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CN107835810A - 作为hdac1/2抑制剂的哌啶衍生物 - Google Patents

作为hdac1/2抑制剂的哌啶衍生物 Download PDF

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CN107835810A
CN107835810A CN201580076059.1A CN201580076059A CN107835810A CN 107835810 A CN107835810 A CN 107835810A CN 201580076059 A CN201580076059 A CN 201580076059A CN 107835810 A CN107835810 A CN 107835810A
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mmol
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alkyl
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CN201580076059.1A
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约翰·H·范·迪泽
拉尔夫·马齐切克
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Regenacy Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
Regenacy Pharmaceuticals Inc
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Abstract

本文提供了化合物、包括这样的化合物的药物组合物，以及使用这样的化合物来治疗与HDAC1和/或HDAC2活性相关的疾病或疾患的方法。

Description

作为HDAC1/2抑制剂的哌啶衍生物
相关申请
该申请要求2014年12月12日提交的美国临时申请序号62/091,221和2015年10月8日提交的美国临时申请序号62/238,931的优先权，它们通过引用以整体并入本文。
背景
目前感兴趣的生物靶标是组蛋白脱乙酰酶(HDAC)(参见，例如，使用组蛋白脱乙酰酶抑制剂用于治疗癌症的讨论：Marks等人Nature Reviews ACNcer 2001,7,194；Johnstone等人Nature Reviews Drug Discovery 2002,287)。通过赖氨酸残基的乙酰化和脱乙酰化的蛋白质翻译后修饰在调节其细胞功能上起至关重要的作用。HDAC是通过组蛋白和其他转录调节物的N-乙酰基-赖氨酸残基的脱乙酰化来调节基因表达的锌水解酶(Hassig等人Curr.Opin.Chem.Biol.1997,1,300-308)。HDAC参与控制细胞形状和分化的细胞途径，以及HDAC抑制剂已经显示出在治疗其他顽固癌症上是有效的(Warrell等人J.Natl.ACNcer Inst.1998,90,1621-1625)。
已鉴定了使用Zn作为辅因子的十一种人HDAC(Taunton等人Science 1996,272,408-411；Yang等人J.Biol.Chem.1997,272,28001-28007.Grozinger等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1999,96,4868-4873；Kao等人Genes Dev.2000,14,55-66.Hu等人J.Biol.Chem.2000,275,15254-15264；Zhou等人Proc.Natl.Acad.Sci U.S.A.2001,98,10572-10577；Venter等人Science 2001,291,1304-1351)并且这些成员基于对其酵母直向同源物的序列同源性分成三类(I、II和IV类)(O.Witt等人ACNcer Letters,2009,277,8-21)。I类HDAC包括HDAC1、HDAC2、HDAC3和HDAC8并且被称为“经典”的HDAC，这意味着在其基部具有Zn2+离子的催化口袋。
仍然需要制备结构上多样的HDAC抑制剂，特别是作为特殊类HDAC和个别HDAC的有效的和/或选择性抑制剂的HDAC抑制剂。
发明内容
本文提供化合物、包含这样的化合物的药物组合物，以及使用这样的化合物来治疗与HDAC活性相关的疾病或疾患(特别是涉及HDAC1和/或HDAC2表达的疾病或疾患)的方法。涉及HDAC1和/或HDAC2表达的疾病包括但不限于各种类型的癌症和血红蛋白病，如镰状细胞贫血和β地中海贫血。
因此，在一方面，本文提供了式I的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一种实施方式中，本文提供了式II的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在具体实施方式中，本文提供了式III的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在另一实施方式中，本文提供了表1的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一方面，本文提供了包含与药学上可接受的载体一起的式I、式II、
式IIa、式III或式IIIa的化合物，表1中呈现的化合物，表1a中呈现的
化合物，或它们的药学上可接受的盐的药物组合物。
在另一方面，本文提供了抑制受试者中HDAC1和/或HDAC2的活性的方法，所述方法包括向所述受试者施用式I、式II、式IIa、式III或式IIIa的化合物，表1中呈现的化合物，表1a中呈现的化合物，或它们药学上可接受的盐。
在另一方面，本文提供了选择性地抑制受试者中HDAC1和/或HDAC2中的每一种高于其他HDAC的活性的方法，所述方法包括向所述受试者施用式I、式II、式IIa、式III或式IIIa的化合物，表1中呈现的化合物，表1a中呈现的化合物，或它们药学上可接受的盐。在一些实施方式中，所述化合物具有比对于其他HDAC大5倍至1000倍的对于HDAC1和/或HDAC2中的每一种的选择性。在其他实施方式中，当在HDAC酶测定中测试时所述化合物具有比对于其他HDAC大大约5倍至大约1000倍的对于HDAC1和/或HDAC2中的每一种的选择性是。
在另一方面，本文提供了用于治疗受试者中由一种或多种HDAC介导的疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用式I、式II、式IIa、式III或式IIIa的化合物，表1中呈现的化合物，表1a中呈现的化合物，或它们药学上可接受的盐。在一些实施方式中，疾病是由HDAC1和HDAC2介导。在另一实施方式中，疾病由HDAC1介导。在又一实施方式中，疾病由HDAC2介导。
在另一方面，本文提供了用于治疗受试者中疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用式I、式II、式IIa、式III或式IIIa的化合物，表1中呈现的化合物，表1a中呈现的化合物，或它们药学上可接受的盐。在实施方式中，所述疾病是骨髓增生异常综合征。在实施方式中，所述疾病是血红蛋白病。在另一实施方式中，所述疾病是镰状细胞病。在又一实施方式中，所述疾病是β地中海贫血。
在另外的实施方式中，所述疾病是癌症。所述癌症可以选自肺癌、结肠癌、乳腺癌、神经母细胞瘤、白血病或淋巴瘤。在又另外的实施方式中，癌症是神经母细胞瘤。白血病可以是急性骨髓性白血病或急性巨核细胞白血病。
在另一方面，本文提供了用于治疗有需要的受试者中镰状细胞病、β地中海贫血、骨髓增生异常综合征、急性髓细胞性白血病、神经母细胞瘤或急性巨核细胞白血病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的式I、式II、式IIa、式III或式IIIa的化合物，表1中呈现的化合物，表1a中呈现的化合物，或它们药学上可接受的盐。
在本文描述的治疗方法的另外的实施方式中，待治疗的受试者是人。
在又另一方面，本文提供了用于治疗与GATA结合蛋白2(Gata2)缺陷相关的疾病或疾患的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的式I、式II、式IIa、式III或式IIIa的化合物，表1中呈现的化合物，表1a中呈现的化合物，或它们药学上可接受的盐。
在再另一方面，本文提供了一种用于增加细胞中GATA结合蛋白2(Gata2)表达的方法，所述方法包括使细胞与式I、式II、式IIa、式III或式IIIa的化合物，表1中呈现的化合物，表1a呈现的化合物，或它们药学上可接受的盐接触。
在另外的方面，本文提供了用于诱导受试者中HbG(γ-球蛋白)表达的方法，所述方法包括向所述受试者施用式I、式II、式IIa、式III或式IIIa的化合物，表1中呈现的化合物，表1a中呈现的化合物，或它们药学上可接受的盐。
附图简述
图1为示出化合物003相对于HDAC1、HDAC2和HDAC3的HDAC抑制曲线的图(参见，实施例43)。
图2示出在口服施用40mg/kg的化合物003之后大鼠中的血浆浓度随时间的变化(参见实施例44)。
图3示出化合物003相比于另一种已知的HDAC1/2抑制剂化合物A的体外胎儿球蛋白诱导(参见实施例45)。
图4是示出化合物005相对于HDAC1、HDAC2和HDAC3的HDAC抑制曲线的图(参见，实施例43)。
图5示出在口服施用20mg/kg的化合物005之后大鼠中的血浆浓度随时间的变化(参见实施例44)。
图6示出化合物005相比于另一种已知的HDAC1/2抑制剂化合物A的体外胎儿球蛋白诱导(参见实施例45)。
图7示出用各种HDAC1/2抑制剂(化合物005和A)治疗红系祖细胞导致GaTa2mRNA的诱导。
详述
本申请大体上涉及化合物、包含这样的化合物的药物组合物，以及使用这样的化合物来治疗与HDAC活性相关的疾病或疾患(特别是涉及任何类型的HDAC1和/或HDAC2表达的疾病或疾患)的方法。
定义
下面列出的定义是用来描述本发明的各种术语的定义。除非在特定情况下另有限制，这些定义无论是单独地或作为较大组的一部分适用于术语(当术语在整个说明书和权利要求书中使用时)。
术语“约”通常是指不超过值的10％、5％或1％的可能变化。例如，“约25mg/kg”一般在其最广泛的意义上表示22.5-27.5mg/kg，即25±2.5mg/kg的值。
术语“烷基”是指在某些实施方式中分别含有一个到六个或一个到八个碳原子的饱和的直链或支链烃部分。在烷基取代基中的碳原子数目可以通过前缀“CX-CY”表示，其中x是取代基中的碳原子的最小数目以及y是最大数目。同样地，CX链描述表明含有x个碳原子(即，不包括杂原子的数目)的基团。C1-C6-烷基部分的实例包括，但不限于：甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、新戊基、正己基部分；和C1-C8-烷基部分的实例包括，但不限于：甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、新戊基、正己基、庚基和辛基部分。
术语“烷氧基”是指-O-烷基部分。C1-C6-烷氧基的非限制性实例包括甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。烷氧基的烷基部分可以是直链或支链。
术语“芳基”是指具有一个或多个芳香环的单环或多环的稠合或非稠合的碳环系统，其包括，但不限于：苯基(即，C6-芳基)、萘基、四氢萘基、茚满基、茚基等等。在一些实施方式中，芳基具有6个碳原子(例如，C6芳基)。在一些实施方式中，芳基具有六个至十个碳原子(例如，C6-C10-芳基)。在一些实施方式中，芳基具有六个至十六个碳原子。
术语“环烷基”表示从单环或多环的饱和或部分不饱和的碳环化合物衍生的一价基团。C3-C6-环烷基的实例包括，但不限于：环丙基、环丁基、环戊基和环己基；C3-C8-环烷基的实例包括，但不限于：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环戊基和环辛基；和C3-C12-环烷基的实例包括，但不限于：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、二环[2.2.1]庚基和二环[2.2.2]辛基。还考虑了从具有通过去除单个氢原子的碳-碳双键的单环或多环碳环化合物衍生的一价基团。这样的基团的实例包括，但不限于：环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基，等等。
术语“杂芳基”是指具有至少一个芳族环的单环或多环(例如，双环或三环或更多)稠合的或非稠合的部分或环系统，其中成环原子中的一个或多个环形成原子是杂原子，如氧、硫或氮。在一些实施方式中，杂芳基具有一个至八个碳原子、一个到六个碳原子、2个至6个碳原子(例如，C1-C8-杂芳基、C1-C6-杂芳基或C2-C6-杂芳基)。在另外的实施方式中，杂芳基具有一个至十五个碳原子。在一些实施方式中，杂芳基含有其中一个环原子是选自氧、硫和氮中的五个到十六个环原子；零个、一个、两个或三个环原子是独立选自氧、硫和氮中的另外的杂原子；且其余环原子是碳。杂芳基包括，但不限于：吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、噁二唑基、噻吩基、呋喃基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、喹喔啉基、吖啶基，等等。
术语“杂环基”是指非芳族3-、4-、5-、6-或7-元环或二环或三环基团稠合或非稠合系统，其中(i)每个环含有独立选自氧、硫和氮的一个至三个杂原子，且其余原子是碳(例如，C2-C6-杂环基、C3-C6-杂环基或C3-C5-杂环基)，(ⅱ)每个5-元环具有0个至1个双键并且每个6-元环具有0个至2个双键，(iii)氮和硫杂原子可以可选地被氧化，(iv)氮杂原子可可选地被季铵化，以及(iv)上述环中任何一个可以稠合至苯环。术语“杂环基”包括，但不限于：[1,3]二氧戊环、吡咯烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基、噁唑烷基、异噁唑烷基、吗啉基、噻唑烷基、异噻唑烷基和四氢呋喃基。
术语“卤代”和“卤素”指的是选自氟、氯、溴和碘的原子。
术语“卤代烷基”是指如下烷基：其中所述烷基的碳原子中的任何一个或多个被如以上所定义的卤素取代。卤代烷基涵盖单卤代烷基、二卤代烷基和多卤代烷基基团。术语“卤代烷基”包括，但不限于：氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基和五氟乙基。
术语“羟基”是指-OH基团。
术语“HDAC”是指组蛋白脱乙酰酶，其是从核心组蛋白中的赖氨酸残基除去乙酰基团从而导致了稠化和转录沉默染色质的形成的酶。目前有18种已知的组蛋白脱乙酰酶，它们分为四组。包括HDAC1、HDAC2、HDAC3和HDAC8的I类HDAC与酵母RPD3基因有关。包括HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC9和HDAC10的II类HDAC与酵母Hda1基因有关。还被称为长寿因子(sirtuin)的III类HDAC与Sir2基因有关，并且包括SIRT1-7。只包含HDAC11的IV类HDAC有I类和II类HDAC二者的特征。术语“HDAC”是指18种已知的组蛋白脱乙酰酶中的任何一种或多种，除非另有规定。
术语“抑制剂”与术语拮抗剂同义。
术语“药学上可接受的盐”是指通过本发明的方法形成的化合物的那些盐，其在合理的医学判断范围内，适合用于与人类和低等动物的组织接触而没有不当毒性、刺激、过敏反应等等，并且与合理的利益/风险比相称。另外，“药学上可接受的盐”指的是所公开的化合物的衍生物，其中通过将存在的酸或碱的部分转化成其盐形式来修改母体化合物。药学上可接受的盐的实例包括但不限于，碱性残基如胺的无机酸盐或有机酸盐；酸性残基如羧酸的碱金属盐或有机盐；等等。本发明的药学上可接受的盐包括由例如无毒无机酸或有机酸形成的母体化合物的常规无毒盐。本发明的药学上可接受的盐可以通过常规化学方法由含有碱性或酸性部分的母体化合物来合成。一般地，这样的盐可通过在水中或在有机溶剂中或在这两者的混合物中使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计算量的适当的碱或酸进行反应来制备；一般地，非水介质像乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是优选的。合适的盐的列表见雷明顿氏药物科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)，第17版，Mack出版公司，伊斯顿，宾州，1985，第1418页和Pharmaceutical Science,66,2(1977)，其每一个通过引用整体并入本文。
本发明预想的取代基和变量的组合只是导致稳定的化合物的形成的组合。术语“稳定的”是指具有足以允许制造的稳定性和保持化合物的完整性持续足够时间段以用于本文详述的目的(例如，向受试者治性疗或预防性施用)的化合物。
术语“受试者”是指哺乳动物。因此，受试者是指例如，狗、猫、马、牛、猪、豚鼠等。优选地，受试者是人。当受试者是人时，受试者在本文可以被称为患者。
本发明的化合物
在一方面，本文提供了式I的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中，
X1是CR7或N；
X2是CH或N；
Y选自由以下组成的组：
Z选自由H、C1-C6-烷基、C6-芳基、C(O)NR4R5、C(O)OR6、C(O)C1-C6-烷基、C(O)C0-C6-烷基-C6-芳基、C(O)-C3-C6-环烷基、C(O)-C2-C6-杂环基和C(O)C0-6-烷基-杂芳基组成的组，其中，所述芳基、杂芳基、环烷基和杂环基可选地被C1-C6-烷基、卤素、C1-C6-卤代烷基、羟基或C1-C6-烷氧基中的1个或2个取代；
Ra和Rb是H，或Ra和Rb一起形成稠合C6-芳基；
R1选自由H和C1-C6-烷基组成的组；
R2选自由H、C1-C6-烷基和C6-芳基组成的组；
R3选自由H、C1-C6-烷基和C6-芳基组成的组；
或者R2和R3一起形成C2-C6-杂环基；
R4选自由H、C1-C6-烷基、C1-C6-烷基-OH和C1-C6-NH2组成的组；
R5是C1-C6-烷基；
或R4和R5一起形成C2-C6-杂环基，其中杂环基可选地被C1-C6-烷基、卤素、C1-C6-卤代烷基、羟基或C1-C6-烷氧基中的1个或2个取代；
R6选自由C1-C6-烷基和C0-C6-烷基-C6-芳基组成的组，其中芳基可选地被C1-C6-烷基、卤素或羟基中的1个或2个取代；和
R7选自由H、C1-C6-烷基和C3-C6-环烷基组成的组。在式I化合物的实施方式中，Ra和Rb是H，并且R3选自由H和C6-芳基组成的组。
在式I化合物的实施方式中，Y选自由以下组成的组：
在式I化合物的另一实施方式中，Z选自由H、C1-C6-烷基、C6-芳基、C(O)OR6、C(O)C1-C6-烷基、C(O)C0-C6-烷基-C6-芳基、C(O)-C3-C6-环烷基和C(O)C0-6-烷基-杂芳基组成的组，其中所述芳基、杂芳基和环烷基可选地被C1-C6-烷基、卤素、C1-C6-卤代烷基、羟基或C1-C6-烷氧基中的1个或2个取代。
在实施方式中，式I化合物是式II化合物：
或其药学上可接受的盐。
在式I或式II化合物的实施方式中，X1和X2各自是N，或X1和X2各自是CH。
在式I或式II化合物的另一实施方式中，Y为：
在式I或式II化合物的另一实施方式中，Z选自由C(O)NR4R5、C(O)OR6、C(O)-C3-C6-环烷基、C(O)-C2-C6-杂环基和C(O)C0-6-烷基-杂芳基组成的组，其中杂芳基、环烷基或杂环基可选地被C1-C6-烷基、卤素或羟基中的1个或2个取代；和
R6是C6-芳基。
在式I或式II化合物的又另一实施方式中，Z选自由H、C1-C6-烷基和C6-芳基组成的组。
在式I或式II化合物的实施方式中，R1是H。
在式I或式II化合物的另一实施方式中，R2是H。
在式I或式II化合物的另一实施方式中，R3是H、甲基、乙基、异丙基或苯基。在式I或式II化合物的另一实施方式中，R3选自由H或C6-芳基组成的组。在式I或式II化合物的又另一实施方式中，R3是H。
在实施方式中，式I化合物是式IIa化合物：
或其药学上可接受的盐。
在式IIa化合物的实施方式中，Y为：
在式IIa化合物的另一实施方式中，Z选自由C(O)NR4R5、C(O)OR6、C(O)-C3-C6-环烷基、C(O)-C2-C6-杂环基和C(O)C0-6-烷基-杂芳基组成的组，其中杂芳基、环烷基或杂环基可选地被C1-C6-烷基、卤素或羟基中的1个或2个取代；和
R6是C6-芳基。
在式IIa化合物的又另一实施方式中，Z选自由H、C1-C6-烷基和C6-芳基组成的组。
在式IIa化合物的实施方式中，R1是H。
在式IIa化合物的另一实施方式中，R2是H。
在式IIa化合物的另一实施方式中，R3是H、甲基、乙基、异丙基或苯基。在式IIa化合物的又另一实施方式中，R3是H。
在具体实施方式中，R1是H；R2是H；以及R3是H。
在再一实施方式中，式I化合物是式III化合物：
或其药学上可接受的盐。
在式III化合物的实施方式中，X1和X2各自是N，或X1和X2各自是CH。
在式III化合物的实施方式中，R2是H。
在式III化合物的实施方式中，R3是H、甲基或异丙基。
在式III化合物的实施方式中，R4是H且R5是C1-C6-烷基。
在式III化合物的另一实施方式中，R4和R5一起形成选自由吗啉基、哌啶基、哌嗪基和吡咯烷基组成的组的杂环基，其中所述吗啉基、哌啶基、哌嗪基和吡咯烷基可选地被C1-C6-烷基、卤素或羟基中的1个或2个取代。
在式III化合物的另一实施方式中，X1和X2是N；
R1是H；
R2是H；
R3是H或C1-C4-烷基；和
R4和R5一起形成选自由吗啉基、哌啶基、哌嗪基和吡咯烷基组成的组的杂环基，其中所述吗啉基、哌啶基、哌嗪基和吡咯烷基可选地被C1-C6-烷基、卤素或羟基中的1个或2个取代。
在式III化合物的另一实施方式中，X1和X2是N；
R1是H；
R2是H；
R3是H；和
R4和R5一起形成选自由吗啉基、哌啶基、哌嗪基和吡咯烷基组成的组的杂环基，其中所述吗啉基、哌啶基、哌嗪基和吡咯烷基可选地被C1-C6-烷基、卤素或羟基中的1个或2个取代。
在再一实施方式中，式I化合物是式IIIa化合物：
或其药学上可接受的盐。
在式IIIa化合物的实施方式中，R2是H。
在式IIIa化合物的实施方式中，R3是H、甲基或异丙基。在式IIIa化合物的另一实施方式中，R3是H。
在式III化合物的实施方式中，R4是H且R5是C1-C6-烷基。
在式IIIa化合物的实施方式中，R4和R5一起形成选自由吗啉基、哌啶基、哌嗪基和吡咯烷基组成的组的杂环基，其中所述吗啉基、哌啶基、哌嗪基和吡咯烷基可选地被C1-C6-烷基、卤素或羟基中的1个或2个取代。
在式IIIa化合物的另一实施方式中，
R1是H；
R2是H；和
R3是H。
在式IIIa化合物的另一实施方式中，
R1是H；
R2是H；
R3是H；和
R4和R5一起形成选自由吗啉基、哌啶基、哌嗪基和吡咯烷基组成的组的杂环基，其中所述吗啉基、哌啶基、哌嗪基和吡咯烷基可选地被C1-C6-烷基、卤素或羟基中的1个或2个取代。
在另一方面，本文提供了选自表1中呈现的化合物中的任何一种的化合物：
表1.
