CN108026529A - 组合疗法 - Google Patents

Abstract

用于用靶向GCGR的反义寡核苷酸和二甲双胍的组合治疗与2型糖尿病相关的病状的方法。

Description

组合疗法

序列表

本申请连同序列表一起以电子格式提交。序列表提供为在2016年9月29日创建的名称为BIOL0279WOSEQ_ST25.txt的文件，所述文件的大小为32Kb。电子格式的序列表中的信息以引用的方式整体并入本文。

领域

本发明实施方案提供靶向胰高血糖素受体(GCGR)的反义寡核苷酸和二甲双胍的组合。还提供使用此类组合治疗、预防或改善与代谢病症相关的病状；具体地与糖尿病相关的病症的方法。此类方法可用于治疗、预防或改善与代谢病症相关的病状；具体地与糖尿病相关的病症。

背景

2型糖尿病以胰岛素分泌和/或作用受损为特征，并且许多受试者也展现出在空腹和餐后状态中循环胰高血糖素的不适当水平。胰高血糖素/胰岛素比的增加可能是2型糖尿病患者中所见的高血糖的重要决定因素(Baron等，Diabetes.1987.36:274-283)。T2DM受试者中餐后胰高血糖素分泌的抑制缺乏也在餐后高血糖的发病机理中起到重要作用(Henkel等，Metabolism.2005.54:1168-1173)。

在患有2型糖尿病(T2DM)的患者中不受控制的肝葡萄糖产生对高血糖有显著影响，并且尽管目前存在可用的若干种疗法，但是许多患者仍得到亚最佳的控制(Datamonitor,2006)。因此抑制不受控制的肝葡萄糖产生并且有助于恢复正常肝葡萄糖代谢的替代性治疗仍然是需要的，并且可以为T2DM患者提供治疗益处。

概要

本文提供的若干种实施方案涉及抑制胰高血糖素受体(GCGR)可用于治疗糖尿病的发现。在某些实施方案中，提供了用于组合使用靶向GCGR的反义化合物和二甲双胍来治疗糖尿病的方法。与单独使用二甲双胍或单独使用反义化合物的治疗相比，所提供的组合使用在治疗个体的糖尿病方面实现了加和或大于加和的作用。与单独使用二甲双胍或单独使用反义化合物的治疗相比，所提供的组合使用实现了对个体的端值的加和或大于加和的作用。在某些实施方案中，加和作用或大于加和的作用是以不大于每种药物的毒性的加和作用的毒性实现的。在某些实施方案中，靶向GCGR的反义化合物可用于以反义化合物的出人意料的低剂量治疗糖尿病，例如2型糖尿病。对于用反义化合物治疗糖尿病，此类剂量是出人意料地低的。

详述

应理解，以上概述和以下详述都仅是示例性和解释性的，并且不限制要求保护的本发明。在本文中，除非另外确切说明，否则单数的使用包括复数。如本文所使用，除非另外说明，否则“或”的使用意指“和/或”。此外，术语“包括(including)”以及其他形式诸如“包括(includes)”和“包括(included)”的使用不是限制性的。

本文所用的章节标题仅出于组织目的，并且不应解释为限制所述主题。本申请中引用的所有文献或文献的部分(包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍、论文以及GenBank和NCBI参考序列记录)关于本文所论述的文献部分明确地以引用方式特此并入以及以引用方式特此整体并入。

应了解，本文中所含的实例中的每个SEQ ID NO中所列的序列与糖部分、核苷间键合或核碱基的任何修饰无关。因而，由SEQ ID NO定义的化合物可独立地包含糖部分、核苷间键合或核碱基的一个或多个修饰。由ISIS编号(ISIS#)所述的化合物指示核碱基序列、化学修饰和基序的组合。

“2'-O-甲氧基乙基”(又为2’-MOE和2’-O(CH₂)₂-OCH₃)是指糖环例如呋喃糖基环的2'位上的O-甲氧基-乙基修饰。2’-O-甲氧基乙基修饰的糖是修饰的糖。

“2'-MOE核苷”(又为2'-O-甲氧基乙基核苷)意指包含2'-MOE修饰的糖部分的核苷。

“2'-取代核苷”或“2-修饰核苷”意指包含2'-取代或2’-修饰的糖部分的核苷。如本文所用，关于糖部分的“2'-取代的”或“2-修饰的”意指包含不同于H或OH的至少一个2'-取代基的糖部分。

“3’靶位点”是指与特定化合物的最3’核苷酸互补的靶核酸的核苷酸。

“5’靶位点”是指与特定化合物的最5’核苷酸互补的靶核酸的核苷酸。

“5-甲基胞嘧啶”意指具有连接至5位的甲基的胞嘧啶。

如应用于给药量的“约”意指在值的±10％以内。例如，如果陈述为“剂量是在约50-100mg的范围内的量”，则其表示剂量是在40-110mg的范围内的量。在另一实例中，如果陈述为剂量是“约50mg”的量”，则其表示剂量可以是40mg至60mg。

“肥胖症”或“肥胖”是指肥胖的状态或相对于瘦体重而言过度高量的体脂肪或脂肪组织。体脂肪的量包括对全身脂肪分布和脂肪组织沉积物质量的考虑。体脂肪分布可通过皮褶测量、腰臀比或诸如超声波、计算机断层扫描或磁共振成像来评估。根据疾病预防控制中心(Center for Disease Control and Prevention)的规定，体重指数(BMI)为30或以上的个体被视为肥胖。如本文所用，术语“肥胖”包括因为体内脂肪组织过量累积所导致的超出需要的体脂肪增加的情况。术语“肥胖”包括但不限于以下病状：成年型肥胖；食饵性肥胖；内源性或炎性肥胖；内分泌肥胖；家族性肥胖；胰岛功能亢进性肥胖；脂肪細胞增殖型-肥大型肥胖；性腺功能减退性肥胖；甲状腺功能减退肥胖；终生性肥胖；病态肥胖和外源性肥胖。

“施用(Administration)”或“施用(administering)”是指将本文所提供的化合物或组合物引入个体以进行其预期功能的途径。可以使用的施用途径的实例包括但不限于肠胃外施用，诸如皮下、静脉内或肌肉内注射或输注。

“伴随施用”或“共同施用”意指对两种或更多种化合物以两者的药理作用均在患者中显现的任何方式进行施用。伴随施用不需要以单一药物组合物、以相同剂型、通过相同施用途径或同时对两种化合物进行施用。两种化合物的作用不需要同时显现。所述作用仅需要重叠一段时间但不需要同延。伴随施用或共同施用涵盖并行或依序施用。

“改善”是指对相关疾病、病症或病状的至少一种指标、体征或症状的改善或减轻。在某些实施方案中，改善包括延缓或减缓病状或疾病的一个或多个指标的进展或严重性。指标的进展或严重性可通过本领域的技术人员已知的主观或客观度量来确定。

“动物”是指人类或非人类动物，包括但不限于小鼠、大鼠、家兔、狗、猫、猪，和非人灵长类，包括但不限于猴子和猩猩。

“反义化合物”意指包含反义寡核苷酸和选择的一个或多个附加特征(诸如缀合基团或末端基团)的化合物。反义化合物的实例包括单链和双链化合物，诸如反义寡核苷酸、核糖酶、siRNA、shRNA、ssRNA及占位型化合物。

“反义抑制”意指在与靶核酸互补的反义化合物存在下靶核酸水平相比于在不存在反义化合物下的靶核酸水平有所减少。

“反义机制”为所有涉及化合物与靶核酸的杂交的机制，其中杂交的结果或效果为靶标降解或靶标占用，伴随阻碍涉及例如转录或剪接的细胞机构。

“反义寡核苷酸”意指具有与靶核酸或其区或区段至少部分互补的核碱基序列的寡核苷酸。在某些实施方案中，反义寡核苷酸可与靶核酸或其区或区段特异性杂交。

“双环核苷”或“BNA”意指包含双环糖部分的核苷。“双环糖”或“双环糖部分”意指包含两个环的修饰糖部分，其中第二环通过连接第一环中的两个原子的桥形成，从而形成双环结构。在某些实施方案中，双环糖部分的第一个环是呋喃糖基部分。在某些实施方案中，双环糖部分不包括呋喃糖基部分。

化合物中的“化学修饰”描述了通过化合物中任一单元的化学反应进行的取代或改变。“修饰核苷”意指独立地具有修饰糖部分和/或修饰核碱基的核苷。“修饰寡核苷酸”意指包含至少一个修饰核苷间键合、修饰糖和/或修饰核碱基的寡核苷酸。

“化学上不同的区”是指以某种方式化学上不同于同一化合物的另一区的化合物的区。例如，具有2’-O-甲氧基乙基核苷酸的区化学上不同于具有无2’-O-甲氧基乙基修饰的核苷酸的区。

“嵌合反义化合物”意指具有至少2个化学相异区的反义化合物，每一位置具有多个亚单位。

“胆固醇”是在所有动物组织的细胞膜中发现的固醇分子。胆固醇必须通过包括极低密度脂蛋白(VLDL)、中密度脂蛋白(IDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)的脂蛋白在动物的血浆中运输。“血浆胆固醇”是指血浆或血清中存在的所有脂蛋白(VDL、IDL、LDL、HDL)、酯化的和/或未酯化的胆固醇的总和。

“共同施用”意指向个体施用两种或更多种药剂。两种或更多种药剂可在单一药物组合物中，或可在单独的药物组合物中。两种或更多种药剂可各自经由相同或不同的施用途径来施用。共同施用包括平行或相继施用。

“互补性”意指第一核酸与第二核酸的核碱基之间配对的能力。

寡核苷酸背景下的“连续”是指彼此紧邻的核苷、核碱基、糖部分或核苷间键合。例如，“连续核碱基”意指序列中彼此紧邻的核碱基。

“设计”或“被设计来”是指设计与所选核酸分子特异性杂交的反义化合物的方法。

“糖尿病(Diabetes mellitus)”或糖尿病(diabetes)是以由胰岛素水平不足或胰岛素敏感性降低所致的代谢障碍或异常高血糖(高血糖)为特征的综合征。特征症状为由高血糖水平引起的过量尿产生(多尿)、试图补偿增加排尿的过度口渴和增加的液体摄取(烦渴)、由对眼睛光学系统的高血糖作用引起的视力模糊、原因不明的体重减轻、和嗜眠。

“糖尿病性血脂异常”或“伴血脂异常的2型糖尿病”意指以2型糖尿病、HDL-C降低、甘油三酯升高以及小而密LDL颗粒的升高为特征的病状。

“稀释剂”是指组合物中缺乏药理活性但在药学上是必需的或期望的成分。例如，注射组合物中的稀释剂可以是液体，例如盐水溶液。

“剂量”意指在单次施用中或在指定时间段内提供的指定量的化合物或药剂。在某些实施方案中，可以两次或更多次快速浓注(bolus)、片剂或注射来施用剂量。例如，在某些实施方案中，在需要皮下施用时，所需剂量可能需要不易由单次注射提供的体积。在此类实施方案中，可使用两次或更多次注射来达成所需剂量。在某些实施方案中，可以两次或更多次注射施用剂量以使个体的注射部位反应减至最小。在其他实施方案中，化合物或药剂通过经长时间段或连续输注来施用。剂量可被规定为每小时、每天、每周或每个月的药剂的量。

“给药方案”为被设计以达成一种或多种所需作用的剂量的组合。

“剂量单位”是指所提供的药剂的形式。在某些实施方案中，剂量单位为含有冻干型ISIS 449884的小瓶。在某些实施方案中，剂量单位为含有重构型ISIS 449884的小瓶。

“持续时间”意指活性或事件持续的时间段。例如，负荷阶段的持续时间是施用负荷剂量的时间段。例如，维持阶段的持续时间是施用维持剂量的时间段。

“血脂异常”是指脂质和/或脂蛋白代谢的障碍，包括脂质和/或脂蛋白过度产生或缺乏。血脂异常可表现为诸如胆固醇和甘油三酯的脂质以及诸如低密度脂蛋白(LDL)胆固醇的脂蛋白的升高。

“有效量”意指足以在需要化合物的个体中实现所需生理学结果的化合物的量。有效量可在个体间变化，取决于待治疗个体的健康和身体条件、待治疗个体的分类群、组合物的制剂、个体的医疗条件的评价和其他相关因素。

“功效”意指产生所需效果的能力。

“表达”包括基因密码信息借以转化成细胞中存在且起作用的结构的所有功能。此结构包括但不限于转录和转译的产物。

“缺口聚物(Gapmer)”意指包含具有位于具有一个或多个核苷的外部区之间的支持RNA酶H裂解的多个核苷的内部区的寡核苷酸，其中构成内部区的核苷在化学上不同于构成外部区的核苷。内部区可称为“缺口区”且外部区可称为“翼区”。

“GCGR”意指GCGR的任何核酸或蛋白质。“GCGR核酸”意指编码GCGR的任何核酸。例如，在某些实施方案中，GCGR核酸包括编码GCGR的DNA序列、从编码GCGR的DNA(包括含有内含子和外显子的基因组DNA)转录的RNA序列(包括非蛋白质编码(即非编码)的RNA序列)以及编码GCGR的mRNA序列。“GCGR mRNA”意指编码GCGR蛋白的mRNA。在上面情况或下面情况下可以称之为靶标。

