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CN108884037A - 作为登革热病毒复制抑制剂的经取代的吲哚啉衍生物 - Google Patents

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CN108884037A
CN108884037A CN201780021323.0A CN201780021323A CN108884037A CN 108884037 A CN108884037 A CN 108884037A CN 201780021323 A CN201780021323 A CN 201780021323A CN 108884037 A CN108884037 A CN 108884037A
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A.D.M.马查德
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Katholieke Universiteit Leuven
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Abstract

Description

作为登革热病毒复制抑制剂的经取代的吲哚啉衍生物
本发明涉及经取代的吲哚啉衍生物、通过使用所述化合物预防或治疗登革热病毒感染的方法，并且还涉及所述化合物用作药物，更优选地用作治疗或预防登革热病毒感染的药物。此外，本发明涉及这些化合物的药物组合物或组合制剂，涉及用作药物，更优选地用于预防或治疗登革热病毒感染的组合物或制剂。本发明还涉及用于制备这些化合物的方法。
发明背景
通过蚊子或蜱传播的黄病毒在人中引起危及生命的感染，如脑炎和出血热。已知黄病毒登革热的四种不同的但密切相关的血清型，所谓的DENV-1、-2、-3和-4。登革热是在全世界大多数热带和亚热带地区地方性的，主要在城市和半城市地区。根据世界卫生组织(WHO)，25亿人(其中10亿儿童)处于DENV感染的风险(WHO，2002)。估计每年在世界范围内发生5000万至1亿登革热[DF]病例、50万严重登革热疾病(即登革出血热[DHF]和登革休克综合征[DSS])病例以及超过20,000例死亡。DHF已经成为流行地区中儿童之中住院和死亡的一个主要原因。总而言之，登革热代表虫媒病毒(arboviral)疾病的最常见原因。由于在位于拉丁美洲、东南亚和西太平洋的国家(包括巴西、波多黎各、委内瑞拉、柬埔寨、印度尼西亚、越南、泰国)中的最近大暴发，登革热病例的数量已经在过去几年急剧上升。随着疾病传播至新的区域，不仅登革热病例的数量在增加，而且暴发倾向于更严重。
虽然正在针对登革热的疫苗开发中(在疫苗的有效性方面)取得进展，但是遇到许多困难。这些困难包括被称为抗体依赖性增强作用(ADE)的现象的存在。从一种血清型感染中恢复提供针对该血清型的终身免疫，但是仅赋予针对其他三种血清型中的一种的随后感染的部分和短暂保护。
在感染另一种血清型之后，预先存在的异源抗体与新感染的登革病毒血清型形成复合物，但是不中和病原体。相反，据信促进病毒进入细胞，从而导致不受控制的病毒复制和更高的峰病毒滴度。在原发感染和继发感染两者中，更高的病毒滴度与更严重的登革热疾病相关。因为母体抗体能够容易地通过母乳喂养传递至婴儿，所以这可能是儿童比成年人更多受严重登革热疾病影响的原因之一。
在具有两种或更多种血清型同时流通的区域(还被称为超流行地区)，严重登革热疾病的风险显著更高，这是由于经历继发性、更严重感染的风险增加。此外，在超流行性的情况下，更强毒株出现的概率增加，这进而增加登革出血热(DHF)或登革休克综合征的概率。
携带登革热的蚊子，包括埃及伊蚊(Aedes aegypti)和白纹伊蚊(Aedesalbopictus)(虎斑蚊(tiger mosquito))在地球上向北方移动。根据美国(US)疾病控制与预防中心(CDC)，两种蚊子当前在得克萨斯州南部普遍存在。携带登革热的蚊子向北传播不限于美国，而且也已在欧洲观察到。
由赛诺菲巴斯德公司(Sanofi Pasteur)生产的登革热疫苗在墨西哥首次获得批准，并且已经同时在更多国家中获得批准。尽管如此，由于功效有限，尤其是针对DENV-1和DENV-2，在黄病毒初次感染受试者中的功效低和漫长的给药方案，该疫苗留下了相当大的改进余地。
尽管存在这些缺点，该疫苗是流行地区的规则改变者，因为它将为大部分人群提供保护，但是可能不能保护非常小的婴儿，这些婴儿承载着登革热的最大负担。此外，给药方案和在黄病毒初次感染受试者中的功效非常有限使它对于从非流行地区到登革热流行地区的游客而言是不合适的并且可能是不值得的/成本有效的。登革热疫苗的上述缺点是为何需要预暴露预防性登革热抗病毒剂的原因。
此外，当前不可获得用于治疗或预防登革热病毒感染的特异性抗病毒药物。显然，对于用于预防或治疗动物中(更具体地人中)的病毒感染并且尤其是针对由黄病毒(更具体地登革病毒)引起的病毒感染的治疗剂仍然存在巨大未满足的医学需求。高度需要具有良好抗病毒效力、无副作用或低水平的副作用、针对多种登革热病毒血清型的广谱活性、低毒性和/或良好药代动力学或药效-动力学特性的化合物。
WO-2010/021878披露了2-苯基吡咯烷和吲哚啉衍生物作为冷的薄荷醇受体桔抗剂用于治疗炎性和中枢性疾病。WO-2013/045516披露了吲哚和吲哚啉衍生物，用于在治疗登革热病毒感染中使用。
本发明现在提供化合物经取代的吲哚啉衍生物，这些化合物显示针对所有四种(4)登革热病毒血清型的高效活性。
本发明的概述
本发明是基于上文提到的问题中的至少一个可以通过本发明的当前化合物来解决的出人意料的发现。
本发明提供化合物，这些化合物已显示具有针对当前已知的所有四种(4)血清型的有效抗病毒活性。此外，本发明证明这些化合物有效地抑制登革热病毒(DENV)的增殖。因此，这些化合物构成可用于治疗和/或预防动物、哺乳动物和人中的病毒感染，更具体地用于治疗和/或预防登革热病毒感染的一类有用的有效化合物。
此外，本发明涉及这类化合物作为药物的用途，并且涉及其用于制造用以治疗和/或预防动物或哺乳动物(更具体地人)中的病毒感染，特别是属于登革热病毒家族的病毒感染的药剂的用途。本发明还涉及用于制备所有这类化合物的方法，并且涉及包含有效量的这些化合物的药物组合物。
本发明还涉及一种通过向有需要的患者给予有效量的一种或多种这类化合物或其药学上可接受的盐任选地与一种或多种其他药物(像另一种抗病毒剂)的组合来治疗或预防人中的登革热病毒感染的方法。
本发明的一个方面是提供具有化学式(I)的化合物、其立体异构形式、药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物：
其中这些化合物选自下组，该组包括：
在可替代的实施例中，本发明涉及具有化学式(I)的化合物
其立体异构形式、药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，其中
R1是氟，R2是氢，R3是三氟甲基，并且R4是氢；或
R1是氟，R2是氢，R3是三氟甲氧基，并且R4是氢；或
R1是氯，R2是氢，R3是三氟甲基，并且R4是氢；或
R1是氯，R2是氢，R3是三氟甲氧基，并且R4是氢；或
R1是氯，R2是氢，R3是三氟甲基，并且R4是甲氧基；或
R1是氯，R2是甲氧基，R3是三氟甲基，并且R4是氢；或
R1是氯，R2是甲氧基，R3是三氟甲基，并且R4是甲氧基；或
R1是氯，R2是甲氧基，R3是三氟甲氧基，并且R4是氢；或
R1是氯，R2是氟，R3是三氟甲基，并且R4是氢；或
R1是氯，R2是氟，R3是三氟甲氧基，并且R4是氢；或
R1是氯，R2是氟，R3是三氟甲基，并且R4是甲氧基；或
R1是氯，R2是氢，R3是三氟甲氧基，并且R4是甲氧基。
本发明的一部分还是一种药物组合物，该药物组合物包括以上提到的化合物或其立体异构形式、药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，连同一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
所述化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐以及碱盐。合适的酸加成盐是从形成无毒盐的酸形成。合适的碱盐是从形成无毒盐的碱形成的。
本发明的化合物还可以按非溶剂化的和溶剂化的形式存在。术语“溶剂化物”在此用以描述包括本发明的化合物以及一种或多种药学上可接受的溶剂分子(例如，乙醇)的分子复合物。
术语“多晶型物”是指本发明的化合物能够以一种以上的形式或晶体结构存在。
可以将本发明的化合物以晶态的或非晶态的产品给予。它们可通过诸如沉淀、结晶、冷冻干燥、喷雾干燥或蒸发干燥等方法以例如固体填料、粉末或膜形式获得。它们可以单独给予或与一种或多种本发明的其他化合物组合给予或与一种或多种其他药物组合给予。通常，它们将作为与一种或多种药学上可接受的赋形剂相结合的配制品给予。术语“赋形剂”在此用以描述除本发明的一种或多种化合物之外的任何成分。赋形剂的选择大体上取决于如具体给予模式、赋形剂对溶解性和稳定性的影响以及剂型的性质等因素。
本发明的化合物或其任何亚群可以被配制成用于给予目的不同药物形式。作为适当的组合物，可能引用了所有经常用于全身性给药的组合物。为制备本发明的药物组合物，将作为活性成分的有效量的具体化合物，任选为加成盐形式与药学上可接受的载体组合成紧密混合物，其载体根据给药需要的剂型可以采用各种形式。令人希望地，这些药物组合物处于适合于例如口服或经直肠给予的单位剂型。例如，在制备处于口服剂型的组合物中，可使用任何常见药物介质，在口服液体制剂(如悬浮液、糖浆剂、酏剂、乳液以及溶液)的情况下，例如像水，二醇类、油类、醇类等；或在粉剂、丸剂、胶囊剂和片剂的情况下，固体载体如淀粉、糖、高岭土、稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。因为其容易给予，片剂和胶囊剂代表最有利的口服单位剂型，在该情况下显然使用固体药物载体。也包括可在即将使用前转化成液体形式的固体形式制剂。
为了便于给予和剂量的均一性，将上述药物组合物配制成单位剂型是特别有利的。如在此所用的单位剂型是指适合作为单位剂量的物理离散单位，各单位包含预定量的活性成分，该预定量的活性成分经计算与所需药物载体相结合而产生所希望的治疗效果。此类单位剂型的实例是片剂(包括刻痕或包衣的片剂)、胶囊剂、丸剂、粉末包(powderpacket)、糯米纸囊剂(wafer)、栓剂、可注射溶液或悬浮液以及类似剂型，及其分离的多剂量形式(multiples)。
在感染性疾病治疗领域中的普通技术人员将能够从下文所呈现的测试结果来确定有效量。通常，预期每日有效量将为从0.01mg/kg至50mg/kg体重，更优选从0.1mg/kg至10mg/kg体重。可以适当地将所需剂量在全天中以适当的时间间隔作为两个、三个、四个或更多个子剂量给予。所述子剂量可配制成单位剂型，例如每单位剂型含有1mg至1000mg，且具体来说5mg至200mg的活性成分。
如本领域的普通技术人员所熟知的，给予的精确剂量和频率取决于所使用的本发明的具体化合物、正在被治疗的具体病症、正在被治疗的病症的严重性、具体患者的年龄、体重和总体身体状况以及个体可能服用的其他药物。此外，显而易见的是可根据所治疗受试者的反应和/或根据用本发明化合物开处方的医师的评估来降低或增加有效量。因此，上文所述的有效量范围仅为指导且并不打算在任何程度上限制本发明的范围或使用。
本披露还旨在包括存在于本发明的化合物中的原子的任何同位素。例如，氢的同位素包括氚和氘，并且碳的同位素包括C-13和C-14。
用于本发明中的这些化合物还可以其立体化学异构形式存在，从而定义由相同键序列键合的相同原子组成但具有不可互换的不同三维结构的所有可能的化合物。除非另外提及或指明，化合物的化学命名涵盖所述化合物可以具有的所有可能的立体化学异构形式的混合物。所述混合物可以包含所述化合物的基本分子结构的所有非对映异构体和/或对映异构体。用于本发明中的处于纯形式的或彼此混合的化合物的所有立体化学异构形式旨在被涵盖于本发明的范围内，包括任何外消旋混合物或外消旋体。
在此提到的化合物和中间体的纯的立体异构形式被定义为基本上不具有所述化合物或中间体的相同基本分子结构的其他对映异构或非对映异构形式的异构体。具体地说，术语‘立体异构纯’涉及具有至少80％立体异构过量(即，最少90％的一种异构体和最大10％的其他可能的异构体)到100％立体异构过量(即，100％的一种异构体并且没有其他异构体)的化合物或中间体，更具体地具有90％至100％立体异构过量、甚至更具体地具有94％至100％立体异构过量并且最具体地具有97％至100％立体异构过量的化合物或中间体。应当以类似的方式理解术语‘对映异构纯’和‘非对映异构纯’，但是讨论中的分别是关于混合物中的对映异构过量以及非对映异构过量。
可以通过领域已知的程序的应用来获得用于本发明中的化合物和中间体的纯的立体异构形式。例如，对映异构体可以通过用光学活性酸或碱使它们的非对映异构盐进行选择性结晶而得以彼此分离。它们的实例是酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二甲苯甲酰基酒石酸以及樟脑磺酸。可替代地，可以通过使用手性固定相的层析技术分离对映异构体。所述纯的立体化学异构形式还可以衍生自适当起始材料的相对应的纯的立体化学异构形式，其条件是反应立体特异性地发生。优选地，如果一种具体的立体异构体是所希望的，那么所述化合物将通过立体专一的制备方法得以合成。这些方法将有利地使用对映异构纯的起始材料。
本发明的具有化学式(I)的化合物均具有至少一个如在以下图中通过用*标记的碳原子来指示的手性碳原子：
由于存在所述手性碳原子，“具有化学式(I)的化合物”可以是(R)-对映异构体、(S)-对映异构体、外消旋形式、或两种单独对映异构体以任何比率的任何可能组合。当对映异构体的绝对(R)-或(S)-构型是未知的时，这种对映异构体也可以通过在测量所述特定对映异构体的比旋光度之后，指示该对映异构体是右旋的(+)-还是左旋的来鉴定。
在一方面，本发明涉及第一组具有化学式(I)的化合物，其中具有化学式(I)的化合物具有(+)比旋光度。
在另一方面，本发明涉及第二组具有化学式(I)的化合物，其中具有化学式(I)的化合物具有(-)比旋光度。
实例
LC/MS方法
使用LC泵、二极管阵列(DAD)或UV检测器以及如在对应的方法中所指定的柱进行高效液相层析(HPLC)测量。如果必要的话，包括其他检测器(参见下文的方法表格)。
将来自柱的流带至配置有大气压离子源的质谱仪(MS)。设置调谐参数(例如扫描范围、停留时间等)以便获得允许鉴定化合物的标称单一同位素分子量(MW)的离子在技术人员的知识内。使用适当的软件进行数据采集。
通过其实验保留时间(Rt)和离子描述化合物。如果未在数据表中不同地指定，那么报道的分子离子对应于[M+H]+(质子化的分子)和/或[M-H]-(去质子的分子)。在该化合物不是直接可电离的情况下，指定加合物类型(即[M+NH4]+、[M+HCOO]-等)。对于具有多种同位素模式的分子(Br、Cl)，所报告值是针对最低同位素质量所获得的值。所获得的所有结果均具有实验不确定性，这通常与所使用方法相关。
下文中，“SQD”意指单四极检测器，“MSD”质量选择性检测器，“RT”室温，“BEH”桥连乙基硅氧烷/二氧化硅杂化体，“DAD”二极管阵列检测器，“HSS”高强度二氧化硅。
LC/MS方法代码(以mL/分钟来表示流量；以℃表示柱温度(T)；以分钟表示运行时间)
SFC-MS方法
使用分析型超临界流体层析(SFC)系统来进行SFC测量，该系统由以下构成：用于递送二氧化碳(CO2)和改性剂的二元泵、自动进样器、柱烘箱、配备有经得起400巴的高压流动池的二极管阵列检测器。如果配置有质谱仪(MS)，来自柱的流被带至该(MS)。设置调谐参数(例如扫描范围、停留时间等)以便获得允许鉴定化合物的标称单一同位素分子量(MW)的离子在技术人员的知识内。使用适当的软件进行数据采集。
分析型SFC/MS方法(以mL/min表示流量；以℃表示柱温度(T)；以分钟表示运行时间，以巴表示背压(BPR))。
熔点
值是峰值抑或熔融范围，并且所获得的值具有通常与这个分析方法相关的实验不确定性。
DSC823e(指示为DSC)
对于多种化合物，熔点是用DSC823e(梅特勒-托利多(Mettler-Toledo))来确定的。使用10℃/分钟的温度梯度来测量熔点。最高温度是300℃。
旋光度：
在铂金埃尔默(Perkin-Elmer)341旋光计上用钠灯测量旋光度并且记录如下：[α]°(λ，cg/100ml，溶剂，T℃)。
[α]λ T＝(100α)/(l×c)：其中l是以dm计的路径长度并且c是针对在温度T(℃)和波长λ(以nm计)下的样品的以g/100ml计的浓度。如果所使用的光波长是589nm(钠D线)，那么可以改为使用符号D。始终应给出旋转符号(+或-)。当使用这一等式时，常常在旋转后的括号中提供浓度和溶剂。使用度报道旋转并且浓度不带单位的给出(将其假定为g/100ml)。
实例1：4-(3-((1-(4-氟苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物1)的合成以及手性分离成对映异构体1A和1B
中间体1a的合成：
向4-溴丁酸叔丁酯[CAS 110661-91-1](42.3g，0.19mol)于DMF(600mL)中的机械搅拌溶液中分部分地添加3-氨基-5-甲氧基苯酚[CAS 162155-27-3](26.4g，0.19mol)和Cs2CO3(123.6g，0.379mol)的固体混合物。将该反应在60℃下搅拌65h，并且允许其达到室温。将该混合物倾倒入H2O(2.5L)中。将该产物用Et2O进行萃取(2次)。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥并滤出。将该溶剂在减压下蒸发，并且然后与甲苯共蒸发。将该残余物经由正相HPLC(固定相：硅胶60A 25-40μm(默克公司(Merck))，流动相：梯度从20％EtOAc、80％庚烷至60％EtOAc、40％庚烷)进行纯化，产生4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯1a(27g)。
