CN108478800A

CN108478800A - 含mg53/其突变体的组合物在制备炎症性肠病药物的应用

Info

Publication number: CN108478800A
Application number: CN201810280431.6A
Authority: CN
Inventors: 慎东
Original assignee: Individual
Current assignee: Mudanjiang Youbo Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2018-04-02
Filing date: 2018-04-02
Publication date: 2018-09-04

Abstract

本发明提出了一种含MG53/其突变体的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病的药物的应用，其突变体是MG53的Coiled‑coil结构域中的丝氨酸位点突变为非极性氨基酸丙氨酸。本发明通过葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导建立小鼠溃疡性结肠炎模型，以5‑氨基水杨酸(5‑ASA)为阳性药进行对照，通过鉴定疾病的活动指数(DAI)、结肠长度、体重变化及结肠组织病理性变化等，证实本发明对于DSS引起的结肠炎有明显的抑制作用。

Description

含MG53/其突变体的组合物在制备炎症性肠病药物的应用

技术领域

本发明涉及医学领域，具体的，涉及一种含MG53的组合物、含MG53突变体的组合物在预防和治疗炎症性肠病的应用。

背景技术

炎症性肠病(inflammatory bowel disease，IBD)是一组慢性非特异性肠道炎症性疾病，包括克罗恩病(Crohn′s disease，CD)和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)。1956年我国学者文士域教授发表了国内最早的IBD相关文章：“溃疡性结肠炎二十三例之分析与探讨”和“胃十二指肠及空肠克隆氏病一例报道”。1978年第一次全国消化疾病会议中提出了UC的诊断标准，从此开启了中国IBD基础和临床研究的探索之旅。近20年我国IBD病例数也迅速增加，大大激发了我国学者不仅是对临床诊断和治疗的关注与兴趣，而且对其发病机制研究投入逐渐加大，获得了一定的成绩和经验。

以往我国的IBD流行病学调查资料都是基于住院病例和临床分析的报道。在卫生行业专项基金的支持下，2012—2013年分别在北方城市黑龙江省大庆市、南方城市广东省中山市开展了以人群为基础的IBD流行病学调查，这个调查首次发布了我国南方城市和北方城市IBD、CD、UC标化后发病率，我国南方IBD发病率高于北方，CD发病率高于北方。

柳氮磺吡啶(Salazosulfapyridine,SASP)、美沙拉嗪、奥沙拉嗪、巴柳氮,被作为IBD诱导和维持缓解的一线药物,其机制主要是依靠有效成分5-ASA来发挥抗炎作用.SASP为5-ASA的前体药物,由有效成分5-ASA和作为载体的磺胺吡啶(sulfapyridine,SP)组成,由于SP可引起头痛、胃肠道反应、荨麻疹等不良反应较多,疗效不佳，故仅适用于轻度UC患者短期服用，不太适合IBD缓解治疗长期使用的需求。

在治疗药物方面，糖皮质激素已经被医生和患者广泛接受，国内陈白莉等和姚尧等对首次应用糖皮质激素的临床疗效和长期应用的疗效进行了分析，结果显示UC和CD患者予糖皮质激素治疗30d，临床有效率达70.4％和61.0％，随访1年UC临床缓解率达50.8％，延长激素使用时间及增加剂量对维持患者长期临床缓解无意义。

检索万方数据库发现，最初只有寥寥几篇文章探讨IBD免疫抑制剂的使用，但至2015年关于硫唑嘌呤(azathioprine，AZA)治疗IBD的文章可达120余篇，环孢素相关文章也达30余篇。免疫抑制剂的使用也越来越趋于规范。另外关于生物制剂的研究结果也越来越多。这些都预示着我国IBD的治疗进入到循证医学的阶段。AZA是IBD一线诱导治疗药物，也是维持用药的主要药物。近几年来，国内关于其用药的剂量、疗效、副作用做了大量临床研究。其中高翔等进行了一项开放性前瞻研究显示，AZA(2mg/kg)和糖皮质激素联合治疗活动性CD，随访96周患者的完全缓解率达53.3％；用药后的主要副作用表现为血液系统损害、感染、胃肠道反应、肝功能异常、头晕、乏力、关节痛和皮疹等。环孢素是治疗重度UC的“拯救”药物，最初我国仅为少数病例报告，3年有2篇文献对22例、24例UC应用环孢素进行回顾性分析，结果显示有效率为86.36％和62.5％。其他免疫抑制剂如沙利度胺、环磷酰胺、甲氨蝶呤作为IBD治疗的二线用药，在我国也有部分研究报道。

2007年英夫利西单抗获得我国食品药品监督局批准，并应用于临床治疗CD。其中肖英莲等报道英夫利西单抗的“降阶梯”和“升阶梯”治疗的临床及内镜缓解率相似。关于英夫利西单抗治疗UC的临床疗效分析，共检索到5篇文献，观察周期为8～38周，总体有效率达41.7％～96.0％。但英夫利西单抗不良反应颇多、安全性风险大且价格昂贵(1次使用量价格为￥6700元)导致其应用受到一定限制：最常见的副作用是溃疡性结肠炎恶化，上呼吸道感染，输注相关反应和头痛。世界胃肠病学会及欧洲克罗恩病和结肠炎组织(ECCO)在关于IBD生物治疗的共识意见(2012年)中指出，在以下几种情况下应尽量避免使用生物制剂治疗：①无炎性反应的纤维化狭窄CD；②感染及疫苗接种，感染控制前不可使用生物制剂治疗，使用生物制剂前应去除所有化脓灶，排除或治愈潜在感染(如肺结核、乙型肝炎或免疫缺陷病毒感染等)。接受生物制剂治疗前应排除潜伏性结核，必要时应回顾和更新疫苗接种状态。近3个月内有活疫苗接种史者不宜接受生物治疗；③有肿瘤及其他禁忌，包括恶性肿瘤病史(除外黑色素瘤皮肤癌)、淋巴细胞增生性疾病、严重充血性心力衰竭或神经系统脱髓鞘病患者，在有其他治疗选择的情况下，不应接受生物制剂治疗。

其中，克罗恩病是一种肠道炎症性疾病，在胃肠道的任何部位均可发生，但好发于末端回肠和右半结肠。克罗恩病和慢性非特异性溃疡性结肠炎两者统称为炎症性肠病(IBD)。本病临床表现为腹痛、腹泻、肠梗阻，伴有发热、营养障碍等肠外表现。病程多迁延，反复发作，不易根治。

溃疡性结肠炎是一种结肠和直肠慢性非特异性炎症性疾病，病变多位于乙状结肠和直肠，也可延伸至降结肠，甚至整个结肠，其病变局限于大肠黏膜及黏膜下层。其病程漫长、易反复，且易引起中毒性结肠扩张、肠穿孔、大出血、息肉、癌变等多种并发症。其主要临床表现为腹泻、腹痛、黏液便及脓血便、里急后重、甚则大便秘结、数日内不能通大便，常伴有消瘦乏力等。溃疡性结肠炎的病因尚未完全阐明，目前认为，该病的发病是外源物质引起宿主反应、基因遗传和免疫失衡三者相互作用的结果。

对于该病，目前尚无有效的长期预防或治疗的方法，现有的治疗方法中，一般包括药物治疗和手术治疗。药物治疗包括活动期和缓解期的诱导和维持缓解治疗，治疗原则基于疾病的严重程度和病变范围。疾病的严重程度目前多采用改良Truelove-Witts评分和改良Mayo评分，分为轻度、中度和重度。病变范围目前主要采用蒙特利尔分型，分为直肠型、左半结肠型和广泛结肠型。其中药物治疗包括水杨酸类药物治疗、皮质激素治疗、免疫抑制剂治疗、生物治疗(单抗)等。水杨酸类药物(5-ASA)是轻中度溃疡性结肠炎治疗的主要药物，但是很多的轻中度溃疡性结肠炎患者由于疗效不佳选用须使用激素治疗；激素治疗存在副作用大，因此无法长期使用；免疫抑制剂治疗、生物治疗因其不良反应和安全性而饱受争议，且生物治疗存在价格昂贵且对患者条件要求苛刻。近年来，黏膜愈合(MH)逐渐纳入溃疡性结肠炎的疗效评估。但已经上市的药物中，除生物治疗(单抗，主要针对是重度溃疡性结肠炎)具有轻微的促进粘膜愈合作用外，其余类别药物无促进粘膜愈合的作用。因此，提供一种快速促进溃疡愈合从而治疗溃疡性结肠炎的药物治疗方法尤为重要。

激素治疗主要针对对氨基水杨酸制剂治疗无效者，特别是病变较广泛者，但目前并不认为长期激素维持可防止复发，且副作用明显，故不主张长期使用；硫唑嘌呤等免疫抑制剂和生物治疗(单抗)可发挥免疫抑制作用，适用于激素无效或依赖患者的重度溃疡性结肠炎，但存在肾脏毒性、高血压、神经毒性和感染等副反应。如果上述治疗手段全部无效，须考虑外科全结肠切除，会给患者以后的生活造成极大的不便。

由于溃疡性结肠炎的病因不明，因此有必要用不同的模型上效果进行评价，化学品如DSS、醋酸、乙醇均可诱发溃疡性结肠炎，这些化学诱导均是业内公认的溃疡性结肠炎模型，其中DSS诱导的动物模型是经典溃疡性结肠炎动物模型同时也用于评价克罗恩病。DSS诱导急性溃疡性结肠炎和克罗恩病模型评价，边造模边给药是的常规做法，造模7天结束后给予上市的药物不会看到明显回调作用，业内的专家也认可这种造模方法，从另一个角度说明上市药物疗效不佳。

综上所述，研究一种含MG53/其突变体的组合物在预防和治疗炎症性肠病的应用尤为重要。

发明内容

本发明的目的是公开一种含MG53的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病的药剂中的应用，本发明的机理在于通过促进肠粘膜修复快速治疗炎症性肠病，还能够促进肠粘膜修复。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种含MG53的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病药物中的应用。

进一步的，所述MG53为以下六种中的任意一种，或任意一种及相应的激动剂和/或拮抗剂中的一种。

1)包括MG53多肽；

2)包括编码MG53多肽的核酸；

3)包括MG53多肽，编码MG53多肽的核酸；

4)包括MG53多肽；小窝蛋白-3；

5)包括编码MG53多肽的核酸；小窝蛋白-3；

6)包括MG53多肽、编码MG53多肽的核酸；小窝蛋白-3；

进一步的，所述MG53多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:7-SEQ ID NO:14中任意一项所示。

进一步的，所述编码MG53多肽的核酸的核苷酸序列如SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:6中任意一项所示。

进一步的，所述激动剂包括磷脂酰丝氨酸、锌或锌盐、钙离子、Zn-1-羟基吡啶-2-硫酮(Zn-HPT)、三七、氧化剂、乙基汞硫代水杨酸钠中的一种或者多种组合。

进一步的，所述含MG53的组合物包括但不限于粉针剂、水针剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、口服液、粉剂、散剂、预混剂、膏剂、舌下片、肠溶剂、栓剂、灌肠剂。

优选的，所述含MG53的组合物包括肠溶剂和灌肠剂，所述肠溶剂包括但不限于肠溶胶囊、肠溶片各种肠溶缓释或控释剂、复方制剂。

本发明另一个目的在于公开一种含MG53突变体的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病药物的应用，其可以通过促进肠粘膜修复快速治疗炎症性肠病，快速抑制炎症性肠病，实现预防和治疗炎症性肠病的效果。

进一步的，所述MG53突变体为MG53的Coiled-coil结构域中的丝氨酸位点突变为除苏氨酸和酪氨酸以外的非极性氨基酸，所述MG53突变体为选自MG53S150A、MG53S189A、MG53S211A中的一种或多种。

进一步的，所述MG53突变体为MG53的Coiled-coil结构域中的丝氨酸位点突变为非极性氨基酸丙氨酸，所述MG53突变体为选自MG53S150A、MG53S189A、MG53S211A中的一种或多种。

进一步的，所述MG53突变体为以下六种中的任意一种，或任意一种及相应的激动剂和/或拮抗剂中的一种。

1)包括MG53突变体多肽；

2)包括编码MG53突变体多肽的核酸；

3)包括MG53突变体多肽，编码MG53突变体多肽的核酸；

4)包括MG53突变体多肽；小窝蛋白-3；

5)包括编码MG53突变体多肽的核酸；小窝蛋白-3；

6)包括MG53突变体多肽、编码MG53突变体多肽的核酸；小窝蛋白-3；

进一步的，所述含MG53突变体的组合物包括但不限于粉针剂、水针剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、口服液、粉剂、散剂、预混剂、膏剂、舌下片、肠溶剂、栓剂。

优选的，所述含MG53突变体的组合物包括肠溶剂和灌肠剂，所述肠溶剂包括但不限于肠溶胶囊、肠溶片各种肠溶缓释或控释剂、复方制剂。

为了证实本发明对炎症性肠病的治疗作用，本发明采取的实验方案如下：

1、准备体重相差较小的同品种、同性别的小鼠，将小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组、以及MG53组或MG53突变体组。

