剂，并且在皮肤新生过程中持续补充水分。

有很多种皮肤病会导致皮肤干燥，妨碍皮肤提供这种屏障功能。

用于解决该问题的药物和化妆品方法是基于使用通过提供水分的组合物为受损组织补充水分的物质、和/或通过保护层防止水分流失。

因此，本发明的目的为提供一种用于治疗、支持性治疗或预防皮肤病症和疾病的新型组合物。

发明内容

通过权利要求的内容来实现该目的。

因此，本发明提供了一种用于治疗、支持性治疗或预防皮肤病症和疾病的药物组合物，其包含有效量的灭活大肠杆菌(Escherichia coli)与粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)的混合物以及药学上可接受的赋形剂和/或载体。

该组合物可以是可局部施用的形式。

大肠杆菌和粪肠球菌可作为裂解物存在。

大肠杆菌和粪肠球菌的混合物可以以全部组合物的1-95wt％、20-80wt％、40-60wt％或45-55wt％的量存在。

大肠杆菌和粪肠球菌可以以0.5：1.5至1.5：0.5之间、0.75：1.25至1.25：0.75之间、或1.15：0.85至0.85：1.15之间或1.05：0.95至0.95：1.05之间的比例存在于混合物中。

大肠杆菌和粪肠球菌各自可以以每100g总质量为0.5×10⁷至10×10⁷、1.0×10⁷至7×10⁷、或1.5×10⁷至4.5×10⁷的细胞计数存在。

皮肤疾病或皮肤病症可选自皮肤干燥、经表皮水分流失、炎症性皮肤病、神经性皮炎或其组合。

组合物可以为软膏、液体、乳液或溶液的形式。

本发明还公开了一种化妆品组合物，其包含有效量的灭活大肠杆菌和粪肠球菌的混合物。

该化妆品组合物可以以可局部施用的形式存在。

粪肠球菌可以以裂解物的形式存在于化妆品组合物中。

大肠杆菌和粪肠球菌的混合物可以以全部组合物的1-95wt％、20-80wt％、40-60wt％或45-55wt％的量存在于化妆品组合物中。

大肠杆菌和粪肠球菌可以以0.5：1.5至1.5：0.5之间、0.75：1.25至1.25：0.75之间、或1.15：0.85至0.85：1.15之间或1.05：0.95至0.95：1.05之间的比例存在于化妆品组合物中。

大肠杆菌和粪肠球菌可以分别以每100g总质量为0.5×10⁷至10×10⁷、1.0×10⁷至7×10⁷或1.5×10⁷至4.5×10⁷的细胞计数存在于化妆品组合物中。

所适用的化妆品应用可选自皮肤干燥或经表皮水分流失。

该化妆品组合物可以为软膏、液体、乳液或溶液的形式。

本发明还公开了一种制备药物组合物或化妆品组合物的方法，其中将有效量的灭活大肠杆菌和粪肠球菌以及药学上或化妆品上可接受的赋形剂和/或载体混合，以获得上述在皮肤病方面有效的药物或化妆品组合物。

附图说明

图1：用10ng/mL的TNFα(对照不含TNFα)处理以及与测试物质(PSF)或氢化可的松(HC)一起培养72小时后(除非另有说明)，测定HaCaT细胞中IL-8的分泌，MV±SEM，n＝3(分别一式三份)。

图2：用10ng/mL的TNFα(对照不含TNFα)处理以及与测试物质(PSF)或氢化可的松(HC)一起培养72小时后(除非另有说明)，在HaCaT细胞中相对于具有TNFα的对照(72小时)的IL-8的分泌，MV±SEM，n＝3(分别一式三份)。

图3：用10ng/mL的TNFα(对照不含TNFα)处理以及与测试物质(PSF)或氢化可的松(HC)一起培养72小时后(除非另有说明)，测定HaCaT细胞中IL-6的分泌，MV±SEM，n＝3(分别一式三份)。

图4：用10ng/mL的TNFα(对照不含TNFα)处理以及与PSF或氢化可的松(HC)一起培养72小时后(除非另有说明)，在HaCaT细胞中相对于具有TNFα的对照(72小时)的IL-6的分泌，MV±SEM，n＝3(分别一式三份)。

