CN109521003A - 一种抗缪勒管激素磁微粒化学发光检测试剂盒 - Google Patents
一种抗缪勒管激素磁微粒化学发光检测试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109521003A CN109521003A CN201811391709.3A CN201811391709A CN109521003A CN 109521003 A CN109521003 A CN 109521003A CN 201811391709 A CN201811391709 A CN 201811391709A CN 109521003 A CN109521003 A CN 109521003A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- miao
- shi pipe
- concentration
- pipe hormone
- reagent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 title claims abstract description 81
- 239000005556 hormone Substances 0.000 title claims abstract description 81
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 title claims abstract description 31
- 238000002038 chemiluminescence detection Methods 0.000 title description 15
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 87
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 77
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 43
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 31
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 30
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 claims abstract description 24
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims abstract description 21
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims abstract description 21
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims abstract description 12
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- -1 that is Substances 0.000 claims description 22
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 16
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 16
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 15
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 11
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 8
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 claims description 8
- 102100034534 Adenomatous polyposis coli protein 2 Human genes 0.000 claims description 7
- 101000924579 Homo sapiens Adenomatous polyposis coli protein 2 Proteins 0.000 claims description 7
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 13
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000008086 immune related sensitivity Effects 0.000 abstract 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 19
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 15
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 13
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 210000002394 ovarian follicle Anatomy 0.000 description 4
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 3
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 3
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 2
- 206010011498 Cryptorchism Diseases 0.000 description 2
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 2
- 206010033266 Ovarian Hyperstimulation Syndrome Diseases 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 2
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 201000000160 cryptorchidism Diseases 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N hydrogen thiocyanate Natural products SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- GRHBQAYDJPGGLF-UHFFFAOYSA-N isothiocyanic acid Chemical compound N=C=S GRHBQAYDJPGGLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 2
