CN109705200A

CN109705200A - 灰斑病抗性相关蛋白ZmWAK-RLK及其编码基因和应用

Info

Publication number: CN109705200A
Application number: CN201910140479.1A
Authority: CN
Inventors: 徐明良; 钟涛; 番兴明; 朱芒; 张艳; 徐凌; 刘丽
Original assignee: China Agricultural University
Current assignee: China Agricultural University
Priority date: 2019-02-26
Filing date: 2019-02-26
Publication date: 2019-05-03
Also published as: EP3932939A1; WO2020173403A1; CN113490683A; US20220177907A1; MX2021010318A; US12077769B2; BR112021016750A2; EP3932939A4; CN113490683B; US20250059555A1

Abstract

本发明公开了一种灰斑病抗性相关蛋白ZmWAK‑RLK及其编码基因和应用。本发明提供的蛋白质，获自玉米自交系Y32，命名为ZmWAK‑RLK蛋白，为序列表中序列1所示的蛋白质。编码ZmWAK‑RLK蛋白的核酸分子也属于本发明的保护范围。本发明还保护一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：在出发植物中导入所述核酸分子，得到灰斑病抗病性增强的转基因植物。本发明还保护一种植物育种方法，包括如下步骤：增加目的植物中ZmWAK‑RLK蛋白的含量和/或活性，从而提高目的植物的灰斑病抗病性。本发明对于玉米的抗灰斑病育种具有重大的应用价值。

Description

灰斑病抗性相关蛋白ZmWAK-RLK及其编码基因和应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种灰斑病抗性相关蛋白ZmWAK-RLK及其编码基因和应用。

背景技术

玉米灰斑病(GLS)是一种玉米叶部病害，影响玉米的产量和品质。20世纪20年代，灰斑病首次在美国伊利诺伊州亚历山大县发现，随后逐渐发展成为一种严重的全球性叶部病害。灰斑病广泛分布在美国、亚洲、欧洲以及非洲的玉米主产区。在发病情况下，灰斑病能够导致20-60％的减产，在发病严重的情况下可达100％，对玉米生产造成严重的经济损失。

玉米灰斑病是一种真菌性病害，普遍认为其致病菌主要有玉蜀黍尾孢菌(Czm，Cercospora zeae-maydis)和玉米尾孢菌(Cz，Cercospora zeina)两种。2013年Liu等人广泛采集了我国玉米灰斑病发生区的病样，利用单孢分离方法获得大量菌株，采用病菌形态学、培养特征生长状态和分子生物学的手段，准确的鉴定了我国不同地区的玉米灰斑病致病种，引起我国北方地区玉米灰斑病的是玉蜀黍尾孢菌，而引起西南地区玉米灰斑病的是玉米尾孢菌。

据报道，玉米对灰斑病的抗性属于数量遗传，由多基因控制，以加性效应为主。那么如果克隆到灰斑病抗病基因，利用分子标记辅助选育技术导入现有的自交系，将能够提高推广品种的灰斑病抗性。

发明内容

本发明的目的是提供一种灰斑病抗性相关蛋白ZmWAK-RLK及其编码基因和应用。

本发明提供的蛋白质，获自玉米自交系Y32，命名为ZmWAK-RLK蛋白，为如下(a1)或(a2)或(a3)或(a4)：

(a1)序列表中序列1所示的蛋白质；

(a2)在(a1)所述蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白；

(a3)将(a1)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与植物灰斑病抗病性相关的蛋白质；

(a4)来源于玉米且与(a1)具有98％以上同一性且与植物灰斑病抗病性相关的蛋白质。

标签具体如表1所示。

表1标签的序列

蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。

编码ZmWAK-RLK蛋白的核酸分子也属于本发明的保护范围。

所述核酸分子为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4)或(b5)：

(b1)编码区如序列表中序列2第87-2084位核苷酸所示的DNA分子；

(b2)序列表中序列2所示的DNA分子；

(b3)序列表中序列3所示的DNA分子；

(b4)来源于玉米且与(b1)或(b2)或(b3)具有95％以上同一性且编码所述蛋白质的DNA分子；

(b5)在严格条件下与(b1)或(b2)或(b3)限定的核苷酸序列杂交且编码所述蛋白质的DNA分子。

所述严格条件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次5min，又于0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次15min。

含有所述核酸分子的DNA分子、表达盒、重组载体或重组微生物均属于本发明的保护范围。

含有所述核酸分子的DNA分子具体可如序列表的序列4所示。

可用现有的表达载体构建含有所述核酸分子的重组表达载体。使用所述核酸分子构建重组表达载体时，可在其转录起始核苷酸前加上任何一种增强型、组成型、组织特异型或诱导型启动子，它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用；此外，使用所述核酸分子构建重组表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。为了便于对转基因植物或转基因微生物进行鉴定及筛选，可对所用表达载体进行加工，如加入在植物或微生物中表达可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因、具有抗性的抗生素标记物或是抗化学试剂标记基因等。从转基因安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以表型筛选转化植物或微生物。

重组表达载体具体可为：将序列表的序列4所示双链DNA分子插入pCAMBIA3301载体的多克隆位点(例如BamHI位点)得到的重组质粒。

重组表达载体具体可为：将序列表的序列2第87-2084位核苷酸所示的双链DNA分子插入pBCXUN载体的多克隆位点(例如XcmI酶切位点)得到的重组质粒。

本发明还保护ZmWAK-RLK蛋白的应用，为如下(c1)或(c2)或(c3)或(c4)：

(c1)调控植物的灰斑病抗病性；

(c2)提高植物的灰斑病抗病性；

(c3)调控植物对玉米尾孢菌引发的病害的抗病性；

(c4)提高植物对玉米尾孢菌引发的病害的抗病性。

本发明还保护所述核酸分子或所述含有所述核酸分子的DNA分子的应用，为如下(d1)或(d2)或(d3)或(d4)：

(d1)培育灰斑病抗病性改变的转基因植物；

(d2)培育灰斑病抗病性增强的转基因植物；

(d3)培育对玉米尾孢菌引发的病害的抗病性改变的转基因植物；

(d4)培育对玉米尾孢菌引发的病害的抗病性增强的转基因植物。

本发明还保护一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：在出发植物中导入所述核酸分子或所述含有所述核酸分子的DNA分子，得到灰斑病抗病性增强的转基因植物。所述核酸分子具体可通过以上任一所述重组表达载体导入所述出发植物。携带有所述核酸分子的重组表达载体可通过Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化到出发植物中。将所述转基因植物与现有玉米品种进行杂交(包括单次杂交和多次杂交，例如连续杂交三次)，得到的转基因后代植株同样为抗病性增强的转基因植物。所述现有玉米品种具体可为玉米自交系Q11。