2、将阳性对照组、模型组以及MG53组或MG53突变体组的小鼠通过葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导，建立小鼠炎症性肠病模型。

3、模型组不做任何处理；阳性对照组给予适量5-氨基水杨酸(5-ASA)；MG53组给予适量的本发明中的含MG53或含MG53突变体的组合物。

4、末次给药后，经过一定时间，处死小鼠，取其结肠组织，观察结肠外观、及结肠组织病理性变化。

在整个实验过程中，每天固定时间，进行测定小鼠的体重、大便性状以及隐血情况，用以确定本发明对炎症性肠病的效果。

通过采取以上方案，本发明的有益效果是：

现有的治疗活动期及缓解期轻中度溃疡性结肠炎的药物主要是柳氮磺胺吡啶(SASP)和各种不同类型5-氨基水杨酸(5-ASA)制剂。5-ASA于肠中崩解，大部分药物可抵达结肠，作用于炎症黏膜，抑制引起炎症的前列腺素合成和炎症介质白三烯的形成，对肠壁炎症有显著的消炎作用，对发炎的肠壁结缔组织效用尤佳。此种药物在回肠和结肠释放，仅有少量药物被吸收入血，入血的药物主要经肝脏首关效应代谢而形成乙酰水杨酸代谢产物，其与血浆蛋白结合率平均为83％。乙酰化代谢产物从尿中排出，未被吸收的药物随粪便排泄。

而本发明含MG53的组合物或含MG53突变体的组合物治疗溃疡性结肠炎的机制与现有的治疗手段有所不同，因而在使用本发明后能观察到明显的治疗溃疡性结肠炎效果，本发明远远优于现有的抗炎药物，见效更加迅速，为溃疡性结肠炎提供了一种颠覆性的的药物治疗手段。

发明人进行了安全性探索性的试验，给予外源性的MG53及MG53M单次给药、连续7天静脉注射(i.v.)12、24mg/kg均不会引起大鼠血常规、血生化、体重和行为学、组织病理的变化。从成药性的角度分析静脉注射安全性剂量24mg/kg大于灌肠剂及肠溶胶囊的换算剂量，安全性时限>＝1w(药效时限为4天)，因此不影响MG53及MG53M用于炎症性肠病的治疗的成药性。

另外，根据前期急性毒性及长期毒性实验结果显示，含MG53的组合物和含其突变体的组合物均没有观察到任何安全性风险，因此，从安全角度含MG53的组合物和含其突变体的组合物的每日施用剂量不受严格的限制，应用时可根据实际情况进行调整，且可以长时间使用，满足溃疡性结肠炎的长期治疗需求，具有很好的推广应用前景。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1为实验一中各溶液对实验鼠疾病活动指数(DAI)评分的影响；

图2为实验一中实验鼠体重变化；

图3为实验一中实验鼠最终结肠长度；

图4为实验一中实验鼠大体病理评分；

图5为实验一中中实验鼠结肠组织病理学典型照片；

图6为实验一中实验鼠结肠组织病理学评分；

图7为实验二中各溶液对实验鼠疾病活动指数(DAI)评分的影响；

图8为实验二中实验鼠体重变化；

图9为实验二中实验鼠最终结肠长度；

图10为实验二中实验鼠大体病理评分；

图11为实验二中实验鼠结肠组织病理学典型照片；

图12为实验二中实验鼠结肠组织病理学评分。

图13为实验三中各溶液对实验鼠疾病活动指数(DAI)评分的影响；

图14为实验三中实验鼠体重变化；

图15为实验三中实验鼠最终结肠长度；

图16为实验三中实验鼠大体病理评分；

图17为实验三中实验鼠结肠组织病理学典型照片；

图18为实验三中实验鼠结肠组织病理学评分。

图19为实验四中各溶液对实验鼠疾病活动指数(DAI)评分的影响；

图20为实验四中实验鼠体重变化；

图21为实验四中实验鼠最终结肠长度；

图22为实验四中实验鼠大体病理评分；

图23为实验四中实验鼠结肠组织病理学典型照片；

图24为实验四中实验鼠结肠组织病理学评分；

图25为实验五中各溶液对实验鼠疾病活动指数(DAI)评分的影响；

图26为实验五中实验鼠体重变化；

图27为实验五中实验鼠大体病理评分；

图28为实验五中实验鼠结肠组织病理学典型照片；

图29为实验五中实验鼠结肠组织病理学评分；

图30为实验六中各溶液对实验鼠疾病活动指数(DAI)评分的影响；

图31为实验六中实验鼠体重变化；

图32为实验六中实验鼠大体病理评分；

图33为实验六中实验鼠结肠组织病理学典型照片；

图34为实验六中实验鼠结肠组织病理学评分。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

一种含MG53的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病药物的应用。

优选的，MG53为以下六种中的任意一种，或任意一种及相应的激动剂和/或拮抗剂中的一种。

1)包括MG53多肽；

2)包括编码MG53多肽的核酸；

3)包括MG53多肽，编码MG53多肽的核酸；

4)包括MG53多肽；小窝蛋白-3；

5)包括编码MG53多肽的核酸；小窝蛋白-3；

6)包括MG53多肽、编码MG53多肽的核酸；小窝蛋白-3；

优选的，MG53多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:5，SEQID NO:7-SEQ ID NO:14中任意一项所示。

优选的，编码MG53多肽的核酸的核苷酸序列如SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:4,SEQ IDNO:6中任意一项所示。

优选的，激动剂包括磷脂酰丝氨酸、锌或锌盐、钙离子、Zn-1-羟基吡啶-2-硫酮(Zn-HPT)、三七、氧化剂、乙基汞硫代水杨酸钠中的一种或者多种组合。

优选的，含MG53的组合物包括但不限于粉针剂、水针剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、口服液、粉剂、散剂、预混剂、膏剂、舌下片、肠溶剂、栓剂、灌肠剂。

本发明另一个目的在于公开一种含MG53突变体的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病药物的应用，其可以快速抑制炎症性肠病。

优选的，MG53突变体为MG53的Coiled-coil结构域中的丝氨酸位点突变为除苏氨酸和酪氨酸以外的非极性氨基酸，所述MG53突变体为选自MG53S150A、MG53S189A、MG53S211A中的一种或多种。

优选的，MG53突变体为MG53的Coiled-coil结构域中的丝氨酸位点突变为非极性氨基酸丙氨酸，所述MG53突变体为选自MG53S150A、MG53S189A、MG53S211A中的一种或多种。

优选的，MG53突变体为以下六种中的任意一种，或任意一种及相应的激动剂和/或拮抗剂中的一种。

1)包括MG53突变体多肽；

2)包括编码MG53突变体多肽的核酸；

3)包括MG53突变体多肽，编码MG53突变体多肽的核酸；

4)包括MG53突变体多肽；小窝蛋白-3；

5)包括编码MG53突变体多肽的核酸；小窝蛋白-3；

优选的，含MG53突变体的组合物包括但不限于粉针剂、水针剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、口服液、粉剂、散剂、预混剂、膏剂、舌下片、肠溶剂、栓剂。

优选的，含MG53突变体的组合物包括肠溶剂和灌肠剂，所述肠溶剂包括但不限于肠溶胶囊、肠溶片各种肠溶缓释或控释剂、复方制剂。

为了进一步验证本发明的技术效果，发明人进行了下列六个实验，其中，实验一～实验四为溃疡性结肠炎疗效实施案例。

实验一含MG53组合物对溃疡性结肠炎疗效实施案例

1、配置溶液：

(1)2.5％的DSS溶液：称取DSS 5g，加入200mL双蒸水，现用现配；

(2)PBS溶液：称取：KCl 0.2g、NaCl 8g、Na₂HPO₄·12H₂O 2.084g、KH₂PO₄ 0.2g，加入1L双蒸水；

本实验中采用了PBS溶液，但是在具体实验过程中，不仅限于PBS溶液，还可以为淀粉、糊精、β-环糊精等。

(3)5-ASA(200mg/kg)悬液：CMC-Na 5g，加入1L的双蒸水，配置成0.5％的CMC-Na溶液，将0.2g 5-ASA均匀的分散在10mL的0.5％CMC-Na溶液中；

(4)MG53溶液：MG53冻干粉西林瓶制剂为2mg/支，将2、1和0.5mLPBS分别注入到瓶中，浓度分别为1、2和4mg/mL，给药体积为2mL/kg。

2、准备体重为18-20g的雌性C57/LB6小鼠100只，随机预留10只备用，其余90只为实验鼠。然后，将90只实验鼠随机分为正常组、模型组、5-ASA阳性对照组、MG53(2mg/kg)组、MG53(4mg/kg)组、MG53(8mg/kg)组，共六组，每组15只实验鼠。

3、对不同实验鼠进行分别处理

正常组：实验鼠不做任何处理；

模型组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后通过直肠给予PBS灌肠4天；

5-ASA阳性对照组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，同时灌胃给予5-ASA溶液200mg/kg，7天；造模结束后继续通过灌胃给予5-ASA溶液200mg/kg，4天；

MG53(2mg/kg)组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后通过直肠给予2mg/kg的MG53溶液，4天；

MG53(4mg/kg)组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后通过直肠给予4mg/kg的MG53溶液，4天；

MG53(8mg/kg)组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后通过直肠给予8mg/kg的MG53溶液，4天。

4、末次给药后4小时，乙醚麻醉处死实验鼠，取结肠组织，观察其外观形状、并测定其长度、拍照记录。随后将肠段纵向剖开，用4％的甲醛溶液固定，用于后续病理学检查，剩余组织冻存于-80度的冰箱中备用。

在实验期间，观察各组小鼠的生活状况，观察项目主要包括小鼠的体重、大便性状以及隐血情况，观察的同时，对疾病活动指数(DAI)进行评估，得出每组实验鼠的平均DAI值，结果记录如图1-6。

下面将对图1-6进行进一步的分析。各图中##代表的是P<0.01vs正常组，*代表的是P<0.05，**代表的是P<0.01vs模型组。

图1为实验一中各溶液对实验鼠疾病活动指数(DAI)评分的影响，如图1所示，模型组小鼠DAI评分显著升高，MG53(2，4，8mg/kg)和5-ASA(200mg/kg)均呈明显下调作用。

MG53是造模结束后进行给药4天，常规5-ASA是边造模边给药7天，造模结束后再给药4天。作为急性溃疡性结肠炎模型评价，边造模边给药是的常规做法，造模7天结束后给上市的药物不会看到明显回调作用，由此可知，与现有技术相比，MG53快速起效及疗效突出。

图2为实验一中实验鼠体重变化，如图2所示，5-ASA(200mg/kg)和MG53(2，4，8mg/kg)均可抑制结肠炎小鼠体重的减轻。

图3为实验一中实验鼠最终结肠长度；如图3所示，结肠炎小鼠结肠长度明显缩短，5-ASA(200mg/kg)和MG53(2，4，8mg/kg)可抑制小鼠结肠长度的缩短。

图4为实验一中实验鼠大体病理评分，结合图4及实验结果，对结肠炎小鼠结肠大体评分的影响进行进一步的分析。

正常组:结肠损伤情况，15只小鼠结肠肠壁均为损伤；腹泻情况，15只小鼠均无腹泻症状；肠道粘连，15只小鼠均未出现粘连情况。

模型组：结肠损伤情况，10只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm，5只小鼠出现结肠轻度损伤；腹泻情况，12只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，12只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，3只小鼠结肠轻度粘连。

MG53(2mg/kg)：结肠损伤情况，5只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm；3只小鼠出现结肠轻度损伤，长度扩展为0.5cm；1只小鼠肠壁出现3个溃疡部位；4只小鼠肠壁出现2个溃疡部位；腹泻情况，11只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，6只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，4只小鼠结肠轻度粘连。

MG53(4mg/kg)：结肠损伤情况，4只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm；4只小鼠出现结肠轻度损伤，长度扩展为0.5cm；3只小鼠肠壁出现2个溃疡部位；4只小鼠肠壁出现1个溃疡部位；腹泻情况，8只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，6只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，4只小鼠结肠轻度粘连。

MG53(8mg/kg)：结肠损伤情况，3只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm；3只小鼠出现结肠轻度损伤，长度扩展为0.5cm；1只小鼠肠壁出现3个溃疡部位；3只小鼠肠壁出现2个溃疡部位；腹泻情况，7只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，4只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，5只小鼠结肠轻度粘连。

5-ASA(200mg/kg)组:结肠损伤情况，3只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm；5只小鼠出现结肠轻度损伤，长度扩展为0.5cm；3只小鼠肠壁出现2个溃疡部位；1只小鼠肠壁出现1个溃疡部位；2只小鼠肠壁充血，肠壁增厚但无溃疡，1只小鼠肠壁充血但无溃疡；腹泻情况，9只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，6只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，5只小鼠结肠轻度粘连。

