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CN108570039A - 一类具有抑制抗凋亡蛋白活性的化合物及其制备和应用 - Google Patents

一类具有抑制抗凋亡蛋白活性的化合物及其制备和应用 Download PDF

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CN108570039A
CN108570039A CN201810379582.7A CN201810379582A CN108570039A CN 108570039 A CN108570039 A CN 108570039A CN 201810379582 A CN201810379582 A CN 201810379582A CN 108570039 A CN108570039 A CN 108570039A
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Abstract

本发明提供了一类具有抑制抗凋亡蛋白活性的化合物及其制备和应用。具体地，本发明提供了一种如下式I所示的化合物；其中，各基团的定义如说明书中所述。本发明的化合物具有很好的Bcl‑2家族蛋白抑制活性，可以用于制备一系列治疗Bcl‑2家族蛋白活性相关的疾病的药物。

Description

一类具有抑制抗凋亡蛋白活性的化合物及其制备和应用
技术领域
本发明属于药物领域，具体地，本发明涉及一种作为Bcl-2家族蛋白抑制剂的喹唑啉类化合物，及其制备和应用。
背景技术
细胞凋亡是一个高度管控的过程，它引导细胞进行自我降解以消除功能失常的细胞。在肿瘤向危险状态不断发展的过程中，它必须压制细胞凋亡的作用。在肿瘤细胞中特异性地激活细胞凋亡提供了一种新型的肿瘤靶向治疗的方案。本项目中研发产品的生物靶点就是针对细胞凋亡过程中的主要控制点。
细胞凋亡分内在和外在两个主要途径。内在途径由控制线粒体外膜完整性的促凋亡以及抗凋亡的两类Bcl-2蛋白之间的相互作用而调控。促凋亡成员(Bax,Bak,Bad,Bik,Bid,Bim,Hrk,Bmf,Noxa and Puma)诱导线粒体膜通透性的增加，释放细胞色素c，激活胱门蛋白酶从而启动凋亡过程。抗凋亡成员(Bcl-2,Bcl-xL,Bcl-w,Mcl-1,and Bcl2-A1)靠结合与隔离促凋亡成员从而防止细胞凋亡的发生。癌细胞往往过度表达抗凋亡的Bcl-2家族成员，抑制细胞凋亡，提高细胞生存率，在化疗中形成抵抗。抑制抗凋亡Bcl-2家族成员的作用已被研究证明是重新诱发癌细胞中细胞凋亡的有效手段，已被确认为临床治疗干预的重要生物靶点。在细胞中过度表达抗凋亡Bcl-2蛋白的癌症包括急性淋巴细胞白血病(ALL)，慢性淋巴细胞白血病(CLL)，多发性骨髓瘤，人类滤泡性淋巴瘤，小细胞肺癌(SCLC)，子宫癌，卵巢癌，膀胱癌，前列腺癌，胰腺癌，胃癌，结直肠癌以及乳腺癌等。
因此，发展肿瘤细胞凋亡途径的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)抑制剂已成为抗肿瘤药物研究的前沿热点。
发明内容
本发明的目的是提供一种新型靶向Bcl-2家族蛋白抑制剂。
本发明的第一方面，提供了一种如下式I所示的化合物，或其药学上可接受的盐：
其中，
环A为选自下组的基团：
R1和R2各自独立地选自：H、卤素、NO2、CN、CF3SO2或CF3；
R3和R4各自独立地选自：H、取代或未取代的C1-C8烷基、C(O)OR5、CONR6R7、C(O)R8、取代或未取代的5～8元芳基、取代或未取代的5～8元杂芳基、取代或未取代的3～12元饱和或不饱和杂环或碳环；其中，所述的杂芳基包含1-3个选自下组的杂原子：N、O或S；所述的杂环包含1-3个选自下组的杂原子：N、O或S；
R5、R6、R7和R8各自独立地选自：H、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C1-C6亚烷基-胺基、取代或未取代的C1-C6亚烷基-羟基、取代或未取代的5～8元芳基、或取代或未取代的5～8元杂芳基；取代或未取代的3～12元饱和杂环或碳环；其中，所述的杂芳基包含至少一个选自下组的杂原子：N、O或S，所述的杂环包含至少一个选自下组的杂原子：N、O或S；
上述的任一“取代”指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代基取代：卤素、OH、NH2、CN、未取代或卤代的C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、未取代或卤代的C2-C6烯基、未取代或卤代的C2-C6炔基、未取代或卤代的C2-C6酰基、未取代或卤代的5～8元芳基、未取代或卤代的5～8元杂芳基、未取代或卤代的3～12元饱和杂环或碳环；其中，所述的杂芳基包含1-3个选自下组的杂原子：N、O或S，所述的杂环包含1～3个选自下组的杂原子：N、O或S。
在另一优选例中，环A为
在另一优选例中，当R1选自：卤素、NO2、CN、CF3SO2或CF3时，R2为H。
在另一优选例中，当R1为H时，R2选自：卤素、NO2、CN、CF3SO2或CF3。
在另一优选例中，当R1为NO2或CF3SO2时，R2为H。
在另一优选例中，当R2为NO2或CF3SO2时，R1为H。
在另一优选例中，R3和R4各自独立地选自：H、取代或未取代的C1-C8烷基。
在另一优选例中，R3或R4中其中一个为H而另一个为取代的C1-C8烷基。
在另一优选例中，A、R1、R2、R3或R4为实施例中所述具体化合物中所对应的基团。
在另一优选例中，所述式I化合物为如下所示的化合物：
本发明的第二方面，提供了一种如本发明第一方面所述的式I化合物的制备方法，包括步骤：
(a)在惰性溶剂中，用式I-13化合物和式I-14化合物反应，得到式I化合物；
上述各式中，各基团的定义如上所述。
在另一优选例中，所述的(a)步骤中，所述惰性溶剂选自下组：二氯甲烷，甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、异丁醇、二氧六环、THF、DMF、DMSO、NMP，或其组合。
在另一优选例中，所述的(a)步骤中，所述反应在碱存在下进行。
在另一优选例中，所述的(a)步骤中，所述的碱选自下组：三乙胺、二异丙基胺、二异丙基乙胺、Na2CO3、K2CO3、Cs2CO3、LiHMDS、NaHMDS、KHMDS、叔丁醇钠、叔丁醇钾，或其组合。
在另一优选例中，所述制备方法还包括以下步骤：
(b)在惰性溶剂中，用式I-12化合物和式I-5化合物反应，得到式I-13化合物；
上述各式中，各基团的定义如上所述。
在另一优选例中，所述的(b)步骤中，所述的惰性溶剂选自下组：甲苯、二氧六环、THF、DMF，或其组合。
在另一优选例中，所述的(b)步骤中，所述反应在钯催化剂存在下进行。
在另一优选例中，所述的(b)步骤中，所述的钯催化剂选自下组：Pd(PPh3)4、Pd2(dba)3、Pd(dba)2、Pd(OAc)2、Pd(PPh3)2Cl2、Pd(dppe)Cl2、Pd(dppf)Cl2、Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2，或其组合。
在另一优选例中，所述的(b)步骤中，所述的反应在铜盐存在下进行。
在另一优选例中，所述的(b)步骤中，所述的铜盐选自下组：CuI、Cu、CuCl、Cu2O、CuO、Cu(OAc)2、CuSO4·5H2O、Cu(acac)2、CuCl2、CuSCN，或其组合。
在另一优选例中，所述的(b)步骤中，所述的反应在碱存在下进行。
在另一优选例中，所述的(b)步骤中，所述的碱选自下组：K2CO3、K3PO4、Cs2CO3，或其组合。
本发明的第三方面，提供了一种如本发明第一方面所述的化合物的用途，用于：
(a)制备治疗与Bcl-2家族蛋白活性或表达量相关的疾病的药物；
(b)制备Bcl-2家族蛋白靶向抑制剂；
(c)体外非治疗性地抑制Bcl-2家族蛋白的活性；
(d)体外非治疗性地抑制肿瘤细胞增殖；和/或
(e)治疗与Bcl-2家族蛋白活性或表达量相关的疾病。
在另一优选例中，所述Bcl-2家族蛋白选自下组：Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-w、Mcl-1、Bcl2-A1，或其组合。
在另一优选例中，所述的肿瘤细胞为白血病细胞株；较佳地为淋巴细胞白血病细胞株；更佳地为急性淋巴细胞白血病细胞株MV-4-11细胞。
本发明的第四方面，提供了一种药物组合物，所述的药物组合物包括：(i)有效量的式I化合物，或其药学上可接受的盐；和(ii)药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述的有效量是指治疗有效量或抑制有效量，较佳地为0.01～99.99％。
在另一优选例中，所述的药物组合物用于抑制Bcl-2家族蛋白的活性。
在另一优选例中，所述的药物组合物用于治疗与Bcl-2家族蛋白活性或表达量相关的疾病。
本发明的第五方面，提供了一种抑制Bcl-2家族蛋白活性的方法，包括步骤：对抑制对象施用抑制有效量的如本发明第一方面所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，或对抑制对象施用抑制有效量的如本发明第四方面所述的药物组合物。
在另一优选例中，所述的抑制是体外非治疗性的抑制。
在另一优选例中，当对抑制对象施用抑制有效量的上述式I化合物或其药学上可接受的盐时，所述的抑制有效量为0.001-500nmol/L，较佳地为0.01-200nmol/L。
本发明的第六方面，提供了一种体外抑制肿瘤细胞的方法，所述方法包括：对抑制对象施用抑制有效量的如本发明第一方面所述的式I化合物，或如本发明第四方面所述的药物组合物。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
本发明人经过长期而深入的研究，制备了一类具有式I所示结构的化合物，并发现其具有Bcl-2家族蛋白抑制活性。且所述的化合物在极低浓度(可低至≤100nmol/L)下，即对一系列Bcl-2家族蛋白产生抑制作用，抑制活性相当优异，因而可以用于治疗与Bcl-2家族蛋白活性或表达量相关的疾病如肿瘤。基于上述发现，发明人完成了本发明。
术语
如本文所用，术语“C1-C6烷基”指具有1～6个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基，或类似基团。术语“C1-C8烷基”指具有1～8个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基，或类似基团。术语“C1-C8烷氧基”是指C1-C8直链或支链烷氧基，是指含有1-8个碳原子的烷氧基，包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基、庚氧基或辛氧基。
如本文所用，术语“C2-C6酰基”指形如“具有1～6个碳原子的直链或支链烷基-羰基”结构的取代基，如乙酰基、丙酰基、丁酰基，或类似基团。
术语“C1-C6亚烷基”指如上文所述的C1～C6烷基失去一个氢原子之后形成的基团，例如-CH2-、-CH2-CH2-，或类似基团。术语“C2-C6烯基”是指具有2～6个碳原子且包含至少一个双键的直链或支链烃基。术语“C2-C6炔基”是指具有2～6个碳原子且包含至少一个三键的直链或支链烃基。
术语“C6-C10亚芳基”指具有6-10个碳原子的芳基失去一个氢原子形成的基团，包括单环或二环亚芳基，例如亚苯基、亚萘基，或类似基团。
术语“6元芳基”指苯基。
术语“5～8元芳基”指5-8元环的碳非饱和系的取代基，如苯基，或类似基团。
术语“5元～8元杂芳基”指具有5-8元的环系上具有一个或多个选自O、S、N或P的杂原子的非饱和环系取代基，如吡啶基、噻吩基，或类似基团。
术语“3～12元饱和碳环”指具有3-12个碳原子的饱和碳环，例如环己基，或类似基团。术语“3～12元不饱和碳环”指具有3-12个碳原子的不饱和碳环，例如环己烯基，或类似基团。
术语“3～12元饱和杂环”指具有3-12元的环系上具有一个或多个选自O、S、N或P的杂原子的饱和环系取代基，如哌啶基，四氢吡喃基，吗啡林基，或类似基团。术语“3～12元不饱和杂环”指具有3-12元的环系上具有一个或多个选自O、S、N或P的杂原子的不饱和环系取代基，如吡咯基，或类似基团。
术语“卤素”指F、Cl、Br和I。
本发明中，术语“含有”、“包含”或“包括”表示各种成分可一起应用于本发明的混合物或组合物中。因此，术语“主要由...组成”和“由...组成”包含在术语“含有”中。
本发明中，术语“药学上可接受的”成分是指适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)，即有合理的效益/风险比的物质。
本发明中，术语“有效量”指治疗剂治疗、缓解或预防目标疾病或状况的量，或是表现出可检测的治疗或预防效果的量。对于某一对象的精确有效量取决于该对象的体型和健康状况、病症的性质和程度、以及选择给予的治疗剂和/或治疗剂的组合。因此，预先指定准确的有效量是没用的。然而，对于某给定的状况而言，可以用常规实验来确定该有效量，临床医师是能够判断出来的。
在本文中，除特别说明之处，术语“取代”指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代基取代：卤素、未取代或卤代的C1-C6烷基、未取代或卤代的C2-C6酰基、未取代或卤代的C1-C6烷基-羟基、OH、NH2、CN、未取代或卤代的C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、未取代或卤代的C2-C6烯基、未取代或卤代的C2-C6炔基、未取代或卤代的5～8元芳基、未取代或卤代的5～8元杂芳基、未取代或卤代的3～12元饱和杂环或碳环；其中，所述的杂芳基包含1-3个选自下组的杂原子：N、O或S，所述的杂环包含1～3个选自下组的杂原子：N、O或S。
除非特别说明，本发明中，所有出现的化合物均意在包括所有可能的光学异构体，如单一手性的化合物，或各种不同手性化合物的混合物(即外消旋体)。本发明的所有化合物之中，各手性碳原子可以任选地为R构型或S构型，或R构型和S构型的混合物。
如本文所用，术语“本发明化合物”指式I所示的化合物。该术语还包括及式I化合物的各种晶型形式、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有机酸；以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸。
式I化合物
其中，
环A为选自下组的基团：
R1和R2各自独立地选自：H、卤素、NO2、CN、CF3SO2或CF3；
R3和R4各自独立地选自：H、取代或未取代的C1-C8烷基、C(O)OR5、CONR6R7、C(O)R8、取代或未取代的5～8元芳基、取代或未取代的5～8元杂芳基、取代或未取代的3～12元饱和或不饱和杂环或碳环；其中，所述的杂芳基包含1-3个选自下组的杂原子：N、O或S；所述的杂环包含1-3个选自下组的杂原子：N、O或S；
R5、R6、R7和R8各自独立地选自：H、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C1-C6亚烷基-胺基、取代或未取代的C1-C6亚烷基-羟基、取代或未取代的5～8元芳基、或取代或未取代的5～8元杂芳基；取代或未取代的3～12元饱和杂环或碳环；其中，所述的杂芳基包含至少一个选自下组的杂原子：N、O或S，所述的杂环包含至少一个选自下组的杂原子：N、O或S；
上述的任一“取代”指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代基取代：卤素、OH、NH2、CN、未取代或卤代的C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、未取代或卤代的C2-C6烯基、未取代或卤代的C2-C6炔基、未取代或卤代的C2-C6酰基、未取代或卤代的5～8元芳基、未取代或卤代的5～8元杂芳基、未取代或卤代的3～12元饱和杂环或碳环；其中，所述的杂芳基包含1-3个选自下组的杂原子：N、O或S，所述的杂环包含1～3个选自下组的杂原子：N、O或S。
在另一优选例中，环A为
在另一优选例中，当R1选自：卤素、NO2、CN、CF3SO2或CF3时，R2为H。
在另一优选例中，当R1为H时，R2选自：卤素、NO2、CN、CF3SO2或CF3。
在另一优选例中，当R1为NO2或CF3SO2时，R2为H。
在另一优选例中，当R2为NO2或CF3SO2时，R1为H。
在另一优选例中，R3和R4各自独立地选自：H、取代或未取代的C1-C8烷基。
在另一优选例中，R3或R4中其中一个为H而另一个为取代的C1-C8烷基。
在另一优选例中，A、R1、R2、R3或R4为实施例中所述具体化合物中所对应的基团。
在另一优选例中，所述式I化合物为如下所示的化合物：
式I化合物的制备方法
本发明提供了一种制备式I化合物的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)在惰性溶剂中，用式I-13化合物和式I-14化合物反应，得到式I化合物；
上述各式中，各基团的定义如上所述。
在另一优选例中，所述的(a)步骤中，所述惰性溶剂选自下组：二氯甲烷，甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、异丁醇、二氧六环、THF、DMF、DMSO、NMP，或其组合。
在另一优选例中，所述步骤在碱存在下进行。
在另一优选例中，所述的碱选自下组：三乙胺、二异丙基胺、二异丙基乙胺、Na2CO3、K2CO3、Cs2CO3、LiHMDS、NaHMDS、KHMDS、叔丁醇钠、叔丁醇钾，或其组合。
在另一优选例中，所述制备方法还包括以下步骤：
(b)在惰性溶剂中，用式I-12化合物和式I-5化合物反应，得到式I-13化合物；
上述各式中，各基团的定义如上所述。
在另一优选例中，所述的(b)步骤中，所述的惰性溶剂选自下组：甲苯、二氧六环、THF、DMF，或其组合。
在另一优选例中，所述步骤在钯催化剂存在下进行。
在另一优选例中，所述的钯催化剂选自下组：Pd(PPh3)4、Pd2(dba)3、Pd(dba)2、Pd(OAc)2、Pd(PPh3)2Cl2、Pd(dppe)Cl2、Pd(dppf)Cl2、Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2，或其组合。
在另一优选例中，所述步骤在铜盐存在下进行。
在另一优选例中，所述的铜盐选自下组：CuI、Cu、CuCl、Cu2O、CuO、Cu(OAc)2、CuSO4·5H2O、Cu(acac)2、CuCl2、CuSCN，或其组合。
在另一优选例中，所述步骤在碱存在下进行。
在另一优选例中，所述的碱选自下组：K2CO3、K3PO4、Cs2CO3，或其组合。
在另一优选例中，所述制备方法还包括以下步骤：
(c)在惰性溶剂中，用式I-10化合物和式I-11化合物反应，得到式I-12化合物；
上述各式中，各基团的定义如上所述。
在另一优选例中，所述的(c)步骤中，所述的惰性溶剂选自下组：甲苯、二氧六环、THF、DMF、H2O，或其组合。
在另一优选例中，所述步骤在钯催化剂存在下进行。
在另一优选例中，所述的钯催化剂选自下组：Pd(PPh3)4、Pd2(dba)3、Pd(dba)2、Pd(OAc)2、Pd(PPh3)2Cl2、Pd(dppe)Cl2、Pd(dppf)Cl2、Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2，或其组合。
在另一优选例中，所述步骤在配体存在下进行。
在另一优选例中，所述的配体为单齿膦配体或双齿膦配体；更佳地，所述的配体选自下组：三苯基膦、三甲苯基膦、三环己基膦、三叔丁基膦、X-Phos、S-Phos、联萘二苯基膦、1,1'-双(二苯基膦)二茂铁、1，2-二(二苯基膦基)乙烷、Xant-Phos，或其组合。
在另一优选例中，所述步骤在碱存在下进行。
在另一优选例中，所述的碱选自下组：Na2CO3、K2CO3、Cs2CO3、K3PO4，或其组合。
在另一优选例中，所述制备方法还包括以下步骤：
(d)在惰性溶剂中，用式I-8化合物和式I-9化合物反应，得到式I-10化合物；
上述各式中，各基团的定义如上所述。
在另一优选例中，所述的(d)步骤中，所述惰性溶剂选自下组：二氯甲烷，甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、异丁醇、二氧六环、THF、DMF、DMSO、NMP，或其组合。
在另一优选例中，所述步骤在碱存在下进行。
在另一优选例中，所述的碱选自下组：三乙胺、二异丙基胺、二异丙基乙胺、Na2CO3、K2CO3、Cs2CO3、LiHMDS、NaHMDS、KHMDS、叔丁醇钠、叔丁醇钾，或其组合。
式I化合物的应用
所述的式I化合物可用于以下的一种或多种用途：
(a)制备治疗与Bcl-2家族蛋白活性或表达量相关的疾病的药物；
(b)制备Bcl-2家族蛋白靶向抑制剂；
(c)体外非治疗性地抑制Bcl-2家族蛋白的活性；
(d)体外非治疗性地抑制肿瘤细胞增殖；和/或
(e)治疗与Bcl-2家族蛋白活性或表达量相关的疾病。
在另一优选例中，所述Bcl-2家族蛋白选自下组：Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-w、Mcl-1、Bcl2-A1，或其组合。
在另一优选例中，所述的肿瘤细胞为白血病细胞株；较佳地为淋巴细胞白血病细胞株；更佳地为急性淋巴细胞白血病细胞株MV-4-11细胞。
本发明的式I化合物可用于制备一种药物组合物，所述的药物组合物包括：(i)有效量的式I化合物，或其药学上可接受的盐；和(ii)药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述的有效量是指治疗有效量或抑制有效量。
在另一优选例中，所述的药物组合物用于抑制Bcl-2家族蛋白的活性。
在另一优选例中，所述的药物组合物用于治疗与Bcl-2家族蛋白活性或表达量相关的疾病。
本发明的式I化合物还可以用于抑制Bcl-2家族蛋白活性的方法，包括步骤：对抑制对象施用抑制有效量的如上所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，或对抑制对象施用抑制有效量的如上所述的药物组合物。
在另一优选例中，所述的抑制是体外非治疗性的抑制。
在另一优选例中，当对抑制对象施用抑制有效量的如上所述的式I化合物或其药学上可接受的盐时，所述的抑制有效量为0.001-500nmol/L，较佳地为0.01-200nmol/L。
本发明的式I化合物还可以用于体外抑制肿瘤细胞的方法，所述方法包括：对抑制对象施用抑制有效量的如上所述的式I化合物，或如上所述的药物组合物。
药物组合物和施用方法
由于本发明化合物具有优异的对Bcl-2家族蛋白例如Bcl-2、Bcl-xL的抑制活性，因此本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐，水合物或溶剂合物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于治疗、预防以及缓解由与Bcl-2家族蛋白活性或表达量相关的疾病。根据现有技术，本发明化合物可用于治疗以下疾病：子宫内膜癌、乳腺癌、胃癌、膀胱癌、骨髓瘤、肝癌等等。
本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明化合物/剂，更佳地，含有5-200mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。
“药学上可以接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。
除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、娇味剂和香料。
除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。
本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选5～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
本发明的主要优点包括：
1.提供了一种如式I所示的化合物。
2.提供了一种结构新颖的Bcl-2家族蛋白抑制剂及其制备和应用，所述的抑制剂在极低浓度下即可抑制各类Bcl-2家族蛋白的活性。
3.提供了一类治疗与Bcl-2家族蛋白活性相关疾病的药物组合物。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
实施例1
将化合物1(6.3g，41.0mmol)和化合物2(8.5g，82.0mmol)加入到乙二醇单甲醚(40mL)中，在140℃下搅拌回流18小时。反应完毕后，浓缩至干，用0.01摩尔的氨水稀释中和，有固体析出，过滤，水洗，干燥，得化合物3(5.6g，83％)。LC MS:165(M+H+)，RT＝1.10min。
将化合物3(5.6g，34.1mmol)加入到发烟硝酸(12mL)和浓硫酸(12mL)中，100℃搅拌1小时后，冷至室温。将反应液倒入冰水中，过滤的粗品，粗品用醋酸重结晶。得化合物4(3.48g，49％)。LC MS:210(M+H+)，RT＝1.26min。
将化合物4(200mg，1mmol)加入二氯亚砜(4mL)中，接着加入1滴DMF。在85℃下回流搅拌3小时。LCMS检测反应完全，浓缩，用甲苯带出残留的二氯亚砜，得化合物5(200mg，粗品直接用于下一步)。LC MS:228(M+H+)，RT＝1.58min。
将化合物6(1.40g，10.0mmol)和化合物7(4.6g，53.1mmol)加入到水(10mL)中，在100℃下搅拌过夜。反应完毕后，冷至室温，有固体析出，过滤，水洗，甲苯洗，干燥，得化合物8(1.68g,82％)。LC MS:206(M+H+)，RT＝0.30min。
将化合物8(205mg，1.0mmol)、化合物9(251mg，1.0mmol)和DIEA(193mg，1.5mmol)加入到DMF(5mL)中，在室温下搅拌反应过夜。反应完毕后，浓缩，粗品经柱层析纯化，得化合物10(255mg，68％)。LC MS:374(M+H+)，RT＝1.28min。
将化合物10(155mg，0.41mmol)、化合物11(80mg，0.5mmol)、醋酸钯(10mg，0.041mmol)和碳酸钠(65mg，0.61mmol)加入到DMF(2mL)和水(1mL)中，室温搅拌反应20小时。LCMS检测反应完全，加乙酸乙酯和饱和氯化铵萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，干燥，过滤，浓缩。粗品经柱层析纯化，得化合物12(138mg，83％)。LC MS:406(M+H+)，RT＝1.19min。
将化合物12(183mg，0.45mmol)、化合物5(103mg，0.45mmol)、四三苯基膦钯(104mg，0.09mmol)、碘化亚铜(34mg，0.18mmol)和碳酸铯(220mg，0.68mmol)加入干燥的二氧六环(10mL)中。微波反应(160℃，1小时)，LCMS检测反应完全。过滤，用DCM:MeOH(10:1)混合液洗涤，粗品经柱层析纯化，得化合物13(58mg，22％)。LCMS:597(M+H+)，RT＝1.36min。
将化合物13(30mg，0.05mmol)、化合物14(8mg，0.07mmol)和三乙胺(12mg，0.12mmol)加入到乙醇(8mL)中。在100℃下搅拌反应5小时，LCMS检测反应完全。浓缩，粗品经制备TLC纯化，得化合物15(12mg，35％)。LC MS:692(M+H+)，RT＝1.53min。
化合物15：4-(4-((4’-氯-联苯-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(6-硝基-7-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)喹唑啉-4-基)苯甲酰胺
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ(ppm)14.66(s,1H),9.54(s,1H),8.30(d,J＝3.6Hz,2H),8.26(s,1H),7.52(d,J＝4.4Hz,1H),7.38(s,6H),6.99(s,1H),6.91(d,J＝7.2Hz,2H),5.35(s,1H),4.01(s,2H),3.43(s,4H),3.33(s,6H),2.52(s,4H),1.80～1.20(m,5H)。
使用类似方法可得到如下化合物：
4-(4-((4’-氯-联苯-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(7-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)-6-(三氟甲磺酰基)喹唑啉-4-基)苯甲酰胺
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ(ppm)14.64(s,1H),8.54(s,1H),8.31(d,J＝3.6Hz,2H),8.26(s,1H),7.52(d,J＝4.4Hz,1H),7.38(s,6H),7.18(s,1H),6.91(d,J＝7.2Hz,2H),5.36(s,1H),4.01(s,2H),3.42(s,4H),3.35(s,6H),2.53(s,4H),1.80～1.20(m,5H)