中间体1b的合成：
将2-溴-2-(4-氟苯基)乙酸甲酯[CAS 71783-54-5](0.400g，1.62mmol)、4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯1a(0.547g，1.94mmol)和三乙胺(0.337mL，2.43mmol)于CH3CN(4mL)中的混合物在微波炉中在100℃下加热20min。将该反应混合物用EtOAc稀释并且用1N HCl洗涤。将有机相用H2O和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤且在减压下浓缩。将残余物使用EtOAc(2％至20％)于庚烷中的梯度通过在硅胶上快速层析进行纯化，以给出4-(3-((1-(4-氟苯基)-2-甲氧基-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯1b(0.511g)。
中间体1c的合成：
向4-(3-((1-(4-氟苯基)-2-甲氧基-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯1b(0.510g，1.14mmol)于THF(3mL)、MeOH(3mL)和H2O(3mL)的溶剂混合物中的溶液中添加氢氧化锂(0.239g，5.70mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌2h。将该反应混合物在减压下部分浓缩以移除有机溶剂。将该残余物用1N HCl酸化并且用CH2Cl2萃取。将有机相经MgSO4干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物使用MeOH(0％至10％)于CH2Cl2(包含2％的乙酸)中的梯度通过在硅胶上快速层析进行纯化，以给出2-((3-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁氧基)-5-甲氧基苯基)氯基)-2-(4-氟苯基)乙酸1c(0.326g)。
中间体1d的合成：
向2-((3-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁氧基)-5-甲氧基苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)乙酸1c(0.326g，0.75mmol)于DMF(6mL)中的溶液中添加HATU(0.286g，0.75mmol)、三乙胺(0.418mL，3.01mmol)和6-(三氟甲基)吲哚啉[CAS 181513-29-1](0.141g，0.75mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌3h。将该反应混合物用EtOAc稀释并且用1N HCl洗涤。将有机相用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物使用EtOAc(5％至50％)于庚烷中的梯度通过在硅胶上快速层析进行纯化，以给出4-(3-((1-(4-氟苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯1d(0.134g)。
化合物1的合成以及手性分离成对映异构体1A和1B：
向4-(3-((1-(4-氟苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯1d(0.134g，0.22mmol)于CH2Cl2(3mL)中的溶液中添加于二噁烷(3mL，12mmol)中的4M氯化氢溶液。将该反应混合物在室温下搅拌过夜。将该反应混合物在减压下进行浓缩。将残余物用Et2O/庚烷的混合物研磨。将固体滤出并且在真空下干燥，以给出作为外消旋混合物的4-(3-((1-(4-氟苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物1，103mg)。
将化合物1(1.3g)的对映异构体经由制备型SFC(固定相：Diacel OD20x 250mm，流动相：CO2，乙醇)进行分离。将产物级分合并且在减压下蒸发。将第一洗脱对映异构体通过快速层析(固定相：Grace二氧化硅40g，流动相：庚烷/EtOAc/EtOH/HOAc梯度100/0/0/0至0/75/24.5/0.5)进行进一步纯化。将所希望的级分合并，在减压下蒸发，并且与EtOAc共蒸发，并且然后与MeOH/H2O共蒸发。将残余物在H2O(15mL)+MeOH(1.5mL)中搅拌45分钟，过滤出，用MeOH/H2O(4/1)洗涤(4x)，并且在真空下在45℃下干燥，以提供对映异构体1A(475mg)。将第二洗脱对映异构体通过快速层析(固定相：Grace二氧化硅40g，流动相：庚烷/EtOAc/EtOH/HOAc梯度100/0/0/0至0/75/24.5/0.5)进行进一步纯化。将所希望的级分合并，在减压下蒸发，并且与EtOAc共蒸发，并且然后与MeOH/H2O共蒸发。将残余物在H2O(15mL)+MeOH(1.5mL)中搅拌75分钟，过滤出，用MeOH/H2O(4/1)洗涤(4x)，并且在真空下在45℃下干燥，以提供对映异构体1B(461mg)。
化合物1：
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 1.80-1.94(m，2H)2.22-2.48(m，2H)3.09-3.27(m，2H)3.62(s，3H)3.85(t，J＝6.2Hz，2H)3.91-4.06(m，1H)4.48-4.61(m，1H)5.57(d，J＝8.7Hz，1H)5.76(s，1H)5.94(s，1H)5.96(s，1H)6.39(d，J＝8.3Hz，1H)7.21(t，J＝8.7Hz，2H)7.35-7.49(m，2H)7.58(dd，J＝8.1，5.8Hz，2H)8.38(s，1H)12.1(br.s.，1H)
LC/MS(方法LC-C)：Rt1.94min，MH+547
对映异构体1A：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.8Hz，2H)2.33(t，J＝7.4Hz，2H)3.14-3.29(m，2H)3.62(s，3H)3.85(t，J＝6.5Hz，2H)4.00(td，J＝10.5，7.3Hz，1H)4.54(td，J＝10.4，6.3Hz，1H)5.56(d，J＝8.6Hz，1H)5.76(t，J＝2.0Hz，1H)5.95(dt，J＝9.1，1.8Hz，2H)6.36(d，J＝8.8Hz，1H)7.20(t，J＝8.9Hz，2H)7.34-7.41(m，1H)7.42-7.49(m，1H)7.52-7.62(m，2H)8.38(br s，1H)12.10(br s，1H)
LC/MS(方法LC-D)：Rt0.99min，MH+547
[α]D 20：-49.0°(c 0.41，DMF)
手性SFC(方法SFC-J)：Rt2.92min，MH+547，手性纯度100％。
对映异构体1B：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.9Hz，2H)2.33(t，J＝7.3Hz，2H)3.12-3.29(m，2H)3.62(s，3H)3.85(t，J＝6.5Hz，2H)4.00(td，J＝10.4，7.2Hz，1H)4.54(td，J＝10.4，6.3Hz，1H)5.56(d，J＝8.8Hz，1H)5.76(t，J＝2.1Hz，1H)5.95(dt，J＝9.1，2.0Hz，2H)6.36(d，J＝8.8Hz，1H)7.20(t，J＝8.2Hz，2H)7.35-7.41(m，1H)7.42-7.48(m，1H)7.53-7.62(m，2H)8.38(br s，1H)12.11(br s，1H)
LC/MS(方法LC-D)：Rt1.00min，MH+547
[α]D 20：+49.5°(c 0.525，DMF)
手性SFC(方法SFC-J)：Rt2.81min，MH+547，手性纯度100％。
实例2：4-(3-((1-(4-氟苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物2)的合成以及手性分离成对映异构体2A和2B。
中间体2a的合成：
将6-(三氟甲氧基)吲哚啉[CAS 959235-95-1](2g，9.84mmol)、2-(4-氟苯基)乙酸[CAS 405-50-5](1.67g，10.8mmol)、HATU(5.6g，14.8mmol)和二异丙基乙胺(4.9mL，29.5mmol)于DMF(40mL)中的混合物在室温下搅拌12h。添加水并且将该沉淀过滤出。将残余物用EtOAc吸收。将有机溶液用10％K2CO3水溶液、盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并且在减压下蒸发溶剂。将残余物在硅胶上通过色谱法(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc梯度90/10至60/40)进行纯化。将纯的级分合并，并且将溶剂在减压下浓缩，以给出2-(4-氟苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮2a(2.5g)。
中间体2b的合成：
在-78℃，在N2流下，将1.5M于THF中的LiHMDS(9.82mL，14.7mmol)滴加至2-(4-氟苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮2a(2.5g，7.37mmol)于THF(40mL)中的混合物中。将该混合物在-78℃下搅拌15min，并且滴加N-溴代琥珀酰亚胺(1.44g，8.1mmol)于THF(30mL)中的溶液。在-78℃下搅拌2h之后，将该反应用NH4Cl的饱和水溶液淬灭。将该混合物用EtOAc进行萃取。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂，以在从CH3CN/二异丙醚沉淀之后给出2-溴-2-(4-氟苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮2b(3g)。将该化合物按原样用于下一步骤中。
中间体2c的合成：
将2-溴-2-(4-氟苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮2b(1.1g，2.63mmol)、4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯1a(0.74g，2.63mmol)和二异丙基乙胺(0.54mL，3.15mmol)于CH3CN(40mL)中的混合物在70℃下搅拌4h。将该混合物在减压下浓缩。将残余物用EtOAc稀释，用1N HCl和水洗涤。将有机相分离，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将该化合物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc 80/20)进行纯化。将纯的级分合并，并且蒸发至干。将残余物从二异丙醚/石油醚中结晶，以给出4-(3-((1-(4-氟苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯2c(1.25g)。
化合物2的合成以及手性分离成对映异构体2A和2B：
将4-(3-((1-(4-氟苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯2c(1.5g，2.42mmol)于在二噁烷(15mL)中的4M HCl中的溶液在5℃下搅拌3h并且在室温下搅拌3h。将该沉淀过滤出并干燥，以提供呈HCl盐的4-(3-((1-(4-氟苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物2，1.4g，0.76当量HCl，0.1当量H2O)。在手性分离之前，将化合物2(HCl盐)通过用1NNaOH处理化合物2(HCl盐)于EtOAc或CH2Cl2中的溶液并在减压下蒸发有机层来中和。将化合物2(1.3g)的对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：OD-H 5μm 250x 30mm，流动相：50％CO2，50％MeOH)分离并且经由反相色谱(固定相：YMC-actus Triart-C18 10μm150x 30mm，流动相：梯度从60％HCOONH40.6g/L pH＝3.5，40％CH3CN至0％HCOONH40.6g/LpH＝3.5，100％CH3CN)进行进一步纯化。将产物级分合并且在减压下蒸发。将第一洗脱对映异构体(205mg)从石油醚/二异丙醚中固化，以给出对映异构体2A(168mg)。将第二洗脱对映异构体(259mg)从石油醚/二异丙醚中固化，以给出对映异构体2B(180mg)。
化合物2：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.9Hz，2H)2.34(t，J＝7.3Hz，2H)3.05-3.28(m，2H)3.62(s，3H)3.85(t，J＝6.5Hz，2H)4.01(td，J＝10.3，7.4Hz，1H)4.53(td，J＝10.2，6.6Hz，1H)5.56(s，1H)5.76(s，1H)5.96(br d，J＝10.4Hz，2H)7.01(br d，J＝7.9Hz，1H)7.21(t，J＝8.8Hz，2H)7.33(d，J＝8.2Hz，1H)7.57(dd，J＝8.5，5.7Hz，2H)8.04(s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.80min，MH+563
熔点：136℃
对映异构体2A：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.86(quin，J＝6.9Hz，2H)2.33(t，J＝7.3Hz，2H)3.05-3.26(m，2H)3.61(s，3H)3.84(t，J＝6.3Hz，2H)3.96-4.08(m，1H)4.46-4.60(m，1H)5.55(d，J＝8.8Hz，1H)5.75(s，1H)5.95(br d，J＝11.0Hz，2H)6.41(br d，J＝8.5Hz，1H)7.01(br d，J＝8.2Hz，1H)7.21(t，J＝8.8Hz，2H)7.33(d，J＝8.2Hz，1H)7.57(dd，J＝8.2，5.7Hz，2H)8.04(s，1H)12.19(br s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.87min，MH+563
[α]D 20：-46.3°(c 0.27，DMF)
手性SFC(方法SFC-B)：Rt1.75min，MH+563，手性纯度100％。
对映异构体2B：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.86(quin，J＝6.9Hz，2H)2.32(t，J＝7.3Hz，2H)3.05-3.26(m，2H)3.61(s，3H)3.84(t，J＝6.5Hz，2H)4.01(td，J＝10.3，7.4Hz，1H)4.53(td，J＝10.2，6.0Hz，1H)5.55(d，J＝8.8Hz，1H)5.75(s，1H)5.95(br d，J＝12.0Hz，2H)6.41(d，J＝8.8Hz，1H)7.01(br d，J＝7.9Hz，1H)7.20(t，J＝8.7Hz，2H)7.33(d，J＝8.2Hz，1H)7.57(dd，J＝8.5，5.7Hz，2H)8.04(s，1H)11.49-12.49(m，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.87min，MH+563
[α]D 20：+47.0°(c 0.27，DMF)
手性SFC(方法SFC-B)：Rt3.83min，MH+563，手性纯度100％。
实例3：4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物3)的合成以及手性分离成对映异构体3A和3B。
中间体3a的合成：
将6-(三氟甲基)吲哚啉[CAS 181513-29-1](3g，16.0mmol)、2-(4-氯苯基)乙酸[CAS 1878-66-6](3.53g，20.8mmol)、HATU(9.1g，24.0mmol)和二异丙基乙胺(7.95mL，48.1mmol)于DMF(75mL)中的混合物在室温下搅拌12h。添加水并且将该沉淀过滤出。将残余物用EtOAc吸收。将有机溶液用10％K2CO3水溶液、盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并且在减压下蒸发溶剂。将残余物在硅胶上通过色谱法(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc梯度90/10至60/40)进行纯化。将纯的级分合并，并且将溶剂在减压下浓缩，以给出2-(4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮3a(4.5g)。
中间体3b的合成：
在-78℃下，在N2流下，将1.5M于THF中的LiHMDS(17.7mL，26.5mmol)滴加至2-(4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮3a(4.5g，13.3mmol)于THF(65mL)中的混合物中。将该混合物在-78℃下搅拌15min，并且滴加N-溴代琥珀酰亚胺(2.6g，14.6mmol)于THF(35mL)中的溶液。在-78℃下搅拌2h之后，将该反应用Ni4Cl的饱和溶液淬灭。将该混合物用EtOAc进行萃取。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将残余物用二异丙醚吸收。将沉淀物过滤出并且丢弃(残余的琥珀酰亚胺)。将滤液在减压下浓缩，以给出2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮3b(5g)。将该化合物按原样用于下一步骤中。
中间体3c的合成：
将2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮3b(5g，11.9mmol)、4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯1a(3.3g，11.9mmol)和二异丙基乙胺(2.47mL，14.3mmol)于CH3CN(120mL)中的混合物在70℃下搅拌6h。将该混合物在减压下浓缩，用EtOAc稀释，并且用1N HCl和水洗涤。将有机相分离，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将该化合物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc梯度90/10至60/40)进行纯化。将纯的级分合并，并且蒸发至干，以给出4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯3c(1.6g)。
化合物3的合成以及手性分离成对映异构体3A和3B：
将4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯3c(1.6g，2.58mmol)于在二噁烷(22mL)中的4M HCl中的溶液在5℃下搅拌3h并且在室温下搅拌8h。将该溶液在减压下浓缩。将该残余物吸收在CH3CN/二异丙醚中。将该沉淀过滤出并干燥，以提供呈HCl盐的4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(1.15g，0.95当量HCl，0.07当量H2O)。将小部分的化合物3(HCl盐)通过用1N NaOH处理化合物3(HCl盐)于EtOAc或CH2Cl2中的溶液并在减压下蒸发有机层来中和以给出化合物3。将剩余量的化合物3(HCl盐)用于手性分离：将这些对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：OD-H 5μm 250x30mm，流动相：50％CO2，50％iPrOH)进行分离。将第一洗脱对映异构体(470mg)从石油醚/二异丙醚中固化，以给出对映异构体3A(404mg)。将第二洗脱对映异构体(480mg)从石油醚/二异丙醚中固化，以给出对映异构体3B(433mg)。
化合物3：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.8Hz，2H)2.33(t，J＝7.3Hz，2H)3.18-3.27(m，2H)3.62(s，3H)3.85(t，J＝6.3Hz，2H)3.97-4.09(m，1H)4.46-4.59(m，1H)5.57(d，J＝8.6Hz，1H)5.76(s，1H)5.95(br d，J＝9.1Hz，2H)6.40(br d，J＝8.6Hz，1H)7.34-7.49(m，4H)7.55(d，J＝8.6Hz，2H)8.38(s，1H)11.90-12.25(m，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.88min，MH+563
熔点：192℃
对映异构体3A：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(br t，J＝6.6Hz，2H)2.34(br t，J＝7.1Hz，2H)3.15-3.31(m，2H)3.62(s，3H)3.85(br t，J＝6.1Hz，2H)3.97-4.09(m，1H)4.48-4.60(m，1H)5.59(br d，J＝8.5Hz，1H)5.77(br s，1H)5.95(br d，J＝11.3Hz，2H)6.44(br d，J＝8.5Hz，1H)7.36-7.50(m，4H)7.56(br d，J＝8.2Hz，2H)8.38(s，1H)12.17(brs，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.93min，MH+563
[α]D 20：-42.4°(c 0.25，DMF)
手性SFC(方法SFC-C)：Rt2.12min，MH+563，手性纯度100％。
对映异构体3B：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.7Hz，2H)2.34(br t，J＝7.1Hz，2H)3.15-3.31(m，2H)3.62(s，3H)3.85(br t，J＝6.3Hz，2H)3.97-4.10(m，1H)4.49-4.61(m，1H)5.59(br d，J＝8.8Hz，1H)5.77(s，1H)5.95(br d，J＝11.3Hz，2H)6.44(br d，J＝8.5Hz，1H)7.36-7.49(m，4H)7.56(br d，J＝8.2Hz，2H)8.38(s，1H)12.17(br s，1H
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.93min，MH+563
[α]D 20：+50.7°(c 0.27，DMF)
手性SFC(方法SFC-C)：Rt4.87min，MH+563，手性纯度100％。
实例4：4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物4)的合成以及手性分离成对映异构体4A和4B。
中间体4a的合成：
将6-(三氟甲氧基)吲哚啉[CAS 959235-95-1](2g，9.84mmol)、2-(4-氯苯基)乙酸[CAS 1878-66-6](1.85g，10.8mmol)、HATU(5.6g，14.8mmol)和二异丙基乙胺(4.9mL，29.5mmol)于DMF(40mL)中的混合物在室温下搅拌12h。添加水并且将该沉淀过滤出。将残余物用EtOAc吸收。将有机溶液用10％K2CO3水溶液、盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并且在减压下蒸发溶剂。将残余物在硅胶上通过色谱法(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc梯度90/10至60/40)进行纯化。将纯的级分合并，并且将溶剂在减压下浓缩，以给出2-(4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮4a(3g)。
中间体4b的合成：
在-78℃下，在N2流下，将1.5M于THF中的LiHMDS(11.2mL，16.9mmol)滴加至2-(4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮4a(3g，8.43mmol)于THF(50mL)中的混合物中。将该混合物在-78℃下搅拌15min，并且滴加N-溴代琥珀酰亚胺(1.65g，9.3mmol)于THF(30mL)中的溶液。在-78℃下搅拌2h之后，将该反应用NH4Cl的饱和溶液淬灭。将该混合物用EtOAc进行萃取。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤并且将该溶剂在减压下蒸发，以给出2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮4b(3.6g)。将该化合物按原样用于下一步骤中。
中间体4c的合成：
将2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮4b(3.6g，8.3mmol)、4-(3-氯基-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯1a(2.3g，8.3mmol)和二异丙基乙胺(1.7mL，9.94mmol)于CH3CN(80mL)中的混合物在70℃下搅拌4h。将该混合物在减压下浓缩，用EtOAc稀释，并且用1N HCl和水洗涤。将有机相分离，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将该化合物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，120g，庚烷/EtOAc 80/20)进行纯化。将纯的级分合并，并且蒸发至干，以在从二异丙醚中结晶之后给出4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯4c(2.6g)。
化合物4的合成以及手性分离成对映异构体4A和4B：
将4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯4c(2.4g，3.8mmol)于在二噁烷(24mL)中的4M HCl中的溶液在5℃下搅拌3h并且在室温下搅拌3h。将该沉淀过滤出并干燥，以提供呈HCl盐的4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物4，2g，0.8当量HCl，0.07当量H2O)。在手性分离之前，将化合物4(2g，HCl盐)通过用1N NaOH处理化合物4(HCl盐)于乙酸乙酯中的溶液并在减压下蒸发有机层来中和。将这些对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：OD-H 5μm 250x 30mm，流动相：50％CO2，50％iPrOH(+0.3％iPrNH2))分离并且经由制备型手性SFC(固定相：6μm 150x21.2mm，流动相：80％CO2，20％MeOH(+0.3％iPrNH2))进行进一步纯化。将产物级分合并且在减压下蒸发。将两种对映异构体用EtOAc吸收并用1N HCl洗涤。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将第一洗脱对映异构体从醚/二异丙醚中固化，以给出对映异构体4A(616mg)。将第二洗脱对映异构体从醚/二异丙醚中固化，以给出对映异构体4B(715mg)。
还有可能从外消旋体的HCl盐开始使用用于手性分离的相同条件来分离对映异构体。
化合物4：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.9Hz，2H)2.34(t，J＝7.3Hz，2H)3.07-3.28(m，2H)3.62(s，3H)3.85(t，J＝6.5Hz，2H)4.04(td，J＝10.5，7.1Hz，1H)4.52(td，J＝10.3，6.5Hz，1H)5.57(s，1H)5.76(t，J＝2.2Hz，1H)5.90-6.00(m，2H)7.01(dd，J＝8.2，1.6Hz，1H)7.33(d，J＝8.2Hz，1H)7.41-7.48(m，2H)7.55(d，J＝8.5Hz，2H)8.03(s，1H)
LC/MS(方法LC-B)：Rt 2.70min，MH+579
熔点：150℃
对映异构体4A：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.7Hz，2H)2.34(br t，J＝7.3Hz，2H)3.08-3.27(m，2H)3.62(s，3H)3.85(br t，J＝6.3Hz，2H)3.99-4.11(m，1H)4.47-4.57(m，1H)5.57(br s，1H)5.76(s，1H)5.95(br d，J＝10.1Hz，2H)6.45(br s，1H)7.01(br d，J＝7.6Hz，1H)7.34(br d，J＝7.9Hz，1H)7.44(br d，J＝8.5Hz，2H)7.55(br d，J＝8.2Hz，2H)8.04(br s，1H)12.12(br s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.95min，MH+579
[α]D 20：-48.5°(c 0.27，DMF)
手性SFC(方法SFC-A)：Rt1.13min，MH+579，手性纯度100％。
对映异构体4B：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(br t，J＝6.8Hz，2H)2.34(br t，J＝7.3Hz，2H)3.09-3.27(m，2H)3.62(s，3H)3.85(br t，J＝6.1Hz，2H)3.99-4.10(m，1H)4.46-4.59(m，1H)5.57(s，1H)5.76(br s，1H)5.95(br d，J＝10.1Hz，2H)6.45(br s，1H)7.01(br d，J＝7.9Hz，1H)7.34(br d，J＝7.9Hz，1H)7.44(br d，J＝8.2Hz，2H)7.55(br d，J＝8.2Hz，2H)8.04(br s，1H)12.12(br s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.94min，MH+579
[α]D 20：+42.9°(c 0.28，DMF)
手性SFC(方法SFC-A)：Rt2.13min，MH+579，手性纯度100％。
实例5：4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物5)的合成以及手性分离成对映异构体5A和5B。
中间体5a的合成：
在-10℃下，将1-甲氧基-4-硝基-2-(三氟甲基)苯[CAS 654-76-2](24.5g，110.8mmol)和4-氯苯氧基乙腈[CAS 3598-13-8](20.4g，121.9mmol)于DMF(100mL)中的混合物经30min滴加至tBuOK(27.35g，243.7mmol)于DMF(100mL)中的搅拌溶液中。在添加之后，将紫色溶液在-10℃下保持1h。添加500mL的冰水和500mL的6N HCl，将沉淀过滤出，用水洗涤并在减压下干燥，以提供40.4g的2-(5-甲氧基-2-硝基-4-(三氟甲基)苯基)乙腈5a(按原样用于下一步骤中)。
中间体5b的合成：
将2-(5-甲氧基-2-硝基-4-(三氟甲基)苯基)乙腈5a(26g，99.9mmol)于乙醇/水(9/1)(500mL)和AcOH(5.2mL)中的溶液在3.5巴的大气压下用10％Pd/C(15.3g)作为催化剂进行氢化持续1h。将该反应混合物通过硅藻土垫过滤，并且将该滤饼用CH2Cl2和CH3OH的溶剂混合物洗涤。将滤液在减压下浓缩。将该残余物通过用二氧化硅60-200μm填充的玻璃过滤器使用庚烷/EtOAc 80/20作为洗脱液来进行过滤。将含有所期望的化合物的级分合并，并且将该溶剂在减压下浓缩，以给出5-甲氧基-6-(三氟甲基)-1H-吲哚5b(15.6g)。
中间体5c的合成：
在0℃下，将BH3-吡啶(23.5mL，232.4mmol)滴加至5-甲氧基-6-(三氟甲基)-1H-吲哚5b(10g，46.5mmol)于EtOH(60mL)中的溶液中。缓慢添加6N HCl(140mL)，同时保持温度低于10℃。将该混合物在0℃下搅拌2h。添加水(200mL)，并且将该混合物用浓缩的NaOH水溶液碱化至pH 8-9(该反应温度保持低于20℃)。将沉淀过滤出，用水洗涤(两次)并且在减压下与甲苯共蒸发，以给出5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉5c(9g)。
中间体5d的合成：
将5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉5c(2g，9.21mmol)、2-(4氯苯基)乙酸[CAS1878-66-6](1.73g，10.1mmol)、HATU(5.25g，13.8mmol)和二异丙基乙胺(4.6mL，27.6mmol)于DMF(40mL)中的混合物在室温下搅拌12h。添加水并且将该沉淀过滤出。将残余物用EtOAc吸收。将有机溶液用10％K2CO3水溶液、盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并且在减压下蒸发溶剂。将残余物在硅胶上通过色谱法(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc梯度90/10至60/40)进行纯化。将纯的级分合并，并且将溶剂在减压下浓缩，以给出2-(4-氯苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮5d(3g)。
中间体5e的合成：
在-78℃下，在N2流下，将1M于THF中的LiHMDS(17.3mL，17.3mmol)滴加至2-(4-氯苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮5d(3.2g，8.65mmol)于THF(45mL)中的混合物中。滴加TMSCl(1.32mL，10.4mmol)。将该混合物在-78℃下搅拌15min，并且滴加N-溴代琥珀酰亚胺(1.85g，10.4mmol)于THF(30mL)中的溶液。在-78℃下搅拌2h之后，将该反应用NH4Cl的饱和溶液淬灭。将该混合物用EtOAc进行萃取。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤并且将该溶剂在减压下蒸发，以给出2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮5e(3.1g)。将该化合物按原样用于下一步骤中。
中间体5f的合成：
将2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮5e(3.5g，7.8mmol)、4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯1a(2.2g，7.8mmol)和二异丙基乙胺(1.6mL，9.4mmol)于CH3CN(80mL)中的混合物在70℃下搅拌4h。将该混合物在减压下浓缩，用EtOAc稀释并且用1N HCl和水洗涤。将有机相分离，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将该残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc 80/20)进行纯化。将纯的级分合并，并且蒸发至干，以在从二异丙醚中结晶之后给出4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯5f(2.1g)。
化合物5的合成以及手性分离成对映异构体5A和5B：
将4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯5f(3.1g，4.77mmol)于在二噁烷(42.2mL)中的4MHCl中的溶液在5℃下搅拌3h并且在室温下搅拌8h。将沉淀过滤出并干燥，以给出呈HCl盐的4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物5，2g)。将这些对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：IA 5μm 250x 20mm，流动相：50％CO2，50％iPrOH(+0.3％iPrNH2+10％CH2Cl2))进行分离。将产物级分合并且在减压下蒸发。将两种对映异构体用EtOAc吸收并用1N HCl洗涤。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将第一洗脱对映异构体(847mg)从石油醚/二异丙醚中固化，以给出对映异构体5A(772mg)。将第二洗脱对映异构体(840mg)从醚/二异丙醚中固化，以给出对映异构体5B(724mg)。
化合物5：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.9Hz，2H)2.34(t，J＝7.3Hz，2H)3.14-3.35(m，2H)3.61(s，3H)3.80-3.89(m，5H)3.94-4.04(m，1H)4.51(td，J＝10.2，6.3Hz，1H)5.55(s，1H)5.76(s，1H)5.95(br d，J＝11.7Hz，2H)7.23(s，1H)7.43(d，J＝8.2Hz，2H)7.55(d，J＝8.2Hz，2H)8.34(s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.86min，MH+593
熔点：130℃
对映异构体5A：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.9Hz，2H)2.34(t，J＝7.3Hz，2H)3.12-3.31(m，2H)3.62(s，3H)3.81-3.89(m，5H)3.94-4.05(m，1H)4.45-4.56(m，1H)5.55(brs，1H)5.76(s，1H)5.95(br d，J＝11.0Hz，2H)6.40(br s，1H)7.23(s，1H)7.44(d，J＝8.2Hz，2H)7.56(d，J＝8.5Hz，2H)8.34(s，1H)12.14(br s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.85min，MH+593
[α]D 20：-43.2°(c 0.25，DMF)
手性SFC(方法SFC-D)：Rt2.16min，MH+593，手性纯度100％。
对映异构体5B：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.8Hz，2H)2.34(t，J＝7.3Hz，2H)3.13-3.33(m，2H)3.62(s，3H)3.79-3.88(m，5H)3.94-4.03(m，1H)4.51(td，J＝10.3，6.1Hz，1H)5.54(br s，1H)5.75(s，1H)5.95(br d，J＝11.3Hz，2H)6.40(br s，1H)7.23(s，1H)7.43(d，J＝8.2Hz，2H)7.55(d，J＝8.5Hz，2H)8.34(s，1H)12.14(br s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.85min，MH+593
[α]D 20：+41.4°(c 0.28，DMF)
手性SFC(方法SFC-D)：Rt 3.75min，MH+593，手性纯度99.37％。
实例6：4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)氯基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物6)的合成以及手性分离成对映异构体6A和6B。
中间体6a的合成：
将6-(三氟甲基)吲哚啉[CAS 181513-29-1](2g，10.7mmol)、2-(4-氯-2-甲氧基苯基)乙酸[CAS 170737-95-8](2.36g，11.8mmol)、HATU(6.1g，16mmol)和二异丙基乙胺(5.3mL，32mmol)于DMF(50mL)中的混合物在室温下搅拌12h。添加水并且将该沉淀过滤出。将残余物用EtOAc吸收。将有机溶液用10％K2CO3水溶液、盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并且在减压下蒸发溶剂。将残余物在硅胶上通过色谱法(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc梯度90/10至60/40)进行纯化。将纯的级分合并，并且将溶剂在减压下浓缩，以给出2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮6a(3.9g)。
中间体6b的合成：
在-78℃下，在N2流下，将1M于THF中的LiHMDS(13.5mL，13.5mmol)滴加至2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮6a(2.5g，6.76mmol)于THF(40mL)中的混合物中。将该混合物在-78℃下搅拌15min，并且滴加N-溴代琥珀酰亚胺(1.32g，7.44mmol)于THF(20mL)中的溶液。在-78℃下搅拌2h之后，将该反应用NH4Cl的饱和溶液淬灭。将该混合物用EtOAc进行萃取。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤并且将该溶剂在减压下蒸发，以给出2-溴-2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮6b(3g)。将该化合物按原样用于下一步骤中。
中间体6c的合成：
将2-溴-2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮6b(3g，6.69mmol)、4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯1a(1.88g，6.69mmol)和二异丙基乙胺(1.4mL，8mmol)于CH3CN(100mL)中的混合物在70℃下搅拌6h。将该混合物在减压下浓缩，用EtOAc稀释并且用1N HCl和水洗涤。将有机相分离，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将该化合物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc 80/20)进行纯化。将纯的级分合并，并且蒸发至干，以给出4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯6c(1.6g)。
化合物6的合成以及手性分离成对映异构体6A和6B：
将4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯6c(1.53g，2.36mmol)于在二噁烷(20mL)中的4MHCl中的溶液在5℃下搅拌3h并且在室温下搅拌8h。将该溶液在减压下浓缩。将该残余物吸收在CH3CN/二异丙醚中。将该沉淀过滤出并干燥，以提供呈HCl盐的4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物6)(1.35g，0.67当量HCl，0.28当量H2O)。将这些对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：OD-H 5μm 250x 30mm，流动相：65％CO2，35％EtOH)进行分离。将产物级分合并且在减压下蒸发。将第一洗脱对映异构体经由反相色谱法(固定相：YMC-actus Triart-C18 10μm 150x 30mm，流动相：梯度从55％甲酸0.1％、45％CH3CN至0％甲酸0.1％、100％CH3CN)进行进一步纯化。将纯的级分合并且在减压下蒸发。将该残余物(417mg)从石油醚/二异丙醚中固化，以给出对映异构体6A(370mg)。将第二洗脱对映异构体经由反相色谱法(固定相：YMC-actus Triart-C18 10μm 150x 30mm，流动相：梯度从55％甲酸0.1％、45％CH3CN至0％甲酸0.1％、100％CH3CN)进行进一步纯化。将纯的级分合并且在减压下蒸发。然后将该残余物(400mg)从石油醚/二异丙醚中固化，以给出对映异构体6B(363mg)。
化合物6：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm1.87(br t，J＝6.6Hz，2H)2.33(br t，J＝7.3Hz，2H)3.18-3.32(m，2H)3.61(s，3H)3.80-3.87(m，2H)3.90(s，3H)3.96-4.07(m，1H)4.31-4.45(m，1H)5.61(s，1H)5.76(s，1H)5.87(br d，J＝7.6Hz，2H)7.02(br d，J＝8.1Hz，1H)7.14(s，1H)7.32(d，J＝8.1Hz，1H)7.35-7.41(m，1H)7.43-7.50(m，1H)8.37(s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.90min，MH+593
熔点：130℃
对映异构体6A：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.9Hz，2H)2.33(t，J＝7.3Hz，2H)3.24(br dd，J＝18.6，11.7Hz，2H)3.61(s，3H)3.80-3.87(m，2H)3.90(s，3H)3.97-4.06(m，1H)4.33-4.43(m，1H)5.61(d，J＝8.8Hz，1H)5.76(s，1H)5.87(br d，J＝10.4Hz，2H)6.43(d，J＝8.5Hz，1H)7.03(dd，J＝8.2，1.9Hz，1H)7.15(d，J＝1.6Hz，1H)7.32(d，J＝8.2Hz，1H)7.39(d，J＝7.9Hz，1H)7.46(d，J＝7.9Hz，1H)8.37(s，1H)12.16(br s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.99min，MH+593
[α]D 20：-28.6°(c O.29，DMF)
手性SFC(方法SFC-E)：Rt 2.17min，MH+593，手性纯度100％。
熔点：178℃
对映异构体6B：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.9Hz，2H)2.33(t，J＝7.3Hz，2H)3.24(br dd，J＝18.8，11.5Hz，2H)3.61(s，3H)3.83(q，J＝6.2Hz，2H)3.90(s，3H)3.96-4.08(m，1H)4.32-4.43(m，1H)5.61(d，J＝8.5Hz，1H)5.76(s，1H)5.87(br d，J＝10.1Hz，2H)6.43(br d，J＝8.5Hz，1H)7.03(dd，J＝8.2，1.6Hz，1H)7.15(d，J＝1.6Hz，1H)7.32(d，J＝8.2Hz，1H)7.39(d，J＝7.6Hz，1H)7.46(d，J＝7.9Hz，1H)8.37(s，1H)12.16(br s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt3.00min，MH+593
[α]D 20：+32.1°(c 0.28，DMF)
手性SFC(方法SFC-E)：Rt4.04min，MH+593，手性纯度100％。
实例7：4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物7)的合成以及手性分离成对映异构体7A和7B。
中间体7a的合成：
将5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉5c(1.5g，6.9mmol)、2-(4-氯-2-甲氧基苯基)乙酸[CAS 170737-95-8](1.4g，6.9mmol)、HATU(3.94g，10.4mmol)和二异丙基乙胺(3.4mL，20.7mmol)于DMF(40mL)中的混合物在室温下搅拌12h。添加冰/水并且将该沉淀过滤出。将该残余物用CH2Cl2吸收。将有机溶液用10％K2CO3水溶液、盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并且在减压下蒸发溶剂。将该残余物从二异丙醚中结晶，以给出2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮7a(2.48g)。
中间体7b的合成：
在-78℃下，在N2流下，将1M于THF中的LiHMDS(16.5mL，16.5mmol)滴加至2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮7a(3.3g，8.25mmol)于THF(45mL)中的混合物中。滴加TMSCl(1.26mL，9.91mmol)。将该混合物在-78℃下搅拌15min，并且滴加N-溴代琥珀酰亚胺(1.76g，9.91mmol)于THF(30mL)中的溶液。在-78℃下搅拌2h之后，将该反应用NH4Cl的饱和溶液淬灭。将该混合物用EtOAc进行萃取。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤并且将该溶剂在减压下蒸发，以给出2-溴-2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮7b(3.5g)。将该化合物按原样用于下一步骤中。
中间体7c的合成：
将2-溴-2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮7b(3.5g，7.31mmol)、4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)-丁酸叔丁酯1a(2g，7.31mmol)和二异丙基乙胺(1.5mL，8.8mmol)于CH3CN(80mL)中的混合物在70℃下搅拌4h。将该混合物在减压下浓缩，用EtOAc稀释并且用1N HCl和水洗涤。将有机相分离，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将该化合物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc 80/20)进行纯化。将纯的级分合并，并且蒸发至干，以给出4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯7c(2.2g)。
化合物7的合成以及手性分离成对映异构体7A和7B：
将4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯7c(2.1g，3.1mmol)于在二噁烷(27.4mL)中的4M HCl中的溶液在5℃下搅拌3h并且在室温下搅拌8h。将该溶液在减压下浓缩。将该残余物吸收在CH3CN/二异丙醚中。将该沉淀过滤出并干燥，以提供呈HCl盐的4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物7)(1.5g，0.74当量HCl，0.29当量H2O)。将这些对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：OD-H 5μm 250x 30mm，流动相：55％CO2，45％iPrOH)进行分离。将产物级分合并且在减压下蒸发。将第一洗脱对映异构体(671mg)从石油醚/二异丙醚中固化，以给出对映异构体7A(606mg)。将第二洗脱对映异构体(647mg)从石油醚/二异丙醚中固化，以给出对映异构体6B(580mg)。