及其药学上可接受的盐。
在另一方面，本文提供了选自表1a中呈现的化合物中的任何一种的化合物：
表1a.
及其药学上可接受的盐。
在优选的实施方式中，本发明的化合物具有以下特性中的一个或多个：所述化合物能够抑制至少一种组蛋白脱乙酰酶(HDAC)；所述化合物能够抑制HDAC1和/或HDAC2；所述化合物选择性地抑制HDAC1和/或HDAC2超过其他HDAC。
本发明的另一目的是本文所述的化合物(例如，本文任一种式的化合物)在制造用于治疗本文的疾患或疾病的药剂中的用途。本发明的另一目的是本文所述的化合物(例如，本文任一种式的化合物)用于治疗本文的疾患或疾病的用途。
在另一方面，本文提供了合成式I、式II、式IIa、式III或式IIIa的化合物，表1中呈现的化合物，表1a中呈现的化合物，或其药学上可接受的盐的方法。本发明的化合物的合成可以在以下实施例中找到。因此，实施方式是使用本文描述的反应中的任何一个或组合制备本文任一种式的化合物的方法。该方法可以包括使用本文描述的一种或多种中间体或化学试剂。
在另一方面，本文提供了本文描述的任一种式的化合物的同位素标记的化合物。这样的化合物具有可以是放射性的被引入到该化合物中的一种或多种同位素原子(例如，3H、2H、14C、13C、35S、32P、125I和131I)。这样的化合物对于药物代谢研究和诊断以及治疗应用是有用的。
本发明的化合物的被保护的衍生物可以通过本领域普通技术人员已知的方法制备。适用于保护基团的产生及其除去的技术的详细描述可在T.W.Greene，“ProtectingGroups in Organic Chemistry(有机化学中的保护基团)”，第3版，John Wiley和Sons，Inc.，1999和其后续版本中找到。
本发明的化合物可以在本发明的方法过程中作为溶剂合物(例如，水合物)被方便地制备或形成。本发明化合物的水合物可以通过从使用有机溶剂(诸如二噁烷、四氢呋喃或甲醇)的水性/有机溶剂混合物中重结晶来方便地制备。
此外，本发明的化合物可以具有一个或多个双键，或一个或多个不对称中心。这样的化合物可以作为外消旋体、外消旋混合物、单一对映体、单个非对映异构体、非对映体混合物，以及顺式或反式或E或Z-双异构体形式，以及可以根据绝对立体化学被定义为(R)-或(S)-或对于氨基酸定义为(D)-或(L)-的其他立体异构形式。这些化合物的所有这样的异构体形式均明确地包括在本发明中。光学异构体可从其对应的光学活性前体通过以上所述的程序或者通过拆分外消旋混合物来制备。拆分可以在拆分剂的存在下通过色谱法或通过反复结晶或通过本领域技术人员已知的这些技术的一些组合来进行。关于拆分的进一步细节可在acques,等人,“Enantiomers,Racemates,and Resolutions”(John Wiley&Sons,1981)中找到。本发明的化合物还能够以多种互变异构形式表示，在这样的情况下，本发明明确地包括本文所述的化合物的所有互变异构形式。当本文所述的化合物包含烯属双键或其他几何不对称中心时，并且除非另有说明，否则旨在化合物包括E和Z几何异构体两者。同样，所有互变异构形式也旨在被包括在内。本文出现的任何碳-碳双键的构型仅仅是为了方便而选择，并且不旨在指定特定的构型，除非文本如此陈述；因此，在本文被任意描述为反式的碳-碳双键可以是顺式、反式或二者的任何比例的混合物。这样的化合物的所有这样的异构形式被明确地包括在本发明中。
合成的化合物可从反应混合物中分离和通过诸如柱色谱、高压液相色谱或重结晶的方法进一步纯化。如本领域技术人员可以理解的，合成本文的式的化合物的另外的方法将对本领域普通技术人员是明显的。此外，各种合成步骤可以以交替顺序或次序进行，以给出期望的化合物。此外，本文描述的溶剂、温度、反应持续时间等仅用于说明的目的，并且本领域普通技术人员将认识到反应条件的改变可产生本发明期望的化合物。用于合成本文描述的化合物的合成化学转化和保护基团方法(保护和脱保护)是本领域已知的。
在本文变量的任何定义中化学基团的清单的表述包括该变量作为任何单一基团或所列基团的组合的定义。本文变量的实施方式的表述包括作为任何单一实施方式或与任何其他实施方式或其部分组合的该实施方式。
药物组合物
本文还提供了包含与药学上可接受的载体一起的本发明的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。
一方面，本文提供了包含与药学上可接受的载体一起的本发明的化合物(即，式I、式II、式IIa、式III或式IIIa的化合物，表1中呈现的化合物，表1a中呈现的化合物，或它们药学上可接受的盐)中的任一种的药物组合物。
在一方面，本文提供了包含与药学上可接受的载体一起的式I的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。
在一方面，本文提供了包含与药学上可接受的载体一起的式II的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。
在一方面，本文提供了包含与药学上可接受的载体一起的式IIa的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。
在一方面，本文提供了包含与药学上可接受的载体一起的式III的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。
在一方面，本文提供了包含与药学上可接受的载体一起的式IIIa的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。
在一方面，本文提供了包含与药学上可接受的载体一起的表1的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。
在一方面，本文提供了包含与药学上可接受的载体一起的表1a的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。
在一方面，本文提供了包含与药学上可接受的载体一起的化合物005或其药学上可接受的盐的药物组合物。
这些药物组合物包含与一种或多种药学上可接受的载体一起配制的治疗有效量的本发明的化合物。术语“药学上可接受的载体”是指无毒、惰性的固体、半固体或液体的填充剂，稀释剂，包封材料或任何类型的配制助剂。药物组合物可以经口服、直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹膜内，局部(如通过粉剂、软膏或滴剂)、含服、或作为口腔或鼻腔喷雾剂施用于人和其他动物。
本发明的化合物可以作为药物组合物通过任何常规途径施用，特别是经肠内，例如口服，例如以片剂或胶囊的形式，或肠胃外，例如以可注射溶液或悬浮液的形式，局部，例如，以洗剂、凝胶剂、软膏剂或乳膏剂的形式，或以经鼻或栓剂的形式。
包含与至少一种药学上可接受的载体或稀释剂联合的游离形式或药学上可接受的盐的形式的本发明的化合物的药物组合物可以以常规方式通过混合、制粒或包衣方法来制造。例如，口服组合物可以是与以下一起的包含活性成分的片剂或明胶胶囊：a)稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸的镁盐或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂还有c)粘合剂、例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要，还有d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或海藻酸钠盐或泡腾混合物；和/或e)吸收剂、着色剂、调味剂和甜味剂。可注射的组合物可以是水性等渗溶液或悬浮液，且栓剂可以由脂肪乳液或悬浮液来制备。该组合物可以被灭菌和/或含有佐剂，如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂，溶解促进剂，用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。此外，它们还可以含有其他有治疗价值的物质。用于透皮应用的合适的制剂包括与载体一起的有效量的本发明的化合物。载体可以包括可吸收的药理学上可接受的溶剂以协助通过宿主的皮肤。例如，透皮设备是包括背衬构件的绷带形式，含有可选地与载体一起的化合物的储器，为了在受控和预定的速率下经延长的时间段将化合物递送至宿主的皮肤的可选的速率控制屏障，以及将设备固定在皮肤上的装置。还可以使用基质经皮制剂。适于局部应用于例如皮肤和眼睛的合适的制剂优选是本领域中公知的水溶液、软膏、乳膏或凝胶。此类可以包含增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。
片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以用包衣和壳(例如肠溶衣、控释包衣和药物配制领域中熟知的其他包衣)来制备。在这样的固体剂型中，活性化合物可以与至少一种惰性稀释剂(如蔗糖、乳糖或淀粉)混合。这样的剂型还可包含，如作为标准实践，除惰性稀释剂以外的其他物质，例如，压片润滑剂和其他压片助剂，如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，所述剂型还可以包含缓冲剂。
治疗方法
本文提供了用于治疗或预防受试者(诸如人或其他动物)中疾患的方法，是通过以达到所期望的结果所必要的量和持续时间向所述受试者施用治疗有效量的本发明的化合物。本发明的化合物的术语“治疗有效量”是指该化合物减少受试者的疾患的症状的足够的量。如在医疗领域所充分理解的，治疗有效量的本发明的化合物将以合理的益处/风险比应用于任何医学治疗。
本文所用的术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包括缓解、减少或减轻受试者中的至少一种症状或实现疾病的进展的延迟。例如，治疗可以是疾患的一个或几个症状的减少或疾患诸如癌症的完全根除。在本公开内容的含义之内，术语“治疗”还表示阻止、延缓发病(即，疾病的临床表现之前的时期)和/或降低疾病发展或噁化的风险。本文所用的术语“保护”是指预防、延迟或治疗受试者(例如哺乳动物或人)的疾病或适当情况下疾病的所有发展、继续或加重。本文所用的术语“预防(prevent)”、“预防(preventing)”或“预防(prevention)”包括预防与被预防的状态、疾病或疾患相关或由其引起的至少一种症状。
一般地，本发明的化合物将以治疗有效量经由任何本领域已知的常用和可接受的方式，单独地或与一种或多种治疗剂组合施用。治疗有效量可以根据疾病的严重性、受试者的年龄和相对健康状况、所用化合物的效力和其他因素而宽泛地变化。
在某些实施方式中，本发明的化合物的治疗的量或剂量可为约0.1mg/kg至约500mg/kg(约0.18mg/m2至约900mg/m2)，可选地，约1至约50mg/kg(约1.8至约90mg/m2)。通常，根据本发明的治疗方案包含向需要此治疗的患者每天以单剂量或多剂量施用约10mg至约1000mg的一种或多种本发明的化合物。治疗的量或剂量还将根据施用途径以及与其他药剂的共同使用的可能性而变化。
在改善受试者的状况后，如果是必要的，可以施用本发明的化合物、组合物或组合的维持剂量。随后，施用的剂量或频率或两者，可以根据症状被减小到使改善的病情得以保持的水平，当症状已经减轻至所期望的水平时，治疗应该停止。然而，受试者在疾病症状出现任何复发后可以需要长期的间歇性治疗。
然而，将理解的是，本发明的化合物和组合物的总每日用量将在合理的医学判断范围内由主治医师来决定。对于任何特定患者的具体抑制剂量将取决于各种因素，包括所治疗的疾患和疾患的严重性；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；施用时间、施用途径和所采用的具体化合物的排泄速率；治疗的持续时间；与所采用的具体化合物相组合或同时使用的药物；以及如在医疗领域熟知的因素。
在一方面，本发明提供了在受试者中选择性抑制HDAC和/或HDAC2中每一种超出其他HDAC的活性的方法，包括施用式I、式II、式IIa、式III或式IIIa的化合物，表1中呈现的化合物，表1a中呈现的化合物，或它们药学上可接受的盐。
在一种实施方式中，该化合物具有比对其他HDAC大大约2至1000(包括范围：诸如，例如，5至1000、10至1000、5至100等)倍的对HDAC1和/或HDAC2中的每一种的选择性。在另一实施方式中，当在HDAC酶测定中测试时该化合物具有比对其他HDAC大大约2至1000(包括范围：诸如，例如，5至1000、10至1000、5至100等)倍的对HDAC1和/或HDAC2中的每一种的选择性。
在另一方面，本发明提供了用于治疗受试者中由HDAC具体是HDAC1和/或HDAC2介导的疾病的方法，包括向所述受试者施用式I、式II、式IIa、式III或式IIIa的化合物，表1中呈现的化合物，表1a中呈现的化合物，或它们药学上可接受的盐。本发明的选择性HDAC1和HDAC2抑制剂具有良好的药代动力学特性(参见，例如，实施例44)。
在一方面，本文提供了用于治疗受试者中由HDAC1和/或HDAC2介导的疾病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐。
在一方面，本文提供了用于治疗受试者中由HDAC1和/或HDAC2介导的疾病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的式II化合物或其药学上可接受的盐。
在一方面，本文提供了用于治疗受试者中由HDAC1和/或HDAC2介导的疾病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的式IIa化合物或其药学上可接受的盐。
在一方面，本文提供了用于治疗受试者中由HDAC1和/或HDAC2介导的疾病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的式III化合物或其药学上可接受的盐。
在一方面，本文提供了用于治疗受试者中由HDAC1和/或HDAC2介导的疾病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的式IIIa化合物或其药学上可接受的盐。
在一方面，本文提供了用于治疗受试者中由HDAC1和/或HDAC2介导的疾病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的表I化合物或其药学上可接受的盐。
在一方面，本文提供了用于治疗受试者中由HDAC1和/或HDAC2介导的疾病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的表Ia化合物或其药学上可接受的盐。
在一方面，本文提供了用于治疗受试者中由HDAC1和/或HDAC2介导的疾病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的化合物005或其药学上可接受的盐。
HDAC1和HDAC2的抑制足以阻遏胎儿球蛋白。在经历红细胞分化的培养的人CD34+骨髓细胞中，这些化合物可以诱导胎儿血红蛋白表达的剂量依赖性增加(参见，例如，实施例45)。
因此，该化合物能够通过HDAC的抑制来阻遏胎儿球蛋白。因此，在一种实施方式中，所述化合物能够治疗患有或易患血红蛋白病的患者。在优选实施方式中，所述化合物能够治疗镰状细胞病或β地中海贫血。
在另一实施方式中，本发明的化合物在骨髓增生异常综合征的治疗中是有用的。
在某些实施方式中，本发明的化合物用作抗癌剂是有用的。本发明的化合物能够诱导癌细胞凋亡，从而能够治疗如癌症或增殖性疾病的疾病。在一种实施方式中，本发明的化合物通过实现肿瘤细胞死亡或抑制肿瘤细胞的生长而在癌症治疗中可能是有用的。
在某些实施方式中，癌症是肺癌、结肠直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、脑癌、肾癌、卵巢癌、胃癌(stomach cancer)、皮肤癌、骨癌、胃癌(gastric cancer)、乳腺癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、神经母细胞瘤、肝细胞癌、乳头状肾细胞癌、头和颈部鳞状细胞癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、视网膜母细胞瘤、宫颈癌、黑素瘤和/或皮肤癌、膀胱癌、子宫癌、睾丸癌、食道癌和实体瘤。在一些实施方式中，癌症是肺癌、结肠癌、乳腺癌、神经母细胞瘤、白血病或淋巴瘤。在其他实施方式中，癌症是肺癌、结肠癌、乳腺癌、神经母细胞瘤、白血病或淋巴瘤。在再一实施方式中，所述癌症是非小细胞肺癌(NSCLC)或小细胞肺癌。在另一实施方式中，癌症是神经母细胞瘤。
在另外的实施方式中，所述癌症是血液癌症，如白血病或淋巴瘤。在某个实施方式中，淋巴瘤是霍奇金淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤。在某些实施方式中，白血病是骨髓性、淋巴细胞性、髓细胞性、淋巴母细胞性或巨核细胞性白血病。在具体实施方式例中，所述白血病是急性髓性白血病和巨核细胞白血病。
在另一方面，本文提供了用于治疗受试者中镰状细胞病、β地中海贫血、骨髓增生异常综合征、急性髓细胞性白血病、神经母细胞瘤或巨核细胞白血病的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的式I、式II、式IIa、式III或式IIIa的化合物，表1中呈现的化合物，表1a中呈现的化合物，或它们药学上可接受的盐。
在一方面，本文提供了用于治疗受试者中的镰状细胞病、β地中海贫血、骨髓增生异常综合征、急性髓细胞性白血病、神经母细胞瘤或巨核细胞白血病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐。
在一方面，本文提供了用于治疗受试者中的镰状细胞病、β地中海贫血、骨髓增生异常综合征、急性髓细胞性白血病、神经母细胞瘤或巨核细胞白血病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的式II化合物或其药学上可接受的盐。
在一方面，本文提供了用于治疗受试者中的镰状细胞病、β地中海贫血、骨髓增生异常综合征、急性髓细胞性白血病、神经母细胞瘤或巨核细胞白血病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的式IIa化合物或其药学上可接受的盐。
在一方面，本文提供了用于治疗受试者中的镰状细胞病、β地中海贫血、骨髓增生异常综合征、急性髓细胞性白血病、神经母细胞瘤或巨核细胞白血病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的式III化合物或其药学上可接受的盐。
在一方面，本文提供了用于治疗受试者中的镰状细胞病、β地中海贫血、骨髓增生异常综合征、急性髓细胞性白血病、神经母细胞瘤或巨核细胞白血病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的式IIIa化合物或其药学上可接受的盐。
本文描绘的方法包括那些方法：其中受试者被鉴定为需要特定的所述治疗。鉴定需要此种治疗的患者可以在受试者或卫生保健专业人员的判断之内，且可以是主观的(例如意见)或客观的(例如通过测试或诊断方法可测量的)。
同样，如上面所讨论的，本发明的化合物是HDAC1和/或HDAC2的选择性抑制剂并且本身在由这些组蛋白脱乙酰酶(HDAC)调节的疾患的治疗中是有用的。例如，本发明的化合物可以在癌症(例如，肺癌、结肠癌、乳腺癌、神经母细胞瘤、白血病或淋巴瘤等)治疗中是有用的。因此，在又另一方面，根据本发明的治疗方法，通过使所述肿瘤细胞与本文所述的本发明的化合物或组合物接触来将肿瘤细胞杀死或抑制其生长。
因此，在本发明的另一方面，提供了用于治疗癌症的方法，包括向需要其的受试者施用治疗有效量的如本文所述的本发明化合物(即，本文的式中任一种的化合物)。在某些实施方式中，受试者被鉴定为需要此种治疗。在某些实施方式中，提供了用于治疗癌症的方法，包括以达到所期望的效果所必要的量和持续时间向需要其的受试者施用治疗有效量的本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物。在本发明的某些实施方式中，“治疗有效量”的本发明化合物或药物组合物是对于杀死肿瘤细胞或抑制肿瘤细胞生长的有效的量。根据本发明的方法的化合物和组合物，可使用有效杀死肿瘤细胞或抑制肿瘤细胞的生长的任何量和任何施用途径来施用。因此，如本文所用的表达“有效杀死肿瘤细胞或抑制肿瘤细胞的生长的量”是指试剂杀死肿瘤细胞或抑制肿瘤细胞的生长的足够量。所需确切的量将因受试者而变化，取决于受试者的物种、年龄和一般状况，感染的严重性，特定抗癌剂，其施用方式，等等。