具体实施方式

将灭活细菌的混合物理解为指代细菌混合物，该细菌混合物中细菌不存活即不再进行代谢和/或不能增殖。可以通过放射性或紫外线照射、加热、冷冻、用对细菌包膜进行穿孔的物质如洗涤剂或盐等处理、或通过暴露于例如破坏细胞膜的压降(例如弗氏压碎器)等进行裂解的方式，来获取灭活细菌。

可通过裂解产生裂解物，在裂解中，将包含具有所需细胞计数的细菌的液体培养物均质化10-20、12-18、13-17或14-16分钟并在例如50-150、70-130或80-120rpm下搅拌。然后将均质化的液体培养物进行常规的高压釜处理，例如，在至少121℃(例如，121℃-130℃、121℃-125℃或121℃-123℃)下加热即灭菌至少20分钟(例如，20-40分钟、20-30或20-25分钟)。然后将获得的裂解物冷却(例如冷却至18-20℃)。

有效量认为是足以获得所需或治疗效果的成分的量。

当数字前面有术语“约”时，这指的是所讨论数字的±20％，优选±10％，或特别优选±5％的数值范围。

各节标题用于简化对本公开的理解，并没有将一个公开与另一个公开分开。特别是，可以将各节标题之后的各个公开与各节标题之后的一个或多个其他公开相结合。

组合物

公开了一种组合物，其包含有效量的灭活大肠杆菌和粪肠球菌的混合物。组合物可以为药物或化妆品组合物。

优选地，大肠杆菌为大肠杆菌DSM 17252。

优选地，粪肠球菌为粪肠球菌DSM 16440。

优选地，混合物为大肠杆菌DSM 17252和粪肠球菌DSM 16440的混合物。

组合物可以为裂解物的形式。优选地，裂解物包含细菌的所有可溶性和不溶性组分，因此为水性悬浮液的形式。例如可如上所述获得裂解物。

大肠杆菌和粪肠球菌的混合物可以以全部组合物的1-95wt％、10-90wt％、20-80wt％、30-70wt％、40-60wt％、45-55wt％、50-54wt％或52-53wt％的量存在。

大肠杆菌和粪肠球菌可以以0.5：1.5至1.5：0.5之间、0.75：1.25至1.25：

0.75之间、或1.15：0.85至0.85：1.15之间或1.05：0.95至0.95：1.05之间的比例存在于混合物中。

大肠杆菌和粪肠球菌可以分别以每100g总质量为0.5×10⁷至10×10⁷、1.0×10⁷至7×10⁷或1.5×10⁷至4.5×10⁷的细胞计数存在。术语细胞计数在无细胞裂解物的情况下是指用于产生裂解物的细胞的数量。

药物或化妆品组合物包含药学上可接受的赋形剂和/或载体。

因此，组合物可任选地包含以下物质(根据“国际化妆品成分命名法”(INCI)命名，其中，如果常用的话还给出了常规的德国产品名称)：

油栗(Simmondsia chinensis)籽油，特别是0.5至10wt％或约3.00wt％的油栗籽油(天然的荷荷巴蜡)，

辛酸/癸酸甘油三酯，特别是1-20wt％或约16.80wt％的辛酸/癸酸甘油三酯(中链甘油三酯)，

白蜡，特别是0.1至3.0wt％或约0.50wt％的白蜡(蜂蜡)，

氢化蓖麻油，特别是0.1至3.0wt％或约0.80wt％的氢化蓖麻油，

鲸蜡基PEG/PPG-10/1聚二甲基硅氧烷，特别是1.0至4.0wt％或约2.0wt％的鲸蜡基PEG/PPG-10/1聚二甲基硅氧烷(Abil EM 180)，

鲸蜡醇棕榈酸酯，特别是0.1至3.0wt％或约0.3wt％的鲸蜡醇棕榈酸酯，

甘油二山嵛酸酯、三山嵛酸甘油酯、甘油山嵛酸酯、角鲨烷、神经酰胺3、神经酰胺3B、神经酰胺6、胆固醇的混合物，特别是0.1至10.0wt％或约0.5wt％的甘油二山嵛酸酯、三山嵛酸甘油酯、甘油山嵛酸酯、角鲨烷、神经酰胺3、神经酰胺3B、神经酰胺6、胆固醇、植物鞘氨醇的混合物(其中该混合物包含约56.0-75.0wt％的角鲨烷，约5.0-15.0wt％的重量比约为1：1：1的甘油二山嵛酸酯、三山嵛酸甘油酯、甘油山嵛酸酯的混合物，约为1.0-5.0wt％的重量比约为1：1的神经酰胺3和神经酰胺3B的混合物，约0.1-1.0wt％的神经酰胺6，以及约5.0-15.0wt％的重量比约为1：1的胆固醇和植物鞘氨醇的混合物，其中所有含量加起来为100wt％)，

