CN108834889B - 一种提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及铁皮石斛育苗技术，具体涉及一种提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法，包括步骤：A原球茎诱导：将铁皮石斛蒴果浸泡于诱导液中于温度为10‑18℃条件下恒温浸泡10‑12h；B内生菌活化：将浸泡后蒴果置于搅拌机内，加入发酵菌剂及葡萄糖酸铜，在180‑240r/min的转速下搅拌处理5‑12min；C增殖培养：将活化处理的蒴果播种于紫薯基栽培基质上，于温度为20‑25℃条件下恒温培育30‑35d；D生根培养：将增殖培养后的芽苗置于矿石基栽培基质上，自然培育；采用本发明的铁皮石斛育苗方法，操作简便，绿色无污染，成活率高，提高了铁皮石斛的抗病能力，移栽成活率高达99.5％以上。
Description
技术领域
本发明涉及铁皮石斛育苗技术，具体涉及一种提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法。
背景技术
铁皮石斛为兰科石斛属多年生草本，含有多糖、甘露醇、多种生物碱、多种氨基酸、挥发性物质、微量元素及黏液质等，可增强身体免疫力、延缓衰老、缓解疲劳、抗氧化、降血压、降血糖、促消化、促唾液分泌、抗肿瘤、化痰止咳、预防辐射损伤等多方面的作用。随着野生铁皮石斛越来越少，濒临绝种，但需求量日渐增加的情况，人工种植尤为重要，但人工栽培铁皮石斛种苗来源绝大多数为种子无菌萌发获得的试管苗，试管苗经过继代，种苗长势变差且易感病，影响了铁皮石斛的观赏性、质量和产量。
专利号201711086415.5公开了一种石斛多倍体育苗方法，涉及石斛育苗技术领域。本发明石斛多倍体育苗方法，包括以下步骤：1)选择尚未开裂的石斛多倍体种子的种包，表面灭菌处理，取出种子浸泡在二氧化碳甘斯溶液；2)将鸡粪、果壳、枯枝烂叶、氯化钠按照质量比混合均匀后密封发酵，加清水稀释并过滤出细浆备用；3)采用杉木边皮板或不易脱皮的成活树木，苗床铺上5～8cm厚的培养基，将石斛多倍体种子浸泡于步骤2)过滤出的细浆，埋于培养基中；4)苗床内的温度控制在20～25℃，每隔5～8天浇灌一次，阳光透过率以20～30％为宜，该专利具有操作简便，人力物力投入少，绿色无污染，成活率高，提高了石斛多倍体的抗病能力，移栽成活率高的好处。
专利号CN201610718627.X公开了一种石斛的育苗方法，属于农业种植技术领域。包括苗床选择、基质配置、浸种和种植，其中浸种是将石斛种子在二氧化碳甘斯溶液中浸泡后再进行种植。其中，石斛种子选择有尚未开裂的种包，要将种包用75vol％的酒精溶液进行表面灭菌处理，取出种子浸泡在二氧化碳甘斯溶液中，种子与溶液的质量比为20～30:900～1005。基质配置是采用牛粪、米汤和食盐按照质量比80～110:3～7:40～60均匀混合后密封发酵25～30天，在使用之前加入相应质量比40～60份数的清水稀释并过滤后待用。该专利具有操作简单，获得的植株发芽率高，重复生长周期长，抗病能力强，生长快，移栽成活率高的优势。
但上述方法中不可缺少杀菌步骤，同时也抑制了铁皮石斛的内生菌和有益微生物的发展，进而影响了铁皮石斛药效。
发明内容
本发明为解决上述技术问题，本发明提供了一种提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法。
具体按照以下技术方案实现：
一种提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法，包括步骤：