16。
4-(4-((4’-氯-联苯-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(7-((3-吗啡啉基丙基)氨基)-6-(三氟甲磺酰基)喹唑啉-4-基)苯甲酰胺
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ(ppm)14.63(s,1H),8.55(s,1H),8.31(d,J＝4.0Hz,2H),8.26(s,1H),7.51(d,J＝4.4Hz,1H),7.36(s,6H),7.18(s,1H),6.92(d,J＝7.2Hz,2H),5.36(s,1H),4.02(s,2H),3.42(s,4H),3.35(s,6H),2.71(s,4H),2.57(m,2H),2.45(s,4H),1.67(m,2H).
17。
4-(4-((4’-氯-联苯-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(8-硝基-7-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)喹唑啉-4-基)苯甲酰胺
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ(ppm)14.66(s,1H),8.37(d,J＝3.6Hz,2H),8.28(s,1H),8.05(d,J＝7.2Hz,1H),7.52(d,J＝4.4Hz,1H),7.37(s,6H),7.05(d,J＝7.6Hz,1H),6.90(d,J＝7.2Hz,2H),5.35(s,1H),4.01(s,2H),3.41(s,4H),3.32(s,6H),2.53(s,4H),1.80～1.20(m,5H)
18。
4-(4-((4’-氯-联苯-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(7-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)-8-(三氟甲磺酰基)喹唑啉-4-基)苯甲酰胺
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ(ppm)14.64(s,1H),8.37(d,J＝3.6Hz,2H),8.28(s,1H),7.88(d,J＝7.2Hz,1H),7.53(d,J＝4.4Hz,1H),7.36(s,6H),7.09(d,J＝7.6Hz,1H),6.90(d,J＝7.2Hz,2H),5.35(s,1H),4.02(s,2H),3.41(s,4H),3.34(s,6H),2.52(s,4H),1.80～1.20(m,5H)
19。
4-(4-((2-(4-氯苯基)-5,5-二甲基-环己-1-烯基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(7-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)-8-(三氟甲磺酰基)喹唑啉-4-基)苯甲酰胺
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ(ppm)14.65(s,1H),8.35(d,J＝4.0Hz,2H),8.28(s,1H),7.89(d,J＝7.2Hz,1H),7.53(d,J＝4.4Hz,1H),7.37(s,2H),7.08(d,J＝7.6Hz,1H),6.91(d,J＝7.2Hz,2H),5.35(s,1H),3.51(s,2H),3.32(s,4H),3.21(s,6H),2.46(s,4H),2.09(s,2H),2.03(s,2H),1.97(s,2H),1.68(m,3H),1.35(s,2H),1.04(s,6H).
20。
4-(4-((2-(4-氯苯基)-5,5-二甲基-环己-1-烯基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(8-硝基-7-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)喹唑啉-4-基)苯甲酰胺
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ(ppm)14.65(s,1H),8.36(d,J＝4.0Hz,2H),8.28(s,1H),8.05(d,J＝7.2Hz,1H),7.53(d,J＝4.4Hz,1H),7.37(s,2H),7.04(d,J＝7.2Hz,1H),6.89(d,J＝7.6Hz,2H),5.34(s,1H),3.51(s,2H),3.32(s,4H),3.23(s,6H),2.44(s,4H),2.08(s,2H),2.01(s,2H),1.96(s,2H),1.68(m,3H),1.35(s,2H),1.05(s,6H).
21。
4-(4-((2-(4-氯苯基)-5,5-二甲基-环己-1-烯基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(7-((3-吗啡啉基丙基)氨基)-8-硝基喹唑啉-4-基)苯甲酰胺
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ(ppm)14.66(s,1H),8.35(d,J＝4.0Hz,2H),8.28(s,1H),8.03(d,J＝6.8Hz,1H),7.52(d,J＝4.4Hz,1H),7.37(s,2H),7.05(d,J＝7.2Hz,1H),6.86(d,J＝7.2Hz,2H),5.34(s,1H),3.52(s,2H),3.34(s,4H),3.23(s,6H),2.68(s,4H),2.59(m,2H),2.46(s,4H),2.05(s,2H),2.00(s,2H),1.69(m,4H),1.03(s,6H).