月见草(Oenothera biennis)油，特别是0.5至10wt％或约2.00wt％的月见草油(包括可选的足以防止氧化的量的生育酚、用维生素E稳定化的晚樱草油)，

角鲨烷，特别是1.0至20wt％或约6.0wt％的角鲨烷(除了组合物中含有的其它量的角鲨烷外，还含有这个量的角鲨烷)，

甜扁桃(Prunus amygdalus dulcis)油，特别是0.5至20wt％或约2.50wt％的甜扁桃油(杏仁油)，

鳄梨(Persea gratissima)油，特别是0.5至10wt％或约2.00wt％的鳄梨油(精制牛油果油)，

生育酚乙酸酯，特别是0.1至5wt％或约0.5wt％的生育酚乙酸酯(维生素E乙酸酯)，

牛油果树(Butyrospermum parkii)果脂，特别是0.1至5wt％或约0.5wt％的牛油果树果脂(乳木果油)，

戊二醇，特别是1.0至5.0wt％或约4.0wt％的戊二醇，

甘油，特别是1.0至5.0wt％或约4.0wt％的甘油(甘油99％)，

玻尿酸钠，特别是0.01至0.5wt％或约0.10wt％的玻尿酸钠(透明质酸钠)，

泛醇，特别是0.1至5.0wt％或约1.0wt％的泛醇(75％右泛醇)，

甜菜碱，0.1至5.0wt％或约0.3wt％的甜菜碱，

硫酸镁，特别是0.1-3.0wt％或约0.8wt％的硫酸镁(硫酸镁七水合物)，

乳酸钠，特别是0.05至1.00wt％或约0.10wt％的50％的乳酸钠(乳酸钠50％)，

葡萄糖酸钠，特别是0.05至3.00wt％或约0.10wt％的葡萄糖酸钠，和/或

乳酸，特别是0.01至1.00wt％的乳酸(90％)(乳酸90％)。

优选地，组合物包含所有上述赋形剂。还公开了上述赋形剂中的1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种、13种、14种、15种、16种、17种、18种、19种、20种、21种以及22种的所有组合。

优选地，组合物包含少于10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、0.1、0.001或0.0001wt％的不饱和脂肪酸或0wt％的游离和/或酯化形式的不饱和脂肪酸。不饱和脂肪酸为含有至少一个双键的脂肪酸，其中本公开中的神经酰胺不包括在不饱和脂肪酸中，因此可以包含在组合物中。

组合物的pH在4至6之间或4.5至5之间。优选通过加入药学上可接受的酸，优选有机酸，来调节pH。特别优选地，用于调节pH的酸为乳酸。

皮肤病症和疾病

药物组合物用于治疗、支持性治疗或预防皮肤病症和疾病。优选地，皮肤疾病和皮肤病症选自皮肤干燥、经表皮水分流失、炎症性皮肤病和神经性皮炎。

特别地，药物或化妆品组合物适合用于治疗以白细胞介素8的(可能提升的)释放为特征的皮肤疾病或皮肤病症。白细胞介素8的提升释放为比具有健康皮肤的受试者的白细胞介素8的分泌高至少5％、10％、20％、30％、40％、50％或100％的白细胞介素8的释放。根据本发明的组合物可以将白细胞介素8的释放减少至少10％、20％、30％、40％、50％或100％。白细胞介素8在炎症组织中释放，因此也在上述皮肤疾病和皮肤病症中释放。因此，减少白细胞介素8的释放是受影响组织中的炎症减轻的特征。

“皮肤干燥”的皮肤病症和皮肤疾病的特征在于脂肪和/或水分含量过低，并表现为暗淡、苍白、弹性低、感觉紧绷和瘙痒。

经表皮水分流失(TEWL)是指水分从皮肤中蒸发，不包括通过排汗引起的水分流失，因为水分可以通过皮肤以排汗和被动扩散两种方式进行释放。通过皮肤被动扩散的过程被称为经表皮水分流失。TEWL强烈依赖于角质层的完整性。因此，TEWL是可用于评估皮肤状况的值。根据本发明的组合物适合用于降低TEWL，特别是将TEWL降低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％或50％。