A原球茎诱导：将铁皮石斛蒴果浸泡于诱导液中于温度为10-18℃条件下恒温浸泡10-12h；
B内生菌活化：将浸泡后蒴果置于搅拌机内，加入蒴果质量0.1-0.5％的发酵菌剂及蒴果质量0.04-0.07％的葡萄糖酸铜，在180-240r/min的转速下搅拌处理5-12min；
C增殖培养：将活化处理的蒴果播种于紫薯基栽培基质上，于温度为20-25℃条件下恒温培育30-35d；
D生根培养：将增殖培养后的芽苗置于矿石基栽培基质上，自然培育。
上述方法中，所述诱导液包括以下重量份组分：番石榴10-15份、苦瓜3-7份、芹菜4-6份、蒲公英12-17份、水25-30份。
进一步地，所述诱导液的制备方法为：将番石榴、苦瓜、芹菜、蒲公英切碎后，分别置于功率为200-300W条件下微波处理至含水量为各鲜料含水量的10-15％，研磨成粉后混合，加入至水中，大火熬煮0.8-1.2h。
上述方法中，所述发酵菌剂为双歧杆菌、枯草芽胞杆菌、乳酸杆菌按质量比为1：(2-7)：(3-6)混合而成。
上述方法中，所述紫薯基栽培基质包括以下重量份组分：紫薯20-30份、桑叶6-13份、马鞭草2-8份、糯米4-9份、水40-50份。
进一步地，所述紫薯基栽培基质的制备方法为：
1)取桑叶、马鞭草同置于温度为40-45℃的炒锅中炒制0.8-1.2h，研磨成粉，得混合粉；
2)取糯米浸泡于水12h后，大火加热至沸腾，然后加入紫薯保持沸腾至紫薯煮熟；
3)将煮熟的紫薯、糯米、混合粉高速搅拌均匀，即得紫薯基栽培基质。
上述方法中，所述矿石基栽培基质包括以下重量份组分：磷石膏5-9份、镍铁渣4-7份、煤渣1-3份、卡拉胶0.7-1份、魔芋精粉1-5份、水21-30份。
进一步地，所述矿石基栽培基质的制备方法为：
①取磷石膏、镍铁渣、煤渣、魔芋精粉混合均匀后，制粒，得颗粒物；
②取水加热至80℃，再加入卡拉胶搅拌均匀，加热至沸腾5-8min，然后加入颗粒物混合均匀，置于0-4℃条件下冷却至形成胶体。
本发明的有益效果在于：
采用本发明的铁皮石斛育苗方法，操作简便，绿色无污染，成活率高，提高了铁皮石斛的抗病能力，移栽成活率高达99.5％以上。
首先，本发明所采用紫苏基栽培基质和矿石基栽培基质相互结合，其一，基质具有良好地疏松透气性能，可保持水分和养分的良好吸收；其二，基质营养丰富，能够为铁皮石斛提供养分，无需添加化肥和营养液；其三、基质具有驱虫、杀虫和杀菌的药效成分，避免了病虫害入侵。
其次，本发明利用发酵菌活化蒴果，促进了铁皮石斛内生菌的增长，利用葡萄酸铜的生物催化作用，使得外源益生菌与内生菌的增长具有协同效应，更大程度地发挥微生物的效能，促进铁皮石斛的生长，并且，通过控制搅拌速率，有助于蒴果表皮的软化，进而有助于促进吸收。
再次，本发明在增殖培养阶段严格控制温度，防止了有害微生物的增殖，还促进了铁皮石斛对营养成分的吸收；在诱导阶段严格控制温度，有助于铁皮石斛蒴果吸收水分和营养物质，进而缩短生长周期。
本发明通过合理的栽培基质、诱导液的组分配方，不仅充分地促进了各阶段的铁皮石斛生长效果，还具有杀菌、抑菌作用，减少了杀菌步骤，避免了杀菌剂的使用，还充分地利用了天然物质和废弃物质，降低了化学试剂对铁皮石斛品质的不良影响，对培育工作的健康影响。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，但本发明并不局限于这些实施方式，任何在本实施例基本精神上的改进或代替，仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。
实施例1