图5为实验一中实验鼠结肠组织病理学典型照片，图6为实验一中实验鼠结肠组织病理学评分，结合图5、图6分析可知：

正常组小鼠结肠由4层结构组成，即粘膜层、粘膜下层、肌层和浆膜层。粘膜层被覆单层柱状上皮，有多量杯状细胞。粘膜下层为疏松结缔组织。肌层为平滑肌，浆膜为单层扁平上皮。粘膜层向肠腔突起形成褶皱、形状规则、排列整齐，未见粘膜层细胞变性坏死。

模型组小鼠结肠组织出现严重炎细胞浸润，病变伤及粘膜层、粘膜下层和浆膜层，隐窝出现损伤。MG53(2mg/kg)组、MG53(4mg/kg)组、MG53(8mg/kg)和5-ASA(200mg/kg)组较模型组小鼠减轻，炎细胞浸润减弱，病变范围明显缩小。

综上所述，结合上述实验及肠炎小鼠DAI评分、体重变化、结肠长度变化、结肠大体病理改变及结肠组织病理学损伤表现，证实MG53对小鼠急性溃疡性结肠炎模型有快速的治疗作用，且不同剂量组间呈现一定的量效关系。

实验二含MG53突变体组合物对溃疡性结肠炎疗效实施案例

1、配置溶液：

(1)2.5％的DSS溶液：称取DSS 5g，加入200mL双蒸水，现用现配；

(4)MG53M溶液：MG53M冻干粉西林瓶制剂为2mg/支，将2、1和0.5mLPBS注入到瓶中，浓度分别为1、2和4mg/mL，给药体积为2mL/kg。

2、准备体重为18-20g的雌性C57/LB6小鼠100只，随机预留10只备用，其余90只为实验鼠。然后，将90只实验鼠随机分为正常组、模型组、5-ASA阳性对照组、MG53M(2mg/kg)组、MG53M(4mg/kg)组、MG53M(8mg/kg)组，共六组，每组15只实验鼠。

3、对不同实验鼠进行分别处理

正常组：实验鼠不做任何处理；

模型组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后给予不含MG53M的仅有辅料的小鼠肠溶胶囊，4天；

MG53M(2mg/kg)组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后通过胃肠道给予0.2mg/只(小鼠按25g计算，剂量为2mg/kg，按含MG53M药物剂量算)的MG53M肠溶胶囊，4天。

MG53M(4mg/kg)组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后通过胃肠道给予0.2mg/只(小鼠按25g计算，剂量为4mg/kg，按含MG53M药物剂量算)的MG53M肠溶胶囊，4天。

MG53M(8mg/kg)组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后通过胃肠道给予0.2mg/只(小鼠按25g计算，剂量为8mg/kg，按含MG53M药物剂量算)的MG53M肠溶胶囊，4天。

5、末次给药后4小时，乙醚麻醉处死实验鼠，取结肠组织，观察其外观形状、并测定其长度、拍照记录。随后将肠段纵向剖开，用4％的甲醛溶液固定，用于后续病理学检查，剩余组织冻存于-80度的冰箱中备用。

在实验期间，观察各组小鼠的生活状况，观察项目主要包括小鼠的体重、大便性状以及隐血情况，观察的同时，对疾病活动指数(DAI)进行评估，得出每组实验鼠的平均DAI值，结果记录如图7-12。

下面将对图7-12进行进一步的分析。各图中各图中##代表的是P<0.01vs正常组，*代表的是P<0.05，**代表的是P<0.01vs模型组。

图7为实验二中各溶液对实验鼠疾病活动指数(DAI)评分的影响，如图7所示，模型组小鼠DAI评分显著升高，MG53M(2，4，8mg/kg)和5-ASA(200mg/kg)均呈明显下调作用。

MG53M是造模结束后进行给药4天，5-ASA是边造模边给药7天，造模结束后再给药4天。作为急性溃疡性结肠炎模型评价，边造模边给药是的现有技术中的常规做法，造模7天结束后给上市的药物不会看到明显回调作用，从另一个角度说明上市药物疗效不佳，MG53快速起效及疗效突出

图8为实验二中实验鼠体重变化，如图2所示，5-ASA(200mg/kg)和MG53M(2，4，8mg/kg)均可抑制结肠炎小鼠体重的减轻。

图9为实验二中实验鼠最终结肠长度；如图9所示，结肠炎小鼠结肠长度明显缩短，5-ASA(200mg/kg)和MG53M(2，4，8mg/kg)可抑制小鼠结肠长度的缩短。

图10为实验二中实验鼠大体病理评分，结合图10及实验结果，对结肠炎小鼠结肠大体评分的影响进行进一步的分析。

模型组：结肠损伤情况，11只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm，4只小鼠出现结肠轻度损伤；腹泻情况，12只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，11只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连。

MG53M(2mg/kg)：结肠损伤情况，5只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm；4只小鼠出现结肠轻度损伤，长度扩展为0.5cm；2只小鼠肠壁出现3个溃疡部位；4只小鼠肠壁出现2个溃疡部位；腹泻情况，11只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，6只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，5只小鼠结肠轻度粘连。

MG53M(4mg/kg)：结肠损伤情况，4只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm；4只小鼠出现结肠轻度损伤，长度扩展为0.5cm；2只小鼠肠壁出现2个溃疡部位；4只小鼠肠壁出现1个溃疡部位；腹泻情况，8只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，6只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，4只小鼠结肠轻度粘连。

MG53M(8mg/kg)：结肠损伤情况，3只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm；2只小鼠出现结肠轻度损伤，长度扩展为0.5cm；1只小鼠肠壁出现3个溃疡部位；2只小鼠肠壁出现2个溃疡部位；腹泻情况，7只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，4只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，5只小鼠结肠轻度粘连。

5-ASA(200mg/kg)组:结肠损伤情况，4只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm；6只小鼠出现结肠轻度损伤，长度扩展为0.5cm；2只小鼠肠壁出现2个溃疡部位；1只小鼠肠壁出现1个溃疡部位；1只小鼠肠壁充血，肠壁增厚但无溃疡，1只小鼠肠壁充血但无溃疡；腹泻情况，9只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，6只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，5只小鼠结肠轻度粘连。

图11为实验二中中实验鼠结肠组织病理学典型照片，图12为实验二中实验鼠结肠组织病理学评分，结合图11、图12分析可知：

模型组小鼠结肠组织出现严重炎细胞浸润，病变伤及粘膜层、粘膜下层和浆膜层，隐窝出现损伤。MG53M(2mg/kg)组、MG53M(4mg/kg)组、MG53M(8mg/kg)和5-ASA(200mg/kg)组较模型组小鼠减轻，炎细胞浸润减弱，病变范围明显缩小。

综上所述，结合上述实验及肠炎小鼠DAI评分、体重变化、结肠长度变化、结肠大体病理改变及结肠组织病理学损伤表现，证实MG53M对小鼠急性溃疡性结肠炎模型有快速的治疗作用，且不同剂量组间呈现一定的量效关系。

实验三含MG53多肽及其激动剂(MG53A)的组合物对溃疡性结肠炎疗效实施案例

1、配置溶液：

(1)2.5％的DSS溶液：称取DSS 5g，加入200mL双蒸水，现用现配；

(4)MG53A溶液：MG53A冻干粉西林瓶制剂为2mg/支，将2、1和0.5mLPBS注入到瓶中，浓度分别为1、2和4mg/mL，给药体积为2mL/kg。其中，激动剂选用的为锌离子，激动剂与MG53的用量比例为千分之一。

2、准备体重为18-20g的雌性C57/LB6小鼠100只，随机预留10只备用，其余90只为实验鼠。然后，将90只实验鼠随机分为正常组、模型组、5-ASA阳性对照组、MG53A(2mg/kg)组、MG53A(4mg/kg)组、MG53A(8mg/kg)组，共六组，每组15只实验鼠。

3、对不同实验鼠进行分别处理

正常组：实验鼠不做任何处理；

MG53A(2mg/kg)组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后通过直肠给予2mg/kg的MG53A溶液，4天；

MG53A(4mg/kg)组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后通过直肠给予4mg/kg的MG53A溶液，4天；

MG53A(8mg/kg)组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后通过直肠给予8mg/kg的MG53A溶液，4天。

6、末次给药后4小时，乙醚麻醉处死实验鼠，取结肠组织，观察其外观形状、并测定其长度、拍照记录。随后将肠段纵向剖开，用4％的甲醛溶液固定，用于后续病理学检查，剩余组织冻存于-80度的冰箱中备用。

下面将对图13-18进行进一步的分析。各图中各图中##代表的是P<0.01vs正常组，*代表的是P<0.05，**代表的是P<0.01vs模型组。

图13为实验三中各溶液对实验鼠疾病活动指数(DAI)评分的影响，如图13所示，模型组小鼠DAI评分显著升高，MG53A(2，4，8mg/kg)和5-ASA(200mg/kg)均呈明显下调作用。

MG53A是造模结束后进行给药4天，5-ASA是边造模边给药7天，造模结束后再给药4天。作为急性溃疡性结肠炎模型评价，边造模边给药是的现有技术中的常规做法，造模7天结束后给上市的药物不会看到明显回调作用，从另一个角度说明上市药物疗效不佳，MG53快速起效及疗效突出

图14为实验三中实验鼠体重变化，如图14所示，5-ASA(200mg/kg)和MG53A(2，4，8mg/kg)均可抑制结肠炎小鼠体重的减轻。

图15为实验三中实验鼠最终结肠长度；如图15所示，结肠炎小鼠结肠长度明显缩短，5-ASA(200mg/kg)和MG53A(2，4，8mg/kg)可抑制小鼠结肠长度的缩短。

图16为实验三中实验鼠大体病理评分，结合图16及实验结果，对结肠炎小鼠结肠大体评分的影响进行进一步的分析。

模型组：结肠损伤情况，11只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm，4只小鼠出现结肠轻度损伤；腹泻情况，12只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，11只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，4只小鼠结肠轻度粘连。

MG53A(2mg/kg)：结肠损伤情况，5只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm；7只小鼠出现结肠轻度损伤，长度扩展为0.5cm；2只小鼠肠壁出现3个溃疡部位；4只小鼠肠壁出现2个溃疡部位；腹泻情况，11只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，6只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，5只小鼠结肠轻度粘连。

MG53A(4mg/kg)：结肠损伤情况，4只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm；6只小鼠出现结肠轻度损伤，长度扩展为0.5cm；2只小鼠肠壁出现2个溃疡部位；4只小鼠肠壁出现1个溃疡部位；腹泻情况，8只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，6只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，4只小鼠结肠轻度粘连。

MG53A(8mg/kg)：结肠损伤情况，2只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm；3只小鼠出现结肠轻度损伤，长度扩展为0.5cm；0只小鼠肠壁出现3个溃疡部位；1只小鼠肠壁出现2个溃疡部位；腹泻情况，7只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，4只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，5只小鼠结肠轻度粘连。

图17为实验三中中实验鼠结肠组织病理学典型照片，图18为实验三中实验鼠结肠组织病理学评分，结合图17、图18分析可知：

模型组小鼠结肠组织出现严重炎细胞浸润，病变伤及粘膜层、粘膜下层和浆膜层，隐窝出现损伤。MG53A(2mg/kg)组、MG53A(4mg/kg)组、MG53A(8mg/kg)和5-ASA(200mg/kg)组较模型组小鼠减轻，炎细胞浸润减弱，病变范围明显缩小。

综上所述，结合上述实验及肠炎小鼠DAI评分、体重变化、结肠长度变化、结肠大体病理改变及结肠组织病理学损伤表现，证实MG53A小鼠急性溃疡性结肠炎模型有快速的治疗作用，且不同剂量组间呈现一定的量效关系。

实验四含MG53突变体及其相应的激动剂(MG53MA)的组合物对溃疡性结肠炎疗效实施案例

1、配置溶液：

(1)2.5％的DSS溶液：称取DSS 5g，加入200mL双蒸水，现用现配；

(4)MG53MA溶液：MG53MA冻干粉西林瓶制剂为2mg/支，将2、1和0.5mLPBS注入到瓶中，浓度分别为1、2和4mg/mL，给药体积为2mL/kg，其中，激动剂选用的为锌离子，激动剂与MG53突变体的用量比例为千分之一。

2、准备体重为18-20g的雌性C57/LB6小鼠100只，随机预留10只备用，其余90只为实验鼠。然后，将90只实验鼠随机分为正常组、模型组、5-ASA阳性对照组、MG53MA(2mg/kg)组、MG53MA(4mg/kg)组、MG53MA(8mg/kg)组，共六组，每组15只实验鼠。

3、对不同实验鼠进行分别处理

正常组：实验鼠不做任何处理；

MG53MA(2mg/kg)组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后通过直肠给予2mg/kg的MG53MA溶液，4天；