本发明还保护一种植物育种方法，包括如下步骤：增加目的植物中ZmWAK-RLK蛋白的含量和/或活性，从而提高目的植物的灰斑病抗病性。

本发明还保护一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：在出发植物中导入所述核酸分子或所述含有所述核酸分子的DNA分子，得到抗病性增强的转基因植物；所述抗病性为对玉米尾孢菌引发的病害的抗病性。所述核酸分子具体可通过以上任一所述重组表达载体导入所述出发植物。携带有所述核酸分子的重组表达载体可通过Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化到出发植物中。将所述转基因植物与现有玉米品种进行杂交(包括单次杂交和多次杂交，例如连续杂交三次)，得到的转基因后代植株同样为抗病性增强的转基因植物。所述现有玉米品种具体可为玉米自交系Q11。

本发明还保护一种植物育种方法，包括如下步骤：增加目的植物中ZmWAK-RLK蛋白的含量和/或活性，从而提高目的植物的抗病性；所述抗病性为对玉米尾孢菌引发的病害的抗病性。

以上任一所述植物为双子叶植物或单子叶植物。所述单子叶植物可为禾本科植物。所述禾本科植物可为玉蜀黍属植物。所述玉蜀黍属植物具体可为玉米，例如玉米自交系B73-329。

以上任一所述灰斑病具体可为玉米尾孢菌引起的灰斑病。

本发明的发明人提供了ZmWAK-RLK蛋白及其编码基因，通过过表达转基因实验证明了ZMWAK-RLK基因能够提高玉米对灰斑病的抗性，显著的降低玉米灰斑病的病情指数。本发明对于玉米的抗灰斑病育种具有重大的应用价值。

附图说明

图1为实施例2中部分植株的PCR鉴定结果。

图2为各个分级的代表性叶片的照片。

图3为实施例2中回交分离后代的抗病性鉴定结果。

图4为实施例2中纯合的转基因株系的抗病性鉴定结果。

图5为实施例3中部分植株的PCR鉴定结果。

图6为实施例3中回交分离后代的抗病性鉴定结果。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

玉米自交系Y32，为高抗玉米灰斑病的玉米自交系。玉米自交系Y32(line Y32)，记载于如下文献：QTL mapping of resistance to gray leaf spot in maize，Yan Zhangect.,Theor Appl Genet DOI 10.1007/s00122-012-1954-z.。

玉米自交系Q11，为高感灰斑病的玉米自交系。玉米自交系Q11(line Q11)，记载于如下文献：QTL mapping of resistance to gray leaf spot in maize，Yan Zhang ect.,Theor Appl Genet DOI 10.1007/s00122-012-1954-z.。

玉米自交系B73-329(B73-329inbred lines)，记载于如下文献：Aretrotransposon in an HKT1family sodium transporter causes variation of leafNa⁺exclusion and salt tolerance in maize，Ming Zhang ect.,New Phytologist(2018)217:1161–1176doi:10.1111/nph.14882。

玉米尾孢菌(Cercospora zeina)，记载于如下文献：First Report of Gray LeafSpot of Maize Caused by Cercospora zeina in China，Plant Disease/Vol.97No.12。

pCAMBIA3301载体(bivalent expression vector pCAMBIA3301)，记载于如下文献：Pyramiding of nine transgenes in maize generates high-level resistanceagainst necrotrophic maize pathogens。

pBCXUN载体(pBCXUN vector)，记载于如下文献：ZmHAK5and ZmHAK1function inK⁺uptake and distribution in maize under low K⁺conditions。

实施例1、ZmWAK-RLK蛋白及其编码基因的发现

用玉米自交系Y32(作为供体亲本)和玉米自交系Q11(作为轮回亲本)，构建初定位群体和精细定位群体。将qRgls1定位到玉米8号染色体IDP2和M2之间，物理位置约为120kb。

利用位于精细定位的QTL-qRgls1区域的分子标记，通过PCR的方法筛选抗病亲本Y32BAC文库。进行BAC克隆指纹图谱分析，构建覆盖整个基因区段的BAC重叠群。选择能够覆盖基因区域最少的克隆，用于测序。通过序列比对和表达分析发现了一个新基因，编码序列表的序列1所示的蛋白质。

将序列表的序列1所示的蛋白质命名为ZmWAK-RLK蛋白。将编码ZmWAK-RLK蛋白的基因命名为ZmWAK-RLK基因。玉米自交系Y32的cDNA中的ZmWAK-RLK基因如序列表的序列2所示(其中第87-2084位核苷酸为开放阅读框)。玉米自交系Y32的基因组DNA中的ZmWAK-RLK基因如序列表的序列3所示。

实施例2、验证7.2kb的片段的功能

一、转基因植株的获得

1、将玉米自交系Y32中约7.2kb的片段(该片段如序列表的序列4所示；序列4中，第1-2103位核苷酸为启动子，第2104-4316位核苷酸与序列表的序列3相同)插入pCAMBIA3301载体的BamH I酶切位点，得到重组质粒。

2、将步骤1得到的重组质粒导入农杆菌EHA105，得到重组农杆菌。

3、取步骤2得到的重组农杆菌，采用农杆菌介导法对玉米自交系B73-329的幼胚进行遗传转化，得到T0代植株。

4、T0代植株自交，收获籽粒，将籽粒培育为植株，即为T1代植株。

5、将T1代植株进行PCR鉴定，筛选转基因植株。从T1代植株中筛选到的转基因植株，即为T1转基因植株。从T1代植株中筛选到若干转基因植株，其中两株命名为WAK1-15植株和WAK1-17植株。

PCR鉴定方法：取植株叶片，提取基因组DNA，采用F1和R1组成的引物对进行PCR扩增，如果得到1197bp的扩增产物、PCR鉴定为阳性、该植株为转基因植株；如果没有得到扩增产物、PCR鉴定为阴性、该植株为非转基因植株。