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 2
- 108010005853 Anti-Mullerian Hormone Proteins 0.000 description 1
- 206010012205 Delayed puberty Diseases 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 206010060980 Granular cell tumour Diseases 0.000 description 1
- 102100030173 Muellerian-inhibiting factor Human genes 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010036049 Polycystic ovaries Diseases 0.000 description 1
- 208000002500 Primary Ovarian Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N Sulphide Chemical compound [S-2] UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- ZXPSRPAUXQIYID-UHFFFAOYSA-N [N].[Na] Chemical compound [N].[Na] ZXPSRPAUXQIYID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000868 anti-mullerian hormone Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000002242 deionisation method Methods 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 1
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 230000008217 follicular development Effects 0.000 description 1
- 239000000745 gonadal hormone Substances 0.000 description 1
- 201000006604 granular cell tumor Diseases 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003760 hair shine Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012886 linear function Methods 0.000 description 1
- 238000000504 luminescence detection Methods 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000011017 operating method Methods 0.000 description 1
- 208000029749 ovarian granulosa cell tumor Diseases 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000009984 peri-natal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 1
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 1
- 201000010065 polycystic ovary syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 206010036601 premature menopause Diseases 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000013102 re-test Methods 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000004116 schwann cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 150000003515 testosterones Chemical class 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 208000013327 true hermaphroditism Diseases 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
本发明公开了一种测定人体抗缪勒氏管激素含量的磁微粒化学发光试剂盒的制备方法，试剂盒包括：抗缪勒氏管激素R1试剂、R2试剂、磁分离试剂、校准品液系列和化学发光底物液；抗缪勒氏管激素R1试剂是异硫氰酸荧光素标记的抗缪勒氏管激素单克隆抗体稀释液，抗缪勒氏管激素R2试剂是碱性磷酸酶标记的抗缪勒氏管激素抗体稀释液，磁分离试剂为抗异硫氰酸荧光素单克隆抗体包被的磁微粒稀释液，抗缪勒氏管激素校准品液是由合成的抗缪勒氏管激素和缓冲液组成，发光底物液是碱性磷酸酶催化的含二氧杂环乙烷的Tris‑HCl缓冲液。本发明极大地提高了免疫反应的信号强度和灵敏度，使低含量物质在进行免疫结合时也能产生很强的化学发光信号，为抗缪勒氏管激素的检测提供了一种更准确、精确、方便、快捷和简单的方法。
Description
技术领域
本发明涉及医用诊断试剂领域，特别是涉及一种采用磁微粒化学发光技术和抗体结合技术检测人体抗缪勒氏管激素含量的磁微粒化学发光检测试剂盒及其制造方法。
背景技术
抗缪勒氏管激素(anti-Mullerian hormone，AMH)是转化生长因子β超家族的成员之一，由Professor Alfred Jost于1974年首先发现。AMH是由两个相同的72KD亚基，通过二硫键连接组成的二聚糖蛋白，相对分子质量为140KD；人类AMH编码基因位于19号染色体短臂，大小2.4～2.8kb，含有5个外显子。
抗缪勒氏管激素AMH在性腺器官发育过程中起着重要作用，是男女性腺功能的重要标记物之一。在男性AMH主要由睾丸间质细胞产生，始于胚胎形成并贯穿生命始终；在男性胎儿的发育过程中，AMH导致缪勒氏管退化，形成正常发育的男性生殖管道。在女性AMH主要由卵巢颗粒细胞产生，血清AMH保持相对于男性较低的一个水平，从青春期开始，血清AMH水平随时间慢慢降低，并在更年期降低到ELISA法检测不到的水平。