在某些实施方式中，该方法包括将治疗有效量的所述化合物或其药学上可接受的衍生物向需要它的受试者(包括但不限于人或动物)施用。在某些实施方式中，本发明化合物对于治疗癌症和其他增殖性疾患是有用的，癌症和其他增殖性疾患包括但不限于：肺癌(例如非小细胞肺癌)、结肠直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、脑癌、肾癌、卵巢癌、胃癌、皮肤癌、骨癌、胃癌、乳腺癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、神经母细胞瘤、肝细胞癌、乳头状肾细胞癌、头和颈鳞状细胞癌、白血病(例如，CML、AML、CLL、ALL)、淋巴瘤(非霍奇金及霍奇金)、骨髓瘤、视网膜母细胞瘤、宫颈癌、黑素瘤和/或皮肤癌、膀胱癌、子宫癌、睾丸癌、食道癌和实体瘤。
在某些实施方式中，本发明提供了用于治疗本文描述的疾患的任何一种的方法，其中受试者是人。
根据前述，本发明还提供了用于预防或治疗在需要此种治疗的受试者中任何上述疾病或疾患的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐。对于任何上述用途，所需的剂量将根据施用方式、待治疗的具体病症和所期望的效果而变化。
实施例
出于说明的目的，在下面已经阐述实施例以描述本发明的某些具体实施方式。然而，权利要求的范围不得以任何方式受本文所阐述的实施例限制。对所公开的实施方式的各种变化和修改将对本领域技术人员是明显的且包括但不限于与本发明的化学结构、取代基、衍生物、制剂和/或方法相关的变化和修改的这样的变化和修改可以在不脱离本发明的精神和所附权利要求的范围的情况下做出。在本文方案中的结构中的变量的定义与本文呈现的化学式中的对应位置的定义相称。
实施例1：化合物001的合成
步骤1：在-76℃在N2下将双(三甲基硅基)氨基锂(1.0M的THF溶液，240ml，240mmol)缓慢加入到具有化合物1(25g，120mmol)的圆底烧瓶中。使反应在-76℃搅拌4小时，然后将碘甲烷(15ml，240mmol)注入该系统中。将反应混合物在-76℃搅拌30分钟，然后温热至室温并搅拌过夜。将反应混合物用150ml饱和的水性NH4Cl猝灭，用水稀释并用EtOAc(乙酸乙酯，或EA)萃取。将有机层用水和盐水洗涤，并经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到目标化合物2(25g，93％)，为浅黄色固体。
步骤2：将K2CO3(31g，224mmol)加入到化合物2(25克，111mmol)的DMSO(120ml)溶液中。H2O2(100ml)在60℃下缓慢加入到系统中，并且反应在60℃下搅拌过夜。该系统随后被引入到冷水中并用EA萃取。将有机层用水和盐水洗涤，并经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到目标化合物3(26g，96％)，为白色固体。
步骤3：将化合物3(26g，107mmol)用ACN(乙腈)(200ml)和5N KOH(100ml)溶解。然后将1,3-二溴-5,5-二甲基咪唑烷-2,4-二酮(15g，54mmol)加入到该系统中。将混合物搅拌过夜并浓缩以除去ACN。用2N HCl在冰浴中将水相的pH调节至约5，用EA萃取并分离。然后将水相的pH调节至10。收集沉淀，得到化合物4，为白色固体(16g，69％)。
步骤4：化合物4(2g，9.34mmol)、2-氯嘧啶(2.6g，14.02mmol)和DIPEA(5.3g，28.03mmol)的1,4-二噁烷(25ml)溶液在95℃下加热过夜。然后将反应混合物浓缩，并用EA/PE＝1/5的硅胶柱纯化，得到化合物5(1.8g，53％)，为浅黄色固体。
步骤5：将化合物5(465mg，1.28mmol)、2N NaOH(10ml，20mmol)在THF(10ml)和EtOH(10ml)中的溶液在55℃下加热2小时。浓缩反应溶液，并将水相的pH调节至约5～6。将得到的溶液用EA萃取，将有机层用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到目标化合物6(400mg，93％)，为白色固体。
步骤6：将化合物6(400mg，1.19mmol)、胺(345mg，1.19mmol)、EDCI(307mg，2.38mmol)和DMAP(290mg，2.38mmol)在DMF(10mL)中的混合物在55℃下加热过夜。将该混合物与水混合，并用EA萃取。将有机层用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将得到的组合物用EA/PE＝1/2的硅胶柱纯化，得到化合物7(400mg，55％)，为紫色固体。
步骤7：化合物7(400mg，0.65mmol)与HCl/1,4-二噁烷(5ml，20mmol)在1,4-二噁烷(10ml)中的溶液在室温下搅拌过夜。将反应溶液浓缩，并用PE洗涤，得到目标化合物8(350mg，100％)，为灰色固体。
步骤8：将化合物8(162mg，0.4mmol)和Et3N(80mg，0.8mmol)溶解在THF(5ml)中。将异氰酸异丙酯(CAS：1795-48-8，1.2当量)加入到该系统中。将混合物在室温下搅拌2小时。然后将混合物浓缩并通过制备型HPLC纯化，得到化合物001(35mg，16％)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.51(s,1H),8.84(s,2H),7.50(s,1H),7.44(d,J＝2.0Hz,1H),7.35(d,J＝5.1Hz,1H),7.29(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),7.23(d,J＝2.7Hz,1H),7.05(dd,J＝5.0,3.6Hz,1H),6.79(d,J＝8.3Hz,1H),6.09(d,J＝7.6Hz,1H),5.20(s,2H),3.53(d,J＝13.6Hz,2H),3.05(t,J＝10.7Hz,2H),2.25(d,J＝13.8Hz,2H),1.53–1.44(m,2H),1.42(s,3H),1.08(d,J＝6.6Hz,1H),1.04(d,J＝6.6Hz,6H)。LCMS:m/z＝494(M+H)。
实施例2：化合物002的合成
步骤1：在-78℃向用N2冲洗的煮沸的3颈烧瓶中的1(3g，14.28mmol)的溶液加入LHDMS(1M，21.4ml)。将反应搅拌3小时，然后缓慢地加入2-碘丙烷(3.6g，21.43mmol)。该反应溶液在-78℃搅拌，并温热至室温过夜。该混合物用H2O(2ml)猝灭并浓缩，溶解在EA(200ml)中，并用水(100ml×2)洗涤，接着用饱和NaCl(水性，100ml)洗涤。浓缩有机层，得到化合物2，为褐色固体(4g，100％)。
步骤2：向2(1g，3.97mmol)的DMSO(30ml)溶液中加入K2CO3(1.6g，11.9mmol)。将得到的反应混合物在60℃下搅拌。然后逐滴加入H2O2(30％水溶液，5ml)，并搅拌2小时。将EA(100ml)加入到该混合物中，然后用水(50ml×2)和饱和NaCl(水溶液，50ml)洗涤。用无水Na2SO4干燥和浓缩，得到化合物3，为白色固体(1g，90％)。
步骤3：在0℃向化合物3(2.7g，10mmol)的ACN(50ml)的溶液中加入KOH(4N，水溶液，50ml)和DBDMH(2.81g，5mmol)。将得到的反应混合物在室温下搅拌过夜。浓缩混合物和加入1N盐酸以调节pH至约6。然后将混合物用EA(50ml)萃取，并通过加入KOH将水相调节至约pH 9。将所得的水相用EA(50ml×3)萃取。EA相用无水Na2SO4干燥并浓缩，得到化合物4，为无色液体(1g，40％)。
步骤4：将化合物4(500mg，2.06mmol)和2-氯嘧啶-5-甲酸乙酯(384mg，2.06mmol)的NMP(10ml)溶液用N2冲洗，并在140℃下搅拌1小时。将EA(100ml)加入到混合物中，然后将其用水(50ml×2)和饱和NaCl(水溶液，50ml)洗涤。浓缩并经硅胶色谱柱纯化(PE/EA＝5/1)，得到化合物5，为白色固体(120mg15％)。
步骤5：向化合物5(400mg)在EtOH(水溶液，95％，5ml)中的混合物加入NaOH(2M，5ml)和在55℃下搅拌反应2小时。将水(50ml)加入到混合物中并用柠檬酸将pH调节到约7。将得到的水性混合物用EA(50ml×3)萃取。将EA相用无水Na2SO4干燥并浓缩，得到化合物6，为白色固体(340mg，粗品)。
步骤6：将6(100mg，粗品)、胺(79.6mg，0.274mmol)、EDCI(71mg，0.549mmol)、HOAT(75mg，0.549mmol)、DMAP(3.4mg，0.027mmol)、DIPEA(142mg，1.1mmol)的DMF(5ml)溶液在55℃下搅拌过夜。将EA(100ml)加入到该混合物中，然后用水(50ml×3)洗涤并浓缩，得到化合物7，为棕色油(200mg，粗品)。
步骤7：向7(200mg，粗品)的DCM(2ml)溶液加入TFA(2ml)并将所得混合物于室温下搅拌2小时。将混合物浓缩，得到化合物8，为棕色油(200mg，20％)。
步骤8：向化合物8(100mg，粗品)的DCM(5ml)溶液加入DIPEA(88.8mg，0.688mmol)和(44.6mg，0.275mmol)。该反应在0℃下搅拌1小时。将该混合物浓缩，并通过制备型HPLC纯化，得到化合物002，为白色固体(34mg，35％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.75(s,1H),9.64(s,1H),8.84(s,2H),7.58(s,1H),7.47(d,J＝1.9Hz,1H),7.39(d,J＝4.9Hz,1H),7.35(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),7.28(d,J＝3.3Hz,1H),7.09–7.04(m,1H),6.88(d,J＝8.4Hz,1H),3.64(d,J＝10.5Hz,2H),3.50(d,J＝11.9Hz,2H),3.37(d,J＝8.4Hz,2H),2.98(dd,J＝30.8,11.3Hz,6H),2.81(s,3H),2.61–2.55(m,1H),2.38(d,J＝11.7Hz,2H),1.51(t,J＝11.1Hz,2H),0.86(d,J＝6.9Hz,6H)。LCMS:m/z＝563(M+H)。
实施例3：化合物003的合成
步骤1：2-Cl-嘧啶(1.86g，10mmol)、胺(3.00，15mmol)和NEt3(3.0g，30mmol)在1,4-二噁烷(20ml)中的混合物在95℃下搅拌过夜。将混合物浓缩，加入EA(60ml)和水性柠檬酸(60mL)，将所得混合物搅拌30分钟。分离、干燥并浓缩有机层，得到化合物2(3.4g，产率：97％)，为浅黄色固体。
步骤2：化合物2(3.5g，10mmol)和NaOH(2M，15ml)在EtOH(15ml)和THF(15ml)中的混合物在60下搅拌2小时。浓缩混合物并加入水性柠檬酸直到pH<7。将所得混合物搅拌30分钟，并过滤，得到化合物3(2.8g，产率：90％)，为淡黄色固体。
步骤3：将化合物3(3.2g，10mmol)、化合物胺(2.9g，10mmol)、HOAT(2.0g，15mmol)、EDCI(3.8g，20mmol)在DMF(25ml)中的混合物在60℃下搅拌过夜。EA(100ml)和水性饱和NaCl(100ml)加入到该混合物中并搅拌所得混合物30分钟。分离出有机层，通过水性饱和NaCl(50ml×2)洗涤，干燥并浓缩以产生残留物，其通过CH3CN(10～20ml)洗涤，得到化合物4(2.9g，50％)，为灰色固体。
步骤4：在室温下向化合物4(2.9g，5mmol)的DCM(30ml)溶液加入TFA(5ml)2小时。将该混合物浓缩，得到化合物5(2.9g，100％)不经进一步纯化。
步骤5：在0℃下向化合物4(197mg，0.5mmol)和NEt3(250mg，2.5mmol)的DCM(5ml)溶液加入吗啉-4-碳酰氯(194mg，0.65mmol)。使用LCMS来监控反应完成。将NH3-H2O(0.5ml)加入到该反应混合物，然后将其搅拌30分钟并浓缩至残余物。通过硅胶柱纯化，得到化合物003(114mg，45％)，为浅黄色固体。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.54(s,1H),8.85(s,2H),7.88(d,J＝7.9Hz,1H),7.44(d,J＝1.9Hz,1H),7.35(d,J＝5.0Hz,1H),7.29(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),7.24(d,J＝3.4Hz,1H),7.05(dd,J＝4.9,3.7Hz,1H),6.79(d,J＝8.3Hz,1H),5.21(s,2H),4.01(dd,J＝7.2,3.3Hz,1H),3.68–3.51(m,7H),3.18–3.04(m,5H),2.88(t,J＝11.7Hz,2H),1.86(d,J＝10.0Hz,2H),1.45(dd,J＝20.5,11.3Hz,2H)。LCMS:m/z＝508(M+H)
实施例4：化合物004的合成
步骤1：将胺1(1g，4.67mmol)、4-溴苯甲酸甲酯(1g，4.67mmol)、Pd2(dba)3(428mg，0.47mmol)、Ruphos(218mg，0.47mmol)、Cs2CO3(4.5g，14.0mmol)的甲苯(50ml)溶液用N2冲洗，并在98℃下搅拌过夜。将该混合物过滤，浓缩，并通过硅胶色谱法(PE:EA＝5：1至1:1)纯化，得到化合物2，为黄色固体(1.1g，65％)
步骤2：向化合物2(1.1克)在EtOH(水溶液95％，5ml)中的混合物加入NaOH(2M，5ml)并将所得溶液在55℃下搅拌2小时。将水(50ml)加入到混合物中，并用柠檬酸将pH调节到7。将所得混合物用EA(50ml×3)萃取。EA相用无水Na2SO4干燥并浓缩，得到化合物3，为白色固体(1g，粗品)。
步骤3：将化合物3(800mg，粗品)、胺(694mg，2.395mmol)、EDCI(618mg，4.790mmol)、HOAT(651mg，4.790mmol)、DMAP(29mg，0.239mmol)和DIPEA(927mg，7.186mmol)的DMF(20ml)溶液在55℃搅拌3天。将EA(100ml)加入到混合物中，并将所得溶液用水(50ml×3)洗涤，浓缩，并通过硅胶色谱(PE:EA＝6:1-1:1)纯化，得到化合物4，为褐色固体(650mg，45％)。
步骤4：向化合物4(300mg)的DCM(2ml)溶液中加入TFA(2ml)并在室温下搅拌所得溶液2小时。将混合物浓缩，得到化合物5，为棕色油(400mg，粗品)。
步骤5：向化合物5(200mg，粗品)的DCM(20ml)溶液中加入DIPEA(190mg，1.478mmol)和吗啉-4-碳酰氯(110mg，0.739mmol)。将得到的反应混合物在0℃下搅拌1小时。将混合物浓缩，并通过制备型HPLC纯化，得到化合物004，为白色固体(67.4mg)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.85(s,1H),7.81(t,J＝21.9Hz,2H),7.58(d,J＝1.7Hz,1H),7.53–7.42(m,2H),7.40(d,J＝3.1Hz,1H),7.11(dd,J＝5.0,3.6Hz,2H),6.92(s,2H),3.63–3.47(m,4H),3.31–3.01(m,8H),1.98(d,J＝14.0Hz,2H),1.63(d,J＝12.9Hz,2H),1.37(s,3H)。LCMS:m/z＝520(M+H)。
实施例5：化合物005的合成
步骤1：向化合物1(1g，5mmol)和4-溴苯甲酸甲酯(1.1g，5mmol)的甲苯(20ml)溶液加入Pd2(dba)3(230mg，0.25mmol)、Ruphos(290mg，0.5mmol)和Cs2CO3(4.9g，15mmol)。将反应在N2气氛下于95℃下搅拌过夜。在起始材料完全消耗掉后，将非均相混合物通过硅藻土过滤并在真空中浓缩，得到粘稠的油，将其通过硅胶柱纯化，得到化合物2(1g，60％)。
步骤2：将化合物2(1g，3mmol)用MeOH(10ml)和THF(10ml)溶解。然后将2N NaOH(15ml)加入到该溶液中。将反应在55℃下搅拌1小时。浓缩反应混合物以除去溶剂并将pH调节到约4～5，并用EA萃取。将有机相用盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。将有机相浓缩，得到化合物3(800mg，82％)，为白色固体。
步骤3：向化合物3(500mg，1.56mmol)和胺(453mg，1.56mmol)的DMF(10ml)溶液加入HOAT(421mg，3.1mmol)、EDCI(592mg，3.1mmol)和DIPEA(400mg，3.1mmol)。将反应在55℃下搅拌过夜。将反应用水淬灭并用EA萃取。将有机相用盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。通过硅胶柱纯化，得到化合物4(800mg，80％)，为浅黄色固体。
步骤4：向化合物4(800mg，1.35mmol)的DCM(10ml)溶液加入TFA(5ml)。将溶液在室温下搅拌30分钟。将溶液浓缩，得到化合物5(600mg，100％)，为灰色固体。
步骤5：在0℃向化合物5(80mg，0.20mmol)和4-甲基哌嗪-1-碳酰氯盐酸盐(40mg，0.20mmol)的溶液加入三乙胺(100mg，1mmol)。将反应在0℃搅拌2小时，然后通过硅胶过滤。浓缩并通过制备型HPLC纯化，得到化合物004(15mg，15％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.37(s,1H),7.78(d,J＝8.7Hz,2H),7.45(d,J＝2.1Hz,1H),7.36(dd,J＝5.1,1.0Hz,1H),7.28(d,J＝2.1Hz,1H),7.26(d,J＝2.2Hz,1H),7.24(dd,J＝3.5,1.1Hz,1H),7.05(dd,J＝5.1,3.6Hz,1H),6.80(d,J＝8.3Hz,1H),6.65(d,J＝8.8Hz,2H),6.20(d,J＝8.1Hz,1H),5.08(s,2H),3.57(d,J＝13.0Hz,3H),3.15(s,4H),2.91(t,J＝11.3Hz,2H),2.33(s,3H),2.20(s,3H),1.91(d,J＝10.2Hz,2H),1.41–1.24(m,2H)。LCMS:m/z＝519(M+H)。
实施例6：化合物006的合成
步骤1-4：参见实施例5的步骤1-4，以获得化合物5。
步骤5：在0℃向化合物5(100mg，0.25mmol)和吡咯烷-1-碳酰氯(34mg，0.25mmol)的溶液加入三乙胺(100mg，1mmol)。将反应在0℃下搅拌2小时，然后通过硅胶过滤。浓缩并通过制备型HPLC纯化，得到化合物006(10mg，8％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.50(s,1H),7.79(d,J＝8.8Hz,2H),7.50(d,J＝2.1Hz,1H),7.40(d,J＝4.2Hz,1H),7.33(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),7.29(d,J＝2.7Hz,1H),7.07(dd,J＝5.1,3.6Hz,1H),6.91(d,J＝8.3Hz,1H),6.66(d,J＝8.8Hz,2H),3.63(d,J＝13.2Hz,2H),3.53(s,1H),3.26(t,J＝6.5Hz,4H),2.87(t,J＝11.2Hz,2H),1.91(d,J＝10.8Hz,2H),1.75(t,J＝6.5Hz,5H),1.34(dd,J＝20.6,10.1Hz,2H)。LCMS:m/z＝490(M+H)。
实施例7：化合物007的合成
步骤1：在-76℃于氮气气氛下将双(三甲基硅基)氨基锂(1.0M的THF溶液，240ml，240mmol)的溶液缓慢地加入到具有化合物1(25g，120mmol)的圆底烧瓶中。在-76℃下搅拌混合物4小时。然后将碘甲烷(15ml，240mmol)加入到系统中。在-76℃搅拌反应混合物30分钟，然后温热至室温，并搅拌过夜。用150ml饱和的水性NH4Cl淬灭反应混合物，用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到目标化合物2(25g，93％)，为浅黄色固体。
步骤2：将K2CO3(31g，224mmol)加入到化合物2(25g，111mmol)的DMSO(120ml)溶液中。在60℃下将H2O2(100ml)缓慢加入到该系统中并且将反应在60℃下搅拌过夜。完成后，系统用冷水淬灭并用EA萃取。将有机层用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到目标化合物3(26g，96％)，为白色固体。