“GCGR特异性抑制剂”是指能够在分子水平上特异性抑制GCGR RNA和/或GCGR蛋白表达或活性的任何试剂。例如，GCGR特异性抑制剂包括核酸(包括反义化合物)、肽、抗体、小分子和其他能够抑制GCGR RNA和/或GCGR蛋白的表达的试剂。

“葡萄糖”是指被细胞用作能量源和炎性介体的单糖。“血浆葡萄糖”是指血浆中存在的葡萄糖。

“杂交”意指互补核酸分子的退火。在某些实施方案中，互补核酸分子包括反义化合物和靶核酸。

“高脂血症(Hyperlipidemia)”或高脂血症(hyperlipemia)是以血清脂质或循环(血浆)脂质升高为特征的病状。此病状表现为异常高浓度的脂肪。循环血液中的脂质级分为胆固醇、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和甘油三酯。

“高甘油三酯血症”意指以甘油三酯水平升高为特征的病状。

“鉴定”或“选择具有代谢疾病的动物”意指鉴定或选择已诊断出代谢疾病或代谢病症的受试者；或，鉴定或选择具有代谢疾病的任何症状的受试者，所述症状包括但不限于代谢综合征、高血糖、高甘油三酯血症、高血压、增加的胰岛素抵抗、胰岛素敏感性降低、超过正常体重，和/或超过正常体脂肪或它们的任何组合。这种鉴定可通过任何方法来实现，所述方法包括但不限于标准临床试验或评价，诸如测量血清或循环(血浆)血液葡萄糖、测量血清或循环(血浆)甘油三酯、测量血压、测量体脂肪、测量体重等。

“紧邻”意指在相同种类的紧邻的要素之间没有插入要素(例如，在紧邻核碱基之间没有插入核碱基)。

“抑制GCGR”意指与不存在GCGR反义化合物诸如反义寡核苷酸时的GCGR mRNA和/或蛋白质水平的表达相比，在存在GCGR反义化合物(包括GCGR反义寡核苷酸)时降低GCGRmRNA和/或蛋白质水平的表达。

“个体”意指选用于治疗或疗法的人或非人动物。

“抑制表达或活性”是指相对于未治疗或对照样品的表达或活性降低或阻断表达或活性，并且不一定指示完全消除表达或活性。

“胰岛素抵抗”被定义为其中正常胰岛素量不足以产生来自脂肪、肌肉和肝组织的正常胰岛素应答的病状。脂肪细胞中的胰岛素抵抗导致储存的甘油三酯水解，这升高血浆中的游离脂肪酸。肌肉中的胰岛素抵抗降低葡萄糖摄取，而肝脏中的胰岛素抵抗减少葡萄糖储存，两种作用都会升高血液葡萄糖。由胰岛素抵抗引起的胰岛素和葡萄糖的高血浆水平往往导致代谢综合征和2型糖尿病。

“胰岛素敏感性”是个体对葡萄糖加工的有效程度的量度。具有高胰岛素敏感性的个体有效地加工葡萄糖，而具有低胰岛素敏感性的个体不会有效地加工葡萄糖。

“核苷间键合”意指在寡核苷酸中的相邻核苷之间形成共价键的基团或键。“修饰核苷间键合”意指除了天然存在的磷酸核苷间键合之外的任何核苷间键合。非磷酸键合在本文中被称为修饰核苷间键合。

“ISIS 449884”意指具有核碱基序列“GGTTCCCGAGGTGCCCA”(其作为SEQ ID NO:1掺入本文)的反义寡核苷酸，其中每个核苷酸键合是硫代磷酸酯核苷间键合，每个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶，并且核苷1-3和14-17中的每一个包含2’-MOE部分。ISIS 449884与从核碱基16865000至16885000截短的RefSeqNo.NW_926918.1序列(其以SEQ ID NO:2并入本文)的核碱基7270-7286、7295-7311、7319-7335、7344-7360、7368-7384、7392-7408、7416-7432和7440-7456互补。

“连接核苷”意指由核苷间键合连接在一起的相邻核苷。

“降脂质疗法”或“降脂质剂”意指提供给受试者以降低受试者中的一种或多种脂质的治疗方案。在某些实施方案中，提供降脂质疗法以降低受试者中的ApoB、总胆固醇、LDL-C、VLDL-C、IDL-C、非-HDL-C、甘油三酯、小而密LDL颗粒和Lp(a)中的一种或多种。降脂质疗法的实例包括他汀类、贝特类和MTP抑制剂。

“代谢疾病”或“代谢病症”是指以代谢功能的改变或紊乱为特征的病状。“代谢的”和“代谢”是本领域中熟知的术语并且通常包括发生在活有机体内的整个范围的生物化学过程。代谢疾病或病症包括但不限于肥胖症、糖尿病、高血糖、前驱糖尿病、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、代谢综合征、胰岛素抵抗、糖尿病性血脂异常，或高甘油三酯血症或其组合。

“代谢综合征”意指以代谢来源的脂质和非脂质心血管风险因素的聚类为特征的病状。在某些实施方案中，通过以下因素中任何3个的存在来鉴定代谢综合征：男性中腰围大于102cm或女性中腰围大于88cm；至少150mg/dL的血清甘油三酯；男性中HDL-C小于40mg/dL或女性中小于50mg/dL；至少130/85mmHg的血压；以及至少110mg/dL的空腹葡萄糖。这些决定因素可在临床实践中容易地测量(JAMA,2001,285:2486-2497)。

“错配”或“非互补”意指当第一寡核苷酸和第二寡核苷酸比对时，第一寡核苷酸的核碱基与第二寡核苷酸或靶核酸的对应核碱基不互补。例如，核碱基(包括但不限于通用的核碱基、肌苷和次黄嘌呤)能够与至少一个核碱基杂交，但是仍然与所述核碱基所杂交的核碱基错配或非互补。又如，当第一寡核苷酸和第二寡核苷酸比对时，不能与第二寡核苷酸或靶核酸的对应核碱基杂交的第一寡核苷酸的核碱基是错配或非互补核碱基。

“混合型血脂异常”意指以升高的胆固醇和升高的甘油三酯为特征的病状。

“调节”是指改变或调整细胞、组织、器官或生物体的特征。例如，调节GCGR RNA可以意指增加或降低细胞、组织、器官或生物体中的GCGR RNA和/或GCGR蛋白的水平。“调节剂”实现细胞、组织、器官或生物体的改变。例如，GCGR反义化合物可以为降低细胞、组织、器官或生物体中的GCGR RNA和/或GCGR蛋白的量的调节剂。

“MOE”意指甲氧基乙基。

“单体”是指寡聚物的单个单元。单体包括但不限于核苷及核苷酸。

“基序”意指寡核苷酸中的未修饰和/或修饰糖部分、核碱基和/或核苷间键合的模式。

“天然”或“天然存在的”意指存在于自然界中。

“非双环修饰糖”或“非双环修饰糖部分”意指包含不形成糖的两个原子之间的桥以形成第二环的修饰诸如取代基的修饰糖部分。

“核酸”是指由单体核苷酸组成的分子。核酸包括但不限于核糖核酸(RNA)、脱氧核糖核酸(DNA)、单链核酸以及双链核酸。

“核碱基”意指能够与另一核酸的碱基配对的杂环部分。如本文所用，“天然存在的核碱基”为腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)尿嘧啶(U)和鸟嘌呤(G)。“修饰核碱基”是经化学修饰的天然存在的核碱基。“通用碱基”或“通用核碱基”是除天然存在的核碱基和修饰核碱基之外的核碱基，并且能够与任何核碱基配对。

“核碱基序列”意指连续核碱基在核酸或寡核苷酸中的顺序，与任何糖或核苷间键合无关。

“核苷”意指包含核碱基部分和糖部分的化合物。核碱基和糖部分各自独立地是未修饰或修饰的。“修饰核苷”意指包含修饰核碱基部分和/或修饰糖部分的化合物。修饰核苷包括不包含核碱基的无碱基核苷。

“脱靶效应”是指与调节除预定靶核酸以外的基因的RNA或蛋白质表达有关的不必要或有害的生物效应。

“寡聚化合物”意指包含单一寡核苷酸和任选的一个或多个附加特征(诸如缀合基团或末端基团)的化合物。

“寡核苷酸”意指连接核苷的聚合物，每个核苷可彼此独立地经修饰或未经修饰。除非另外指明，否则寡核苷酸由8-80个连接核苷组成。“修饰寡核苷酸”意指这样的寡核苷酸，其中至少一个糖、核碱基或核苷酸键合经修饰。“未修饰寡核苷酸”意指这样的寡核苷酸，所述寡核苷酸不包含任何糖、核碱基或核苷间修饰。

“肠胃外施用”意指通过注射或输注来施用。肠胃外施用包括皮下施用、静脉内施用、肌肉内施用、动脉内施用、腹膜内施用或颅内施用，例如鞘内或脑室内施用。

“药学上可接受的载体或稀释剂”意指适合用于向动物施用的任何物质。例如，药学上可接受的载体可以是无菌水性溶液，诸如PBS或注射用水。

“药学上可接受的盐”意指化合物诸如寡聚化合物的生理上和药学上可接受的盐，即保留了母体化合物的所需生物活性并且不赋予其不希望的毒理学效应的盐。

“药剂”意指当施用给个体时提供治疗益处的化合物。

“药物组合物”意指适用于对个体施用的物质的混合物。例如，药物组合物可包含一种或多种化合物或其盐和无菌水性溶液。

“药学上可接受的衍生物”涵盖本文所述的化合物的药学上可接受的盐、缀合物、前药或异构体。

“硫代磷酸酯键合”意指修饰磷酸酯键合，其中非桥联氧原子之一被硫原子置换。硫代磷酸酯核苷间键合为修饰核苷间键合。

“磷部分”意指包含磷原子的原子团。在某些实施方案中，磷部分包含单-、二-或三磷酸酯或硫代磷酸酯。

“部分”意指核酸中确定数目的连续(即连接的)核碱基。在某些实施方案中，部分是靶核酸的限定数目的连续核碱基。在某些实施方案中，部分是寡聚化合物的限定数目的连续核碱基。

“预防”是指延迟或阻止疾病、病症或病状的发作、发展或进程达数分钟到无限期的时间段。

“前药”意指呈身体之外形式的化合物，其当施用至个体时在所述个体身体或细胞内代谢成另一形式。在某些实施方案中，代谢形式是化合物(例如药物)的活性或更具活性的形式。通常，前药在身体内的转化通过存在于细胞或组织的酶(例如内源性酶或病毒酶)或化学物质的作用和/或通过生理条件来促进。

“减少”是指将大小、数量或数目降低到较小的程度。

“RefSeq No.”是分配给序列以指示所述序列是针对特定靶转录物(例如，靶基因)的字母和数字的唯一组合。关于靶基因的这种序列和信息(统称为基因记录)可以在基因序列数据库中找到。基因序列数据库包括NCBI参考序列数据库、GenBank、欧洲核苷酸归档和日本的DNA数据库(后三者形成国际核苷酸序列数据库协作或INSDC)。

“区”被定义为靶核酸中具有至少一个可鉴别的结构、功能或特征的部分。

“RNAi化合物”意指至少部分地通过RISC或Ago2，而不是通过RNA酶H来调节靶核酸和/或由靶核酸编码的蛋白质的反义化合物。RNAi化合物包括但不限于双链siRNA、单链RNA(ssRNA)和微RNA，包括微RNA模拟物。

“区段”被定义为核酸内的区的较小部分或子部分。

“副作用”意指可归因于治疗的非所需作用的生理疾病和/或病状。在某些实施方案中，副作用包括注射部位反应、肝功能测试异常、肾功能异常、肝毒性、肾毒性、中枢神经系统异常、肌病和不适。例如，血清中的转氨酶水平升高可指示肝中毒或肝功能异常。例如，胆红素增加可指示肝中毒或肝功能异常。

关于化合物的“单链的”意指化合物仅具有一种寡核苷酸。“自互补的”意指与自身至少部分地杂交的寡核苷酸。由一种寡核苷酸组成的化合物是一种单链化合物，其中化合物的寡核苷酸是自身互补的。单链化合物可以能够与互补化合物结合形成双链体。

“位点”被定义为靶核酸内的独特核碱基位置。

“可特异性杂交的”是指反义化合物在反义寡核苷酸与靶核酸之间具有足够的互补度以诱导所需效应，而对非靶核酸表现出极小的影响或无影响。在某些实施方案中，在生理条件下发生特异性杂交。