F1：CGAGGAGGTTTCCCGATATTAC；R1：CACGTCAATCCGAAGGCTATTA。

部分植株的PCR鉴定结果见图1，箭头标注目标带，最左侧的泳道为分子量标准，其余每个泳道对应一株植株。

二、B73-329遗传背景转基因纯系的获得

T1转基因植株自交并收获种子，将种子培育为植株，即为T2代植株。T2代植株自交并收获种子，将种子培育为植株，即为T3代植株。

T3代植株进行PCR鉴定(PCR鉴定方法同步骤一的5)。

对于某一T2代植株，如果其自交得到的T3代植株均为转基因植株，该T2代植株为纯合的转基因植株。纯合的转基因植株自交得到的后代为纯合的转基因株系。

三、回交分离后代的获得

PCR鉴定方法同步骤一的5。

1、将WAK1-15植株(或WAK1-17植株)作为父本，玉米自交系Q11作为母本，进行杂交，收获籽粒，将籽粒培育为植株，即为BC₁F₁植株，通过PCR鉴定筛选转基因植株和非转基因植株。

2、将WAK1-15植株(或WAK1-17植株)作为父本，玉米自交系Q11作为母本，进行杂交，收获籽粒，将籽粒培育为植株，即为BC₁F₁植株，通过PCR鉴定筛选转基因植株；将BC₁F₁植株中的转基因植株作为父本，玉米自交系Q11作为母本，进行杂交，收获籽粒，将籽粒培育为植株，即为BC₂F₁植株，通过PCR鉴定筛选转基因植株；将BC₂F₁植株中的转基因植株作为父本，玉米自交系Q11作为母本，进行杂交，收获籽粒，将籽粒培育为植株，即为BC₃F₁植株，通过PCR鉴定筛选转基因植株和非转基因植株。

四、植株的抗病性鉴定

1、抗病性鉴定的方法

抗病性鉴定在中国农业大学上庄实验基地进行。

灰斑病致病菌：玉米尾孢菌(Cercospora zeina)。

正常培养供试材料，10叶期接种致病菌，然后继续正常培养，授粉两周后进行表型调查，采用分级调查计算病情指数(DSI)。接种致病菌的具体方法(菌液灌心法)：用无菌水悬浮灰斑病致病菌的孢子，得到孢子浓度为1×10⁵个/mL的孢子悬液，利用注射器将孢子悬液灌注于玉米叶心，每株玉米灌注5ml。

病情等级的分级标准(X代表病斑面积占叶片面积的百分比)：

1级(赋值为0)：X≤5％；

3级(赋值为0.25)：5％＜X≤10％；

5级(赋值为0.5)：10％＜X≤30％；

7级(赋值为0.75)：30％＜X≤70％；

9级(赋值为1)：70％＜X≤100％。

各个分级的代表性叶片的照片见图2。

2、回交分离后代(BC₁F₁植株和BC₃F₁植株)的抗病性鉴定

第一组供试材料：步骤三的1中WAK1-15植株作为父本得到的BC₁F₁植株中的转基因植株(10株)和非转基因植株(10株)、步骤三的1中WAK1-17植株作为父本得到的BC₁F₁植株中的转基因植株(10株)和非转基因植株(10株)。

第二组供试材料：步骤三的2中WAK1-15植株作为父本得到的BC₃F₁植株中的转基因植株(10株)和非转基因植株(10株)、步骤三的2中WAK1-17植株作为父本得到的BC₃F₁植株中的转基因植株(10株)和非转基因植株(10株)。

2017年，第一组供试材料按照步骤1的方法进行抗病性鉴定。转基因植株的病情指数显著低于非转基因植株，DSI降低10.5-11.6％。

2018年，第二组供试材料按照步骤1的方法进行抗病性鉴定。转基因植株的病情指数显著低于非转基因植株，DSI降低9.5-10.6％。

结果见图3(**：p<0.01)。

3、纯合的转基因株系的抗病性鉴定

供试材料：步骤二得到的纯合的转基因株系的T3代植株(10株)、玉米自交系B73-329植株(10株)。

2018年，供试材料按照步骤1的方法进行抗病性鉴定。结果见图4。转基因植株的病情指数显著低于玉米自交系B73-329植株，DSI降低9.5％。

以上结果表明，ZmWAK-RLK基因为QTL-qRls1的功能基因。将ZmWAK-RLK基因导入玉米，可以显著的降低其灰斑病病情指数10％左右。

实施例3、验证开放阅读框的功能

一、转基因植株的获得

1、将序列表的序列2第87-2084位核苷酸所示的双链DNA分子插入pBCXUN载体的XcmI酶切位点，得到重组质粒。

5、将T1代植株进行PCR鉴定，筛选转基因植株。从T1代植株中筛选到的转基因植株，即为T1转基因植株。从T1代植株中筛选到若干转基因植株，其中三株命名为WAK2-6植株、WAK2-7植株和WAK2-8植株。

PCR鉴定方法：取植株叶片，提取基因组DNA，采用F2和R2组成的引物对进行PCR扩增，如果得到530bp的扩增产物、PCR鉴定为阳性、该植株为转基因植株；如果没有得到扩增产物、PCR鉴定为阴性、该植株为非转基因植株。

F2：TTTTAGCCCTGCCTTCATACGC；

R2：CGACATCGAATTCGGATAAAGGA。

部分植株的PCR鉴定结果见图5，箭头标注目标带，最左侧的泳道为分子量标准，其余每个泳道对应一株植株。

二、回交分离后代的获得

PCR鉴定方法同步骤一的5。

1、将WAK2-6植株(或WAK2-7植株或WAK2-8植株)作为父本，玉米自交系Q11作为母本，进行杂交，收获籽粒，将籽粒培育为植株，即为BC₁F₁植株，通过PCR鉴定筛选转基因植株和非转基因植株。

2、将WAK2-6植株(或WAK2-7植株或WAK2-8植株)作为父本，玉米自交系Q11作为母本，进行杂交，收获籽粒，将籽粒培育为植株，即为BC₁F₁植株，通过PCR鉴定筛选转基因植株；将BC₁F₁植株中的转基因植株作为父本，玉米自交系Q11作为母本，进行杂交，收获籽粒，将籽粒培育为植株，即为BC₂F₁植株，通过PCR鉴定筛选转基因植株；将BC₂F₁植株中的转基因植株作为父本，玉米自交系Q11作为母本，进行杂交，收获籽粒，将籽粒培育为植株，即为BC₃F₁植株，通过PCR鉴定筛选转基因植株和非转基因植株。