步骤3：向化合物3(26g，107mmol)在200ml CH3CN中的溶液加入5N KOH(100ml)。然后将1,3-二溴-5,5-二甲基咪唑烷-2,4-二酮(15g，54mmol)加入到系统中。将反应搅拌过夜。完成后，将混合物浓缩以除去CH3CN，并且在冰浴中用2N HCl将水相的pH调节至5，用EA萃取，并分离。然后将水相的pH调节至10。收集沉淀，得到化合物4(16.1g，69％)，为白色固体。
步骤4：向化合物4(2g，9.34mmol)在1,4-二噁烷(25ml)中的溶液加入2-氯嘧啶-5-甲酸乙酯(2.6g，14.02mmol)和DIPEA(5.3g，28.03mmol)。将反应在95℃下搅拌过夜。浓缩并用EA/PE＝1/5的硅胶柱纯化，得到化合物5(1.8g，53％)，为浅黄色固体。
步骤5：化合物5(465mg，1.28mmol)和2N NaOH(10ml，20mmol)在THF(10ml)和EtOH(10ml)中的溶液在55℃下搅拌2小时。浓缩并将水相的pH调节至5-6，接着用EA(2×15ml)萃取。将有机层用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物6(400mg，93％)，为白色固体。
步骤6：形成了化合物6(400mg，1.19mmol)、2-氨基-4-(噻吩-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(345mg，1.19mmol)、EDCI(307mg，2.38mmol)和DMAP(290mg，2.38mmol)在DMF(10ml)中的溶液。将反应在55℃下搅拌过夜。完成后，该混合物加入到水中并用EA(2×15ml)萃取。将有机层用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。然后用EA/PE＝
1/2的硅胶柱纯化，得到化合物7(400mg，55％)，为紫色固体。
步骤7：在室温下向化合物7(400mg，0.65mmol)的1,4-二噁烷(10ml)溶液加入HCl/1,4-二噁烷(5ml，20mmol)过夜。浓缩并用PE洗涤，得到化合物8(350mg，100％)，为灰色固体。
步骤8：向化合物8(200mg，0.45mmol)和Et3N(101mg，2.2当量)的THF(10ml)溶液加入氯甲酸苯酯(phenyl carbonochloridate)(78mg，0.5mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。完成后，将混合物浓缩，并通过制备型HPLC纯化，得到化合物007(66mg，28％)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.71(s,1H),8.88(s,2H),7.68(s,1H),7.50(s,1H),7.42-7.35(m,
4H),7.30(d,J＝2.9Hz,1H),7.22(t,J＝7.3Hz,1H),7.12(d,J＝7.9Hz,2H),7.10-7.06(m,1H),6.91(d,J＝8.2Hz,1H),3.76(d,J＝60.0Hz,2H),3.32(d,J＝79.9Hz,2H),2.40(s,2H),1.65(s,2H),1.48(s,3H)。LCMS:m/z＝529
(M+H)+。
实施例8：化合物008的合成
步骤1-7：参见实例7的步骤1-7得到化合物008。
步骤8：向化合物8(100mg，0.22mmol)和Et3N(44mg，0.44mmol)在THF(5ml)中的溶液加入吗啡-1-碳酰氯(36mg，1.1当量)。在室温下搅拌该混合物2小时。完成后，将混合物浓缩，并通过制备型HPLC纯化，得到化合物008(50mg，44％)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.52(s,1H),8.85(s,2H),7.56(s,1H),7.44(s,1H),7.35(d,J＝5.0Hz,1H),7.29(d,J＝8.3Hz,1H),7.23(d,J＝3.1Hz,1H),7.07–7.03(m,1H),6.79(d,J＝8.4Hz,1H),5.22(s,2H),3.56(s,4H),3.08(d,J＝22.9Hz,6H),2.31(d,J＝12.9Hz,2H),1.56(t,J＝10.1Hz,2H),1.42(s,3H)。LCMS:m/z＝522(M+H)+
实施例9：化合物009的合成
步骤1：将化合物1(1.86g，10mmol)、化合物Boc-胺(3.0g，15mmol)和NEt3(3.0g，30mmol)在1,4-二噁烷(20ml)中的混合物在95℃下搅拌过夜。将混合物浓缩，并在加入EA(60ml)和水性柠檬酸(60ml)后，搅拌混合物30分钟。分离有机层，干燥并浓缩，得到化合物2(3.4g，97％)，为浅黄色固体。
步骤2：将化合物2(3.5g，10mmol)和NaOH(2M，15ml)在EtOH(15ml)和THF(15ml)中的混合物在60℃下搅拌2小时。将该混合物浓缩，并且加入水性柠檬酸调节至pH<7之后，搅拌混合物30分钟，并过滤，得到化合物3(2.8g，90％)，为浅黄色固体。
步骤3：将化合物3(3.2g，10mmol)、化合物Boc-胺(2.9g，10mmol)、HOAT(2.0g，15mmol)和EDCI(3.8g，20mmol)在DMF(25ml)中的混合物在60℃下搅拌过夜。向混合物中加入EA(100ml)和水性饱和NaCl(100ml)，并且搅拌混合物30分钟。分离有机层，通过水性饱和NaCl(50ml×2)洗涤，干燥并浓缩，得到残余物，将其经CH3CN(10-20ml)洗涤，得到化合物4(2.9g，50％)，为灰色固体。
步骤3：向化合物4(2.9g，5mmol)在DCM(30ml)中的溶液加入TFA(5ml)。在室温下搅拌混合物2小时。浓缩混合物，得到化合物5(2.9g，100％)，不经任何进一步纯化。
步骤4：在0℃下，向化合物5(197mg，0.5mmol)和NEt3(250mg，2.5mmol)在DCM(5ml)中的溶液加入哌啶-1-碳酰氯(96mg，0.65mmol)。监测LCMS直到反应完成。向混合物加入NH3H2O(0.5ml)，搅拌混合物30分钟，并浓缩，得到残余物，将其通过硅胶柱纯化，得到化合物009(114mg，45％)，为浅黄色固体。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.69(s,1H),8.86(s,2H),7.89(d,J＝8.0Hz,1H),7.49(s,1H),7.40(d,J＝5.1Hz,1H),7.36(d,J＝8.2Hz,1H),7.30(d,J＝3.3Hz,1H),7.07(dd,J＝5.0,3.7Hz,1H),6.90(d,J＝8.2Hz,1H),3.99(s,1H),3.56(d,J＝11.5Hz,2H),3.10(s,4H),2.84(t,J＝11.6Hz,2H),1.85(d,J＝10.7Hz,2H),1.52(s,2H),1.46(d,J＝8.3Hz,6H)。LCMS:m/z＝506(M+H)+。
实施例10：化合物010的合成
步骤1-7：参见实施例7的步骤1-7得到化合物8。
步骤8：向化合物8(100mg，0.22mmol)和Et3N(44mg，0.45mmol)在THF(5ml)中的溶液加入哌嗪-1-碳酰氯(60mg，0.24mmol)。在室温下搅拌混合物2小时。完成后，浓缩该混合物，得到粗的化合物9，为油(110mg，粗品)。
步骤9：在室温下向化合物9(100mg)在DCM(5ml)中的溶液加入TFA(1ml)40分钟。完成后，将混合物浓缩并在制备型HPLC上纯化，得到化合物010(35mg，30％，2步)，为黄色固体。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.70(s,1H),8.86(s,2H),8.79(s,2H),7.63(s,1H),7.49(d,J＝1.8Hz,1H),7.40(d,J＝5.0Hz,1H),7.36(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),7.29(d,J＝3.2Hz,1H),7.10-7.04(m,1H),6.90(d,J＝8.3Hz,1H),3.37(s,1H),3.29(s,4H),3.09(s,6H),2.32(d,J＝13.6Hz,2H),1.56(t,J＝10.2Hz,2H),1.43(s,3H)。LCMS:m/z＝521(M+H)+。
实施例11：化合物011的合成
步骤1-7：参见实施例7的步骤1-7得到化合物8。
步骤8：向化合物8(100mg，0.22mmol)和Et3N(45mg，0.45mmol)在THF(5ml)中的溶液加入4-甲基哌嗪-1-碳酰氯(40mg，0.24mmol)。在室温下搅拌混合物2小时。该混合物通过硅胶过滤，并用EA洗涤。浓缩并通过制备型HPLC纯化，得到化合物011(42mg，36％)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.88(s,1H),9.72(s,1H),8.86(s,2H),7.64(s,1H),7.49(d,J＝1.8Hz,1H),7.41(d,J＝5.0Hz,1H),7.37(dd,J＝8.3,2.0Hz,1H),7.30(d,J＝2.9Hz,1H),7.08(dd,J＝4.9,3.7Hz,1H),6.92(d,J＝8.4Hz,1H),3.63(d,J＝11.2Hz,2H),3.38(d,J＝8.2Hz,3H),3.15-2.97(m,6H),2.81(s,3H),2.33(d,J＝13.5Hz,2H),1.57(t,J＝10.1Hz,2H),1.43(s,3H)。LCMS:m/z＝535(M+H)+。
实施例12：化合物012的合成
步骤1：向化合物6(95mg，0.79mmol)和Et3N(159mg，1.6mmol)在THF(5ml)中的溶液加入双(三氯甲基)碳酸酯(119mg，0.4mmol)。该混合物在室温下搅拌2小时，并在下一步骤(步骤2)直接使用。
步骤2：参见实施例7的步骤1-7得到化合物8。将化合物8(162mg，0.4mmol)和Et3N(80mg，0.8mmol)在THF(5ml)中的溶液加入到包含化合物7的步骤1的反应混合物的溶液。反应在室温下搅拌2小时。然后将混合物浓缩并通过制备型HPLC并纯化，得到化合物012(35mg，16％)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.73(s,1H),8.86(s,2H),7.62(s,1H),7.50(s,1H),7.42(d,J＝5.0Hz,1H),7.38(d,J＝8.4Hz,1H),7.31(d,J＝3.1Hz,1H),7.08(dd,J＝5.0,3.7Hz,1H),6.93(d,J＝8.1Hz,1H),3.34(s,1H),3.31(s,1H),3.23(d,J＝5.6Hz,4H),3.08(t,J＝10.8Hz,2H),2.31(d,J＝13.7Hz,2H),1.94(d,J＝13.9Hz,4H),1.57(t,J＝10.0Hz,2H),1.43(s,3H)。LCMS:m/z＝556(M+H)+。
实施例13：化合物013的合成
步骤1：将4-碘苯甲酸甲酯(2.6g，10mmol)、化合物4(6.4g，30mmol)、Pd2(dba)3(915mg，1mmol)、Ruphos(467mg，1mmol)和Cs2CO3(9.75g，30mmol，3当量)在甲苯(30ml)中的混合物在氮气气氛下于95℃搅拌过夜。将混合物冷却并加入EA(100ml)。过滤并浓缩混合物得到残余物，将其通过硅胶柱纯化，得到化合物5(2.2g，60％)，为浅黄色固体。
步骤2：向化合物5(500mg，1.4mmol)在EtOH(15ml)和THF(15ml)中的溶液加入水性NaOH(2M，15ml)，并且将混合物在60℃搅拌2小时。浓缩混合物，得到残余物，并且加入水(100ml)然后在0℃下加入水性柠檬酸调节至pH<7，然后过滤得到化合物6(369mg，80％)，为白色固体。
步骤3：将化合物6(150mg，0.45mmol)、化合物Boc-胺(130mg，0.45mmol)、HOAT(103mg，0.76mmol)、EDCI(145mg，0.76mmol)和NEt3(154mg，1:52mmol)在DMF(5ml)中的混合物在60℃下搅拌过夜。向混合物加入EA(100ml)和水性饱和NaCl(100ml)，并且搅拌混合物30分钟。分离出有机层，用水性饱和NaCl(50ml×2)洗涤，干燥并浓缩，得到残余物，将其通过制备型TLC纯化，得到化合物7(123mg，45％)，为黄色固体。
步骤4：在室温下向化合物7(120mg，0.20mmol)在DCM(5ml)中的溶液加入TFA(3ml)2小时。浓缩混合物，得到化合物8(80mg，100％)，其不经进一步纯化用于下一步骤中。
步骤5：在0℃下向化合物8(80mg，0.20mmol)和Et3N(106mg，1.05mmol)在THF(5ml)中的溶液加入化合物吡咯烷-1-碳酰氯(74mg，0.30mmol)并搅拌2h。向混合物中加入EA(50ml)和水性饱和NaCl(50ml)，并且搅拌混合物30分钟。分离出有机层，通过水性饱和NaCl(50ml×2)洗涤，干燥并浓缩，得到残余物，其通过制备型TLC纯化，得到化合物013(99mg，80％)，为黄色固体。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.35(s,1H),7.75(d,J＝8.7Hz,2H),7.45(d,J＝2.0Hz,1H),7.36(d,J＝5.1Hz,1H),7.27(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),7.24(d,J＝3.5Hz,1H),7.05(dd,J＝5.0,3.6Hz,1H),6.79(dd,J＝8.5,3.5Hz,3H),5.89(s,1H),5.07(d,J＝12.4Hz,2H),3.31(d,J＝7.8Hz,1H),3.25(t,J＝6.4Hz,5H),3.10(t,J＝10.5Hz,2H),1.97(d,J＝13.9Hz,2H),1.74(s,4H),1.59(t,J＝9.9Hz,2H),1.37(s,3H)。LCMS:m/z＝504(M+H)+。
实施例14：化合物014的合成
步骤1：在0℃下形成4-羟基哌啶(化合物1，0.8g，7.9mmol)、吡啶(1.3g，16mmol)和叔丁基二甲基硅烷氯化物(1.4g，9.5mmol)的CH2Cl2(25ml)溶液。搅拌混合物3小时。完成后，将混合物浓缩并用EA：PE＝1:5的硅胶柱纯化，得到化合物2(1.5g，88％)，为浅黄色固体。
步骤2：向化合物2(95mg，0.44mmol)和Et3N(89mg，0.9mmol)在THF(5ml)中的溶液加入三光气(74mg，0.25mmol)。在室温下搅拌混合物2小时，并在下一步中直接使用。
步骤3：向化合物4(162mg，0.4mmol)和Et3N(80mg，0.8mmol)在THF(5ml)中的溶液加入上面来自步骤2的含化合物3的溶液。在室温将混合物搅拌2小时并不经任何进一步纯化用于下一步骤。
步骤4：在0℃下向化合物5(粗混合物)的THF(5ml)溶液加入TBAF(5滴)。在室温下搅拌该混合物2小时，然后浓缩，并经制备型HPLC纯化，得到化合物014(29mg，15％，3步)。1HNMR(400MHz,DMSO)δ9.67(s,1H),8.86(s,2H),7.56(s,1H),7.48(s,1H),7.39(d,J＝4.9Hz,1H),7.37-7.31(m,1H),7.28(d,J＝3.3Hz,1H),7.10-7.03(m,1H),6.88(d,J＝8.3Hz,1H),3.59(s,3H),3.42(s,1H),3.25(d,J＝13.6Hz,2H),3.03(t,J＝11.0Hz,2H),2.83(t,J＝10.6Hz,2H),2.29(d,J＝13.5Hz,2H),1.70(d,J＝9.9Hz,2H),1.57(t,J＝10.3Hz,2H),1.44(d,J＝10.4Hz,3H),1.34-1.27(m,2H)。LCMS:m/z＝536(M+H)+。
实施例15：化合物015的合成
步骤1-4：参见实施例13的步骤1-4，得到化合物8。
步骤5：在0℃下向化合物8(80mg，0.20mmol)和Et3N(106mg，1.05mmol)的THF(5ml)溶液加入4-(氯羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(74mg，0.30mmol)，并将该混合物搅拌2小时。向混合物加入EA(20ml)和水性饱和NaCl(20ml)，并且搅拌混合物30分钟。分离出有机层，通过水性饱和NaCl(50ml×2)洗涤，干燥并浓缩，得到残余物，将其通过制备型TLC纯化，得到化合物9(99mg，80％)，为黄色固体。
步骤6：向化合物9(90mg，0.15mmol)的DCM(5ml)溶液缓慢加入TFA(3ml)。在室温下搅拌混合物2小时。然后浓缩混合物得到残余物，将其通过制备型HPLC纯化，得到化合物015(45mg，60％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.58(s,1H),8.78(s,2H),7.78(t,J＝9.6Hz,2H),7.52(d,J＝2.1Hz,1H),7.42(d,J＝5.1Hz,1H),7.36(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),7.31(d,J＝3.5Hz,1H),7.08(dd,J＝5.0,3.6Hz,1H),6.96(d,J＝8.3Hz,1H),6.84(d,J＝8.4Hz,2H),5.97(s,6H),3.18(t,J＝10.6Hz,2H),3.10(s,4H),2.02-1.93(m,2H),1.60(t,J＝9.7Hz,2H),1.37(s,3H)。LCMS:m/z＝519(M+H)+。
实施例16：化合物016的合成
步骤1-4：参见实施例13的步骤1-4，得到化合物8。
步骤5：在0℃下向化合物8(80mg，0.20mmol)和Et3N(106mg，1.05mmol)在THF(5ml)中的溶液加入4-甲基哌嗪-1-碳酰氯(49mg，0.30mmol)，并且搅拌混合物2小时。通过制备型TLC纯化混合物，得到化合物016(49mg，46％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.79(s,1H),9.58(s,1H),7.79(d,J＝8.7Hz,2H),7.51(d,J＝2.1Hz,1H),7.42(d,J＝4.2Hz,1H),7.36(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),7.31(d,J＝3.5Hz,1H),7.08(dd,J＝5.0,3.6Hz,1H),6.95(d,J＝8.3Hz,1H),6.84(d,J＝8.3Hz,2H),3.64(d,J＝11.6Hz,2H),3.43-3.28(m,4H),3.18(t,J＝10.3Hz,2H),3.10-2.96(m,4H),2.81(s,3H),1.99(d,J＝13.4Hz,2H),1.60(t,J＝9.7Hz,2H),1.37(s,3H)。LCMS:m/z＝533(M+H)+。
实施例17：化合物017的合成
步骤1：在-76℃于氮气气氛下向圆底烧瓶中的双(三甲基硅基)氨基锂(在THF中1.0M，240ml，240mmol)的溶液中缓慢地加入化合物1(25g，120mmol)。在-76℃下将混合物搅拌4小时后，将碘乙烷(17ml，240mmol)逐滴加入到系统中。将反应混合物再搅拌30分钟，然后温热至室温并搅拌过夜。将残余物用150ml饱和的水性NH4Cl淬灭，用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到目标化合物2(20g，70％)，为浅黄色固体。
步骤2：向化合物2(20g，84mmol)的溶液中加入在DMSO(120ml)中的K2CO3(23g，168mmol)。在60℃下将H2O2(100ml)非常缓慢地加入到该系统中并且反应在60℃下搅拌过夜。加入冷水，并且用EA(3×100ml)萃取该混合物。将有机层用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到目标化合物3(21g，99％)，为白色固体。
步骤3：向化合物3(20.5g，80mmol)在CH3CN(200ml)和5N KOH(100ml)中的溶液加入1,3-二溴-5,5-二甲基咪唑烷-2,4-二酮(11.1g，40mmol)。在室温下将混合物搅拌过夜。完成后，将该混合物浓缩以除去CH3CN。用2N HCl在冰浴中将水相的pH调节至5，混合物用EA萃取并分离。然后将水相的pH调节至10。收集沉淀物，得到化合物4(10g，55％)，为白色固体。
