CN108956606A - 一种防晒护肤品防晒功效的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及检测技术领域，具体涉及一种防晒护肤品防晒功效的检测方法；本发明以斑马鱼为实验载体，通过对比紫外线照射前后斑马鱼鱼鳍完整性对防晒类护肤品的防晒功效进行评价；本发明实验周期短、成本低廉，并能科学有效的对防晒类护肤品的防晒功效进行评价。
Description
技术领域
本发明涉及检测技术领域，具体涉及一种防晒护肤品防晒功效的检测方法。
背景技术
随着人们物质生活水平的不断提升，生活观念的改观，在外出工作、旅游、购物等活动的时候皮肤会长时间暴露在紫外线辐射下。为达到防止肌肤被晒黑、晒伤等目的而采取一些方法来阻隔或吸收紫外线。一般的防晒方法：涂抹防晒产品、使用防晒衣等物品、食用防晒食物等。由于涂抹防晒类护肤品简洁方便，因此越来越多的人外出会擦涂防晒类护肤品。
防晒护肤品的功效主要取决于防晒护肤品的SPF和PA值，SPF指数高，紫外线防护时间就会长。传统的防晒类护肤品的防晒功效主要是用小鼠、猴子甚至人体进行实验，这些实验方法的实验周期长，费用高，不适合大量外源物质的筛选。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的目在于，提供一种防晒护肤品防晒功效的检测方法；该方法能快速，并科学有效的对防晒类护肤品的防晒功效进行评价。
本发明是通过以下技术方案来实现的：
一种防晒护肤品防晒功效的检测方法，具体方法为：
(1)将待检测的防晒护肤品溶解到含有斑马鱼的养殖水中，所述待检测的防晒护肤品在养殖水中的浓度为400-800mg/L；
(2)将含有待检测的防晒护肤品、斑马鱼的养殖水,于紫外线照射，以含有斑马鱼的养殖水组不经过紫外线照射为空白对照(-UV)，含有斑马鱼的养殖水组经过紫外线照射为模型对照(+UV)；
(3)取出步骤(2)中各组经过紫外线照射的斑马鱼，拍取斑马鱼卵黄囊以下至尾部的照片，聚焦在斑马鱼鱼鳍部位，测量斑马鱼鱼鳍面积；
(4)通过对比含有防晒护肤品养殖水中的斑马鱼鱼鳍与-UV和+UV中斑马鱼鱼鳍面积的大小，对所述防晒护肤品的防晒效果进行检测。
所述防晒护肤品防晒功效的检测方法，具体方法为：
(1)准备：
实验前，挑选一对雌雄斑马鱼于交配盒，用隔板将斑马鱼雌雄分开，夜晚或黑暗状态放置10h；第二天早上抽开隔板，斑马鱼交配产卵；捞出斑马鱼，收集斑马鱼鱼卵；
(2)以抽开隔板时间为0hpf(hours post-fertilization)，在72hpf时开始实验；
(3)具体实验：
A.配制好实验溶液，以养殖水组不经过紫外线照射为-UV，以养殖水组经过紫外线照射为+UV；
B.用玻璃平皿装载斑马鱼，用养殖水或PBS清洗2-3遍，将每条斑马鱼编号，置于体式显微镜下拍照；对体式显微镜进行长度标定，在体式显微镜5倍镜下进行拍照，拍取斑马鱼卵黄囊以下至尾部的照片，聚焦在斑马鱼鱼鳍部位，对应并记录好编号，用6孔板为实验容器，每孔1条斑马鱼，加入实验溶液5ml；
C.将加入实验溶液和斑马鱼的6孔板置于CL-1000紫外交联仪(波长302nm和365nm)下照射，每次照射30s，共照射5-6次；
D.照射完毕后，将斑马鱼从6孔板用塑料吸管吸出，用养殖水清洗1-2遍。然后将斑马鱼转移至24孔板，对应并记录好斑马鱼编号；将24孔板置于生化培养箱中培养；
E.于紫外线照射后24、48h时，在体式显微镜5倍镜下进行拍照，拍取斑马鱼卵黄囊以下至尾部的照片，聚焦在斑马鱼鱼鳍部位，记录照片和对应的斑马鱼的编号；导出图片至电脑，使用Image测量斑马鱼鱼鳍面积；
F.通过对比含有防晒护肤品养殖水中的斑马鱼鱼鳍与-UV和+UV中斑马鱼鱼鳍面积的大小，对所述防晒护肤品的防晒效果进行检测。
较佳地，所述挑选的雌雄斑马鱼为野生型AB系斑马鱼。
较佳地，所述(1)中实验前，每晚22:00左右，挑选一对雌雄斑马鱼于交配盒，用隔板将斑马鱼雌雄分开，夜晚或黑暗状态放置10h；第二天早上8:00左右抽开隔板，斑马鱼交配产卵；捞出斑马鱼，收集斑马鱼鱼卵。
较佳地，所述24孔板置于生化培养箱，培养箱温度为28±0.5℃。
本发明以斑马鱼为实验载体，通过斑马鱼鱼鳍完整性对防晒类护肤品的防晒功效进行评价。经过长时间科学验证，模式生物斑马鱼能很好解决这些问题。斑马鱼个体小，易饲养，繁殖快，实验周期短，成本低廉，与人类基因同源性达到87％。因此能快速，并科学有效的对防晒类护肤品的防晒功效进行评价。斑马鱼鱼鳍透明，并对外界环境刺激非常敏感，在受到紫外线辐射后会做出相应反应。因此斑马鱼可以很好的对防晒类护肤品的防晒功效进行评价。
附图说明
图1为本发明以不同浓度的奥克立林，紫外线照射前、照射后1天、2天斑马鱼鱼鳍面积对照；以无紫外线照射的养殖水组作为-UV，以经过紫外线照射的养殖水组作为+UV。
图2为本发明以不同浓度的奥克立林紫外线照射后1天、2天斑马鱼鱼鳍相对面积对照；以无紫外线照射的养殖水组作为-UV，以经过紫外线照射的养殖水组作为+UV。
图3为本发明以不同浓度的奥克立林紫外线照射前斑马鱼鱼鳍照片；以无紫外线照射的养殖水组作为-UV，以经过紫外线照射的养殖水组作为+UV。
图4为本发明以不同浓度的奥克立林紫外线照射后1天斑马鱼鱼鳍照片；以无紫外线照射的养殖水组作为-UV，以经过紫外线照射的养殖水组作为+UV。
图5为本发明以不同浓度的奥克立林紫外线照射后2天斑马鱼鱼鳍照片；以无紫外线照射的养殖水组作为-UV，以经过紫外线照射的养殖水组作为+UV。
具体实施方式
一种防晒护肤品防晒功效的检测方法，具体实验方法为：
(1)实验前(大概每晚22:00)，挑选一对雌雄(野生型AB系)斑马鱼于交配盒，用隔板将斑马鱼雌雄分开，夜晚(黑暗)状态放置10h。
(2)第二天早上(8:00左右)抽开隔板，斑马鱼交配产卵。
(3)捞出斑马鱼，收集斑马鱼鱼卵。
(4)以抽开隔板时间为0hpf，在72hpf时开始实验。
(5)配制好实验溶液，以养殖水组不经过紫外线照射为-UV，以养殖水组经过紫外线照射为+UV。
(6)用玻璃平皿装载斑马鱼，用养殖水(或PBS)清洗2～3遍。将每条斑马鱼编号，置于体式显微镜下拍照。
(7)对体式显微镜进行长度标定。在体式显微镜5倍镜下进行拍照，拍取斑马鱼卵黄囊以下至尾部的照片，聚焦在斑马鱼鱼鳍部位。对应并记录好编号，用6孔板为实验容器，每孔1条斑马鱼，加入实验溶液5ml。
(8)将加入实验溶液和斑马鱼的6孔板置于CL-1000紫外交联仪(波长302nm和365nm)下照射，每次照射30s，共照射5～6次。
(9)照射完毕后，将斑马鱼从6孔板用塑料吸管吸出，用养殖水清洗1～2遍。然后将斑马鱼转移至24孔板，对应并记录好斑马鱼编号。
(10)将24孔板置于生化培养箱，于28±0.5℃培养。
(11)于紫外线照射后24、48h时，在体式显微镜5倍镜下进行拍照，拍取斑马鱼卵黄囊以下至尾部的照片，聚焦在斑马鱼鱼鳍部位。记录照片和对应的斑马鱼的编号。
(12)导出图片至电脑，使用Image测量斑马鱼鱼鳍面积。
-UV组，相对于紫外线照射前，发育24、48h鱼鳍面积的变化，见表1。
表1
| 紫外线照射情况 | -UV |
| 紫外线照射前 | 100.00％ |
| 紫外线照射24h | 134.20±2.04％ |
| 紫外线照射48h | 159.98±5.87％ |
+UV组和药物浓度组，相对于-UV组鱼鳍面积比例的变化，详见表2.