化合物7：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.7Hz，2H)2.34(t，J＝7.3Hz，2H)3.17-3.30(m，2H)3.61(s，3H)3.79-3.87(m，5H)3.90(s，3H)3.93-4.02(m，1H)4.29-4.40(m，1H)5.59(s，1H)5.75(s，1H)5.87(br d，J＝10.7Hz，2H)7.02(dd，J＝8.2，1.6Hz，1H)7.14(d，J＝1.3Hz，1H)7.24(s，1H)7.32(d，J＝8.5Hz，1H)8.32(s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.89min，MH+623
熔点：160℃
对映异构体7A：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(br t，J＝6.8Hz，2H)2.34(br t，J＝7.1Hz，2H)3.18-3.28(m，2H)3.61(s，3H)3.79-3.87(m，5H)3.91(s，3H)3.94-4.05(m，1H)4.31-4.42(m，1H)5.59(br d，J＝8.2Hz，1H)5.76(br s，1H)5.87(br d，J＝10.4Hz，2H)6.40(br d，J＝8.5Hz，1H)7.02(br d，J＝7.9Hz，1H)7.14(s，1H)7.24(s，1H)7.33(br d，J＝8.2Hz，1H)8.33(s，1H)12.18(br s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.87min，MH+623
[α]D 20：-23.9°(c 0.28，DMF)
手性SFC(方法SFC-C)：Rt1.76min，MH+623，手性纯度100％。
对映异构体7B：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.5Hz，2H)2.34(br t，J＝7.1Hz，2H)3.18-3.28(m，2H)3.61(s，3H)3.80-3.87(m，5H)3.91(s，3H)3.94-4.02(m，1H)4.28-4.41(m，1H)5.59(br d，J＝8.2Hz，1H)5.75(br s，1H)5.87(br d，J＝10.4Hz，2H)6.40(br d，J＝8.5Hz，1H)7.02(br d，J＝7.9Hz，1H)7.14(s，1H)7.24(s，1H)7.33(br d，J＝8.2Hz，1H)8.33(s，1H)12.17(br s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.87min，MH+623
[α]D 20：+28.5°(c 0.26，DMF)
手性SFC(方法SFC-C)：Rt3.52min，MH+623，手性纯度100％。
实例8：4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物8)的合成以及手性分离成对映异构体8A和8B。
中间体8a的合成：
将6-(三氟甲氧基)吲哚啉[CAS 959235-95-1](2.5g，12.3mmol)、2-(4-氯-2-甲氧基苯基)乙酸[CAS 170737-95-8](2.47g，12.3mmol)、HATU(7g，18.5mmol)和二异丙基乙胺(6.1mL，36.9mmol)于DMF(40-mL)中的混合物在室温下搅拌4h。添加水和EtOAc。将有机层分离，用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将残余物在硅胶上通过色谱法(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc 85/15)进行纯化。将纯的级分合并，并且将溶剂在减压下浓缩，以在从CH3CN/庚烷中结晶之后给出2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮8a(4.3g)。
中间体8b的合成：
在-78℃下，在N2流下，将1M于THF中的LiHMDS(19.7mL，19.7mmol)滴加至2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮8a(3.8g，9.8mmol)于THF(50mL)中的混合物中。滴加TMSCl(1.5mL，11.8mmol)。将该混合物在-78℃下搅拌15min，并且滴加N-溴代琥珀酰亚胺(1.9g，10.8mmol)于THF(35mL)中的溶液。在-78℃下搅拌2h之后，将该反应用NH4Cl的饱和溶液淬灭。将该混合物用EtOAc进行萃取。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤并且将该溶剂在减压下蒸发，以给出2-溴-2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮8b(4.5g)。将该化合物按原样用于下一步骤中。
中间体8c的合成：
将2-溴-2-(4-氯-2-甲氧基苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮8b(4.5g，9.68mmol)、4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯1a(2.7g，9.68mmol)和二异丙基乙胺(2mL，11.6mmol)于CH3CN(100mL)中的混合物在70℃下搅拌4h。将该混合物在减压下浓缩，用EtOAc稀释并且用1N HCl和水洗涤。将有机相分离，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将该残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，120g，庚烷/EtOAc 80/20)进行纯化。将纯的级分合并，并且蒸发至干，以在从CH3CN中结晶之后给出4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯8c(2.3g)。
化合物8的合成以及手性分离成对映异构体8A和8B：
将4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯8c(2.3g，3.46mmol)于在二噁烷(30mL)中的4M HCl中的溶液在5℃下搅拌3h并且在室温下搅拌12h。将该沉淀过滤出，用二异丙醚洗涤并干燥，以提供呈HCl盐的4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物8)(1.79g，0.86当量HCl，0.22当量H2O)。将这些对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：OD-H 5μm 250x 30mm，流动相：65％CO2，35％iPrOH)进行分离。将产物级分合并且在减压下蒸发。将第一洗脱对映异构体(726mg)从石油醚/二异丙醚中固化，以给出对映异构体8A(612mg)。将第二洗脱对映异构体(712mg)从石油醚/二异丙醚中固化，以给出对映异构体8B(643mg)。
化合物8：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.9Hz，2H)2.34(br t，J＝7.3Hz，2H)3.08-3.26(m，2H)3.61(s，3H)3.83(q，J＝6.5Hz，2H)3.90(s，3H)3.98-4.09(m，1H)4.31-4.42(m，1H)5.60(s，1H)5.76(s，1H)5.87(br d，J＝9.5Hz，2H)6.98-7.05(m，2H)7.14(d，J＝1.9Hz，1H)7.31(d，J＝8.2Hz，1H)7.34(d，J＝8.2Hz，1H)8.02(s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 3.04min，MH+609
熔点：139℃
对映异构体8A：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.9Hz，2H)2.33(t，J＝7.4Hz，2H)3.09-3.25(m，2H)3.61(s，3H)3.78-3.87(m，2H)3.90(s，3H)3.98-4.07(m，1H)4.32-4.42(m，1H)5.59(d，J＝8.5Hz，1H)5.76(s，1H)5.86(s，1H)5.88(s，1H)6.45(d，J＝8.8Hz，1H)6.97-7.06(m，2H)7.14(d，J＝1.3Hz，1H)7.31(d，J＝8.5Hz，1H)7.34(d，J＝8.2Hz，1H)8.02(s，1H)12.14(br s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt3.03min，MH+609
[α]D 20：-39.3°(c 0.28，DMF)
手性SFC(方法SFC-F)：Rt2.32min，MH+609，手性纯度100％。
对映异构体8B：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.8Hz，2H)2.34(t，J＝7.3Hz，2H)3.09-3.25(m，2H)3.61(s，3H)3.79-3.88(m，2H)3.90(s，3H)4.02(td，J＝10.2，6.9Hz，1H)4.33-4.41(m，1H)5.60(s，1H)5.76(s，1H)5.86(s，1H)5.88(s，1H)6.45(br s，1H)6.99-7.05(m，2H)7.14(d，J＝1.6Hz，1H)7.31(d，J＝8.5Hz，1H)7.34(d，J＝8.2Hz，1H)8.02(s，1H)12.12(br s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt3.03min，MH+609
[α]D 20：+34.5°(c 0.29，DMF)
手性SFC(方法SFC-F)：Rt3.51min，MH+609，手性纯度100％。
实例9：4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物9)的合成以及手性分离成对映异构体9A和9B。
中间体9a的合成：
将2-(4-氯-2-氟苯基)乙酸[CAS 194240-75-0](2.52g，13.4mmol)、6-(三氟甲基)吲哚啉[CAS 181513-29-1](2.5g，13.4mmol)、羟基苯并三唑(2.7g，20.04mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺(3.84g，20.04mmol)和三甲胺(3.71mL，26.7mmol)于CH2Cl2(30mL)中的混合物在室温下搅拌12h。添加水并且将各层进行分离。将有机层用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂，以在从CH3CN/二异丙醚中结晶之后给出2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮9a(3.9g)。将该化合物按原样用于下一步骤中。
中间体9b的合成：
在-78℃下，在N2流下，将1M于THF中的LiHMDS(13.98mL，13.98mmol)滴加至2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮9a(2.5g，6.99mmol)于THF(20mL)中的混合物中。将该混合物在-78℃下搅拌15min，并且滴加N-溴代琥珀酰亚胺(1.37g，7.69mmol)于THF(15mL)中的溶液。在-78℃下搅拌2h之后，将该反应用NH4Cl的饱和溶液淬灭。将该混合物用EtOAc进行萃取。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤并且将该溶剂在减压下蒸发，以给出2-溴-2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮9b(2.8g)。将该化合物按原样用于下一步骤中。
中间体9c的合成：
将2-溴-2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮9b(2.8g，6.41mmol)、4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯1a(1.8g，6.41mmol)和二异丙基乙胺(1.33mL，7.7mmol)于CH3CN(90mL)中的混合物在70℃下搅拌4h。将该混合物在减压下浓缩，用EtOAc稀释并且用1N HCl和水洗涤。将有机相分离，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将该残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc 80/20)进行纯化。将纯的级分合并，并且蒸发至干，以在从CH3CN/二异丙醚中结晶之后给出4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯9c(1.75g)。
化合物9的合成以及手性分离成对映异构体9A和9B：
将4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯9c(1.75g，2.75mmol)于在二噁烷(24.3mL)中的4M HCl中的溶液在5℃下搅拌3h并且在室温下搅拌8h。将该混合物在减压下浓缩。将该残余物从CH3CN/二异丙醚中结晶，以提供呈HCl盐的4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物9)(1.4g，0.8当量HCl，0.78当量H2O)。将这些对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：AD-H 5μm 250x30mm，流动相：70％CO2，30％iPrOH)进行分离。将产物级分合并且在减压下蒸发。将第一洗脱对映异构体(618mg)从石油醚/二异丙醚中固化，以给出对映异构体9A(505mg)。将第二洗脱对映异构体(548mg)从石油醚/二异丙醚中固化，以给出对映异构体9B(495mg)。
化合物9：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6-9Hz，2H)2.34(t，J＝7.3Hz，2H)3.18-3.34(m，2H)3.63(s，3H)3.80-3.90(m，2H)4.02-4.14(m，1H)4.40-4.49(m，1H)5.72(s，1H)5.80(s，1H)5.94(br d，J＝10.1Hz，2H)7.33(dd，J＝8.5，1.6Hz，1H)7.39-7.43(m，1H)7.43-7.50(m，3H)8.36(s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.99min，MH+581
熔点：110℃
对映异构体9A：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.7Hz，2H)2.33(br t，J＝7.1Hz，2H)3.22-3.28(m，2H)3.62(s，3H)3.80-3.90(m，2H)4.03-4.13(m，1H)4.39-4.48(m，1H)5.72(br d，J＝8.8Hz，1H)5.80(s，1H)5.93(br d，J＝10.7Hz，2H)6.60(br d，J＝8.8Hz，1H)7.33(br d，J＝7.9Hz，1H)7.39-7.43(m，1H)7.43-7.51(m，3H)8.36(s，1H)12.19(br s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.98min，MH+581
[α]D 20：-30.0°(c 0.29，DMF)
手性SFC(方法SFC-G)：Rt1.97min，MH+581，手性纯度100％。
对映异构体9B：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.9Hz，2H)2.33(t，J＝7.3Hz，2H)3.21-3.28(m，2H)3.63(s，3H)3.80-3.91(m，2H)4.02-4.12(m，1H)4.40-4.49(m，1H)5.72(d，J＝9.1Hz，1H)5.80(s，1H)5.94(br d，J＝11.0Hz，2H)6.60(br d，J＝8.8Hz，1H)7.33(dd，J＝8.2，1.6Hz，1H)7.38-7.43(m，1H)7.43-7.50(m，3H)8.36(s，1H)11.04-12.93(m，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.98min，MH+581
[α]D 20：+27.9°(c 0.28，DMF)
手性SFC(方法SFC-G)：Rt3.19min，MH+581，手性纯度99.35％。
实例10：4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物10)的合成以及手性分离成对映异构体10A和10B。
中间体10a的合成：
将HATU(7.02g，18.46mmol)添加至6-(三氟甲氧基)吲哚啉[CAS 959235-95-1](2.5g，12.3mmol)、2-(4-氯-2-氟苯基)乙酸[CAS 194240-75-0](2.32g，12.3mmol)和二异丙基乙胺(6.1mL，36.9mmol)于DMF(100mL)中的混合物中。将所得混合物在室温下搅拌12h。将该混合物用水稀释，将沉淀物过滤出并用水洗涤。将该残余物用EtOAc吸收，并且将有机溶液用10％K2CO3水溶液、盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并且在减压下蒸发溶剂。将该残余物产品从二异丙醚中结晶以给出2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮10a(4g)。
中间体10b的合成：
在-78℃下，在N2流下，将1M于THF中的LiHMDS(21.4mL，21.4mmol)滴加至2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮10a(4g，10.7mmol)于THF(60mL)中的混合物中。将该混合物在-78℃下搅拌15min，并且滴加N-溴代琥珀酰亚胺(2.1g，11.8mmol)于THF(40mL)中的溶液。在-78℃下搅拌2h之后，将该反应用NH4Cl的饱和溶液淬灭。将该混合物用EtOAc进行萃取。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤并且将该溶剂在减压下蒸发，以给出2-溴-2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮10b(4.8g)。将该化合物按原样用于下一步骤中。
中间体10c的合成：
将2-溴-2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮10b(3g，6.63mmol)、4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯1a(1.86g，6.63mmol)和二异丙基乙胺(1.37mL，7.95mmol)于CH3CN(60mL)中的混合物在70℃下搅拌4h。将该混合物在减压下浓缩，用EtOAc稀释并且用1N HCl 1N和水洗涤。将有机相分离，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将该残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，120g，庚烷/EtOAc 80/20)进行纯化。将纯的级分合并，并且蒸发至干，以给出4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯10c(835mg)。
化合物10的合成以及手性分离成对映异构体10A和10B：
将4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯10c(835mg，1.28mmol)于在二噁烷(11.3mL)中的4MHCl中的溶液在5℃下搅拌3h并且在室温下搅拌8h。将该溶液在减压下浓缩。将该残余物从二异丙醚中固化，以提供4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物10)(620mg)。将这些对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：IC 5μm 250x 30mm，流动相：70％CO2，30％iPrOH(+0.3％iPrNH2))进行分离。将产物级分合并且在减压下蒸发。将第一洗脱对映异构体(249mg)用EtOAc吸收并且用1N HCl洗涤。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤且在减压下浓缩。将该残余物从石油醚/二异丙醚中固化，以给出对映异构体10A(183mg)。将第二洗脱对映异构体(274mg)用EtOAc吸收并且用1N HCl洗涤。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤且在减压下浓缩。将该残余物从石油醚/二异丙醚中固化，以给出对映异构体10B(186mg)。
化合物10：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.8Hz，2H)2.33(br t，J＝7.3Hz，2H)3.09-3.24(m，2H)3.62(s，3H)3.81-3.89(m，2H)4.05-4.13(m，1H)4.38-4.47(m，1H)5.70(br d，J＝9.1Hz，1H)5.79(s，1H)5.93(brd，J＝9.8Hz，2H)6.62(brd，J＝8.8Hz，1H)7.03(brd，J＝8.2Hz，1H)7.31-7.37(m，2H)7.41-7.50(m，2H)8.02(s，1H)12.15(brs，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 3.07min.MH+597
对映异构体10A：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.9Hz，2H)2.34(t，J＝7.3Hz，2H)3.12-3.22(m，2H)3.62(s，3H)3.79-3.90(m，2H)4.04-4.13(m，1H)4.38-4.48(m，1H)5.70(d，J＝8.8Hz，1H)5.79(s，1H)5.93(br d，J＝9.8Hz，2H)6.62(d，J＝8.8Hz，1H)7.03(br d，J＝9.5Hz，1H)7.30-7.38(m，2H)7.41-7.51(m，2H)8.02(s，1H)12.10(br s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt3.04min，MH+597
[α]D 20：+23.1°(c 0.26，DMF)
手性SFC(方法SFC-H)：Rt 3.22min，MH+597，手性纯度100％。
对映异构体10B：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(br t，J＝6.8Hz，2H)2.34(br t，J＝7.3Hz，2H)3.12-3.25(m，2H)3.63(s，3H)3.80-3.90(m，2H)4.05-4.14(m，1H)4.38-4.49(m，1H)5.71(br d，J＝9.1Hz，1H)5.80(br s，1H)5.94(br d，J＝9.5Hz，2H)6.62(br d，J＝8.8Hz，1H)7.03(br d，J＝7.9Hz，1H)7.30-7.38(m，2H)7.41-7.52(m，2H)8.02(br s，1H)12.12(br s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt3.04min，MH+597
[α]D 20：-23.0°(c 0.3，DMF)
手性SFC(方法SFC-H)：Rt4.05min，MH+597，手性纯度100％。
实例11：4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物11)的合成以及手性分离成对映异构体11A和11B。
中间体11a的合成：
将HATU(5.25g，13.81mmol)添加至5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉5c(2g，9.21mmol)、2-(4-氯-2-氟苯基)乙酸[CAS 194240-75-0](1.74g，9.21mmol)和二异丙基乙胺(4.57mL，27.6mmol)于DMF(50mL)中的混合物中。将所得混合物在室温下搅拌12h。将该混合物用冰/水稀释。将沉淀过滤出并且用水洗涤。将残余物用CH2Cl2吸收并且将有机溶液用10％K2CO3水溶液、盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并且在减压下蒸发溶剂。将该残余物从二异丙醚中结晶，以给出2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮11a(3.4g)。
中间体11b的合成：
在-78℃下，在N2流下，将1M于THF中的LiHMDS(17.5mL，17.5mmol)滴加至2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮11a(3.4g，8.77mmol)于THF(45mL)中的混合物中。滴加TMSCl(1.34mL，10.5mmol)。将该混合物在-78℃下搅拌15min，并且滴加N-溴代琥珀酰亚胺(1.87g，10.52mmol)于THF(30mL)中的溶液。在-78℃下搅拌2h之后，将该反应用NH4Cl的饱和溶液淬灭。将该混合物用EtOAc进行萃取。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤并且将该溶剂在减压下蒸发，以给出2-溴-2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮11b(4g)。将该化合物按原样用于下一步骤中。
中间体11c的合成：
将2-溴-2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮11b(4g，8.57mmol)、4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯1a(2.4g，8.57mmol)和二异丙基乙胺(1.77mL，10.3mmol)于CH3CN(100mL)中的混合物在70℃下搅拌4h。将该混合物在减压下浓缩，用EtOAc稀释并且用1N HCl和水洗涤。将有机相分离，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将该化合物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc 80/20)进行纯化。将该化合物经由手性SFC(固定相：2-乙基吡啶5μm 150x 30mm，流动相：85％CO2，15％MeOH)进行进一步纯化。将纯的级分合并，并且蒸发至干，以给出4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯11c(2.6g)。
化合物11的合成以及手性分离成对映异构体11A和11B：
将4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯11c(2.2g，3.3mmol)于在二噁烷(29.2mL)中的4M HCl中的溶液在5℃下搅拌3h并且在室温下搅拌8h。将该溶液在减压下浓缩。将该残余物从CH3CN/二异丙醚中结晶，以提供呈HCl盐的4-(3-((1-(4-氯-2-氟苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物11)(800mg，0.85当量HCl，0.36当量H2O)。将此级分与另一批(总量：1.8g)合并用于手性分离。将这些对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：OD-H 5μm 250x 30mm，流动相：55％CO2，45％iPrOH)进行分离。将产物级分合并且在减压下蒸发。将第一洗脱对映异构体(788mg)从石油醚/二异丙醚中固化，以给出对映异构体11A(693mg)。将第二洗脱对映异构体(771mg)从石油醚/二异丙醚中固化，以给出对映异构体11B(695mg)。
化合物11：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(quin，J＝6.8Hz，2H)2.34(br t，J＝7.4Hz，2H)3.18-3.31(m，2H)3.63(s，3H)3.85(s，5H)3.98-4.09(m，1H)4.37-4.48(m，1H)5.69(s，1H)5.79(s，1H)5.93(br d，J＝11.0Hz，2H)7.26(s，1H)7.32(br d，J＝8.5Hz，1H)7.44-7.52(m，2H)8.32(s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.90min，MH+611
熔点：121℃
对映异构体11A：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.88(quin，J＝6.8Hz，2H)2.34(t，J＝7.3Hz，2H)3.18-3.29(m，2H)3.63(s，3H)3.86(s，5H)3.99-4.07(m，1H)4.38-4.47(m，1H)5.69(br s，1H)5.79(s，1H)5.93(brd，J＝10.7Hz，2H)6.55(br s，1H)7.25(s，1H)7.32(dd，J＝8.5，1.3Hz，1H)7.43-7.51(m，2H)8.33(s，1H)12.13(br s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.90min，MH+611
[α]D 20：-23.9°(c 0.26，DMF)
手性SFC(方法SFC-C)：Rt 1.70min，MH+611，手性纯度100％。
对映异构体11B：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.88(quin，J＝6.8Hz，2H)2.34(br t，J＝7.3Hz，2H)3.18-3.31(m，2H)3.63(s，3H)3.85(s，5H)3.99-4.07(m，1H)4.37-4.47(m，1H)5.69(brs，1H)5.79(s，1H)5.93(br d，J＝11.0Hz，2H)6.56(br s，1H)7.25(s，1H)7.32(br d，J＝8.2Hz，1H)7.43-7.50(m，2H)8.33(s，1H)12.13(br s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.89min，MH+611
[α]D 20：+24.0°(c 0.25，DMF)
手性SFC(方法SFC-C)：Rt 2.96min，MH+611，手性纯度100％。
实例12：4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物12)的合成以及手性分离成对映异构体12A和12B。
中间体12a的合成：
在5℃下，将4-甲氧基-3-(三氟甲氧基)苯胺[CAS 647855-21-8](3.1g，15.0mmol)于甲苯(50mL)中的溶液用N-溴代琥珀酰亚胺(2.8g，15.7mmol)处理并且将所得混合物在5℃-10℃下搅拌2h。将该混合物用水淬灭并且用EtOAc萃取。将合并的萃取物经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发。通过在硅胶上快速层析(15-40μm，24g，庚烷/EtOAc梯度95/5至90/10)进行纯化。将纯的级分合并，并蒸发至干以给出2-溴-4-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯胺12a(2.5g)。
中间体12b的合成：
将2-溴-4-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯胺12a(2.72g，9.51mmol)于DMF(30mL)中的溶液用N2脱气15min。添加二氯双(三苯基膦)钯(667mg，0.95mmol)、碘化铜(I)(362mg，1.90mmol)、三乙胺(3.96mL，28.5mmol)和三甲基甲硅烷基乙炔(3.95mL，28.53mmol)。将该反应混合物在70℃下在N2流下加热12h。在冷却至室温之后，将该反应混合物用H2O稀释并用EtOAc萃取。将有机相合并，经MgSO4干燥，过滤且在减压下浓缩。将该残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc 85/15)进行纯化。将纯的级分合并，并且蒸发至干以给出4-甲氧基-5-(三氟甲氧基)-2-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯胺12b(1.4g)。
中间体12c的合成：
在N2流下，向4-甲氧基-5-(三氟甲氧基)-2-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯胺12b(1.2g，3.96mmol)于NMP(11mL)中的溶液里一次性添加tBuOK(1.33g，11.9mmol)。将该反应混合物在80℃下加热4h，在冷却至室温之后，将该混合物倾倒入冰/水中并且用3N HCl酸化直至pH 4-5。将反应混合物用EtOAc萃取。合并有机相，用H2O洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将该残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，40g，庚烷/EtOAc 85/15)进行纯化。将纯的级分合并，并且蒸发至干以给出5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)-1H-吲哚12c(490mg)。
中间体12d的合成：
在0℃下，将BH3-吡啶(10.5mL，103.8mmol)滴加至5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)-1H-吲哚12c(8g，34.6mmol)于EtOH(45mL)中的溶液中。缓慢添加6N HCl(6mL)，同时保持温度低于10℃。将该混合物在0℃下搅拌3h。添加水(210mL)，并且将该混合物用NaOH在水中的浓溶液碱化直至pH 8-9(在添加期间，该反应温度保持低于20℃)。将该混合物用EtOAc进行萃取。将有机层用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。添加甲苯并且将该溶液在减压下浓缩，以给出7.5g的5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉12d。
中间体12e的合成：
将5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉12d(1g，4.29mmol)、2-(4-氯苯基)乙酸[CAS1878-66-6](805mg，4.72mmol)、HATU(2.44g，6.43mmol)和二异丙基乙胺(2.13mL，12.87mmol)于DMF(20mL)中的混合物在室温下搅拌12h。添加冰/水并且将该沉淀过滤出。将该残余物用CH2Cl2吸收。将有机溶液分离，经MgSO4干燥，过滤并且将该溶剂在减压下蒸发，以给出2-(4-氯苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮12e(1.68g)。
中间体12f的合成：
在-78℃下，在N2流下，将1M于THF中的LiHMDS(8.3mL，8.3mmol)滴加至2-(4-氯苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮12e(1.6g，4.15mmol)于THF(25mL)中的混合物中。滴加TMSCl(0.63mL，4.98mmol)。将该混合物在-78℃下搅拌15min，并且滴加N-溴代琥珀酰亚胺(0.89g，4.98mmol)于THF(15mL)中的溶液。在-78℃下搅拌2h之后，将该反应用NH4Cl的饱和溶液淬灭。将该混合物用EtOAc进行萃取。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤并且将该溶剂在减压下蒸发，以给出2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮12f(2.3g，纯度(通过LC)：50％)。将该化合物按原样用于下一步骤中。
中间体12g的合成：
将2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮12f(2.3g，2.48mmol，纯度(通过LC)：50％)、4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯1a(0.696g，2.48mmol)和二异丙基乙胺(0.512mL，2.97mmol)于CH3CN(25mL)中的混合物在70℃下搅拌4h。将该混合物在减压下浓缩，用EtOAc稀释并且用1N HCl和水洗涤。将有机相分离，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将该残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc80/20)进行纯化。将包含产物的级分合并，并且在减压下蒸发，并且将该残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，40g，CH2Cl2)再次纯化。将纯的级分合并，并且蒸发至干以给出4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯12g(920mg)。
化合物12的合成以及手性分离成对映异构体12A和12B：
将4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸叔丁酯12g(920mg，1.38mmol)于在二噁烷(15mL)中的4MHCl中的溶液在5℃下搅拌3h并且在室温下搅拌12h。将该沉淀过滤出，用二异丙醚洗涤并干燥，以提供4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物12，802mg，0.2当量H2O)。将这些对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：AD-H 5μm 250x 20mm，流动相：50％CO2，50％iPrOH)进行分离。将产物级分合并且在减压下蒸发。将第一洗脱对映异构体(260mg)从庚烷/二异丙醚中固化，以给出对映异构体12A(165mg)。将第二洗脱对映异构体(241mg)从庚烷/二异丙醚中固化，以给出对映异构体12B(184mg)。
化合物12：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.86(quin，J＝6.9Hz，2H)2.33(t，J＝7.3Hz，2H)3.08-3.28(m，2H)3.61(s，3H)3.81(s，3H)3.84(br t，J＝6.5Hz，2H)3.97-4.06(m，1H)4.48(td，J＝10.4，6.3Hz，1H)5.53(s，1H)5.75(s，1H)5.94(br d，J＝10.1Hz，2H)7.20(s，1H)7.43(d，J＝8.5Hz，2H)7.54(d，J＝8.5Hz，2H)8.06(s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.89min，MH+609
对映异构体12A：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.86(quin，J＝6.8Hz，2H)2.33(t，J＝7.3Hz，2H)3.09-3.26(m，2H)3.61(s，3H)3.81(s，3H)3.84(br t，J＝6.5Hz，2H)4.02(td，J＝10.3，7.1Hz，1H)4.48(td，J＝10.4，6.3Hz，1H)5.53(d，J＝8.5Hz，1H)5.75(s，1H)5.93(s，1H)5.95(s，1H)6.43(d，J＝8.8Hz，1H)7.20(s，1H)7.43(d，J＝8.2Hz，2H)7.55(d，J＝8.5Hz，2H)8.06(s，1H)12.12(br s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.92min，MH+609
[α]D 20：-44.2°(c 0.197，DMF)
手性SFC(方法SFC-I)：Rt0.99min，MH+609，手性纯度100％。
对映异构体12B：
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.86(quin，J＝6.9Hz，2H)2.33(t，J＝7.3Hz，2H)3.09-3.27(m，2H)3.61(s，3H)3.81(s，3H)3.84(br t，J＝6.5Hz，2H)3.98-4.06(m，1H)4.48(td，J＝10.5，6.1Hz，1H)5.53(d，J＝8.8Hz，1H)5.75(s，1H)5.93(s，1H)5.95(s，1H)6.43(d，J＝8.8Hz，1H)7.20(s，1H)7.43(d，J＝8.5Hz，2H)7.54(d，J＝8.5Hz，2H)8.06(s，1H)12.16(br s，1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.91min，MH+609
[α]D 20：+40.7°(c 0.189，DMF)
手性SFC(方法SFC-I)：Rt1.45min，MH+609，手性纯度98.53％。
表：如以上所述制备的化合物
本发明的化合物的抗病毒活性
DENV-2抗病毒测定
本发明的所有化合物的抗病毒活性针对DENV-2 16681株进行测试，该菌株用增强型绿色荧光蛋白标记(eGPF)。培养基由补充有2％热灭活的胎牛血清、0.04％庆大霉素(50mg/mL)以及2mM L-谷氨酰胺的最低必需培养基组成。将获自ECACC的维洛(Vero)细胞悬浮于培养基中，并且将25μL添加至384孔板(2500个细胞/孔)，这些板已经含有抗病毒化合物。通常，这些板包含测试化合物的9个稀释步骤的5倍连续稀释液，在于100％DMSO(200nL)中的最终浓度的200倍下。此外，一式四份地测试每一化合物浓度(对于多数活性化合物而言，最终浓度范围：25μM-0.000064μM或2.5μM-0.0000064μM)。最后，每个板包含被指定为病毒对照(在不存在化合物的情况下包含细胞和病毒)、细胞对照(在不存在病毒和化合物的情况下包含细胞)和培养基对照(在不存在细胞、病毒和化合物的情况下包含培养基)的孔。向被指定为培养基对照的这些孔添加25μL的培养基而不是维洛(Vero)细胞。一旦细胞被添加到这些板，就将这些板在室温下孵育30分钟以便允许这些细胞在这些孔内均匀地分布。接着，将这些板在一个完全润湿的孵育箱(37℃，5％CO2)中孵育直到第二天。然后，以0.5的感染复数(MOI)添加用eGFP标记的DENV-2株16681。因此，将15μL的病毒悬浮液添加至所有包含测试化合物的孔中并且添加至被指定为病毒对照的孔中。并行地，将15μL的培养基添加至培养基对照和细胞对照。接着，将这些板在一个完全润湿的孵育箱(37℃，5％CO2)中孵育3天。在读出当天，使用自动化荧光显微镜在488nm(蓝色激光)下测量eGFP荧光。使用内部LIMS系统，计算每种化合物的抑制剂量反应曲线并且测定半最大有效浓度(EC50)。因此，使用以下公式来计算每一测试浓度的抑制百分比(I)：I＝100*(ST-SCC)/(SVC-SCC)；ST、SCC和SVC分别是测试化合物孔、细胞对照孔和病毒对照孔中的eGFP信号的量。EC50表示如通过相较于病毒对照的eGFP荧光强度的50％降低所测量，病毒复制被抑制50％的化合物的浓度。使用线性内插法计算EC50(表1)。
并行地，在相同板上评定这些化合物的毒性。一旦进行eGFP信号的读出，就将40μL的ATPlite(一种细胞存活力染色剂)添加至384孔板的所有孔。ATP存在于所有代谢活性细胞中，并且当细胞经历坏死或凋亡时，浓度下降非常迅速。ATPLite测定系统是基于通过ATP与添加的荧光素酶和萤虫素反应引起的光的产生。将这些板在室温下孵育10分钟。接着，在ViewLux上测量这些板。还测定了半最大细胞毒性浓度(CC50)，其被定义为使发光信号相较于细胞对照孔的发光信号降低50％所需的浓度。最后，测定这些化合物的选择性指数(SI)，该指数如下计算：SI＝CC50/EC50。
表1：在DENV-2抗病毒测定中本发明的化合物的EC50、CC50和SI
N＝对这些化合物进行测试的独立实验的数目。
四价逆转录酶定量-PCR(RT-qPCR)测定
在RT-qPCR测定中测试本发明的化合物针对DENV-1株TC974#666(NCPV)、DENV-2株16681、DENV-3株H87(NCPV)以及DENV-4株H241(NCPV)的抗病毒活性。因此，在存在或不存在测试化合物的情况下用DENV-1抑或DENV-2抑或DENV-3抑或DENV-4感染维洛(Vero)细胞。在感染后第3天，将细胞溶解并且细胞溶解产物用于制备病毒靶标(DENV的3’UTR；表2)和细胞参考基因(β-肌动蛋白，表2)两者的cDNA。随后，在Lightcycler480仪上进行双重实时PCR。所生成的Cp值与这些靶标的RNA表达的量成反比。通过一种测试化合物抑制DENV复制导致3’UTR基因的Cp的移位。另一方面，如果测试化合物对这些细胞来说是具有毒性的，那么将观察到对β-肌动蛋白表达的类似作用。对比ΔΔCp方法用于计算EC50，该方法是基于用细胞管家基因(β-肌动蛋白)标准化的靶基因(3’UTR)的相对基因表达。此外，CC50值是基于针对管家基因β-肌动蛋白获取的Cp值来测定的。
表2：用于实时定量RT-PCR的引物和探针。
a报道染料(FAM，HEX)和淬灭剂(ZEN和IABkFQ)元素以粗体和斜体指示。
b这些引物和探针的核苷酸序列选自登革热病毒基因组的3’UTR区中的保守区，其是基于保藏在Genbank的四种登革热血清型的300个核苷酸序列的比对(宫(Gong)等人，2013，分子生物学方法(Methods Mol Biol)，第16章)。
培养基由补充有2％热灭活的胎牛血清、0.04％庆大霉素(50mg/mL)以及2mM L-谷氨酰胺的最低必需培养基组成。将获自ECACC的维洛(Vero)细胞悬浮于培养基中，并且将75μL/孔添加在96孔板(10000个细胞/孔)中，这些板已经包含抗病毒化合物。通常，这些板包含测试化合物的9个稀释步骤的5倍连续稀释液，在于100％DMSO(500nL；对于大多数活性化合物而言，最终浓度范围：25μM-0.000064μM或2.5μM-0.0000064μM)中的最终浓度的200倍下。此外，每个板包含被指定为病毒对照(在不存在化合物的情况下包含细胞和病毒)和细胞对照(在不存在病毒和化合物的情况下包含细胞)的孔。一旦将这些细胞添加在这些板中，就将这些板在一个完全润湿的孵育箱(37℃，5％CO2)中孵育直到第二天。稀释登革热病毒血清型1、-2、-3和-4，以便在测定中获得约22-24的Cp。因此，将25μL的病毒悬浮液添加至所有包含测试化合物的孔中并且添加至被指定为病毒对照的孔中。并行地，将25μL的培养基添加至细胞对照。接着，将这些板在一个完全润湿的孵育箱(37℃，5％CO2)中孵育3天。在3天之后，将上清液从这些孔中除去并且将这些细胞用冰冷PBS(约100μL)洗涤两次。将这些96-孔板内的细胞沉淀储存在-80℃下持续至少1天。接着，根据制造商的指导(生命技术公司(Life Teehnologies))使用Cells-to-CTTM溶解试剂盒提取RNA。这些细胞溶解产物可以储存在-80℃下或立即用于逆转录步骤中。
在逆转录步骤的准备中，制备混合物A(表3A)并且将7.57μL/孔分配在96孔板中。在添加5μL的细胞溶解产物之后，进行在75℃下的五分钟变性步骤(表3B)。之后，添加7.43μL的混合物B(表3C)并且起始逆转录步骤(表3D)以产生eDNA。
最后，制备RT-qPCR混合物，混合物C(表4A)，并且将该混合物(22.02μL/孔)分配在96孔LightCycler qPCR板中，向这些板添加3μL的cDNA，并且根据表4B中的条件在LightCycler 480上进行qPCR。
使用LightCycler软件和一种内部LIMS系统，计算每种化合物的剂量反应曲线，并且测定半最大有效浓度(EC50)和半最大细胞毒性浓度(CC50)(表5-8)。
表3：使用混合物A、变性、混合物B和逆转录进行cDNA合成
混合物A
B 变性步骤：
步骤 温度 时间
变性 75℃ 5′
保持 4℃ 保持
C 混合物B
D 方案cDNA合成
步骤 温度 时间
逆转录 42℃ 30′
变性 99℃ 5′
保持 4℃ 保持
表4：qPCR混合物和方案。
A 混合物C
B 方案qPCR3
表5：在RT-qPCR测定中化合物针对血清型1的EC50、CC50和SI
N＝对这些化合物进行测试的独立实验的数目。
表6：在RT-aPCR测定中化合物针对血清型2的EC50、CC50和SI
N＝对这些化合物进行测试的独立实验的数目。
表7：在RT-qPCR测定中化合物针对血清型3的EC50、CC50和SI
N＝对这些化合物进行测试的独立实验的数目。
表8：在RT-aPCR测定中化合物针对血清型4的EC50、CC50和SI
N＝对这些化合物进行测试的独立实验的数目。
现有技术实例
披露于WO-2013/045516中的化合物(56)和(170)作为本发明的化合物已经在类似的DENV-2抗病毒测定中被检测并且以下列出了其经报道的活性。
表9：披露于DENV-2抗病毒测定中的化合物(56)和(170)的EC50、CC50和SI
化合物# EC50(μM) CC50(μM) SI
WO-2013/045516的(56) 0.45 ＞139 ＞312
WO-2013/045516的(170) 0.44 26 58
实验部分中所使用的缩写

Claims (14)

1.一种具有化学式(I)的化合物
其立体异构形式、药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，其中这些化合物选自下组，该组包括：
2.一种药物组合物，包括根据权利要求1所述的化合物或其立体异构形式、其药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，连同一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
3.根据权利要求1所述的化合物或其立体异构形式、其药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，或根据权利要求2所述的药物组合物，用于用作药剂。
4.根据权利要求1所述的化合物或其立体异构形式、其药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，或根据权利要求2所述的药物组合物，用于在治疗登革热中使用。
5.一种由来自权利要求1的任一结构式所表示的化合物、其立体异构形式、药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物用于抑制生物样品或患者中的一种或多种登革热病毒的复制的用途，该化合物包含单取代的或二取代的吲哚基团。
6.根据权利要求5所述的化合物的用途，进一步包括共同给予另外的治疗剂。
7.如权利要求6所述的用途，其中所述另外的治疗剂选自抗病毒剂或登革热疫苗或两者。
8.如权利要求1所述的化合物，其中该化合物是
或其药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物。