用于此目的已知的任何方法都可用于确定TEWL，例如，使用不通风室、通风室、蒸汽压梯度(例如适用特瓦测试仪(Tewameter))或角质测试仪(Corneometer)等。

在使用角质测试仪测量的原理中，进行电容测量以确定表皮(角质层)的“外层”的皮肤含水量。该原理是以水和其他物质的不同介电常数为基础的。相应配置的测量用电容器通过电容量的变化对放置在其测量容积中的样本作出反应，这些变化完全由设备自动检测和评估。将覆盖有特殊玻璃的主动式探针按压在待测皮肤部位上，1秒钟后，显示器显示角质测试仪的测量值，即皮肤表面的含水程度。一种特殊的设计确保了探针的主动端面在每种情况下都以恒定的力按压在皮肤部位，包括所有难以接近的皮肤部位。

角质测试仪由杆壳体和附带的测量传感器组成。该传感器通过具有特殊连接器的螺旋电缆连接到杆壳体。测量值作为具有最多三位数的数字而显示在杆壳体的显示区域上。显示区域还执行附加信息功能。

测量传感器为方形。测量传感器的主动端面覆盖有特殊玻璃，可轴向移动，且其位移至少为3毫米。测量原理中要求端面在恒定压力下平放。为了尽可能可重复地确保这一点，测量头的端面配置得极其小(7x7mm)。内部可移动部，即主动端面，在每种情况下都通过弹簧以3.5N的力按压在皮肤上。

角质测试仪可以是全自动的。为了进行测量，将测量头按压在待测皮肤部位。一秒钟后，显示测量值。

角质测试仪的显示值表示皮肤表面的含水程度，例如，在用化妆品或药物产品治疗皮肤之前和之后的皮肤表面的含水程度，即，该装置显示皮肤表面的含水量的状态或变化。

可以在施用组合物后的恒定的时间窗内进行测量。

炎症性皮肤病是由过敏原、荨麻疹、肥大细胞增多症、湿疹、皮炎、药疹、地衣、结节性红斑、幼年黄色肉芽肿、环状肉芽肿、坏疽性脓皮病和/或类脂质渐进性坏死引起的皮肤病。特别地，湿疹包括特应性湿疹，也称为神经性皮炎，特应性皮炎和内源性湿疹。

施用形式

组合物可以是软膏、液体、乳液或溶液的形式。

组合物可以进行局部施用，特别是通过将组合物外用于皮肤而进行局部施用，其中皮肤不包括粘膜，特别是鼻粘膜。

可以在1、2、3、4、5或7天的时间内进行施用。可以在1、2、3、4、5或7周的时间内进行施用，优选在4周的时间内进行施用。可以每天施用1、2、3、4或5次，优选每天施用2次。在每天施用多次的情况下，优选以大致相等的间隔进行施用。

特别优选地，在4周的时间内进行组合物的施用，每天施用两次(优选以12小时的间隔进行施用)。

制备方法

本发明还公开了制备药物组合物或化妆品组合物的方法，其中将有效量的灭活大肠杆菌和粪肠球菌与药学上或化妆品上可接受的赋形剂和/或载体混合，以获得上述在皮肤病方面有效的药物或化妆品组合物。

优选地，获得的组合物为乳液。

可通过已知方法制备乳液。例如，可通过以下方法制备乳液，其中使用的量对应于上述针对包含灭活大肠杆菌和粪肠球菌的混合物以及赋形剂而说明的量：

将玻尿酸钠分散在戊二醇和甘油中，从而产生相C；

将包含灭活大肠杆菌和粪肠球菌的混合物与泛醇、甜菜碱、硫酸镁、乳酸钠、葡萄糖酸钠和乳酸一起混合作为水溶液，从而得到相D；然后将相D加入到相C中，产生相E；

搅拌相E直至玻尿酸钠(澄清地)溶解；

用有机酸，例如乳酸，调节相E至pH值为4.0至5.5或4.5至5.0；

将相E加热到约75℃；

通过混合各组分来制备相A，该组分为油栗籽油、辛酸/癸酸甘油三酯、白蜡、氢化蓖麻油、鲸蜡基PEG/PPG-10/1聚二甲基硅氧烷、鲸蜡醇棕榈酸酯、甘油二山嵛酸酯、三山嵛酸甘油酯、甘油山嵛酸酯、角鲨烷、神经酰胺3、神经酰胺3B、神经酰胺6、胆固醇、以及植物鞘氨醇；将相A加热到约75℃；