步骤4：将化合物4(1.0g，4.4mmol)、4-溴苯甲酸乙酯(ethyl 4-bromobenzoate)(943mg，4.4mmol)、Pd2(dba)3(202mg，0.22mmol)、Ruphos(103mg，0.22mmol)和Cs2CO3(2.9g，8.8mmol)在甲苯(25ml)中的溶液在100℃搅拌过夜。浓缩混合物并用EA:PE＝1:5的硅胶柱纯化，得到化合物5(1.0g，59％)，为浅黄色固体。
步骤5：将化合物5(233mg，0.65mmol)和2N NaOH(10ml，20mmol)在THF(10ml)和EtOH(10ml)中的溶液在55℃下搅拌2小时。浓缩并调节水相的pH至5-6，随后用EA(3×15ml)萃取。将有机层用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物6(200mg，93％)，为白色固体。
步骤6：将化合物6(200mg，0.6mmol)、2-氨基-4-(噻吩-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(173mg，0.6mmol)、EDCI(154mg，1.2mmol)和DMAP(145mg，1.2mmol)在DMF(10ml)中的混合物在55℃下搅拌过夜。将混合物用水稀释，并用EA萃取。将有机层用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。然后用EA：PE＝1：2的硅胶柱纯化，得到化合物7(200mg，55％)，为紫色固体。
步骤7：向化合物7(200mg，0.32mmol)在1,4-二噁烷(10ml)中的溶液加入HCl/1,4-二噁烷(5ml，20mmol)，并且在室温下搅拌混合物过夜。浓缩并用PE洗涤，得到化合物8(175mg，100％)，为灰色固体。
步骤8：向化合物8(95mg，0.21mmol)和Et3N(106mg，1.05mmol)在THF(5ml)中的溶液加入吗啉-4-碳酰氯(50mg，0.3mmol)，并且将混合物在室温下搅拌2小时。该混合物通过硅胶过滤，并用EA洗涤。浓缩并通过制备型HPLC纯化，得到化合物017(10mg，9％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.56(s,1H),7.76(d,J＝8.7Hz,2H),7.52(s,1H),7.42(d,J＝4.8Hz,1H),7.36(d,J＝8.2Hz,1H),7.31(d,J＝3.0Hz,1H),7.11-7.04(m,1H),6.95(d,J＝8.2Hz,1H),6.81(d,J＝8.5Hz,2H),5.86(s,1H),3.55(s,8H),3.11(s,4H),2.02(d,J＝13.3Hz,2H),1.76(d,J＝6.6Hz,2H),1.50(t,J＝10.9Hz,2H),0.75(t,J＝7.3Hz,3H)。LCMS:m/z＝534(M+H)+。
实施例18：化合物018的合成
步骤1：向化合物1(1.2g，5mmol)在二噁烷(20ml)中的溶液加入DIPEA(1.3g，10mmol)和2-氯嘧啶-5-甲酸乙酯(5.5mmol，1.0g)。在100℃将混合物搅拌过夜。完成后，浓缩并用PE：EA＝2:1的制备型TLC直接纯化，得到化合物2(1.37g，70％)，为白色固体。
步骤2：向化合物2(220mg，0.56mmol)在EtOH(5ml)和THF(5ml)中的溶液加入水性NaOH(2M，2ml)。该反应在60℃搅拌2小时。浓缩混合物以得到残余物。向残余物中加入水(10ml)，并在0℃下加入水性柠檬酸以调节至pH<7，并过滤混合物，得到化合物3(200mg，粗品)，为白色固体。
步骤3：将化合物3(200mg，粗品)、化合物2-氨基-4-(噻吩-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(160mg，0.55mmol)、EDCI(154mg，1.2mmol)和DMAP(145mg，1.2mmol)在DMF(10ml)中的混合物在67℃下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EA萃取，得到化合物4(200mg，55％)，为黄色油。
步骤4：向化合物4(200mg，0.32mmol)在DCM(10ml)的溶液中加入TFA(2ml)，并且混合物在室温下搅拌30分钟。浓缩并用PE洗涤，得到化合物5(250mg，粗品)，为棕色油。
步骤5：向化合物5(250mg，粗品)和Et3N(106mg，1.05mmol)的THF(5ml)溶液加入吡咯烷-1-碳酰氯(70mg，0.5mmol)。在室温下搅拌混合物2小时。该混合物通过硅胶过滤，并用EA洗涤。浓缩并通过制备型HPLC纯化，得到化合物018(61mg，60％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.72(s,1H),8.91(s,2H),7.53(s,1H),7.42(d,J＝4.8Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.32(d,J＝3.2Hz,1H),7.12-7.04(m,1H),6.95(d,J＝8.2Hz,1H),6.85-6.13(m,1H),3.70(dd,J＝13.5,7.5Hz,4H),3.29(s,4H),3.07(t,J＝10.5Hz,2H),2.81(t,J＝12.8Hz,2H),2.11(dd,J＝14.5,7.9Hz,2H),1.93-1.84(m,2H),1.76(s,4H),1.32(d,J＝12.1Hz,2H)。LCMS:m/z＝532(M+H)+。
实施例19：化合物019的合成
步骤1：将4-溴苯甲酸甲酯(2.1g，10mmol，1当量)、化合物1(6.0g，30mmol，3当量)、Pd2(dba)3(915mg，1mmol，0.1当量)、Xantphos(478mg，1mmol，0.1当量)和Cs2CO3(9.75g，30mmol，3当量)在甲苯(30ml)中的混合物在氮气气氛下于95℃搅拌过夜。冷却混合物，加入EA(100ml)，过滤和浓缩，得到残余物，将其通过硅胶柱纯化，得到化合物2(1.97g，59％)，为浅黄色固体。
步骤2：向化合物2(3.34g，10mmol)在EtOH(15ml)和THF(15ml)中的溶液加入水性NaOH(2M，15ml)并在60搅拌5小时。浓缩混合物以得到残余物。混合物用水(100ml)稀释，并在0℃下加入水性柠檬酸至pH<7并过滤得到化合物3(3.07g，96％)，为白色固体。
步骤3：将化合物3(3.2g，10mmol，1当量)、Boc-胺(2.6g，9mmol，0.9当量)、EDCI(5.7g，30mmol，3当量)在Py(15ml)中的混合物在25℃下搅拌过夜。向混合物加入EA(100ml)和水性柠檬酸(50ml)并且搅拌混合物30分钟。将有机层分离，干燥并浓缩，得到残余物，将其通过硅胶柱纯化，得到化合物4(3.7g，70％)，为浅黄色固体。
步骤4：向化合物4(2.96g，5mmol)在DCM(20ml)中的溶液加入TFA(20ml)，并且在室温下搅拌混合物1小时。浓缩混合物，得到残余物。向混合物中加入水(100ml)和NaOH(2M溶液)以调节至pH>7，并且将混合物过滤，得到化合物5(1.86g，95％)，为浅黄色固体。
步骤5：向化合物5(100mg，0.25mmol)和Et3N(50mg，0.5mmol)在THF(5ml)中的混合物加入4-(氯羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(68mg，0.275mmol)，并在室温下搅拌混合物2小时。完成后，浓缩该混合物，得到粗化合物6(110mg)用于下一步骤。
步骤6：向化合物6(110mg，粗品)在DCM(5ml)的溶液缓慢地加入TFA(2ml)。在室温下搅拌混合物2小时。然后浓缩混合物得到残余物，将其通过制备型HPLC纯化，得到化合物019(40mg，32％，2步)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.37(s,1H),8.71(s,2H),7.79(d,J＝8.7Hz,2H),7.45(d,J＝2.1Hz,1H),7.36(d,J＝5.1Hz,1H),7.30-7.20(m,3H),7.05(dd,J＝5.1,3.6Hz,1H),6.81(d,J＝8.3Hz,1H),6.66(d,J＝8.8Hz,2H),3.63(d,J＝13.5Hz,2H),3.48-3.42(m,1H),3.30(s,4H),3.11(s,4H),2.96(t,J＝11.9Hz,2H),1.92(d,J＝9.8Hz,2H),1.34(d,J＝10.8Hz,2H),1.05(t,J＝7.0Hz,1H)。LCMS:m/z＝505(M+H)+。
实施例20：化合物020的合成
步骤1-4：参见实施例19的步骤1-4，得到化合物5。
步骤5：向化合物5(100mg，0.25mmol)和Et3N(50mg，0.5mmol)在THF(5ml)中的溶液加入4-(氯羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(41mg，0.275mmol)，并且将混合物在室温下搅拌2小时。然后浓缩混合物得到残余物，将其通过制备型HPLC纯化，得到化合物020(32mg，25％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.37(s,1H),7.78(d,J＝8.6Hz,2H),7.45(d,J＝2.0Hz,1H),7.36(d,J＝4.4Hz,1H),7.30–7.20(m,2H),7.05(dd,J＝5.0,3.7Hz,1H),6.80(d,J＝8.3Hz,1H),6.65(d,J＝8.8Hz,2H),6.20(d,J＝7.9Hz,1H),5.07(s,2H),3.60-3.52(m,6H),3.18–3.06(m,4H),2.92(t,J＝11.6Hz,2H),2.08(s,1H),1.91(d,J＝10.2Hz,2H),1.33(dd,J＝20.7,9.8Hz,2H)。LCMS:m/z＝506(M+H)+。
实施例21：化合物021的合成
步骤1-4：参见实施例19的步骤1-4，得到化合物5。
步骤5：向化合物5(100mg，0.25mmol)和Et3N(50mg，0.5mmol)在THF(5ml)中的溶液加入环己烷碳酰氯(41mg，0.275mmol)，并且在室温下搅拌混合物2小时。然后浓缩混合物得到残余物，将其通过制备型HPLC纯化，得到化合物021(30mg，24％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.61(s,1H),7.81(d,J＝8.6Hz,2H),7.53(d,J＝1.8Hz,1H),7.43(d,J＝4.8Hz,1H),7.38(d,J＝8.3Hz,1H),7.33(d,J＝3.3Hz,1H),7.13-7.05(m,1H),6.98(d,J＝8.4Hz,1H),6.68(d,J＝8.7Hz,2H),4.29(d,J＝11.3Hz,1H),3.92(d,J＝12.5Hz,1H),3.66-3.57(m,1H),3.27-3.13(m,1H),2.85-2.73(m,1H),2.67-2.56(m,1H),2.03-1.88(m,2H),1.75-1.58(m,5H),1.37-1.12(m,7H)。LCMS:m/z＝503(M+H)+。
实施例22：化合物022的合成
步骤1-4：参见实施例19的步骤1-4，得到化合物5。
步骤5：向化合物5(100mg，0.25mmol)和Et3N(50mg，0.5mmol)在THF(5ml)中的溶液加入四氢-2H-吡喃-4-碳酰氯(41mg，0.275mmol)，并且在室温下搅拌该混合物2小时。然后浓缩混合物得到残余物，将其通过制备型HPLC纯化，得到化合物022(20mg，16％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.57(s,1H),7.80(d,J＝8.6Hz,2H),7.52(s,1H),7.46-7.29(m,3H),7.1-7.06(m,1H),6.96(s,1H),6.68(d,J＝8.6Hz,2H),4.29(d,J＝14.4Hz,1H),3.97(d,J＝13.9Hz,1H),3.85(d,J＝9.7Hz,2H),3.71-3.55(m,1H),3.39(t,J＝11.5Hz,2H),3.22(t,J＝11.6Hz,1H),2.98-2.87(m,1H),2.81(t,J＝12.1Hz,1H),2.08-1.86(m,2H),1.68-1.43(m,4H),1.39-1.13(m,2H)。LCMS:m/z＝505(M+H)+。
实施例23：化合物023的合成
步骤1-7：参见实施例17的步骤1-7得到化合物8。
步骤8：向化合物8(175mg，0.4mmol)和Et3N(106mg，1.05mmol)在THF(5ml)中的混合物加入4-(氯羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(125mg，0.5mmol)。在室温下搅拌混合物2小时。通过硅胶过滤和用EA洗涤，得到化合物9(175mg，67％)，为黄色油。
步骤9：在室温下向化合物9(175mg，0.28mmol)在1,4-二噁烷(10ml)中的溶液中加入HCl/1,4-二噁烷(5ml，20mmol)随后搅拌过夜。浓缩并用PE洗涤，得到目标化合物023(92mg，63％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.21(s,1H),9.30(s,3H),7.91(d,J＝8.1Hz,2H),7.81(s,1H),7.59(d,J＝5.9Hz,2H),7.51(d,J＝3.3Hz,1H),7.45(d,J＝8.4Hz,1H),7.19-7.12(m,1H),6.90(s,2H),3.48-3.41(m,1H),3.33(s,4H),3.18-3.10(m,2H),3.06(s,4H),2.04(d,J＝13.0Hz,2H),1.77(d,J＝7.0Hz,2H),1.59-1.48(m,2H),1.08-1.02(m,2H),0.78(t,J＝7.0Hz,3H)。LCMS:m/z＝533(M+H)+。
实施例24：化合物024的合成
步骤1：将化合物2(300mg，0.90mmol)的TFA(5ml)的溶液在室温下搅拌过夜。然后浓缩和用PE洗涤，得到目标化合物3(200mg，95％)，为灰色固体。
步骤2：形成了化合物3(180mg，0.77mmol)、1-羟基环己烷羧酸(111mg，0.77mmol)、HATU(351mg，0.92mmol)和DIPEA(199mg，1.5mmol)在DMF(10ml)中的混合物(180mg，0.77mmol)。反应在室温下搅拌2小时。将混合物溶于水并用EA萃取。将有机层用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。然后用EA：PE＝1：2的硅胶柱纯化，得到化合物4(150mg，54％)，为紫色固体。
步骤3：。将化合物4(150mg，0.42mmol)和2N的NaOH(10ml，20mmol)在THF(10ml)和EtOH(10ml)中的溶液在60℃下搅拌6小时。然后将混合物浓缩，并将水相的pH调节至5-6，然后用EA萃取。将有机层用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到目标化合物5(130mg，90％)，为白色固体。
步骤4：形成了化合物5(70mg，0.2mmol)、2-氨基-4-(噻吩-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(59.0mg，0.2mmol)、EDCI(39.0mg，0.3mmol)、HOAT(41mg，0.3mmol)和DIPEA(52mg，0.4mmol)在DMF(10ml)的混合物。在65℃下将该混合物搅拌过夜。然后将混合物溶于水，并用EA萃取。将有机层用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。然后用EA：PE＝1：2的硅胶柱纯化，得到化合物6(20mg，16％)，为紫色固体。
步骤5：向化合物6(20mg；0.03mmol)的DCM(10ml)溶液加入HCl/1,4-二噁烷(2ml，8.0mmol)，随后在室温下搅拌过夜。浓缩并用PE洗涤，得到目标化合物024(12mg，71％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.41(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.46(s,1H),7.36(d,J＝4.9Hz,1H),7.30-7.22(m,2H),7.09-7.03(m,1H),6.80(d,J＝8.4Hz,1H),6.66(d,J＝8.6Hz,2H),6.26(d,J＝7.9Hz,1H),5.24(s,1H),5.09(s,2H),2.04-1.87(m,3H),1.76-1.39(m,10H),1.35-1.14(m,6H)。LCMS:m/z＝519(M+H)+。
实施例25：化合物025的合成
步骤1：参见实施例24的步骤1，得到化合物3。
步骤2：形成了化合物3(400mg，1.7mmol)、1-羟基环戊烷羧酸(222mg，1.7mmol)、HATU(969mg，2.6mmol)和DIPEA(439mg，3.4mmol)在DMF(10ml)中的混合物。在室温下搅拌混合物2小时。将混合物溶于水并用EA萃取。有机层用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。然后用EA：PE＝1：2的硅胶柱纯化，得到化合物4(300mg，51％)，为紫色固体。
步骤3：在60℃向化合物4(300mg，0.87mmol)在THF(10ml)和EtOH(10ml)中的溶液加入2N的NaOH(10ml，20mmol)，并且将得到的反应混合物搅拌6小时。浓缩并调节水相的pH调节至5-6，接着通过用EA(2×15ml)萃取。将有机层用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到目标化合物5(250mg，87％)，为白色固体。
步骤4：形成了化合物5(250mg，0.75mmol)、2-氨基-4-(噻吩-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(218mg，0.75mmol)、EDCI(143.0mg，1.1mmol)、HOAT(147mg，1.1mmol)和DIPEA(194mg，1.5mmol)在DMF(10ml)中的混合物。在65℃下搅拌反应过夜。然后将混合物溶于水，并用EA萃取。将有机层用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。然后用EA：PE＝1：2的硅胶柱纯化，得到化合物6(50mg，11％)，为紫色固体。
步骤5：向化合物6(50mg，0.08mmol)在DCM中的溶液加入HCl/1,4-二噁烷(2ml，8.0mmol)。在室温下将混合物搅拌过夜。浓缩并用PE洗涤，得到目标化合物025(13mg，32％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.61(s,1H),7.81(d,J＝8.6Hz,2H),7.53(s,1H),7.46-7.30(m,3H),7.11-7.07(m,1H),6.98(d,J＝8.0Hz,1H),6.68(d,J＝8.7Hz,2H),4.57-4.44(m,1H),4.36-4.19(m,1H),3.24-3.17(m,1H),2.90-2.79(m,1H),2.39-2.25(m,1H),2.08-1.91(m,4H),1.74-1.63(m,4H),1.57-1.52(m,2H),1.38-1.22(m,2H)。LCMS:m/z＝505(M+H)+。
实施例26：化合物026的合成
步骤1：向化合物1(300mg，0.88mmol)在THF(5ml)和EtOH(5ml)中的混合物加入2MNaOH(超过5m)，并且将得到的反应混合物在60℃搅拌5小时。浓缩混合物，得到残留物。将其通过快速柱纯化，得到化合物2(180mg，产率：65％)，为黄色固体。
步骤2：将化合物2(150mg，12.48mmol)、化合物Boc-胺(139mg，0.48mmol)、HOAT(131mg，096mmol)和EDCI(183mg，0.96mmol)在DMF(4ml)中的混合物在60℃下搅拌过夜。向混合物加入EA(30ml)和水性饱和NaCl(100ml)，并且将得到的反应混合物搅拌30分钟。分离有机层，用水性饱和NaCl(50ml×2)洗涤，干燥并浓缩，得到残余物，将其通过制备型TLC纯化，得到化合物3(100mg，35％)，为黄色固体。