9.一种药物组合物，包括根据权利要求8所述的化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，连同一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
10.根据权利要求8所述的化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，或根据权利要求9所述的药物组合物，用于用作药剂。
11.根据权利要求8所述的化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，或根据权利要求9所述的药物组合物，用于在治疗登革热中使用。
12.一种由来自权利要求8的任一结构式表示的化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物用于抑制生物样品或患者中的一种或多种登革热病毒的复制的用途，该化合物包含单取代的或二取代的吲哚基团。
13.根据权利要求12所述的用途，该用途进一步包括共同给予另外的治疗剂。
14.根据权利要求13所述的用途，其中所述另外的治疗剂选自抗病毒剂或登革热疫苗或两者。
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Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201116559D0 (en) 2011-09-26 2011-11-09 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
GB201305376D0 (en) 2013-03-25 2013-05-08 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
JOP20160086B1 (ar) 2015-05-08 2021-08-17 2 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research And Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20160198B1 (ar) 2015-09-16 2022-03-14 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JO3633B1 (ar) 2015-09-16 2020-08-27 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research & Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
EP3436435B1 (en) 2016-03-31 2021-05-12 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Substituted indole derivatives as dengue viral replication inhibitors
MA44498A (fr) 2016-03-31 2019-02-06 Janssen Pharmaceuticals Inc Dérivés d'indoline substituée utilisés en tant qu'inhibiteurs de la réplication du virus de la dengue
SG11201808237UA (en) 2016-04-01 2018-10-30 Janssen Pharmaceuticals Inc Substituted indole compound derivatives as dengue viral replication inhibitors
JOP20170069B1 (ar) 2016-04-01 2021-08-17 1 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20180025B1 (ar) 2017-03-31 2021-08-17 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20180026A1 (ar) 2017-03-31 2019-01-30 Univ Leuven Kath مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
PE20200604A1 (es) * 2017-05-22 2020-03-10 Janssen Pharmaceuticals Inc Derivados de indolina sustituidos como inhibidores de la replicacion virica de dengue
TWI771420B (zh) * 2017-05-22 2022-07-21 美商健生醫藥公司 作為登革熱病毒複製抑制劑之經取代之吲哚啉衍生物（一）
US20220409583A1 (en) 2019-11-15 2022-12-29 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Treatment and Prevention of Dengue Disease
WO2025248536A1 (en) * 2024-05-29 2025-12-04 Zydus Lifesciences Limited Novel oxime derivatives to treat viral infections
WO2025253267A1 (en) 2024-06-06 2025-12-11 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Combination of mosnodenvir and close analogs with nitd-688 for use in the treatment and prevention of dengue disease

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010021878A1 (en) * 2008-08-19 2010-02-25 Janssen Pharmaceutica Nv Cold menthol receptor antagonists
CN104024223A (zh) * 2011-09-26 2014-09-03 鲁汶天主教大学 病毒复制抑制剂

Family Cites Families (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999021559A1 (en) 1997-10-27 1999-05-06 Eli Lilly And Company MORPHOLINO-N-ETHYL ESTER PRODRUGS OF INDOLE sPLA2 INHIBITORS
GB0110832D0 (en) 2001-05-03 2001-06-27 Virogen Ltd Antiviral compounds
EP1519735A4 (en) 2001-12-12 2006-01-11 Conforma Therapeutic Corp ASSAYS AND DEVICES FOR DETERMINING AND MODULATING HSP90 BINDING ACTIVITY
GB0215293D0 (en) 2002-07-03 2002-08-14 Rega Foundation Viral inhibitors
JP2008526980A (ja) 2005-01-14 2008-07-24 ジェネラブズ テクノロジーズ インコーポレーティッド ウイルス感染症を治療するためのインドール誘導体
MX2007009561A (es) 2005-02-09 2008-01-14 Migenix Inc Composiciones y metodos para tratar o evitar infecciones de flaviviridae.
AU2009256390A1 (en) 2008-06-03 2009-12-10 Siga Technologies, Inc. Small molecule inhibitors for the treatment or prevention of dengue virus infection
TWI453207B (zh) 2008-09-08 2014-09-21 Signal Pharm Llc 胺基三唑并吡啶，其組合物及使用其之治療方法
WO2010091413A1 (en) 2009-02-09 2010-08-12 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Linked dibenzimidazole derivatives
GB0910003D0 (en) 2009-06-11 2009-07-22 Univ Leuven Kath Novel compounds for the treatment of neurodegenerative diseases
US8993604B2 (en) 2009-06-30 2015-03-31 Siga Technologies, Inc. Treatment and prevention of dengue virus infections
NZ600816A (en) 2010-01-15 2014-08-29 Gilead Sciences Inc Inhibitors of flaviviridae viruses
US20130023532A1 (en) 2010-03-26 2013-01-24 Casillas Linda N Indazolyl-pyrimidines as kinase inhibitors
JP5716205B2 (ja) 2011-03-29 2015-05-13 学校法人日本大学 グルコシダーゼ活性阻害用組成物及びそのスクリーニング方法
GB201305376D0 (en) 2013-03-25 2013-05-08 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
JP6452119B2 (ja) 2013-10-23 2019-01-16 ヤンセン・サイエンシズ・アイルランド・アンリミテッド・カンパニー カルボキサミド誘導体およびｂ型肝炎の処置のための医薬品としてのその使用
BR112016015717B1 (pt) 2014-01-31 2023-04-04 Bristol-Myers Squibb Company Compostos macrociclos com grupos p2' heterocíclicos como inibidores do fator xia, composição farmacêutica compreendendo os referidos compostos e uso dos mesmos
TWI681951B (zh) 2014-10-01 2020-01-11 美商健生醫藥公司 作為登革熱病毒複製抑制劑之單-或二-取代的吲哚衍生物
PT3201177T (pt) * 2014-10-01 2019-02-12 Univ Leuven Kath Indóis mono- ou di-substituídos como inibidores de replicação viral do dengue
NO2721243T3 (zh) 2014-10-01 2018-10-20
PH12017501272B1 (en) * 2015-01-16 2023-01-11 Janssen Pharmaceuticals Inc Indole derivatives as dengue viral replication inhibitors
AR103680A1 (es) 2015-02-23 2017-05-24 Lilly Co Eli Inhibidores selectivos de bace1
JOP20160086B1 (ar) 2015-05-08 2021-08-17 2 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research And Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JO3633B1 (ar) 2015-09-16 2020-08-27 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research & Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20160198B1 (ar) 2015-09-16 2022-03-14 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
AU2016350868B2 (en) 2015-11-03 2022-03-31 Zoetis Services Llc Sol-gel polymer composites and uses thereof
MA44498A (fr) 2016-03-31 2019-02-06 Janssen Pharmaceuticals Inc Dérivés d'indoline substituée utilisés en tant qu'inhibiteurs de la réplication du virus de la dengue
EP3436435B1 (en) 2016-03-31 2021-05-12 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Substituted indole derivatives as dengue viral replication inhibitors
TWI738753B (zh) 2016-03-31 2021-09-11 日商武田藥品工業股份有限公司 雜環化合物
NZ746554A (en) 2016-04-01 2023-03-31 Signal Pharm Llc Substituted aminopurine compounds, compositions thereof, and methods of treatment therewith
IL296966A (en) 2016-04-01 2022-12-01 Amgen Inc Chimeric receptors to flt3 and methods of use thereof
PE20181898A1 (es) 2016-04-01 2018-12-11 Basf Se Compuestos biciclicos
TWI691596B (zh) 2016-04-01 2020-04-21 美商凱特製藥公司 嵌合抗原和ｔ細胞受體及使用方法
SG11201808237UA (en) 2016-04-01 2018-10-30 Janssen Pharmaceuticals Inc Substituted indole compound derivatives as dengue viral replication inhibitors
JOP20170069B1 (ar) 2016-04-01 2021-08-17 1 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
PE20200400A1 (es) 2016-04-01 2020-02-26 Kite Pharma Inc Receptores quimericos y metodos de uso de los mismos
JOP20180026A1 (ar) 2017-03-31 2019-01-30 Univ Leuven Kath مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20180025B1 (ar) 2017-03-31 2021-08-17 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
TWI771420B (zh) 2017-05-22 2022-07-21 美商健生醫藥公司 作為登革熱病毒複製抑制劑之經取代之吲哚啉衍生物（一）
PE20200604A1 (es) 2017-05-22 2020-03-10 Janssen Pharmaceuticals Inc Derivados de indolina sustituidos como inhibidores de la replicacion virica de dengue

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010021878A1 (en) * 2008-08-19 2010-02-25 Janssen Pharmaceutica Nv Cold menthol receptor antagonists
CN104024223A (zh) * 2011-09-26 2014-09-03 鲁汶天主教大学 病毒复制抑制剂

Also Published As

Publication number Publication date
CA3013406C (en) 2024-01-09
AU2017242894B2 (en) 2021-07-29
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