CN107817350B - 一种肺癌筛查试剂盒 - Google Patents
一种肺癌筛查试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107817350B CN107817350B CN201711014014.9A CN201711014014A CN107817350B CN 107817350 B CN107817350 B CN 107817350B CN 201711014014 A CN201711014014 A CN 201711014014A CN 107817350 B CN107817350 B CN 107817350B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lung
- lung cancer
- sost
- expression level
- reagent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- G01N33/575—
-
- G01N33/5752—
-
- G01N33/5758—
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种肺癌筛查试剂盒，它包括任选的用于检测SOST蛋白表达水平的试剂。本发明还公开了检测SOST蛋白表达水平的试剂在制备肺癌筛查用试剂中的用途。本发明试剂盒通过检测SOST蛋白的表达水平，可以判断待检者患肺癌的风险，可用于临床肺癌的辅助诊断，为患者采取相关的治疗措施或者决策提供有效的依据，临床应用前景良好。
Description
技术领域
本发明涉及一种肺癌筛查试剂盒。
背景技术
在恶性肿瘤的发病率及死亡率中，肺癌分别占13.0％和19.4％，居恶性肿瘤第一位。且受中国人口老龄化形势的加剧、吸烟人群的年轻化等因素的影响，肺癌患者的人群基数仍在上升。由于肺癌的异质性，同一治疗手段对肺癌的治疗效果往往是南辕北辙，由此，肺癌领域的临床研究和临床处理，重要的一环是对肺癌进行分类和分期以尽量减少其异质性，提高治疗效率。
目前，根据各型肺癌的分化程度和形态特征，可将肺癌分为小细胞肺癌、腺癌、鳞癌等。其中，鳞癌、腺癌均为高发类型，分别占原发性肺癌的50％、25％，是肺癌防治和研究的重点。鳞癌以中央型肺癌多见，并有向管腔内生长的倾向，常早期造成支气管狭窄，引起肺不张，或阻塞性肺炎。癌组织易变性、坏死，形成空洞或癌性肺脓肿。腺癌多生长在肺边缘小支气管的黏液腺，在周围型肺癌中最为常见。腺癌倾向于管外生长，但也可沿肺泡壁蔓延，常在肺边缘部形成直径2～4cm的肿块。腺癌含有非常多的血管，故局部浸润和血行转移较鳞癌早。易转移至肝、脑和骨，更容易累及胸膜而造成胸水。
与其它恶性肿瘤一样，早发现、早治疗是降低肺癌包括鳞癌和腺癌死亡率的关键。但肺癌在早期并没有什么特殊症状，经常在疾病发展到晚期才表现出肺癌症状，错过了最佳手术时机，即使手术，多数患者仍会死于肺癌复发的侵袭或转移。因此肺癌的早期诊断和进行有效的筛查至关重要。
肺癌发生发展的分子生物学机制至今仍不清楚，探寻有效的肺癌分子生物学检测标志物，不仅对阐明肺癌细胞侵袭和转移的分子机制提供依据，也为肺癌的病理诊断、治疗方案的选择具有重要的理论意义和临床应用价值。
骨硬化蛋白(Sclerostin、SOST)，是一种C-末端具有CTCK结构域的分泌性蛋白，由SOST基因进行编码，一般认为是由骨细胞特异性表达，研究表明，SOST可结合LRP5/6受体并抑制Wnt信号通路，进而发挥抑制成骨细胞分化和骨形成的作用。目前，未见SOST在肺癌中表达情况的报道。
发明内容
发明人对肺癌进行了详细研究，发现了SOST蛋白可以作为其分子标志物，并且，SOST蛋白在肺组织中的表达水平与肺鳞癌、腺癌相关。因此，通过检测肺组织中的SOST蛋白表达水平，不仅可以预测待检者患肺癌的风险，而且可以预测其肺癌分型。
据此，本发明提供了一种肺癌筛查试剂盒，以及检测SOST蛋白的表达水平的试剂在制备肺癌筛查试剂中的用途。
本发明公开了一种肺癌筛查试剂盒，它包括任选的用于检测SOST蛋白表达水平的试剂。
其中，所述试剂是用于检测肺组织中SOST蛋白表达水平的试剂。
其中，所述检测SOST蛋白表达水平的试剂为免疫组化检测方法用试剂。
其中，所述检测SOST蛋白表达水平的试剂为Western Blot或ELISA检测方法用试剂。
其中，所述肺癌为肺腺癌和/或肺鳞癌。
本发明还提供了检测SOST蛋白表达水平的试剂在制备肺癌筛查用试剂中的用途。
其中，所述试剂是用于检测肺组织中SOST蛋白表达水平的试剂。
其中，所述检测SOST蛋白表达水平的试剂为免疫组化检测方法用试剂。