22。
4-(4-((2-(4-氯苯基)-4,4-二甲基-环己-1-烯基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(6-硝基-7-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)喹唑啉-4-基)苯甲酰胺
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ(ppm)14.64(s,1H),9.53(s,1H),8.32(d,J＝4.0Hz,2H),8.25(s,1H),7.53(d,J＝4.4Hz,1H),7.37(s,2H),6.98(s,1H),6.87(d,J＝7.2Hz,2H),5.34(s,1H),3.51(s,2H),3.32(s,4H),3.23(s,6H),2.44(s,4H),2.09(s,2H),2.02(s,2H),1.96(s,2H),1.68(m,3H),1.35(s,2H),1.02(s,6H).
23。
4-(4-((2-(4-氯苯基)-4,4-二甲基-环己-1-烯基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(8-硝基-7-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)喹唑啉-4-基)苯甲酰胺
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ(ppm)14.66(s,1H),8.34(d,J＝3.6Hz,2H),8.28(s,1H),8.04(d,J＝6.8Hz,1H),7.52(d,J＝4.0Hz,1H),7.37(s,2H),7.06(d,J＝7.2Hz,1H),6.88(d,J＝7.6Hz,2H),5.32(s,1H),3.51(s,2H),3.32(s,4H),3.23(s,6H),2.45(s,4H),2.08(s,2H),2.00(s,2H),1.96(s,2H),1.67(m,3H),1.36(s,2H),1.03(s,6H).
24。
4-(4-((2-(4-氯苯基)-4,4-二甲基-环己-1-烯基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(7-((3-吗啡啉基丙基)氨基)-8-硝基喹唑啉-4-基)苯甲酰胺
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ(ppm)14.64(s,1H),8.34(d,J＝4.0Hz,2H),8.28(s,1H),8.03(d,J＝6.8Hz,1H),7.54(d,J＝4.0Hz,1H),7.37(s,2H),7.07(d,J＝7.6Hz,1H),6.86(d,J＝7.2Hz,2H),5.34(s,1H),3.52(s,2H),3.33(s,4H),3.23(s,6H),2.69(s,4H),2.58(m,2H),2.44(s,4H),2.05(s,2H),1.98(s,2H),1.70(m,4H),1.03(s,6H).
25。
4-(4-((2-(4-氯苯基)-4,4-二甲基-环己-1-烯基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(7-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)-8-(三氟甲磺酰基)喹唑啉-4-基)苯甲酰胺
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ(ppm)14.65(s,1H),8.36(d,J＝3.6Hz,2H),8.28(s,1H),7.88(d,J＝7.2Hz,1H),7.53(d,J＝4.4Hz,1H),7.35(s,2H),7.08(d,J＝7.2Hz,1H),6.93(d,J＝7.6Hz,2H),5.35(s,1H),3.52(s,2H),3.32(s,4H),3.21(s,6H),2.46(s,4H),2.10(s,2H),2.03(s,2H),1.98(s,2H),1.67(m,3H),1.36(s,2H),1.02(s,6H).
26。
实施例2化合物在分子水平与Bcl-2和Bcl-xL的结合亲和力测定
1.试验方法(荧光偏振测定法)
体外Bcl-2结合测定
将使用6-6-羧基荧光素琥珀酰亚胺基酯(FAM)在N-末端上标记的21-残基Bid BH3肽(QEDIIRNIARHLAQVGDSMDR)(SEQ ID NO:1)用作荧光标记(F1u-Bid-21)。已经证实该荧光肽具有Kd为15.74nM的高结合亲和力。在本测定法中使用的Bcl-2为重组的His-融合可溶性蛋白。
将溶于DMSO的测试化合物和在测定缓冲液(100mM磷酸钟，pH 7.5；100μg/ml牛血清丙种球蛋白，0.02％叠氮化纳，购自Invitrogen Corporation,Life Technologies)中Bcl-2蛋白质(0.120μM)与Flu-Bid-21肽(0.010μM)预温育的5μl样品加入到Dynex 96-孔黑色圆底平板(Fisher Scientific)中，以使产生125μ1的终体积。对每次测定而言，每个测定平板上均包括含有Bcl-2和Flu-Bid-21肽(相当于0％抑制)的结合肽和仅含Flu-Bid-21(相当于100％抑制)的游离肽对照品。在结合达到平衡时的4小时温育后，使用Ultra平板读数器(Tecan U.S.Inc.,Research Triangle Park,NC)在485nm的激发波长和530nm的发射波长处测定以毫极化(mi1ipo1arization)单位计的极化值(mP)。使用非线性最小二乘法分析和用GraphPad Prism@软件拟合的曲线从曲线图中确定IC50，即取代50％结合肽时的抑制剂浓度。
体外BcI-xL结合测定
