CN108355124A - 一种治疗气道粘液高分泌的中药组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种治疗气道粘液高分泌的中药组合物及其应用，所述中药组合物包括：生麻黄，桂枝，龙胆草，细辛，干姜，生黄芪，生地，炒黄芩，蒲公英，紫花地丁，柯子肉，姜半夏，生甘草。本发明还涉及上述中药组合物在制备治疗或抑制气道粘液高分泌的药物中的应用。本发明中药联合西药治疗慢性阻塞性肺疾病疗效显著，能更好地缓解患者喘息中医症状、改善MMRC评分，缩短患者住院天数。中药联合西药常规治疗AECOPD能够降低患者血CRP和PCT水平，有助于AECOPD细菌感染控制，并能够改善患者的辅助呼吸肌动用评分，减轻呼吸肌的做功。

Description

一种治疗气道粘液高分泌的中药组合物及其应用

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体地说，是一种治疗气道粘液高分泌的中药组合物及其应用。

背景技术

气道黏液高分泌是慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)、支气管哮喘(哮喘)、支气管扩张症、肺囊性纤维化等慢性气道炎症性疾病的重要病理生理和临床表现。近年来的研究发现，在炎症、氧化应激等多种因素刺激下，腺体和杯状细胞产生、分泌过多的黏液，参与了慢性气道炎性疾病的发病，并与其临床转归密切相关。有文献报道了气道黏液高分泌在常见呼吸系统疾病中的重要作用，并且在临床实践中发现许多患者死于气道黏液高分泌导致的气道阻塞或窒息。

黏液是由气管、支气管中杯状细胞分泌的黏蛋白及黏膜下腺体分泌的水、糖类、蛋白质、脂类及矿物质组成的混合物。正常分泌的气道黏液具有保护气道、湿润空气等作用，但在吸烟、感染、氧化应激等多种致病因素作用下，可产生大量促分泌因子作用于分泌细胞，导致气道杯状细胞肥大和增生，产生过量黏液。气道黏液高分泌和纤毛功能失调是慢阻肺、哮喘、支气管扩张症的特征性病理生理学改变。在慢阻肺的发病过程中，中性粒细胞蛋白酶和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)合成、释放增加，黏液分泌亢进。哮喘患者气道内黏液素含量如MUC5AC和MUC5B增加，上皮受损致纤毛细胞脱落，杯状细胞明显增生，黏膜下腺体肥厚，导致气道黏液高分泌。因支气管扩张症患者气道不可逆的扩张，导致黏液清除功能受损，细菌容易定植，细菌分泌的有毒介质及细菌死亡后的分解物刺激气道上皮细胞杯状化生，产生过多黏液，导致气道黏液高分泌。总之，气道黏液高分泌的产生涉及炎症反应、氧化应激、蛋白酶失衡、胆碱能神经功能紊乱等多种病理生理机制，是慢阻肺、哮喘、支气管扩张症等呼吸道常见疾病的重要病理生理改变和临床表现。

气道黏液高分泌导致分泌过多的黏液蓄积在气道管腔中，阻塞气道，使气流受限，加速肺功能下降进程；同时，炎症反应使纤毛清除功能下降、肺泡表面活性物质丧失和黏液生物物理性质改变，导致气道的反复感染、阻塞和重塑，形成恶性循环。研究证实气道黏液高分泌是影响慢性气道炎症性疾病发病与临床进展、预后的重要危险因素。

