CN108205032A

CN108205032A - 一种复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量的检测方法

Info

Publication number: CN108205032A
Application number: CN201711489287.9A
Authority: CN
Inventors: 陶映娴; 林孝崇; 焦伟丽; 寇贺红; 赵奉君; 倪凯燕; 向聪; 李莉
Original assignee: GUANGZHOU HIGH MACHINERY VESTIBULE SCHOOL; Foshan Nanhai Eastern Along Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: GUANGZHOU HIGH MACHINERY VESTIBULE SCHOOL; Foshan Nanhai Eastern Along Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2017-12-29
Filing date: 2017-12-29
Publication date: 2018-06-26

Abstract

本发明提供了一种复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量的检测方法。本发明检测方法利用高效液相色谱法对复方酮康唑软膏中酮康唑成分的液相含量进行检测。本发明检测方法专属性强、分析时间短，而且精密度高、重现性好、准确度高；同时，通过对于流动相溶液种类和配比的优化，也使得本发明检测方法检测效果更优，从而提高了检测的重现性和耐用性，因而更适合检测复方酮康唑软膏，且减少操作误差引起的检测结果偏差，也避免了影响有效成分的提取效果、污染实验室环境、伤害分析人员健康。

Description

一种复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量的检测方法

技术领域

本发明涉及兽药分析领域，具体而言，涉及一种复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量的检测方法。

背景技术

复方酮康唑软膏是兽用外用药，属于抗微生物药，适用于治疗由于真菌、厌氧菌等引起的犬猫细菌性皮肤病，主要成分是甲硝唑、酮康唑、薄荷脑。

酮康唑为合成的咪唑类抗真菌药，对全身及浅表皮肤真菌(小孢子菌、表皮癣菌和毛发癣菌)均有抑菌作用，可用于防治皮肤真菌感染。

目前国标上复方酮康唑软膏的含量检测方法(即《兽药国家标准汇编——兽药地方标准上升国家标准》(第三册)“复方酮康唑软膏”质量标准规定的【含量测定】项下的酮康唑测定法)是样品经萃取后以紫外分光光度计检测吸光度测定含量，此方法操作较繁琐、耗时较长，且操作误差造成的含量损耗也较多，检测过程中还需要注意每一步的操作是否规范，需要严格控制每一步的损耗，稍有不慎就会对检测结果的精密度、重现性、准确性造成较大影响。

高效液相色谱法具有分离效率高、选择性好、检测灵敏度高、操作自动化、应用范围广等优点，因此为了解决国标方法的缺点，建立一个专属性更强、分析时间更短、精密度和重现性更好、准确度更高的液相色谱法是很好的选择。

但无论是现有技术或者国际/国家标准中，还没有对于复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量进行准确检测的方法。虽然《中国药典》2015年版中所公开的“酮康唑乳膏”含量测定方法能够在一定程度上提供复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量测定的解决方案，然而，药典中所公开的方法仍然存在一些弊端，不仅会影响测定结果的重复性、准确性，而且会对于检测人员的健康造成较大的伤害。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量的检测方法，本发明检测方法操作简单，而且能够提高检测效率，并准确、有效地测定复方酮康唑软膏中酮康唑的含量。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量的检测方法，所述检测方法包括：

利用高效液相色谱法对复方酮康唑软膏中酮康唑成分的液相含量进行检测；

其中，供试品溶液制备：取复方酮康唑软膏，置于量瓶中，加溶液，并超声将酮康唑溶解；放冷，以溶液稀释至刻度后摇匀，冰浴冷却后立即滤过，取续滤液放置至室温，作为供试品溶液；

对照品溶液制备：将酮康唑以溶液溶解后稀释，作为对照品溶液。

优选的，本发明所述的复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量的检测方法中，复方酮康唑软膏的质量克数与量瓶的容量毫升数之比为1:10。

优选的，本发明所述的复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量的检测方法中，超声的时间为20～50min；更优选的，超声的时间为30～40min。

优选的，本发明所述的复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量的检测方法中，对照品溶液中酮康唑的含量为1mg/ml。

优选的，本发明所述的复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量的检测方法中，所述高效液相色谱法中，采用下列条件进行梯度洗脱：

时间/min	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	65～75	25～35
7	55～65	35～45
			10	55～65	35～45
13	45～55	45～55
			18	45～55	45～55
19	65～75	25～35
			22	65～75	25～35

其中，流动相A为硫酸氢四丁基铵溶液，流动相B为甲醇；更优选的，所述硫酸氢四丁基铵溶液的浓度为0.02mol/L。

时间/min	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	70	30
7	60	40
			10	60	40
13	50	50
			18	50	50
19	70	30
			22	70	30

优选的，本发明所述的复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量的检测方法中，所述高效液相色谱法采用如下条件：

柱温：30℃；流速：1.0ml/min；检测波长：240nm；进样量：10μL；理论板数：按酮康唑峰计不低于2000。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明检测方法专属性强、分析时间短，而且精密度高、重现性好、准确度高；

同时，相较于现有技术中最为相关的酮康唑乳膏的液相含量测定方法(《中国药典》2015年版中所公开)而言，本发明检测方法更适合检测复方酮康唑软膏，通过对于流动相溶液种类和配比的优化，也使得本发明检测方法检测效果更优，从而提高了检测的重现性和耐用性；

进一步的，本发明检测方法能减少操作误差引起的检测结果偏差，也避免了影响有效成分的提取效果、污染实验室环境、伤害分析人员健康。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

有鉴于现有测定方法并不适用于复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量的检测，本发明特提供了一种新的检测方法，从而能够高效、准确的测定复方酮康唑中酮康唑的含量，并且本发明检测方法还具有良好的重现性和耐用性，而且还能够避免对于分析人员的伤害。

具体的，本发明利用高效液相色谱法对复方酮康唑软膏中酮康唑成分的液相含量进行检测，并分别对供试品溶液和对照品溶液进行高效液相色谱分析，再根据测试图谱采用外标法以峰面积计算得出酮康唑的含量。

本发明测试方法具体包括如下步骤：

供试品溶液制备：取复方酮康唑软膏，置于量瓶中，优选的，复方酮康唑软膏的质量克数与量瓶的容量(即，量瓶标注体积)毫升数之比为1:10；更优选的，是精确称量5g复方酮康唑软膏，并置于50ml容量瓶中；

然后，向容量瓶中加入适量溶液，优选的，是加入体积比为1:1的甲醇-三氯甲烷混合溶液，其加入量优选的为20ml；

然后，进行超声，以使得复方酮康唑软膏中的酮康唑溶解于溶液中，超声的时间优选的为20～50min，更优选的，超声的时间为30～40min；

超声处理后，将超声后的混合体系放冷，然后以溶液稀释至量瓶刻度，优选的，此步骤所用溶液为体积比为1:1的甲醇-三氯甲烷混合溶液；

然后，将容量瓶在冰浴条件下进行冷却，并在冷却后立即滤过，由于用以溶解酮康唑的甲醇和三氯甲烷的沸点较低，因而，需要尽量快速的将容量瓶中的体系进行滤过，以避免长时间和高温所带来的溶剂损失，以及由此所导致的酮康唑测定含量偏高；

最后，取续滤液放置至室温，作为供试品溶液。

对照品溶液制备：将酮康唑以溶液溶解后稀释，作为对照品溶液；

而对照品酮康唑溶解所用溶剂同样为体积比为1:1的甲醇-三氯甲烷混合溶液，并优选的得到酮康唑的浓度为1mg/ml的对照品溶液。

如上供试品溶液的制备步骤条件的选择与优化，也是本发明检测方法能够更加准确测定复方酮康唑软膏中酮康唑含量的主要原因之一，具体的：

《中国药典》2015年版中所公开的“酮康唑乳膏”含量测定方法为：取本品2.5g，精密称定，置烧杯中，加甲醇-三氯甲烷(1:1)20ml，置80℃水浴中振摇使酮康唑溶解，用甲醇-三氯甲烷(1:1)定量转移至50ml量瓶中，放冷，用甲醇-三氯甲烷(1:1)稀释至刻度，摇匀，在冰浴中冷却1小时后滤过，取续滤液放置至室温，作为供试品溶液，精密量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取酮康唑对照品适量，精密称定，加甲醇-三氯甲烷(1:1)溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

虽然参照其方法也能够用于复方酮康唑软膏中酮康唑含量的测定，然而，其方法仍有不足之处：

首先，其采用烧杯作为酮康唑软膏溶解器皿，然而，由于所用溶剂甲醇-三氯甲烷(1:1)是极易挥发的试剂，烧杯是敞口容器，不能阻止溶剂的挥发，特别在样品80℃水浴溶解过程中，溶剂挥发会污染实验室环境、伤害分析人员健康及影响有效成分溶解效果。

其次，其在80℃水浴条件下进行酮康唑的溶解，然而，因为甲醇沸点约65℃，三氯甲烷沸点约61℃，因此80℃已超过甲醇-三氯甲烷(1:1)的沸点，使得80℃水浴中，溶液不断有气泡逸出，水浴后甲醇-三氯甲烷(1:1)量明显减少，影响酮康唑溶解效果，即使烧杯换成50ml量瓶，也难阻止甲醇-三氯甲烷(1:1)量减少，这条件设置不合理。

最后，药典方法中“用甲醇-三氯甲烷(1:1)定量转移至50ml量瓶中”。虽然是定量转移，但在转移过程中难做到有效成分完全无损耗，因此应尽可能减少转移操作，把样品直接称在量瓶中即可避免转移操作。

而本发明中，采用能够封闭的量瓶进行待测物的溶解，因而还能够避免进一步的转移、定量及混合溶剂的挥发损耗；同时，采用超声的方法也能够避免长时间高温加热所产生的溶剂挥发。因而，相较于最为相关的药典中所公开的方法而言，本发明检测方法能够更为准确的反映复方酮康唑软膏中酮康唑的含量水平，而且检测结果更为精确，重复性好。

供试品溶液和对照品溶液制备完成后，即进行高效液相色谱测试，而本发明色谱条件与系统适用性试验具体为：

色谱柱型号：Kromasil 100-5Si column 150×4.6mm；填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；柱温：30℃；流速：1.0ml/min；检测波长：240nm；进样量：10μL；理论板数：按酮康唑峰计不低于2000。

而高效液相色谱条件也是本发明检测方法能够更加准确测定复方酮康唑软膏中酮康唑含量的另一个原因，与药典中以0.2％二异丙胺的甲醇溶液-0.5％醋酸铵溶液(77:23)为流动相不同的是，本发明中所用流动项分别为：流动相A硫酸氢四丁基铵溶液(优选的为硫酸氢四丁基铵水溶液，其浓度为0.02mol/L)以及流动相B甲醇。而且，本发明检测方法在梯度洗脱过程中，对于流动相的组成也进行了适应性的调整，而这也能够进一步改善液相色谱检测的精确度，更有效的将酮康唑检出。

具体的梯度洗脱条件如下：

更优选的，梯度洗脱的条件如下：

更进一步优选的，梯度洗脱的条件如下：

实施例1本发明建立的复方酮康唑软膏酮康唑成分HPLC含量测定方法

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.02mol/L硫酸氢四丁基铵为流动相A，甲醇为流动相B，按下表程序进行梯度洗脱；检测波长为240nm。理论板数按酮康唑峰计算不低于2000。

时间(min)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	70	30
7	60	40
			10	60	40
13	50	50
			18	50	50
19	70	30
			22	70	30

测定方法：

取复方酮康唑软膏5g，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇-三氯甲烷(1:1)20ml，超声30min使酮康唑溶解，放冷，用甲醇-三氯甲烷(1:1)稀释至刻度，摇匀，在冰浴中冷却1小时后立即滤过，取续滤液放置至室温，作为供试品溶液，精密量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；

另取酮康唑对照品适量，精密称定，加甲醇-三氯甲烷(1:1)溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

含量测定方法考察：

1.超声时长的确定

分别对不同的超声时长进行优化筛选，按照实施例1的方法和条件，对同一批次复方酮康唑软膏酮康唑成分含量进行检测。

超声时长筛选实验结果如下表所示：

结果表明，样品在30、40、50、60min超声时长条件下酮康唑成分含量测定结果较一致，30min及40min结果无差别，且当超声时长大于40min时，检测结果有变大趋势，这是因为超声时间延长，样品溶液温度升高，且溶剂挥发量增多，造成有效成分检测结果偏大，因此选定30min为最佳超声时长。

2.专属性试验

阴性对照溶液的制备：按处方比例称取除酮康唑以外的其他原料及辅料，照复方酮康唑软膏的制备工艺和供试品溶液配制项下方法制成阴性对照溶液。

精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液、流动相各10μl，按本发明建立的含量测定方法色谱条件进样。结果，供试品与对照品在相应的位置上均出现色谱峰，且供试品色谱峰中基线平稳、分离度良好；阴性对照、流动相在该位置上无色谱峰出现，表明流动相和阴性对照在酮康唑保留时间无干扰。

3.样品溶液的稳定性

取供试品溶液，分别于0、2、4、6、10小时，采用相同色谱条件，进样10μl，根据测得的色谱峰面积，供试品组RSD为0.92％＜2.0％，由此可见，对照品及供试品溶液在10h内稳定性良好。

溶液稳定性试验结果如下表所示：

4.线性关系

精密称取酮康唑对照品100mg置于50ml量瓶中，加甲醇-三氯甲烷(1:1)使之完全溶解后定容，摇匀，作为储备液。分别再量取该储备液1、2、3、5、6、7ml于10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，得到20％、40％、60％、100％、120％、140％系列测定浓度溶液。按本发明建立的色谱条件，进样10μl，测定样品色谱峰面积。

线性试验结果如下表所示：

浓度(mg/ml)	0.2	0.4	0.6	1.0	1.2	1.4
							峰面积	412.2	893.3	1324.8	2224.5	2672.9	3110.8

以峰面积和浓度为坐标，建立标准曲线，得到方程为：Y＝2241.9X-20.445(R²＝0.9999)，由此可见，酮康唑浓度在0.2mg/ml～1.4mg/ml范围内与峰面积存在良好的线性关系。

5.精密度试验

将“线性关系”项下的测试浓度为100％的溶液(即含酮康唑浓度为1.0mg/ml的溶液)，在相同色谱条件下，重复进样6次，每次10μl，分别测定峰面积，考察仪器精密度，并计算6组数据所得的相对标准偏差RSD，结果为0.06％＜2.0％，由此可见，本发明建立的含量测定方法精密度良好。

精密度试验结果如下表所示：

6.重复性试验

选择同批号复方酮康唑软膏6份，精密称定后，根据供试品项操作制备溶液，采用相同色谱条件，进样10μl，采集6份样品的色谱图，计算溶液的相对标准偏差RSD，结果为0.90％＜2.0％，由此可见本发明建立的含量测定方法重复性良好。

重复性试验结果如下表所示：

7.重现性试验

选择同批号复方酮康唑软膏6份，由另一个分析员在不同实验室、不同的工作日，使用不同的液相色谱仪，不同的色谱柱，同“重复性试验”操作，测定酮康唑成分含量。

重现性试验结果如下表所示：

结果表明，两者RSD为0.24％＜2.0％，差值为0.3％，由此可见，本发明建立的含量测定方法重现性良好。

8.准确度试验

精密称定酮康唑对照品约20mg、25mg、30mg，各3份，分别置于9个25ml量瓶中，分别精密称取复方酮康唑软膏处方比例的全辅料混合物适量，根据供试品项操作制备溶液，即得80％、100％、120％测试浓度样品溶液各3份，按本发明建立的含量测定方法测定酮康唑成分含量，计算回收率。

准确度试验结果如下所示：

结果表明，回收率及平均回收率均在92％～105％，RSD都在2％以内，由此可见，本发明建立的含量测定方法准确度良好。

9.耐用性试验

取同一批复方酮康唑软膏适量，分别考察流速变化±0.2ml/min、柱温变化±5℃、不同色谱柱时仪器色谱行为的变化，观察基线分离情况，计算各条件下所得数据的平均值及RSD值，耐用性试验结果如下：

试验结果表明，复方酮康唑软膏酮康唑成分含量测定方法耐用性试验中，流速、柱温、色谱柱的微小变动，酮康唑峰和相邻峰均达到基线分离，各条件下所测酮康唑成分含量的RSD值均＜2％，由此可见，本发明建立的含量测定方法耐用性良好。

10.检测限

取酮康唑对照品溶液，用流动相溶解，并逐级稀释，调节对照品溶液浓度使酮康唑的响应值约为噪音水平的3倍，得出酮康唑的检测限为36μg/ml，而对照品中酮康唑的浓度约为1.0mg/ml，因此本发明建立的含量测定方法检测限可以满足检测需要。

11.样品中酮康唑成分含量测定

按本发明建立的含量测定方法分别测定三批复方酮康唑软膏中酮康唑成分含量，结果如下：

片号	20161001	20161002	20161003
				1	97.2％	97.8％	98.0％
2	97.6％	97.7％	97.4％
				3	97.0％	97.5％	98.3％
平均值(％)	97.3	97.7	97.9
				RSD(％)	0.31	0.16	0.47

结果表明，三批样品的酮康唑成分含量RSD均小于2％，批内差异小。

实施例2

测定方法：取复方酮康唑软膏5g，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇-三氯甲烷(1:1)20ml，置80℃水浴中振摇使酮康唑溶解，放冷，用甲醇-三氯甲烷(1:1)稀释至刻度，摇匀，在冰浴中冷却1小时后立即滤过，取续滤液放置至室温，作为供试品溶液，精密量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取酮康唑对照品适量，精密称定，加甲醇-三氯甲烷(1:1)溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

按实施例2的含量测定方法分别测定三批复方酮康唑软膏中酮康唑成分含量，结果如下表所示：

片号	20161001	20161002	20161003
				1	98.1	97.5	95.4
2	96.2	98.5	97.9
				3	95.9	95.8	97.0
平均值(％)	96.7	97.3	96.8
				RSD(％)	1.23	1.40	1.31

结果表明，三批样品的酮康唑成分含量RSD均小于2％，但较实施例1的RSD值大，测得结果偏差较大。

由实施例1和实施例2检测结果对比可知，相较于加热振摇使得酮康唑溶解而言，采用超声的方法使得酮康唑溶解能够更加精确的对酮康唑含量进行测定，而且准确都更好，且重复性更好。

实施例3

测定方法：取复方酮康唑软膏5g，精密称定，置烧杯中，加甲醇-三氯甲烷(1:1)20ml，超声30min使酮康唑溶解，用甲醇-三氯甲烷(1:1)定量转移至50ml量瓶中，放冷，用甲醇-三氯甲烷(1:1)稀释至刻度，摇匀，在冰浴中冷却1小时后立即滤过，取续滤液放置至室温，作为供试品溶液，精密量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取酮康唑对照品适量，精密称定，加甲醇-三氯甲烷(1:1)溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

按实施例3的含量测定方法分别测定三批复方酮康唑软膏中酮康唑成分含量，结果如下表所示：

片号	20161001	20161002	20161003
				1	95.5	96.2	98.7
2	97.0	99.0	96.4
				3	98.9	97.3	95.1
平均值(％)	97.1	97.5	96.7
				RSD(％)	1.75	1.45	1.88

结果表明，三批样品的酮康唑成分含量RSD均小于2％，但较实施例1及实施例2的RSD值大，测得结果偏差较大。

而由实施例1方法测定结果与实施例3方法测定结果可知，相较于以敞口容器进行复方酮康唑软膏溶解，再转移定量而言，采用量瓶进行直接溶解复方酮康唑软膏并定量的方法能够更为准确的反映酮康唑的含量水平，而且检测结果重复性明显更优。

实施例4

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.02mol/L硫酸氢四丁基铵为流动相A，甲醇为流动相B，将二者体积比按照65:35混合，作为固定流动相；

检测波长为240nm。理论板数按酮康唑峰计算不低于2000。

测定方法：

按实施例4的含量测定方法分别测定三批复方酮康唑软膏中酮康唑成分含量，结果显示，软膏中的酮康唑成分色谱峰不能被单独分离出来，不排除是各辅料成分及另外两个主成分(甲硝唑、薄荷脑)在此色谱条件下不能被良好分离而致，此流动相比例对复方酮康唑软膏的含量检测专属性差。

而由实施例1方法测定结果与实施例4方法测定结果可知，相较于以流动相A与流动相B的体积比固定为65:35混合而言，采用实施例1的梯度洗脱方法具有很好的检测方法专属性，分离效果好，从而能够准确地对酮康唑含量进行测定。

实施例5

时间(min)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	75	25
7	65	35
			10	65	35
13	55	45
			18	55	45
19	75	25
			22	75	25

测定方法：

按实施例5的含量测定方法分别测定三批复方酮康唑软膏中酮康唑成分含量，结果显示酮康唑成分色谱峰保留时间延后至下一个梯度时间段内，且色谱峰拖尾，峰形不好。

而由实施例1方法测定结果与实施例5方法测定结果可知，流动相中各组分比例对于检测结果也有着一定的影响，而相较于以实施例5的流动相梯度方法而言，采用实施例1的流动相梯度方法能够使酮康唑成分色谱峰位于同一梯度时间段内，且峰形对称、漂亮、无拖尾变形，从而能准确测定酮康唑含量，反映酮康唑的含量水平。

实施例6

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.02mol/L硫酸氢四丁基铵为流动相A，甲醇为流动相B，按下程序进行梯度洗脱；检测波长为240nm。理论板数按酮康唑峰计算不低于2000。

时间(min)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	65	35
7	55	45
			10	55	45
13	45	55
			18	45	55
19	65	35
			22	65	35

测定方法：

按实施例6的含量测定方法分别测定三批复方酮康唑软膏中酮康唑成分含量，结果显示酮康唑成分色谱峰提前在上一个梯度时间段内则开始出峰，横跨两个梯度时间段，且色谱峰不对称。

而由实施例1方法测定结果与实施例6方法测定结果可知，流动相中各组分比例对于检测结果也有着一定的影响，不同流动相组分间只有保持适当的比例，才能够准确检测得出酮康唑的成分含量。而且相较于以实施例6的流动相梯度方法而言，采用实施例1的流动相梯度方法能够使酮康唑成分色谱峰位于同一梯度时间段内，且峰形对称、漂亮，从而能准确测定酮康唑含量，反映酮康唑的含量水平。

对比例1

按《中国药典》2015年版“酮康唑乳膏”项下的含量测定方法分别测定三批复方酮康唑软膏中酮康唑成分含量，结果如下：

片号	20161001	20161002	20161003
				1	98.5	97.7	100.5
2	96.2	95.4	96.3
				3	100.2	99.6	97.1
平均值(％)	98.3	97.6	98.0
				RSD(％)	2.04	2.16	2.28

结果表明，三批样品的酮康唑成分含量RSD均大于2％，批内差异大，测得结果偏差很大。

由此可见，相较于药典中所公开的酮康唑乳膏测定的标准方法而言，本发明方法测定结果准确度和精密度明显更高，更适于作为复方酮康唑中酮康唑含量检测的标准方法。

对比例2

按《兽药国家标准汇编——兽药地方标准上升国家标准》(第三册)“复方酮康唑软膏”项下的酮康唑含量测定法分别测定三批复方酮康唑软膏中酮康唑成分含量及方法学考察，结果如下：

精密度及重现性结果：

准确度结果：

供试液稳定性试验结果：

对紫外分光光度法进行精密度、重现性、稳定性、准确度的方法学考察，结果表明，上述RSD均小于2％，由此可见，国家标准的紫外分光光度法符合药品分析方法相关要求，但本发明建立的高效液相色谱法专属性、准确度、精密度、重现性、稳定性更好。

三批样品中酮康唑成分含量测定结果：

片号	20161001	20161002	20161003
				1	92.2	93.0	93.7
2	94.6	92.6	90.7
				3	91.2	90.0	94.0
平均值(％)	92.7	91.9	92.8
				RSD(％)	1.89	1.77	1.97

综上所述，本发明建立的用于检测复方酮康唑软膏中酮康唑成分含量的高效液相色谱法所测含量结果高于国家标准中的紫外分光光度测定法，相较而言，本发明建立的方法更接近药物标识含量，考虑是因为紫外分光光度法的操作误差引起含量损耗较多的原因。而且，药典“酮康唑乳膏”项下的含量测定方法供试品溶液前处理操作并不适合于检测复方酮康唑软膏中的酮康唑成分，故本发明建立的高效液相法测定结果相对更准确。

虽然本发明建立方法及国标的紫外分光光度法均符合方法学考察相关要求，但本发明建立方法所测结果更接近真实含量，建议考虑此种检测方法来测定复方酮康唑软膏中酮康唑成分含量。

尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

Claims

1.一种复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：

2.根据权利要求1所述的复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量的检测方法，其特征在于，复方酮康唑软膏的质量克数与量瓶的容量毫升数之比为1:10。

3.根据权利要求1所述的复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量的检测方法，其特征在于，超声的时间为20～50min；

优选的，超声的时间为30～40min。

4.根据权利要求1所述的复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量的检测方法，其特征在于，对照品溶液中酮康唑的含量为1mg/ml。

5.根据权利要求1所述的复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法中，采用下列条件进行梯度洗脱：

0min：流动相A 65～75％；流动相B 25～35％；

7min：流动相A 55～65％；流动相B 35～45％；

10min：流动相A 55～65％；流动相B 35～45％；

13min：流动相A 45～55％；流动相B 45～55％；

18min：流动相A 45～55％；流动相B 45～55％；

19min：流动相A 65～75％；流动相B 25～35％；

22min：流动相A 65～75％；流动相B 25～35％；

其中，流动相A为硫酸氢四丁基铵溶液，流动相B为甲醇；

优选的，所述硫酸氢四丁基铵溶液的浓度为0.02mol/L。

6.根据权利要求5所述的复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法中，采用下列条件进行梯度洗脱：

0min：流动相A 68～72％；流动相B 28～32％；

7min：流动相A 57～63％；流动相B 37～43％；

10min：流动相A 57～63％；流动相B 37～43％；

13min：流动相A 47～52％；流动相B 48～53％；

18min：流动相A 47～52％；流动相B 48～53％；

19min：流动相A 68～72％；流动相B 28～32％；

22min：流动相A68～72％；流动相B 28～32％。

7.根据权利要求6所述的复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法中，采用下列条件进行梯度洗脱：

0min：流动相A 70％；流动相B 30％；

7min：流动相A 60％；流动相B 40％；

10min：流动相A 60％；流动相B 40％；

13min：流动相A 50％；流动相B 50％；

18min：流动相A 50％；流动相B 50％；

19min：流动相A 70％；流动相B 30％；

22min：流动相A 70％；流动相B 30％。

8.根据权利要求1所述的复方酮康唑软膏中酮康唑成分液相含量的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法采用如下条件：

柱温：30℃；

流速：1.0ml/min；

检测波长：240nm；

进样量：10μL

理论板数：按酮康唑峰计不低于2000。