步骤3：向化合物3(100mg，0.17mmol)的DCM(3ml)溶液加入TFA(3ml)，并将得到的反应混合物在室温下搅拌2小时。将该混合物浓缩以得到残余物，将其通过制备型HPLC纯化，得到化合物026(20mg，24％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.53(s,1H),8.76(d,J＝86.5Hz,2H),8.41(d,J＝13.8Hz,1H),7.43-7.38(m,3H),7.37-7.31(m,3H),7.29(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),7.22(dd,J＝7.7,4.2Hz,2H),7.04(dd,J＝5.1,3.6Hz,1H),6.79(d,J＝8.4Hz,1H),3.46(d,J＝11.2Hz,2H),3.34-3.20(m,2H),2.96-2.90(m,2H),2.86(d,J＝4.5Hz,3H),2.26-2.08(m,2H)。LCMS:m/z＝485(M+H)+。
实施例27：化合物027的合成
步骤1：将化合物1(3.0g，15mmol)、溴苯(7.0g，45mmol)、Pd2(dba)3(1.4g，1.5mmol)、Ruphos(700mg，1.5mmol)和Cs2CO3(14.6g，45mmol)在甲苯(100ml)中的混合物在氮气气氛下于95℃搅拌过夜。将混合物过滤并浓缩，接着用PE(30ml)洗涤，得到化合物2(3.5g，产率：85％)，为浅黄色固体。
步骤2：在室温下向化合物2(3.5g，12.6mmol)在1,4-二噁烷(50ml)中的溶液加入1,4-二噁烷(9.45ml，37.8mmol)中的HCl，并且将该混合物搅拌过夜。将混合物过滤，得到化合物3(2.0g，90％)，为白色固体。
步骤3：将化合物3(500mg，2.8mmol)、2-氯嘧啶-5-甲酸乙酯(352mg，1.9mmol)和NEt3(576mg，5.7mmol)在1,4-二噁烷(15ml)中的混合物在60℃下搅拌过夜。向该混合物加入EA(100ml)和水性饱和柠檬酸(30ml)，并且搅拌得到的反应混合物30分钟。分离有机层，通过水性饱和NaCl(50ml×2)洗涤，干燥并浓缩，并通过PE(30ml)洗涤，得到化合物4(500mg，81％)，为黄色固体。
步骤4：向化合物4(500mg，1.5mmol)在EtOH(15ml)和THF(15ml)中的溶液加入水性NaOH(2M，15ml)，并且将得到的反应混合物在60℃搅拌5小时。向混合物加入水性饱和柠檬酸调整到pH<7随后过滤，得到化合物5(400mg，87％)，为白色固体。
步骤5：将化合物5(150mg，0.5mmol)、化合物Boc-胺(145mg，0.5mmol)、HOAT(136mg，1mmol)、EDCI(191mg，1mmol)和NEt3(202mg，2mmol)在DMF(5ml)中的混合物在60℃下搅拌过夜。向混合物加入EA(100ml)和水性饱和NaCl(100ml)，并且将得到的反应混合物搅拌30分钟。分离有机层，用水性饱和的NaCl(50ml×2)洗涤，干燥并浓缩，并用CH3CN(10-20mL)洗涤，得到化合物6(140mg，49％)，为黄色固体。
步骤6：在室温下向化合物6(140mg，0.25mmol)在DCM(5ml)中的溶液加入TFA(3ml)，并且将得到的反应混合物搅拌2小时。浓缩混合物，并通过制备型HPLC纯化混合物，得到化合物027(110mg，95％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.52(s,1H),8.86(s,2H),7.87(d,J＝7.8Hz,1H),7.45(s,1H),7.35(d,J＝4.9Hz,1H),7.29(d,J＝8.3Hz,1H),7.25-7.18(m,3H),7.07-7.02(m,1H),6.96(d,J＝8.2Hz,2H),6.83-6.73(m,2H),5.20(s,2H),3.72(d,J＝12.2Hz,2H),2.82(t,J＝11.7Hz,2H),1.99(s,1H),1.96(d,J＝10.5Hz,2H),1.69-1.58(m,2H)。LCMS:m/z＝471(M+H)+。
实施例28：化合物028的合成
步骤1-2：参见实施例27的步骤1-2得到化合物3。
步骤3：将化合物3(300mg，1.7mmol)、4-氟苄腈(181mg，1.5mmol)和K2CO3(414mg，3mmol)在DMSO(10ml)中的混合物在100℃下搅拌过夜。向混合物加入EA(100ml)和水性饱和柠檬酸(30ml)，并且搅拌得到的反应混合物30分钟。分离有机层，用水性饱和NaCl(50ml×2)洗涤，干燥并浓缩，并通过硅胶柱纯化，得到化合物4(300mg，72％)，为黄色固体。
步骤4：将化合物4(300mg，1.1mmol)在6M盐酸(20ml)中的溶液在80℃搅拌3天。将混合物过滤，得到化合物5(250mg，78％)，为白色固体。
步骤5：将化合物5(150mg，0.5mmol)、化合物Boc-胺(145mg，0.5mmol)、HOAT(136mg，1mmol)、EDCI(191mg，1mmol)和NEt3(202mg，2mmol)在DMF(5ml)中的混合物在60℃下搅拌过夜。向混合物加入EA(80ml)和水性饱和NaCl(80ml)，并且将得到的反应混合物搅拌30分钟。分离有机层，用水性饱和NaCl(30ml×2)洗涤，干燥并浓缩，并通过制备型TLC纯化，得到化合物6(50mg，18％)，为黄色固体。
步骤6：在室温下向化合物6(50mg，0.09mmol)在DCM(5ml)中的溶液加入TFA(3ml)，并且将得到的反应混合物搅拌2小时。浓缩混合物，并通过制备型HPLC纯化混合物，得到化合物028(5mg，12％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.36(s,1H),7.79(d,J＝8.6Hz,2H),7.46(d,J＝1.9Hz,1H),7.35(d,J＝5.0Hz,1H),7.27(dd,J＝8.3,2.0Hz,1H),7.25-7.18(m,3H),7.08-7.03(m,1H),6.96(d,J＝8.2Hz,2H),6.80(d,J＝8.3Hz,1H),6.75(t,J＝7.2Hz,1H),6.67(d,J＝8.7Hz,2H),6.22(d,J＝8.0Hz,1H),5.07(s,2H),3.70(d,J＝12.8Hz,2H),3.53(s,1H),2.89(t,J＝11.0Hz,2H),2.01(d,J＝10.8Hz,2H),1.51(dd,J＝20.6,10.5Hz,2H)。LCMS:m/z＝469(M+H)+。
实施例29：化合物029的合成
步骤1-2：参见实施例13的步骤1-2得到化合物6。
步骤3：将化合物6(630mg，1.89mmol)、化合物Boc-胺(484mg，1.7mmol)、HOAT(510mg，3.78mmol)、EDCI(721mg，3.78mmol)DIPEA(487mg，3.78mmol)和DMAP(461mg，3.78mmol)在DMF(25ml)中的混合物在67℃搅拌3天。向混合物加入EA(100ml)和水性饱和NaCl(100ml)，并且将得到的反应混合物搅拌30分钟。分离有机层，用水性饱和NaCl(50ml×2)洗涤，干燥并浓缩，并通过硅胶柱纯化，得到化合物7(473mg，46％)，为黄色固体。
步骤4：在室温下向化合物7(250mg，0.42mmol)在DCM(10ml)中的溶液加入TFA(3ml)，并且将得到的反应混合物搅拌2小时。浓缩混合物，得到化合物8(300mg，粗品)并该混合物不经进一步纯化而用于下一步骤。
步骤5：在0℃下向化合物8(150mg，粗品)和Et3N(50mg，0.5mmol)在THF(5ml)中的溶液加入化合物吗啉-4-碳酰氯(37mg，0.25mmol)，并将得到的反应混合物搅拌2小时。向混合物加入EA(10ml)和水性饱和NaCl(10ml)，并且将得到的反应混合物搅拌30分钟。分离有机层，用水性饱和NaCl(10ml×2)洗涤，干燥并浓缩，并通过制备型HPLC纯化，得到化合物029(44mg，35％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.36(s,1H),8.51(dd,J＝4.7,1.5Hz,2H),7.76(d,J＝8.8Hz,2H),7.66(d,J＝2.1Hz,1H),7.57(dd,J＝4.7,1.6Hz,2H),7.47(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),6.88(d,J＝8.4Hz,1H),6.79(d,J＝8.8Hz,2H),5.87(s,1H),5.29(s,2H),3.60-3.51(m,4H),3.32-3.24(m,2H),3.17-3.08(m,6H),1.98(d,J＝13.8Hz,2H),1.64-1.55(m,2H),1.36(s,3H)。LCMS:m/z＝515(M+H)+。
实施例30：化合物030的合成
步骤1-3：参见实施例29的步骤1-3得到化合物8。
步骤3：在0℃下向化合物8(150mg，粗品)和Et3N(50mg，0.5mmol)在THF(5ml)中的溶液加入化合物吡咯烷-1-碳酰氯(33mg，0.25mmol)，并且将得到的反应混合物搅拌2小时。向混合物加入EA(10ml)和水性饱和NaCl(10ml)，并且将得到的反应混合物搅拌30分钟。分离有机层，用水性饱和NaCl(10ml×2)洗涤，干燥并浓缩，并通过制备型HPLC纯化，得到化合物030(17mg，14％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.34(d,J＝10.2Hz,1H),8.51(d,J＝5.5Hz,2H),7.76(d,J＝8.6Hz,2H),7.67(d,J＝1.8Hz,1H),7.58(d,J＝5.9Hz,2H),7.48(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),6.88(d,J＝8.4Hz,1H),6.79(d,J＝8.6Hz,2H),5.87(s,1H),5.31(s,2H),3.31-3.20(m,6H),3.10(t,J＝10.5Hz,2H),1.98(d,J＝13.5Hz,2H),1.74(s,4H),1.59(t,J＝10.1Hz,2H),1.37(s,3H)。LCMS:m/z＝499(M+H)+。
实施例31：化合物031的合成
步骤1：将化合物6(270mg，0.8mmol)、化合物Boc-胺(205mg，0.72mmol)、HOAT(216mg，1.6mmol)、EDCI(305mg，1.6mmol)DIPEA(206mg，1.6mmol)和DMAP(195mg，1.6mmol)在DMF(25ml)中的混合物在67℃搅拌3天。向混合物加入EA(60ml)和水性饱和NaCl(60ml)，并且将得到的反应混合物搅拌30分钟。分离有机层，用水性饱和NaCl(20ml×2)洗涤，干燥并浓缩，并通过硅胶柱纯化，得到化合物7(400mg，83％)，为黄色固体。
步骤2：向化合物7(200mg，0.33mmol)在DCM(10ml)中的溶液加入TFA(3ml)，并在室温下搅拌得到的反应混合物的2小时。浓缩混合物，得到化合物8(250mg，粗品)并该混合物不经进一步纯化而用于下一步骤。
步骤3：在0℃向化合物8(150mg，粗品)和Et3N(50mg，0.5mmol)在THF(5ml)中加入化合物吗啉-4-碳酰氯(37mg，0.25mmol)，并将得到的反应混合物搅拌2小时。向混合物加入EA(10ml)和水性饱和NaCl(10ml)，并且将得到的反应混合物搅拌30分钟。分离有机层，用水性饱和NaCl(10ml×2)洗涤，干燥并浓缩，并通过制备型HPLC纯化，得到化合物031(55mg，60％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.57(s,1H),9.09(s,1H),8.76-8.58(m,2H),8.01-7.69(m,4H),7.56(d,J＝7.2Hz,1H),7.05-6.87(m,3H),3.56(s,4H),3.17(d,J＝39.8Hz,8H),1.96(s,2H),1.61(s,2H),1.37(s,3H)。LCMS:m/z＝515(M+H)+。
实施例32：化合物032的合成
步骤1-2：参见实施例19的步骤1-2得到化合物3。
步骤3：将化合物3(150mg，0.45mmol)、化合物Boc-胺(130mg，0.45分mmol)、HOAT(103mg，0.76mmol)、EDCI(145mg，0.76mmol)和NEt3(154mg，1.52mmol)在CH3CN(5ml)中的混合物在60℃搅拌过夜。向混合物加入EA(10ml)和水性饱和NaCl(10ml)，并且将得到的反应混合物搅拌30分钟。分离有机层，用水性饱和NaCl(10ml×2)洗涤，干燥并浓缩，并通过硅胶柱纯化，得到化合物4(90mg，30％)，为黄色固体。
步骤4：在室温下向化合物4(90mg，0.15mmol)在DCM(5ml)中的溶液加入TFA(3ml)，并且将得到的反应混合物搅拌2小时。浓缩混合物，得到化合物5(58mg，粗品)并该混合物不经进一步纯化而用于下一步骤。
步骤5：在0℃下向化合物5(58mg，0.15mmol)和Et3N(33mg，0.33mmol)在THF(5ml)中的溶液加入化合物吡咯烷-1-碳酰氯(20mg，015mmol)，并且将得到的反应混合物搅拌2小时。通过制备型HPLC纯化混合物，得到化合物032(12mg，17％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.37(s,1H),8.58(d,J＝5.1Hz,2H),7.79(d,J＝8.8Hz,4H),7.76(d,J＝2.1Hz,1H),7.59(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),6.89(d,J＝8.5Hz,1H),6.66(d,J＝8.8Hz,2H),6.22(d,J＝7.4Hz,1H),3.63(d,J＝13.2Hz,2H),3.26(t,J＝6.4Hz,4H),2.87(t,J＝11.3Hz,2H),1.91(d,J＝10.0Hz,2H),1.75(t,J＝6.5Hz,4H),1.34(dd,J＝20.2,10.4Hz,2H)。LCMS:m/z＝485(M+H)+。
实施例33：化合物033的合成
步骤1：将化合物1(2.1g，9.6mmol)、2-氯嘧啶-5-甲酸乙酯(600mg，3.2mmol)和NEt3(970mg，9.6mmol)在1,4-二噁烷(20ml)中的混合物在95℃下搅拌过夜。浓缩混合物，然后加入EA(60ml)和水性柠檬酸(60ml)，并且将得到的反应混合物搅拌30分钟。分离有机层，干燥并浓缩，得到化合物2(880mg，产率：75％)，为浅黄色固体。
步骤2：在室温下向化合物2(880mg，2.4mmol)的DCM(10ml)溶液加入TFA(5ml)，并且将得到的反应混合物搅拌2小时。将该混合物浓缩，得到化合物3(630mg，99％)，为黄色固体。
步骤3：将化合物3(630mg，2.4mmol)、2-吲哚乙酸(531mg，3mmol)、HOAT(816mg，6mmol)、EDCI(1.1g，6mmol)和NEt3(1.2g，12mmol)在DMF(15ml)中的混合物在60℃下搅拌过夜。向混合物加入EA(100ml)和水性饱和NaCl(100ml)，并且将得到的反应混合物搅拌30分钟。分离有机层，用水性饱和NaCl(50ml×2)洗涤，干燥并浓缩，得到残余物，将其通过制备型TLC纯化，得到化合物4(600mg，60％)，为黄色固体。
步骤4：向化合物4(600mg，1.4mmol)在EtOH(15ml)和THF(15ml)中的溶液加入水性NaOH(2M，15ml)，并且将得到的反应混合物在60℃搅拌5小时。浓缩混合物，得到残余物。在0℃向混合物加入水(100ml)和水性柠檬酸调节至pH<7，然后过滤，得到化合物5(400mg，72％)，为白色固体。
步骤5：将化合物5(150mg，0.38mmol)、化合物Boc-胺(108mg，0.38mmol)、HOAT(103mg，0.76mmol)、EDCI(145mg，0.76mmol)和NEt3(154mg，1.52mmol)在DMF(5ml)中的混合物在60℃搅拌过夜。向混合物加入EA(20ml)和水性饱和NaCl(20ml)，并且将得到的反应混合物搅拌30分钟。分离有机层，用水性饱和NaCl(20ml×2)洗涤，干燥并浓缩，并通过制备型TLC纯化，得到化合物6(150mg，59％)，为黄色固体。
步骤6：在室温下向化合物6(150mg，0.23mmol)在DCM(5ml)中的溶液加入TFA(3ml)，并且将得到的反应混合物搅拌2小时。将混合物浓缩并通过制备型HPLC纯化，得到化合物033(28mg，22％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.94(s,1H),9.75(s,1H),8.91(s,2H),7.58(dd,J＝15.8,7.9Hz,5H),7.41(t,J＝7.6Hz,4H),7.36(d,J＝8.1Hz,1H),7.31-7.24(m,3H),7.08(t,J＝7.5Hz,1H),7.01-6.97(m,2H),4.84(d,J＝11.4Hz,2H),4.58(d,J＝14.0Hz,2H),4.14(d,J＝11.9Hz,1H),3.82(q,J＝15.1Hz,3H),3.09(t,J＝12.1Hz,1H),2.82(s,3H),2.63(t,J＝12.0Hz,1H),1.63-1.44(m,5H),1.31(d,J＝8.2Hz,2H)。LCMS:m/z＝562(M+H)+。
实施例34：化合物034的合成
步骤1：参照实施例3的步骤1，得到化合物2。
步骤2：向化合物2(5.25g，15mmol)在DMSO(50ml)中的溶液加入K2CO3(4.14g，30mmol)和Cu(960mg，15mmol)。在145℃于氮气气氛下将混合物搅拌过夜。过滤该混合物，并且收集滤液，随后在柱上纯化，得到化合物3(2.4，38％)，为白色固体。
步骤3：在室温下向化合物3(600mg，1.5mmol)在1,4-二噁烷(15ml)中的溶液加入1,4-二噁烷(10ml)中的4M HCl过夜。将混合物过滤，得到化合物4(437mg，95％)，为黄色固体。
步骤4：将化合物4(437mg，1.75mmol)、EDCI(543mg，3.5mmol)、HOAT(476mg，3.5mmol)，DIPEA(903mg，7mmol)和2-吲哚乙酸(307mg，1.75mmol)在5ml DMF中的混合物在60℃下搅拌过夜。在用EA萃取后，通过用EA的柱纯化后得到目标化合物5(600mg，84％)。
步骤5：向化合物5(600mg，1.47mmol)在EtOH/THF中的溶液中加入2N的NaOH(5ml)，然后将得到的反应混合物在60℃搅拌过夜。在蒸发掉溶剂后，通过EA萃取混合物，然后将合并的有机层干燥，得到期望的化合物6，为白色固体(140mg，25％)。
步骤6：将化合物6(200mg，0.33mmol)、EDCI(102mg，0.66mmol)、HOAT(88mg，0.66mmol)、DIPEA(170mg，1.32)和胺(102mg，0.33mmol)在5ml DMF中的混合物在60℃下搅拌过夜。在通过EA萃取后，得到目标化合物7(200mg，20％)，为白色固体。
步骤7：向化合物7(200mg，0.28mmol)在5ml CH2Cl2的混合物中加入2ml TFA，并且将混合物在室温下搅拌2小时。在通过EA萃取后，通过制备型HPLC纯化目标化合物034(10mg，6％)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.86(s,1H),9.67(s,1H),8.85(s,1H),7.57-7.52(m,2H),7.47.41(m,3H),7.40-7.35(m,3H),7.33(d,J＝8.1Hz,1H),7.26(t,J＝7.4Hz,1H),7.12(s,1H),7.09(d,J＝8.8Hz,1H),7.07-7.04(m,2H),6.92(t,J＝7.0Hz,1H),4.96(s,1H),4.49(d,J＝10.4Hz,1H),4.12(d,J＝10.9Hz,1H),3.71(q,J＝15.0Hz,2H),3.44(q,J＝7.0Hz,2H),3.10(t,J＝12.3Hz,1H),2.64(t,J＝12.2Hz,1H),2.09(s,2H),1.87(dd,J＝26.7,12.8Hz,2H),1.16-1.08(m,1H),1.05(t,J＝7.0Hz,3H)。LCMS:m/z＝622(M+H)+。
实施例35：化合物035的合成