MG53MA(4mg/kg)组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后通过直肠给予4mg/kg的MG53MA溶液，4天；

MG53MA(8mg/kg)组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后通过直肠给予8mg/kg的MG53MA溶液，4天。

7、末次给药后4小时，乙醚麻醉处死实验鼠，取结肠组织，观察其外观形状、并测定其长度、拍照记录。随后将肠段纵向剖开，用4％的甲醛溶液固定，用于后续病理学检查，剩余组织冻存于-80度的冰箱中备用。

下面将对图19-24进行进一步的分析。各图中各图中##代表的是P<0.01vs正常组，*代表的是P<0.05，**代表的是P<0.01vs模型组。

图19为实验四中各溶液对实验鼠疾病活动指数(DAI)评分的影响，如图19所示，模型组小鼠DAI评分显著升高，MG53MA(2，4，8mg/kg)和5-ASA(200mg/kg)均呈明显下调作用。

MG53MA是造模结束后进行给药4天，5-ASA是边造模边给药7天，造模结束后再给药4天。作为急性溃疡性结肠炎模型评价，边造模边给药是的现有技术中的常规做法，造模7天结束后给上市的药物不会看到明显回调作用，从另一个角度说明上市药物疗效不佳，MG53MA快速起效及疗效突出

图20为实验四中实验鼠体重变化，如图20所示，5-ASA(200mg/kg)和MG53MA(2，4，8mg/kg)均可抑制结肠炎小鼠体重的减轻。

图21为实验四中实验鼠最终结肠长度；如图21所示，结肠炎小鼠结肠长度明显缩短，5-ASA(200mg/kg)和MG53MA(2，4，8mg/kg)可抑制小鼠结肠长度的缩短。

图22为实验四中实验鼠大体病理评分，结合图22及实验结果，对结肠炎小鼠结肠大体评分的影响进行进一步的分析。

MG53MA(2mg/kg)：结肠损伤情况，5只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm；7只小鼠出现结肠轻度损伤，长度扩展为0.5cm；3只小鼠肠壁出现3个溃疡部位；4只小鼠肠壁出现2个溃疡部位；腹泻情况，11只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，6只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，5只小鼠结肠轻度粘连。

MG53MA(4mg/kg)：结肠损伤情况，4只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm；6只小鼠出现结肠轻度损伤，长度扩展为0.5cm；2只小鼠肠壁出现2个溃疡部位；3只小鼠肠壁出现1个溃疡部位；腹泻情况，8只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，6只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，4只小鼠结肠轻度粘连。

MG53MA(8mg/kg)：结肠损伤情况，2只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm；3只小鼠出现结肠轻度损伤，长度扩展为0.5cm；1只小鼠肠壁出现2个溃疡部位；腹泻情况，7只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，4只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，5只小鼠结肠轻度粘连。

图23为实验四中实验鼠结肠组织病理学典型照片，图24为实验四中实验鼠结肠组织病理学评分，结合图23、图24分析可知：

模型组小鼠结肠组织出现严重炎细胞浸润，病变伤及粘膜层、粘膜下层和浆膜层，隐窝出现损伤。MG53MA(2mg/kg)组、MG53MA(4mg/kg)组、MG53MA(8mg/kg)和5-ASA(200mg/kg)组较模型组小鼠减轻，炎细胞浸润减弱，病变范围明显缩小。

综上所述，结合上述实验及肠炎小鼠DAI评分、体重变化、结肠长度变化、结肠大体病理改变及结肠组织病理学损伤表现，证实MG53MA小鼠急性溃疡性结肠炎模型有快速的治疗作用，且不同剂量组间呈现一定的量效关系。

根据上述小鼠急性溃疡性结肠炎实验结果MG53、MG53M、MG53A、MG53MA的药效强度对比如下(按照数值由小至大(疗效由强至弱)的顺序)：

实验五～实验六为克罗恩病疗效实施案例，特别的，克罗恩病动物模型病变范围累及全肠，不能通过给予灌肠制剂进行疗效评判。

实验五含MG53多肽的组合物对克罗恩病疗效实施案例

1、配置溶液：

(1)2.5％的DSS溶液：称取DSS 5g，加入200mL双蒸水，现用现配；

(2)5-ASA(200mg/kg)悬液：CMC-Na 5g，加入1L的双蒸水，配置成0.5％的CMC-Na溶液，将0.2g 5-ASA均匀的分散在10mL的0.5％CMC-Na溶液中；

(3)MG53肠溶胶囊：分别将0.2、0.6、1.8mg MG53装入小鼠专用肠溶胶囊中。

2、准备体重为18-20g的雌性C57/LB6小鼠100只，随机预留10只备用，其余90只为实验鼠。然后，将90只实验鼠随机分为正常组、模型组、5-ASA阳性对照组、MG53(8mg/kg)组、MG53(24mg/kg)组、MG53(72mg/kg)组，共六组，每组15只实验鼠。

3、对不同实验鼠进行分别处理

正常组：实验鼠不做任何处理；

模型组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后给予不含MG53的仅有辅料的小鼠肠溶胶囊，4天；

MG53(8mg/kg)组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后通过胃肠道给予0.2mg/只(小鼠按25g计算，剂量为8mg/kg，按含MG53药物剂量算)的MG53肠溶胶囊，4天；

MG53(24mg/kg)组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后通过胃肠道给予0.6mg/只(小鼠按25g计算，剂量为24mg/kg，按含MG53药物剂量算)的MG53肠溶胶囊，4天；

MG53(72mg/kg)组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后通过胃肠道给予1.8mg/只(小鼠按25g计算，剂量为24mg/kg，按含MG53药物剂量算)的MG53肠溶胶囊，4天；

8、末次给药后4小时，乙醚麻醉处死实验鼠，取结肠组织，观察其外观形状。随后将肠段纵向剖开，用4％的甲醛溶液固定，用于后续病理学检查，剩余组织冻存于-80度的冰箱中备用。

在实验期间，观察各组小鼠的生活状况，观察项目主要包括小鼠的体重、大便性状以及隐血情况，观察的同时，对疾病活动指数(DAI)进行评估，得出每组实验鼠的平均DAI值，结果记录如图25-29。

下面将对图25-29进行进一步的分析。各图中##代表的是P<0.01vs正常组，*代表的是P<0.05，**代表的是P<0.01vs模型组。

图25为实验五中各溶液对实验鼠疾病活动指数(DAI)评分的影响，如图25所示，模型组小鼠DAI评分显著升高，MG53(8，24，72mg/kg)和5-ASA(200mg/kg)均呈明显下调作用。

MG53是造模结束后进行给药4天，5-ASA是边造模边给药7天，造模结束后再给药4天。作为克罗恩病动物模型评价，边造模边给药是的现有技术中的常规做法，造模7天结束后给上市的药物不会看到明显回调作用，从另一个角度说明上市药物疗效不佳，MG53快速起效及疗效突出。

图26为实验五中实验鼠体重变化，如图26所示，5-ASA(200mg/kg)和MG53(8，24，72mg/kg)均可抑制克罗恩病小鼠体重的减轻。

图27为实验五中实验鼠大体病理评分，结合图27及实验结果，对结肠炎小鼠结肠大体评分的影响进行进一步的分析。

MG53(8mg/kg)：结肠损伤情况，5只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm；5只小鼠出现结肠轻度损伤，长度扩展为0.5cm；2只小鼠肠壁出现3个溃疡部位；3只小鼠肠壁出现2个溃疡部位；腹泻情况，10只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，5只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，4只小鼠结肠轻度粘连。

MG53(24mg/kg)：结肠损伤情况，4只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm；4只小鼠出现结肠轻度损伤，长度扩展为0.5cm；1只小鼠肠壁出现2个溃疡部位；3只小鼠肠壁出现1个溃疡部位；腹泻情况，8只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，4只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，4只小鼠结肠轻度粘连。

MG53(72mg/kg)：结肠损伤情况，3只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm；3只小鼠出现结肠轻度损伤，长度扩展为0.5cm；1只小鼠肠壁出现2个溃疡部位；腹泻情况，7只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，4只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，5只小鼠结肠轻度粘连。

图28为实验五中实验鼠结肠组织病理学典型照片，图29为实验五中实验鼠结肠组织病理学评分，结合图28、图29分析可知：

综上所述，结合上述实验及肠炎小鼠DAI评分、体重变化、结肠大体病理改变及结肠组织病理学损伤表现，证实MG53对小鼠克罗恩病模型有快速的治疗作用，且不同剂量组间呈现一定的量效关系。

实验六MG53突变体多肽对克罗恩病疗效实施案例

1、配置溶液：

(1)2.5％的DSS溶液：称取DSS 5g，加入200mL双蒸水，现用现配；

(3)MG53M肠溶胶囊：分别将0.2、0.6、1.8mg MG53M装入小鼠专用肠溶胶囊中。

2、准备体重为18-20g的雌性C57/LB6小鼠100只，随机预留10只备用，其余90只为实验鼠。然后，将90只实验鼠随机分为正常组、模型组、5-ASA阳性对照组、MG53M(8mg/kg)组、MG53M(24mg/kg)组、MG53M(72mg/kg)组，共六组，每组15只实验鼠。

3、对不同实验鼠进行分别处理

正常组：实验鼠不做任何处理；

MG53M(8mg/kg)组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后通过胃肠道给予0.2mg/只(小鼠按25g计算，剂量为8mg/kg，按含MG53M药物剂量算)的MG53M肠溶胶囊，4天；

MG53M(24mg/kg)组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后通过胃肠道给予0.6mg/只(小鼠按25g计算，剂量为24mg/kg，按含MG53M药物剂量算)的MG53M肠溶胶囊，4天；

MG53M(72mg/kg)组：实验鼠灌胃给予2.5％的DSS溶液，7天；造模结束后通过胃肠道给予1.8mg/只(小鼠按25g计算，剂量为24mg/kg，按含MG53M药物剂量算)的MG53M肠溶胶囊，4天；

9、末次给药后4小时，乙醚麻醉处死实验鼠，取结肠组织，观察其外观形状。随后将肠段纵向剖开，用4％的甲醛溶液固定，用于后续病理学检查，剩余组织冻存于-80度的冰箱中备用。

在实验期间，观察各组小鼠的生活状况，观察项目主要包括小鼠的体重、大便性状以及隐血情况，观察的同时，对疾病活动指数(DAI)进行评估，得出每组实验鼠的平均DAI值，结果记录如图30-34。

下面将对图30-34进行进一步的分析。各图中##代表的是P<0.01vs正常组，*代表的是P<0.05，**代表的是P<0.01vs模型组。

图30为实验六中各溶液对实验鼠疾病活动指数(DAI)评分的影响，如图30所示，模型组小鼠DAI评分显著升高，MG53M(8，24，72mg/kg)和5-ASA(200mg/kg)均呈明显下调作用。

MG53M是造模结束后进行给药4天，5-ASA是边造模边给药7天，造模结束后再给药4天。作为克罗恩病动物模型评价，边造模边给药是的现有技术中的常规做法，造模7天结束后给上市的药物不会看到明显回调作用，从另一个角度说明上市药物疗效不佳，MG53M快速起效及疗效突出。

图31为实验六中实验鼠体重变化，如图31所示，5-ASA(200mg/kg)和MG53M(8，24，72mg/kg)均可抑制克罗恩病小鼠体重的减轻。

图32为实验六中实验鼠大体病理评分，结合图32及实验结果，对结肠炎小鼠结肠大体评分的影响进行进一步的分析。

MG53M(8mg/kg)：结肠损伤情况，5只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm；4只小鼠出现结肠轻度损伤，长度扩展为0.5cm；2只小鼠肠壁出现3个溃疡部位；3只小鼠肠壁出现2个溃疡部位；腹泻情况，10只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，5只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，4只小鼠结肠轻度粘连。

MG53M(24mg/kg)：结肠损伤情况，4只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm；4只小鼠出现结肠轻度损伤，长度扩展为0.5cm；1只小鼠肠壁出现2个溃疡部位；3只小鼠肠壁出现1个溃疡部位；腹泻情况，7只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，4只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，4只小鼠结肠轻度粘连。

MG53M(72mg/kg)：结肠损伤情况，3只小鼠出现结肠重度损伤，长度扩展为1cm；3只小鼠出现结肠轻度损伤，长度扩展为0.5cm；1只小鼠肠壁出现2个溃疡部位；腹泻情况，7只小鼠出现腹泻症状；肠道粘连，3只小鼠结肠与腹腔组织重度粘连，5只小鼠结肠轻度粘连。

图33为实验六中实验鼠结肠组织病理学典型照片，图34为实验六中实验鼠结肠组织病理学评分，结合图33、图34分析可知：

综上所述，结合上述实验及肠炎小鼠DAI评分、体重变化、结肠大体病理改变及结肠组织病理学损伤表现，证实MG53M对小鼠克罗恩病模型有快速的治疗作用，且不同剂量组间呈现一定的量效关系。