三、植株的抗病性鉴定

1、抗病性鉴定的方法

同实施例2的步骤三的1。

2、回交分离后代(BC₁F₁植株和BC₃F₁植株)的抗病性鉴定

第一组供试材料：步骤三的1中WAK2-6植株作为父本得到的BC₁F₁植株中的转基因植株(10株)和非转基因植株(10株)、步骤三的1中WAK2-7植株作为父本得到的BC₁F₁植株中的转基因植株(10株)和非转基因植株(10株)、步骤三的1中WAK2-8植株作为父本得到的BC₁F₁植株中的转基因植株(10株)和非转基因植株(10株)。

第二组供试材料：步骤三的1中WAK2-6植株作为父本得到的BC₃F₁植株中的转基因植株(10株)和非转基因植株(10株)、步骤三的1中WAK2-7植株作为父本得到的BC₃F₁植株中的转基因植株(10株)和非转基因植株(10株)、步骤三的1中WAK2-8植株作为父本得到的BC₃F₁植株中的转基因植株(10株)和非转基因植株(10株)。

2017年，第一组供试材料按照步骤1的方法进行抗病性鉴定。转基因植株的病情指数显著低于非转基因植株，DSI降低8.3-10.5％。

2018年，第二组供试材料按照步骤1的方法进行抗病性鉴定。转基因植株的病情指数显著低于非转基因植株，DSI降低10.8-11.9％。

结果见图6(**：p<0.01)。

以上结果表明，ZmWAK-RLK基因为抗灰斑病主效QTL-qRgls1区段内的功能基因，将其回交导入Q11遗传背景可以显著提高玉米对灰斑病的抗性。

SEQUENCE LISTING

<110> 中国农业大学

<120> 灰斑病抗性相关蛋白ZmWAK-RLK及其编码基因和应用

<130> GNCYX190543

<160> 4

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 665

<212> PRT

<213> Zea mays L.