通过混合各组分来制备相B，该组分为月见草油、角鲨烷、甜扁桃油、鳄梨油、生育酚乙酸酯以及牛油果树果脂；将相B加热到约50℃；

将加热的相E加入到相A中并混合以产生相AE；将加热的相B加入到AE中并均化，从而产生油包水乳液；

将得到的乳液在搅拌下冷却至约30℃(最高30℃)并保持在这个温度；

将乳液在约30℃(最高30℃)下均化约5分钟，从而产生作为乳液的根据本发明的组合物。

混合步骤可在约75rpm的搅拌器中进行。均化步骤在约19,000rpm的均化器中进行。

化妆方法

本发明还公开了一种用上述根据本发明的组合物增加皮肤弹性和/或含水量的化妆方法。这种方法适用于皮肤无任何病理变化的人。

在化妆方法中，根据本发明的组合物可以进行局部施用，特别是通过将组合物外用于皮肤而进行局部施用，其中皮肤不包括粘膜，特别是鼻粘膜。

实施例

实施例1：包含灭活大肠杆菌和粪肠球菌的混合物对HaCaT细胞中白细胞介素分泌的影响

为了证明根据本发明的组合物在治疗炎症性皮肤病中的用途，对细胞因子分泌的减少进行了测试。

例如，测定白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素8(IL-8)的分泌。通过用TNFα(10ng/mL)刺激，可以在各种细胞类型中形成白细胞介素。施用抗炎剂或免疫调节剂会影响白细胞介素的产生。对HaCaT细胞(成人低钙高温角质细胞)进行免疫调节特性测试。从人类非恶性角质细胞(＝正常皮肤)获得(自发永生化)的细胞系HaCaT来源于男性患者的健康皮肤，并且本质上具有表皮基底角质细胞的特性。

物质的抗炎(消炎)或免疫调节特性可以针对细胞系进行体外研究。在该测试设计中，通过外部刺激在细胞系中诱导炎症(白细胞介素产量的上调)。

测试物质1具有以下组成：

灭活形式的作为天然肠道菌的粪肠球菌和大肠杆菌。1ml悬浮液含有：由1.5-4.5×10⁷个大肠杆菌细胞(DSM 17252)和1.5-4.5×10⁷个粪肠球菌细胞(DSM 16440)产生的细菌裂解物。

将测试物质1以两种稀释度施用于受激细胞，并研究白细胞介素产量(IL-6和IL-8)的下调或调节。通过ELISA(酶联免疫吸附试验)进行评估。还将抗炎剂氢化可的松作为比较物质进行测试。将HaCaT细胞接种到24孔细胞培养板上，细胞密度为每孔20,000个细胞；24小时后，用TNF-α(10ng/mL)刺激HaCaT细胞(诱导白细胞介素产生，例如IL-8)，并加入待测物质。经过72小时的培养后，通过ELISA定量评估两种炎症标记物(IL-8和IL-6)。

为了检测抗炎活性，一式三份进行三次独立测试。

72小时后与对照相比，用TNFα刺激HaCaT细胞使白细胞介素8的分泌增加了2.5倍(图1+2)。仅与测试物质(1:10，未使用TNFα的对照)一起培养的HaCaT细胞的IL-8分泌在72小时时与对照相比平均降低约10％。在同时添加TNFα和测试物质(1:10)时，72小时后与使用了TNFα的对照相比，IL-8分泌减少了约27％(1:10)。

在使用测试物质(1：100)时，72小时后与使用了TNFα的对照相比，平均来说，不可能检测到IL-8分泌的任何变化。

与HaCaT细胞中的白细胞介素8相比，用TNFα刺激后白细胞介素6的分泌显著降低了(图3+4)。在不添加TNFα(对照)的24小时后，IL-6分泌低于检测限。在同时添加TNFα和测试物质(1:10)时，72小时后与使用了TNFα的对照相比，看到IL-6分泌平均略微增加了24％。

72小时后，在1：100稀释度的测试物质中IL-6分泌与处理后的对照相当。与IL-8分泌相反，72小时后，与处理后的对照相比，氢化可的松(10^-7M)诱导IL-6分泌显著减少(40％)。

针对测试物质对炎症过程的影响的测试显示IL-8和IL-6的释放均依赖浓度调节。通过1:10稀释度的测试物质，72小时后与使用了TNFα的对照相比，IL-8分泌减少了27％，但IL-6分泌增加了24％。通过1：100稀释度的测试物质，72小时后IL-8分泌和IL-6分泌均在使用了TNFα的对照的范围内。

加入TNFα可引发炎症。TNFα是一种多功能细胞因子，其除了调节炎症外，还调节免疫应答和细胞凋亡。TNFα通过引发进一步细胞分裂的发生来激活免疫应答，其被认为是炎症标记物。IL-6在TNFα刺激后在体内(体内)形成，并影响各种炎症反应。例如，IL-6刺激C反应蛋白的形成，其通常用作急性炎症参数。IL-8是一种趋化细胞因子，由各种组织和血液细胞来表达。作为炎症介质，IL-8动员并激活中性粒细胞并支持其脱粒。T淋巴细胞、中性粒细胞和表皮细胞之间的相互作用可能在炎症性皮肤病如牛皮癣的病理生理学中起决定性作用。

对用TNFα刺激后的HaCaT细胞进行的试验表明测试物质1在体外对白细胞介素的分泌具有浓度依赖性的影响。

实施例2：包含灭活大肠杆菌和粪肠球菌的混合物对人皮肤的经表皮水分流失(TEWL)的影响

皮肤的经表皮水分流失是评估皮肤保护功能的最重要参数之一。该过程涉及水分从身体内部蒸发而不包括通过排汗损失的水分。维持或改善皮肤屏障功能的制剂会降低经表皮水分流失。水分从皮肤蒸发得较少对应于保持皮肤含水量的有利作用。

使用蒸发计进行皮肤的经表皮水分流失(TEWL)的定量测定。蒸发计的测量探针由顶部开口的、具有两个温度和湿度传感器的管组成，其中一个传感器附接在另一个上面，其之间的距离很小。两个湿度传感器直接在皮肤上方的扩散区域中确定蒸汽压梯度。在计算机支持下，根据菲克扩散定律测量以g/hm²计的水分释放：

其中，

dm/dt＝扩散流量，

D＝扩散系数，

A＝面积，

dc/dx＝密度梯度。

使用(CK电子公司(Courage+Khazaka Electronic GmbH))进行皮肤的经表皮水分流失的测试。

在不对待测皮肤区域施加按压力的情况下放置测量探针，使得特氟隆管的边缘与皮肤齐平。每个测试区域总共进行20个测量周期的测量系列，由设备记录和进行平均计算。测试区域位于面部，测量区域的大小约为直径3厘米。对这些区域的3个不同位置进行测量，并计算测量值的平均值。将获得的测量值显示在表中。

受试者集体由年龄在23岁至66岁之间的20名受试者组成。指示受试者在早晨和晚上定期使用测试物质2持续四周。

受试者的测试区域显示出皮肤极其干燥或皮肤趋于神经性皮炎(无需医学治疗)。

测试物质2具有以下组成：

3.00wt％的油栗籽油，

16.80wt％的辛酸/癸酸甘油三酯，

0.50wt％的白蜡，

0.80wt％的氢化蓖麻油，

鲸蜡基PEG/PPG-10/1聚二甲基硅氧烷，

0.3wt％的鲸蜡醇棕榈酸酯，

0.5wt％的甘油二山嵛酸酯、三山嵛酸甘油酯、甘油山嵛酸酯、角鲨烷、神经酰胺3、神经酰胺3B、神经酰胺6、胆固醇、植物鞘氨醇的混合物(其中各成分分别按等份存在)，

2.00wt％的月见草油(用生育酚稳定化)，

6.0wt％的角鲨烷，

2.50wt％的甜扁桃油,

2.00wt％的鳄梨油，

0.5wt％的生育酚乙酸酯，

0.5wt％的牛油果树果脂，

4.0wt％的戊二醇，

4.0wt％甘油(99％)，

0.10wt％的玻尿酸钠，

52.19wt％的测试物质1(参见实施例1)