根据上述小鼠克罗恩病模型实验结果MG53、MG53M、MG53A、MG53MA的药效强度对比如下(按照数值由小至大(疗效由强至弱)的顺序)，MG53与MG53M药效强度无差别：

为了进一步实现本发明的技术方案，上述实验中仅公开了灌肠剂用药量分别为2mg/kg组、4mg/kg组和8mg/kg组及肠溶胶囊8mg/kg组、24mg/kg组和72mg/kg组，但是经过发明人的测定，用药量不仅限于以上三组情况，当用灌肠剂药量低于2mg/kg及肠溶胶囊药量低于8mg/kg时，其作用效果较不明显，因此，对于用药量限定为灌肠剂不低于2mg/kg，肠溶制剂不低于8mg/kg。

为了进一步证明本发明的技术效果，发明人进行了安全性探索性的试验，给予外源性的MG53及MG53M单次给药、连续7天静脉注射(i.v.)12、24mg/kg均不会引起大鼠血常规、血生化、体重和行为学、组织病理的变化。从成药性的角度分析静脉注射安全性剂量24mg/kg大于灌肠剂及肠溶胶囊的换算剂量，安全性时限>＝1w(药效时限为4天)，因此不影响MG53及MG53M用于炎症性肠病的治疗的成药性。

综上可知，本发明的研究结果显示，与现有的治疗炎症性肠病的药物相比，MG53的组合物/其突变体的组合物在保护肠道粘膜的机制有所不同，因而在使用本发明后能观察到明显的效果，本发明远远优于现有溃疡性结肠炎最新指南推荐的药物，见效更加迅速且效果突出，为溃疡性结肠炎提供了一种新的药物选择。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，并非对本发明作任何形式上的限制。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。

序列表

<110> 慎东

<120> 含MG53/其突变体的组合物在制备炎症性肠病药物的应用

<160> 14

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 477

<212> PRT

<213> human

<400> 1

Met Ser Ala Ala Pro Gly Leu Leu His Gln Glu Leu Ser Cys Pro Leu

1 5 10 15

Cys Leu Gln Leu Phe Asp Ala Pro Val Thr Ala Glu Cys Gly His Ser

20 25 30

Phe Cys Arg Ala Cys Leu Gly Arg Val Ala Gly Glu Pro Ala Ala Asp

35 40 45

Gly Thr Val Leu Cys Pro Cys Cys Gln Ala Pro Thr Arg Pro Gln Ala

50 55 60

Leu Ser Thr Asn Leu Gln Leu Ala Arg Leu Val Glu Gly Leu Ala Gln

65 70 75 80

Val Pro Gln Gly His Cys Glu Glu His Leu Asp Pro Leu Ser Ile Tyr

85 90 95

Cys Glu Gln Asp Arg Ala Leu Val Cys Gly Val Cys Ala Ser Leu Gly

100 105 110

Ser His Arg Gly His Arg Leu Leu Pro Ala Ala Glu Ala His Ala Arg

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Leu Lys Thr Gln Leu Pro Gln Gln Lys Leu Gln Leu Gln Glu Ala Cys

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Met Arg Lys Glu Lys Ser Val Ala Val Leu Glu His Gln Leu Val Glu

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Val Glu Glu Thr Val Arg Gln Phe Arg Gly Ala Val Gly Glu Gln Leu

165 170 175

Gly Lys Met Arg Val Phe Leu Ala Ala Leu Glu Gly Ser Leu Asp Cys

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Glu Ala Glu Arg Val Arg Gly Glu Ala Gly Val Ala Leu Arg Arg Glu

195 200 205

Leu Gly Ser Leu Asn Ser Tyr Leu Glu Gln Leu Arg Gln Met Glu Lys

210 215 220

Val Leu Glu Glu Val Ala Asp Lys Pro Gln Thr Glu Phe Leu Met Lys

225 230 235 240

Tyr Cys Leu Val Thr Ser Arg Leu Gln Lys Ile Leu Ala Glu Ser Pro

245 250 255

Pro Pro Ala Arg Leu Asp Ile Gln Leu Pro Ile Ile Ser Asp Asp Phe

260 265 270

Lys Phe Gln Val Trp Arg Lys Met Phe Arg Ala Leu Met Pro Ala Leu

275 280 285

Glu Glu Leu Thr Phe Asp Pro Ser Ser Ala His Pro Ser Leu Val Val

290 295 300

Ser Ser Ser Gly Arg Arg Val Glu Cys Ser Glu Gln Lys Ala Pro Pro

305 310 315 320

Ala Gly Glu Asp Pro Arg Gln Phe Asp Lys Ala Val Ala Val Val Ala

325 330 335

His Gln Gln Leu Ser Glu Gly Glu His Tyr Trp Glu Val Asp Val Gly

340 345 350

Asp Lys Pro Arg Trp Ala Leu Gly Val Ile Ala Ala Glu Ala Pro Arg

355 360 365

Arg Gly Arg Leu His Ala Val Pro Ser Gln Gly Leu Trp Leu Leu Gly

370 375 380

Leu Arg Glu Gly Lys Ile Leu Glu Ala His Val Glu Ala Lys Glu Pro

385 390 395 400

Arg Ala Leu Arg Ser Pro Glu Arg Arg Pro Thr Arg Ile Gly Leu Tyr

405 410 415

Leu Ser Phe Gly Asp Gly Val Leu Ser Phe Tyr Asp Ala Ser Asp Ala

420 425 430

Asp Ala Leu Val Pro Leu Phe Ala Phe His Glu Arg Leu Pro Arg Pro

435 440 445

Val Tyr Pro Phe Phe Asp Val Cys Trp His Asp Lys Gly Lys Asn Ala

450 455 460

Gln Pro Leu Leu Leu Val Gly Pro Glu Gly Ala Glu Ala

465 470 475

<210> 2

<211> 1434

<212> DNA

<213> human

<400> 2

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cgcgcgctgg tgtgcggagt gtgcgcctca ctcggctcgc accgcggtca tcgcctcctg 360

cctgccgccg aggcccacgc acgcctcaag acacagctgc cacagcagaa actgcagctg 420

caggaggcat gcatgcgtaa ggagaagagt gtggctgtgc tggagcatca gctggtggag 480

gtggaggaga cagtgcgtca gttccggggg gccgtggggg agcagctggg caagatgcgg 540

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<210> 3

<211> 477

<212> PRT

<213> 小家鼠 (Mus musculus)

<400> 3

Met Ser Ala Ala Pro Gly Leu Leu Arg Gln Glu Leu Ser Cys Pro Leu

1 5 10 15

Cys Leu Gln Leu Phe Asp Ala Pro Val Thr Ala Glu Cys Gly His Ser

20 25 30

Phe Cys Arg Ala Cys Leu Ile Arg Val Ala Gly Glu Pro Ala Ala Asp

35 40 45

Gly Thr Val Ala Cys Pro Cys Cys Gln Ala Pro Thr Arg Pro Gln Ala

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Leu Ser Thr Asn Leu Gln Leu Ser Arg Leu Val Glu Gly Leu Ala Gln

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Ser His Arg Gly His Arg Leu Leu Pro Ala Ala Glu Ala Gln Ala Arg

115 120 125

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Met Arg Lys Glu Lys Thr Val Ala Val Leu Glu His Gln Leu Val Glu

145 150 155 160

Val Glu Glu Thr Val Arg Gln Phe Arg Gly Ala Val Gly Glu Gln Leu

165 170 175

Gly Lys Met Arg Met Phe Leu Ala Ala Leu Glu Ser Ser Leu Asp Arg

180 185 190

Glu Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Ala Gly Val Ala Leu Arg Arg Glu

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Leu Ser Ser Leu Asn Ser Tyr Leu Glu Gln Leu Arg Gln Met Glu Lys

210 215 220

Val Leu Glu Glu Val Ala Asp Lys Pro Gln Thr Glu Phe Leu Met Lys

225 230 235 240

Phe Cys Leu Val Thr Ser Arg Leu Gln Lys Ile Leu Ser Glu Ser Pro

245 250 255

Pro Pro Ala Arg Leu Asp Ile Gln Leu Pro Val Ile Ser Asp Asp Phe

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Lys Phe Gln Val Trp Lys Lys Met Phe Arg Ala Leu Met Pro Ala Leu

275 280 285

Glu Glu Leu Thr Phe Asp Pro Ser Ser Ala His Pro Ser Leu Val Val

290 295 300

Ser Ser Ser Gly Arg Arg Val Glu Cys Ser Asp Gln Lys Ala Pro Pro

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Ala Gly Glu Asp Thr Arg Gln Phe Asp Lys Ala Val Ala Val Val Ala

325 330 335

Gln Gln Leu Leu Ser Gln Gly Glu His Tyr Trp Glu Val Glu Val Gly

340 345 350

Asp Lys Pro Arg Trp Ala Leu Gly Val Met Ala Ala Asp Ala Ser Arg

355 360 365

Arg Gly Arg Leu His Ala Val Pro Ser Gln Gly Leu Trp Leu Leu Gly

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Leu Arg Asp Gly Lys Ile Leu Glu Ala His Val Glu Ala Lys Glu Pro

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Arg Ala Leu Arg Thr Pro Glu Arg Pro Pro Ala Arg Ile Gly Leu Tyr

405 410 415

Leu Ser Phe Ala Asp Gly Val Leu Ala Phe Tyr Asp Ala Ser Asn Pro

420 425 430

Asp Val Leu Thr Pro Ile Phe Ser Phe His Glu Arg Leu Pro Gly Pro

435 440 445

Val Tyr Pro Ile Phe Asp Val Cys Trp His Asp Lys Gly Lys Asn Ala

450 455 460

Gln Pro Leu Leu Leu Val Gly Pro Glu Gln Glu Gln Ala

465 470 475

<210> 4

<211> 1434

<212> DNA

<213> 小家鼠 (Mus musculus)

<400> 4

atgtcggctg cacccggcct tctgcgtcag gaactgtcct gcccactgtg cttgcagctg 60

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<210> 5

<211> 477

<212> PRT

<213> 欧洲野兔 (Oryctolagus cuniculus)

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Met Ser Ala Ala Pro Gly Leu Leu His Gln Glu Leu Ser Cys Pro Leu

1 5 10 15

Cys Leu Gln Leu Phe Asp Ala Pro Val Thr Ala Glu Cys Gly His Ser

20 25 30

Phe Cys Arg Ala Cys Leu Ser Arg Val Ala Gly Glu Pro Ala Ala Asp

35 40 45

Gly Thr Val Asn Cys Pro Cys Cys Gln Ala Pro Thr Arg Pro Gln Ala

50 55 60

Leu Ser Thr Asn Leu Gln Leu Ala Arg Leu Val Glu Gly Leu Ala Gln

65 70 75 80

Val Pro Gln Gly His Cys Glu Glu His Leu Asp Pro Leu Ser Ile Tyr

85 90 95

Cys Glu Gln Asp Arg Val Leu Val Cys Gly Val Cys Ala Ser Leu Gly

100 105 110

Ser His Arg Gly His Arg Leu Leu Pro Ala Ala Glu Ala His Ser Arg

115 120 125

Leu Lys Thr Gln Leu Pro Gln Gln Lys Leu Gln Leu Gln Glu Ala Ser

130 135 140

Met Arg Lys Glu Lys Ser Val Ala Val Leu Glu His Gln Leu Thr Glu

145 150 155 160

Val Glu Glu Thr Val Arg Gln Phe Arg Gly Ala Val Gly Glu Gln Leu

165 170 175

Gly Lys Met Arg Val Phe Leu Ala Ala Leu Glu Gly Ser Leu Asp Arg

180 185 190

Glu Ala Glu Arg Val Arg Ser Glu Ala Gly Val Ala Leu Arg Arg Glu

195 200 205

Leu Gly Gly Leu His Ser Tyr Leu Glu Gln Leu Arg Gln Met Glu Lys

210 215 220

Val Leu Glu Glu Val Ala Asp Lys Pro Gln Thr Glu Phe Leu Met Lys

225 230 235 240

Tyr Cys Leu Val Thr Ser Arg Leu Gln Lys Ile Leu Ala Glu Ser Pro

245 250 255

Pro Pro Ala Arg Leu Asp Ile Gln Leu Pro Ile Ile Ser Asp Asp Phe

260 265 270

Lys Phe Gln Val Trp Arg Lys Met Phe Arg Ala Leu Met Pro Ala Leu

275 280 285

Glu Glu Leu Thr Phe Asp Pro Ser Ser Ala His Pro Ser Leu Val Val

290 295 300

Ser Pro Thr Gly Arg Arg Val Glu Cys Ser Glu Gln Lys Ala Pro Pro

305 310 315 320

Ala Gly Asp Asp Ala Arg Gln Phe Asp Lys Ala Val Ala Val Val Ala

325 330 335

Gln Gln Leu Leu Ser Asp Gly Glu His Tyr Trp Glu Val Glu Val Gly

340 345 350

Asp Lys Pro Arg Trp Ala Leu Gly Val Met Ala Ser Glu Ala Ser Arg

355 360 365

Arg Gly Arg Leu His Ala Val Pro Ser Gln Gly Leu Trp Leu Leu Gly

370 375 380

Leu Arg Asp Gly Lys Thr Leu Glu Ala His Val Glu Ala Lys Glu Pro

385 390 395 400

Arg Ala Leu Arg Thr Pro Glu Arg Arg Pro Thr Arg Leu Gly Leu Tyr

405 410 415

Leu Ser Phe Gly Asp Gly Val Leu Ala Phe Tyr Asp Ala Ser Asp Ala

420 425 430

Asp Ala Leu Glu Leu Leu Phe Ala Phe Arg Glu Arg Leu Pro Gly Pro

435 440 445

Val Tyr Pro Phe Phe Asp Val Cys Trp His Asp Lys Gly Lys Asn Ala

450 455 460

Gln Pro Leu Leu Leu Val Gly Pro Asp Gly Gln Glu Ala

465 470 475

<210> 6

<211> 1434

<212> DNA

<213> 欧洲野兔 (Oryctolagus cuniculus)