中文期刊《中医杂志》2015年3月公开论文《蠲饮泄肺方联合西药治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期随机对照双盲研究》，比较蠲饮泄肺方和清热化痰方分别联合西药治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期痰热壅肺证的临床疗效，公开处方：麻黄9g、桂枝15g、龙胆9g、细辛6g、干姜9g、黄芪15g、生地黄15g、黄芩15g、苦杏仁9g、五味子9g、白芍15g、姜半夏15g、枳壳15g、甘草6g。中国专利2014105043446公开了一种治疗支气管哮喘的中药：麻黄5-15克，桔梗5-15克，百部5-15克，黄连5-15克，金银花5-15克，党参5-15克，黄芩5-15克，地龙5-15克，五味子5-15克，生石膏5-15克，川贝10-20克，桂枝10-20克，半夏10-20克，白芍10-20克，杏仁10-20克，防风15-25克，黄芪15-25克，干姜3-8克，细辛2-5克，甘草2-5克。中国专利2013107048721公开了一种治疗支气管哮喘的中药组合物：黄芪30克，白术30克，防风25克，白芥子10克，金银花10克，黄芩10克，五味子10克，生石膏10克，紫苏子10克，半夏10克，熟地黄10克，杏仁10克，蝉蜕10克，地龙10克，陈皮10克，川贝母6克，麻黄6克，桔梗6克，细辛2克，生姜8克，大枣5克，炙甘草4克。然而现有技术中，关于本发明治疗气道粘液高分泌的中药组合物，目前还未见报道。

发明内容

本发明的第一个目的是针对现有技术中的不足，提供一种治疗气道粘液高分泌的中药组合物。

本发明的第二个目的在于，提供上述中药组合物的制药用途。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：

一种治疗气道粘液高分泌的中药组合物，所述中药组合物由以下重量份的原料药制成：生麻黄4-14份，桂枝7-17份，龙胆草4-14份，细辛1-11份，干姜4-14份，生黄芪25-35份，生地7-17份，炒黄芩7-17份，蒲公英25-35份，紫花地丁25-35份，柯子肉7-17份，姜半夏7-17份，生甘草1-11份。

作为本发明的一个优选实施方案，所述中药组合物由以下重量份的原料药制成：生麻黄6-12份，桂枝9-15份，龙胆草6-12份，细辛3-9份，干姜6-12份，生黄芪27-33份，生地9-15份，炒黄芩9-15份，蒲公英27-33份，紫花地丁27-33份，柯子肉9-15份，姜半夏9-15份，生甘草3-9份。

作为本发明的一个优选实施方案，所述中药组合物由以下重量份的原料药制成：生麻黄9份，桂枝12份，龙胆草9份，细辛6份，干姜9份，生黄芪30份，生地12份，炒黄芩12份，蒲公英30份，紫花地丁30份，柯子肉12份，姜半夏12份，生甘草6份。

方解：全方寒热并用，辛开苦降，相反相成，反激逆从。

君：生麻黄，桂枝，龙胆草。

麻黄、桂枝相须为君，发汗散寒以解表邪，且麻黄又能宣发肺气而平喘咳，桂枝化气行水以利里饮之化。龙胆草苦寒，可降肺胃之气，可清肝胆湿热，同时裘老认为龙胆草还可清三焦之火，并常用于清肺热，热平，气降则咳喘平。

臣：细辛，干姜，黄芪，生地，炒黄芩。

细辛，干姜温肺化饮，兼助麻、桂解表祛邪。黄芪补肺益气，生地养阴生津，久咳耗气伤阴，二药合用，益气养阴。炒黄芩苦寒泄肺，清热解毒。

佐：柯子肉，姜半夏，蒲公英，紫花地丁。

柯子肉敛肺止咳、与辛散之品相配既可增强止咳平喘之功，又可制约诸药辛散温燥太过之弊。证治准绳：“善治痰者，不治痰而治气，气顺则一身之津液亦随气而顺矣”，姜半夏燥湿化痰，和胃降逆。蒲公英，紫花地丁二药同用，清肺化痰，清热解毒。

使：生甘草

止咳化痰之良药，又兼能调和诸药。

(3)组方特点：

龙胆草，炒黄芩——细辛，干姜：寒热并用，辛开苦降，相反相成，反激逆从。辛能散邪结，温可化痰饮，苦能降上逆之肺气，亦可清内蕴之痰热。

生麻黄，桂枝——柯子肉：一宣一肃。肺失宣肃，为咳嗽得总病机，尤以外感所致者为然，临床上咳声不畅，咳痰不爽，为肺气失宣的表现，而气逆喘促，为肺气上逆，失于肃降的表现，两者每每并存，故宣肺与肃肺之品兼施，自在情理之中。