1.0wt％的泛醇，

0.3wt％的甜菜碱，

0.8wt％的硫酸镁，

0.10wt％的乳酸钠，

0.10wt％的葡萄糖酸钠，或

乳酸，将pH调节到4.5至5的范围。

下表分别给出了在定期施用之前和4周之后测试区域中TEWL测量的平均值(以g/hm²计)。

当皮肤的经表皮水分流失从第一次测量减少到第二次测量时，获得负值。

表1：20名受试者在制剂施用之前和4周之后的测量结果(TEWL值)以及之前/之后的差值计算。身体的右半身。

	之前	4周之后	差值	百分数变化
					平均值	17.6	12.9	-4.7	-26.70
标准偏差	27.7	22.1	4.9	30.25
					方差	4.8	4.5	4.0	24.21

对于20名受试者的个体结果，计算由于施用制剂而导致的TEWL值(％)平均变化量的平均值。确定的平均TEWL值的差值为-4.7。该值给出了制剂施用后水分释放的平均减少量。平均TEWL起始值为17.6，这相当于皮肤的经表皮水分流失减少约-26.70％。

表2：20名受试者在施用制剂之前和4周之后的测量结果(TEWL值)以及之前/之后的差值计算。身体的左半身。

	之前	4周之后	差值	百分数变化
					平均值	16.9	13.9	-3.0	-17.75
标准偏差	23.0	23.7	6.2	106.90
					方差	3.8	4.4	3.5	33.25

对于20名受试者的个体结果，计算由于施用制剂而导致的TEWL值(％)平均变化量的平均值。确定的平均TEWL值的差值为-3.0。该值给出了制剂施用后水分释放的平均减少量。平均TEWL起始值为16.9，这相当于皮肤的经表皮水分流失减少约-17.75％。

表3：20名受试者在施用之前和4周之后在对照区域中(即，未施用测试物质2)的测量结果(TEWL值)以及之前/之后的差值计算。

	之前	4周之后	差值	百分数变化
					平均值	10.3	9.8	-0.5	-4.85
标准偏差	5.2	3.7	2.1	13.82
					方差	27.0	13.4	4.2	190.92

对于20名受试者的个体结果，计算未治疗对照区域中TEWL值(％)平均变化量的平均值。确定的平均TEWL值的差值为-0.5。该值给出了在未施用制剂的情况下水分释放的平均减少量。平均TEWL起始值为10.3，这相当于皮肤的经表皮水分流失减少约-4.85％。

表4：观察期期间平均变化量的总结：

通过这种方式，可以确定，测试物质2使得皮肤明显干燥的人的经表皮水分流失基本减少了。

实施例3：包含灭活大肠杆菌和粪肠球菌的混合物对皮肤含水量的影响

在使用产品后的在恒定的时间窗内进行测量。

指示受试者在测试持续的过程中在指定的测试期间仅使用测试产品。

进行如下测量：

1.使受试者在22℃的温度和60％的相对含水量下适应45分钟。

2.在三个不同部位的相应测试区域中确定皮肤测量值。计算所得值的平均值。

3.在该测试中，未治疗的皮肤区域用作对照测量区域。

4.在实施例2的测试组合物2使用开始前和施用4周后进行测量。在最后一次施用先前使用的产品或测试产品后10-12小时，进行相应测量。

确定每个测试区域和时间点的相应皮肤含水量值。将各个值显示在下表中。

对由序列号、年龄和性别指定的受试者进行平均计算，确定标准偏差。

(文献：L.Sachs，“Statistische Methoden”[统计方法]，第6版，柏林海德堡施普林格出版社，1988)。

δ＝皮肤含水量值的差值

δ(％)＝基于起始值的由于使用而发生的含水量平均百分比变化

相应的表格中示出了确定的各个值。

在测试区域中，受试者显示出皮肤非常干燥或皮肤倾向于神经性皮炎(无需医学治疗)。

表5：治疗区域中皮肤含水量的测量，身体右半身。

	之前	4周之后	差值	百分数变化
					平均值	18.3	27.7	9.4	51.37
标准偏差	4.0	7.8	6.4	40.12
					方差	15.7	60.8	41.4	1609.75

表6：治疗区域中皮肤含水量的测量，身体左半身。

	之前	4周之后	差值	百分数变化
					平均值	17.7	27.2	9.5	53.67
标准偏差	4.1	6.3	5.6	35.40
					方差	16.7	40.1	31.7	1252.89