AMH的表达合成受控于男性胎儿以及出生后睾丸内的赛尔托利细胞，和出生后女性卵巢内的颗粒细胞。在男性胚胎发育的过程中，塞尔托利细胞分泌的AMH引发苗勒氏管的不可逆退化。而女性胚胎发育早期不存在AMH，因此苗勒氏管得以继续发育，分化成为子宫、输卵管和阴道上部。男性出生以后，AMH在围产期会有短暂的下降，之后维持一个稳定的高水平直到青春期。青春期开始男性的AMH水平下降，标志着赛尔托利细胞的成熟。成年男性的AMH维持在较低水平。女性出生时的AMH水平很低，之后逐渐上升，青春期到达峰值，然后随着年龄的增长而下降。绝经后的AMH降低到极低的水平。女性的AMH主要由窦前卵泡和小窦卵泡的颗粒细胞分泌，抑制卵泡的募集并降低卵泡对卵泡刺激素(FSH)的敏感性，从而抑制优势卵泡的形成，防止原始卵泡池的过快消耗。由此可见，女性的AMH水平反应了卵巢功能的储备。
综上所述，AMH对于男性性分化和女性卵泡发育都非常关键，血清中AMH浓度的检测为女性及男性生殖状态提供了非常重要的指标。可能导致AMH浓度偏高的因素有：男孩青春期延迟、非促性腺激素依赖的男性性早熟、睾酮中毒症、某些睾酮合成缺陷、双性儿童的睾丸发育不全或卵巢睾丸并存、Sertoli-Leydig氏细胞瘤、颗粒细胞瘤等。可能导致AMH浓度偏低的因素有：隐睾症、无睾症、某些性早熟、睾丸发育不全、过早绝经等。
临床上，血清AMH水平的检测可用于卵巢功能储备的评估、控制性超排卵(COH)效果的预测、卵巢过度刺激(OHSS)的预测、多囊卵巢综合征的诊断和预后、卵巢颗粒细胞瘤的诊断和管理、男性性早熟和青春期延迟的诊断和鉴别诊断、男童的隐睾症和无睾症的诊断和儿童双性状态的鉴别诊断。
目前已知的抗缪勒氏管激素(AMH)检测方法主要有RIA(radioimmunoassay放射免疫测定法)法、均相酶免疫检测法、酶联免疫法(ELISA)、高效液相色谱法、气相色谱法和气相色谱和质谱联用法(GC-MS)。但是，这些方法都存在一定的缺陷，RIA法污染大、ELISA法自动化程度低且操作复杂繁琐，高效液相色谱法、气相色谱法和气相色谱和质谱联用法不适合广泛用于临床检测。
因此，目前尚需一种污染小、灵敏度高、操作简单、自动化程度高、特异性好、成本低的抗缪勒氏管激素(AMH)检测试剂盒和使用方法。
发明内容
本发明旨在开发一种灵敏度高、无污染、操作简单、特异性好并且成本低廉的一种测定人体抗缪勒氏管激素(AMH)含量的磁微粒化学发光检测试剂盒。
基于上述目的，本发明提供一种测定人体抗缪勒氏管激素(AMH)含量的磁微粒化学发光检测试剂盒，包括：R1试剂、R2试剂、磁分离试剂、校准品液系列和化学发光底物液；R1试剂为抗异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗缪勒氏管激素(AMH)单克隆抗体稀释液，R2试剂为碱性磷酸酶(ALP)标记的抗缪勒氏管激素(AMH)抗体稀释液，磁分离试剂为抗异硫氰酸荧光素(FITC)抗体包被的磁微粒稀释剂，校准品液系列为含有不同浓度抗缪勒氏管激素(AMH)抗体的稀释液，化学发光底物液为碱性磷酸酶催化发光的底物液。
另一方案，所述R1试剂即异硫氰酸荧光素标记的抗抗缪勒氏管激素(AMH)多克隆抗体稀释液是浓度为1.0～3.0μg/mL的异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗抗缪勒氏管激素(AMH)单克隆抗体经缓冲液稀释配成。
另一方案，所述R1试剂缓冲液pH值为6.7～7.6，缓冲液包括叠氮钠，浓度为0.98～0.99g/L；牛血清白蛋白，浓度为4～5g/L；三羟甲基氨基甲烷，摩尔浓度为0.01～0.06mol/L；其余为去离子水。
另一方案，所述R1试剂即异硫氰酸荧光素标记的抗缪勒氏管激素单克隆抗体稀释液是浓度为1.5μg/mL的异硫氰酸荧光素标记的抗缪勒氏管激素单克隆抗体经缓冲液稀释配成。
另一方案，所述R1试剂缓冲液pH值为7.0，缓冲液包括叠氮钠，浓度为0.99g/L；牛血清白蛋白，浓度为4.5g/L；三羟甲基氨基甲烷，摩尔浓度为0.05mol/L；其余为去离子水。
另一方案，所述R2试剂即碱性磷酸酶标记的抗缪勒氏管激素抗体稀释液是由浓度为1.0～3.0μg/mL碱性磷酸酶标记的抗缪勒氏管激素抗原经缓冲液稀释而成。
另一方案，所述R2试剂缓冲液为pH值为6.7～7.6，缓冲液包括叠氮钠，浓度为0.98～0.99g/L；牛血清白蛋白，浓度为4～5g/L；三羟甲基氨基甲烷，摩尔浓度为0.01～0.06mol/L；其余为去离子水。
另一方案，所述R2试剂即碱性磷酸酶标记的抗缪勒氏管激素(AMH)抗体稀释液是由浓度为1.5μg/mL碱性磷酸酶标记的抗缪勒氏管激素(AMH)抗体经缓冲液稀释而成。
另一方案，所述R2试剂缓冲液为pH值为6.8，缓冲液包括叠氮钠，浓度为0.99g/L；牛血清白蛋白，浓度为4.5g/L；三羟甲基氨基甲烷，摩尔浓度为0.05mol/L；其余为去离子水。
另一方案，所述磁分离试剂为抗异硫氰酸荧光素单克隆抗体包被的磁微粒悬浮于缓冲液配制成浓度为0.5～2mg/mL的磁微粒溶液。
另一方案，所述磁分离试剂缓冲液为pH值为7.5～9.0，缓冲液组分为包括叠氮钠，浓度为0.98～0.99g/L；牛血清白蛋白，浓度为4～5g/L；三羟甲基氨基甲烷，摩尔浓度为0.05～0.2mol/L；其余为去离子水。
另一方案，所述磁分离试剂为抗异硫氰酸荧光素单克隆抗体包被的磁微粒悬浮于缓冲液配制成浓度为1.0mg/mL的磁微粒溶液。
另一方案，所述磁分离试剂缓冲液为pH值为8.0，缓冲液组分为包括叠氮钠，浓度为0.989g/L；牛血清白蛋白，浓度为4.5g/L；三羟甲基氨基甲烷，摩尔浓度为0.025mol/L；其余为去离子水。
另一方案，所述校准品液系列为含有不同浓度抗缪勒氏管激素(AMH)抗原的稀释液。
另一方案，所述校准品液系列的缓冲液包括叠氮钠，浓度为0.98～0.99g/L；牛血清白蛋白，浓度为4～5g/L；三羟甲基氨基甲烷，摩尔浓度为0.005～0.03mol/L；其余为去离子水。
另一方案，所述校准品液系列，浓度范围为0～30ng/mL，缓冲液pH值为7.6。
另一方案，所述校准品液系列的不同浓度为0ng/ml、0.2ng/ml、1.0ng/ml、5.0ng/ml、10ng/ml、30ng/ml。
另一方案，所述化学发光底物液是摩尔浓度0.1～0.3M的碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物液，pH值为8～10的摩尔浓度0.2M的Tris-HCl缓冲液，并含有0.2～0.4mg/mL的二氧杂环乙烷化合物(APCL)。
另一方案，所述化学发光底物液是摩尔浓度为0.2M，pH值为9.3的摩尔浓度0.2M的Tris-HCl缓冲液，并含有0.3mg/mL的二氧杂环乙烷化合物(APCL)。
一种测定人体抗缪勒氏管激素(AMH)含量的磁微粒化学发光检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
配制试剂R1：1)按照试剂R1缓冲液组分含量配制缓冲液，调节pH；2)制备异硫氰酸荧光素标记的抗抗缪勒氏管激素(AMH)单克隆抗体；3)将异硫氰酸荧光素标记的抗抗缪勒氏管激素(AMH)单克隆抗体用R1缓冲液进行稀释。
配制试剂R2：1)按照试剂R2缓冲液组分含量配制缓冲液，调节pH；2)制备碱性磷酸酶标记的抗缪勒氏管激素(AMH)抗体；3)将碱性磷酸酶标记的抗缪勒氏管激素(AMH)抗体用R2缓冲液进行稀释。
配制磁微粒：1)按照磁微粒缓冲液组分含量配制缓冲液；2)制备抗异硫氰酸荧光素(FITC)单克隆抗体包被的磁微粒；3)将磁微粒用Tris-HCl缓冲液进行稀释。
配制校准品：1)按照校准品缓冲液组分含量配制磷酸盐缓冲液；2)将抗缪勒氏管激素(AMH)抗体溶解于校准品缓冲液中配置成不同的浓度。