一种提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法，包括步骤：
A原球茎诱导：将铁皮石斛蒴果浸泡于诱导液中于温度为18℃条件下恒温浸泡12h；
B内生菌活化：将浸泡后蒴果置于搅拌机内，加入蒴果质量0.5％的发酵菌剂及蒴果质量0.07％的葡萄糖酸铜，在240r/min的转速下搅拌处理12min；
C增殖培养：将活化处理的蒴果播种于紫薯基栽培基质上，于温度为25℃条件下恒温培育35d；
D生根培养：将增殖培养后的芽苗置于矿石基栽培基质上，自然培育；
上述方法中，所述诱导液包括：番石榴15kg、苦瓜7kg、芹菜6kg、蒲公英17kg、水30kg；
所述诱导液的制备方法为：将番石榴、苦瓜、芹菜、蒲公英切碎后，分别置于功率为300W条件下微波处理至含水量为各鲜料含水量的15％，研磨成粉后混合，加入至水中，大火熬煮1.2h；
所述发酵菌剂为双歧杆菌、枯草芽胞杆菌、乳酸杆菌按质量比为1：7：6混合而成；
上述方法中，所述紫薯基栽培基质包括：紫薯30kg、桑叶13kg、马鞭草8kg、糯米9kg、水50kg；
进一步地，所述紫薯基栽培基质的制备方法为：取桑叶、马鞭草同置于温度为45℃的炒锅中炒制1.2h，研磨成粉，得混合粉；取糯米浸泡于水12h后，大火加热至沸腾，然后加入紫薯保持沸腾至紫薯煮熟；将煮熟的紫薯、糯米、混合粉高速搅拌均匀，即得紫薯基栽培基质；
上述方法中，所述矿石基栽培基质包括：磷石膏9kg、镍铁渣7kg、煤渣3kg、卡拉胶1kg、魔芋精粉5kg、水30kg；
进一步地，所述矿石基栽培基质的制备方法为：
①取磷石膏、镍铁渣、煤渣、魔芋精粉混合均匀后，制粒，得颗粒物；
②取水加热至80℃，再加入卡拉胶搅拌均匀，加热至沸腾8min，然后加入颗粒物混合均匀，置于4℃条件下冷却至形成胶体。
实施例2
一种提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法，包括步骤：
A原球茎诱导：将铁皮石斛蒴果浸泡于诱导液中于温度为10℃条件下恒温浸泡10h；
B内生菌活化：将浸泡后蒴果置于搅拌机内，加入蒴果质量0.1％的发酵菌剂及蒴果质量0.04％的葡萄糖酸铜，在180r/min的转速下搅拌处理5min；
C增殖培养：将活化处理的蒴果播种于紫薯基栽培基质上，于温度为20℃条件下恒温培育30d；
D生根培养：将增殖培养后的芽苗置于矿石基栽培基质上，自然培育；
上述方法中，所述诱导液包括：番石榴10kg、苦瓜3kg、芹菜4kg、蒲公英12kg、水25kg；
所述诱导液的制备方法为：将番石榴、苦瓜、芹菜、蒲公英切碎后，分别置于功率为200W条件下微波处理至含水量为各鲜料含水量的10％，研磨成粉后混合，加入至水中，大火熬煮0.8h；
所述发酵菌剂为双歧杆菌、枯草芽胞杆菌、乳酸杆菌按质量比为1：2：3混合而成；
上述方法中，所述紫薯基栽培基质包括：紫薯20kg、桑叶6kg、马鞭草2kg、糯米4kg、水40kg；
进一步地，所述紫薯基栽培基质的制备方法为：取桑叶、马鞭草同置于温度为40℃的炒锅中炒制0.8h，研磨成粉，得混合粉；取糯米浸泡于水12h后，大火加热至沸腾，然后加入紫薯保持沸腾至紫薯煮熟；将煮熟的紫薯、糯米、混合粉高速搅拌均匀，即得紫薯基栽培基质；
上述方法中，所述矿石基栽培基质包括：磷石膏5kg、镍铁渣4kg、煤渣1kg、卡拉胶0.7kg、魔芋精粉1kg、水21kg；
进一步地，所述矿石基栽培基质的制备方法为：
①取磷石膏、镍铁渣、煤渣、魔芋精粉混合均匀后，制粒，得颗粒物；
②取水加热至80℃，再加入卡拉胶搅拌均匀，加热至沸腾5min，然后加入颗粒物混合均匀，置于0℃条件下冷却至形成胶体。
实施例3
一种提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法，包括步骤：
A原球茎诱导：将铁皮石斛蒴果浸泡于诱导液中于温度为15℃条件下恒温浸泡11h；
B内生菌活化：将浸泡后蒴果置于搅拌机内，加入蒴果质量0.4％的发酵菌剂及蒴果质量0.05％的葡萄糖酸铜，在210r/min的转速下搅拌处理9min；
C增殖培养：将活化处理的蒴果播种于紫薯基栽培基质上，于温度为22℃条件下恒温培育32d；
D生根培养：将增殖培养后的芽苗置于矿石基栽培基质上，自然培育；
上述方法中，所述诱导液包括：番石榴13kg、苦瓜5kg、芹菜5kg、蒲公英15kg、水27kg；
所述诱导液的制备方法为：将番石榴、苦瓜、芹菜、蒲公英切碎后，分别置于功率为250W条件下微波处理至含水量为各鲜料含水量的12％，研磨成粉后混合，加入至水中，大火熬煮1h；
所述发酵菌剂为双歧杆菌、枯草芽胞杆菌、乳酸杆菌按质量比为1：5：4混合而成；
上述方法中，所述紫薯基栽培基质包括：紫薯25kg、桑叶10kg、马鞭草5kg、糯米7kg、水45kg；
进一步地，所述紫薯基栽培基质的制备方法为：取桑叶、马鞭草同置于温度为43℃的炒锅中炒制1h，研磨成粉，得混合粉；取糯米浸泡于水12h后，大火加热至沸腾，然后加入紫薯保持沸腾至紫薯煮熟；将煮熟的紫薯、糯米、混合粉高速搅拌均匀，即得紫薯基栽培基质；
上述方法中，所述矿石基栽培基质包括：磷石膏7kg、镍铁渣5kg、煤渣2kg、卡拉胶0.8kg、魔芋精粉3kg、水24kg；
进一步地，所述矿石基栽培基质的制备方法为：
①取磷石膏、镍铁渣、煤渣、魔芋精粉混合均匀后，制粒，得颗粒物；
②取水加热至80℃，再加入卡拉胶搅拌均匀，加热至沸腾7min，然后加入颗粒物混合均匀，置于2℃条件下冷却至形成胶体。
实施例4
一种提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法，包括步骤：
A原球茎诱导：将铁皮石斛蒴果浸泡于诱导液中于温度为15℃条件下恒温浸泡11h；
B增殖培养：将活化处理的蒴果播种于紫薯基栽培基质上，于温度为22℃条件下恒温培育33d；
C生根培养：将增殖培养后的芽苗置于矿石基栽培基质上，自然培育；
上述方法中，所述诱导液包括：番石榴13kg、苦瓜5kg、芹菜5kg、蒲公英15kg、水27kg；
所述诱导液的制备方法为：将番石榴、苦瓜、芹菜、蒲公英切碎后，分别置于功率为250W条件下微波处理至含水量为各鲜料含水量的12％，研磨成粉后混合，加入至水中，大火熬煮1h；
上述方法中，所述紫薯基栽培基质包括：紫薯25kg、桑叶10kg、马鞭草5kg、糯米7kg、水45kg；
进一步地，所述紫薯基栽培基质的制备方法为：取桑叶、马鞭草同置于温度为43℃的炒锅中炒制1h，研磨成粉，得混合粉；取糯米浸泡于水12h后，大火加热至沸腾，然后加入紫薯保持沸腾至紫薯煮熟；将煮熟的紫薯、糯米、混合粉高速搅拌均匀，即得紫薯基栽培基质；
上述方法中，所述矿石基栽培基质包括：磷石膏7kg、镍铁渣5kg、煤渣2kg、卡拉胶0.8kg、魔芋精粉3kg、水24kg；
进一步地，所述矿石基栽培基质的制备方法为：
①取磷石膏、镍铁渣、煤渣、魔芋精粉混合均匀后，制粒，得颗粒物；
②取水加热至80℃，再加入卡拉胶搅拌均匀，加热至沸腾7min，然后加入颗粒物混合均匀，置于2℃条件下冷却至形成胶体。
实施例5
一种提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法，包括步骤：