步骤1：将2-氯嘧啶-5-甲酸乙酯(1.86g，10mmol)、化合物1(3.00，15mmol)和NEt3(3.0g，30mmol)在1,4-二噁烷(20ml)中的混合物在95℃下搅拌过夜。浓缩混合物，并加入EA(60ml)和水性柠檬酸(60ml)。将得到的反应混合物搅拌30分钟。分离有机层，干燥并浓缩，得到化合物2(3.4g，产率：97％)，为浅黄色固体。
步骤2：在室温下向化合物2(600mg，1.7mmol)在1,4-二噁烷(15ml)中的溶液加入1,4-二噁烷(10ml)中的4M HCl，并且将得到的反应混合物搅拌过夜。过滤混合物，得到化合物3(427mg，100％)，为黄色固体。
步骤3：将化合物3(427mg，1.7mmol)、化合物2-吲哚乙酸(301mg，1.7mmol)、HOAT(462mg，3.4mmol)、EDCI(649mg，3.4mmol)和NEt3(687mg，6.8mmol)在DMF(15ml)中的混合物在60℃下搅拌过夜。向混合物加入EA(100ml)和水性饱和NaCl(100ml)，并且将得到的反应混合物搅拌30分钟。分离有机层，用水性饱和NaCl(50ml×2)洗涤，干燥并浓缩，得到残余物，将其通过制备型TLC纯化，得到化合物4(584mg，84％)，为黄色固体。
步骤4：向化合物4(500mg，1.2mmol)在EtOH(15ml)和THF(15ml)中的溶液加入水性NaOH(2M，15ml)，并且将得到的反应混合物在60℃搅拌2小时。浓缩混合物，得到残余物。在0℃向混合物加入水(100mL)和水性柠檬酸调节至pH<7，然后过滤，得到化合物5(342mg，75％)，为白色固体。
步骤5：将化合物5(150mg，0.39mmol)、化合物Boc-胺(113mg，0.39mmol)、HOAT(103mg，0.76mmol)、EDCI(145mg，0.76mmol)和NEt3(154mg，1.52mmol)在DMF(5ml)中的混合物在60℃下搅拌过夜。向混合物加入EA(100ml)和水性饱和NaCl(100ml)，并且将得到的反应混合物搅拌30分钟。分离有机层，用水性饱和NaCl(50ml×2)洗涤，干燥并浓缩，得到残余物，将其通过制备型TLC纯化，得到化合物6(150mg，59％)，为黄色固体。
步骤6：在室温下向化合物6(150mg，0.23mmol)在DCM(5ml)中的溶液加入TFA(3ml)，并且将得到的反应混合物搅拌2小时。浓缩混合物，并通过制备型HPLC纯化混合物，得到化合物035(2mg，1.5％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.92(s,1H),9.57(s,1H),8.86(s,2H),7.84(d,J＝7.8Hz,1H),7.56(dd,J＝12.6,7.9Hz,4H),7.49(s,1H),7.36(dt,J＝17.7,8.5Hz,5H),7.27–7.19(m,3H),7.07(t,J＝7.4Hz,1H),6.97(t,J＝7.3Hz,1H),6.84(d,J＝8.3Hz,1H),5.15(s,2H),4.33(d,J＝14.0Hz,1H),3.78(d,J＝2.4Hz,2H),3.15(t,J＝12.5Hz,1H),2.77(t,J＝11.7Hz,1H),1.84(s,2H),1.32(d,J＝10.9Hz,2H)。LCMS:m/z＝548(M+H)+。
实施例36：化合物036的合成
步骤1-3：参见实施例34的步骤1-3，获得化合物4。
步骤4：将化合物4(500mg，1.53mmol)、EDCI(573mg，3mmol)、HOAT(405mg，3mmol)、DIPEA(390mg，3mmol)和2-甲基-3-吲哚乙酸(289mg，1.53mmol)在10ml的DMF中的混合物在60℃搅拌过夜。用冰水淬灭后，沉淀和收集目标化合物5(508mg，69％)，为白色固体。
步骤5：向化合物5(508mg，1mmol)在EtOH/THF(10ml)中的溶液加入2N NaOH(5ml)，然后将所得的反应混合物在60℃搅拌过夜。蒸发掉溶剂后，混合物的pH调节至4-5。收集沉淀物得到所需的化合物6，为白色固体(460mg，96％)。
步骤6：将化合物6(200mg，0.42mmol)、EDCI(160mg，0.84mmol)、HOAT(113mg，0.84mmol)、DIPEA(108mg，0.84mmol)和胺(120mg，0.42mmol)在5ml DMF中的混合物在60℃下搅拌过夜。在用EA萃取后，得到目标化合物7(200mg，粗品)，为油。
步骤7：向化合物7(200mg，粗品)在5ml CH2Cl2的混合物中加入2ml TFA，并在室温下搅拌混合物2小时。在用EA萃取后，通过制备型HPLC纯化目标化合物036(94mg，46％)。1HNMR(500MHz,DMSO)δ10.74(s,1H),9.78(s,1H),8.84(s,2H),7.61-7.54(m,3H),7.48-7.36(m,6H),7.34-7.25(m,2H),7.22(d,J＝8.0Hz,1H),7.04-6.94(m,4H),6.86(t,J＝7.4Hz,1H),4.93(t,J＝11.9Hz,1H),4.48(d,J＝13.2Hz,1H),3.98(d,J＝12.1Hz,1H),3.64(dd,J＝45.6,15.4Hz,2H),3.07(t,J＝12.4Hz,1H),2.62(t,J＝12.2Hz,1H),2.22(s,3H),1.85(d,J＝11.3Hz,1H),1.75(d,J＝10.8Hz,1H),1.08(d,J＝8.4Hz,1H),0.94(d,J＝8.5Hz,1H)。LCMS:m/z＝636(M+H)+。
实施例37：化合物037的合成
步骤1：参见实施例13的步骤1，得到化合物5。
步骤2：将化合物5(250mg，0.69mmol)和NBS(123mg，069mmol)在DCM(10ml)中的混合物在0℃下搅拌30分钟。向混合物中加入EA(20ml)和水性饱和Na2SO3(20ml)，并且搅拌所得到的反应混合物30分钟。分离有机层，用水性饱和NaCl(20ml×2)洗涤，干燥并浓缩，并通过制备型TLC纯化，得到化合物6(258mg，85％)，为黄色固体，
步骤3：将化合物6(240mg，0.55mmol)、环丙基硼酸(232mg，2.7mmol)、Pd(OAc)2(11mg，0.05mmol)、三环己基膦(14mg，0.05mmol)和K3PO4(360mg，1.7mmol)在甲苯(30ml)和H2O(5ml)中的混合物在氮气气氛下在95℃搅拌过夜。冷却该混合物，并向该混合物中加入EA(100ml)。过滤，浓缩，并经硅胶柱纯化，得到化合物7(200mg，90％)，为浅黄色固体。
步骤4：向化合物7(200mg，0.5mmol)在EtOH(15ml)和THF(15ml)中的溶液中加入水性NaOH(2M，15ml)，并将得到的反应混合物在60℃搅拌2小时。浓缩该混合物，然后，在0℃向混合物，加入水(20ml)和水性柠檬酸以调节至pH<7，随后过滤，得到化合物8(168mg，90％)，为白色固体。
步骤5：将化合物8(150mg，0.40mmol)、化合物Boc-胺(114mg，0.40mmol)、HOAT(103mg，0.76mmol)、EDCI(145mg，0.76mmol)和NEt3(154mg，1.52分)在DMF(5ml)中的混合物在60℃下搅拌过夜。该混合物用EA(10ml×2)萃取，干燥并浓缩，并经制备型TLC纯化，得到化合物9(120mg，50％)，为黄色固体。
步骤6：在室温下向化合物9(120mg，0.20mmol)在DCM(5ml)中的溶液加入TFA(3ml)，并且将得到的反应混合物搅拌2小时。浓缩混合物，得到化合物10(80mg，100％)，并且该混合物不经进一步纯化而用于下一步骤。
步骤7：在0℃向化合物10(80mg，0.20mmol)和Et3N(106mg，1.05mmol)的THF(5ml)溶液加入吗啉-4-碳酰氯(45mg，0.30mmol)，并且将得到的反应混合物搅拌2小时。向混合物加入EA(10ml)和水性饱和NaCl(10ml)，并且将得到的反应混合物搅拌30分钟。将有机层分离，浓缩，并通过制备型HPLC纯化，得到化合物037(3mg，3％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.78(d,J＝7.1Hz,2H),7.58(d,J＝7.6Hz,2H),7.48(s,1H),7.39(t,J＝7.9Hz,3H),7.26(t,J＝7.4Hz,1H),6.99(d,J＝8.3Hz,1H),6.93(d,J＝9.2Hz,1H),3.71-3.66(m,4H),3.50(d,J＝13.6Hz,2H),3.30-3.20(m,6H),2.19(d,J＝13.9Hz,2H),2.05(s,1H),1.84-1.67(m,3H),1.53(s,3H),1.33(d,J＝17.9Hz,1H),1.06-0.99(m,2H),0.67(d,J＝4.4Hz,2H)。LCMS:m/z＝554(M+H)+。
实施例38：化合物038的合成
步骤1：将化合物1(1.5g，10.2mmol)、(BOC)2O(2.2g，10.2mmol)和TEA(2.06g，20.4mmol)在CH2Cl2(50ml)中的混合物在室温下搅拌过夜。浓缩并经EA：PE＝1：5的硅胶柱纯化，得到化合物2(1.5g，60％)，为黄色固体。
步骤2：将化合物2(1.4g，5.7mmol)、NaBH3CN(539mg，8.6mmol)和乙酸铵(3.1g，40.0mmol)在MeOH(20ml)中的混合物在70℃下搅拌2小时。浓缩并通过用EA：PE＝1.1的硅胶柱纯化，得到化合物3(1.2g，85％)，为黄色固体。
步骤3：形成了化合物3(800mg，3.2mmol)、2-氯嘧啶-5-甲酸乙酯(603mg，3.2mmol)和DIPEA(826mg，6.4mmol)在1,4-二噁烷(25ml)中的溶液。将混合物加热至95℃，并搅拌过夜。浓缩并通过用EA：PE＝1：10的硅胶柱纯化，得到化合物4(1.0g，79％)，为浅黄色固体。
步骤4：形成了化合物4(1.0g，2.5mmol)和2N NaOH(10ml，20mmol)在THF(10ml)和EtOH(10ml)中的溶液。将混合物加热至60℃并搅拌6小时。浓缩并调节水相的pH至5-6，接着用EA萃取。将有机层用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到目标化合物5(600mg，65％)，为白色固体。
步骤5：形成了化合物5(100mg，0.27mmol)、3-氨基联苯-4-基氨基甲酸叔丁酯(77mg，0.27mmol)、EDCI(53.0mg，0.41mmol)、HOAT(55.0mg，0.41mmol)和DIEA(70mg，0.54mmol)在DMF(10ml)中的混合物。将混合物加热至65℃，并搅拌过夜。然后将混合物溶于水，并用EA萃取。将有机层用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过用EA：PE＝1：1的硅胶柱纯化，得到化合物6(130mg，76％)，为紫色固体。
步骤6：向化合物6(130mg，0.2mmol)在CH2Cl2(10ml)中的搅拌溶液加入HCl/1,4-二噁烷(2ml，8.0mmol)，并且将得到的反应混合物在室温下搅拌过夜。浓缩并用PE洗涤，得到目标化合物038(55mg，62％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.58(s,1H),8.92(s,2H),8.10(d,J＝8.8Hz,1H),7.6-7.47(m,3H),7.45-7.29(m,3H),7.24(t,J＝7.3Hz,1H),6.98-6.81(m,3H),6.54-6.40(m,2H),5.85(s,1H),5.29(s,1H),3.13-3.04(m,1H),1.94(d,J＝5.1Hz,2H),1.18(t,J＝7.2Hz,2H),0.85(s,1H)。LCMS:m/z＝437(M+H)+。
实施例39：化合物039的合成
步骤1：将化合物1(200mg，0.62mmol)、EDCI(192mg，1.24mmol)、HOAT(170mg，1.24mmol)、DIPEA(400mg，2.5mmol)和胺(177mg，0.62mmol)在5ml DMF中的混合物在60℃下搅拌过夜。用EA萃取后，得到目标化合物2(220mg，59％)，为粗油。
步骤2：向化合物2(220mg，0.4mmol)在5mlCH2Cl2中的混合物加入1ml的TFA。在室温下搅拌混合物2小时。用EA萃取(10ml)和水后(10ml×2)萃取后，通过制备型HPLC纯化目标化合物039(120mg，67％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.65(s,1H),8.89(s,2H),8.58(s,1H),8.32(s,1H),8.07(d,J＝7.3Hz,1H),7.62-7.49(m,3H),7.39(dd,J＝17.1,9.2Hz,3H),7.26(t,J＝7.4Hz,1H),6.92(s,1H),4.13(s,1H),3.33(d,J＝12.8Hz,2H),3.05(d,J＝9.9Hz,2H),2.05(d,J＝11.4Hz,2H),1.77-1.63(m,2H)。LCMS:m/z＝389(M+H)+。
实施例40：化合物040的合成
步骤1：将化合物1(2.0g，17.5mmol)、2-氯嘧啶-5-甲酸乙酯(3.2g，17.5mmol)和DIPEA(4.5mg，35.0mmol)在5ml CH2Cl2中的混合物于室温下搅拌2小时。通过EA(2×50ml)萃取后，对合并的有机层进行干燥，得到目标化合物2(2.0g，43％)，为白色固体。
步骤2：将化合物2(400mg，1.5mmol)在6MHCl中的溶液在100℃搅拌过夜，并通过冷冻干燥机干燥所期望的化合物3(300mg，85％)。
步骤3：将化合物3(150mg，0.63mmol)、EDCI(197mg，1.26mmol)、HOAT(171mg，1.26mmol)、DIPEA(325mg，2.5mmol)和胺(179mg，0.63mmol)在5ml DMF中的混合物在60℃下搅拌过夜。通过EA萃取后，通过用CH2Cl2:CH3OH(10:1)的柱纯化目标化合物(200mg，63％)。
步骤4：向化合物4(100mg，0.2mmol)在5ml CH2Cl2中的混合物中加入TFA(1ml)。在室温下搅拌混合物2小时。通过EA(10ml)和水(10ml×2)萃取后，通过制备型HPLC纯化目标化合物040(20mg，25％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.52(s,1H),8.84(s,2H),7.78(d,J＝7.5Hz,1H),7.59–7.46(m,3H),7.39(t,J＝7.5Hz,2H),7.32(d,J＝7.5Hz,1H),7.24(t,J＝7.0Hz,1H),6.85(d,J＝8.3Hz,1H),5.14(s,2H),3.77(s,1H),2.75(d,J＝11.5Hz,2H),2.16(s,3H),1.95(t,J＝10.9Hz,2H),1.83(d,J＝10.4Hz,2H),1.55(d,J＝9.5Hz,2H)。LCMS:m/z＝403(M+H)+。
实施例41：化合物041合成
步骤1-5：参见实施例7的步骤1-5得到化合物6。
步骤6：将化合物6(200mg，0.62mmol)、EDCI(192mg，1.24mmol)、HOAT(170mg，1.24mmol)、DIPEA(400mg，2.5mmol)和胺(177mg，0.62mmol)在5ml DMF中的混合物在60℃搅拌过夜。通过EA萃取后，得到目标化合物7(187mg，50％)，为粗油。
步骤7：向化合物7(186mg，0.31mmol)在5ml CH2Cl2中的混合物中加入1ml的TFA。在室温下搅拌混合物2小时。通过EA(10ml)和水(10ml×2)萃取后，通过制备型HPLC纯化目标化合物041(90mg，70％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.57(s,1H),8.88(s,2H),7.63(s,1H),7.54(d,J＝7.4Hz,2H),7.49(s,1H),7.39(t,J＝7.7Hz,2H),7.35-7.29(m,1H),7.24(t,J＝7.3Hz,1H),6.85(d,J＝8.4Hz,1H),5.16(s,2H),3.04(d,J＝13.0Hz,2H),2.96(t,J＝10.8Hz,2H),2.43(s,2H),1.68(t,J＝10.7Hz,2H),1.44(s,3H)。LCMS:m/z＝402(M+H)+。
实施例42：化合物042的合成
步骤1：将化合物1(2.0g，13.6mmol)、碘甲烷(5.8g，40.8mmol)和K2CO3(5.5g，40.8mmol)在DMF(30ml)中的混合物在80℃下搅拌过夜。向混合物加入EA(100ml)和水性饱和NaCl(100ml)，并且将得到的反应混合物搅拌30分钟。分离有机层，用水性饱和NaCl(50ml×2)洗涤，干燥并浓缩，通过硅胶柱纯化，得到化合物2(1.5g，68％)，为黄色固体。
步骤2：将化合物2(1.5g，9.3mmol)、NaBH3CN(1.8g，9.27mmol)和AcONH4(3.6g，46.5mmol)在MeOH(30ml)中的混合物在70℃搅拌5小时。向混合物加入EA(100ml)和水性饱和NaCl(100ml)，并且将得到的反应混合物搅拌30分钟。分离有机层，用水性饱和NaCl(50ml×2)洗涤，干燥并浓缩，得到化合物3(1.4g，80％)，为白色固体。
步骤3：在室温下将化合物3(1.6g，10mmol)、2-氯嘧啶-5-甲酸乙酯(1.7g，9mmol)和DIPEA(3.9g，30mmol)在DCM(30ml)中的混合物搅拌过夜。通过硅胶柱纯化该混合物，得到化合物4(800mg，29％)，为黄色固体。
步骤4：向化合物4(800mg，2.6mmol)在EtOH(20ml)和THF(20ml)中的溶液加入水性NaOH(2M，20ml)。将混合物在60℃搅拌2小时。将该混合物浓缩，得到残余物，并且在0℃向混合物加入水(100ml)和水性柠檬酸调节至pH<7，然后过滤，得到化合物5(600mg，80％)，为白色固体。
步骤5：将化合物5(150mg，0.53mmol)、化合物Boc-胺(152mg，0.53mmol)、HOAT(103mg，0.76mmol)、EDCI(145mg，0.76mmol)和NEt3(154mg，1.52mmol)在DMF(5ml)中的混合物在60℃下搅拌过夜。通过EA(10ml)和水(10ml×2)萃取混合物。分离有机层，用水性饱和NaCl(20ml×2)洗涤，干燥并浓缩，并通过制备型TLC纯化，得到化合物6(45mg，15％)，为黄色固体。
步骤6：在室温下向化合物6(45mg，0.08mmol)在1,4-二噁烷(0.5ml)中的溶液中加入1,4-二噁烷(5ml)中的HCl，并且将得到的反应混合物搅拌过夜。将混合物过滤，得到化合物042(15mg，41％)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.43(s,1H),9.00(d,J＝29.0Hz,2H),8.30(d,J＝8.6Hz,1H),7.80(d,J＝1.9Hz,1H),7.67(d,J＝7.4Hz,2H),7.61(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),7.49(t,J＝7.7Hz,2H),7.45-7.37(m,2H),7.12(t,J＝7.8Hz,1H),7.04(d,J＝7.3Hz,1H),6.72(d,J＝8.2Hz,1H),6.63(t,J＝7.3Hz,1H),5.32(d,J＝6.8Hz,1H),3.39(s,2H),2.90(s,3H),2.07(dd,J＝22.1,4.2Hz,2H)。LCMS:m/z＝451(M+H)+。
实施例43：HDAC酶测定
用于测试的化合物在DMSO中稀释至50倍的终浓度并制备十点三倍稀释系列。将化合物在测定缓冲液(50mM HEPES，pH7.4，100mM KCl，0.001％吐温-20，0.05％BSA，20μM三(2-羧乙基)膦)中稀释至6倍的其终浓度。将HDAC酶(从BPS Biosciences公司购入)在测定缓冲液中稀释至1.5倍的其终浓度，并与化合物预温育24小时，之后添加底物。
每种酶的底物三肽底物3(在内部合成)等于通过底物滴定曲线确定的Km。所使用的酶和底物的浓度在表2中给出。在具有0.3μM的测序级胰蛋白酶(Sigma)的测定缓冲液中将底物以6×其终浓度稀释。将底物/胰蛋白酶混合物加入到酶/化合物混合物，将板振摇60秒，并置于在Spectramax M5微量滴定板读数仪中。监测荧光的形成持续30分钟，并计算出反应的线性速率。通过四参数曲线拟合使用Graph Pad Prism确定IC50。对本发明的化合物获得的IC50值见于表1中。曲线的实例见于图1和图4中。
表2.