配制化学发光底物液：1)配制0.2M，pH值为9.3的Tris-HCl缓冲液，并添加0.3mg/mL的二氧杂环乙烷；2)将碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物溶解于缓冲液中。
一种测定人体抗缪勒氏管激素(AMH)含量的磁微粒化学发光检测试剂盒使用方法包括如下步骤：
(1)将待测样本或校准品、试剂R1、试剂R2 37℃混合温育15min；
(2)将磁微粒加入上述反应体系后于37℃继续温育5min；
(3)洗涤，去除未结合的抗体和杂质后加入发光底物；
(4)加入发光底物，ALP催化底物发光后测定相对发光强度(RLU)；
在一定范围内RLΜ与抗缪勒氏管激素(AMH)抗体浓度呈反比，通过内插法就可以从标准曲线上读取待测样本的抗缪勒氏管激素(AMH)含量。
采用本发明上述检测试剂盒测定人体抗缪勒氏管激素(AMH)含量时的方法学鉴定数据可达到如下指标：
灵敏度－最小检出量为0.004ng/ml；
抗缪勒氏管激素(AMH)线性检测范围，0～30ng/ml；
精密度－分析内精密度平均为1.86％(n＝10)，分析间精密度平均为2.89％(n＝30)，精密度远低于国家要求，说明本发明试剂盒在实验过程中具有很好的可重复性；
交叉反应－配制一定浓度的交叉反应物作为样本用试剂盒进行检测，检测结果与样本配制浓度的比值(％)即为对该样本的交叉反应率，实验结果均＜1.0％；
抗干扰－干扰物存在测得值与干扰物不存在测得值的偏差≤15％。
稳定性—校准品放入37℃温箱7天，准确度符合要求，校准品降幅小于10％，试剂盒降幅小于50％。
上述步骤表明，本发明采用的竞争法的反应模式，利用化学发光检测技术与磁微粒免疫分离技术相结合的原理，定量检测人血清或血浆样品中的抗缪勒氏管激素(AMH)含量，确保了检测的灵敏度，由于实验采用竞争法不存在HOOK效应，无污染、特异性强、操作简单、并且对样品的前处理要求低、可快速高通量检测大批量样本，便于临床试剂应用。本发明为临床检测人血清中的抗缪勒氏管激素(AMH)提供了一种更准确、精确、方便、快捷和简单的方法。
附图说明
图1为本发明实施例2的线性实验的理论浓度与测试浓度的线性相关图；
图2为本发明实施例2的比对某知名厂家试剂的测试结果比较图。
具体实施方式
测定人体抗缪勒氏管激素(AMH)含量的磁微粒化学发光检测试剂盒的组成
一种测定人体抗缪勒氏管激素(AMH)含量的磁微粒化学发光检测试剂盒包括R1试剂、R2试剂、磁分离试剂、校准品液系列和化学发光底物液。
R1试剂包括：1)R1抗体：异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗缪勒氏管激素(AMH)单克隆抗体，浓度为1.0～3.0μg/mL；2)缓冲液：包括叠氮钠，浓度为0.98～0.99g/L；牛血清白蛋白，浓度为4～5g/L；三羟甲基氨基甲烷，摩尔浓度为0.01～0.06mol/L；其余为去离子水。R1试剂的缓冲液pH值为6.7～7.6。
R2试剂包括：1)R2抗体：碱性磷酸酶(ALP)标记的抗缪勒氏管激素(AMH)抗体，浓度为1.0～3.0μg/mL；2)缓冲液：包括叠氮钠，浓度为0.98～0.99g/L；牛血清白蛋白，浓度为4～5g/L；三羟甲基氨基甲烷，摩尔浓度为0.01～0.06mol/L；其余为去离子水。R1试剂的缓冲液pH值为6.7～7.6。
磁分离试剂包括：1)磁微粒：抗异硫氰酸荧光素(FITC)单克隆抗体包被的磁微粒，浓度为0.5～2mg/ml；2)缓冲液：包括叠氮钠，浓度为0.98～0.99g/L；牛血清白蛋白，浓度为4～5g/L；三羟甲基氨基甲烷，摩尔浓度为0.05～0.2mol/L；其余为去离子水。磁分离试剂的缓冲液pH值为7.5～9.0。
校准品液系列包括：1)抗缪勒氏管激素(AMH)抗原；2)缓冲液：包括叠氮钠，浓度为0.98～0.99g/L；牛血清白蛋白，浓度为4～5g/L；三羟甲基氨基甲烷，摩尔浓度为0.005～0.03mol/L；其余为去离子水。校准品液系列的缓冲液pH值为7.6。AMH抗原和缓冲液配制成为含有不同浓度(0.00，0.20，1.00，5.00，10.00，30.00ng/ml)的校准品液系列。
底物液为摩尔浓度0.05～0.1M碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物液，其中，发光底物液中二氧杂环乙烷化合物(APCL)的浓度为0.02～0.04mg/mL，缓冲液为摩尔浓度为0.02M的Tris-HCl，pH值为8～10。
一种测定人体抗缪勒氏管激素(AMH)含量的磁微粒化学发光检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
配制试剂R1：1)按照试剂R1缓冲液组分含量配制缓冲液，调节pH；2)制备异硫氰酸荧光素标记的抗缪勒氏管激素(AMH)单克隆抗体；3)将异硫氰酸荧光素标记的抗缪勒氏管激素(AMH)单克隆抗体用R1缓冲液进行稀释。
配制试剂R2：1)按照试剂R2缓冲液组分含量配制缓冲液，调节pH；2)制备碱性磷酸酶标记的抗缪勒氏管激素(AMH)抗体；3)将碱性磷酸酶标记的抗缪勒氏管激素(AMH)抗体用R2缓冲液进行稀释。
配制磁分离试剂：1)按照磁微粒缓冲液组分含量配制缓冲液；2)制备抗异硫氰酸荧光素单克隆抗体包被的磁微粒；3)将磁微粒用缓冲液进行稀释。
配制校准品液系列：1)按照校准品缓冲液组分含量配制缓冲液；2)将不同浓度的抗缪勒氏管激素(AMH)抗体分别溶解于校准品缓冲液中配置成不同浓度的校准品液。
配制化学发光底物液：1)配制Tris-HCl缓冲液，并添加二氧杂环乙烷化合物(APCL)；2)将碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物溶解于缓冲液中。
人体抗缪勒氏管激素(AMH)含量的磁微粒化学发光检测试剂盒的测定方法和绘制标准曲线
(1)首先，将50μl的校准品系列(浓度分别为0.00，0.20，1.00，5.00，10.00，30.00ng/ml)分别与50μl试剂R1、50μl试剂R2依次加入反应管中，37℃条件下混合温育15min；
(2)将上述试剂系列分别再与25μl磁分离试剂结合后于37℃继续温育5min；
(3)用清洗液洗涤3次以去除未结合的抗体和杂质；
(4)加入发光底物液150μl，ALP催化底物发光后采用利德曼自研化学发光检测仪测定相对发光强度(RLU)，获得抗缪勒氏管激素(AMH)浓度-发光值系列数值。
(5)根据抗缪勒氏管激素(AMH)浓度-发光值系列数值进行拟合，获得抗缪勒氏管激素(AMH)浓度-发光值标准曲线。
(6)根据拟合的抗缪勒氏管激素(AMH)浓度-发光值标准曲线计算测定待测样本的浓度值。
在一定范围内RLU与抗缪勒氏管激素(AMH)抗体浓度呈反比，通过内插法就可以从标准曲线上读取待测样本的抗缪勒氏管激素(AMH)含量。
实施例1一种测定人体抗缪勒氏管激素(AMH)含量的磁微粒化学发光检测试剂盒包括R1试剂、R2试剂、磁分离试剂、校准品液系列和底物液。
本实施例中，R1试剂包括：1)R1抗体：异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗缪勒氏管激素(AMH)单克隆抗体，浓度为1.0～3.0μg/mL；2)缓冲液：包括叠氮钠，浓度为0.989g/L；牛血清白蛋白，浓度为4.5g/L；三羟甲基氨基甲烷，摩尔浓度为0.05mol/L；其余为去离子水。R1试剂的缓冲液pH值优选为7.0。
本实施例中，R2试剂包括：1)R2抗体：碱性磷酸酶标记的抗缪勒氏管激素(AMH)抗体，浓度为1.5μg/ml；2)缓冲液：包括叠氮钠，浓度为0.989g/L；牛血清白蛋白，浓度为4.5g/L；三羟甲基氨基甲烷，摩尔浓度为0.05mol/L；其余为去离子水。R2试剂的缓冲液pH值为6.8。
本实施例中，磁分离试剂包括：1)磁微粒：抗异硫氰酸荧光素(FITC)单克隆抗体包被的磁微粒，浓度为1.0mg/ml；2)缓冲液：包括叠氮钠，浓度为0.989g/L；牛血清白蛋白，浓度为4.5g/L；三羟甲基氨基甲烷，摩尔浓度为0.05mol/L；其余为去离子水。磁分离试剂的缓冲液pH值为8.0。
本实施例中，校准品液系列包括：1)抗缪勒氏管激素(AMH)抗原；2)缓冲液：包括叠氮钠，浓度为0.989g/L；牛血清白蛋白，浓度为4.5g/L；三羟甲基氨基甲烷，摩尔浓度为0.025mol/L；其余为去离子水。校准品液系列的缓冲液pH值为7.6。AMH抗原和缓冲液配制成为含有不同浓度(0.00，0.20，1.00，5.00，10.00，30.00ng/ml)的校准品液系列。
本实施例中，底物液为碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物液，其中，发光底物液中二氧杂环乙烷化合物(APCL)的浓度为0.03mg/mL，缓冲液为摩尔浓度为0.02M的Tris-HCl，pH值为9.3。
实施例2本发明抗缪勒氏管激素(AMH)磁微粒化学发光检测试剂盒的各项性能评价
1、最低检测限
方法：用零浓度校准品作为样本进行检测，重复测定20次，得出20次测量结果的相对发光强度(RLU)值，计算其平均值(M)和标准差(SD)，得出M+2SD，根据零浓度校准品和相邻校准品之间的浓度-RLU进行两点回归拟合得出一次方程，将M+2SD(正反应)或M-2SD(负反应)的RLU值带入上述方程中，求出对应的浓度值，即为最低检测限。
合格标准：<0.05ng/ml
结论：灵敏度不大于0.05ng/mL，满足设计要求。
2、线性实验
分析方法：
用试剂盒最高浓度点校准品(F点)用该项目校准品稀释液倍比稀释到接近该项目分析灵敏度，形成若干浓度点样本。试剂盒定标后测试梯度样本，每个稀释浓度测试3次，分别求出测定结果的均值(yi)。以稀释浓度(xi)为自变量，以测定结果均值(yi)为因变量求出线性回归方程。按公式(1)计算线性回归的相关系数(r)。
合格标准：1.0-200ng/ml内，r>0.9900。
基于上表所示的数据，进行理论浓度和测试浓度的比对，如图1所示，基本在一条直线上，线性很好。
结论：r>0.9900，线性符合设计要求。
3、精密度
试验方法：
分析方法(分析内)：用高、低两个水平浓度的质控血清或新鲜人血清检测试剂，重复测试10次，按以下公式计算测定结果的均值和变异系数(CV)。
式中：Xi──待测血清样本的测定结果；──待测血清样本的均值；n──测定次数，此处为10。
分析方法(分析间)：分三次实验，用高、低两个水平浓度的质控血清或新鲜人血清检测试剂，重复测试10次，没一样本均得到30个结果，按以下公式计算测定结果的均值和变异系数(CV)。
式中：Xi──待测血清样本的测定结果；──待测血清样本的均值；n──测定次数，此处为30。
合格标准：
分析内：不大于10％
分析间：不大于15％
分析内
分析间
结论：研制试剂盒精密度分析内和分析间均符合要求。
4、HOOK效应
试验方法：按照试剂盒产品标准要求配制HOOK检验试剂，将其作为样本检测。
合格标准：发光值超过校准品最高浓度点发光值。
| AMH-STD浓度 | RLU |
| 0 | 1938 |
| 0.2 | 28271 |
| 1.0 | 128558 |
| 5 | 571072 |
| 10 | 1094349 |
| 30 | 3022720 |
结论：样本浓度在2000ng/ml范围内，未出现测值低于检测范围上限的情况，符合设计要求。
5、交叉反应
试验方法：按试剂盒产品标准要求，配制一定浓度的交叉反应物作为样本用试剂盒进行检测，检测结果与样本配制浓度的比值(％)即为对该样本的交叉反应率。
试验数据及合格标准：＜1.0％
| 交叉反应物 | 实际浓度 | 测试浓度 |
| 促卵泡生成素(FSH) | 150mU/ml | ≤0.05ng/ml |
| 促黄体生成素(LH) | 250mIU/ml | ≤0.05ng/ml |
| 雌二醇(E2) | 3000pg/ml | ≤0.05ng/ml |
结论：与其他常用性腺激素交叉反应均＜1.0％，符合要求。
6、抗干扰
试验方法：用同一批号的试剂和接近正常值的病人血清，向该血清中加干扰物配制成如下几种浓度的物质做标本，每个标本测两次。检测试剂特异性。干扰物存在测得值与干扰物不存在测得值的偏差≤15％被视为无干扰。
试验数据及合格标准：≤15％
7、稳定性
试剂盒及标品加速破坏性实验
验证方法：新配制并检验合格的试剂(包括STD，R1，R2，M)放入37℃温箱共放置7天(可超过7天)。若干天取出试剂，定标后(用4℃保存合格校准品)检测试剂准确性，质控偏差小于20％。
合格标准：校准品降幅小于10％，试剂盒降幅小于50％，准确度符合要求。
试剂盒整体37℃加速
校准品37℃加速
质控品
结论：校准品放入37℃温箱7天，准确度符合要求，校准品降幅小于10％，试剂盒降幅小于50％，符合要求。
8、试剂盒临床性能评价
检测200例血清，比对某知名厂家试剂测值，如图2所示，相关系数为R2＝0.9535，一致性较好。
采用本发明上述检测试剂盒测定人体抗缪勒氏管激素(AMH)含量时的方法学鉴定数据可达到如下指标：
灵敏度－最小检出量为0.004ng/ml；
抗缪勒氏管激素(AMH)线性检测范围，0～30ng/ml；
精密度－分析内精密度平均为1.86％(n＝10)，分析间精密度平均为2.89％(n＝30)，精密度远低于国家要求，说明本发明试剂盒在实验过程中具有很好的可重复性；
交叉反应－配制一定浓度的交叉反应物作为样本用试剂盒进行检测，检测结果与样本配制浓度的比值(％)即为对该样本的交叉反应率，实验结果均＜1.0％；
抗干扰－干扰物存在测得值与干扰物不存在测得值的偏差≤15％。
稳定性—校准品放入37℃温箱7天，准确度符合要求，校准品降幅小于10％，试剂盒降幅小于50％。
上述步骤表明，本发明采用的竞争法的反应模式，利用化学发光检测技术与磁微粒免疫分离技术相结合的原理，定量检测人血清或血浆样品中的抗缪勒氏管激素(AMH)含量，确保了检测的灵敏度，由于实验采用竞争法不存在HOOK效应，无污染、特异性强、操作简单、并且对样品的前处理要求低、可快速高通量检测大批量样本，便于临床试剂应用。本发明为临床检测人血清中的抗缪勒氏管激素(AMH)提供了一种更准确、精确、方便、快捷和简单的方法。
本发明提供的人体抗缪勒氏管激素(AMH)含量的磁微粒化学发光检测试剂盒可以与全自动化学发光分析仪联用，操作步骤极大简化，加大了检测速度和检测通量，提高了检测效率，同时避免了人为操作导致的误差。
所属领域的普通技术人员应当理解：以上任何实施例的讨论仅为示例性的，并非旨在暗示本发明的范围(包括权利要求)被限于这些例子；在本发明的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化，为了简明它们没有在细节中提供。因此，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何省略、修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (16)
1.一种检测人体抗缪勒氏管激素含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，包括：R1试剂、R2试剂、磁分离试剂、校准品液系列和化学发光底物液；