细辛，干姜——柯子肉：辛散酸收。对久咳、剧咳者，以辛散宣肺祛寒邪，以酸收敛肺气以止咳，使邪气去而肺气和。

生黄芪、生地——龙胆草，炒黄芩，蒲公英，紫花地丁：一补一泄，相反相成。祛邪与补肺并投，苦寒不伤正，泄肺不伤阴。

生地——姜半夏：一润一燥，相激相成。单用辛燥则津益伤,专以滋阴则湿愈滞，唯有润燥互用，可令湿化津复，养阴清热与燥湿化痰，各尽其责又相互协助。

作为本发明的一个优选实施方案，按照中药常规制备方法制备成临床上可接受的药物制剂。

作为本发明的一个优选实施方案，所述药物制剂为颗粒剂、散剂、胶囊剂、片剂、合剂或口服液。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

如上任一所述的中药组合物在制备治疗或抑制气道粘液高分泌的药物中的应用。

如上任一所述的中药组合物在制备治疗慢性气道炎症性疾病的药物中的应用。所述慢性气道炎症性疾病包括慢性阻塞性肺疾病、支气管哮喘、支气管扩张症、肺囊性纤维化。

所述的药物还可进一步包含常规载体，例如：稀释剂、赋形剂和水等，填充剂如淀粉、蔗糖，乳糖、微晶纤维素等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂如甘油；崩解剂如羧甲基淀粉钠、羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇、十二烷基硫酸钠；吸附载体如高龄土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、微粉硅胶和聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。

本发明优点在于：

1、本发明的中药组合物联合西药治疗慢性阻塞性肺疾病疗效显著，与对照组清热化痰方相比，本发明能更好地缓解患者喘息中医症状、改善MMRC评分，缩短患者住院天数。

2、本发明的中药组合物联合西药常规治疗AECOPD能够降低患者血CRP和PCT水平，有助于AECOPD细菌感染控制，并能够改善患者的辅助呼吸肌动用评分，减轻呼吸肌的做功。

3、中药组合物的组成及其之间的配比经过试验筛选，具有效果显著的优点。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1治疗气道粘液高分泌的中药组合物(一)

按比例取中药原料：生麻黄9份，桂枝12份，龙胆草9份，细辛6份，干姜9份，生黄芪30份，生地12份，炒黄芩12份，蒲公英30份，紫花地丁30份，柯子肉12份，姜半夏12份，生甘草6份。

实施例2治疗气道粘液高分泌的中药组合物(二)

按比例取中药原料：生麻黄4份、桂枝7份、龙胆草4份、细辛1份、干姜14份、生黄芪35份、生地17份、炒黄芩17份、蒲公英35份、紫花地丁35份、柯子肉17份、姜半夏17份、生甘草11份。

实施例3治疗气道粘液高分泌的中药组合物(三)

按比例取中药原料：生麻黄14份、桂枝17份、龙胆草14份、细辛11份、干姜4份、生黄芪25份、生地7份、炒黄芩7份、蒲公英25份、紫花地丁25份、柯子肉7份、姜半夏7份、生甘草1份。

实施例4治疗气道粘液高分泌的中药组合物(四)

按比例取中药原料：生麻黄4份、桂枝17份、龙胆草4份、细辛11份、干姜4份、生黄芪35份、生地7份、炒黄芩17份、蒲公英25份、紫花地丁35份、柯子肉7份、姜半夏17份、生甘草1份。

实施例5治疗气道粘液高分泌的中药组合物(五)

按比例取中药原料：生麻黄14份、桂枝7份、龙胆草14份、细辛1份、干姜14份、生黄芪25份、生地17份、炒黄芩7份、蒲公英35份、紫花地丁25份、柯子肉17份、姜半夏7份、生甘草11份。

实施例6治疗气道粘液高分泌的中药组合物(六)

按比例取中药原料：生麻黄6份、桂枝9份、龙胆草6份、细辛3份、干姜12份、生黄芪33份、生地15份、炒黄芩15份、蒲公英33份、紫花地丁33份、柯子肉15份、姜半夏15份、生甘草9份。

实施例7治疗气道粘液高分泌的中药组合物(七)

按比例取中药原料：生麻黄12份、桂枝15份、龙胆草12份、细辛9份、干姜6份、生黄芪27份、生地9份、炒黄芩9份、蒲公英27份、紫花地丁27份、柯子肉9份、姜半夏9份、生甘草3份。

实施例8治疗气道粘液高分泌的中药组合物(八)

按比例取中药原料：生麻黄6份、桂枝15份、龙胆草6份、细辛9份、干姜6份、生黄芪33份、生地9份、炒黄芩15份、蒲公英27份、紫花地丁33份、柯子肉9份、姜半夏15份、生甘草3份。

实施例9治疗气道粘液高分泌的中药组合物(九)

按比例取中药原料：生麻黄12份、桂枝9份、龙胆草12份、细辛3份、干姜12份、生黄芪27份、生地15份、炒黄芩9份、蒲公英33份、紫花地丁27份、柯子肉15份、姜半夏9份、生甘草9份。

实施例10汤剂的制备

取实施例1-9任一所述的中药组合物，加水按照常规方法煎煮。即按照重量份配比取中药原料，加水煎煮成汤剂。

实施例11合剂/颗粒剂的制备

(1)取生麻黄9份，桂枝12份，龙胆草9份，细辛6份，干姜9份，生黄芪30份，生地12份，炒黄芩12份，清洗、灭菌，加入热水浸泡30-60分钟；

(2)加入蒲公英30份、紫花地丁30份、柯子肉12份、姜半夏12份、生甘草6份，煎煮60-120分钟，煎煮2-3次；

(3)合并煎煮液，过滤药渣，浓缩得清膏，备用；

(4)取步骤(3)所述清膏，加入适量的防腐剂，加纯化水至规定量，滤过，得中药合剂；或取步骤(3)所述清膏，干燥并粉碎成干浸膏粉，加入颗粒剂适用的填充剂，制粒，干燥，得中药颗粒剂。

实施例12中药片剂/胶囊的制备

(1)取生麻黄9份，桂枝12份，龙胆草9份，细辛6份，干姜9份，生黄芪30份，生地12份，炒黄芩12份，清洗、灭菌，加入热水浸泡30-60分钟；

(2)加入蒲公英30份、紫花地丁30份、柯子肉12份、姜半夏12份、生甘草6份，煎煮60-120分钟，煎煮2-3次；

(3)合并煎煮液，过滤药渣，干燥，粉碎，得浸膏粉备用；

(4)取步骤(3)所述干浸膏粉，加入片剂适用的辅料，制粒，干燥，加入片剂适用的润滑剂，压片，或包衣，即得中药片剂；或取步骤(3)所述干浸膏粉，加入胶囊剂适用的辅料，或制粒，干燥，装入空心胶囊，即得中药胶囊剂。

实施例13浓缩丸剂的制备

(1)取生麻黄9份、桂枝12份、龙胆草9份，粉碎成药材细粉，混合均匀，备用；

(2)取细辛6份、干姜9份、生黄芪30份、生地12份、炒黄芩12份、蒲公英30份、紫花地丁30份、柯子肉12份、姜半夏12份、生甘草6份，加水煎煮1-2小时，煎煮2-3次；

(3)合并煎煮液，过滤药渣，浓缩得清膏，备用；

(4)将步骤(1)所述药材细粉，以步骤(2)所述清膏为粘合剂，制成浓缩丸，干燥，打光，即得浓缩丸剂。

效果实施例1

1临床资料

1.1一般资料

收集2014年9月至2017年12月呼吸内科病房住院患者69例，按随机数字表法分成治疗组36例和对照组33例。治疗组中男31例，女5例；年龄52～81岁，平均(68.72±11.36)岁；病程1～17年，平均(6.51±8.72)年。对照组中男27例，女6例；年龄52～82岁，平均(73.18±9.66)岁，病程2～22年，平均(7.37±8.22)年。两组患者一般资料比较差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2诊断标准

西医诊断参照《中华医学会呼吸病学分会慢性阻塞性肺疾病学组.慢性阻塞性肺疾病诊治指南(2013年修订版)》中AECOPD的诊断标准，中医诊断参照《中华中医药学会.中医内科常见病诊疗指南中医病证部分》肺胀病痰热壅肺证的诊断标准。

1.3纳入标准

(1)符合上述诊断及辨证标准。

(2)年龄50～85岁。

(3)签署知情同意书。

1.4排除标准

(1)已出现呼吸衰竭者且估计生存时间小于1年者。

(2)伴有咯血或活动性肺结核者，伴严重心肝肾功能不全者。

(3)妊娠期妇女。

(4)近3个月内参加其他药物临床试验，影响本研究的效应指标观察者。

(5)智力障碍、精神障碍等患者。

(6)怀疑酒精、药物滥用病史，或根据研究者判断，具有降低入组可能性或使入组复杂化的其他病史，如工作环境经常变动，容易造成失访的情况。

2方法

2.1治疗方法

两组均采用西医综合治疗，包括抗生素(左氧氟沙星注射液每次0.5g，每天1次，静脉滴注)、糖皮质激素(甲强龙40mg，每天1次，静脉滴注)、支气管扩张剂(多索茶碱0.2g，每天1次，静脉滴注)等。治疗组在西医综合治疗基础上服用实施例1中药组合物的汤剂，处方：生麻黄9g，桂枝12g，龙胆草9g，细辛6g，干姜9g，生黄芪30g，生地12g，炒黄芩12g，蒲公英30g，紫花地丁30g，柯子肉12g，姜半夏12g，生甘草6g。每次1剂，分2次口服。对照组在西医治疗基础上服用《慢性阻塞性肺疾病中医诊疗指南(2011版)》推荐的清热化痰方，即：桑白皮12g、黄芩9g、苦杏仁9g、全瓜蒌15g、姜半夏9g、浙贝母9g、栀子9g、白头翁12g、鱼腥草18g、麦冬12g、陈皮9g。每次1剂，分2次口服。以上两组均治疗7天。

2.2观察指标与方法

分别于治疗前及治疗7天后观察下列各项指标。

2.2.1中医证候积分：将主症和次症分为正常、轻度、中度、重度4级。主症包括咳嗽、喘息、胸闷、咯痰，以无、轻、中、重分别计为0分、2分、4分、6分；次症包括发热、、胸痛、口渴、便秘，以无、轻、中、重分别计为0分、1分、2分、3分。

2.2.2临床疗效评判标准

临床控制：治疗后中医证候积分减少≥95％；显效：70％≤中医证候积分减少＜95％；有效：30％≤中医证候积分减少＜70％；无效：中医证候积分减少＜30％。

2.2.3呼吸困难评分(MMRC评分)标准

0分：除非剧烈运动外，一般不感到呼吸困难；1分：平地急走或上坡时气短；2分：平地步行因气短比同龄人慢，或以自己的步速行走时必须停下来喘气；3分：走平地100米或数分钟后即有气促；4分：明显气促，不能离开房屋，穿衣、脱衣有气促。

2.2.4辅助呼吸肌动用评分标准

0分：无明显颈部肌肉紧张或周期性收缩；1分：颈部肌肉紧张但无明显的肌肉活动；2分：可见颈部肌肉轻微的收缩活动；3分：颈部肌肉中度周期性收缩，不伴锁骨上窝和肋间内陷；4分：颈部肌肉强烈周期性收缩，伴锁骨上窝和肋间内陷；5分：颈部肌肉强烈周期性收缩，伴腹部矛盾运动。

2.2.5血C反应蛋白(CRP)、PCT水平

所有患者抽取外周静脉血。血CRP采用速率散射比浊法测定；血PCT采用ELISA法测定(美国BD公司的FACSVerse流式细胞仪)，均由上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院检验科和中西医结合研究所完成。

2.2.6住院天数记录两组患者住院天数并进行比较。

2.3统计学方法

采用SPSS16.0软件处理。计量资料数据符合正态分布且方差齐者采用两独立样本t检验，不符合正态分布的采用非参数检验；计数资料采用χ2检验。

3结果

3.1两组患者临床疗效比较

治疗组36例，完成随访33例；对照组33例，完成随访31例。结果如表1所示，治疗组总有效率为96.97％，对照组为96.77％，两组总有效率比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

表1两组患者临床疗效比较[例(％)]

组别	例数	临床控制	显效	有效	无效	总有效
							治疗组	33	0	6(18.18)	26(78.79)	1(3.03)	32(96.97)
对照组	31	0	3(9.68)	27(87.10)	1(3.22)	30(96.77)

3.2两组患者中医证候积分比较

如表2所示，两组治疗前中医证候总积分差异无统计学意义(P＞0.05)。两组治疗后与本组治疗前比较，中医证候总积分均显著下降(P＜0.01)；治疗后两组中医证候总积分比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

表2两组AECOPD痰热壅肺证患者中医证候积分比较(分，x±s)

组别	例数	治疗前	治疗后
				治疗组	28	12.26±3.77	5.62±2.41*
对照组	27	12.85±3.51	6.58±2.72*

注：与本组治疗前比较，*P＜0.01

统计两组治疗前后单项中医症候积分，治疗前两组单项中医证候积分比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)。治疗组中医证候积分治疗后均较治疗前显著降低(P＜0.05)，且治疗组喘息的证候积分较对照组显著下降(P＜0.05)，其他中医证候积分两组比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)。

3.3两组患者MMRC、辅助呼吸肌动用评分比较

如表3所示，两组治疗前MMRC、辅助呼吸肌动用评分比较差异无统计学意义(P＞0.05)；治疗后，两组MMRC、辅助呼吸肌动用评分均较本组治疗前显著改善(P＜0.01)，且治疗组MMRC评分优于对照组(P＜0.01)。

表3两组患者MMRC、辅助呼吸肌动用评分比较(分，x±s)

注：与本组治疗前比较，*P＜0.01；与对照组治疗后比较，△P＜0.01

3.4两组患者血CRP、PCT水平比较

如表4所示，治疗前两组患者血CRP、PCT水平比较差异无统计学意义(P＞0.05)。治疗组治疗后血CRP、PCT水平显著下降(P＜0.05)，对照组治疗后仅PCT下降(P＜0.05)。治疗后两组血CRP、PCT水平组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

表4两组患者血CRP、PCT水平比较(x±s)

注：与本组治疗前比较，*P＜0.01

3.5两组患者住院天数比较

治疗组平均住院(11.27±2.56)天，显著低于对照组的(13.85±5.42)天(P＜0.05)。

4结论

本发明的中药组合物联合西药治疗慢性阻塞性肺疾病疗效显著，与对照组清热化痰方相比，本发明能更好地缓解患者喘息中医症状、改善MMRC评分，缩短患者住院天数。AECOPD患者的血CRP和PCT水平是反映AECOPD细菌感染判断疗效和合理使用抗生素的重要指标。本发明的中药组合物联合西药常规治疗AECOPD能够降低患者血CRP和PCT水平，有助于AECOPD细菌感染控制；并能够改善患者的辅助呼吸肌动用评分，减轻呼吸肌的做功。

效果实施例2

1.材料与方法

1.1材料

人支气管上皮细胞16HBE购自基尔顿生物科技(上海)有限公司，DMEM培养液购自Hyclone公司，胎牛血清购自美国Gibco公司，LPS购自美国Sigma公司，CCK-8(cellcounting kit-8)试剂购自SAB公司，BCA蛋白定量试剂盒购自thermo公司，一抗购自美国abcam公司，二抗购自碧云天公司。

1.2细胞培养

16HBE细胞采用含10％胎牛血清，1％双抗(青链霉素混合液)的1640培养液，置于37℃，5％CO₂的培养箱中进行培养，显微镜下观察细胞为贴壁细胞。

1.3LPS诱导

根据LPS对16HBE细胞的刺激时长分组为0、0.5、1、6、12及24h组，其中0h组无LPS刺激，仅给予同体积磷酸盐缓冲液处理，其余各组LPS刺激浓度为1mg/L。刺激完毕后分别收集细胞裂解上清液，测定MUC5AC蛋白和SOCSl蛋白相对表达量，观察各组MUC5AC和SOCSl的表达水平，确定后续实验的刺激时长。

1.4药物制备

取实施例1的中药组合物，配成相当于8.1g/ml总药物浓度和0.081g/L(即0.001％)、0.405g/L(即0.005％)、0.81g/L(即0.01％)作用于细胞的药物浓度。

1.5最适药物浓度

将处于对数生长期的细胞经胰蛋白酶消化，显微镜下计数后制成5×10⁴个细胞/ml的细胞悬液。分别取100μl至96孔培养板，每组细胞每块板接种3个同样的孔作为复孔，5×10³个细胞/孔，以100μl培养液做空白对照，37℃培养过夜。每块板设置八个分组。空白组：加入不含药物的1640完全培养基；中药组：分别加入含有0.001％、0.005％、0.01％中药的1640完全培养基；LPS组：加入含有1mg/L LPS的1640完全培养基；LPS+中药组：分别加入含有1mg/L LPS+0.001％中药、1mg/L LPS+0.005％中药、1mg/L LPS+0.01％中药的1640完全培养基。分别于给药后0h、24h、48h、72h，按1:10体积比混合Cell Counting Kit-8(CCK-8)和无血清必需基本培养基，每孔100μL加入待测孔中，在37℃，5％CO₂培养箱中孵育1h。用酶标仪测定450nm波长吸光度。记录每块板的数值。

1.6实验分组

将细胞从培养箱中取出，根据实验目的设置组别如下：对照组：无LPS刺激，仅给予同体积磷酸盐缓冲液处理；高黏液表达组(LPS)：仅LPS刺激浓度为1mg/L，作用时间6h；中药干预组：加入1mg/L LPS刺激6h，同时予0.005％中药处理16HBE细胞48h。测定中药和LPS作用后MUC5AC蛋白和SOCS1蛋白的相对表达量，观察各组MUC5AC和SOCS1的表达水平。

1.7Western印迹法检测细胞裂解液SOCSl、MUC5AC蛋白相对表达量

常规提取细胞裂解液，经二喹啉甲基法检测并调节各组蛋白浓度后，经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳，聚偏二氟乙烯膜转膜，5％脱脂牛奶室温封闭1h后，以相应一抗在4℃下孵育过夜，辣根过氧化物酶标记的二抗在37℃孵育1h后，增敏化学发光法显色5min后发光显像，与内参GAPDH进行对比。放入成像系统中进行扫描，以目的条带与内参条带的灰度比值表示目的蛋白相对表达量。

1.8统计学处理

用SPSS 19.0软件进行统计学分析。所有实验重复3次，正态分布的数据以表示，组间差异比较用t检验，多组间差异比较用单因素方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

结果显示：培养基中中药溶液的浓度高时对16HBE有抑制生长的作用，当浓度为0.005％时中药溶液对LPS刺激后的细胞治疗效果最好，后续实验药物作用浓度选择0.005％，作用时间48h。LPS能刺激16HBE细胞表达MUC5AC，抑制SOCS1的表达；中药处理能抑制LPS诱导的MUC5AC表达(P＜0.01)，相对表达量降低0.1522±0.0049，促进LPS作用后SOCS1的表达(P＜0.01)，相对表达量增加0.1186±0.0041。本发明的中药组合物能抑制脂多糖诱导的气道黏蛋白MUC5AC表达，作用机制可能与SOCS1有关。

效果实施例3

1.大鼠气道粘液高分泌模型

健康雄性Wistar大鼠，中性粒细胞弹力酶用0.9％生理盐水配成100U/ml，第一次以10U/g的剂量和0.2ml/min的速率超声雾化给药，以后每日按1U/g的剂量以相同速率给药，每日1次，连续3周。