<400> 1

Met Ala Thr Met Ser Ala Ala Ser His Arg Cys Cys Ala Ser Ser Leu

1 5 10 15

Arg Ala Leu Thr Val Leu Phe Val Leu Ala Ala Leu Val Ser Asp Val

20 25 30

Gly Gly Arg His His His His Val Cys Pro Pro Tyr Phe Ser Cys Gly

35 40 45

Gly Phe Ser Asn Ile Ser Tyr Pro Phe Arg Arg Gln Gly Asp Pro Ser

50 55 60

Gly Cys Gly Val Gln Ser Tyr Glu Leu Val Cys Thr Asp Thr Asp Ala

65 70 75 80

Thr Ile Arg Ile Gly Ser Gly Thr Tyr Thr Val Leu Ser Ile Asn Ser

85 90 95

Thr Tyr Ser Tyr Phe Trp Val Val Asp Ala Asp Leu Asp Ile Gln Ser

100 105 110

Ser Cys Pro Leu Pro Trp Trp Asp His His Gly Glu Thr Ser Thr Ala

115 120 125

Asn Ser Tyr Arg Arg Arg Thr Glu Phe Arg Pro Tyr Phe Leu Tyr Pro

130 135 140

Asn Ser Met Ser Ile Ile Phe Val Asn Cys Ser Lys Pro Ile Glu Asn

145 150 155 160

Asn Asp Ile Tyr Glu Pro Val Pro Cys Leu Ser Asn Ser Ser Phe Ile

165 170 175

Tyr Leu Leu Thr His Tyr Ser Tyr Gly Tyr Ala Leu Ala Glu Ile Leu

180 185 190

Glu Pro Ser Cys Gly Tyr Leu Ala Met Ile Tyr Leu Gly Gly Pro Gly

195 200 205

Ile Pro Val Pro Lys Asn Thr Ser Tyr Pro Asp Val Val Lys Leu Met

210 215 220

Arg Asn Gly Phe Gly Leu Arg Phe Pro Ser Ser Ile Gly Asp Arg Gly

225 230 235 240

Ile Arg Glu Cys Phe Ala Glu Ser Val Arg Asn Phe Leu Lys Glu Pro

245 250 255

Arg Lys Tyr Gln Ile Val Asp Ile Leu Met Val Glu Glu Leu Trp Ser

260 265 270

Cys Phe Leu Asp Gln His Gly Ser Thr Asn Asn Val Val Thr Ser Val

275 280 285

Ile Ile Asp Ile Ile Lys Thr Ile Pro Ile Cys Met Trp Leu Leu Lys

290 295 300

Ser Thr His Val Phe Cys Arg Leu Val Leu Met Pro Leu Ala Val Phe

305 310 315 320

Val Phe Leu Ala His Lys Tyr Trp Lys Ala Arg Ile Thr Ile Asp Ala

325 330 335

Val Glu Lys Phe Leu Arg Met Gln Gln Met Leu Val Pro Met Arg Tyr

340 345 350

Ala Tyr Thr Asn Ile Ile Ala Ile Thr Gly His Phe Arg Glu Lys Leu

355 360 365

Gly Gln Gly Gly Tyr Gly Ser Val Tyr Lys Gly Val Leu Gln Pro Gly

370 375 380

Glu Val His Val Ala Val Lys Met Leu Gly Asn Ser Asn Cys Asn Gly

385 390 395 400

Glu Glu Phe Ile Ser Glu Val Ala Thr Ile Gly Lys Ile His His Phe

405 410 415

Asn Val Val Arg Leu Ile Gly Phe Cys Ser Glu Glu Asn Arg Arg Ala

420 425 430

Leu Ile Tyr Glu Phe Met Pro His Gly Ser Leu Asp Lys Tyr Ile Phe

435 440 445

Ser Ser Glu Lys Ser Phe Ser Trp Asp Lys Leu Asn Glu Ile Ala Leu

450 455 460

Gly Ile Ala Arg Gly Leu Asn Tyr Leu His His Gly Cys Asp Met Gln

465 470 475 480

Ile Val His Phe Asp Ile Lys Pro His Asn Ile Leu Leu Asp Ser Asn

485 490 495

Phe Val Pro Lys Val Ala Asp Phe Gly Leu Ala Lys Leu Phe Pro Arg

500 505 510

Asp Asp Ser Phe Val Pro Leu Ser Ala Thr Arg Gly Thr Ile Gly Tyr

515 520 525

Ile Ala Pro Glu Met Val Ser Arg Ser Phe Gly Val Ile Ser Ser Lys

530 535 540

Ser Asp Val Tyr Ser Phe Gly Met Leu Leu Leu Glu Met Thr Gly Gly

545 550 555 560

Arg Arg Asn Ala Asp Pro Tyr Ala Gly Ser Ser Ser Gln Ala Tyr Tyr

565 570 575

Pro Ser Leu Val Tyr Ser Gln Leu Ser Gln Gly Asp Leu Gly Glu Ile

580 585 590

Ser Asp Gly Val Asp Met His Glu Leu Glu Lys Lys Leu Cys Ile Ile

595 600 605

Gly Leu Trp Cys Ile Gln Met Lys Pro Gln Asp Arg Pro Thr Met Ser

610 615 620

Asp Val Ile Glu Met Leu Glu Val Gly Val Asp Gly Ile Gln Met Pro

625 630 635 640

Pro Arg Pro Phe Phe Cys Asp Asp Glu Gly Asp Ser Ser Tyr Ser Ala

645 650 655

Ile Ser Glu Ser Asp Thr Ile Glu Glu

660 665

<210> 2

<211> 2238

<212> DNA

<213> Zea mays L.

<400> 2

ggcaagaagg tccacgaatc acgcgagcca atcagtggcg tgcagtggcg actgcaaaga 60

taagtgggta gaaacaagag tcacccatgg cgacgatgtc tgcagcgtct catcgctgct 120

gtgcttcttc cttgagagct ttaacggtgt tatttgtgtt ggcagctctt gtttcagatg 180

ttggcgggcg acatcatcat catgtttgtc ctccttattt ctcctgcggt ggttttagca 240

atatatcgta tccattccgt cggcaaggtg atccatcggg gtgcggtgtc caatcgtatg 300

agctggtttg cacggataca gacgctacca ttcgcatcgg cagtggaacg tataccgtgc 360

ttagcatcaa ctccacctat tcttacttct gggtcgttga tgccgacctg gacatccaga 420

gcagttgccc ccttccctgg tgggatcacc atggtgagac cagtactgcc aactcatatc 480

gtaggaggac tgagttcagg ccttatttcc tttatccgaa ttcgatgtcg attatctttg 540

tgaattgctc gaagccaata gagaacaatg atatatatga gccggtgcct tgcttgagca 600

attcttcttt catctacttg ctaactcact actcgtatgg ctatgctctt gctgagattc 660

tggagccctc atgcggttac ctagccatga tttatttggg tggtccaggc ataccggtgc 720

ccaagaatac aagctatcca gatgttgtta agttaatgag gaatggattt ggccttagat 780

ttccttcttc gattggtgac cgcggcatca gagaatgttt cgcagagtct gtgcgtaatt 840

tccttaaaga gccaagaaag tatcagattg tggacattct aatggtcgag gaattatggt 900

cttgttttct cgatcaacat ggatcaacta ataatgttgt cacttctgtt atcatcgaca 960

ttatcaaaac aataccaata tgtatgtggc ttctgaaatc tacacatgtt ttttgcaggc 1020

ttgtattgat gccgctagca gtatttgtct tcctagccca taaatactgg aaagcaagga 1080

ttacaataga tgcagtcgag aagttcctgc ggatgcagca gatgctcgtt ccgatgagat 1140

atgcatacac aaacatcatt gctatcaccg gtcattttag agaaaagctc ggacaaggag 1200

gctacggttc tgtatacaag ggggtgctac agccaggtga agtacatgtt gctgtcaaga 1260

tgttaggcaa ctccaactgt aatggagaag agttcatcag tgaggtcgcc accattggca 1320

agatccacca tttcaatgtt gtgcgcctca ttgggttttg ctccgaggaa aatagaaggg 1380

cacttatcta cgagttcatg ccccatggat ctctcgataa gtacatcttc tcgtcggaga 1440

agagtttctc atgggacaaa ctcaatgaga tcgctctggg cattgctaga ggtctcaact 1500

acctacatca cgggtgcgat atgcaaattg tacacttcga catcaagcca cacaacatcc 1560

ttcttgacag caactttgtt ccaaaagttg ctgattttgg gcttgccaaa ctgttcccaa 1620

gagacgacag tttcgtgcca ctgagcgcta cgcggggaac gataggctat atagctccag 1680

agatggtatc tcgaagcttt ggtgtcatct ctagcaaatc tgatgtgtat agctttggaa 1740

tgctactgtt ggagatgacg ggcgggcgaa ggaacgcaga tccttatgca ggaagctcca 1800

gtcaagcata ctacccatcc ttggtgtaca gccagctaag ccaaggagat ttgggcgaga 1860

tcagtgacgg tgttgatatg cacgagttag agaagaagct atgtatcatt ggactttggt 1920

gcatccagat gaagccgcaa gatcgaccga cgatgagcga cgtcatagag atgcttgaag 1980

ttggtgtcga tggcatccaa atgcctccaa ggccattctt ttgtgatgac gagggtgata 2040

gttcttactc tgcaatctct gaatcggata caatagaaga gtagtagtag taaaatacac 2100

ttgtgtatat ttgatcttaa tgtattttag actactaaga atgcaaggtt gtcataagct 2160

aaggtactgg ttgtatactt ttattgagag tgtggtaatg tgttttcatt taaaatacct 2220

caatgaacct tttttatc 2238

<210> 3

<211> 2213

<212> DNA

<213> Zea mays L.

<400> 3

atggcgacga tgtctgcagc gtctcatcgc tgctgtgctt cttccttgag agctttaacg 60

gtgttatttg tgttggcagc tcttgtttca gatgttggcg ggcgacatca tcatcatgtt 120

tgtcctcctt atttctcctg cggtggtttt agcaatatat cgtatccatt ccgtcggcaa 180

ggtgatccat cggggtgcgg tgtccaatcg tatgagctgg tttgcacgga tacagacgct 240

accattcgca tcggcagtgg aacgtatacc gtgcttagca tcaactccac ctattcttac 300

ttctgggtcg ttgatgccga cctggacatc cagagcagtt gcccccttcc ctggtgggat 360

caccatggtg agaccagtac tgccaactca tatcgtagga ggactgagtt caggccttat 420

ttcctttatc cgaattcgat gtcgattatc tttgtgaatt gctcgaagcc aatagagaac 480

aatgatatat atgagccggt gccttgcttg agcaattctt ctttcatcta cttgctaact 540

cactactcgt atggctatgc tcttgctgag attctggagc cctcatgcgg ttacctagcc 600

atgatttatt tgggtggtcc aggcataccg gtgcccaaga atacaagcta tccagatgtt 660

gttaagttaa tgaggaatgg atttggcctt agatttcctt cttcgattgg tgaccgcggc 720

atcagagaat gtttcgcaga gtctgtgcgg tatctgatca tcctatccta ttttcctcct 780

atgcatgact ttgtcatctg aaaaccgtcc gttgcattcc cttcgtaatt cttttatatg 840

ctatggcatg gtcttgcagt aatttcctta aagagccaag aaagtatcag attgtggaca 900

ttctaatggt cgaggaatta tggtcttgtt ttctcgatca acatggatca actaataatg 960

ttgtcacttc tgttatcatc gacattatca aaacaatacc aatatgtatg tggcttctga 1020

aatctacaca tggtactctc tccggctatc atcatttgtt gaataaacat cgtatgtttt 1080

gtggcttctg ttttttttta attcttcatg tttacaacct tggatttttt tcggcagttt 1140

tttgcaggct tgtattgatg ccgctagcag tatttgtctt cctagcccat aaatactgga 1200

aagcaaggat tacaatagat gcagtcgaga agttcctgcg gatgcagcag atgctcgttc 1260

cgatgagata tgcatacaca aacatcattg ctatcaccgg tcattttaga gaaaagctcg 1320

gacaaggagg ctacggttct gtatacaagg gggtgctaca gccaggtgaa gtacatgttg 1380

ctgtcaagat gttaggcaac tccaactgta atggagaaga gttcatcagt gaggtcgcca 1440

ccattggcaa gatccaccat ttcaatgttg tgcgcctcat tgggttttgc tccgaggaaa 1500

atagaagggc acttatctac gagttcatgc cccatggatc tctcgataag tacatcttct 1560

cgtcggagaa gagtttctca tgggacaaac tcaatgagat cgctctgggc attgctagag 1620

gtctcaacta cctacatcac gggtgcgata tgcaaattgt acacttcgac atcaagccac 1680

acaacatcct tcttgacagc aactttgttc caaaagttgc tgattttggg cttgccaaac 1740

tgttcccaag agacgacagt ttcgtgccac tgagcgctac gcggggaacg ataggctata 1800

tagctccaga gatggtatct cgaagctttg gtgtcatctc tagcaaatct gatgtgtata 1860

gctttggaat gctactgttg gagatgacgg gcgggcgaag gaacgcagat ccttatgcag 1920

gaagctccag tcaagcatac tacccatcct tggtgtacag ccagctaagc caaggagatt 1980

tgggcgagat cagtgacggt gttgatatgc acgagttaga gaagaagcta tgtatcattg 2040

gactttggtg catccagatg aagccgcaag atcgaccgac gatgagcgac gtcatagaga 2100

tgcttgaagt tggtgtcgat ggcatccaaa tgcctccaag gccattcttt tgtgatgacg 2160

agggtgatag ttcttactct gcaatctctg aatcggatac aatagaagag tag 2213

<210> 4

<211> 7238

<212> DNA

<213> Zea mays L.

<400> 4

tccactcgtg atccctgatc accaaaccag cccttagcca atcacctgca acttgatctt 60

cgcaaaagct agttgttagt cgattaggtt cgcctttgac tctcatttgt taatgatagt 120

tgggtcctgt ctgactagca gatagtctac aaaatttttg atcatcttca gtgtatccca 180

aatagtaggg tgaagatggg gagtgtcact catttatttg cgttttatgc cttatggata 240

tgtaaagtgt gtataaaatg gtttagagag aattaaattg tttattttgc taatcatttt 300

tctggtgtcg ggtaccaaaa tgcacatgtt ttgttgtaca tgtaagttct ttatgactga 360

tgtgtagtca tcactacgag tgcttgaaat agtgttggga gctaggagga agtctatgta 420

ttctgtagca gtagcattat gcgacatcat taccataatt acaaataaac taatcgtagc 480

cacgatgttc aatacattaa ctttttggta acaaataaat gtaaaatggg gaatgagagg 540

ttgcaatgtc tactgatttc tacgattttt cttatcagtg agtatgttgg tagcttcttt 600

ttctctttct aagtataaca tctttgtcgt tttaaattca tgagaatgat taaatataat 660

aggggaactt tgaatatgtt catattctta tctaattgtg caagttctat caatcatata 720

aattctaaaa taggcatgtc ttataacttt gattcttttg aacaatttag tttatggacc 780

aactatgttt gtatatgaac agatgacaga catagcaaaa cttgtctaca atcttatata 840

tcttttaagg tacataaata tctaatttta gtgatgctaa caaaagtata gaataacaat 900

tacggggcgt ttggatccct tcattttaga agaattagaa ttcactcaat aaagtgactt 960

atttagttta gaatttgaca ttccaccact tttcaaagtt aggtataagc ctatctcaaa 1020

tttatgtggt ggaggatgag aaatgatttt attcattagt agaatttgtt tctactctgt 1080

aacttacatg acactcttcg tctcactcct ctatagtaaa aatatagcac ataaatatct 1140

ccaacatctt gctaataata gtatacaaat atattttgca taaaacagaa ttagcttaat 1200

tgatatatgt caaaattact attattagaa tggaattcaa ttcgaatgat ccaaacgagg 1260

cgttagtgtt tttatcatat taattccgta gcaacgcacg agtatataac tagtctttaa 1320

taaggtgtat acaaactata gattgttcaa acaatttcta tcattatgct ctagctataa 1380

tttaactttg caaaacacac cttggtcata ataattttat attatcatta atcaccgaaa 1440

aataggaggg tctagatgct ttcaacattc ataggaaagc atctcatcta atgtttcata 1500

tactgtatat attgataaga tgaaaagata aacacgaggc ggaccataca ctttatcatt 1560

tagttccaaa ttaactgaca ctaaagttct tttcataaca gggactgaag agcatttctc 1620

tactagtagt ggagcagatc caaatagact gaaatatgcc gataaatcta ccaagtatat 1680

catatgagta tacttcggtt taataagaca ctgactgagc aaggatgccg gccgcttcaa 1740

ggtttgcact tgaaagtagc actccagatg atattggtta ctgcattgaa ataccttttt 1800

taattacatt ttattccgta tatatccaag tttatactgg tttgcggtgg taaaattatc 1860

tcttcatctc cggtcccata tccccatcga aggccatttg caaaccagaa aaagacgcaa 1920

aagaatgact accaagtcag cggcatcaca attatgtgga ccagtcatgt gcgattttgt 1980

tccacaaata cagcgaagat gctgaggctg tgaccccggg tgactcttgt ttctacccac 2040

ttatctttgc agtcgccact gcacgccact gattggctcg cgtgattcgt ggaccttctt 2100

gccatggcga cgatgtctgc agcgtctcat cgctgctgtg cttcttcctt gagagcttta 2160

acggtgttat ttgtgttggc agctcttgtt tcagatgttg gcgggcgaca tcatcatcat 2220

gtttgtcctc cttatttctc ctgcggtggt tttagcaata tatcgtatcc attccgtcgg 2280

caaggtgatc catcggggtg cggtgtccaa tcgtatgagc tggtttgcac ggatacagac 2340

gctaccattc gcatcggcag tggaacgtat accgtgctta gcatcaactc cacctattct 2400

tacttctggg tcgttgatgc cgacctggac atccagagca gttgccccct tccctggtgg 2460

gatcaccatg gtgagaccag tactgccaac tcatatcgta ggaggactga gttcaggcct 2520

tatttccttt atccgaattc gatgtcgatt atctttgtga attgctcgaa gccaatagag 2580

aacaatgata tatatgagcc ggtgccttgc ttgagcaatt cttctttcat ctacttgcta 2640

actcactact cgtatggcta tgctcttgct gagattctgg agccctcatg cggttaccta 2700

gccatgattt atttgggtgg tccaggcata ccggtgccca agaatacaag ctatccagat 2760

gttgttaagt taatgaggaa tggatttggc cttagatttc cttcttcgat tggtgaccgc 2820

ggcatcagag aatgtttcgc agagtctgtg cggtatctga tcatcctatc ctattttcct 2880

cctatgcatg actttgtcat ctgaaaaccg tccgttgcat tcccttcgta attcttttat 2940

atgctatggc atggtcttgc agtaatttcc ttaaagagcc aagaaagtat cagattgtgg 3000

acattctaat ggtcgaggaa ttatggtctt gttttctcga tcaacatgga tcaactaata 3060

atgttgtcac ttctgttatc atcgacatta tcaaaacaat accaatatgt atgtggcttc 3120

tgaaatctac acatggtact ctctccggct atcatcattt gttgaataaa catcgtatgt 3180

tttgtggctt ctgttttttt ttaattcttc atgtttacaa ccttggattt ttttcggcag 3240

ttttttgcag gcttgtattg atgccgctag cagtatttgt cttcctagcc cataaatact 3300

ggaaagcaag gattacaata gatgcagtcg agaagttcct gcggatgcag cagatgctcg 3360

ttccgatgag atatgcatac acaaacatca ttgctatcac cggtcatttt agagaaaagc 3420

tcggacaagg aggctacggt tctgtataca agggggtgct acagccaggt gaagtacatg 3480

ttgctgtcaa gatgttaggc aactccaact gtaatggaga agagttcatc agtgaggtcg 3540

ccaccattgg caagatccac catttcaatg ttgtgcgcct cattgggttt tgctccgagg 3600

aaaatagaag ggcacttatc tacgagttca tgccccatgg atctctcgat aagtacatct 3660

tctcgtcgga gaagagtttc tcatgggaca aactcaatga gatcgctctg ggcattgcta 3720

gaggtctcaa ctacctacat cacgggtgcg atatgcaaat tgtacacttc gacatcaagc 3780

cacacaacat ccttcttgac agcaactttg ttccaaaagt tgctgatttt gggcttgcca 3840

aactgttccc aagagacgac agtttcgtgc cactgagcgc tacgcgggga acgataggct 3900

atatagctcc agagatggta tctcgaagct ttggtgtcat ctctagcaaa tctgatgtgt 3960