R1试剂为异硫氰酸荧光素标记的抗抗缪勒氏管激素单克隆抗体稀释液，R2试剂为碱性磷酸酶标记的抗缪勒氏管激素抗体稀释液，磁分离试剂为抗异硫氰酸荧光素单克隆抗体包被的磁微粒稀释剂，校准品液系列为含有不同浓度抗缪勒氏管激素抗原的稀释液，化学发光底物液为碱性磷酸酶催化发光的底物液。
2.根据权利要求1所述的检测人体抗缪勒氏管激素含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述R1试剂即异硫氰酸荧光素标记的抗缪勒氏管激素单克隆抗体稀释液是浓度为1.0～3.0μg/mL的异硫氰酸荧光素标记的抗缪勒氏管激素单克隆抗体经缓冲液稀释配成。
3.根据权利要求2所述的检测人体抗缪勒氏管激素含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述R1试剂即异硫氰酸荧光素标记的抗缪勒氏管激素单克隆抗体稀释液是浓度为1.5μg/mL的异硫氰酸荧光素标记的抗缪勒氏管激素单克隆抗体经缓冲液稀释配成。
4.根据权利要求3所述的检测人体抗缪勒氏管激素含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述R1试剂缓冲液pH值为7.0，缓冲液包括叠氮钠，浓度为0.99g/L；牛血清白蛋白，浓度为4.5g/L；三羟甲基氨基甲烷，摩尔浓度为0.05mol/L；其余为去离子水。
5.根据权利要求1所述的检测人体抗缪勒氏管激素含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述R2试剂即碱性磷酸酶标记的抗缪勒氏管激素抗体稀释液是由浓度为1.0～3.0μg/mL碱性磷酸酶标记的抗缪勒氏管激素抗原经缓冲液稀释而成。
6.根据权利要求5所述的检测人体抗缪勒氏管激素含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述R2试剂即碱性磷酸酶标记的抗缪勒氏管激素抗原稀释液是由浓度为1.5μg/mL碱性磷酸酶标记的抗缪勒氏管激素抗原经缓冲液稀释而成。
7.根据权利要求6所述的检测人体抗缪勒氏管激素含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述R2试剂缓冲液为pH值为6.8，缓冲液包括叠氮钠，浓度为0.99g/L；牛血清白蛋白，浓度为4.5g/L；三羟甲基氨基甲烷，摩尔浓度为0.05mol/L；其余为去离子水。
8.根据权利要求1所述的检测人体抗缪勒氏管激素含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述磁分离试剂为抗异硫氰酸荧光素单克隆抗体包被的磁微粒悬浮于缓冲液配制成浓度为0.5～2mg/mL的磁微粒溶液。
9.根据权利要求8所述的检测人体抗缪勒氏管激素含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述磁分离试剂为抗异硫氰酸荧光素单克隆抗体包被的磁微粒悬浮于缓冲液配制成浓度为1.0mg/mL的磁微粒溶液。
10.根据权利要求9所述的检测人体抗缪勒氏管激素含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述磁分离试剂缓冲液为pH值为8.0，缓冲液组分为包括叠氮钠，浓度为0.989g/L；牛血清白蛋白，浓度为4.5g/L；三羟甲基氨基甲烷，摩尔浓度为0.025mol/L；其余为去离子水。
11.根据权利要求1所述的检测人体抗缪勒氏管激素含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述校准品液系列为含有不同浓度抗缪勒氏管激素抗原的稀释液。
12.根据权利要求11所述的检测人体抗缪勒氏管激素含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述校准品液系列的缓冲液包括叠氮钠，浓度为0.98～0.99g/L；牛血清白蛋白，浓度为4～5g/L；三羟甲基氨基甲烷，摩尔浓度为0.005～0.03mol/L；其余为去离子水。
13.根据权利要求12所述的检测人体抗缪勒氏管激素含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述校准品液系列，浓度范围为0～30ng/mL，缓冲液pH值为7.6。
14.根据权利要求13所述的检测人体抗缪勒氏管激素含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述校准品液系列的不同浓度为0ng/ml、0.2ng/ml、1.0ng/ml、5.0ng/ml、10ng/ml、30ng/ml。
15.根据权利要求1所述的检测人体抗缪勒氏管激素含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物液是摩尔浓度0.1～0.3M的碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物液，pH值为8～10的摩尔浓度0.2M的Tris-HCl缓冲液，并含有0.2～0.4mg/mL的二氧杂环乙烷化合物(APCL)。
16.根据权利要求15所述的检测人体抗缪勒氏管激素含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物液是摩尔浓度为0.2M，pH值为9.3的摩尔浓度0.2M的Tris-HCl缓冲液，并含有0.3mg/mL的二氧杂环乙烷化合物(APCL)。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811391709.3A CN109521003A (zh) | 2018-11-21 | 2018-11-21 | 一种抗缪勒管激素磁微粒化学发光检测试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811391709.3A CN109521003A (zh) | 2018-11-21 | 2018-11-21 | 一种抗缪勒管激素磁微粒化学发光检测试剂盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109521003A true CN109521003A (zh) | 2019-03-26 |
Family
ID=65778103
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811391709.3A Withdrawn CN109521003A (zh) | 2018-11-21 | 2018-11-21 | 一种抗缪勒管激素磁微粒化学发光检测试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109521003A (zh) |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109975536A (zh) * | 2019-04-11 | 2019-07-05 | 安徽大千生物工程有限公司 | 抗缪勒激素胶乳增强比浊法检测试剂盒及其制备使用方法 |
| CN110531086A (zh) * | 2019-08-30 | 2019-12-03 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 一种测定人体前白蛋白含量的磁微粒化学发光试剂盒及其制备方法 |