A原球茎诱导：将铁皮石斛蒴果浸泡于诱导液中于温度为15℃条件下恒温浸泡11h；
B内生菌活化：将浸泡后蒴果置于搅拌机内，加入蒴果质量0.4％的发酵菌剂及蒴果质量0.05％的葡萄糖酸铜，在210r/min的转速下搅拌处理9min；
C增殖培养：将活化处理的蒴果播种于矿石基栽培基质上，于温度为22℃条件下恒温培育32d；
D生根培养：将增殖培养后的芽苗置于紫薯基栽培基质上，自然培育；
上述方法中，所述诱导液包括：番石榴13kg、苦瓜5kg、芹菜5kg、蒲公英15kg、水27kg；
所述诱导液的制备方法为：将番石榴、苦瓜、芹菜、蒲公英切碎后，分别置于功率为250W条件下微波处理至含水量为各鲜料含水量的12％，研磨成粉后混合，加入至水中，大火熬煮1h；
所述发酵菌剂为双歧杆菌、枯草芽胞杆菌、乳酸杆菌按质量比为1：5：4混合而成；
上述方法中，所述紫薯基栽培基质包括：紫薯25kg、桑叶10kg、马鞭草5kg、糯米7kg、水45kg；
进一步地，所述紫薯基栽培基质的制备方法为：取桑叶、马鞭草同置于温度为43℃的炒锅中炒制1h，研磨成粉，得混合粉；取糯米浸泡于水12h后，大火加热至沸腾，然后加入紫薯保持沸腾至紫薯煮熟；将煮熟的紫薯、糯米、混合粉高速搅拌均匀，即得紫薯基栽培基质；
上述方法中，所述矿石基栽培基质包括：磷石膏7kg、镍铁渣5kg、煤渣2kg、卡拉胶0.8kg、魔芋精粉3kg、水24kg；
进一步地，所述矿石基栽培基质的制备方法为：
①取磷石膏、镍铁渣、煤渣、魔芋精粉混合均匀后，制粒，得颗粒物；
②取水加热至80℃，再加入卡拉胶搅拌均匀，加热至沸腾7min，然后加入颗粒物混合均匀，置于2℃条件下冷却至形成胶体。
实施例6
一种提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法，包括步骤：
A材料处理：取铁皮石斛蒴果置于超净工作台，先用75％酒精清洗蒴果表面，然后在15％次氯酸钠溶液中浸泡20min，再用无菌水冲洗5次，吸干水分后待用；
B原球茎诱导：将步骤A处理的蒴果在无菌条件下播种于原球茎增殖培养基上，置于室温26℃培养，并于2000Lx光强度下光照12h，其中，原球茎增殖培养基用MS+干酪素0.3g/L+白糖30g/L+卡拉胶6.8g/L，用蒸馏水定容后调节pH值至5.8；
B增殖培养：选择高2cm并带有1-2片真叶的铁皮石斛幼苗，以MS为基本培养基，添加6-BA 2.0mg/L，NAA 0.2mg/L，IAA0.5mg/L，每瓶接种5个，培养30天后，再添加椰子汁50g/L，再培养30天；
D生根培养：选择较为粗壮的铁皮石斛芽苗，以1/2MS为基本培养基，添加6-BA0.1mg/L，NAA 0.2mg/L，IBA 1.5mg/L，每瓶接种5个，培养30天后，再添加椰子汁50g/L，再培养30天。
试验例1
1.成活率效果验证
将实施例1-6的组培苗按相同条件及方法进行移植后，其成活率情况如表1所示：
表1：
2.防虫抗病效果验证
将实施例1-6的组培苗按相同条件及方法进行移植后，在不进行防虫害用药管理条件下进行相同的水肥管理，其病虫害发生率情况如表2所示：
| 病虫害发生率 | 生长状况 | |
| 实施例1 | 10.3％ | 叶片肥厚，无虫咬；根须发达，无根腐 |
| 实施例2 | 12.7％ | 叶片肥厚，无虫咬；根须发达，无根腐 |
| 实施例3 | 9.6％ | 叶片肥厚，无虫咬；根须发达，无根腐 |
| 实施例4 | 32.2％ | 叶片欠肥厚，部分有虫咬；根须偏少，无根腐 |
| 实施例5 | 27.6％ | 叶片肥厚，部分有虫咬；根须偏少，部分根须有虫咬 |
