CN108456212A

CN108456212A - 一种化合物或其溶剂合物，或前体，或它们的药学上可接受的盐、药物及其用途

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Publication number: CN108456212A
Application number: CN201810536871.3A
Authority: CN
Inventors: 杨文思
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2018-05-30
Filing date: 2018-05-30
Publication date: 2018-08-28

Abstract

本发明公开了一种化合物或其溶剂合物，或前体，或它们的药学上可接受的盐、药物及其用途。本发明的化合物能直接作用于Janus激酶，对治疗肿瘤和自身免疫性疾病有显著效果。

Description

一种化合物或其溶剂合物，或前体，或它们的药学上可接受的盐、药物及其用途

技术领域

本发明属于药学领域；更具体地，本发明涉及一种化合物或其溶剂合物，或前体，或它们的药学上可接受的盐、药物及其用途。

背景技术

近20多年来，世界上多数国家肿瘤发病率呈上升趋势。随着人们生活水平的提高，饮食习惯与结构的改变，加之人口老龄化趋势影响，全球肿瘤发病人数和死亡人数也呈增长态势。据统计，2012年，世界范围内约有1400万新发癌症病例，预计今后二十年新发病例数将增加约70％。2015年肿瘤导致880万人死亡。从全球情况看，近六分之一的死亡由癌症造成。癌症带来的经济影响很大且在不断加剧。估计2010年由癌症导致的年度经济总费用约为1.16万亿美元。

JAK是英文Janus kinase的缩写，是一类非跨膜型的酪氨酸激酶。JAK既能磷酸化与其相结合的细胞因子受体，又能磷酸化多个含特定SH2结构域的信号分子。JAK蛋白家族共包括4个成员：JAK1、JAK2、JAK3以及Tyk2，它们在结构上有7个JAK同源结构域(JAKhomology domain，JH)，其中JH1结构域为激酶区、JH2结构域是“假”激酶区、JH6和JH7是受体结合区域。

JAK-STAT信号通路是一条由细胞因子刺激的信号转导通路，参与细胞的增殖、分化、凋亡以及免疫调节等许多重要的生物学过程。JAK-STAT信号通路功能广泛，参与细胞的增殖、分化、凋亡以及免疫调节等许多重要的生物学过程，目前与疾病及药物创新相关的研究都集中于自身免疫性疾病及肿瘤。其中，而肿瘤主要涉及骨髓纤维化、真性红细胞增多症及原发性血小板增多症。另外，JAK分子自身的突变也会导致急性骨髓细胞性白血病(AML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、乳腺导管癌及非小细胞肺癌(NSCLC)等。

发明内容

本发明的目的在于提供具有Janus激酶抑制作用的7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶类衍生物及其用途。

本发明的另一目的在于提供该类二氢吲哚类衍生物或其药学上可接受的等价物单独使用或和其他药物联合使用在治疗肿瘤、自身免疫性疾病或中枢神经系统中的应用。

本发明的目的可以通过以下措施达到：

一类具有以下通式(Ⅰ)的化合物或其溶剂合物或前体，或它们的药学上可接受的盐：

其中，

n为0-6的整数；

R1为氢、卤素、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基或C3-6环烷基；

R2为氢、卤素、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基或C3-6环烷基。

R3为氢、卤素、任意取代的苯基、萘基、C5-7环二烯基或任意取代的单或稠环杂环基，所述杂环具有芳香性，含有5至12个环原子并且在该环或每一环中含有至多四个选自S、O和N的杂原子。

在本发明的一种优选方案中：

n为0-3的整数，进一步优选为0或1；

R1为氢、C1-6烷基或卤素，进一步优选为氢、C1-4烷基或氟；

R2为氢、C1-6烷基氨基、氰基或卤素，进一步优选为氢、C1-4烷基氨基、氰基、氯或氟；

R3为氢、卤素或任意取代的苯基，进一步优选为烷氧基取代的苯基。

“卤素”表示氟、氯、溴或碘。

“C1-6烷基”表示具有1-6个碳原子的支链或直连烷基，包括但不限于甲基、乙基、丙-1-基、丙-2-基、2-甲基-丙-1-基、2-甲基-丙-2-基、2,2-二甲基-丙-1-基、丁-1-基、丁-2-基、3-甲基-丁-1-基、3-甲基-丁-2-基、戊-1-基、戊-2-基、戊-3-基、己-1-基、己-2-基、己-3-基。