| CN110531085A (zh) * | 2019-08-30 | 2019-12-03 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 一种测定人体神经丝轻链蛋白含量的磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法 |
| CN111579801A (zh) * | 2020-06-02 | 2020-08-25 | 苏州翊讯生物科技有限公司 | 用于抗缪勒氏管激素含量检测的单人份试剂盒及其检测方法 |
| CN112198321A (zh) * | 2020-09-17 | 2021-01-08 | 安徽安科生物工程（集团）股份有限公司 | 抗缪勒氏管激素检测试剂盒及其制备方法和使用方法 |
| CN112255406A (zh) * | 2020-09-29 | 2021-01-22 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 测定人体高尔基体蛋白含量的磁微粒化学发光检测试剂盒 |
| CN112462075A (zh) * | 2020-11-13 | 2021-03-09 | 三诺生物传感股份有限公司 | 一种碱性磷酸酶标记amh抗体结合物及其制备方法和应用 |
| CN113203868A (zh) * | 2021-04-28 | 2021-08-03 | 北京美联泰科生物技术有限公司 | 一种适用于amh检测试剂盒的缓冲液 |
| CN113252905A (zh) * | 2021-05-12 | 2021-08-13 | 北京赛诺浦生物技术有限公司 | 人生长分化因子-15磁微粒化学发光检测试剂盒及其应用 |
| CN115267210A (zh) * | 2022-08-03 | 2022-11-01 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种抗缪勒管激素的检测复合物、试剂盒及其制备方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103592445A (zh) * | 2013-10-16 | 2014-02-19 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 检测降钙素原的试剂盒 |
| CN106053791A (zh) * | 2016-06-30 | 2016-10-26 | 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 | 抗缪勒氏管激素化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法和应用 |
| WO2017070258A1 (en) * | 2015-10-19 | 2017-04-27 | Celmatix Inc. | Methods and systems for assessing infertility as a result of declining ovarian reserve and function |
| CN108051603A (zh) * | 2017-11-28 | 2018-05-18 | 泰州泽成生物技术有限公司 | 一种测定抗缪勒氏管激素含量的试剂盒及其测试方法 |
| CN108226464A (zh) * | 2018-02-05 | 2018-06-29 | 江苏泽成生物技术有限公司 | 一种测定甲状腺球蛋白含量的试剂盒及其测试方法 |
| CN108303554A (zh) * | 2018-02-08 | 2018-07-20 | 江苏麦得科生物科技有限公司 | 一种抗苗勒氏管激素的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒 |
| CN108362688A (zh) * | 2018-01-02 | 2018-08-03 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 一种25羟基维生素d磁微粒化学发光检测试剂盒 |
-
2018
- 2018-11-21 CN CN201811391709.3A patent/CN109521003A/zh not_active Withdrawn
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103592445A (zh) * | 2013-10-16 | 2014-02-19 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 检测降钙素原的试剂盒 |
| WO2017070258A1 (en) * | 2015-10-19 | 2017-04-27 | Celmatix Inc. | Methods and systems for assessing infertility as a result of declining ovarian reserve and function |
| CN106053791A (zh) * | 2016-06-30 | 2016-10-26 | 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 | 抗缪勒氏管激素化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法和应用 |
| CN108051603A (zh) * | 2017-11-28 | 2018-05-18 | 泰州泽成生物技术有限公司 | 一种测定抗缪勒氏管激素含量的试剂盒及其测试方法 |
| CN108362688A (zh) * | 2018-01-02 | 2018-08-03 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 一种25羟基维生素d磁微粒化学发光检测试剂盒 |
| CN108226464A (zh) * | 2018-02-05 | 2018-06-29 | 江苏泽成生物技术有限公司 | 一种测定甲状腺球蛋白含量的试剂盒及其测试方法 |
| CN108303554A (zh) * | 2018-02-08 | 2018-07-20 | 江苏麦得科生物科技有限公司 | 一种抗苗勒氏管激素的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒 |
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109975536B (zh) * | 2019-04-11 | 2022-04-12 | 安徽大千生物工程有限公司 | 抗缪勒激素胶乳增强比浊法检测试剂盒及其制备使用方法 |
| CN109975536A (zh) * | 2019-04-11 | 2019-07-05 | 安徽大千生物工程有限公司 | 抗缪勒激素胶乳增强比浊法检测试剂盒及其制备使用方法 |
| CN110531086A (zh) * | 2019-08-30 | 2019-12-03 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 一种测定人体前白蛋白含量的磁微粒化学发光试剂盒及其制备方法 |
| CN110531085A (zh) * | 2019-08-30 | 2019-12-03 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 一种测定人体神经丝轻链蛋白含量的磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法 |
| CN111579801A (zh) * | 2020-06-02 | 2020-08-25 | 苏州翊讯生物科技有限公司 | 用于抗缪勒氏管激素含量检测的单人份试剂盒及其检测方法 |
| CN111579801B (zh) * | 2020-06-02 | 2024-01-30 | 苏州翊讯生物科技有限公司 | 用于抗缪勒氏管激素含量检测的单人份试剂盒及其检测方法 |
| CN112198321A (zh) * | 2020-09-17 | 2021-01-08 | 安徽安科生物工程（集团）股份有限公司 | 抗缪勒氏管激素检测试剂盒及其制备方法和使用方法 |
| CN112255406A (zh) * | 2020-09-29 | 2021-01-22 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 测定人体高尔基体蛋白含量的磁微粒化学发光检测试剂盒 |
| CN112255406B (zh) * | 2020-09-29 | 2023-04-14 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 测定人体高尔基体蛋白含量的磁微粒化学发光检测试剂盒 |
| CN112462075A (zh) * | 2020-11-13 | 2021-03-09 | 三诺生物传感股份有限公司 | 一种碱性磷酸酶标记amh抗体结合物及其制备方法和应用 |
| CN113203868B (zh) * | 2021-04-28 | 2022-04-01 | 北京美联泰科生物技术有限公司 | 一种适用于amh检测试剂盒的缓冲液 |
| CN113203868A (zh) * | 2021-04-28 | 2021-08-03 | 北京美联泰科生物技术有限公司 | 一种适用于amh检测试剂盒的缓冲液 |
| CN113252905A (zh) * | 2021-05-12 | 2021-08-13 | 北京赛诺浦生物技术有限公司 | 人生长分化因子-15磁微粒化学发光检测试剂盒及其应用 |
| CN115267210A (zh) * | 2022-08-03 | 2022-11-01 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种抗缪勒管激素的检测复合物、试剂盒及其制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109521003A (zh) | 一种抗缪勒管激素磁微粒化学发光检测试剂盒 | |
| Su et al. | Body size affects measures of ovarian reserve in late reproductive age women | |
| Kumar et al. | Development of a second generation anti-Müllerian hormone (AMH) ELISA | |
| CN107422129A (zh) | 一种超敏的心肌肌钙蛋白i磁微球免疫比浊检测方法及检测试剂盒 | |
| Sahmay et al. | Serum anti-müllerian hormone, follicle stimulating hormone and antral follicle count measurement cannot predict pregnancy rates in IVF/ICSI cycles | |
| CN102998467A (zh) | β人绒毛膜促性腺激素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN109917134A (zh) | 一种校准品稳定剂、测定c肽的检测试剂盒及检测方法 | |
| CN109001472A (zh) | 人促甲状腺素受体抗体化学发光检测试剂盒及其制备方法和使用方法 | |
| CN106168621A (zh) | 褪黑素在预测卵巢储备、ivf‑et结局中作用的研究方法与应用 | |
| CN113125696B (zh) | 一种雌二醇均相化学发光检测试剂盒及其应用 | |
| CN107449771A (zh) | 酶促化学发光底物 | |
| CN101750501A (zh) | 女性不孕不育检测蛋白芯片及其试剂盒 | |
| CN108982482A (zh) | 抑制素b化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN109212193A (zh) | 用于临床检测异常凝血酶原的试剂盒 | |
| CN103048475A (zh) | 游离人绒毛膜促性腺激素β亚单位的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒及其制备和检测方法 | |
| CN108303528A (zh) | 一种电化学发光分析仪所用底物及其制备方法和应用 | |
| CN107991500A (zh) | 糖化血红蛋白检测试剂盒 | |
| CN103048473A (zh) | 一种促卵泡生成激素的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒及其制备方法和检测方法 | |
| Yu et al. | Establishment of a homogeneous immunoassay-light-initiated chemiluminescence assay for detecting anti-Müllerian hormone in human serum | |
| CN103344763A (zh) | 乳胶增强型afp检测试剂盒及其制备方法和应用 | |
| CN109212196A (zh) | 一种快速检测游离雌三醇的试剂盒 | |
| CN109324038B (zh) | 一种用于促黄体生成素测定试剂盒的磁微粒缓冲液 | |
| CN112269026A (zh) | 一种适用于tsh粉末状国际标准物质浓度准确配制的方法 | |
| CN101858917B (zh) | Axl单克隆抗体的应用及以Axl为检测指标的胎膜早破检测试剂盒和制备方法 | |
| CN108303554A (zh) | 一种抗苗勒氏管激素的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WW01 | Invention patent application withdrawn after publication |
Application publication date: 20190326 |
|
| WW01 | Invention patent application withdrawn after publication |