| 实施例6 | 35.5％ | 叶片欠肥厚，部分有虫咬；根须偏少，部分根须有虫咬 |
Claims (4)
1.一种提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法，其特征在于，包括步骤：
A原球茎诱导：将铁皮石斛蒴果浸泡于诱导液中于温度为10-18℃条件下恒温浸泡10-12h；
B内生菌活化：将浸泡后蒴果置于搅拌机内，加入蒴果质量0.1-0.5％的发酵菌剂及蒴果质量0.04-0.07％的葡萄糖酸铜，在180-240r/min的转速下搅拌处理5-12min；
C增殖培养：将活化处理的蒴果播种于紫薯基栽培基质上，于温度为20-25℃条件下恒温培育30-35d；
D生根培养：将增殖培养后的芽苗置于矿石基栽培基质上，自然培育；
所述发酵菌剂为双歧杆菌、枯草芽胞杆菌、乳酸杆菌按质量比为1：(2-7)：(3-6)混合而成；
所述诱导液包括以下重量份组分：番石榴10-15份、苦瓜3-7份、芹菜4-6份、蒲公英12-17份、水25-30份；
所述紫薯基栽培基质包括以下重量份组分：紫薯20-30份、桑叶6-13份、马鞭草2-8份、糯米4-9份、水40-50份；
所述矿石基栽培基质包括以下重量份组分：磷石膏5-9份、镍铁渣4-7份、煤渣1-3份、卡拉胶0.7-1份、魔芋精粉1-5份、水21-30份。
2.如权利要求1所述提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法，其特征在于，所述诱导液的制备方法为：将番石榴、苦瓜、芹菜、蒲公英切碎后，分别置于功率为200-300W条件下微波处理至含水量为各鲜料含水量的10-15％，研磨成粉后混合，加入至水中，大火熬煮0.8-1.2h。
3.如权利要求1所述提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法，其特征在于，所述紫薯基栽培基质的制备方法为：
1)取桑叶、马鞭草同置于温度为40-45℃的炒锅中炒制0.8-1.2h，研磨成粉，得混合粉；
2)取糯米浸泡于水12h后，大火加热至沸腾，然后加入紫薯保持沸腾至紫薯煮熟；
3)将煮熟的紫薯、糯米、混合粉高速搅拌均匀，即得紫薯基栽培基质。
4.如权利要求1所述提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法，其特征在于，所述矿石基栽培基质的制备方法为：
①取磷石膏、镍铁渣、煤渣、魔芋精粉混合均匀后，制粒，得颗粒物；
②取水加热至80℃，再加入卡拉胶搅拌均匀，加热至沸腾5-8min，然后加入颗粒物混合均匀，置于0-4℃条件下冷却至形成胶体。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
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| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Qiu Jigui Inventor after: Yang Xianyou Inventor before: Qiu Jigui |
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| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
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| TR01 | Transfer of patent right |