CN108201544A - 红藜萃取物于调控nos3、plat、f3及／或serpine1基因表现的应用 - Google Patents
红藜萃取物于调控nos3、plat、f3及／或serpine1基因表现的应用 Download PDFInfo
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Abstract
一种使用红藜(Chenopodiumformosanum)萃取物制造一组合物的用途，其中该组合物用于以下的至少一者：提升NOS3基因表现、提升PLAT基因表现、降低F3基因表现、及降低SERPINE1基因表现，从而达到治疗或预防与NOS3基因、PLAT基因、F3基因及/或SERPINE1基因相关的疾病的效果。
Description
技术领域
本发明涉及红藜萃取物的应用，尤其涉及红藜水萃物的应用，包括使用该萃取物治疗或预防与NOS3基因、PLAT基因、F3基因、及/或SERPINE1基因相关的疾病，尤其涉及使用该萃取物抑制血栓形成、分解血栓及辅助调节血压中的至少一者。
背景技术
止血作用对于生物体的生存至关重要，然而，异常的凝血作用与血栓形成容易引起例如静脉血栓、肺栓塞、中风、心肌梗塞、高血压等高致死率的疾病的发生。形成异常或过量的血栓的因素众多，常见的原因包括血管内皮受损、血液停滞、以及凝血功能亢进等。患有心脏病、高血压、高血脂、糖尿病、癌症等疾病的患者，以及长时间久坐、缺乏运动者等，都为血栓相关疾病的高危险群。
目前临床上对于血栓相关疾病的主要治疗方式，是采取对患者投予溶血栓药物(例如：胞浆素原活化剂(tissue-type plasminogen activator，tPA))或抗凝血剂(例如：肝素(heparin)及苯甲香豆醇(warfarin))，但现有的溶血栓药物有造成出血不止的危险性且无法溶解较大的血栓，抗凝血剂则无法使已形成的血栓变小。因此，持续开发可有效抑制血栓形成及/或分解血栓、且不易产生副作用的药物或方法有相当的必需性及迫切性。
研究已知，血栓的形成及分解受到NOS3、PLAT、F3及SERPINE1等基因的调节。其中，F3基因及SERPINE1基因的过度表现会造成血栓形成，PLAT基因的表现量提升则可促进已形成的血栓进行分解，而NOS3基因的表现量提升有助于促进血管扩张、降低血小板堆积，从而可辅助调节血压及抑制血栓形成。因此，若能提升NOS3基因表现、提升PLAT基因表现、降低F3基因表现及/或降低SERPINE1基因表现，即可有效调节血压、抑制血栓形成及/或分解血栓。
本申请发明人研究发现，红藜萃取物具有调控NOS3、PLAT、F3及SERPINE1等基因的表现的效果，故可用于抑制血栓形成、分解血栓及辅助调节血压，且可用于治疗或预防与前述基因相关的疾病。
发明内容
本发明的一目的，在于提供一种使用红藜(Chenopodiumformosanum)萃取物制造一组合物的用途，其中该组合物用于以下的至少一者：提升NOS3基因表现、提升PLAT基因表现、降低F3基因表现及降低SERPINE1基因表现。较佳地，该红藜萃取物为红藜水萃物，且该组合物为一医药组合物或食品组合物。
根据本发明所提供的医药组合物，可用于治疗心血管疾病(包括心肌梗塞、左心室功能缺损、慢性阻塞性肺高压、高血压、及血栓)、治疗水脑畸形、治疗疱疮、治疗肥胖、预防心血管疾病、预防水脑畸形、预防疱疮、预防肥胖、预防胎儿死亡、及推迟老化的至少一者，尤其用于抑制血栓形成及/或分解血栓。较佳地，该医药组合物呈一选自以下群组的剂型：口服、静脉注射及皮下注射。
根据本发明所提供的食品组合物，是用于辅助抑制血栓形成、辅助分解血栓及/或辅助调节血压。较佳地，该食品组合物为一健康食品、保健食品、机能性食品、营养补充食品或特殊营养食品。更佳地，该食品组合物为一乳制品、肉类加工品、面包类、面食品、饼干、口含锭、胶囊、果汁类、茶类、运动饮料或营养饮料。
本发明的另一目的，在于提供一种提升NOS3基因表现、提升PLAT基因表现、降低F3基因表现及/或降低SERPINE1基因表现的方法，其包含对一有需要的个体投予一有效量的红藜萃取物，较佳投予红藜水萃物。该方法用于治疗心血管疾病(包括心肌梗塞、左心室功能缺损、慢性阻塞性肺高压、高血压、及血栓)、治疗水脑畸形、治疗疱疮、治疗肥胖、预防心血管疾病(包括心肌梗塞、左心室功能缺损、慢性阻塞性肺高压、高血压、及血栓)、预防水脑畸形、预防疱疮、预防肥胖、预防胎儿死亡、及推迟老化的至少一者。较佳地，该方法用于辅助调节血压、抑制血栓形成及/或分解血栓。
本发明的有益效果：
提升NOS3基因表现、提升PLAT基因表现、降低F3基因表现及降低SERPINE1基因表现，从而达到治疗或预防与NOS3基因、PLAT基因、F3基因及/或SERPINE1基因相关的疾病的效果。
附图说明
图1所示为不同组别HUVEC细胞的NOS3基因的表现量(相对于控制组的表现量)，其中，“控制组”是于不含红藜萃取物与藜麦萃取物的培养液中培养24小时，“红藜组”与“藜麦组”则分别于含有红藜萃取物或藜麦萃取物的培养液中培养24小时；
图2所示为不同组别HUVEC细胞的PLAT基因的表现量(相对于控制组的表现量)，其中包括“控制组”、“红藜组”及“藜麦组”的结果；以及
图3所示为不同组别HUVEC细胞的F3及SERPINE1基因的表现量(相对于控制组的表现量)，其中包括“控制组”、“红藜组”及“藜麦组”的结果。
具体实施方式
以下将根据本发明的部分具体实施例进行描述；但是，在不背离本发明精神下，本发明还可以多种不同形式的实施例来实践，不应将本发明保护范围解释为限于说明书所具体陈述的或以权利要求书所界定的。
除非文中有另外说明，于本说明书中(尤其是在权利要求书中)所使用的“一”、“该”及类似用语应理解为包括单数及复数形式；所谓“治疗”，不应被解释为治疗一个体直至完全恢复，而应包括将一个体的疾病进展或症状维持在一实质上静态的程度、增加一个体的恢复速率、改善一具体病况的严重性或提高一患者的生命质量；所谓“预防”是指抑制或防止一具体病况的发作或维持敏感个体的良好健康状态或建立该个体对疾病的耐受性；所谓“调节”是指正向调控(包括诱导、刺激、及增强)或负向调控(包括抑制、及减弱)以使个体朝向所述生理机能的正常状态；所谓“调节血压”是指朝正常值的方向改变血压数值；所谓“有效量”，是指投予至个体时，可有效地至少部分改善怀疑个体的病情的物质数量；所谓“个体”是指哺乳动物，该哺乳动物可以为人类或非人动物。
本发明所涉及的红藜(Chenopodiumformosanum)，又称台湾藜，是台湾原生种植物，也为台湾原住民传统的粮食作物，具有极高的营养价值。于以下实施例中作为对照组的藜麦(Chenopodium quinoa)，又称印地安麦，其原产地为美洲。红藜与藜麦在外观、营养成分等方面都有不同，但一般大众仍常因此二者的命名相似而将其混淆。
如前述，本申请发明人发现红藜萃取物具有调控NOS3、PLAT、F3、及SERPINE1等基因表现的效果。针对前述基因，已知NOS3基因表现低下与心肌梗塞及左心室功能缺损相关。因此，若可提升NOS3基因的表现，则可治疗或预防心肌梗塞及左心室功能缺损。有关NOS3基因与心肌梗塞及左心室功能缺损的关联性，可参见例如：Depletion of circulatingblood NOS3 increases severityof myocardial infarction and left ventriculardysfunction.Basic Res Cardiol.109(1):398(2014)，该文献的全文并于此处以供参考。
已知PLAT基因表现低下与血栓形成、水脑畸形及胎儿死亡相关。因此，若可提升PLAT基因的表现，则可治疗或预防血栓、治疗或预防水脑畸形及预防胎儿死亡。有关PLAT基因与血栓形成、水脑畸形及胎儿死亡的关联性，可参见例如：A lethal phenotypeassociated with tissue plasminogen deficiencyin humans.Hum Genet.135(10):1209-11(2016)，该文献的全文并于此处以供参考。
已知F3基因的过度表现与血栓、慢性阻塞性肺高压及疱疮相关。因此，若可降低F3基因的表现，则可治疗或预防血栓、慢性阻塞性肺高压及疱疮。有关F3基因与血栓、慢性阻塞性肺高压及疱疮的关联性，可参见例如：The role of mononuclear cell tissuefactor and inflammatorycytokines in patients with chronic thromboembolicpulmonaryhypertension.J Thromb Thrombolysis.42(1):38-45(2016)、及Tissue Factorin Dermatitis Herpetiformis and Bullous Pemphigoid:Link between Immune andCoagulation System in Subepidermal Autoimmune Bullous Diseases.Mediators ofInflammation.2015,Article ID 870428,9 pages，这些文献的全文并于此处以供参考。
SERPINE1基因的过度表现则与老化、肥胖及心血管疾病(包括血栓)相关。因此，若可降低SERPINE1基因的表现，则可治疗或预防肥胖、治疗或预防心血管疾病、及推迟老化。有关SERPINE1基因与老化、肥胖及心血管疾病的关联性，可参见例如：PlasminogenActivator Inhibitor-1 Is a Marker and a Mediator ofSenescence.ArteriosclerThrombVasc Biol.37(8):1446-1452(2017)、及PAI-1 and TNF-α profiles of adipose tissue inobese cardiovascular disease patients.Int JClinExpPathol 8(12):15919-15925(2015)，这些文献的全文并于此处以供参考。
因此，本发明提供一种使用红藜萃取物制造一组合物的用途，其中该组合物用于提升NOS3基因表现、提升PLAT基因表现、降低F3基因表现及/或降低SERPINE1基因表现。该组合物可以是一医药组合物或一食品组合物。根据本发明所提供的医药组合物，可用于以下的至少一者：治疗心血管疾病(包括心肌梗塞、左心室功能缺损、慢性阻塞性肺高压、高血压、及血栓)、治疗水脑畸形、治疗疱疮、治疗肥胖、预防心血管疾病(包括心肌梗塞、左心室功能缺损、慢性阻塞性肺高压、高血压、及血栓)、预防水脑畸形、预防疱疮、预防肥胖、预防胎儿死亡及推迟老化。根据本发明所提供的医药组合物，尤其是用于抑制血栓形成及/或分解血栓。根据本发明所提供的食品组合物，是用于辅助抑制血栓形成、辅助分解血栓及/或辅助调节血压。
本发明所采用的红藜萃取物可通过包含如下步骤的操作提供：(a)以一极性溶剂萃取红藜，以提供一粗萃液；(b)对该粗萃液进行离心处理，取上清液进行过滤，以提供一滤液；以及(c)对该滤液进行减压浓缩，获得一浓缩萃取液(此即，本发明的红藜萃取物)。其中，本发明所采用的红藜可以是未脱壳的红藜或经脱壳的红藜。
于步骤(a)中，该极性溶剂可以为水、醇(例如C1-C4醇)或其组合，且可视需要调整极性溶剂与红藜的用量比率。一般而言，极性溶剂的用量并无特殊限制，只要可以使原料均匀分散即可。举例言之，可于步骤(a)采用极性溶剂与红藜的体积比为约1：1至约20：1的用量。于本发明一具体实施例中，是以水作为极性溶剂，并以体积比约10：1的水：红藜进行步骤(a)的萃取。
于步骤(a)中，可视所采用的极性溶剂来选用合宜的萃取时间。以采用水作为极性溶剂且水：红藜的体积比为约10：1为例，通常萃取历时至少0.5小时，较佳至少1.5小时，更佳至少3小时。此外，可视需要辅以例如加温、冷却、超音波等其它操作以进行步骤(a)。举例言之，可于50至100℃下进行步骤(a)。于本发明一具体实施例中，是于75℃下进行步骤(a)，历时0.5小时。另外可视需要于进行步骤(a)之前，先以捣碎、研磨、切碎等方式使红藜成为体积尽可能小的颗粒，以提高萃取效果。
于步骤(c)中，可视需要调整减压浓缩时的温度。举例言之，可于45至70℃下进行步骤(c)的减压浓缩。于本发明一具体实施例中，于60℃下进行步骤(c)的减压浓缩。根据本发明所采用的红藜萃取物，也可以是一干燥物，此干燥物可通过干燥步骤(c)所得的浓缩萃取液而提供。为尽可能达到最大的萃取效益，视需要地，可于进行步骤(b)之前，以相同或不同的极性溶剂对红藜进行重复萃取，并合并该多次萃取所得的萃取液以提供进行步骤(b)的粗萃物；也可重复进行步骤(b)、步骤(c)以及前述视需要的其它操作的循环。
根据本发明所提供的医药组合物可呈任何合宜的型式，并无特殊限制，视所欲的用途而呈对应的合宜剂型。举例言之，但不以此为限，该医药组合物可以口服或非经口服(例如：皮下及静脉内)的投药方式施用至有需要的个体上。其中，视使用形式及用途而定，可选用合宜的载剂以提供该医药组合物，其中，该载剂包括赋形剂、稀释剂、辅助剂、安定剂、吸收延迟剂、崩散剂、增溶剂、乳化剂、抗氧化剂、黏合剂、结合剂、增黏剂、分散剂、悬浮化剂、润滑剂、吸湿剂等。
以适于口服的剂型为例，于根据本发明所提供的医药组合物中可含有任何不会不利影响活性成分(即，红藜萃取物)的所欲效益的医药上可接受的载剂，例如：水、食盐水、葡萄糖(dextrose)、甘油、乙醇或其类似物、纤维素、淀粉、糖膨润土(sugar bentonite)及前述的组合。可利用任何合宜的方法，将该医药组合物以适于口服投药的剂型提供，例如：锭剂(例如糖衣锭)、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、流浸膏剂、溶液剂、糖浆剂、悬液剂、酊剂等。
至于适于皮下或静脉注射的针剂或点滴剂，则可于根据本发明所提供的医药组合物中含有一或多种例如等张溶液、盐类缓冲液(如磷酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液)、增溶剂、乳化剂、5％糖溶液、以及其他载剂等成分，以静脉输注液、乳剂静脉输注液、干粉注射剂、悬液注射剂或干粉悬液注射剂等剂型提供该医药组合物。或者，可将该医药组合物制备成一注射前固体，以可溶于其他溶液或悬浮液中的剂型、或可乳化的剂型提供该注射前固体，并于投予至有需要的个体之前，将该注射前固体溶于其他溶液或悬浮液中或将其乳化，提供所欲的注射剂。
根据本发明所提供的医药组合物可以一日一次、一日多次或数日一次等不同投药频率施用，视投予个体的需求、年龄、体重、及健康况状而异。于根据本发明所提供的医药组合物中，可视实际应用需求，调整红藜萃取物于组合物中的含量比例。此外，该医药组合物可视需要另外包含一或多种其他活性成分(例如胞浆素原活化剂、肝素及苯甲香豆醇等)，或者与含有该一或多种其他活性成分的药物并用，以进一步加强该医药组合物的功效或增加制剂配方的运用灵活性与调配度，只要该其他活性成分对本发明活性成分(即，红藜萃取物)的效益没有不利的影响即可。
视需要地，可于根据本发明所提供的医药组合物或食品组合物中另外含有合宜用量的添加剂，例如可提高该医药组合物或食品组合物于服用时的口适感及视觉感受的调味剂、调色剂、着色剂等，以及可改善该医药组合物或食品组合物的稳定性及储存性的缓冲剂、保存剂、防腐剂、抗菌剂、抗真菌剂等。
根据本发明所提供的食品组合物可以是健康食品、保健食品、机能性食品、营养补充食品或特殊营养食品，且可制成例如乳制品、肉类加工品、面包类、面食品、饼干、口含锭、胶囊、果汁类、茶类、运动饮料、营养饮料等产品，但不以此为限。较佳地，根据本发明的食品组合物以健康食品的型式提供。
根据本发明所提供的健康食品、保健食品、机能性食品、营养补充食品及特殊营养食品可以一日一次、一日多次或数日一次等不同频率食用，视投予个体的年龄、体重及健康状况而异。也可针对特定族群调整根据本发明所提供的健康食品、保健食品、机能性食品、营养补充食品及特殊营养食品中红藜萃取物的含量，较佳为调整至每日应服用的量。
可于本发明健康食品、保健食品、机能性食品、营养补充食品及/或特殊营养食品的外包装标示建议使用量、特定族群(例如高血压患者、中风患者、孕妇等)的使用标准及条件或与其他食品或医药共同服用的建议事项，以利用户在无医师、药师或相关执事人员指导下可在家自行服用而无安全疑虑。于根据本发明所提供的食品组合物中，有关该红藜萃取物的态样以及相关的应用，均如上述的说明。
本发明也提供一种用于提升NOS3基因表现、提升PLAT基因表现、降低F3基因表现及/或降低SERPINE1基因表现的方法，其包含对一有需要的个体投予一有效量的红藜萃取物。有关该红藜萃取物的形态、投予途径、投予形式、施用频率、以及相关的应用，均如上述的说明。
现以下列实施例进一步例示说明本发明。其中这些实施例仅提供作为说明，而非用以限制本发明的保护范围。本发明的保护范围应以权利要求书所界定为准。
实施例
制备实施例
A.红藜萃取物的制备
将红藜(学名：Chenopodiumformosanum、产地：台湾屏东县)进行以下操作处理，以提供红藜萃取物：
1、以研磨的方式将红藜粉碎，并将粉碎后的红藜以10网目(mesh)的筛网进行过滤，以提供一红藜粉末；
2、将步骤1的红藜粉末与水混和(红藜粉末与水的体积比为1：10)，并置于75℃下进行萃取，历时0.5小时，以提供一粗萃液；
3、待步骤2的粗萃液冷却至室温(约25℃)，以5000r.p.m.的转速对其进行离心，历时10分钟，再以400网目的滤网进行过滤，以提供一滤液；
4、于60℃下，对步骤3的滤液进行减压浓缩，以提供一浓缩萃取液(即，本发明的红藜萃取物)。
B.蔾麦萃取物的制备
将藜麦(学名：Chenopodium quinoa、产地：智利)比照上述红藜萃取物的制备步骤进行萃取，以提供一藜麦萃取物。
C.细胞的处理
将人类脐带静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell，HUVEC)(购自ATCC，产品编号CRT-1730)接种于6-孔盘中(每孔1.5x105个细胞)中，培养24小时后，将细胞分为控制组、红藜组及藜麦组(共三组，各组均重复两遍)，并分别以如下培养基进行培养，历时24小时：
1、控制组：含有0.1毫克/毫升的肝素、0.03-0.05毫克/毫升的内皮细胞生长添加剂、10％的胎牛血清的F-12K培养基；
2、红藜组：如控制组的培养基，但另外添加0.3125毫克/毫升由制备实施例A获得的红藜萃取物；
3、藜麦组：如控制组的培养基，但另外添加0.3125毫克/毫升由制备实施例B获得的藜麦萃取物。
其后，分别收集上述各组细胞，以RNA萃取套组(RNA Extraction Kit，购自Geneaid公司)进行RNA萃取，再以反转录酶(III Reverse Transcriptase，购自Invitrogrn公司)将该RNA反转录为cDNA。接着，使用ABI Step One Plus仪器及KAPASYBR FAST套组对前述的cDNA进行qPCR(quantitative polymerase chain reaction)，以检测各组细胞的血管扩张相关基因(包括NOS3)、血栓分解相关基因(包括PLAT)、及血栓形成相关基因(包括F3及SERPINE1)的表现量。以控制组的结果为基准(即，将控制组的基因表现量设定为1倍)，计算其他各组的相对基因表现量。结果示于表1、及图1至图3。
表1
*表示p<0.05；**表示p<0.01
由表1及图1可知，相较于控制组，红藜组及藜麦组的NOS3基因表现量都有增加，其中红藜组的增加趋势更为显著。前述结果显示，本发明的红藜萃取物确实可以提升NOS3基因表现量，可有效促进血管扩张、降低血小板堆积，达到辅助调节血压及抑制血栓形成的效果，且效果较藜麦萃取物为佳。
由表1及图2可知，相较于控制组，红藜组的PLAT基因表现量显著增加，而藜麦组的PLAT基因表现量则无明显变化。前述结果显示，本发明的红藜萃取物确实可提升PLAT基因表现量，可有效促进已形成的血栓进行分解。然而，藜麦萃取物则无法达成前述效果。
由表1及图3可知，相较于控制组，红藜组的F3及SERPINE1基因表现量都有降低。藜麦组的F3基因表现量虽有降低，但SERPINE1基因表现量并无明显变化。前述结果显示，本发明的红藜萃取物确实可降低F3及SERPINE1基因表现量，可有效抑制血栓形成。然而，藜麦萃取物无法有效达成前述效果。
上述结果显示，相较于藜麦萃取物，本发明的红藜萃取物于提升NOS3基因表现、提升PLAT基因表现、降低F3基因表现及降低SERPINE1基因表现的效果更为优异，更可用于治疗心血管疾病、治疗水脑畸形、治疗疱疮、治疗肥胖、预防心血管疾病、预防水脑畸形、预防疱疮、预防肥胖、预防胎儿死亡、及推迟老化的至少一者，尤其是用于抑制血栓形成、分解血栓及/或辅助调节血压。
Claims (9)
1.一种使用红藜萃取物制造一组合物的用途，其特征在于，该组合物用于以下的至少一者：提升NOS3基因表现、提升PLAT基因表现、降低F3基因表现及降低SERPINE1基因表现。
2.如权利要求1所述的使用红藜萃取物制造一组合物的用途，其特征在于，该红藜萃取物为红藜水萃物。
3.如权利要求1或2所述的使用红藜萃取物制造一组合物的用途，其特征在于，该组合物为一医药组合物或食品组合物。
4.如权利要求3所述的使用红藜萃取物制造一组合物的用途，其特征在于，该组合物为医药组合物，且该医药组合物用于以下的至少一者：治疗心血管疾病、治疗水脑畸形、治疗疱疮、治疗肥胖、预防心血管疾病、预防水脑畸形、预防疱疮、预防肥胖、预防胎儿死亡及推迟老化。
5.如权利要求3所述的使用红藜萃取物制造一组合物的用途，其特征在于，该组合物为医药组合物，且该医药组合物用于抑制血栓形成及/或分解血栓。
6.如权利要求3所述的使用红藜萃取物制造一组合物的用途，其特征在于，该组合物为医药组合物，且该医药组合物呈一选自以下群组的剂型：口服、静脉注射及皮下注射。
7.如权利要求3所述的使用红藜萃取物制造一组合物的用途，其特征在于，该组合物为食品组合物，且该食品组合物用于辅助抑制血栓形成、辅助分解血栓及/或辅助调节血压。
8.如权利要求7所述的使用红藜萃取物制造一组合物的用途，其特征在于，该食品组合物为一健康食品、保健食品、机能性食品、营养补充食品或特殊营养食品。
9.如权利要求7所述的使用红藜萃取物制造一组合物的用途，其特征在于，该食品组合物为一乳制品、肉类加工品、面包类、面食品、饼干、口含锭、胶囊、果汁类、茶类、运动饮料或营养饮料。
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