表7：未治疗对照区域中皮肤含水量的测量。

	之前	4周之后	差值	百分数变化
					平均值	30.6	32.2	1.6	5.23
标准偏差	5.0	4.6	2.4	8.85
					方差	25.4	21.5	5.9	78.29

表8：皮肤含水量测量的评估汇总。

在4周的施用测试中，根据皮肤病学/临床标准，总共有20名受试者对测试物质2有耐药性而没有出现问题。在测试区域没有发生不希望的或甚至皮肤发生病理性变化的情况。

使用角质测试仪探针CM 825(由CK公司制造)在20名受试者中进行角质测量以检测测试物质2对皮肤含水量的作用。

在定期施用制剂之前和4周之后的测试区域以及未治疗的对照区域中，测定皮肤含水量值的变化。在治疗区域中，示出了皮肤含水量提高了51.37％(身体的右半身)和53.67％(身体的左半身)。未治疗的皮肤区域中的平均皮肤含水量的变化为5.23％。

因此，测试物质2实现了皮肤含水量的显著提高。

Claims

1.用于治疗、支持性治疗或预防皮肤病症和疾病的药物组合物，包含有效量的灭活大肠杆菌和粪肠球菌的混合物以及药学上可接受的赋形剂和/或载体。

2.根据权利要求1所述的应用药物组合物，其中所述组合物为可局部施用的形式。

3.根据权利要求1或2所述的应用药物组合物，其中大肠杆菌和粪肠球菌作为裂解物存在。

4.根据前述权利要求中的一项或多项所述的应用药物组合物，其中大肠杆菌和粪肠球菌的混合物以全部组合物的1-95wt％、20-80wt％、40-60wt％或45-55wt％的量存在。

5.根据前述权利要求中的一项或多项所述的应用药物组合物，其中大肠杆菌和粪肠球菌以0.5：1.5至1.5：0.5之间、0.75：1.25至1.25：0.75之间、或1.15：0.85至0.85：1.15之间或1.05：0.95至0.95：1.05之间的比例存在于混合物中，任选地，其中大肠杆菌和粪肠球菌分别以每100g总质量为0.5×10⁷至10×10⁷、1.0×10⁷至7×10⁷、或1.5×10⁷至4.5×10⁷的细胞计数存在。

6.根据前述权利要求中的一项或多项所述的应用药物组合物，其中所述皮肤疾病或皮肤病症选自皮肤干燥、经表皮水分流失、炎症性皮肤病以及神经性皮炎。

7.根据前述权利要求中的一项或多项所述的应用药物组合物，其中组合物为软膏、液体、乳液或溶液的形式。

8.一种化妆品组合物，包含有效量的灭活大肠杆菌和粪肠球菌的混合物。

9.根据权利要求8所述的应用化妆品组合物，其中组合物为可局部施用的形式。

10.根据权利要求8或9所述的应用化妆品组合物，其中大肠杆菌和粪肠球菌为裂解物形式。

11.根据权利要求8-10中的一项或多项所述的应用化妆品组合物，其中大肠杆菌和粪肠球菌的混合物以全部组合物的1-95wt％、20-80wt％、40-60wt％或45-55wt％的量存在。

12.根据权利要求8-11中的一项或多项所述的应用化妆品组合物，其中大肠杆菌和粪肠球菌以0.5：1.5至1.5：0.5之间、0.75：1.25至1.25：0.75之间、或1.15：0.85至0.85：1.15之间或1.05：0.95至0.95：1.05之间的比例存在，任选地，其中大肠杆菌和粪肠球菌分别以每100g总质量为0.5×10⁷至10×10⁷、1.0×10⁷至7×10⁷或1.5×10⁷至4.5×10⁷的细胞计数存在。

13.根据权利要求8-12中的一项或多项所述的应用化妆品组合物，其中化妆品施用的适应症选自皮肤干燥和经表皮水分流失。

14.根据权利要求8-13中的一项或多项所述的化妆品组合物，其中组合物为软膏、液体、乳液或溶液的形式。

15.制备根据权利要求1-7中的任一项所述的药物组合物或根据权利要求8-14中的任一项所述的应用化妆品组合物的方法，其中，将有效量的灭活大肠杆菌和粪肠球菌与药学上或化妆品上可接受的赋形剂和/或载体混合，以获得在皮肤病方面有效的药物组合物或化妆品组合物。