为了测定与Bcl-xL蛋白质的结合亲和力，使用不含C-末端疏水尾的人Bcl-xL重组His-标记的蛋白质并用6-羧基荧光素琥珀酰亚胺基酯(FAM)标记的Bak-16mer BH3肽。这种肽已经表现出Kd＝9.79nM的结合亲和力。按照与对Bcl-2蛋白质所述相同的方式，使用与60nMBcl-xL和5nM Flu-Bak肽预温育的复合物在含有50mM Tris-Bis，pH 7.4；0.01％牛血清丙种球蛋白的测定缓冲液中进行竞争性结合测定。
2.结果
下表中提供部分IC50资料。符号+代表IC50小于或等于1uM，符号++代表IC50大于1uM，N/A代表暂无数据
实施例3化合物对急性淋巴细胞白血病细胞株MV-4-11细胞增殖能力的影响试验1、试验方法
化合物对急性淋巴细胞白血病细胞株MV-4-11细胞(购自ATCC细胞库)的生长抑制检测CCK-8细胞计数试剂盒(Dojindo)检测。具体步骤如下：处于对数生长期的MV-4-11细胞按合适密度接种至96孔培养板中，每孔90μL，培养过夜后，加入不同浓度的化合物作用72hr，并设定溶剂对照组(阴性对照)。待化合物作用细胞72h后，化合物对细胞增殖的影响采用CCK-8细胞计数试剂盒(Dojindo)检测，每孔加入10μL CCK-8试剂，置于37℃培养箱中放置2-4小时后，用全波长式微孔板酶标仪SpectraMax 190读数，测定波长为450nm。采用以下列公式计算化合物对肿瘤细胞生长的抑制率(％)：抑制率(％)＝(OD阴性对照孔-OD给药孔)/OD阴性对照孔×100％。IC50值采用酶标仪随机附带软件以四参数法回归求得。
2.结果
下表中提供部分化合物的IC50值。符号+代表IC50小于或等于1uM，且符号++代表IC50为1uM至10uM，且符号+++代表IC50大于10uM
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (9)

1.一种如下式I所示的化合物，或其药学上可接受的盐：
其中，
环A为选自下组的基团：
R1和R2各自独立地选自：H、卤素、NO2、CN、CF3SO2或CF3；
R3和R4各自独立地选自：H、取代或未取代的C1-C8烷基、C(O)OR5、CONR6R7、C(O)R8、取代或未取代的5～8元芳基、取代或未取代的5～8元杂芳基、取代或未取代的3～12元饱和或不饱和杂环或碳环；其中，所述的杂芳基包含1-3个选自下组的杂原子：N、O或S；所述的杂环包含1-3个选自下组的杂原子：N、O或S；
R5、R6、R7和R8各自独立地选自：H、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C1-C6亚烷基-胺基、取代或未取代的C1-C6亚烷基-羟基、取代或未取代的5～8元芳基、或取代或未取代的5～8元杂芳基；取代或未取代的3～12元饱和杂环或碳环；其中，所述的杂芳基包含至少一个选自下组的杂原子：N、O或S，所述的杂环包含至少一个选自下组的杂原子：N、O或S；
上述的任一“取代”指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代基取代：卤素、OH、NH2、CN、未取代或卤代的C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、未取代或卤代的C2-C6烯基、未取代或卤代的C2-C6炔基、未取代或卤代的C2-C6酰基、未取代或卤代的5～8元芳基、未取代或卤代的5～8元杂芳基、未取代或卤代的3～12元饱和杂环或碳环；其中，所述的杂芳基包含1-3个选自下组的杂原子：N、O或S，所述的杂环包含1～3个选自下组的杂原子：N、O或S。
2.如权利要求1所述的式I化合物，其特征在于，所述式I化合物为如下所示的化合物：
3.如权利要求1所述的式I化合物的制备方法，其特征在于，包括步骤：
(a)在惰性溶剂中，用式I-13化合物和式I-14化合物反应，得到式I化合物；
上述各式中，各基团的定义如权利要求1中所述。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法还包括步骤：
(b)在惰性溶剂中，用式I-12化合物和式I-5化合物反应，得到式I-13化合物；
上述各式中，各基团的定义如权利要求1中所述。
5.如权利要求1所述的化合物的用途，其特征在于，用于：
(a)制备治疗与Bcl-2家族蛋白活性或表达量相关的疾病的药物；
(b)制备Bcl-2家族蛋白靶向抑制剂；
(c)体外非治疗性地抑制Bcl-2家族蛋白的活性；
(d)体外非治疗性地抑制肿瘤细胞增殖；和/或
(e)治疗与Bcl-2家族蛋白活性或表达量相关的疾病。
6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述Bcl-2家族蛋白选自下组：Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-w、Mcl-1、Bcl2-A1，或其组合；和/或
所述的肿瘤细胞为白血病细胞株；较佳地为淋巴细胞白血病细胞株；更佳地为急性淋巴细胞白血病细胞株MV-4-11细胞。
7.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括：(i)有效量的式I化合物，或其药学上可接受的盐；和(ii)药学上可接受的载体。
8.一种抑制Bcl-2蛋白活性的方法，其特征在于，包括步骤：对抑制对象施用抑制有效量的如权利要求1所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，或对抑制对象施用抑制有效量的如权利要求7所述的药物组合物。
9.一种体外抑制肿瘤细胞的方法，其特征在于，所述方法包括：对抑制对象施用抑制有效量的如权利要求1所述的式I化合物，或如权利要求7所述的药物组合物。
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