“特异性抑制”靶核酸意指减少或阻断靶核酸的表达，而对非靶核酸减少表现出较小、极小或没有影响，并不一定指示完全消除靶核酸的表达。

“抑制素”意指意指HMG-CoA还原酶的活性的药剂。

“糖部分”是指未修饰糖部分或修饰糖部分。“未修饰糖部分”或“未修饰糖”意指如在RNA中发现的2’-OH(H)呋喃糖基部分(“未修饰RNA糖部分”)，或如在DNA中发现的2’-H(H)部分(“未修饰DNA糖部分”)。未修饰糖部分在1'、3'和4'位各有一个氢，在3'位有一个氧，并且在5'位有两个氢。“修饰糖部分”或“修饰糖”意指修饰呋喃糖基糖部分或糖替代物。“修饰呋喃糖基糖部分”意指包含替代未修饰糖部分的至少一个氢的非氢取代基的呋喃糖基糖部分。在某些实施方案中，修饰呋喃糖基糖部分为2’-取代的糖部分。此类修饰呋喃糖基糖部分包括双环糖和非双环糖。

“协同作用”或“协同”是指组合的作用大于相同剂量下的单独每种组分作用的加和作用。

“靶基因”是指编码靶标的基因。

“靶向”或“靶向的”意指将与靶核酸特异性杂交并诱导所需效应的反义化合物的设计和选择的过程。

“靶核酸”、“靶RNA”、“靶RNA转录物”及“核酸靶”都意指能够由反义化合物靶向的核酸。

“靶区”意指靶核酸中由一种或多种反义化合物所靶向的部分。

“靶区段”意指反义化合物所靶向的靶核酸的核苷酸的序列。“5’靶位点”是指靶区段的最5’核苷酸。“3’靶位点”是指靶区段的最3’核苷酸。

“治疗生活方式变化”意指旨在降低脂肪/脂肪组织质量和/或胆固醇的饮食和生活方式变化。此类变化会降低发展心脏病的风险，并且可包括每日总卡路里、总脂肪、饱和脂肪、多不饱和脂肪、单不饱和脂肪、碳水化合物、蛋白质、胆固醇、不溶纤维的饮食摄取的推荐，以及身体活动的推荐。

“治疗有效量”意指向个体提供治疗益处的化合物、药剂或组合物的量。

“治疗”是指向动物施用化合物或药物组合物以便实现动物的疾病、病症或病状的改变或改善。

某些实施方案

在某些实施方案中，提供了治疗糖尿病的方法，其包括向有需要的个体伴随地施用靶向GCGR的寡核苷酸和二甲双胍的治疗有效性组合。在某些实施方案中，糖尿病是2型糖尿病(T2DM)。在某些实施方案中，糖尿病个体罹患不受二甲双胍控制的高血糖。

在某些实施方案中，提供了治疗糖尿病的方法，其包括向有需要的个体以组合形式有效治疗所述糖尿病的量伴随地施用靶向GCGR的修饰寡核苷酸和二甲双胍。在某些实施方案中，糖尿病是T2DM。在某些实施方案中，所述量导致个体中糖尿病症状的加和或大于加和的改善。在某些实施方案中，所述量引起个体中糖尿病症状的协同改善。在某些实施方案中，所述组合降低血浆葡萄糖水平。在某些实施方案中，所述组合增加活性GLP-1水平。在某些实施方案中，所述组合增加总GLP-1水平。在某些实施方案中，所述组合增加胰高血糖素水平。在某些实施方案中，所述组合降低HbA1c水平。在某些实施方案中，所述组合降低果糖胺水平。在某些实施方案中，所述组合改善葡萄糖耐受性。在某些实施方案中，所述组合降低胰岛素抵抗。在某些实施方案中，所述组合改善胰岛素敏感性。

在某些实施方案中，靶向GCGR的反义化合物可用于以反义化合物的出人意料的低剂量治疗糖尿病，例如2型糖尿病。在某些实施方案中，反义化合物包括修饰寡核苷酸。在某些实施方案中，剂量为50mg/周的修饰寡核苷酸。在某些实施方案中，剂量为75mg/周的修饰寡核苷酸。在某些实施方案中，提供了增强二甲双胍治疗糖尿病的治疗有效性的方法，其包括向有需要的个体施用靶向GCGR的寡核苷酸和二甲双胍的治疗有效性组合。在某些实施方案中，个体是糖尿病患者。在某些实施方案中，糖尿病是2型糖尿病。

在任一前述实施方案中，反义化合物包含由12至30个连接核苷组成、具有包含与SEQ ID NO:2的核碱基7270-7286、7295-7311、7319-7335、7344-7360、7368-7384、7392-7408、7416-7432和7440-7456的等长部分互补的至少12个连续核碱基部分的核碱基序列。

在某些实施方案中，修饰寡核苷酸的核苷碱基序列包含SEQ ID NO:1的序列或由SEQ ID NO:1的序列组成。在某些实施方案中，修饰寡核苷酸与SEQ ID NO:2 100％互补。

在某些实施方案中，修饰寡核苷酸的核碱基序列包含美国专利号7,750,142或美国专利号8,865,674,中所述的任一种GCGR反义寡核苷酸的序列，所述两个美国专利均以引用的方式整体并入本文

在某些实施方案中，修饰寡核苷酸是单链修饰的寡核苷酸。在某些实施方案中，修饰寡核苷酸包含至少一个修饰核苷间键合。在若干种实施方案中，每个核苷间键合为硫代磷酸酯核苷间键合。在某些实施方案中，至少一个核苷包含修饰糖，诸如双环糖，包括但不限于4’-CH₂-O-2’桥或4’-CH(CH₃)-O-2’桥。在某些实施方案中，修饰糖包含2’-O(CH₂)₂-OCH₃基团。在某些实施方案中，至少一个核苷包含修饰核碱基，诸如5-甲基胞嘧啶。

在某些实施方案中，修饰寡核苷酸包含：

由1至5个连接核苷组成的5’-翼区；

由1至5个连接核苷组成的3’-翼区；以及

在5’-翼区与3’-翼区之间的缺口区，其由8至12个连接2’-脱氧核苷组成；

其中5’-翼区和3’-翼区中的至少一者包含至少一个双环核苷或一个2’-取代的核苷。在某些实施方案中，2’-取代的核苷包含2’-O(CH₂)₂-OCH₃基团或2’-O-CH₃基团。在某些实施方案中，双环核苷包含4’-CH₂-O-2’桥或4’-CH(CH₃)-O-2’桥。

在某些实施方案中，修饰核苷是单链的，由17个连接核苷组成，具有SEQ ID NO:1的核碱基序列，并且包含：

由十个连接脱氧核苷组成的缺口区段；

由3个连接核苷组成的5’翼区段；以及

由4个连接核苷组成的3’翼区段；

其中缺口区段位于5’翼区段与3’翼区段之间；其中每个翼区段的每个核苷包括2’MOE核苷，其中修饰寡核苷酸的每个核苷间键合为硫代磷酸酯键合；并且其中修饰寡核苷酸的每个胞嘧啶为5’-甲基胞嘧啶。

在某些实施方案中，修饰寡核苷酸为ISIS 449884并且可用接受的寡核苷酸命名法命名，显示了如下的每个3′-O至5′-O-连接的硫代磷酸二酯核苷酸间键合：

2′-Ο-(2-甲氧基乙基)-P-硫代鸟苷酰-(3′-O→5′-O)-2′-Ο-(2-甲氧基乙基)-P-硫代鸟苷酰(3′-O→5′-O)-2′-Ο-(2-甲氧基乙基)-5-甲基-P-硫代尿苷酰-(3′-O→5′-O)-2′-脱氧-5-甲基-P-硫代胸苷酰-(3′-O→5′-O)-2′-脱氧-5-甲基-P-硫代胞苷酰-(3′-O→5′-O)-2′-脱氧-5-甲基-P-硫代胞苷酰-(3′-O→5′-O)-2′-脱氧-5-甲基-P-硫代胞苷酰-(3′-O→5′-O)-2′-脱氧-P-硫代鸟苷酰-(3′-O→5′-O)-2′-脱氧-P-硫代腺苷酰-(3′-O→5′-O)-2′-脱氧-P-硫代鸟苷酰-(3′-O→5′-O)-2′-脱氧-P-硫代鸟苷酰-(3′-O→5′-O)-2′-脱氧-P-硫代胸苷酰-(3′-O→5′-O)-2′-脱氧-硫代鸟苷酰-(3′-O→5′-O)-2′-Ο-(2-甲氧基乙基)-5-甲基-P-硫代胞苷酰-(3′-O→5′-O)-2′-Ο-(2-甲氧基乙基)-5-甲基-P-硫代胞苷酰-(3′-O→5′-O)-2′-Ο-(2-甲氧基乙基)-5-甲基-P-硫代胞苷酰-(3′-O→5′-O)-2′-Ο-(2-甲氧基乙基)-腺苷，16种钠盐。

在某些实施方案中，修饰寡核苷酸为ISIS 449884并且具有以下结构：

在某些实施方案中，本文所述的修饰寡核苷酸在药物组合物中以剂量单位的形式(例如注射、输注等)施用。在某些实施方案中，此类药物组合物包含量为约15mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg或约100mg中的任一种的反义寡核苷酸，包括但不限于ISIS 449884。应当理解，通过简单地将量按周除以受试者的体重，可以容易地将反义寡核苷酸的前述量表示为毫克反义化合物/千克受试者体重/周(mg/kg/wk)。在某些实施方案中，使用Devine公式将体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.2000.34:1066-1069)。

在某些实施方案中，二甲双胍在药物组合物中以剂量单位的形式(例如注射、输注等)施用。在某些实施方案中，此类药物组合物包含量为约100mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg、约950mg、约1000mg、约1500mg、约1550mg、约2000mg、约2500mg、约2550mg或约3000mg中的任一种的二甲双胍。应当理解，通过简单地将量按周除以受试者的体重，可以容易地将二甲双胍的前述量表示为毫克二甲双胍/千克受试者体重/周(mg/kg/wk)。在某些实施方案中，使用Devine公式将体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.2000.34:1066-1069)。

在某些实施方案中，反义寡核苷酸(包括但不限于ISIS 449884)与二甲双胍的组合伴随地施用。在某些实施方案中，反义寡核苷酸(包括但不限于ISIS 449884)的量为约15mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg或约100mg中的任一种。在某些实施方案中，反义寡核苷酸剂量范围为15-30mg。在某些实施方案中，反义寡核苷酸剂量范围为30-60mg。在某些实施方案中，剂量范围为60-80mg。在某些实施方案中，剂量范围为80-100mg。在某些实施方案中，二甲双胍的量为约100mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg、约950mg、约1000mg、约1500mg、约1550mg、约2000mg、约2500mg、约2550mg或约3000mg中的任一种。在某些实施方案中，二甲双胍的剂量范围为500-3000mg。应当理解，通过简单地将量按周除以受试者的体重，可以容易地将反义寡核苷酸或二甲双胍的前述量表示为毫克化合物/千克受试者体重/周(mg/kg/wk)。在某些实施方案中，使用Devine公式将体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.2000.34:1066-1069)。

在某些实施方案中，反义寡核苷酸与二甲双胍的剂量同时伴随地施用。在某些实施方案中，反义寡核苷酸在二甲双胍的剂量之前伴随地施用。在某些实施方案中，反义寡核苷酸在二甲双胍的剂量之后伴随地施用。在某些实施方案中，用反义寡核苷酸的治疗在开始用二甲双胍的治疗之后开始。在某些实施方案中，用反义寡核苷酸的治疗在用二甲双胍的治疗同时开始。在某些实施方案中，用反义寡核苷酸的治疗在开始用二甲双胍的治疗之前开始。

本文所述的组合物可另外以本领域中确定的使用量的含有常规上存在于药物组合物中的其他辅助组分。因此，例如，组合物可以含有另外的相容性药物活性物质，例如像止痒剂、收敛剂、局部麻醉剂或抗炎剂。然而，此类材料在添加时不应不当地干扰本文所述的组合物组分的生物活性。制剂可经杀菌，并且(如果需要的话)与不以有害方式与制剂的寡核苷酸相互作用的助剂混合，所述助剂例如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、影响渗透压的盐、缓冲剂、着色剂和/或芳香物质等。

反义寡核苷酸可共价连接至一个或多个增强反义寡核苷酸的活性、细胞分布或细胞吸收的部分或缀合物。典型的缀合基团包括胆固醇部分和脂质部分。另外的缀合基团包括碳水化合物、磷脂、生物素、啡嗪、叶酸盐、啡啶、蒽醌、吖啶、荧光素、若丹明、香豆素和染料。

反义寡核苷酸还可被修饰以具有一个或多个稳定化基团，所述一个或多个稳定化基团通常连接至反义化合物的一端或两端以增强例如像核酸酶稳定性的特性。在稳定化基团中包括帽结构。这些末端修饰保护具有末端核酸的反义寡核苷酸免遭核酸外切酶降解，且可有助于递送和/或定位于细胞内。帽可存在于5’末端(5'帽)或3’末端(3'帽)上，或可存在于这两个末端上。帽结构在本领域中为熟知的且包括例如反向脱氧无碱基帽。其他可用于对反义化合物的一端或两端进行封端以赋予核酸酶稳定性的3'及5'-稳定化基团包括2003年1月16日公布的WO 03/004602中所公开的那些基团。

某些治疗

在某些方面，提供治疗罹患糖尿病的个体的方法，所述方法包括向个体伴随地施用与人GCGR互补的反义化合物和二甲双胍的组合。在某些实施方案中，与人GCGR互补的反义化合物如本文所述或如美国专利号7,750,142或美国专利号8,865,674中所公开的。在某些实施方案中，与人GCGR互补的反义化合物为ISIS 449884。

在某些实施方案中，糖尿病为2型糖尿病(T2DM)。

在某些方面，提供用于治疗T2DM的与人GCGR互补的反义化合物和二甲双胍的组合。在某些实施方案中，与人GCGR互补的反义化合物如本文所述或如美国专利号7,750,142或美国专利号8,865,674中所公开的。在某些实施方案中，与人GCGR互补的反义化合物为ISIS 449884。在某些实施方案中，糖尿病为2型糖尿病(T2DM)。

在某些方面，存在了在治疗有需要的个体的糖尿病的方法中使用的与人GCGR互补的反义化合物，其中所述方法包括向个体伴随地施用反义化合物和二甲双胍的组合。在某些实施方案中，与人GCGR互补的反义化合物如本文所述或如美国专利号7,750,142或美国专利号8,865,674中所公开的。在某些实施方案中，与人GCGR互补的反义化合物为ISIS449884。在某些实施方案中，糖尿病为2型糖尿病(T2DM)。

某些方面涉及与人GCGR互补的反义化合物和二甲双胍的组合用于制造用于治疗糖尿病的药物的用途。在某些实施方案中，与人GCGR互补的反义化合物如本文所述或如美国专利号7,750,142或美国专利号8,865,674中所公开的。在某些实施方案中，与人GCGR互补的反义化合物为ISIS 449884。在某些实施方案中，糖尿病为2型糖尿病(T2DM)。

某些给药方案

在某些实施方案中，药物组合物根据给药方案施用。在某些此类实施方案中，给药方案有效治疗糖尿病并且在个体中的耐受性是可接受的。在某些实施方案中，药物组合物包含靶向GCGR的反义寡核苷酸和二甲双胍。在某些实施方案中，药物组合包含靶向GCGR的反义寡核苷酸和二甲双胍。在某些实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQ ID NO:1的核碱基序列。在某些实施方案中，反义寡核苷酸为ISIS 449884。

在某些实施方案中，施用的反义寡核苷酸(包括但不限于ISIS449884)的剂量为约15mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg或约100mg中的任一种。应当理解，通过简单地将量按周除以受试者的体重，可以容易地将反义寡核苷酸的前述剂量表示为毫克反义化合物/千克受试者体重/周(mg/kg/wk)。在某些实施方案中，使用Devine公式将体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.2000.34:1066-1069)。

在某些实施方案中，二甲双胍的剂量为约100mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg、约950mg、约1000mg、约1500mg、约1550mg、约2000mg、约2500mg、约2550mg或约3000mg中的任一种的量。应当理解，通过简单地将量按周除以受试者的体重，可以容易地将二甲双胍的前述量表示为毫克二甲双胍/千克受试者体重/周(mg/kg/wk)。在某些实施方案中，使用Devine公式将体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.2000.34:1066-1069)。

在某些实施方案中，反义寡核苷酸(包括但不限于ISIS 449884)与二甲双胍的组合伴随地施用。在某些实施方案中，反义寡核苷酸(包括但不限于ISIS 449884)的量为约15mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg或约100mg中的任一种。在某些实施方案中，二甲双胍的量为约100mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg、约950mg、约1000mg、约1500mg、约1550mg、约2000mg、约2500mg、约2550mg或约3000mg中的任一种。

在某些实施方案中，在给药方案中，反义寡核苷酸的施用与二甲双胍的施用是同时的。在某些实施方案中，在给药方案中，反义寡核苷酸的施用在二甲双胍的施用之前。在某些实施方案中，在给药方案中，反义寡核苷酸的施用在二甲双胍的施用之后。在某些实施方案中，在给药方案中，用反义寡核苷酸的治疗在开始用二甲双胍的治疗之后开始。在某些实施方案中，在给药方案中，用反义寡核苷酸的治疗在用二甲双胍的治疗同时开始。在某些实施方案中，在给药方案中，用反义寡核苷酸的治疗在开始用二甲双胍的治疗之前开始。

在某些实施方案中，可以选择剂量、剂量频率和治疗期的持续时间以在1至26周内实现所需效果。在某些实施方案中，剂量是相同的，并且剂量频率是变化的以在1至26周内实现所需效果。在某些实施方案中，剂量随时间增加并且剂量频率保持恒定。在某些实施方案中，希望尽可能快地实现所需效果。在某些实施方案中，高剂量和/或高剂量频率可能是所需的。在某些实施方案中，剂量可以一次施用或注射施用。在某些实施方案中，剂量可以多于一次的施用或注射施用。

在某些实施方案中，可以选择剂量、剂量频率和治疗期的持续时间以实现可接受的安全性特征。例如，在某些实施方案中，可以选择此类变量以减轻药物组合物的毒性。在某些实施方案中，选择此类变量以减轻肝毒性。在某些实施方案中，选择此类变量以减轻肾毒性。在某些实施方案中，选择此类变量以减轻aPTT的延长、补体途径活化、促炎性作用、血小板减少症或嗜中性粒细胞减少症。

在某些实施方案中，当ALT是正常上限的5-10倍时，安全性特征是不可接受的。在某些实施方案中，当ALT是正常上限的5-10倍，并且胆红素升高至正常上限的两倍或更多倍时，安全性特征是不可接受的。在某些实施方案中，可接受的安全性特征包括高于正常上限的三倍，但不超过正常上限的五倍的ALT升高。在某些实施方案中，可接受的安全性特征包括高于正常上限三倍，但不超过正常上限的五倍的ALT升高，和不超过正常上限的两倍的胆红素升高。在某些实施方案中，当药物组合物的施用导致高于正常上限的三倍的ALT升高时，调整剂量和/或剂量频率以减轻ALT升高。

在某些实施方案中，治疗期持续一天至个体终生。在某些实施方案中，治疗期持续1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天，如从施用第一剂量至施用至个体的最后剂量所测量的。在某些实施方案中，治疗期持续1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周、24周、25周、26周、27周、28周、29周、30周、31周、32周、33周、34周、35周、36周、37周、38周、39周、40周、41周、42周、43周、44周、45周、46周、47周、48周、49周、50周、51周或52周，如从施用第一剂量至施用至个体的最后剂量所测量的。在某些实施方案中，治疗期持续1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月，如从施用第一剂量至施用至个体的最后剂量所测量的。在某些实施方案中，治疗期持续1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、11年、12年、13年、14年、15年、16年、17年、18年、19年、20年、21年、22年、23年、24年、25年、26年、27年、28年、29年、30年、31年、32年、33年、34年、35年、36年、37年、38年、39年、40年、41年、42年、43年、44年、45年、46年、47年、48年、49年或50年，如从施用第一剂量至施用至个体的最后剂量所测量的。在某些实施方案中，只要继续剂量是需要的、有效的且耐受的，治疗期就持续。

在治疗期的期间包括多于一个剂量的某些实施方案中，在治疗期间施用的剂量全部彼此相同。在某些实施方案中，治疗期的期间施用的剂量不完全相同。在某些实施方案中，剂量随时间增加。在某些实施方案中，剂量随时间降低。

在某些实施方案中，剂量通过肠胃外施用来施用。在某些实施方案中，肠胃外施用是皮下施用。在某些实施方案中，肠胃外施用是静脉内输注。

在某些实施方案中，在治疗期的期间剂量为约0.2mg、约0.3mg、约0.4mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1.0mg、约1.1mg、约1.2mg、约1.3mg、约1.4mg、约1.5mg、约1.6mg、约1.7mg、约1.8mg、约1.9mg、约2.0mg、约2.1mg、约2.2mg、约2.3mg、约2.4mg、约2.5mg、约2.6mg、约2.7mg、约2.8mg、约2.9mg、约3.0mg、约3.1mg、约3.2mg、约3.3mg、约3.4mg或约3.5mg反义化合物/千克受试者体重。在某些实施方案中，使用Devine公式将受试者的体重计算为理想体重(Pai,M.P.和Paloucek,F.P.Ann.Pharmacol.2000.34:1066-1069)。

在某些实施方案中，可以选择剂量、剂量频率和治疗期的持续时间以实现所需的安全性特征。例如，在某些实施方案中，可以选择此类变量以减轻药物组合物的毒性。在某些实施方案中，选择此类变量以减轻肝毒性。在某些实施方案中，选择此类变量以减轻肾毒性。在某些实施方案中，选择此类变量以减轻aPTT的延长、补体途径活化、促炎性作用、血小板减少症或嗜中性粒细胞减少症。

在某些实施方案中，可以时常调整剂量、剂量频率和治疗期的持续时间以实现所需效果。在某些实施方案中，监测个体的效应(治疗和/或毒性效应)，并且可以基于这种监测的结果来调整剂量、剂量频率和/或治疗期的持续时间。

在某些实施方案中，药物组合物包含反义寡核苷酸和二甲双胍。在某些实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQ ID NO:1的核碱基序列。在某些实施方案中，反义寡核苷酸为ISIS 449884。

靶核酸、靶区和核苷酸序列

在某些实施方案中，本文所述的化合物包含含有与靶核酸互补的区的寡核苷酸或由所述寡核苷酸组成。在某些实施方案中，靶核酸为内源性RNA分子。在某些实施方案中，靶核酸编码蛋白质。在某些此类实施方案中，靶核酸选自：mRNA和前体mRNA，包括内含子区、外显子区和非翻译区。在某些实施方案中，靶RNA为mRNA。在某些实施方案中，靶核酸为前体mRNA。在某些此类实施方案中，靶区整个在内含子内。在某些实施方案中，靶区跨越内含子/外显子连接区。在某些实施方案中，靶区是内含子内的至少50％。

编码GCGR的核苷酸包括但不限于以下：RefSeqNo.NM_000160.3(其以SEQ ID NO:3并入本文)和从核苷酸16865000至16885000截短的RefSeqNo.NW_926918.1(以SEQ ID NO:2并入本文)。

用于配制药物组合物的组合物和方法

本文所述的化合物可与药学上可接受的活性或惰性物质混合以制备药物组合物或制剂。用于配制药物组合物的组合物和方法取决于许多标准，包括但不限于施用途径、疾病程度或所施用的剂量。

在某些实施方案中，本发明提供包含一种或多种化合物或其盐的药物组合物。在某些实施方案中，化合物为反义化合物或寡聚化合物。在某些实施方案中，化合物包含修饰寡核苷酸或由修饰寡核苷酸组成。在某些此类实施方案中，药物组合物包含合适的药学上可接受的稀释剂或载体。在某些实施方案中，药物组合物包含无菌盐水溶液和一种或多种化合物。在某些实施方案中，这种药物组合物由无菌盐水溶液和一种或多种化合物组成。在某些实施方案中，无菌盐水为药用级盐水。在某些实施方案中，药物组合物包含一种或多种化合物和无菌水。在某些实施方案中，药物组合物由一种化合物和无菌水组成。在某些实施方案中，无菌水为药用级水。在某些实施方案中，药物组合物包含一种或多种化合物和磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在某些实施方案中，药物组合物由一种或多种化合物和无菌PBS组成。在某些实施方案中，无菌PBS为药用级PBS。用于配制药物组合物的组合物和方法取决于许多标准，包括但不限于施用途径、疾病程度或所施用的剂量。

本文所述的靶向GCGR核酸的化合物可通过将化合物与适合的药学上可接受的稀释剂或载体组合而用于药物组合物中。在某些实施方案中，药学上可接受的稀释剂是水，诸如适于注射的无菌水。因此，在一个实施方案中，在本文所述的方法中使用包含靶向GCGR核酸的化合物及药学上可接受的稀释剂的药物组合物。在某些实施方案中，药学上可接受的稀释剂为水。在某些实施方案中，化合物包含修饰寡核苷酸或由修饰寡核苷酸组成。

包含本文提供的化合物的药物组合物涵盖在施用至动物(包括人)时能够提供(直接或间接)其生物活性代谢物或残余物的任何药学上可接受的盐、酯或此类酯的盐，或任何其他寡核苷酸。在某些实施方案中，化合物为反义化合物或寡聚化合物。在某些实施方案中，化合物包含修饰寡核苷酸或由修饰寡核苷酸组成。因此，例如，本公开还涉及化合物的药学上可接受的盐、前药、此类前药的药学上可接受的盐以及其他生物等效物。合适的药学上可接受的盐包括但不限于钠盐和钾盐。

前药可包括在化合物的一端或两端上并入可由体内内源性核酸酶裂解而形成活性化合物的额外核苷。在某些实施方案中，化合物或组合物还包含药学上可接受的载体或稀释剂。

非限制性公开并且以引用的方式并入

虽然已根据某些实施方案具体描述了本发明，但以下实施例仅用以说明本发明并且不意图限制本发明。本申请中引用的每个参考文献、RefSeqNo、GenBank登录号和类似物均以引用的方式整体并入本文。

实施例

实施例1：对ISIS 449884与二甲双胍的组合的2期随机化、双盲、分层、安慰剂对照研究

在正在进行的临床试验中，研究在患有2型糖尿病的患者中施用GCGR反义寡核苷酸ISIS 449884对二甲双胍的稳定治疗的影响。

受试者

目标研究群体是60名患有2型糖尿病的患者，其在筛选评估前用二甲双胍治疗至少3个月并且BMI≥25.0kg/m²。

给药方案

这项研究是对50mg/周(群组A)和75mg/周(群组B)下的两个剂量的ISIS 449884与二甲双胍的组合相对于二甲双胍加上安慰剂的多中心研究。

参与本研究的患者在筛选评估前必须服用稳定剂量的二甲双胍(至少1,500mg/天)至少3个月，并且需要在整个研究期间继续其不改变的稳定剂量。基于筛选HbA1c水平(≤9.0％与>9.0％)将患者分层。

研究将包括≤3周的筛选期、3周的治疗前期、接着是每周一次皮下(SC)给药的26周治疗期和24周治疗后期。在筛选和治疗前期的期间将确定患者的研究合格性。在治疗前期的期间将患者随机化。

使患者从第1周至第26周(第1、8、15、22、29、36、43、50、57、64、71、78、85、92、99、106、113、120、127、134、141、148、155、162、169和176天)每周一次地通过SC注射接受其分配的研究药物(ISIS 449884或安慰剂)。研究药物将作为SC注射剂由受过培训的专业人员施用。给药信息在下表中进一步描述。

表2：研究药物给药信息

群组	总剂量
		群组A	50mg ISIS 449884或安慰剂
群组B	75mg ISIS 449884或安慰剂

安全性和临床实验室评价将从第1周至第14周每周进行一次，从第15周至第26周每两周进行一次。在患者针对以下参数就诊期间定期获取血样，所述参数包括但不限于禁食C-肽、空腹胰岛素、空腹血糖(FPG)、空腹胰高血糖素、空腹活性胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、空腹总GLP-1、HbA1c、脂质和TSH。体重、BMI、腰围/臀围也将被定期测量。将定期评估ISIS 449884的血浆药代动力学。

在治疗前期、治疗期和治疗后期的期间，患者将经历四次口服葡萄糖耐受性测试(OGTT)。对于每次OGTT程序，患者将在测试前的晚上开始禁食。所述程序将在第二天(禁食10小时后)进行，此时将采集血样。在插入留置导管并保持30分钟的时间段以消除与静脉穿刺引起的应激相联系的任何影响之后，在消耗葡萄糖溶液之前的-10和-5分钟开始取血样。葡萄糖溶液(75克在300mL溶液中)将在5分钟的时间段内消耗掉。在2小时的OGTT期间，在每30分钟一次的测试期间抽取用于胰高血糖素、活性GLP-1、总GLP-1、C-肽、胰岛素和葡萄糖分析的血样。

结果

这项研究是50mg/周(群组A)和75mg/周(群组B)下的两个剂量的ISIS 449884与二甲双胍的组合相对于二甲双胍加上安慰剂的多中心研究。

参与本研究的患者在筛选评估前服用稳定剂量的二甲双胍(至少1,500mg/天)至少3个月，并且在整个研究期间继续其不改变的稳定剂量。基于筛选HbA1c水平(≤9.0％与>9.0％)将患者分层。

使患者从第1周至第26周(第1、8、15、22、29、36、43、50、57、64、71、78、85、92、99、106、113、120、127、134、141、148、155、162、169和176天)每周一次地通过SC注射接受其分配的研究药物(ISIS 449884或安慰剂)。群组A中共招募39名患者，并且群组B中共招募40名患者(参见上表2)。

主要终点HbA1c水平在第27周测量。结果呈现在下表中，并且在给予75mg剂量的患者中展示出>2％的HbA1c降低量，并且在给予50mg剂量的患者中产生出>1％降低量。在75mg剂量下，一些患者中存在高达3.4％的降低量。

表3：HbA1c的平均变化(％基线)

	第6周	第14周	第20周	第27周
					安慰剂	-0.1	-0.5	-0.6	-0.4
50mg剂量	-0.6	-0.9	-0.9	-1.1
					75mg剂量	-0.7	-1.7	-1.8	-2.3

还定期测量ALT水平，并且没有显示出超出反义寡核苷酸的预期范围之外的任何水平升高。总体而言，研究证实两种剂量的ISIS449884具有有利的安全性特征并且耐受性良好。

序列表

<110> IONIS制药公司

<120> 组合疗法

<130> BIOL0279WO

<150> 62/235,283

<151> 2015-09-30

<160> 3

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核苷酸

<400> 1

ggttcccgag gtgccca 17

<210> 2

<211> 20001

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(993)

<223> n为a、c、g或t

<220>

<221> misc_feature

<222> (2653)..(2743)

<223> n为a、c、g或t

<220>

<221> misc_feature

<222> (5539)..(5563)

<223> n为a、c、g或t

<400> 2

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 60

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 120

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 480

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 540

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 600

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 660

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 720

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 780

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 840

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 900

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 960

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnntacttgg ccctcctaat tgggtgttct 1020

cagtgaaaac gaggacactg ctaatatgct ttagaaaata gccctcacat tctccctgtt 1080

cccaatcccc cacttactct aagctcccca ggtagcaata attcagaagt caaattgctc 1140

agcactccta tggttcaagt gattcttgtg tctcagcctc ccaagtagct gggactacag 1200

gagcccacca ccacgcccag ttaatttttg tattttttag tagagatggg gtttcaccat 1260

gttgaccagg ctggtctcga actcctgacc tcaagtgatc cactggcctc ggcctccaaa 1320

agtgttggga ttacaggcgt gagccactgc gcccagcctc aaccttctag tgaaccctcc 1380

atgctctgtt atcttttatt cctcttggat ttttgttgtt tcttttcttt ttcttcttct 1440

ttttcttttc tttttttttt tttgagatgg agtttcattc ttgttgccca ggctggagtg 1500

caatggcaca accttggctc actgcaacct tcgcctcctg ggttcaagca atttgcctgc 1560

ctcagcctcc caagtagctg ggattacagg catgtgctac catgcctggc gaattttgta 1620

tttttagtag agacagggtt tctccgtgtt ggtcgggctg atctcaaact cccgacctca 1680

ggtgatcagc ccgccttggc ctcccaaagt gctgagatta caggcatgag ccaccacacc 1740

cagccttttt gttgtttctt ctgagagatt tcttcaactc aattttccaa cccttctatt 1800

aaatttttta aattccagat attctatttg cagccggcaa ggactcttcc tgcgctctgc 1860

ttgttttcca aagcattccg ttctagtttt tatgggagca tcatcctttc atgtctctaa 1920

ggataatcag agtggttaaa atgttcttga agttttcttc tgttccctgc agtagctctg 1980

tttcctccag tttcctcttt cccaagtgat tggtctgtct catataccta gaggtcttgc 2040

tttgcattca catctaaggg caaaaggcgc taggatgcag tgcggaggtc cattcgcttt 2100

gtcgtaaggt ttgtgccttt cttagtcctg cagtggttga gtaaaacctg accatcccac 2160

accctcaaat actaagtgcc cctgggtagt gatgtggagg ggccttctta ttaatgtgag 2220

gaaatgcttg tgttataggt tgtggtgaga aacgctggtt acaaaactat atcaaagtaa 2280

aaatgtatta atgcacagta aagacacctg gaaaaaaaat gccctttaat gctcacagaa 2340

ggtctctccg aggggcagcc ccaccaccct cctgtttccc ttcctgcatt tccacgtttt 2400

tctgggccca gatgcagcct cccctcccac ccctggtccc tccgccttgg cttccggctg 2460

tcgctttcat ccctcctcct catcagcccc ttgcagaact ccagggtggg gcttctgagt 2520

ctcgctggca gtatgggctc cataagtctt gctggacacc gaaattaagt tctgcaggtg 2580

ccgtctccag aatccccagc acagatagac aaacccacat ctcaggggtg gggggtgcag 2640

acctgccccc agnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 2700

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnntcccagc tgccctctgt 2760

ttatatgtct caccaatgtc aagggaaacc agaactggat agcagttgaa acacatattt 2820

tgttcgggac tattgtaata ggggaaaaaa gattttagta tagacctggg ctcaactctc 2880

aatgtggcac aggcaagtgg ggatttagat ctgaggagca gggcggggtc agtgggtgga 2940

aaattactgg cacgaaacac ctgtctggag gattctggct aaacccagga aacaggaagc 3000

ttgctgaggg caggcagggt tagcagacat cgcctggggg tggcggaggc tgagaaccct 3060

acccaggtaa aatgaagctt gctgacggca gacagggtta gcagacacgg cctggaggtg 3120

gcagaggcta aggaacctac ccaggtaaaa cgaagcttgc tgacggcaga cagggttagc 3180

agacacggcc tggaggtggc agaggctaag gaacctacca aggtaaaatg aagcttgctg 3240

aaggcagcca gggtgagcag atattgcctg ggggtggcgg aaactgagga ccctacccag 3300

gtaaaaggaa gcctgctgaa ggcaggcagg gtgagcagac attgcctgtg ggtagcagag 3360

gctgaggact ctacccaggt aacaggaatc ttgcttaagg caggcaaggt gagcagacat 3420

cgcctggggg tggcggaggc tgaggactct acccagataa caggaatctt gctgcgggca 3480

gccagggtga gcagacgtcg cctgggggtg gtggaagctg aggaccctac ccaggtaaaa 3540

ggaagcttgc tgaaggcagg caaggtaagc agacatcgcc tgggggtggc ggaggctgag 3600

gaccctgatc agatatgggg ggatggaggc ttcttgccaa actgacttag cagagttctt 3660

gctgaatctg gattttataa ggcagaatgc agatgagcct gtgagaaggt tctgaagccg 3720

gactacagtt tggtcaagca aacaatcttg tcatggattc agtcatataa ataagggtca 3780

cccagcccag gggaggtgcc ccaccccatc tgttccctct ccctccccac actgagtccg 3840

aacctttcag gctttgcccc cttcacacac tccaaattta ttcttctact tctcttcctg 3900

caggtaccag actccggcca cccagcgctt acctgggact gctgggcctc tgccccgtgg 3960

ggacctgtcc tccaggaaac aaggccagac acaggagggc agggaggact cttctccagg 4020

gccggtgcgc cgtctcttca gccccatggc acttgactta ggcagagcct acagcaccct 4080

caccccagtc cctgcagcca ccaggaggtg gtccccctca tcccattagc catcaccgcc 4140

attcacagag gtctcggact gaggctggca gggggagcac catgacccaa gatcagaacc 4200

ctgttgtctg tgcctctgga gaggtggggg caggagctga gggagggttt gggtggagag 4260

gggagaagat gcagtagcag gagcagatgc tggcaggtag agacaaactt ttatgacctt 4320

tgccttctga cctttgcctc tggccactgc tccaactaaa acagaatggc cccctctggg 4380

aacagggctt cctatgggct gggaagcatg gagcccccac agtgtggcta tgcaggggag 4440

tgaggaccag gtgggggcag gcctgtgggg gtcacagagc tgggctaagc ttcagaggga 4500

agtggcccct gggaggggga atggctgggg ttaagaccct gggttcccac gcccccaaaa 4560

cagaagtaga attagggaga aaggaccccc aagaccaagg acggcaccta tcagaggagc 4620

tctccacggg caggaggtgt cccagggtga gggtggccag gacaggtcta gggaaatgca 4680

ggtggagcag gacccagaga tggattggag atgccggagg ggaggcttcc tagcgggagc 4740

ggagacaggc actgcagaca agtgtcagcg ggaggggctc tgggtgggga agaagactgg 4800

gacttggagg aagacctctc cagggagaag ggaggagggg gaaggagaag gggaggaagt 4860

gggaggagga gagtgctcat cctggaagcc acagcctcgg agagaacttt ctagaaggaa 4920

ggcatgacca tcagtgtccc aggatgctga gaggccagga aaggtgaggc ctcaaggcgc 4980

catggggttg tggtgacccc aagatcactg ggcacagagc agggatggct gggggtggaa 5040

ggggaggggc gcgggctgag gttctagggc cccaaagcca ggtgtgatgt ggctctaggg 5100

ggagtgagga aggggagaat gtccctctga gcgtgcctct tggggaaggc aggggttctg 5160

gctggggctt ctccactccc aggaaaggag gtggtgtgga aggagcgggt gggacggagg 5220

agagagcgcc ccgcggccgc aggaccagca ggtgggggac cagggtcagc gctgctggag 5280

gggccttagc gcgacaggac tggccagaga ccggggatgt ggcacagaaa gagttaaagg 5340

gcaccccagg gaccgccctg ccggtccacc catgtcaccc atgttggccc ctactccagc 5400

ccccgtctgc tctgcagggg aaggaaccgg gagccgcggt gggggcgact gggggtgtcg 5460

gtctttccag aaaatcaggc aggcatcagg aaagaagggg cgagaacccg gggacgcgag 5520

aggaaggggg cgagggggnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnncgcgtcc cagggcgtcc 5580

cctcccggga ctgggaccca ccgcgaccac cacctgctgg gccagggtcc gcgggctcag 5640

gggtctgcag gattagggtc tgcggaacca ggacccgtgg gacaaaggtc tgtggggcgc 5700

gggtccgcgg ggtggaattc agcgcgccga gtctgcgtat ggccggggta cgaggcgctc 5760

cctgcgcagg gtgggcagga ccgaagctcg ccgggagctg cgcggagggc gggcggggac 5820

cctccggtgc cgctcccacc ccgcggggcc gcccccgagc ccgccctccg ccgccgccct 5880

cgccctcgtc gccgccggaa agtttgcacc gaccccgatc tggcagcgcc gcgaagacga 5940

gcggtcaccg gcgcccgacc cgagcgcgcc cagaggacgg cggggagcca agccgacccc 6000

cgagcagcgc cgcgcggtga gcacctgggc cgcggacccg aggggacgtt ggggagtcga 6060

cccggtgggg acagagaccg cggggcgggc gcggcggggc cgggggcgcg gggagcgggg 6120

agccggccgg gcggtctccg gggtccgggc tggtgcgctc ctcagtcccg tcagacaccc 6180

ccgttcccaa ccccggctcg gacaccaccc ggtcctgcac cgtcgggcag gtccaggggt 6240

ctcagcccct cccccgttct ctggtcctgg ggggcgcggc tgggggcggg ggtgtcgctg 6300

gccgcctggc gccctgcggc ggccacactg cagcggccac actccccact cagggccccg 6360

ggccccgccg ccctggggag cgcacaaagc gccgcggacg cgtccccgag gcgcggggtc 6420

tcaccagcgc tgtctcccct cggtgggctc ctgccccgag gactgcccgg tggcaccggc 6480

gcggcccagg atggggtgag gggtgtctgc gccccgcctg gccgctcctc ttccgcggcc 6540

cacactggcg actttgaccc cggcaagcgg gtcactgccc tgcccggctc cggccccccc 6600

ggcgccccac cacccggccg actcggccac cgggcttatg ctccgactct gaaccgactg 6660

accccggccc cctcggcgcc cgcatcctcc aaggaccggc cagggctgct ctctgccctt 6720

ggtattgggg acatcagggt tggggggtct gggtgcaccc acgcctgccc cgcccccacg 6780

gggtgagggc gcagggatag ggctttgtca acagcctgtg gcccctgatc ccgccccggt 6840

gccctgacct tccactacct tctctggttt cacaaaaaca tcccggctcc catcccggag 6900

ctcctcaaag cgtctgagag gccccttgcg gacgccctgg gagccccgct gccttcctgg 6960

accagtggcc gctccaccca tcctgggggc ccagctccag gtctgcgggt ccctcagccg 7020

cccccagtgg gaatcggtgg agcctgacgc agccaggagc gcccaagagt cacgtgttct 7080

gccagggagg acatgggaca ggacacgggg tgccagccct gcaaagcggc cggggcagtg 7140

gagctcaggt ggccctaagc cctggtggtg gctggtgtgg cccggcaggc agctgtggga 7200

gggaggaagg gggtggcatg cggtgggggt ctagagaagg cgggcagggc acctcgggag 7260

cccccccatt gggcacctcg ggaacccccc acattgggca cctcgggaac cctcccattg 7320

ggcacctcgg gaacccccca cattgggcac ctcgggaacc cccgcattgg gcacctcggg 7380

aaccctccca ttgggcacct cgggaacccc cctattgggc acctcgggaa cccccacatt 7440

gggcacctcg ggaacccccc ctattgggca ccttgggaac ccctccccta attctcagct 7500

gactccaagg cctgagaagg agcttggtca cctggactgt gaaggtggag ggtggggtcc 7560

ctggtgggtc gtcccaccta ccagctgtgt cgccggaagg gtaatacgga gcactgtggc 7620

cccggggagc cccgagtggc agctccacag ctgggagttt ctgtccactc cttcagtcaa 7680

caaacattga tcctgggctg accggggccc gggggtgtca gtgtctcctc tcgggggaga 7740

gggctgggtg agatcaacag aggagcctcc cttcttccct tcaggctggt gtcaccttca 7800

gtgatggggc agggtcccca cttgggaagt taaatcgtcg tccccgtccc aggaccacag 7860

cagcctcagc cctgctctcc aggccaggct ctctcatggg tgctcagctg gaaattggtc 7920

cccccccggc tccacccacc cctgttgggg tgaggagctg gagtctccct acccatatgg 7980

gacccaccac ccgcagggaa cggaggacgc tcacacttct gcacctcctg cctcactatc 8040

agagacccag tggagaattg cctcccacct cacctcttgt attcagaggc cctgacccct 8100

agggatccgg gactaggggt gccctatggg gagcccacct gtggcctgtg gatgctgagc 8160

tgtcggggga atcctccagg atccccagcc ccaccttccc aaccttctgt tgaggctgag 8220

gggacacaga gccccactcc tgggtcctga ctgtttcaaa gaaaggcctg ggggactggg 8280

cagccaaccc ctccctcggc tcgctggggt ctccagactg gctgcccggc tggaaggtgg 8340

ggccctggca cgcgaggacc tcatgtgtgg aggcactggc ttggggggtg ctcccagtgg 8400

ctctagagtc aacatgacag gcatcgaatg gctcctgttt ctctggcaga gttggggcag 8460

agccaggctt ggccacgctg ggctctaagg ggctgtcatt ttgcccaggg agctcctggc 8520

tgggtggtcc tccccccagg gtgagcacgc gtccccccca cccccacttc gaggcgccca 8580

ggcagggaac agctcattgg ccagtgtcct tcctccttgt cccccgcctg catctccacc 8640

atccaccctg ctccagctgc cccttgtccc tctccccgtc ccctgcccag agccccaggt 8700

ctcccctgca cccctgagcc tgcccaccta gcagtgcccc tcgtccaggg cccctctggg 8760

ttgggggtgc acacagtggg gagaggcggc tcctgctgct cctcacccag cccggctcag 8820

tggccggagc cgcccaggac agtggcagta gatggggctg tttgatcagg atcagggaag 8880

ataaggcccc ttgcgtgacc ccagagctgg ggacgccaaa actgcccctc ctcccccacc 8940

cgcctgccgc tgtctccgcc agggagaggc ccctactctg tgggtccttc gccccagcac 9000

caagcctgca tggctgctca cctggctcag gaactgggga tcagcgacac acgggtcctg 9060

cctcccatcg gcccctacat gagcccaggg tccaagggct gcggttggga gctctttagc 9120

agtctgtgac gcaggtgcct gtccctgtca ttcagctgtc acactgcttg gggcatctca 9180

ggccccgtta gcggggcagc cctgggtgga gctggcccca cgcgggctca cccagccgct 9240

acctggagga ggctaaaatc caggctgtcc cgtggcagcc agcagtccag gcctgcccgg 9300

aaaccctctg ctccagctgc agccttcgcc catctccttg cccctctccc cggcttcccc 9360

ctggcactgc cttccagctg gctggccctc catctgccca gccatccatc cacacctctt 9420

attccatttg agggtgcccc aaagaagagc ccgtaacagc ccgggggctc atagccagcc 9480

actcgcggga ccccgcacat gcacgtggac ccacaggaag accctccctg cttctcccac 9540

agaattcagt tggtgcagaa actgggctct gtagcaacga aaggccgatt tgtgtagctg 9600

ttgccacccc gaactcccag ctcagatgct ggctgtggca tggggaccag gggctgtgac 9660

tcccacagcc ctggcaggca ccacggggga tgtcctcccc accctgtgcc cccaccctag 9720

gccagctcct cctccaagtc gacgcccgca gtgctaacct caaaggactg tgcagccagc 9780

ctgtggcgtc ccatgggatc caggaagccc aaccgagcct tgcacggcac ccacgaggca 9840

cctaggcacc ccggtgctgg gcagggggca cacatgtgac acagacccct gagtgtgggc 9900

cccacacact tggcctggca cagctgcaag ccagcccagc cactttgctc gctgtggcac 9960

tggggccaag tgatggaagg tccaggcacc gccaccctca cgcttggcac attggctcag 10020

gtcagcctgg caagccagct ttcccagggg ctaagaatag gtgaggagga tggtgaggaa 10080

gcagccgggg gctgtcaact gagggaggag gtcaccatct ggggaggctg gtcccccacc 10140

caagagcatt gggtcaccct gcaggaaggt ggctgccacc agcaatgaga cgaggggctc 10200

tgcgaccctc agagctgcca gccagccagc cctgggtggc aagagtgact cctcctgggg 10260

tctcctccct cctatcgccc tctttttttt tttttttttt tttgagacgg agtctcgctc 10320

tgtcacccag gctggactgc aatggcgcaa tctccgctca ctgcaagctc tgcctcccgg 10380

gttcacatca ttctcctgcc tcaagctccc gagtagctgg gactacaggc gcctgccacc 10440

acgcctggct aattttttgt atttttagta gacatggggt ttcactgtgt tagccaggat 10500

ggtctcaatc tccagacctc gtgatccacc cccctcggcc tcccaaagtg ctgggattac 10560

aggtgtgagc caccacgccc agcccccagc tccctcttta tccctaggac cctgaggctc 10620

agaggggcag cttcagggga ggacacccca ctggccagga cgccccaggc tctgctgctc 10680

tgccactcag ctgccctcgg aggagcgtac acacccacca ggactgcatt gccccagctg 10740

tgcagcccct gccagatgtg ggaggcagct agctgcccag aggcatgccc ccctgccagc 10800

cacagcgacc cctgctgctg ttgctgctgc tgctggcctg ccaggtgagg actcacagca 10860

ccctcagcac ccaggggccc tcctgtgagg actgcacact gatggctctc tgtctgcctg 10920

cctgcctgcc tgcctgtctg cctgcctgtc tgtctgtctg cccgtctgcc tgcccatctg 10980

cctgtctgtc tgcctgtccg tctgtctgtc catctgtcca tctgcctatc catctgcctg 11040

cctgtctgcc tgtccgtctg cctgtctgtc tgcctgtcca tctgtccatc tgcctatcca 11100

tctgcctgcc tgtctgtcgg cctgcctgcc tgcctgtctg tctgctgcct gtctgtccgt 11160

ctgcctgtct gcctgtccgt ctgcctgcct gtccgtctgc ctgtccgtct gcctgcctgc 11220

ctgtctgtct gcctgcctgt ctgcctgcct gtccgtctgc ctgtccgtct gcctgcctgt 11280

ctgcctgcct gtctgcctgt ctgcccgtct gcctgtctgt ctgcctgtcc gtctgcctgt 11340

ctgtccgtct gtccatctgc ctatccatct gcctgcctat ctgtctgtcc gtctgcctgc 11400

ctgtctgtct gcctgtctgc ctgtctgtct gcctgtctgt ccatctgcct atccatctac 11460

ctgcctgcct gtctgcctgt ctgtctgcct gtctgtctgc ctgcctgtct gtctgtctgt 11520

ctggttgctt gtgcatgtgt cccccagcca caggtcccct ccgctcaggt gatggacttc 11580

ctgtttgaga agtggaagct ctacggtgac cagtgtcacc acaacctgag cctgctgccc 11640

cctcccacgg gtgagccccc cacccagagc ctttcagcct gtgcctggcc tcagcacttc 11700

ctgagttctc ttcatgggaa ggttcctggg tgcttatgca gcctttgagg accccgccaa 11760

ggggccctgt cattcctcag gcccccacca ccgtgggcag gtgaggtaac gaggtaactg 11820

agccacagag ctggggactt gcctcaggcc gcagagccag gaaataacag aacggtggca 11880

ttgccccaga accggctgct gctgctgccc ccaggcccag atgggtaata ccacctacag 11940

ccccgtggag ttttcagtgg gcagacagtg ccagggcgtg gaagctggga cccaggggcc 12000

tgggagggct cgggtggaga gtgtatatca tggcctggac acttggggtg cagggagagg 12060

atagggctgg aggactcacc cgggaggcag tgcctgggtt cggatgaggg aggcagccac 12120