2.分组及处理

造模成功后，采用随机数字表法随机分为以下几组：(1)正常对照组，未予NE刺激的正常大鼠；(2)模型组，NE刺激的大鼠，不予任何处理，只给予生理盐水；(3)中药一组：NE刺激后，给予中药煎煮液(生麻黄9份，桂枝12份，龙胆草9份，细辛6份，干姜9份，生黄芪30份，生地12份，炒黄芩12份，蒲公英30份，紫花地丁30份，柯子肉12份，姜半夏12份，生甘草6份)，剂量为20mg/kg·d，灌胃给药，每日3次。(4)中药二组：NE刺激后，给予中药煎煮液(生麻黄9份，桂枝12份，龙胆草9份，细辛6份，干姜9份，生黄芪30份，生地12份，炒黄芩12份，姜半夏12份，生甘草6份)，剂量为20mg/kg·d，灌胃给药，每日3次。(3)中药三组：NE刺激后，给予中药煎煮液(生麻黄15份，桂枝15份，龙胆草15份，细辛12份，干姜15份，生黄芪15份，生地15份，炒黄芩12份，蒲公英12份，紫花地丁12份，柯子肉20份，姜半夏20份，生甘草6份)，剂量为20mg/kg·d，灌胃给药，每日3次。

3.ELISA检测支气管肺泡灌洗液中MUC5AC含量

各组大鼠腹腔麻醉后颈部切开插入气管导管，4℃无钙镁Hanks液10ml分两次灌洗，回收BALF不少于5ml，1000r/min离心10min。取BALF上清液0.1ml包被酶标板，4℃过夜，用含1％牛血清白蛋白的PBS和0.05％Tween20室温封闭1h,1:500稀释的抗大鼠气道MUC单抗RTE11100μl,37℃孵育1h,1:1000稀释的辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG 100μl,37℃孵育1h,底物溶液100μl,37℃显色15min后停止反应。于492nm处测光密度值作为MUC含量的相对值。

4.结果

NE处理诱导大鼠气道粘蛋白合成增加，予以中药治疗后，气管肺泡灌洗液中MUC5AC含量降低。表中数据显示：本发明中药组合物能抑制NE诱导的气道黏蛋白MUC5AC表达，且中药一组效果最优。

表5不同中药组对支气管肺泡灌洗液中MUC5AC含量的影响

组别	MUC5AC
		对照组	0.28±0.09
模型组	0.96±0.21*
		中药一组	0.37±0.10△
中药二组	0.86±0.26
		中药三组	0.81±0.35

注：*与对照组相比P<0.05，△与模型组相比P<0.05。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种治疗气道粘液高分泌的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物由以下重量份的原料药制成：生麻黄4-14份，桂枝7-17份，龙胆草4-14份，细辛1-11份，干姜4-14份，生黄芪25-35份，生地7-17份，炒黄芩7-17份，蒲公英25-35份，紫花地丁25-35份，柯子肉7-17份，姜半夏7-17份，生甘草1-11份。

2.根据权利要求1所述治疗气道粘液高分泌的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物由以下重量份的原料药制成：生麻黄6-12份，桂枝9-15份，龙胆草6-12份，细辛3-9份，干姜6-12份，生黄芪27-33份，生地9-15份，炒黄芩9-15份，蒲公英27-33份，紫花地丁27-33份，柯子肉9-15份，姜半夏9-15份，生甘草3-9份。

3.根据权利要求1所述治疗气道粘液高分泌的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物由以下重量份的原料药制成：生麻黄9份，桂枝12份，龙胆草9份，细辛6份，干姜9份，生黄芪30份，生地12份，炒黄芩12份，蒲公英30份，紫花地丁30份，柯子肉12份，姜半夏12份，生甘草6份。

4.根据权利要求1-3任一所述中药组合物，其特征在于，按照中药常规制备方法制备成临床上可接受的药物制剂。

5.根据权利要求4所述的中药组合物，其特征在于，所述药物制剂为颗粒剂、散剂、胶囊剂、片剂、合剂或口服液。

6.权利要求1-3任一所述的中药组合物在制备治疗或抑制气道粘液高分泌的药物中的应用。

7.权利要求1-3任一所述的中药组合物在制备治疗慢性气道炎症性疾病的药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述慢性气道炎症性疾病包括慢性阻塞性肺疾病、支气管哮喘、支气管扩张症、肺囊性纤维化。