<400> 6

atgtcggccg cgcccggcct cctgcaccag gagctgtctt gcccgctgtg cctgcagctg 60

ttcgacgcgc ccgtgacagc cgagtgcggc cacagtttct gccgcgcctg cctgagccgc 120

gtggcggggg agccggcggc cgatggcacc gtgaactgcc cgtgctgcca ggcgcccacg 180

cggccgcagg cgctcagcac caacctgcag ctggcgcgcc tggtggaggg gctggcgcag 240

gtgccgcagg gccactgcga ggagcacctg gacccgctga gcatctactg cgagcaggac 300

cgcgttctcg tgtgcggcgt gtgcgcctcg ctcggctcgc accgcggcca ccgcctgctg 360

cccgccgccg aggcccactc gcgtctcaag acgcagctgc cccagcagaa gctgcagctg 420

caggaggcga gcatgcgcaa ggagaagagc gtggccgtgc tggagcacca gctcacggag 480

gtggaggaga cagtgcgtca gttccggggg gcagtggggg agcagctggg caagatgcgg 540

gtgttcctgg ccgccctgga gggctccctg gaccgcgagg cagaacgtgt gcggagcgag 600

gcgggggtgg ccttgcggcg ggagctgggg ggcctccact cgtacctgga gcagctgcgg 660

cagatggaga aggtgttgga ggaggtggct gacaagccac agaccgagtt ccttatgaaa 720

tattgcctgg tgaccagcag gctgcagaag atcctggcgg agtcgccacc acctgctcgt 780

ctggacatcc agctgcccat catttcagat gacttcaaat tccaggtgtg gaggaagatg 840

ttccgggctc tgatgccagc gctggaggag ctgacctttg acccgagctc cgcgcacccg 900

agcctcgtgg tgtcacccac gggccgccga gtggagtgct cggagcagaa ggcgccgccc 960

gccggggacg acgcgcgcca gttcgacaag gctgtggccg tggtggcgca gcagctgctg 1020

tccgacggcg agcactactg ggaggtggag gtgggcgaca agccgcgctg ggcgctgggc 1080

gtgatggcct ccgaggcgag ccgccgtggc cggctgcacg ccgtgccctc acagggtttg 1140

tggctgctgg ggctgcgcga cggcaagacc ctggaggcgc acgtggaggc caaggagccg 1200

cgcgcgctgc gcaccccgga gcggcggccc acgcgcctcg gcctctacct cagcttcggc 1260

gatggcgtgc tcgccttcta cgacgccagc gacgccgacg cgctcgagct gctgtttgct 1320

ttccgcgagc gcctgcccgg gcccgtgtac cccttcttcg acgtgtgctg gcatgacaag 1380

ggcaagaatg cgcagccgct gctgctcgtg gggccggatg gccaggaggc ctga 1434

<210> 7

<211> 477

<212> PRT

<213> 负鼠 (Didelphis sp.)

<400> 7

Met Ser Gly Ala Pro Ala Leu Met Gln Gly Met Tyr Gln Asp Leu Ser

1 5 10 15

Cys Pro Leu Cys Leu Lys Leu Phe Asp Ala Pro Ile Thr Ala Glu Cys

20 25 30

Gly His Ser Phe Cys Arg Asn Cys Leu Leu Arg Leu Ala Pro Asp Pro

35 40 45

Gln Ala Gly Thr Val Leu Cys Pro Ser Cys Gln Ala Pro Thr Lys Pro

50 55 60

Asp Gly Leu Asn Thr Asn Gln Gln Leu Ala Arg Leu Val Glu Ser Leu

65 70 75 80

Ala Gln Val Pro Gln Gly His Cys Glu Glu His Leu Asp Pro Leu Ser

85 90 95

Val Tyr Cys Glu Gln Asp Arg Ala Leu Ile Cys Gly Val Cys Ala Ser

100 105 110

Leu Gly Lys His Arg Gly His Ser Val Val Thr Ala Ala Glu Ala His

115 120 125

Gln Arg Met Lys Lys Gln Leu Pro Gln Gln Arg Leu Gln Leu Gln Glu

130 135 140

Ala Cys Met Arg Lys Glu Lys Thr Val Ala Leu Leu Asp Arg Gln Leu

145 150 155 160

Ala Glu Val Glu Glu Thr Val Arg Gln Phe Gln Arg Ala Val Gly Glu

165 170 175

Gln Leu Gly Val Met Arg Ala Phe Leu Ala Ala Leu Glu Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Lys Glu Ala Glu Arg Val Thr Gly Glu Ala Gly Thr Ala Leu Lys

195 200 205

Ala Glu Arg Arg Ile Val Thr Ser Tyr Leu Asp Gln Leu Gln Gln Met

210 215 220

Glu Lys Val Leu Asp Glu Val Thr Asp Gln Pro Gln Thr Glu Phe Leu

225 230 235 240

Arg Lys Tyr Cys Leu Val Ile Ser Arg Leu Gln Lys Ile Leu Ala Glu

245 250 255

Ser Pro Pro Ala Ala Arg Leu Asp Ile Gln Leu Pro Ile Ile Ser Asp

260 265 270

Asp Phe Lys Phe Gln Val Trp Arg Lys Met Phe Arg Ala Leu Met Pro

275 280 285

Gly Met Glu Val Leu Thr Phe Asp Pro Ala Ser Ala His Pro Ser Leu

290 295 300

Leu Val Ser Pro Ser Gly Arg Arg Val Glu Cys Val Glu Gln Lys Ala

305 310 315 320

Pro Pro Ala Gly Asp Asp Pro Gln Gln Phe Asp Lys Ala Val Ala Leu

325 330 335

Val Ala Lys Gln Gln Leu Ser Glu Gly Glu His Tyr Trp Glu Val Glu

340 345 350

Val Gly Asp Lys Pro Arg Trp Gly Leu Gly Leu Ile Ser Ala Asp Val

355 360 365

Ser Arg Arg Gly Lys Leu His Pro Thr Pro Ser Gln Gly Phe Trp Met

370 375 380

Leu Gly Leu Arg Glu Gly Lys Val Tyr Glu Ala His Val Glu Ser Lys

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Glu Pro Lys Val Leu Lys Val Asp Gly Arg Pro Ser Arg Ile Gly Leu

405 410 415

Tyr Leu Ser Phe Arg Asp Gly Val Leu Ser Phe Tyr Asp Ala Ser Asp

420 425 430

Leu Asp Asn Leu Leu Pro Leu Tyr Ala Phe His Glu Arg Leu Pro Gly

435 440 445

Pro Val Tyr Pro Phe Phe Asp Val Cys Trp His Asp Lys Gly Lys Asn

450 455 460

Ala Gln Pro Leu Leu Leu Leu Gly Pro Asp Gly Glu Gln

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<210> 8

<211> 477

<212> PRT

<213> 狼 (Canis sp.)

<400> 8

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Cys Leu Gln Leu Phe Asp Ala Pro Val Thr Ala Glu Cys Gly His Ser

20 25 30

Phe Cys Arg Ala Cys Leu Ser Arg Val Ala Gly Glu Pro Ala Ala Asp

35 40 45

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50 55 60

Leu Ser Thr Asn Gln Gln Leu Ala Arg Leu Val Glu Gly Leu Ala Gln

65 70 75 80

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Ser His Arg Gly His Arg Leu Leu Pro Ala Ala Glu Ala His Ala Arg

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Met Arg Lys Glu Lys Ser Val Ala Leu Leu Glu His Gln Leu Met Glu

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Val Glu Glu Met Val Arg Gln Phe Arg Gly Ala Val Gly Glu Gln Leu

165 170 175

Gly Lys Met Arg Val Phe Leu Ala Ala Leu Glu Gly Ser Leu Asp Arg

180 185 190

Glu Ala Glu Arg Val Arg Gly Glu Ala Gly Val Ala Leu Arg Arg Glu

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Leu Gly Ser Leu Asn Ser Tyr Leu Glu Gln Leu Arg Gln Met Glu Lys

210 215 220

Val Leu Glu Glu Val Ala Asp Lys Pro Gln Thr Glu Phe Leu Met Lys

225 230 235 240

Tyr Cys Leu Val Thr Ser Arg Leu Gln Lys Ile Leu Ala Glu Ser Pro

245 250 255

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Ala Gly Glu Asp Pro Cys Gln Phe Asp Lys Ala Val Ala Val Val Ala

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Gln Gln Val Leu Ser Asp Gly Glu His Tyr Trp Glu Val Gln Val Gly

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Glu Lys Pro Arg Trp Ala Leu Gly Val Ile Ala Ala Gln Ala Ser Arg

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Arg Ala Leu Arg Thr Pro Glu Arg Arg Pro Thr Arg Ile Gly Ile Tyr

405 410 415

Leu Ser Phe Gly Asp Gly Val Leu Ser Phe Tyr Asp Ala Ser Asp Pro

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Asp Ala Leu Glu Leu Leu Phe Ala Phe His Glu Arg Leu Pro Gly Pro

435 440 445

Val Tyr Pro Phe Phe Asp Val Cys Trp His Asp Lys Gly Lys Asn Ala

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Gln Pro Leu Leu Leu Val Gly Pro Asp Gly Glu Glu Ala

465 470 475

<210> 9

<211> 477

<212> PRT

<213> 黑猩猩 (Pan troglodytes)

<400> 9

Met Ser Ala Ala Pro Gly Leu Leu His Gln Glu Leu Ser Cys Pro Leu

1 5 10 15

Cys Leu Gln Leu Phe Asp Ala Pro Val Thr Ala Glu Cys Gly His Ser

20 25 30

Phe Cys Arg Ala Cys Leu Gly Arg Val Ala Gly Glu Pro Ala Ala Asp

35 40 45

Gly Thr Val Leu Cys Pro Cys Cys Gln Ala Pro Thr Arg Pro Gln Ala

50 55 60

Leu Ser Thr Asn Leu Gln Leu Ala Arg Leu Val Glu Gly Leu Ala Gln

65 70 75 80

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85 90 95

Cys Glu Gln Asp Arg Ala Leu Val Cys Gly Val Cys Ala Ser Leu Gly

100 105 110

Ser His Arg Gly His Arg Leu Leu Pro Ala Ala Glu Ala His Ala Arg

115 120 125

Leu Lys Thr Gln Leu Pro Gln Gln Lys Leu Gln Leu Gln Glu Ala Cys

130 135 140

Met Arg Lys Glu Lys Ser Val Ala Val Leu Glu His Gln Leu Val Glu

145 150 155 160

Val Glu Glu Thr Val Arg Gln Phe Arg Gly Ala Val Gly Glu Gln Leu

165 170 175

Gly Lys Met Arg Val Phe Leu Ala Ala Leu Glu Gly Ser Leu Asp Arg

180 185 190

Glu Ala Glu Arg Val Arg Gly Glu Ala Gly Val Ala Leu Arg Arg Glu

195 200 205

Leu Gly Ser Leu Asn Ser Tyr Leu Glu Gln Leu Arg Gln Met Glu Lys

210 215 220

Val Leu Glu Glu Val Ala Asp Lys Pro Gln Thr Glu Phe Leu Met Lys

225 230 235 240

Tyr Cys Leu Val Thr Ser Arg Leu Gln Lys Ile Leu Ala Glu Ser Pro

245 250 255

Pro Pro Ala Arg Leu Asp Ile Gln Leu Pro Ile Ile Ser Asp Asp Phe

260 265 270

Lys Phe Gln Val Trp Arg Lys Met Phe Arg Ala Leu Met Pro Ala Leu

275 280 285

Glu Glu Leu Thr Phe Asp Pro Ser Ser Ala His Pro Ser Leu Val Val

290 295 300

Ser Ser Ser Gly Arg Arg Val Glu Cys Ser Glu Gln Lys Ala Pro Pro

305 310 315 320

Ala Gly Glu Asp Pro Arg Gln Phe Asp Lys Ala Val Ala Val Val Ala

325 330 335

His Gln Gln Leu Ser Glu Gly Glu His Tyr Trp Glu Val Asp Val Gly

340 345 350

Asp Lys Pro Arg Trp Ala Leu Gly Val Ile Ala Ala Glu Ala Pro Arg

355 360 365

Arg Gly Arg Leu His Ala Val Pro Ser Gln Gly Leu Trp Leu Leu Gly

370 375 380

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385 390 395 400

Arg Ala Leu Arg Ser Pro Glu Arg Arg Pro Thr Arg Ile Gly Leu Tyr

405 410 415

Leu Ser Phe Gly Asp Gly Val Leu Ser Phe Tyr Asp Ala Ser Asp Ala

420 425 430

Asp Ala Leu Val Pro Leu Phe Ala Phe His Glu Arg Leu Pro Arg Pro

435 440 445

Val Tyr Pro Phe Phe Asp Val Cys Trp His Asp Lys Gly Lys Asn Ala

450 455 460

Gln Pro Leu Leu Leu Val Gly Pro Glu Gly Ala Glu Ala

465 470 475

<210> 10

<211> 477

<212> PRT

<213> 猕猴 (Macaca mulatta)

<400> 10

Met Ser Ala Ala Pro Gly Leu Leu His Gln Glu Leu Ser Cys Pro Leu

1 5 10 15

Cys Leu Gln Leu Phe Asp Ala Pro Val Thr Ala Glu Cys Gly His Ser

20 25 30

Phe Cys Arg Ala Cys Leu Gly Arg Val Ala Gly Glu Pro Ala Ala Asp

35 40 45

Gly Thr Val Leu Cys Pro Cys Cys Gln Ala Pro Thr Arg Pro Gln Ala

50 55 60

Leu Ser Thr Asn Leu Gln Leu Ala Arg Leu Val Glu Gly Leu Ala Gln

65 70 75 80

Val Pro Gln Gly His Cys Glu Glu His Leu Asp Pro Leu Ser Ile Tyr

85 90 95

Cys Glu Gln Asp Arg Ala Leu Val Cys Gly Val Cys Ala Ser Leu Gly

100 105 110

Ser His Arg Gly His Arg Leu Leu Pro Ala Ala Glu Ala His Ala Arg

115 120 125

Leu Lys Thr Gln Leu Pro Gln Gln Lys Leu Gln Leu Gln Glu Ala Cys

130 135 140

Met Arg Lys Glu Lys Ser Val Ala Val Leu Glu His Gln Leu Val Glu

145 150 155 160

Val Glu Glu Thr Val Arg Gln Phe Arg Gly Ala Val Gly Glu Gln Leu

165 170 175

Gly Lys Met Arg Val Phe Leu Ala Ala Leu Glu Gly Ser Leu Asp Arg

180 185 190

Glu Ala Glu Arg Val Arg Gly Glu Ala Gly Val Ala Leu Arg Arg Glu

195 200 205

Leu Gly Ser Leu Asn Ser Tyr Leu Glu Gln Leu Arg Gln Met Glu Lys

210 215 220

Val Leu Glu Glu Val Ala Asp Lys Pro Gln Thr Glu Phe Leu Met Lys

225 230 235 240

Tyr Cys Leu Val Thr Ser Arg Leu Gln Lys Ile Leu Ala Glu Ser Pro

245 250 255

Pro Pro Ala Arg Leu Asp Ile Gln Leu Pro Ile Ile Ser Asp Asp Phe

260 265 270

Lys Phe Gln Val Trp Arg Lys Met Phe Arg Ala Leu Met Pro Ala Leu

275 280 285

Glu Glu Leu Thr Phe Asp Pro Ser Ser Ala His Pro Ser Leu Val Val

290 295 300

Ser Ser Ser Gly Arg Arg Val Glu Cys Ser Glu Gln Lys Ala Pro Pro

305 310 315 320

Ala Gly Glu Asp Pro Arg Gln Phe Asp Lys Ala Val Ala Val Val Ala

325 330 335

His Gln Gln Leu Ser Glu Gly Glu His Tyr Trp Glu Val Glu Val Gly

340 345 350

Asp Lys Pro Arg Trp Ala Leu Gly Val Ile Ala Ala Glu Gly Pro Arg

355 360 365

Arg Gly Arg Leu His Ala Val Pro Ser Gln Gly Leu Trp Leu Leu Gly

370 375 380

Leu Arg Glu Gly Lys Ile Leu Glu Ala His Val Glu Ala Lys Glu Pro

385 390 395 400

Arg Ala Leu Arg Ser Pro Glu Arg Arg Pro Thr Arg Ile Gly Leu Tyr

405 410 415

Leu Ser Phe Gly Asp Gly Val Leu Ser Phe Tyr Asp Ala Ser Asp Ala

420 425 430

Asp Ala Leu Val Pro Leu Phe Ala Phe His Glu Arg Leu Pro Gly Pro

435 440 445

Val Tyr Pro Phe Phe Asp Val Cys Trp His Asp Lys Gly Lys Asn Ser

450 455 460

Gln Pro Leu Leu Leu Val Gly Ser Glu Gly Ala Glu Ala

465 470 475

<210> 11

<211> 482

<212> PRT

<213> Bos sp.

<400> 11

Met Ser Ala Ala Pro Gly Leu Leu His Gln Glu Leu Ser Cys Pro Leu

1 5 10 15

Cys Leu Gln Leu Phe Asp Ala Pro Val Thr Ala Glu Cys Gly His Ser

20 25 30

Phe Cys Arg Ala Cys Leu Ser Arg Val Ala Gly Glu Pro Ala Ala Asp

35 40 45

Gly Thr Val Leu Cys Pro Ser Cys Gln Ala Pro Thr Arg Pro Gln Ala

50 55 60

Leu Ser Thr Asn Leu Gln Leu Ala Arg Leu Val Glu Gly Leu Ala Gln

65 70 75 80

Val Pro Gln Gly His Cys Glu Glu His Leu Asp Pro Leu Ser Ile Tyr

85 90 95

Cys Glu Gln Asp Arg Ala Leu Val Cys Gly Val Cys Ala Ser Leu Gly

100 105 110

Ser His Arg Gly His Arg Leu Leu Pro Ala Ala Glu Ala His Ala Arg

115 120 125

Leu Lys Thr Gln Leu Pro Gln Gln Lys Met Gln Leu Gln Glu Ala Cys

130 135 140

Met Arg Lys Glu Lys Ser Val Ala Leu Leu Glu His Gln Leu Leu Glu

145 150 155 160

Val Glu Glu Thr Val Arg Gln Phe Arg Gly Ala Val Gly Glu Gln Leu

165 170 175

Gly Lys Met Arg Leu Phe Leu Ala Ala Leu Glu Gly Ser Leu Asp Arg

180 185 190

Glu Ala Glu Arg Val Arg Gly Glu Ala Gly Val Ala Leu Arg Arg Glu

195 200 205

Leu Gly Ser Leu Asn Ser Tyr Leu Glu Gln Leu Arg Gln Met Glu Lys

210 215 220

Val Leu Glu Glu Val Ala Asp Lys Pro Gln Thr Glu Phe Leu Met Lys

225 230 235 240

Tyr Cys Leu Val Thr Ser Arg Leu Gln Lys Ile Leu Ala Glu Ser Pro

245 250 255

Pro Pro Ala Arg Leu Asp Ile Gln Leu Pro Ile Ile Ser Asp Asp Phe

260 265 270

Lys Phe Gln Val Trp Arg Lys Met Phe Arg Ala Leu Met Pro Ala Arg

275 280 285

Gln Glu Leu Thr Phe Asp Pro Ser Thr Ala His Pro Ser Leu Val Leu

290 295 300

Ser Asn Ser Gly Arg Cys Val Glu Cys Ser Glu Gln Lys Ala Pro Pro

305 310 315 320

Ala Gly Glu Asp Pro Arg Gln Phe Asp Lys Ala Val Ala Val Val Thr

325 330 335

His Gln Leu Leu Ser Glu Gly Glu His Tyr Trp Glu Val Glu Val Gly

340 345 350

Asp Lys Pro Arg Trp Ala Leu Gly Val Ile Gly Ala Gln Ala Gly Arg

355 360 365

Arg Gly Arg Leu His Ala Val Pro Ser Gln Gly Leu Trp Leu Leu Gly

370 375 380

Leu Arg Asp Gly Lys Ile Leu Glu Ala His Val Glu Ala Lys Glu Pro

385 390 395 400

Arg Ala Leu Arg Thr Pro Glu Arg Arg Pro Thr Arg Ile Gly Ile Tyr

405 410 415

Leu Ser Phe Gly Asp Gly Val Leu Ser Phe Tyr Asp Ala Ser Asp Pro

420 425 430

Asp Ala Leu Glu Leu Leu Phe Ala Phe His Glu Arg Leu Pro Gly Pro

435 440 445

Val Tyr Pro Phe Phe Asp Val Cys Trp His Asp Lys Gly Lys Asn Ala

450 455 460

Gln Pro Leu Leu Leu Val Gly Pro Glu Val Ser Gly Gly Ser Gly Ser

465 470 475 480

Glu Ala

<210> 12

<211> 477

<212> PRT

<213> 鼠 (Rattus sp.)

<400> 12

Met Ser Thr Ala Pro Gly Leu Leu Arg Gln Glu Leu Ser Cys Pro Leu

1 5 10 15

Cys Leu Gln Leu Phe Asp Ala Pro Val Thr Ala Glu Cys Gly His Ser

20 25 30

Phe Cys Arg Ala Cys Leu Ile Arg Val Ala Gly Glu Pro Ala Asp Asp

35 40 45

Gly Thr Val Ala Cys Pro Cys Cys Gln Ala Ser Thr Arg Pro Gln Ala

50 55 60

Leu Ser Thr Asn Leu Gln Leu Ala Arg Leu Val Glu Gly Leu Ala Gln

65 70 75 80

Val Pro Gln Gly His Cys Glu Glu His Leu Asp Pro Leu Ser Ile Tyr

85 90 95

Cys Glu Gln Asp Arg Thr Leu Val Cys Gly Val Cys Ala Ser Leu Gly

100 105 110

Ser His Arg Gly His Arg Leu Leu Pro Ala Ala Glu Ala His Ala Arg

115 120 125

Leu Lys Thr Gln Leu Pro Gln Gln Lys Ala Gln Leu Gln Glu Ala Cys

130 135 140

Met Arg Lys Glu Lys Ser Val Ala Val Leu Glu His Gln Leu Val Glu

145 150 155 160

Val Glu Glu Thr Val Arg Gln Phe Arg Gly Ala Val Gly Glu Gln Leu

165 170 175

Gly Lys Met Arg Met Phe Leu Ala Ala Leu Glu Ser Ser Leu Asp Arg

180 185 190

Glu Ala Glu Arg Val Arg Gly Glu Ala Gly Val Ala Leu Arg Arg Glu

195 200 205

Leu Ser Ser Leu Asn Ser Tyr Leu Glu Gln Leu Arg Gln Met Glu Lys

210 215 220

Val Leu Glu Glu Val Ala Asp Lys Pro Gln Thr Glu Phe Leu Met Lys

225 230 235 240

Phe Cys Leu Val Thr Ser Arg Leu Gln Lys Ile Leu Ser Glu Ser Pro

245 250 255

Pro Pro Ala Arg Leu Asp Ile Gln Leu Pro Val Ile Ser Asp Asp Phe

260 265 270

Lys Phe Gln Val Trp Lys Lys Met Phe Arg Ala Leu Met Pro Glu Leu

275 280 285

Glu Glu Leu Thr Phe Asp Pro Ser Ser Ala His Pro Ser Leu Val Val

290 295 300

Ser Ala Ser Gly Arg Arg Val Glu Cys Ser Glu Gln Lys Ala Pro Pro

305 310 315 320

Ala Gly Glu Asp Thr Cys Gln Phe Asp Lys Thr Val Ala Val Val Ala

325 330 335

Lys Gln Leu Leu Ser Gln Gly Glu His Tyr Trp Glu Val Glu Val Gly

340 345 350

Asp Lys Pro Arg Trp Ala Leu Gly Val Met Ala Ala Asp Ala Ser Arg

355 360 365

Arg Gly Arg Leu His Ala Val Pro Ser Gln Gly Leu Trp Leu Leu Gly

370 375 380

Leu Arg Asp Gly Lys Ile Leu Glu Ala His Val Glu Ala Lys Glu Pro

385 390 395 400

Arg Ala Leu Arg Thr Pro Glu Arg Pro Pro Ala Arg Ile Gly Leu Tyr

405 410 415

Leu Ser Phe Ala Asp Gly Val Leu Thr Phe Tyr Asp Ala Ser Asn Thr

420 425 430

Asp Ala Leu Thr Pro Leu Phe Ser Phe His Glu Arg Leu Pro Gly Pro

435 440 445

Val Tyr Pro Met Phe Asp Val Cys Trp His Asp Lys Gly Lys Asn Ser

450 455 460

Gln Pro Leu Leu Leu Val Gly Pro Asp Ser Glu Gln Ala

465 470 475

<210> 13

<211> 477

<212> PRT

<213> 非洲爪蟾 (Xenopus laevis)