其中，所述检测SOST蛋白表达水平的试剂为Western Blot或ELISA检测方法用试剂。
其中，所述肺癌为肺腺癌和/或肺鳞癌。
本发明试剂盒通过检测肺异常者的肺部异常部位与正常部位的SOST表达水平，可以判断肺异常者的SOST表达水平差异，进而判断待检者患肺癌的风险：若SOST的表达水平高，则患肺腺癌的风险低、患肺鳞癌的风险高；若SOST的表达水平低，两种肺癌类型的患病风险相反，可用于临床肺癌的辅助诊断，临床应用前景良好。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1SOST在肺癌组织样本中表达。
图2SOST的表达水平，其中，**代表P＜0.01；*代表P＜0.05。
具体实施方式
实施例1检测SOST在肺癌的表达水平
一、实验材料
肺癌组织微阵列(HLugS060CD01和HLug-Ade050CD-01)购买自上海芯超生物。微阵列含肺癌组织病理切片，其中：
HLugS060CD01组织芯片为肺鳞癌病程芯片：包含正常人肺5例、癌旁/肺鳞癌原发灶(临床1期、2期、3期、4期)各22例、肺鳞癌转移灶3例、肺鳞癌的阴性/阳性淋巴结各4例。
HLug-Ade050CD-01组织芯片为肺腺癌病程芯片：包含正常人肺5例、癌旁/肺腺癌原发灶(临床1期、2期、3期、4期)各14例、肺腺癌转移灶4例、阴性淋巴结7例/阳性淋巴结6例。
抗SOST多克隆抗体获自ProteinTech Group，Inc(中国武汉)。
所有其他试剂盒或试剂购买自碧云天生物技术有限公司(中国上海)。
二、SOST表达水平的检测
使用免疫组化方法进行检测，具体如下：
1.石蜡切片脱蜡至水：(石蜡切片染色前应置60℃1小时)。
(1)二甲苯I、II,各10分钟。
(2)梯度酒精：100％，2分钟→95％，2分钟→80％，2分钟→70％2分钟。
(3)蒸馏水洗：5分钟，2次(置于摇床)。
2.过氧化氢封闭内源性过氧化物酶：3％H2O2，室温10分钟(避光)。
3.蒸馏水洗：5分钟，2次(置于摇床)。
4.抗原修复：高压热修复法：枸橼酸钠缓冲液(10mM，PH6.0)，淹没切片，盖上锅盖，高压锅内煮沸，上汽3分钟后缓慢冷却。
附：抗原修复液(10mM pH 6.0枸橼酸钠缓冲液)的配制
(1)储备液的配制：
A液：枸橼酸三钠-2H2O 29.41g+蒸馏水1000ml
B液：枸橼酸21g+蒸馏水1000ml
(2)工作液的配制：A液82ml+B液18ml+蒸馏水900ml
抗原修复的方法：
5.PBS：5分钟，2次(置于摇床)。
6.正常血清封闭：从染片缸中取出切片，擦净切片背面水分及切片正面组织
周围的水分(保持组织呈湿润状态),滴加正常兔血清处理，37℃，15分钟。
附：正常血清配制(或按试剂盒规定的浓度配制)
按1:20比例,用PBS配制,每张切片需要量按50μl+5μl(10％抛洒量)计算。
7.滴加第一抗体：用滤纸吸去血清，不洗，直接滴加anti-SOST(用PBS按1:200稀释抗体)，4℃冰箱过夜。
8.PBS：5分钟，2次(置于摇床)。
9.滴加生物素化的二抗(用PBS按1:5000稀释二抗)，37℃，40分钟。
10.PBS：5分钟，2次(置于摇床)。
11.滴加三抗(SAB复合物)，37℃，40分钟。
12.PBS：5分钟，2次(置于摇床)。
13.DAB显色，镜下观察，适时终止(自来水冲终止)。
附：DAB的配制
储备液(DAB 25mg/ml)的配制：DAB 250mg+PBS 10ml，待完全溶解后分装成1ml,100μl,50μl，20μl等，—20℃，冻存。
(2)工作液：DAB储备液20μl+PBS 1000μl+3％H2O2 5μl
14.自来水(细水)充分冲洗。
15.苏木素复染，室温，30秒，自来水冲洗。
16.自来水冲洗返蓝，15分钟。
17.梯度酒精脱水：
80％，2分钟→95％，2分钟→100％，2次，5分钟。
18.二甲苯透明：
I，II(二甲苯)各5分钟
19.封片：加拿大树胶(或中性树胶)封片。
20.显微镜拍照，拍照后对SOST免疫组化染色进行半定量分析，其中，
荧光强度为：阴性：0；弱阳性：1；阳性：2；强阳性：3；
阳性百分比为：0％：0；0-25％：1；25％-50％：2；50％-75％：3；75％-100％：4。
半定量评分＝荧光强度X阳性百分比，
半定量得分为0-12。
使用Graphpad 5.0对各组半定量评分进行统计学分析，P＜0.05为有统计学意义。
二、实验结果
肺癌组织与正常组织对照中SOST的表达检测结果见图1-2。