“C1-3烷基”表示具有1-3个碳原子的支链或直连烷基，包括但不限于甲基、乙基、丙-1-基、丙-2-基。

“卤代C1-6烷基”表示被一个或多个卤素原子取代的C1-6烷基，包括但不限于三氟甲基和3,3,3-三氟-1-丙基。

“C3-6环烷基”表示具有3-6个碳原子的单环烷基，并且该环不具有完全连接的π电子系统，包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环戊烯基、环己烯基。

“C1-6烷氧基”表示-O-(未取代的C1-6烷基)和-O-(未取代的C3-6环烷基)，包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。

“卤代C1-6烷氧基”表示被一个或多个卤素原子取代的C1-6烷氧基，包括但不限于三氟甲氧基和3,3,3-三氟-1-丙氧基。

“C1-6烷基氨基”表示-NH-(未取代的C1-6烷基)和-NH-(未取代的C3-6环烷基)，包括但不限于甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、丁基氨基、环丙基氨基、环丁基氨基、环戊基氨基、环己基氨基。

“药学上可接受的盐”指的是本发明化合物的酸式盐或碱式盐，所述盐具有所期望的药学活性并且在生物学上和在其它方面的均没有不合要求之处。酸式盐包括无机酸盐和有机酸盐。无机酸包括但不限于盐酸、硫酸、磷酸、甲磺酸，有机酸包括但不限于乙酸、三氯乙酸、丙酸、丁酸、马来酸、对甲苯磺酸、苹果酸、丙二酸、肉桂酸、柠檬酸、富马酸、樟脑酸、二葡糖酸、天冬氨酸、酒石酸。

本发明还提供一种药物组合物，它以本发明上述保护的任意一种化合物或其溶剂合物，或前体，或它们的药学上可接受的盐为活性成分，同时含有一种或多种药学上可以接受的载体或稀释剂。

本发明所指“药学上可以接受的载体或稀释剂”选自药物制剂中常用的赋形剂、辅料或溶剂，包括但不限于乳糖、蔗糖、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯树胶、硬脂酸镁、硬脂酸、纤维素的低级烷基醚、玉米淀粉、马铃薯淀粉、树胶、脂肪酸、脂肪酸胺、单硬脂酸甘油或二硬脂酸甘油脂、磷脂、橄榄油、花生油、糖浆、着色剂、矫味剂、防腐剂、水、乙醇、丙醇、生理盐水、葡萄糖溶液。

本发明化合物作为活性成分的有效施用剂量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度而变化。然而，通常当本发明的化合物每天以约0.05-500mg/kg，较佳地0.1-300mg/kg，更佳地1-200mg/kg动物体重的剂量给予时，能得到令人满意的效果，较佳地每天以1-3次分开的剂量给予，或以缓释形式给药。可调节此剂量方案以提供最佳治疗应答。例如，由治疗状况的迫切要求，可每天给予若干次分开的剂量，或将剂量按比例地减少。

本发明还提供上述各化合物或其溶剂合物，或前体，或它们的药学上可接受的盐在制备抑制Janus激酶方面的用途，尤其是在制备治疗肿瘤和自身免疫性疾病的应用。所述的“肿瘤和自身免疫性疾病”包括但不限于骨髓纤维化、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、类风湿性关节炎或银屑病。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如J.萨姆布鲁克等编著，分子克隆实验指南，第三版，科学出版社，2002中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

具体实施方式

为了更详细说明本发明，给出下述制备实例，但本发明的范围并非限定于此。

实施例一

6-(3-甲氧基苯基)-N-甲基-4-((四氢呋喃-3-基)氧基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺的制备

6-(3-甲氧基苯基)-2-(甲氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-醇

将6-(3-甲氧基苯基)-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-醇(583mg)与甲胺(276mg)溶于二甲基甲酰胺(5mL)中，于室温条件下反应8h。反应结束加入15mL乙酸乙酯稀释，水洗，有机相用无水硫酸镁干燥。过滤除去固体不溶物，滤液减压浓缩后得产物6-(3-甲氧基苯基)-2-(甲氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-醇(374mg,65％产率)。MS:270.54[M+H]⁺。

4-氯-6-(3-甲氧基苯基)-N-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺

将6-(3-甲氧基苯基)-2-(甲氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-醇(317mg)和三氯化磷(645mg)溶于二氯甲烷(3mL)中。封官加热到40℃反应6小时。冷却至室温，加入15mL乙酸乙酯稀释，水洗，有机相用无水硫酸镁干燥，浓缩得产物4-氯-6-(3-甲氧基苯基)-N-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺，粗产品直接投入下一步反应。

6-(3-甲氧基苯基)-N-甲基-4-((四氢呋喃-3-基)氧基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺

向4-氯-6-(3-甲氧基苯基)-N-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺(330mg)的四氢呋喃(1.5mL)溶液中加入氢氧化钾(193mg)和3-羟基四氢呋喃(202mg)，加热到50℃反应5小时。加入水淬灭反应，乙酸乙酯萃取(3×10mL)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干柱层析得到产物6-(3-甲氧基苯基)-N-甲基-4-((四氢呋喃-3-基)氧基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺(307mg,收率79％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:11.92(brs,1H),8.07(brs,1H),7.57-7.31(m,3H),7.05(d,1H),6.57(s,1H),4.31-3.97(m,3H),3.88(s,3H),3.82-3.70(m,2H),2.85(s,3H),2.36-2.11(m,2H)ppm；13C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:165.7,161.0,159.1,149.7,138.2,130.3,129.6,119.8,114.2,113.9,108.1,100.3,81.3,79.4,67.6,55.9,32.3,28.9ppm；MS-ESI:341.46[M+H]⁺.

实施例二

2-氟-4-((3-异丙基四氢吡喃-3-基)氧基)-6-(3-甲氧基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶的制备

将4-氯-2-氟-6-(3-甲氧基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(550mg)与3-羟基-4-异丙基四氢呋喃(516mg)溶于二甲基甲酰胺(3mL)中，加入氢氧化钾(450mg)，加热到90℃反应10小时。反应结束加入15mL乙酸乙酯稀释，水洗，有机相用无水硫酸镁干燥。过滤，旋干，柱层析得到产物2-氟-4-((3-异丙基四氢吡喃-3-基)氧基)-6-(3-甲氧基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(573mg,78％产率)。

MS:372.56[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:11.95(brs,1H),7.55-7.27(m,3H),7.06(d,1H),6.58(s,1H),4.33-3.99(m,3H),3.84(s,3H),3.78-3.63(m,2H),2.22-2.10(m,1H),1.45-1.36(m,1H),0.89(d,6H)ppm；¹³CNMR(100MHz,CDCl₃)δ:169.4,161.7,161.1,149.5,138.2,130.5,130.6,120.4,114.4,113.8,108.6,101.1,80.8,78.9,69.3,56.4,55.5,22.6,20.9ppm.

本发明所有化合物在以下至少一个实验中显示出具有生理及药理活性作用。以下实施例仅用于详述本发明的活性，并非是对未明示的本发明化合物的限定。

实施例三酶分析

(1)测试方法：JAK1，JAK2和JAK3激酶测定利用在杆状病毒感染的SF9细胞(GST的融合蛋白和人类JAK酶的催化结构域)中表达的蛋白质，其通过亲和层析对谷胱甘肽-琼脂糖进行纯化。反应的底物是聚谷氨酸-酪氨酸[PGT(4:1)]，在Nunc Maxi Sorp板上以100μg/mL在37℃下过夜。将板洗涤三次，并将JAK酶加入到含有100μL激酶缓冲液(50mM HEPES，pH7.3,125mM NaCl,24mM MgCl₂)+ATP+1mM正乙酸钠)的孔中。于室温条件下孵化30分钟，将板洗三次。利用抗磷酸化抗体标准ELISA法测定磷酸化酪氨酸的含量。

(2)测定结果：详见表1，其中IC₅₀越小，表示相应化合物的活性越高。

实施例四细胞分析-抑制人IL-2依赖性T细胞增殖(IL-2 Blast Assay)

(1)测试方法：该方法测量化合物对体外IL-2依赖性T细胞增殖的抑制作用。由于通过IL-2受体的信号需要JAK3，JAK3的细胞活性抑制剂能抑制IL-2依赖性T细胞增殖。用于该测定的细胞从新鲜的人血液中分离。使用Accuspin System-Histopaque-1077分离单核细胞后，使用Lympho-Kwik T(One Lambda,Inc.,)通过阴性选择分离原代人T细胞。培养基(RPMI+10％热灭活的胎牛血清(Hyclone)×1％青霉素/链霉素(P/S；Gibco))中培养T细胞(1-2)*10⁶/并通过加入10μg/mL PHA(Murex Diagnostics)诱导增殖。在37℃，5％CO₂中3天后，将细胞在培养基中洗涤三次，并在培养基中再悬浮至浓度为(1-2)×106个细胞/mL，加上100单位/mL人重组IL-2(R&D Systems)。1周后，细胞依赖IL-2，可以用等体积的培养基加上100单位/mL的IL-2每周两次，维持长达3周。

为了测定化合物抑制IL-2依赖性T细胞增殖的能力，将IL-2依赖性细胞洗涤三次，重悬于培养基中，然后在平底96孔板中接种(50000个细胞/孔/0.1mL)微量滴定板。从10mM试验化合物的二甲基亚砜(DMSO)储备液中，将连续的2倍稀释的化合物以10μM开始一式三份加入。一排用作100％增殖控制，并与DMSO单独孵育。1小时后，向每个试验孔中加入10单位/mL的IL-2，然后将板在37℃和5％CO₂下孵育72小时。然后将板用[³H]胸苷(0.5μCi/孔)脉冲并再孵育18小时。用96孔板收割机收获培养板，通过在Packard Top Count闪烁计数器上计数确定掺入增殖细胞中的[³H]胸苷的量，从而确定IC₅₀值(微摩尔)。

(2)测定结果：详见表1，其中IL-2 blast IC₅₀越小，表示相应化合物的活性越高。

表1本发明所述的部分化合物以及酶分析测试和细胞分析测试测定结果

Claims

1.一种具有以下通式(I)所示化合物或其溶剂合物，或前体，或它们的药学上可接受的盐，用于制备治疗肿瘤和自身免疫性疾病的药物；所述的药物以Janus激酶作为作用靶点：

其中，

n为0-6的整数；

R₁为氢、卤素、硝基、氰基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷基氨基、卤代C_1-6烷基、卤代C_1-6烷氧基或C_3-6环烷基；

R₂为氢、卤素、硝基、氰基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷基氨基、卤代C_1-6烷基、卤代C_1-6烷氧基或C_3-6环烷基；

R₃为氢、卤素、任意取代的苯基、萘基、或C_5-7环二烯基，或任意取代的单或稠环杂环基，所述杂环具有芳香性，含有5至12个环原子并且在该环或每一环中含有至多四个选自S、O和N的杂原子。

2.根据权利要求1所述的化合物或其溶剂合物，或前体，或它们的药学上可接受的盐，其中，

n为0-3的整数；

R₁为氢、C_1-6烷基或卤素；

R₂为氢、C_1-6烷基氨基、氰基或卤素。

R₃为氢、卤素或任意取代的苯基。

3.根据权利要求2所述的化合物或其溶剂合物，或前体，或它们的药学上可接受的盐，其中R₁为氢、C_1-4烷基或氟。

4.根据权利要求2所述的化合物或其溶剂合物，或前体，或它们的药学上可接受的盐，其中R₂为氢、C_1-4烷基氨基、氰基、氯或氟。

5.根据权利要求2所述的化合物或其溶剂合物，或前体，或它们的药学上可接受的盐，其中n为0或1。

6.一种药物组合物，其含有药物有效剂量的如权利要求1-5中任何一项所述的化合物或其溶剂合物，或前体，或它们的药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体或稀释剂。

7.如要求1-5中任一项所述的化合物或其水合物，或前体，或它们的药学上可接受的盐，其特征在于，其用途为治疗肿瘤和自身免疫性疾病。

8.根据权利要求7所述的用途，其中所述肿瘤主要涉及骨髓纤维化、真性红细胞增多症及原发性血小板增多症。

9.根据权利要求7所述的用途，其中所述自身免疫性疾病主要涉及类风湿性关节炎及银屑病。