表2
由上表1表2可以得出如下结论：
(1)-UV组，斑马鱼鱼鳍完整，且鱼鳍面积随着时间推移正常发育。
(2)+UV组，斑马鱼鱼鳍与-UV相比较有明显损伤。
(3)与-UV组相比，奥克立林各浓度组有明显损伤，与+UV组相比，斑马鱼鱼鳍面积损伤较小。且随着浓度的增加，而损伤面积越小。
(4)根据-UV、+UV和药物组的数据比较，斑马鱼防晒模型有效，模型建立成功。
上述实施例，只是本发明的较佳实施例，并非用来限制本发明实施范围，故凡以本发明权利要求所述的特征及原理所做的等效变化或修饰，均应包括在本发明权利要求范围之内。
Claims (5)
1.一种防晒护肤品防晒功效的检测方法，其特征在于，具体方法为：
(1)将待检测的防晒护肤品溶解到含有斑马鱼的养殖水中，所述待检测的防晒护肤品在养殖水中的浓度为400-800mg/L；
(2)将含有待检测的防晒护肤品、斑马鱼的养殖水,于紫外线照射，以含有斑马鱼的养殖水组不经过紫外线照射为空白对照-UV，含有斑马鱼的养殖水组经过紫外线照射为模型对照+UV；
(3)取出步骤(2)中各组经过紫外线照射的斑马鱼，拍取斑马鱼卵黄囊以下至尾部的照片，聚焦在斑马鱼鱼鳍部位，测量斑马鱼鱼鳍面积；
(4)通过对比含有防晒护肤品养殖水中的斑马鱼鱼鳍与-UV和+UV中斑马鱼鱼鳍面积的大小，对所述防晒护肤品的防晒效果进行检测。
2.如权利要求1所述防晒护肤品防晒功效的检测方法，其特征在于，具体方法为：
(1)准备：
实验前，挑选一对雌雄斑马鱼于交配盒，用隔板将斑马鱼雌雄分开，夜晚或黑暗状态放置10h；第二天早上抽开隔板，斑马鱼交配产卵；捞出斑马鱼，收集斑马鱼鱼卵；
(2)以抽开隔板时间为0hpf(hours post-fertilization)，在72hpf时开始实验；
(3)具体实验：
A.配制好实验溶液，以养殖水组不经过紫外线照射为空白对照(-UV)，以养殖水组经过紫外线照射为模型对照(+UV)；
B.用玻璃平皿装载斑马鱼，用养殖水或PBS清洗2-3遍，将每条斑马鱼编号，置于体式显微镜下拍照；对体式显微镜进行长度标定，在体式显微镜5倍镜下进行拍照，拍取斑马鱼卵黄囊以下至尾部的照片，聚焦在斑马鱼鱼鳍部位，对应并记录好编号，用6孔板为实验容器，每孔1条斑马鱼，加入实验溶液5ml；
C.将加入实验溶液和斑马鱼的6孔板置于CL-1000紫外交联仪(波长302nm和365nm)下照射，每次照射30s，共照射5-6次；
D.照射完毕后，将斑马鱼从6孔板用塑料吸管吸出，用养殖水清洗1-2遍。然后将斑马鱼转移至24孔板，对应并记录好斑马鱼编号；将24孔板置于生化培养箱中培养；
E于紫外线照射后24、48h时，在体式显微镜5倍镜下进行拍照，拍取斑马鱼卵黄囊以下至尾部的照片，聚焦在斑马鱼鱼鳍部位，记录照片和对应的斑马鱼的编号；导出图片至电脑，使用Image测量斑马鱼鱼鳍面积；
F.通过对比含有防晒护肤品养殖水中的斑马鱼鱼鳍与-UV和+UV中斑马鱼鱼鳍面积的大小，对所述防晒护肤品的防晒效果进行检测。
3.如权利要求2所述防晒护肤品防晒功效的检测方法，其特征在于，所述挑选的雌雄斑马鱼为野生型AB系斑马鱼。
4.如权利要求2所述防晒护肤品防晒功效的检测方法，其特征在于，所述(1)中实验前，每晚22:00，挑选一对雌雄斑马鱼于交配盒，用隔板将斑马鱼雌雄分开，夜晚或黑暗状态放置10h；第二天早上8:00抽开隔板，斑马鱼交配产卵；捞出斑马鱼，收集斑马鱼鱼卵。
5.如权利要求2所述防晒护肤品防晒功效的检测方法，其特征在于，所述24孔板置于生化培养箱，培养箱温度为28±0.5℃。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20181207 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |