CN109220805A - 一种红豆树组培苗瓶外生根方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种红豆树组培苗瓶外生根方法，该方法包括以下步骤：选用籽苗茎段作为外植体，进行消毒灭菌操作后置入诱导培养基中进行丛生芽诱导，以诱导的丛生芽茎段作外植体进行增殖培养，将增殖培养高于3~5cm的健壮瓶苗移至自然光下3~4d后，打开透气膜于常温下炼苗3~4d，再将增殖丛芽剪成单个芽，基部在NAA100~200mg/L中速醮4~5s，扦插至已消毒灭菌的基质中进行瓶外生根培养，生根率达97.78%。本发明采用瓶外生根的方法将组培苗的生根过程和炼苗驯化相结合，提高了组培苗的质量与存活率，简化了组培生产环节，缩短了红豆树出苗周期，降低培育成本，有利于推动工厂化育苗。
Description
技术领域
本发明涉及一种红豆树组培苗瓶外生根方法，属于红豆树的栽培种植技术领域。
背景技术
红豆树Ormosia hosiei Hemsl. et Wils.是蝶形花科红豆属常绿乔木，为我国特有乡土树种，多生于海拔400～650m的丘陵、河边或山谷常绿阔叶林中。其心材坚硬，深褐色，边材淡黄褐色，纹理别致，是最著名的龙泉宝剑剑鞘和剑柄的首选材料；其树形优美，叶色亮绿，秋季荚果吐红，是良好的园林绿化观赏树种；红豆树还具有较好的药用价值，其根、茎、皮、叶均可入药，主治跌打损伤、风湿关节炎及无名肿毒等病症。红豆树是集珍贵用材、药用、园林绿化、森林文化于一体的乡土树种。红豆树开花结实规律不稳定，结实晚且种子大小年现象特别严重，一般树龄35年左右才开花结实，5～10a结果一次，甚至几十年都不结种子。目前其资源处于濒危状态，特别野生红豆树资源趋于枯竭，已被列为国家Ⅱ级重点保护珍稀濒危野生植物。随着人们生活品质的不断提高，对优质用材的需求量也日益增加，近年来红豆树市场需求大，供不应求。前人的研究表明红豆树扦插、嫁接繁殖均存在成活率低的现象，已有的文献“红豆树组织培养技术（范辉华，李朝辉等.福建林业科技，2011年9月第3期第38卷）”中的诱导率较低，仅52.05%，在此基础上申请号为201210144494.1的中国发明专利申请公开了一种红豆树组织培养方法，采用瓶内生根的方式，虽然其生根率达85.6%，但此方法耗时较长且后期还需进行炼苗移栽，从生根至炼苗移栽完成需要60d以上，未能解决红豆树出苗缓慢的问题，为此，本发明采用生根与炼苗移栽为一体的方法即瓶外生根方法进行红豆树组培苗的生根，探索出一条能提高红豆树繁殖系数，缩短出苗周期，节约成本的高效途径，对于快速培育红豆树苗木，扩大栽培具有重要意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：提供一种红豆树组培苗瓶外生根方法，提高红豆树组培苗生根率、缩短出苗周期并降低生产成本，以解决上述现有技术中存在的问题。
本发明采取的技术方案为：一种红豆树组培苗瓶外生根方法，该方法包括以下步骤：
（1）消毒灭菌：将红豆树幼苗茎段依次在质量浓度为0.1%KMnO4中灭菌10min、质量浓度为75%的乙醇30s、质量浓度为0.1%HgCl28min，两个消毒灭菌期间用无菌水冲洗4~5次；
（2）初代培养：将步骤（1）消毒后的籽苗茎段在无菌超净工作台中剪切成1~1.5cm长，接种于下列培养基中：1/2MS+TDZ0.02mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L进行诱导培养生产丛生芽；
（3）增殖培养：将步骤（2）所得的丛生芽在无菌超净工作台中剪切成1~1.5cm长，接种于下列培养基中：WPM+6-BA1mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L进行增殖培养；
（4）瓶外生根培养：将步骤（3）所得的增殖苗切分成单株后，置于NAA100-200mg/L生根液中速醮无根苗基部4~5s后放置10min，插入已消毒好的基质中，生长30~45d，得到生根苗；
步骤（1）中的幼苗茎段来源于红豆树种子经90℃热水浸泡24h后，置于消毒灭菌的纯蛭石基质中萌发20d的籽苗茎段，培养含杂菌较少的幼嫩植株便于消毒灭菌。
步骤（2）和步骤（3）的培养过程中各自使用的培养基每间隔30d更换一次相同培养基，避免培养基使用时间过长，水分蒸发使培养基过干，影响植株基部正常营养吸收。
步骤（2）和步骤（3）中的培养条件为：温度（25±2）℃、光照强度3000lx、光照时间为12h/d，pH调至6.0，培养地点为无菌培养室，提供红豆树组织培养适宜的培养条件，在无菌培养室培养避免空气污染。
步骤（4）中的培养条件为：温室大棚温度（24±2）℃、湿度60%~70%，提供红豆树瓶外生根适宜的温度和湿度条件，。
步骤（4）中的被切割的单株，高在4~5cm，基部均斜剪成45℃，使芽的基部充分与培养基接触，提高生根率。
步骤（4）中的基质是经高压灭菌消毒，基质由泥炭土、珍珠岩、蛭石按3：1：3的体积比混合制成，将基质浇水至充分湿润并拌匀后使用，基质湿度为65%，扦插在直径为10cm的塑料容器中，用保鲜膜罩住植株，以保持基质湿度和减少植株的水分散失。
本发明的有益效果：与现有技术相比，本发明利用瓶外生根培养基质（体积比为3：1：3的泥炭土：珍珠岩：蛭石）和NAA100-200mg/L生根液的方式进行红豆树组培苗的生根，30~45d后，生根率达97.78%，大大提高了生根率，试管外生根比瓶内生根率高10.41%，简化了组织培养生产工序，缩短了出苗时间，节省了组织培养空间，与试管内生根相比，节约成本55.77%。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明进行进一步介绍。
实施例1：一种红豆树组培苗瓶外生根方法，该方法包括以下步骤：
（1）将红豆树幼苗茎段依次在质量浓度为0.1%KMnO4中灭菌10min、质量浓度为75%的乙醇30s、质量浓度为0.1%HgCl28min，两个消毒灭菌期间用无菌水冲洗5次；
（2）将步骤1消毒好的茎段在超净工作台中剪切成1.5cm长，接种于1/2MS+TDZ0.02mg/L+NAA0.2mg/L培养基中进行丛生芽诱导；
（3）将步骤2所得的健壮丛生芽在超净工作台中剪切成1.5cm长，接种于WPM+6-BA1mg/L+NAA0.5mg/L培养基中进行增殖培养；
（4）将步骤3所得的高4cm健壮芽带组培瓶移至自然光下3d后，打开透气膜于常温下炼苗3d，取出基部斜剪成45°，置于NAA150mg/L生根液中速醮无根苗基部5s后放置10min；
（5）将步骤4处理好的芽插入营养钵内，营养钵内填充消毒好的基质，基质为蛭石：珍珠岩（体积比3：1），基质充分湿润，盖上保鲜膜，以保证基质湿度与减少植株水份散失，大棚温度24℃，湿度65%，生根培养40d。
实施例2：一种红豆树组培苗瓶外生根方法，该方法包括以下步骤：
（1）将红豆树幼苗茎段依次在质量浓度为0.1%KMnO4中灭菌10min、质量浓度为75%的乙醇30s、质量浓度为0.1%HgCl28min，两个消毒灭菌期间用无菌水冲洗5次；
（2）将步骤1消毒好的茎段在超净工作台中剪切成1.5cm长，接种于1/2MS+TDZ0.02mg/L+NAA0.2mg/L培养基中进行丛生芽诱导；
（3）将步骤2所得的健壮丛生芽在超净工作台中剪切成1.5cm长，接种于WPM+6-BA1mg/L+NAA0.5mg/L培养基中进行增殖培养；
（4）将步骤3所得的高4cm健壮芽带组培瓶移至自然光下3d后，打开透气膜于常温下炼苗3d，取出基部斜剪成45°，置于NAA200mg/L生根液中速醮无根苗基部5s后放置10min；
（5）将步骤4处理好的芽插入营养钵内，营养钵内填充消毒好的基质，基质为泥炭土+珍珠岩（体积比3：1），基质充分湿润，盖上保鲜膜，以保证基质湿度与减少植株水份散失，大棚温度24℃，湿度65%，生根培养40d。
实施例3：一种红豆树组培苗瓶外生根方法，该方法包括以下步骤：
（1）将红豆树幼苗茎段依次在质量浓度为0.1%KMnO4中灭菌10min、质量浓度为75%的乙醇30s、质量浓度为0.1%HgCl28min，两个消毒灭菌期间用无菌水冲洗5次；
（2）将步骤1消毒好的茎段在超净工作台中剪切成1.5cm长，接种于1/2MS+TDZ0.02mg/L+NAA0.2mg/L培养基中进行丛生芽诱导；
（3）将步骤2所得的健壮丛生芽在超净工作台中剪切成1.5cm长，接种于WPM+6-BA1mg/L+NAA0.5mg/L培养基中进行增殖培养；
（4）将步骤3所得的高4cm健壮芽带组培瓶移至自然光下3d后，打开透气膜于常温下炼苗3d，取出基部斜剪成45°，置于NAA150mg/L生根液中速醮无根苗基部5s后放置10min；
（5）将步骤4处理好的芽插入营养钵内，营养钵内填充消毒好的基质，基质为泥炭土：珍珠岩：蛭石（体积比3：1：3），基质充分湿润，盖上保鲜膜，以保证基质湿度与减少植株水份散失，大棚温度24℃，湿度65%，生根培养40d。
实施例4：一种红豆树组培苗瓶外生根方法，该方法包括以下步骤：
（1）将红豆树幼苗茎段依次在质量浓度为0.1%KMnO4中灭菌10min、质量浓度为75%的乙醇30s、质量浓度为0.1%HgCl28min，两个消毒灭菌期间用无菌水冲洗5次；
（2）将步骤1消毒好的茎段在超净工作台中剪切成1.5cm长，接种于1/2MS+TDZ0.02mg/L+NAA0.2mg/L培养基中进行丛生芽诱导；
（3）将步骤2所得的健壮丛生芽在超净工作台中剪切成1.5cm长，接种于WPM+6-BA1mg/L+NAA0.5mg/L培养基中进行增殖培养；
（4）将步骤3所得的高4cm健壮芽带组培瓶移至自然光下3d后，打开透气膜于常温下炼苗3d，取出基部斜剪成45°，置于NAA100mg/L生根液中速醮无根苗基部5s后放置10min；
（5）将步骤4处理好的芽插入营养钵内，营养钵内填充消毒好的基质，基质为泥炭土：珍珠岩：蛭石（体积比3：1：3），基质充分湿润，盖上保鲜膜，以保证基质湿度与减少植株水份散失，大棚温度24℃，湿度65%，生根培养40d。
实施例5：一种红豆树组培苗瓶外生根方法，该方法包括以下步骤：
（1）将红豆树幼苗茎段依次在质量浓度为0.1%KMnO4中灭菌10min、质量浓度为75%的乙醇30s、质量浓度为0.1%HgCl28min，两个消毒灭菌期间用无菌水冲洗5次；
（2）将步骤1消毒好的茎段在超净工作台中剪切成1.5cm长，接种于1/2MS+TDZ0.02mg/L+NAA0.2mg/L培养基中进行丛生芽诱导；
（3）将步骤2所得的健壮丛生芽在超净工作台中剪切成1.5cm长，接种于WPM+6-BA1mg/L+NAA0.5mg/L培养基中进行增殖培养；
（4）将步骤3所得的高4cm健壮芽带组培瓶移至自然光下3d后，打开透气膜于常温下炼苗3d，取出基部斜剪45°，置于NAA200mg/L生根液中速醮无根苗基部5s后放置10min；
（5）将步骤4处理好的芽插入营养钵内，营养钵内填充消毒好的基质，基质为泥炭土：珍珠岩：蛭石（体积比3：1：3），基质充分湿润，盖上保鲜膜，以保证基质湿度与减少植株水份散失，大棚温度24℃，湿度65%，生根培养40d。
为了说明本发明的效果，进行如下对比试验，如表1所示：