atagctttgg aatgctactg ttggagatga cgggcgggcg aaggaacgca gatccttatg 4020

caggaagctc cagtcaagca tactacccat ccttggtgta cagccagcta agccaaggag 4080

atttgggcga gatcagtgac ggtgttgata tgcacgagtt agagaagaag ctatgtatca 4140

ttggactttg gtgcatccag atgaagccgc aagatcgacc gacgatgagc gacgtcatag 4200

agatgcttga agttggtgtc gatggcatcc aaatgcctcc aaggccattc ttttgtgatg 4260

acgagggtga tagttcttac tctgcaatct ctgaatcgga tacaatagaa gagtagtagt 4320

agtaaaatac acttgtgtat atttgatctt aatgtatttt agactactaa gaatgcaagg 4380

ttgtcataag ctaaggtact ggttgtatac ttttattgag agtgtggtaa tgtgttttca 4440

tttaaaatac ctcaatgaac cttttttatc aaaaactcct caagaacatt ttgtttgcca 4500

acaaacatag gatcacggtc ccagccgttg tattcagcta ttgcacaagt ttttaagtta 4560

tgcataacaa attaagtgaa ctagcatatt acccgcgcta gcaccaagat aatatttgac 4620

aatacaaatt aaataaccaa aaggttattc atctcatata atataatgcc catgctaaag 4680

accgctcatg tagaacgcga cattcatttg aaggcattag taccagttgt tgtagaatcg 4740

atattgattc aggcgtcagt accgatttta atgaccacgt cctcatggat ggcaatagta 4800

tagattggtg tctcaaatca atgcaaaagg actctatctg agttagttag gtggtctgag 4860

tgacactcaa attctaaatt ctaagtttga gctcctatga aagcaaattt taggctacgg 4920

ttaaaaattc tcttgtatca ttattcttgt gtattcaact gatgtcatta ttcttatttg 4980

tcttcactat agaatttgca tttcctacac acactaccta tatgatttaa ggttcaggat 5040

cgtaactcaa agtagttgga tttaggatta ttttaacaag aacatccatt tttcatgagc 5100

ttaatattaa accctttttt gttttatatg tttttcattg gaatcatgct aagatagatc 5160

atcgtaaaat agaggagaag ttgaatcatg aactagcatt tagaaaggaa ataagaagat 5220

acatctagct agcacttagg gatactgtca caccaagatt taaggataaa ttcagatgca 5280

cctcatatgt gcgccatgat caagtttcac acatataaat actcaatgta tagtagccaa 5340

tgtcacaagc tttattatat aacgaaaatg acttacaaaa taactggaat aaaataaatc 5400

gaactaacat aactatctcc atgatgtgaa tgttgtgcgc ctcatcgggt tttgctccga 5460

tgaaaatagg agggcactca tatatgagtt catgccccgt ggatccctcg ataggtacat 5520

cttctcgtcg aagaagagtt tctgatggga caaactcaat gagatcgctc tgggcattgc 5580

tagaggtctc aactacctgc gtcacgggtg tgacatgcag attgtacact tcgacatcaa 5640

gccacacaac atccttcttg acaacaactt tgttccaaaa gttgctgatt ttgggctcac 5700

caaactgttc ccaagagatg acagtttcgt gccactaagc gctgtgcagg gaacgatagg 5760

ctatataact acatagatgg tatctccaag ctttggtgtc atctctagca aattcgatgt 5820

gtatagcttt gggatgctac tattggagat ggcgggcgat caaaggaacg cagatcctca 5880

agcaggaagc tccagccaag catactaccc atccttcgtg tacagccagc tgagccaagg 5940

agatgttgat gggatcagtg aaggtgttga tatgcatgag ttagagaaga agttatgtat 6000

catcgggctt tggtgcatct agatgaagcc gcaagataga ccgacgatga gcgaggtcat 6060

agagatgctt gaagctagtg ttgatggcat ccaaatgcct ccaaggccat tcttttgtga 6120

tgacgagggt gacagttctt actctacaat ctctgaactg tatacaatat aagagtagta 6180

gtaataaact gcacttgtgt ttatgcgctc ttaatgtatc atagtattaa gattgcaagg 6240

ttgtcataag ctaaggtact agttgtatac ttttattgag agtgtgataa tgtgatgtca 6300

tctaaaatac ctccatgaac cttttttatc aaaaactcat caagaacatt ttgtttgcct 6360

acaaacagag gaccacggtc ccagacattg tattcttgaa aaggaatgca ctagttttat 6420

gcacgtcaat ccgaaggcta ttacacaact ttcttagtta tgcataataa attaggtaaa 6480

ctagcatatt actcgtgcta acactatgat aatcaaaaga atatattctt tacagctagt 6540

ccaagaaaca caggagattg tatttgggga tagtggcaag agtaaggtgg ttggtattgg 6600

taacattcct atctcaacaa agcagtcact atccaatgtt ctattagttg attccttaag 6660

ttataacctt ttgtctgttt tacaactttg tgcaatgggt tttgattgtc tttttacaaa 6720

tgtcagtgtg aaaattctta gaagggagca ttcctatgtt gcctttatag gatagctgac 6780

aggcaagctc taccttgttg attttcaaac aagtagagtg tcatctgata cttatttagt 6840

ggcaaagtcc aacaagggtt ggctctagca ttgctggcta gctcatgttg gcatgagaaa 6900

cttgggcaaa cttctaaaga atgatcacat tattggacta acaaatgtta tatttgagaa 6960

cgacagggtt tgtggagctt gccaagcaag aaaacaacat ggagctctcc accatccaaa 7020

gaatgcggtc accaccaaaa aggcctttgg agcttctaca catggtcctt ttcggaccgg 7080

tggcctacct cagtattggt ggtaacaaat atggcttggt tattgttcat gatttttctt 7140

gcttcacttg tgtttttttc tttttgggtg acaaaggtga aacccaatag attctaaaga 7200

aggtcatgag gcgagcacaa aatgaatttg agctaaag 7238

Claims

1.一种蛋白质，为如下(a1)或(a2)或(a3)或(a4)：

(a1)序列表中序列1所示的蛋白质；

2.编码权利要求1所述蛋白质的核酸分子。

3.如权利要求2所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4)或(b5)：

(b1)编码区如序列表中序列2第87-2084位核苷酸所示的DNA分子；

(b2)序列表中序列2所示的DNA分子；

(b3)序列表中序列3所示的DNA分子；

4.含有权利要求2或3所述核酸分子的DNA分子、表达盒、重组载体或重组微生物。

5.权利要求1所述蛋白质的应用，为如下(c1)或(c2)或(c3)或(c4)：

(c1)调控植物的灰斑病抗病性；

(c2)提高植物的灰斑病抗病性；

(c3)调控植物对玉米尾孢菌引发的病害的抗病性；

(c4)提高植物对玉米尾孢菌引发的病害的抗病性。

6.权利要求2或3所述核酸分子的应用，为如下(d1)或(d2)或(d3)或(d4)：

(d1)培育灰斑病抗病性改变的转基因植物；

(d2)培育灰斑病抗病性增强的转基因植物；

7.一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：在出发植物中导入权利要求2或3所述核酸分子，得到灰斑病抗病性增强的转基因植物。

8.一种植物育种方法，包括如下步骤：增加目的植物中权利要求1所述蛋白质的含量和/或活性，从而提高目的植物的灰斑病抗病性。

9.一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：在出发植物中导入权利要求2或3所述核酸分子，得到抗病性增强的转基因植物；所述抗病性为对玉米尾孢菌引发的病害的抗病性。

10.一种植物育种方法，包括如下步骤：增加目的植物中权利要求1所述蛋白质的含量和/或活性，从而提高目的植物的抗病性；所述抗病性为对玉米尾孢菌引发的病害的抗病性。