酶浓度 底物浓度
HDAC1 3.5ng/μl 3.8μM
HDAC2 0.2ng/μl 2.3μM
HDAC3 0.08ng/μl 3.9μM
实施例44：药代动力学
Male SD大鼠禁食过夜。将本发明的化合物以10倍终浓度溶解于二甲基乙酰胺，然后加入Solutol HS 15(BASF)至10％的终浓度。最后，加入80％的盐水并涡旋以获得澄清的溶液。对于静脉给药，三只动物经足背静脉注射1mg/kg的化合物。对于口服给药，通过口服管饲递送5mg/kg的化合物。在给药后5分钟、15分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时、8小时和24小时将尾静脉采血到K2EDTA管中。在4℃以2000g离心血液5分钟，以获得血浆。用乙腈提取血浆并通过LC/MS/MS分析化合物的水平。由大鼠血浆标准曲线计算血浆中化合物的水平。使用WinNonlin软件计算静脉清除率(IV clearance)和曲线下面积。对于静脉和口服给药的曲线下的剂量调节面积被用于计算口服生物利用度。
结果的总结示于表3和表4，以及图2中。
对化合物005确定了食蟹猴药代动力学。将化合物005在0.5％羟丙基甲基纤维素中溶解并以20mg/kg体重给予供给食蟹猴。随着时间的推移收集血浆样品，并如上所述进行分析。在每个时间点的血浆水平显示在图5中。
表3.
表3：在胎儿球蛋白诱导测定中测试化合物并且在“基于细胞的测定效价”列中呈现实现在胎儿球蛋白基因的表达超过基线2倍的增加的最低浓度。在大鼠盒式给药实验中评价了药代动力学特性。静脉清除率(IV Clr.)是以L/小时/kg为单位。口服最大血浆浓度(PO Cmax)是以ng/ml为单位。口服血浆半衰期(PO T1/2)是以小时为单位。口服曲线下面积(PO AUC)是以小时*ng/ml为单位。通过口服途径吸收的分数(F％)是剂量调整的口服曲线下面积与静脉曲线下面积的百分比。
表4.
实施例45：胎儿球蛋白诱导
使用由Bradner JE(Proc Natl Acad Sci USA.2010Jul 13；107(28):12617-22)描述的方法在体外培养从人骨髓分离的CD34+细胞，该方法包括在支持细胞向红系谱系分化的培养基中的7天扩增阶段，接着是继续红系细胞发育的3天分化阶段。在分化期间结束时，这些细胞主要是晚期红细胞。通过定量实时PCR使用针对成人主要β-球蛋白(β)、成人次要β球蛋白(δ)、胎儿β样球蛋白(HbG，γ)和胚胎β样球蛋白(ε)设计的引物/探针组确定mRNA水平。通过流式细胞术使用针对胎儿血红蛋白(HbF)或成人血红蛋白(HBA)的荧光抗体测定蛋白水平。
在图3所示的实验中，将细胞在媒介物(DMSO)0.3、1和3μM的化合物A以及0.3、1和3μM的化合物003的存在下分化。在图6所示的实验中，将细胞在媒介物(DMSO)0.3、1和3μM的化合物A以及0.3、1和3μM的化合物005的存在下分化。在分化的第3天确定球蛋白mRNA水平。
化合物A是具有以下所示的结构的HDAC1/2抑制剂(对于HDAC1、HDAC2和HDAC3，IC50分别为约4、15和114nM)。化合物A的表征和合成见于美国公布第2014-0128391号。
实施例46：其他研究
进行其他实验表明化合物003缺乏hERG、CYP抑制和遗传毒性。
对于hERG测定，将用hERG cDNA稳定转染和表达hERG通道的CHO细胞系以3-8×106个细胞/ml的密度接种到QPatch板(Sophion)中。以-80mV保持电位(钳制电位)对细胞进行电压钳制。通过在+20mV去极化5秒激活hERG电流，之后使电流回至-50mV持续5秒，以除去失活并观察去激活的尾电流(deactivating tail current)。使用尾电流大小的最大量来确定hERG电流幅值。选择化合物003的六个剂量(30、10、3、1、0.3和0.1μM)来获得拟合曲线和IC50。使用Sophion和GraphPad Prism提供的Assay Software对数据进行分析。化合物003在30μM最高浓度不抑制hERG通道的活性。
对于Cyp抑制，来自BD Gentest的人的活微粒体与化合物003(10、3.33、1.11、0.37、0.12、0.04、0.01μM)和底物(CYP1A2：30μM非那西丁；CYP2C9：10μM双氯芬酸；CYP2C19：35μM S-美芬妥英；CYP3A4：5μM咪达唑仑和80μM睾酮；CYP2D6：10μM丁呋洛尔)一起温育，持续下面的温育时间：CYP1A2、2C9、2D6：10分钟，37℃；CYP2C19：45分钟，37℃；CYP3A4：5分钟，37℃。底物的转换通过液相色谱/质谱/质谱(LC/MS/MS)来测量。通过Graph Pad Prism中的曲线拟合计算抑制。化合物003在最高10μM不抑制任何Cyp的活性。
对于遗传毒性，由Ames等人(1975)描述的细菌测试菌株TA98、TA100、TA1535和TA97a和由Green和Muriel(1976)所述的大肠杆菌测试菌株WP2uvrA与250、75、25、7.5、2.5、0.75、0.25和0.075μg/孔的化合物003在24孔板中温育，所述24孔板中具有或不具有市售购买的肝匀浆物(S9)(MolTox；Boone,NC)，所述肝匀浆物(S9)是由处死前5天以500mg/kg剂量腹膜内注射多氯联苯(Aroclor 1254)(200mg/mL于玉米油中)的雄性Sprague Dawley大鼠而制备。致突变性通过对在非许可介质(non-permissive media)上形成的菌落数目计数来进行评估。化合物003没有增加有或没有S9激活的任何菌株的回复突变菌落数目。
通过人外周血淋巴细胞(HPBL)中的微核形成测定来进一步评估遗传毒性。HPBL从健康供体获得，并且暴露于有或没有S9激活下的3500、2450、1715、1200、840、588、412、288、202、141、98.8、69.2、48.4和33.9μg/ml的化合物003持续4小时。用PBS洗涤细胞，并在完全培养基中与6μg/ml细胞松弛素B一起温育24小时。然后将细胞裂解，固定，并封固(封片，mount)在显微镜载玻片上。在盲的条件下对单核、双核和微核细胞的数目进行计数。化合物003在任何浓度都没有增加微核细胞的数目。
实施例47：用各种HDAC1/2抑制剂处理红系祖细胞导致Gata2 mRNA的诱导
如Sankara等人,Science,vol.322(5909),pp.1839-42(2008)所述的，将人骨髓来源的CD34+细胞扩增7天。然后在所指示的浓度的化合物005、化合物A(另一种已知的HDAC1/2抑制剂)或媒介物对照(DMSO)的存在下分化细胞，在支持红细胞生成的培养基中持续3天(Hu等人,“Isolation and functional characterization of human erythroblasts atdistinct stages:implications for understanding of normal and disorderederythropoiesis in vivo(有核红细胞在不同阶段的分离和功能表征：用于理解体内正常和紊乱的红细胞生成的启示)”,Blood,vol.121(16),pp.3246-53(2005))。Gata2 mRNA使用定量实时PCR确定，并且相对于水平β-肌动蛋白mRNA对照而被表达。化合物005或化合物A对原代红系祖细胞的处理导致HbG％(图6)和Gata2 mRNA(图7)的等同剂量和时间依赖性诱导。
通过引用并入
贯穿本申请所引用的所有参考文献(包括文献参考、授权的专利、公开的专利申请和共同未决的专利申请)的内容均在此明确地以其整体并入本文。除非另有定义，否则本文使用的所有技术术语和科学术语都符合本领域普通技术人员通常知道的含义。
等同物
本领域技术人员将认识到，或能够仅使用常规的实验来识别在本文所述的本发明的具体实施方式的许多等同物。这样的等同物旨在由下列权利要求所涵盖。

Claims (34)

1.一种式I的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中，
X1是CR7或N；
X2是CH或N；
Y选自由以下组成的组：
Z选自由H、C1-C6-烷基、C6-芳基、C(O)NR4R5、C(O)OR6、C(O)C1-C6-烷基、C(O)C0-C6-烷基-C6-芳基、C(O)-C3-C6-环烷基、C(O)-C2-C6-杂环基和C(O)C0-6-烷基-杂芳基组成的组，其中，所述芳基、杂芳基、环烷基和杂环基可选地被C1-C6-烷基、卤素、C1-C6-卤代烷基、羟基或C1-C6-烷氧基中的1个或2个取代；
Ra和Rb是H，或者Ra和Rb一起形成稠合的C6-芳基；
R1选自由H和C1-C6-烷基组成的组；
R2选自由H、C1-C6-烷基和C6-芳基组成的组；
R3选自由H、C1-C6-烷基和C6-芳基组成的组；
或者R2和R3一起形成C2-C6-杂环基；
R4选自由H、C1-C6-烷基、C1-C6-烷基-OH和C1-C6-NH2组成的组；
R5是C1-C6-烷基；
或者R4和R5一起形成C2-C6-杂环基，其中杂环基可选地被C1-C6-烷基、卤素、C1-C6-卤代烷基、羟基或C1-C6-烷氧基中的1个或2个取代；
R6选自由C1-C6-烷基和C0-C6-烷基-C6-芳基组成的组，其中芳基可选地被C1-C6-烷基、卤素或羟基中的1个或2个取代；和
R7选自由H、C1-C6-烷基和C3-C6-环烷基组成的组。
2.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物具有式II的结构：
或其药学上可接受的盐。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中，X1和X2各自是N，或者X1和X2各自是CH。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物，其中，Y为：
5.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中，Z选自由C(O)NR4R5、C(O)OR6、C(O)-C3-C6-环烷基、C(O)-C2-C6-杂环基和C(O)C0-6-烷基-杂芳基组成的组，其中杂芳基、环烷基或杂环基可选地被C1-C6-烷基、卤素或羟基中的1个或2个取代；和R6是C6-芳基。
6.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中，Z选自由H、C1-C6-烷基和C6-芳基组成的组。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中，R1是H。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中，R2是H。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物，其中，R3是H、甲基、乙基、异丙基或苯基。
10.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物具有式III的结构：
或其药学上可接受的盐。
11.根据权利要求10所述的化合物，其中，X1和X2各自是N，或者X1和X2各自是CH。
12.根据权利要求10或11所述的化合物，其中，R2是H。
13.根据权利要求10至12中任一项所述的化合物，其中，R3是H、甲基或异丙基。
14.根据权利要求10至13中任一项所述的化合物，其中，R4是H且R5是C1-C6-烷基。
15.根据权利要求10至13中任一项所述的化合物，其中，R4和R5一起形成选自由吗啉基、哌啶基、哌嗪基和吡咯烷基组成的组的杂环基，其中所述吗啉基、哌啶基、哌嗪基和吡咯烷基可选地被C1-C6-烷基、卤素或羟基中的1个或2个取代。
16.根据权利要求10至15中任一项所述的化合物，其中，X1和X2是N；
R1是H；
R2是H；
R3是H或C1-C4-烷基；和
R4和R5一起形成选自由吗啉基、哌啶基、哌嗪基和吡咯烷基组成的组的杂环基，其中所述吗啉基、哌啶基、哌嗪基和吡咯烷基可选地被C1-C6-烷基、卤素或羟基中的1个或2个取代。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的化合物，所述化合物选自：
或其药学上可接受的盐。
18.根据权利要求10至16中任一项所述的化合物，所述化合物选自：
或其药学上可接受的盐。
19.一种药物组合物，包括根据权利要求1至18中任一项所述的化合物和药学上可接受的载体。
20.一种用于抑制受试者中HDAC1和/或HDAC2的活性的方法，包括施用根据权利要求1至18中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
21.一种用于治疗受试者中由HDAC1和/或HDAC2介导的疾病的方法，包括向所述受试者施用根据权利要求1至18中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐。
22.根据权利要求21所述的方法，其中，所述疾病是骨髓增生异常综合征。
23.根据权利要求21所述的方法，其中，所述疾病是血红蛋白病。
24.根据权利要求23所述的方法，其中，所述血红蛋白病是镰状细胞病或β地中海贫血。
25.根据权利要求21所述的方法，其中，所述疾病是肺癌、结肠癌、乳腺癌、神经母细胞瘤、白血病或淋巴瘤。
26.根据权利要求21所述的方法，其中，所述疾病是急性骨髓性白血病或急性巨核细胞白血病。
27.根据权利要求21所述的方法，其中，所述疾病是神经母细胞瘤。
28.一种用于治疗需要其的受试者中镰状细胞病、β地中海贫血、骨髓增生异常综合征、急性髓细胞性白血病、神经母细胞瘤或急性巨核细胞白血病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至18中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐。
29.根据权利要求20至28中任一项所述的方法，其中，所述受试者是人。
30.一种用于治疗与GATA结合蛋白2(Gata2)缺陷相关的疾病或疾患的方法，包括向需要其的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至18中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐。
31.一种用于增加细胞中的GATA结合蛋白2(Gata2)表达的方法，所述方法包括使所述细胞与权利要求1-18中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐接触。
32.根据权利要求31所述的方法，其中Gata2过表达诱导HbG(γ-球蛋白)。
33.一种用于诱导受试者中HbG(γ-球蛋白)表达的方法，所述方法包括向所述受试者施用权利要求1至18中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐。
34.根据权利要求33所述的方法，其中将权利要求1至18中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐以导致受试者中HbG增加约2倍至约20倍的剂量施用。
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