<400> 13

Met Ser Thr Pro Gln Leu Met Gln Gly Met Gln Lys Asp Leu Thr Cys

1 5 10 15

Gln Leu Cys Leu Glu Leu Phe Arg Ala Pro Val Thr Pro Glu Cys Gly

20 25 30

His Thr Phe Cys Gln Gly Cys Leu Thr Gly Val Pro Lys Asn Gln Asp

35 40 45

Gln Asn Gly Ser Thr Pro Cys Pro Thr Cys Gln Ser Pro Ser Arg Pro

50 55 60

Glu Thr Leu Gln Ile Asn Arg Gln Leu Glu His Leu Val Gln Ser Phe

65 70 75 80

Lys Gln Val Pro Gln Gly His Cys Leu Glu His Met Asp Pro Leu Ser

85 90 95

Val Tyr Cys Glu Gln Asp Lys Glu Leu Ile Cys Gly Val Cys Ala Ser

100 105 110

Leu Gly Lys His Lys Gly His Asn Ile Ile Thr Ala Ser Glu Ala Phe

115 120 125

Ala Lys Leu Lys Arg Gln Leu Pro Gln Gln Gln Val Ile Leu Gln Glu

130 135 140

Ala Arg Leu Lys Lys Glu Lys Thr Val Ala Val Leu Asp Arg Gln Val

145 150 155 160

Ala Glu Val Gln Asp Thr Val Ser Arg Phe Lys Gly Asn Val Lys His

165 170 175

Gln Leu Asn Ala Met Arg Ser Tyr Leu Asn Ile Met Glu Ala Ser Leu

180 185 190

Gly Lys Glu Ala Asp Lys Ala Glu Ser Ala Ala Thr Glu Ala Leu Leu

195 200 205

Val Glu Arg Lys Thr Met Gly His Tyr Leu Asp Gln Leu Arg Gln Met

210 215 220

Glu Gly Val Leu Lys Asp Val Glu Gly Gln Glu Gln Thr Glu Phe Leu

225 230 235 240

Arg Lys Tyr Cys Val Val Ala Ala Arg Leu Asn Lys Ile Leu Ser Glu

245 250 255

Ser Pro Pro Pro Gly Arg Leu Asp Ile Gln Leu Pro Ile Ile Ser Asp

260 265 270

Glu Phe Lys Phe Gln Val Trp Arg Lys Met Phe Arg Ala Leu Met Pro

275 280 285

Ala Leu Glu Asn Met Thr Phe Asp Pro Asp Thr Ala Gln Gln Tyr Leu

290 295 300

Val Val Ser Ser Glu Gly Lys Ser Val Glu Cys Ala Asp Gln Lys Gln

305 310 315 320

Ser Val Ser Asp Glu Pro Asn Arg Phe Asp Lys Ser Asn Cys Leu Val

325 330 335

Ser Lys Gln Ser Phe Thr Glu Gly Glu His Tyr Trp Glu Val Ile Val

340 345 350

Glu Asp Lys Pro Arg Trp Ala Leu Gly Ile Ile Ser Glu Thr Ala Asn

355 360 365

Arg Lys Gly Lys Leu His Ala Thr Pro Ser Asn Gly Phe Trp Ile Ile

370 375 380

Gly Cys Lys Glu Gly Lys Val Tyr Glu Ala His Thr Glu Gln Lys Glu

385 390 395 400

Pro Arg Val Leu Arg Val Glu Gly Arg Pro Glu Lys Ile Gly Val Tyr

405 410 415

Leu Ser Phe Ser Asp Gly Val Val Ser Phe Phe Asp Ser Ser Asp Glu

420 425 430

Asp Asn Leu Lys Leu Leu Tyr Thr Phe Asn Glu Arg Phe Ser Gly Arg

435 440 445

Leu His Pro Phe Phe Asp Val Cys Trp His Asp Lys Gly Lys Asn Ser

450 455 460

Gln Pro Leu Lys Ile Phe Tyr Pro Pro Ala Glu Gln Leu

465 470 475

<210> 14

<211> 477

<212> PRT

<213> 爪蟾 (Xenopus sp.)

<400> 14

Met Ser Thr Pro Gln Leu Met Gln Gly Met Gln Lys Asp Leu Thr Cys

1 5 10 15

Pro Leu Cys Leu Glu Leu Phe Arg Ala Pro Val Thr Pro Glu Cys Gly

20 25 30

His Thr Phe Cys Gln Gly Cys Leu Thr Gly Ala Pro Lys Asn Gln Asp

35 40 45

Gln Asn Gly Ser Thr Pro Cys Pro Thr Cys Gln Thr Pro Ser Arg Pro

50 55 60

Glu Thr Leu Gln Ile Asn Arg Gln Leu Glu His Leu Val Gln Ser Phe

65 70 75 80

Lys Gln Val Pro Lys Gly His Cys Leu Glu His Leu Asp Pro Leu Ser

85 90 95

Val Tyr Cys Glu Gln Asp Lys Glu Leu Ile Cys Gly Val Cys Ala Ser

100 105 110

Leu Gly Lys His Lys Gly His Asn Ile Ile Thr Ala Ala Glu Ala Tyr

115 120 125

Ala Lys Leu Lys Arg Gln Leu Pro Gln Gln Gln Val Ile Leu Gln Glu

130 135 140

Ala Arg Leu Lys Lys Glu Lys Thr Val Ala Val Leu Asp Arg Gln Val

145 150 155 160

Ala Glu Val Gln Asp Thr Val Ser Arg Phe Lys Gly Asn Val Lys His

165 170 175

Gln Leu Asn Ala Met Arg Ser Tyr Leu Ser Ile Met Glu Ala Ser Leu

180 185 190

Ser Lys Glu Ala Asp Asn Ala Glu His Thr Ala Thr Glu Ala Leu Leu

195 200 205

Val Glu Arg Lys Thr Met Gly His Tyr Leu Asp Gln Leu Arg Gln Met

210 215 220

Asp Gly Val Leu Lys Asp Val Glu Ser Gln Glu Gln Thr Glu Phe Leu

225 230 235 240

Arg Lys Tyr Cys Val Val Ala Ala Arg Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu

245 250 255

Ser Pro Pro Pro Gly Arg Leu Asp Ile Gln Leu Pro Ile Ile Ser Asp

260 265 270

Glu Phe Lys Phe Gln Val Trp Arg Lys Met Phe Arg Ala Leu Met Pro

275 280 285

Ala Leu Glu Asn Leu Thr Phe Asp Pro Asp Thr Ala Gln Gln Asn Leu

290 295 300

Val Val Phe Ser Asp Gly Lys Ser Val Glu Cys Ser Glu Gln Lys Gln

305 310 315 320

Ser Val Ser Asp Glu Pro Asn Arg Phe Asp Lys Ser Asn Cys Leu Val

325 330 335

Ser Lys Glu Ser Phe Thr Glu Gly Glu His Tyr Trp Glu Val Leu Val

340 345 350

Glu Asp Lys Pro Arg Trp Ala Leu Gly Val Ile Ser Glu Thr Ala Asn

355 360 365

Arg Lys Gly Lys Leu His Ala Ser Pro Ser Asn Gly Phe Trp Leu Ile

370 375 380

Gly Cys Lys Glu Gly Lys Val Tyr Glu Ala His Thr Glu Gln Lys Glu

385 390 395 400

Pro Arg Val Leu Arg Val Glu Gly Arg Pro Glu Lys Ile Gly Ile Tyr

405 410 415

Leu Ser Phe Ser Asp Gly Val Val Ser Phe Phe Asp Ser Ser Asp Glu

420 425 430

Asp Asn Ile Lys Leu Leu Tyr Thr Phe Asn Glu Arg Phe Ser Gly Arg

435 440 445

Leu His Pro Phe Phe Asp Val Cys Trp His Asp Lys Gly Lys Asn Ala

450 455 460

Gln Pro Leu Lys Ile Phe Tyr Pro Pro Ala Glu Gln Leu

465 470 475

Claims

1.一种含MG53的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病药物的应用。

2.根据权利要求1所述的一种含MG53的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病药物的应用，其特征在于，所述MG53为以下六种中的任意一种，或任意一种及相应的激动剂和/或拮抗剂中的一种。

1)包括MG53多肽；

2)包括编码MG53多肽的核酸；

3)包括MG53多肽，编码MG53多肽的核酸；

4)包括MG53多肽；小窝蛋白-3；

5)包括编码MG53多肽的核酸；小窝蛋白-3；

6)包括MG53多肽、编码MG53多肽的核酸；小窝蛋白-3。

3.根据权利要求1所述的一种含MG53的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病药物的应用，其特征在于，所述MG53多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:7-SEQ ID NO:14中任意一项所示。

4.根据权利要求1所述的一种含MG53的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病药物的应用，其特征在于，所述编码MG53多肽的核酸的核苷酸序列如SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:4,SEQID NO:6中任意一项所示。

5.根据权利要求1所述的一种含MG53的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病药物的应用，其特征在于，所述激动剂包括磷脂酰丝氨酸、锌或锌盐、钙离子、Zn-1-羟基吡啶-2-硫酮(Zn-HPT)、三七、氧化剂、乙基汞硫代水杨酸钠中的一种或者多种组合。

6.根据权利要求1所述的一种含MG53的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病药物的应用，其特征在于，所述含MG53的组合物包括但不限于粉针剂、水针剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、口服液、粉剂、散剂、预混剂、膏剂、舌下片、肠溶剂、栓剂、灌肠剂。

7.根据权利要求6所述的一种含MG53的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病药物的应用，其特征在于，所述含MG53的组合物包括肠溶剂和灌肠剂，所述肠溶剂包括但不限于肠溶胶囊、肠溶片各种肠溶缓释或控释剂、复方制剂。

8.根据权利要求1所述的一种含MG53的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病药物的应用，其特征在于，机理在于通过促进肠粘膜修复快速治疗炎症性肠病，还能促进肠粘膜修复。

9.一种含MG53突变体的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病药物的应用。

10.根据权利要求9所述的一种含MG53突变体的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病药物的应用，其特征在于，所述MG53突变体为MG53的Coiled-coil结构域中的丝氨酸位点突变为除苏氨酸和酪氨酸以外的非极性氨基酸，所述MG53突变体为选自MG53S150A、MG53S189A、MG53S211A中的一种或多种。

11.根据权利要求10所述的一种含MG53突变体的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病药物的应用，其特征在于，所述MG53突变体为MG53的Coiled-coil结构域中的丝氨酸位点突变为非极性氨基酸丙氨酸，所述MG53突变体为选自MG53S150A、MG53S189A、MG53S211A中的一种或多种。

12.根据权利要求9所述的一种含MG53突变体的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病药物的应用，其特征在于，所述MG53突变体为以下六种中的任意一种，或任意一种及相应的激动剂和/或拮抗剂中的一种：

1)包括MG53突变体多肽；

2)包括编码MG53突变体多肽的核酸；

3)包括MG53突变体多肽，编码MG53突变体多肽的核酸；

4)包括MG53突变体多肽；小窝蛋白-3；

5)包括编码MG53突变体多肽的核酸；小窝蛋白-3；

6)包括MG53突变体多肽、编码MG53突变体多肽的核酸；小窝蛋白-3。

13.根据权利要求9所述的一种含MG53突变体的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病药物的应用，其特征在于，所述激动剂包括磷脂酰丝氨酸、锌或锌盐、钙离子、Zn-1-羟基吡啶-2-硫酮(Zn-HPT)、三七、氧化剂、乙基汞硫代水杨酸钠中的一种或者多种组合。

14.根据权利要求9所述的一种含MG53突变体的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病药物的应用，其特征在于，所述含MG53突变体的组合物包括但不限于粉针剂、水针剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、口服液、粉剂、散剂、预混剂、膏剂、舌下片、肠溶剂、栓剂。

15.根据权利要求9所述的一种含MG53突变体的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病药物的应用，其特征在于，所述含MG53突变体的组合物包括肠溶剂和灌肠剂，所述肠溶剂包括但不限于肠溶胶囊、肠溶片各种肠溶缓释或控释剂、复方制剂。

16.根据权利要求9所述的一种含MG53突变体的组合物在制备预防和治疗炎症性肠病药物的应用，其特征在于，机理在于通过促进肠粘膜修复快速治疗炎症性肠病，还能促进肠粘膜修复。