cactgggcag aggggggcag gtgtggcagc ctccattggg cagagggagc agatgtggca 12180

gccacaggtt tggcgatgca cctgggaagg atgaaaatgg cattggggtt cagcccccag 12240

agagggaggt gctgagagaa ggtcacggag aatgggggac cccagtgtgg gtttggggca 12300

catttgagat ggggggtctc caagggaagg tgtcctgcag agctgcaatt cagggctggg 12360

ctgggcgtgc tagcggaggc tggtccaggg gaggtggatg gtcaggtgag gaaggtggag 12420

gtcagatggg ggaggtggag gtcaagtggg ggagggagca gcccaggcca tgtcctgggc 12480

gaggtgacgg ccgagctcag gcttccagag agaggagaga ggcctgctga gggagcccct 12540

tctcccaccc tgccctgccc tgctctgccc tgccctaccc taccctgcag agctggtgtg 12600

caacagaacc ttcgacaagt attcctgctg gccggacacc cccgccaata ccacggccaa 12660

catctcctgc ccctggtacc tgccttggca ccacaaaggt acccatagag gggaggaact 12720

gtgggggggg cgggcccagg gtggggctga ccccagcctc cccccacacc cccagtgcaa 12780

caccgcttcg tgttcaagag atgcgggccc gacggtcagt gggtgcgtgg accccggggg 12840

cagccttggc gtgatgcctc ccagtgccag atggatggcg aggagattga ggtccaggtc 12900

agtgggcggc aggcaggcgc ggtggggctg gatgggaacg ggcatggggg cccctgcctg 12960

gccctcacag gccactgtaa ctcgcagaag gaggtggcca agatgtacag cagcttccag 13020

gtgatgtaca cagtgggcta cagcctgtcc ctgggggccc tgctcctcgc cttggccatc 13080

ctggggggcc tcaggtagga ttccgccagc gcccggggcg gccgcagagg acagggagga 13140

ggacgggcgc tgactggctg tgcccacagc aagctgcact gcacccgcaa tgccatccac 13200

gcgaatctgt ttgcgtcctt cgtgctgaaa gccagctccg tgctggtcat tgatgggctg 13260

ctcaggaccc gctacagcca gaaaattggc gacgacctca gtgtcagcac ctggctcagt 13320

gatggagtga gcccccctcg gcggccccag gcaggtgggt gggtgggcag ccaggcaggt 13380

ggccacgtag ccgcgctcac actgcacctg taccaggcgg tggctggctg ccgtgtggcc 13440

gcggtgttca tgcaatatgg catcgtggcc aactactgct ggctgctggt ggagggcctg 13500

tacctgcaca acctgctggg cctggccacc ctccccgaga ggagcttctt cagcctctac 13560

ctgggcatcg gctggggtga gtgggctggc atgagagggg gttaaggcag gctgaccaag 13620

cctttgggac cacagctgct gccccccaca ggtgccccca tgctgttcgt cgtcccctgg 13680

gcagtggtca agtgtctgtt cgagaacgtc cagtgagtat gagcggctgg acagcctggg 13740

gagggaccgg ggggctgggg tgcggcgctc tggcctgagg cagggagggg ccggggatga 13800

gcctggtgcc tggggagggg gtcatttgtg accttctccc ttccttttct gagacccgaa 13860

ttagatcctg gcaaaatcgg gacgggggtg ctgaggggcg gaggggctgg gggctgtgcc 13920

ccagtatgtg agtggcctgg cctcgcaggt gctggaccag caatgacaac atgggcttct 13980

ggtggatcct gcggttcccc gtcttcctgg ccatcctggt gaggaaatga agagccagga 14040

gcgcacccca ggcccctcct cccttggcgt cctgaggctg ccccaggaga cagcagcatc 14100

ctgtctgaga gcgctgggag ggagccggca cccagacagg acaccaggac actggccagc 14160

accctggaca ctgagccagg ctgttcctcc ctggctgtgt gcccaccagc cccagggcta 14220

tgtggcccag ggcctatctt gctgccaggc ccacctgcag gagggtcagg tggggccttc 14280

caagggcaca gagctgttcc ctggggctcg ggatgcccct gactcgcacc cttctcacac 14340

agatcaactt cttcatcttc gtccgcatcg ttcagctgct cgtggccaag ctgcgggcac 14400

ggcagatgca ccacacagac tacaagttcc ggtgggtgcc gcggcagctg gcgtctcgag 14460

acctggagac cctcagggcc agagggcagc tgggggtggg gactccaagc tccacgtgga 14520

tggtgcgggc cgagggtggg ggcggtgggt gactcaggcg ctgcctctgc aggctggcca 14580

agtccacgct gaccctcatc cctctgctgg gcgtccacga agtggtcttc gccttcgtga 14640

cggacgagca cgcccagggc accctgcgct ccgccaagct cttcttcgac ctcttcctca 14700

gctccttcca ggtgcccgcc cgcccgccgg ctcccccgcc cggggcgcag tgtgccaccc 14760

ctgaccaccc tgtctctcca gggcctgctg gtggctgtcc tctactgctt cctcaacaag 14820

gaggtaggtg ggagtggggg catctgagac catcagcact ggccgtcggg gtcaggggca 14880

gagagaggca cagggatgcc agccccaccc ctgcccgggg gttggaacac gtggggccca 14940

agcctttccc tccccctgct cttattgggt gcagttgcca tggcgctggg tgtcaggccc 15000

ccaggacagg ttggcctcag ccccatcgct acggtgtcca ccgtgggggt ccccaggtgt 15060

ctgcagactg ctttccgtgg cgatgctggg tggcatagct gtgcccagca gggagcttgt 15120

gtcgctctgc acccctcaga gcggagactg ggcatctccg atgaggccca cagcaggtcc 15180

cggtggggtg gagaggacag gcaggcccta ggactggcct gccccgtccc cctccccagg 15240

tgcagtcgga gctgcggcgg cgttggcacc gctggcgcct gggcaaagtg ctatgggagg 15300

agcggaacac cagcaaccac agggcctcat cttcgcccgg ccacggccct cccagcaagg 15360

agctgcagtt tgggaggggt ggtggcagcc aggattcatc tgcggagacc cccttggctg 15420

gtggcctccc tagattggct gagagcccct tctgaaccct gctgggaccc cagctagggc 15480

tggactctgg cacccagagg gcgtcgctgg acaacccaga actggacgcc cagctgaggc 15540

tgggggcggg ggagccaaca gcagccccca cctacccccc acccccagtg tggctgtctg 15600

cgagattggg cctcctctcc ctgcacctgc cttgtccctg gtgcagaggt gagcagagga 15660

gtccagggcg ggagtggggg ctgtgccgtg aactgcgtgc cagtgtcccc acgtatgtcg 15720

gcacgtccca tgtgcatgga aatgtcctcc aacaataaag agctcaagtg gtcaccgtgc 15780

atgtcctgga aagcagggct ggaaatgctg gggccgaagc agtgggggat ggaacagcgg 15840

tgggtggtca gcgccagtgc gggctgttga agggtccccc tgctgtccca gttcactcag 15900

agttggcact ggaaccccgg aggatcccga aggcagccag cctgtgccca tctgagcagg 15960

tcctggccac cttcccatcc tggttctggc gggcagtccc cctggacgct ttggccacca 16020

gagggtcacc attcaccagc agagacgtga ggggcacagt ggctaaggcg gcatgaggca 16080

tcacagtccc ctgaccgacc ccatcagcac tggattcacc cgagggcgtc ttctccctgg 16140

aggccgtgag gacactggca cctggctcat cggcccgccc ttcctctgag cctcctggcc 16200

tccgtttcat ctcagctcca gccccctcgg gcaatttaca ggccacgtag cagattgaag 16260

cgggaagaaa tgggcctgaa cattgccgcg ggtccaggcg acggaggagg gcaggttgcc 16320

caacttctgc acaggacccg gggtgcgcca cacacacgcc agtcctcgtg ccacacagag 16380

aggtccggcc tacgccagtc ctcgtgccac acagagaggt ccggcctacg ccagtcctcg 16440

tgccacacag agaggtccgg cctacgccag tcctcgtgcc acacagagag gtccggccta 16500

cgccagtcct cgtgccacac agagaggtcc ggcctacgcc agtcctcgtg ccacacagag 16560

aggtccggcc tacgccagtc ctcttgccac ctcgtggtgg gtgggcgccc tgcttgccag 16620

ccagggagca ccaggaaaga gctgcctcct gcgtgctgga cacaggaggt gcttcagggt 16680

ggggtctccc attgtgtggg gcccaacctg agtctaaggg cccagggacc acacagcggg 16740

ggtggagaca aattcagggt agaagctgtg aggggcctgt ggtcagcccc ccggggggtc 16800

cctgcagcag gcactgtgag acctactgag gtgtgtgcat gggctgggga aggagccagt 16860

caggtgcccc tgctctgagg agctgctggg aagtgctgct gggccctggg ggaaggggtg 16920

ctcacagccc ctgcctgggc cacgtgggct ggagccgctc aggcagagcc ggactaattg 16980

gggcaaatga ggggacagga ggcctctgag gaaaggtaaa tagaattact cacccgccag 17040

gcactggggc cctcctgggg gggccctcac cctgccaccc accacagggc ctgcatgcag 17100

cagggaggga agtgagctga ttaggcaagg ctggaccctt ctggggccct ggggttgctg 17160

tgattgggac ggcaaggcca ggagacggtc ccctgagctg cacctgctgg aggcctgtga 17220

tctcagacct taaggcttca ggccagctct acgcccctcc ggcctcaggt cctggctctc 17280

ctctgagccc tggatgcccg ggtgcctgtg tgggcacgag gctgctccga gtcagcacac 17340

ggaggtggac attctccttc atgccagctg agctcagggc tggtgactgc cctggggaaa 17400

ctgcccctca cctgggacct cctgacagcc ctccccattc ccgagtccct ctgcccttgt 17460

cctctttcac ctctgtcccg ccctcatccc taagggaact ggagcaggct ggtggagttg 17520

ggtggagttg gggactggca gggggtggac tcacccaggc aataaacact ggccctaacc 17580

aggcagtcct gcaggcaggt aggtggaggg actgtttttt ttcttttttg gagatagagt 17640

ctcactctgt tgcccaagtt ggagtgcagt ggcatgatct tggctcactg caaactccac 17700

ctcccaggtt catgtgattc tctgcctcag cctcccgagt agctgggatt ataggcgtgt 17760

gccacgacac ctggctaatt tttttttttt tttttttgag acggagtttc actctcgttg 17820

cccaggctgg agctcaatgg cgcgatctca gctcaccgca acctccgcct cccaggttca 17880

agcgattctc ctgccttagc ctccctagta gctgggatta caggcaggta tgtgatgccc 17940

ggcatcccaa aggggtatct gcaagagttg ggtgctgtgt gtgcatggct gggaggaaga 18000

tgactttgat accctggaat ctggtgtctg tggacacaaa aatactacta aaatgagagt 18060

ggagaccagg aaaaaggaag acatgaacta catgaaggac caaatctagg agagtcagaa 18120

gtgcgtcaca ggaatagggg accttgagcc agacagaagg ctcagcagag acaccctcaa 18180

ggggatgaaa gggattgagt gcactaatat ttagaggaga gagttcagga cttgattagt 18240

gactagtaca tagaaaacta aacaaatgag gctgggtgca gtggctcatg cctgtaatcc 18300

cagcactttg gggggccaag gcgggcgaat cacctgaggt caggagttcg agaccagcct 18360

ggccaacatg gtgaaacctc gtctctactg aaaatacaaa aattagccgg gcgtggtggc 18420

gggcgcctgt agtcccagct acttgggagc ctgaggcagg agaatcgctt gaacctggga 18480

ggcggaggct gctgtgagcc aagatggtgc cattgcactc caccctgggt gacagagcaa 18540

gactccgtct caaaaaaaaa aaaaaagaaa gaaaaaacca agcaaatgaa aaaagaaggc 18600

aattaataat tccaaagaaa agaaaaattt gggcagaaaa gaacaaaaca agcagaattt 18660

accatgactc agttctgaat acaaacacag acatcataat gtaaacacca acactgatgc 18720

aaccagaatc atgggagaaa aaagatctag ggagggtggt ggacgggaat atcacgtatg 18780

tactgggggt aggggagaga acaaaatggg aaaaatcaag aataattcac gttagaaata 18840

aaaatacaga gcaaaattta aaaatgcaaa gaatgaggtg aagagttcaa agtggtcacc 18900

tcggggccgg gcgcggtggc tcacgcctgt gatcccagca ctctgggagg ctgaggcggg 18960

cggatcacaa ggccaggagt ttgagaccat cctggctaac aaggagaaac cccatctcta 19020

ctaaaaatta gccaggcgtg gtggtgggcg cctgtagtcc cagctactcg ggaggctgag 19080

gcaggagaat ggcgtgaacc caggaggcgc agcttgcagt gagccgagat cgcgccactg 19140

cactccagct tgggcaacag agtgagactc cgcctcaaac aaaacaaaac aaaacaaaaa 19200

aacaaagtgg tcatctctag gcaaggtggg tgggagatgg ctagggctgc aggtccacta 19260

cgtgagctgg ctcagcctat ccccagacac cctgcactca ctcagcccgg ggtcctcccc 19320

ctgcactcac tcagccccgg gtcctcccct gcactcactc agccccgggt cctccccctg 19380

cactcactca gccccgggtc ctcccctgcc tgctctttct ctgaccctgc cctccactgt 19440

tcctttttct tctttctctc cctgttgtgt ccaggaacca ggcaccaccc tcatttcttc 19500

ttgatcaatc tttaaaaacc agcagtgctc agctaactct tcatctatct cccccgacct 19560

ggggctctgc tgaatccacg ctttagaccc agctatcagc tcggcatgta cagctggatg 19620

tccacaccga gctgctcacc ctgtccccag cttcttcctc ccactgtcca ctgcagaagc 19680

ctcctaacag gacccctgct gctaccccgg accctgcaac ccattcccac acagcagcca 19740

gatgctttga cacccgaagt ctcctatgaa tccgatgagg cctctgcacc acacctcatt 19800

ttacagaagt acaggggaaa caggggtctg ttgacaccac agagatgcag ctggccaaag 19860

gcagaatgtg gggtacacga ctgtcaaacg ccaggggtcc ttacacgaat ggtggaaaaa 19920

gaggggcatg ttacggatgg aggctcggga cacatgggcg ccgccttccc atgctgccag 19980

caacccacca ggaacctatt a 20001

<210> 3

<211> 2051

<212> DNA

<213> 智人

<400> 3

agtttgcacc gaccccgatc tggcagcgcc gcgaagacga gcggtcaccg gcgcccgacc 60

cgagcgcgcc cagaggacgg cggggagcca agccgacccc cgagcagcgc cgcgcggacc 120

ctgaggctca gaggggcagc ttcaggggag gacaccccac tggccaggac gccccaggct 180

ctgctgctct gccactcagc tgccctcgga ggagcgtaca cacccaccag gactgcattg 240

ccccagctgt gcagcccctg ccagatgtgg gaggcagcta gctgcccaga ggcatgcccc 300

cctgccagcc acagcgaccc ctgctgctgt tgctgctgct gctggcctgc cagccacagg 360

tcccctccgc tcaggtgatg gacttcctgt ttgagaagtg gaagctctac ggtgaccagt 420

gtcaccacaa cctgagcctg ctgccccctc ccacggagct ggtgtgcaac agaaccttcg 480

acaagtattc ctgctggccg gacacccccg ccaataccac ggccaacatc tcctgcccct 540

ggtacctgcc ttggcaccac aaagtgcaac accgcttcgt gttcaagaga tgcgggcccg 600

acggtcagtg ggtgcgtgga ccccgggggc agccttggcg tgatgcctcc cagtgccaga 660

tggatggcga ggagattgag gtccagaagg aggtggccaa gatgtacagc agcttccagg 720

tgatgtacac agtgggctac agcctgtccc tgggggccct gctcctcgcc ttggccatcc 780

tggggggcct cagcaagctg cactgcaccc gcaatgccat ccacgcgaat ctgtttgcgt 840

ccttcgtgct gaaagccagc tccgtgctgg tcattgatgg gctgctcagg acccgctaca 900

gccagaaaat tggcgacgac ctcagtgtca gcacctggct cagtgatgga gcggtggctg 960

gctgccgtgt ggccgcggtg ttcatgcaat atggcatcgt ggccaactac tgctggctgc 1020

tggtggaggg cctgtacctg cacaacctgc tgggcctggc caccctcccc gagaggagct 1080

tcttcagcct ctacctgggc atcggctggg gtgcccccat gctgttcgtc gtcccctggg 1140

cagtggtcaa gtgtctgttc gagaacgtcc agtgctggac cagcaatgac aacatgggct 1200

tctggtggat cctgcggttc cccgtcttcc tggccatcct gatcaacttc ttcatcttcg 1260

tccgcatcgt tcagctgctc gtggccaagc tgcgggcacg gcagatgcac cacacagact 1320

acaagttccg gctggccaag tccacgctga ccctcatccc tctgctgggc gtccacgaag 1380

tggtcttcgc cttcgtgacg gacgagcacg cccagggcac cctgcgctcc gccaagctct 1440

tcttcgacct cttcctcagc tccttccagg gcctgctggt ggctgtcctc tactgcttcc 1500

tcaacaagga ggtgcagtcg gagctgcggc ggcgttggca ccgctggcgc ctgggcaaag 1560

tgctatggga ggagcggaac accagcaacc acagggcctc atcttcgccc ggccacggcc 1620

ctcccagcaa ggagctgcag tttgggaggg gtggtggcag ccaggattca tctgcggaga 1680

cccccttggc tggtggcctc cctagattgg ctgagagccc cttctgaacc ctgctgggac 1740

cccagctagg gctggactct ggcacccaga gggcgtcgct ggacaaccca gaactggacg 1800

cccagctgag gctgggggcg ggggagccaa cagcagcccc cacctacccc ccacccccag 1860

tgtggctgtc tgcgagattg ggcctcctct ccctgcacct gccttgtccc tggtgcagag 1920

gtgagcagag gagtccaggg cgggagtggg ggctgtgccg tgaactgcgt gccagtgtcc 1980

ccacgtatgt cggcacgtcc catgtgcatg gaaatgtcct ccaacaataa agagctcaag 2040

tggtcaccgt g 2051

Claims (56)

1.一种治疗糖尿病的方法，其包括向有需要的个体施用靶向GCGR的修饰反义寡核苷酸的剂量和二甲双胍的剂量，其中所述修饰GCGR反义寡核苷酸和所述二甲双胍的所述剂量组合地有效治疗所述个体的糖尿病。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述修饰反义寡核苷酸的所述剂量和所述二甲双胍的所述剂量的组合小于治疗所述个体的糖尿病的单独修饰反义寡核苷酸的治疗有效量和/或单独二甲双胍的治疗有效量。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中与单独的所述修饰寡核苷酸或单独的所述二甲双胍相比，所述修饰寡核苷酸和所述二甲双胍的组合在治疗所述个体的糖尿病中提供大于加和的作用。

4.如前述任一项权利要求所述的方法，其中所述修饰寡核苷酸和所述二甲双胍组合地协同用于治疗所述个体的糖尿病。

5.如前述任一项权利要求所述的方法，其中所述修饰反义寡核苷酸包含SEQ ID NO:1的核苷酸序列。

6.如前述任一项权利要求所述的方法，其中修饰反义寡核苷酸的所述剂量为50mg/周。

7.如前述任一项权利要求所述的方法，其中修饰反义寡核苷酸的所述剂量为75mg/周。

8.如前述任一项权利要求所述的方法，其中所述剂量施用至少1-26周。

9.如前述任一项权利要求所述的方法，其中所述剂量向所述受试者每周施用一次。

10.如前述任一项权利要求所述的方法，其中所述治疗糖尿病的方法降低血浆葡萄糖水平。

11.如前述任一项权利要求所述的方法，其中所述治疗糖尿病的方法增加活性GLP-1水平。

12.如前述任一项权利要求所述的方法，其中所述治疗糖尿病的方法增加胰高血糖素水平。

13.如前述任一项权利要求所述的方法，其中所述治疗糖尿病的方法降低HbA1c浓度水平。

14.如前述任一项权利要求所述的方法，其中所述治疗糖尿病的方法降低果糖胺水平。

15.如前述任一项权利要求所述的方法，其中所述治疗糖尿病的方法改善葡萄糖耐受性。

16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述修饰寡核苷酸为单链修饰的寡核苷酸。

17.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述修饰寡核苷酸包含至少一个修饰核苷间键合。

18.如权利要求17所述的方法，其中所述修饰寡核苷酸的每个核苷间键合为硫代磷酸酯核苷间键合。

19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述修饰寡核苷酸中的至少一个核苷包含修饰糖。

20.如权利要求19所述的方法，其中至少一个修饰糖为双环糖。

21.如权利要求20所述的方法，其中所述双环糖包含4’-CH₂-O-2’桥、4’-CH(CH₃)-O-2’桥或2’-O(CH₂)₂-OCH₃基团。

22.如权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述修饰寡核苷酸中的至少一个核苷包含修饰糖。

23.如权利要求22所述的方法，其中所述修饰核碱基为5’-甲基胞嘧啶。

24.如权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述修饰寡核苷酸为单链的、由17个连接核苷组成、具有由SEQ ID NO:1组成的核碱基序列，所述修饰寡核苷酸包含：

由10个连接脱氧核苷组成的缺口区段；

由3个连接核苷组成的5’翼区段；并且

由4个连接核苷组成的3’翼区段；

其中所述缺口区段位于所述5’翼区段与所述3’翼区段之间；其中每个翼区段的每个核苷包括2’MOE核苷，其中所述修饰寡核苷酸的每个核苷间键合为硫代磷酸酯键合；并且其中所述修饰寡核苷酸的每个胞嘧啶为5’-甲基胞嘧啶。

25.一种治疗糖尿病的方法，其包括向有需要的个体施用50mg/周的ISIS 449884和500-3000mg日剂量范围的二甲双胍，其中所述剂量组合地有效治疗所述个体的糖尿病。

26.如权利要求25所述的方法，其中二甲双胍的所述剂量为1500mg/天。

27.一种治疗糖尿病的方法，其包括向有需要的个体施用75mg/周的ISIS 449884和500-3000mg日剂量范围的二甲双胍，其中所述剂量组合地有效治疗所述个体的糖尿病。

28.如权利要求27所述的方法，其中二甲双胍的所述剂量为1500mg/天。

29.一种用于通过向有需要的个体施用治疗糖尿病的组合，其包含靶向GCGR的修饰反义寡核苷酸的剂量和二甲双胍的剂量，其中所述修饰GCGR反义寡核苷酸和所述二甲双胍的所述剂量组合地有效治疗所述个体的糖尿病。

30.如权利要求29所述的组合，其中所述修饰反义寡核苷酸的所述剂量和所述二甲双胍的所述剂量的组合小于治疗所述个体的糖尿病的单独修饰反义寡核苷酸的治疗有效量和/或单独二甲双胍的治疗有效量。

31.如权利要求1或2所述的组合，其中与单独的所述修饰寡核苷酸或单独的所述二甲双胍相比，所述修饰寡核苷酸和所述二甲双胍的组合在治疗所述个体的糖尿病中提供大于加和的作用。

32.如前述任一项权利要求所述的组合，其中所述修饰寡核苷酸和所述二甲双胍组合地协同用于治疗所述个体的糖尿病。

33.如权利要求29-32中任一项所述的组合，其中所述修饰反义寡核苷酸包含SEQ IDNO:1的核苷酸序列。

34.如权利要求29-33中任一项所述的组合，其中修饰反义寡核苷酸的所述剂量为50mg/周。

35.如权利要求29-33中任一项所述的组合，其中修饰反义寡核苷酸的所述剂量为75mg/周。

36.如权利要求29-35中任一项所述的组合，其中所述剂量施用至少1-26周。

37.如权利要求29-36中任一项所述的组合，其中所述剂量向所述受试者每周施用一次。

38.如权利要求29-37中任一项所述的组合，其中所述组合降低血浆葡萄糖水平。

39.如权利要求29-38中任一项所述的组合，其中所述组合增加活性GLP-1水平。

40.如权利要求29-39中任一项所述的组合，其中所述组合增加胰高血糖素水平。

41.如权利要求29-40中任一项所述的组合，其中所述组合降低HbA1c浓度水平。

42.如权利要求29-41中任一项所述的组合，其中所述组合降低果糖胺水平。

43.如权利要求29-42中任一项所述的组合，其中所述组合改善葡萄糖耐受性。

44.如权利要求29-43中任一项所述的组合，其中所述修饰寡核苷酸为单链修饰的寡核苷酸。

45.如权利要求29-44中任一项所述的组合，其中所述修饰寡核苷酸包含至少一个修饰核苷间键合。

46.如权利要求45所述的组合，其中所述修饰寡核苷酸的每个核苷间键合为硫代磷酸酯核苷间键合。

47.如权利要求29-46中任一项所述的组合，其中所述修饰寡核苷酸中的至少一个核苷包含修饰糖。

48.如权利要求47所述的组合，其中至少一个修饰糖为双环糖。

49.如权利要求48所述的组合，其中所述双环糖包含4’-CH₂-O-2’桥、4’-CH(CH₃)-O-2’桥或2’-O(CH₂)₂-OCH₃基团。

50.如权利要求29-49中任一项所述的组合，其中所述修饰寡核苷酸中的至少一个核苷包含修饰核碱基。

51.如权利要求50所述的组合，其中所述修饰核碱基为5’-甲基胞嘧啶。

52.如权利要求29-51中任一项所述的组合，其中所述修饰寡核苷酸为单链的、由17个连接核苷组成、具有由SEQ ID NO:1组成的核碱基序列，所述修饰寡核苷酸包含：

由十个连接脱氧核苷组成的缺口区段；

由3个连接核苷组成的5’翼区段；以及

由4个连接核苷组成的3’翼区段；

其中所述缺口区段位于所述5’翼区段与所述3’翼区段之间；其中每个翼区段的每个核苷包括2’MOE核苷，其中所述修饰寡核苷酸的每个核苷间键合为硫代磷酸酯键合；并且其中所述修饰寡核苷酸的每个胞嘧啶为5’-甲基胞嘧啶。

53.一种用于治疗糖尿病的组合，其包括向有需要的个体施用50mg/周的ISIS 449884和500-3000mg日剂量范围的二甲双胍，其中所述剂量组合地有效治疗所述个体的糖尿病。

54.如权利要求53所述的组合，其中二甲双胍的所述剂量为1500mg/天。

55.一种用于治疗糖尿病的组合，其包括向有需要的个体施用75mg/周的ISIS 449884和500-3000mg日剂量范围的二甲双胍，其中所述剂量组合地有效治疗所述个体的糖尿病。

56.如权利要求55所述的组合，其中二甲双胍的所述剂量为1500mg/天。