从表1不同基质和生根液浓度对试管外生根的结果得出，在基质蛭石+珍珠岩（3：1）和泥炭土：珍珠岩：蛭石（3：1：3）上进行瓶外生根效果均较好，生根率分别为91.11%和97.78%，最差的基质为泥炭土+珍珠岩（3：1），平均生根率仅40%；采用不同浓度NAA速醮处理中，以150mg/L效果较佳，平均生根率为71.11%,分别比100mg/L、200mg/L高13.33%和 2.22%。
从表2方差分析结果可以看出，不同基质和NAA浓度对瓶外生根率均存在极显著影响（P<0.01）。
综上实例结果得出，红豆树瓶外生根最佳的生根液和基质组合的方法为NAA150mg/L生根液速醮无根苗基部5s，放置10min，置于基质泥炭土：珍珠岩：蛭石（3：1：3）中生根，保持基质湿度65%，生根率可达97.78%。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内，因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。
Claims (7)
1.一种红豆树组培苗瓶外生根方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
（1）消毒灭菌：将红豆树幼苗茎段依次在质量浓度为0.1%KMnO4中灭菌10min、质量浓度为75%的乙醇灭菌0.5min、质量浓度为0.1%HgCl2灭菌8min，两个消毒灭菌期间用无菌水冲洗4~5次；
（2）初代培养：将步骤（1）消毒后的茎段在无菌超净工作台中剪切成1~1.5cm长，接种于下列培养基中：1/2MS+TDZ0.02mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L进行诱导培养生产丛生芽；
（3）增殖培养：将步骤（2）所得的丛生芽在无菌超净工作台中剪切成1~1.5cm长，接种于下列培养基中：WPM+6-BA1mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L进行增殖培养得到增殖苗；
（4）瓶外生根培养：将步骤（3）所得的增殖苗切分成单株后，置于NAA100~200mg/L生根液中速醮无根苗基部4~5s后放置10min，插入已消毒好的基质中，生长30~45d，得到生根苗。
2.根据权利要求1所述的一种红豆树组培苗瓶外生根方法，其特征在于：步骤（1）所述的幼苗茎段获取方法为：红豆树种子经90℃热水浸泡24h后，置于消毒灭菌的纯蛭石基质中萌发20d，高于12cm的籽苗茎段。
3.根据权利要求1所述的红豆树组培苗瓶外生根方法，其特征在于，步骤（2）和步骤（3）培养过程中各自使用的培养基每间隔30d更换一次相同培养基。
4.根据权利要求1所述的红豆树组培苗瓶外生根方法，其特征在于，步骤（2）和步骤（3）中培养条件均为：温度23~27℃、光照强度3000lx、光照时间为12h/d，pH调至6.0，培养地点为无菌培养室。
5.根据权利要求1所述的红豆树组培苗瓶外生根方法，其特征在于，步骤（4）中瓶外生根培养条件为：温室大棚温度22-26℃、湿度60%~70%。
6.根据权利要求1所述的红豆树组培苗瓶外生根方法，其特征在于，步骤（4）中被切割的单株，高在4~5cm，基部均斜剪成45°。
7.根据权利要求1所述的红豆树组培苗瓶外生根方法，其特征在于，步骤（4）中基质是经高压灭菌消毒，基质由泥炭土、珍珠岩、蛭石按3：1：3的体积比混合制成，将基质浇水至湿润并拌匀后使用，基质湿度为65%，扦插在10cm的盛有基质的塑料容器中，用保鲜膜罩住植株。
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