由图1-2可见，正常肺组织中，SOST的免疫组化平均得分为8.00±0.58，肺鳞癌组织中，SOST的平均得分为11.67±0.33，与正常肺组织相比，表达水平差异具有统计学意义(P<0.01)，SOST在肺鳞癌组织中显著升高；肺腺癌组织中，SOST的平均得分为3.00±1.73，与正常肺组织相比，表达水平差异具有统计学意义(P<0.05)，SOST在肺腺癌组织中显著降低。
可见，与正常肺组织相比，肺腺癌组织的SOST表达水平显著降低、肺鳞癌组织的SOST表达水平显著升高，说明肺癌与SOST表达水平相关。由于正常肺组织的SOST水平可反映正常人肺组织的SOST水平，因此，对肺部异常者，可分别取异常部位、正常部位组织，比较SOST表达水平，进而评价其患肺腺癌、鳞癌的可能性，作为临床肺癌的辅助诊断手段。
综上，本发明试剂盒通过检测SOST的表达水平，可以判断肺异常者的肺部异常部位与正常部位的SOST表达水平差异，进而筛查待检者患肺癌的风险：若SOST的表达水平低，则患肺腺癌的风险高、患肺鳞癌的风险高，反之，结论相反，可用于临床肺癌的辅助诊断，为患者采取相关的治疗措施或者决策提供有效的依据，临床应用前景良好。
Claims (3)
1.检测SOST蛋白表达水平的试剂在制备肺癌筛查用试剂中的用途，其特征在于：
所述试剂是用于检测肺组织中SOST蛋白表达水平的试剂；
所述肺癌为肺腺癌和/或肺鳞癌；
与正常肺组织相比，SOST蛋白表达水平在肺鳞癌组织中升高、在肺腺癌组织中降低。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述检测SOST蛋白表达水平的试剂为免疫组化检测方法用试剂。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述检测SOST蛋白表达水平的试剂为WesternBlot或ELISA检测方法用试剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711014014.9A CN107817350B (zh) | 2017-10-26 | 2017-10-26 | 一种肺癌筛查试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711014014.9A CN107817350B (zh) | 2017-10-26 | 2017-10-26 | 一种肺癌筛查试剂盒 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107817350A CN107817350A (zh) | 2018-03-20 |
| CN107817350B true CN107817350B (zh) | 2019-09-06 |
Family
ID=61603288
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201711014014.9A Active CN107817350B (zh) | 2017-10-26 | 2017-10-26 | 一种肺癌筛查试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107817350B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113138273B (zh) * | 2020-01-17 | 2024-06-18 | 孟民杰 | 一种应用于肺癌快速筛查及免疫靶向治疗检测的试剂盒及其用途 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AR068767A1 (es) * | 2007-10-12 | 2009-12-02 | Novartis Ag | Anticuerpos contra esclerostina, composiciones y metodos de uso de estos anticuerpos para tratar un trastorno patologico mediado por esclerostina |
| GB201302257D0 (en) * | 2013-02-08 | 2013-03-27 | Nobel Biocare Services Ag | Method for measuring bone loss rate |
| CN105954517B (zh) * | 2016-06-30 | 2018-09-18 | 四川大学华西医院 | 一种肺癌筛查试剂盒 |
| CN106814188B (zh) * | 2017-02-04 | 2018-09-18 | 成都医学院第一附属医院 | 一种宫颈癌的筛查试剂盒 |
-
2017
- 2017-10-26 CN CN201711014014.9A patent/CN107817350B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107817350A (zh) | 2018-03-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Yang et al. | Renal cell carcinoma in tuberous sclerosis complex | |
| Chen et al. | Sialadenoma papilliferum: clinicopathologic, immunohistochemical, molecular analyses of new five cases and review of the literature | |
| CN110187110A (zh) | 一种贲门癌预后预测标志物及其应用 | |
| Sun et al. | Expression of Cav-1 in tumour cells, rather than in stromal tissue, may promote cervical squamous cell carcinoma proliferation, and correlates with high-risk HPV infection | |
| CN107817350B (zh) | 一种肺癌筛查试剂盒 | |
| Bhattacharjee et al. | A comparative immunohistochemical study of presence and distribution pattern of stromal myofibroblast in oral dysplasia and in different grades of oral squamous cell carcinoma | |
| Wu et al. | Correlation between calcification and bone sialoprotein and osteopontin in papillary thyroid carcinoma | |
| CN106290895A (zh) | Chka蛋白在制备肝癌预后评估试剂盒中的应用、试剂盒及方法 | |
| CN108088998B (zh) | 一种肺癌筛查试剂盒 | |
| CN110095605B (zh) | 一种肺癌的筛查试剂盒 | |
| CN110095606B (zh) | 一种肺癌的筛查试剂盒 | |
| CN110763845B (zh) | 一种检测蛋白标志物的配体在制备用于诊断结肠癌的产品中的用途和试剂盒 | |
| CN107621543B (zh) | Krba1蛋白在制备肝癌术后预后评估试剂盒中的应用、肝癌预后评估试剂盒及方法 | |
| CN108152496B (zh) | Mest蛋白在制备肺癌辅助诊断和/或预后判断的试剂盒中的应用 | |
| CN107102141A (zh) | 分子标记物cd71及在子宫内膜癌诊断、分期及预后中的应用 | |
| CN109212214B (zh) | 一种肺癌筛查试剂盒 | |
| CN105954517B (zh) | 一种肺癌筛查试剂盒 | |
| CN105929164B (zh) | 一种肺癌筛查试剂盒 | |
| Saeed et al. | Thyroid Carcinoma Patients Correlated With Cytomegalovirus by using Insitu Hybridization | |
| WO2023217035A1 (zh) | 检测c1qbp蛋白表达水平的试剂在制备口腔癌筛查或预后试剂盒中的用途 | |
| Kazanceva et al. | Proliferative potential in benign mixed salivary gland tu-mors and its value in primary and recurrent neoplasms | |
| CN110018317A (zh) | 核纤层蛋白a在制备皮肤癌术后预后评估试剂盒中的应用 | |
| CN105548548B (zh) | 一种肺癌筛查试剂盒 | |
| CN106383230A (zh) | 一种肺癌诊断试剂盒 | |
| CN106153920B (zh) | 一种肺癌筛查试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |