CN107561014A - 孔板及其使用方法 - Google Patents

Abstract

一种孔板，其是在板上表面具有开口的孔的孔板。孔具有平坦的底面部和从底面部的周缘向上方立起的周壁部；周壁部在任意的高度位置沿周向具有阶梯部，并且周壁部的位于阶梯部上方的周壁上部比位于该阶梯部下方的周壁下部，横截面积更大；进一步地，阶梯部表示收纳在孔中的液体状试样的液面高度的下限。

Description

孔板及其使用方法

技术领域

本发明涉及孔板及其使用方法，更详细而言，涉及一种能改善在用显微镜、成像装置等观察孔板时产生的因弯月面效应导致的可视性的降低，从而即使在孔的底面部周缘处也能以足够的亮度进行观察的孔板及其使用方法。

背景技术

孔板是由排列设置有多个凹处(孔或深孔)的板构成的实验器具或者检测器具，大量地用于生化分析、临床检测等。具体而言，在将培养液、培养基等注入各孔中并对培养的细胞等进行观察或测量时使用。近年来，也正在进行用CCD(Charge Coupled Device，电耦合器件)照相机等摄像装置拍摄并进行数据化，对该图像数据应用各种图像处理技术并用于观察、分析。

在这样的孔板中，例如，在从其上方用照明光照射各孔并接收从该孔的底面部透过来的光进行拍摄的情况下，由于注入在孔中的液体的液面的弯月面效应导致照明光折射，其结果，在拍摄的图像中存在孔的底面部的周缘变暗的问题。

针对这样的问题，例如在日本特开平5-181068号公报中，公开了使注入于各孔的液体上漂浮透明的平板，使由该溶液产生的弯月面平坦化。但是，使设置于孔板的多个孔中分别漂浮平板明显地降低了作业性。

另外，日本特开2012-147739号公报公开了，通过使用具有足以接收透过孔板的光束的数值孔径(NA)的观察光学系统的物镜，即使因由孔板的侧壁产生的液面的凹面化带来的弯月面效应而导致到达孔板凹部的外周部的照明光进一步从孔板的中心呈放射状地折射，也能够制作能同时观察作为孔板底面的整个培养区域的光学系统，能够避免在孔板的穴的壁面附近产生影。但是，存在的问题是：数值孔径(NA)大的透镜的制造成本高，另外，因为景深小，所以在观察试样的立体结构时不能将整个对象物囊括于聚焦范围内。

发明内容

本发明是鉴于前述问题而完成的，其目的在于提供一种孔板及其使用方法，能改善因注入于孔的液体的弯月面效应导致的可视性的降低，即使在孔底面部周缘也能以足够的亮度进行观察。

为了解决前述课题，本发明的孔板是在板上表面具有开口的孔的孔板，其特征在于，前述孔具有平坦的底面部和从该底面部的周缘向上方立起的周壁部；前述周壁部在任意的高度位置沿周向具有阶梯部；并且，前述周壁部的位于前述阶梯部上方的周壁上部比位于前述阶梯部下方的周壁下部，横截面积更大；进一步地，前述阶梯部表示收纳在前述孔中的液体状试样的液面高度的下限。

根据前述的构成，孔的周壁部具备阶梯部，位于该阶梯部上方的周壁上部比位于该阶梯部下方的周壁下部，横截面积更大。而且，阶梯部表示收纳在孔中的液体状试样的液面高度的下限，该液体状试样注入孔时，以使液面到达位于阶梯部上方的周壁上部。

另一方面，注入孔中的液体状试样由于该液体状试样的表面张力而浸润周壁部，其结果，由于弯月面效应，液面变成例如凹状曲面。但是，在从孔的底面部观察该孔的情况下，液体状试样浸润周壁部从而成为曲面状的周缘部能够被阶梯部遮挡。其结果是能够使实际所观察的孔的底面部的周缘变亮，能够实现可视性的改善。由此，以改善因弯月面效应导致的可视性为目的，不再需要使用昂贵的光学系统装置、图像处理系装置，能够用简便的摄像装置等高精度地观察和分析收纳在孔中的液体状试样。

需要说明的是，前述“液体状”是指，除溶液状态以外，还包括凝胶、悬浊液以及膏等具有流动性的状态。前述“液体状试样”是指如上述那样的具有流动性的状态的试样，试样其本身不仅包括观察或测量对象的液体，而且还包括用于细胞培养的培养基等、对观察或测量对象进行培养或保护等的液体。另外，前述“横截面积”是指与孔的深度方向垂直的面的截面积。此外，所谓前述“液面”，在收纳于孔中的液体状试样例如由于弯月面效应而凹面化的情况下，是指该凹面的水平切面，“液面高度”是指从孔的底面部至前述水平切面的高度。

对于前述的构成，前述阶梯部在前述周壁部优选设置于使前述周壁下部的容量相对于前述孔的容量成为1/2以下的高度位置。由此，即使在注入孔中的液体状试样的量是微量的情况下，也能够改善因弯月面效应导致的可视性的降低，也能提高液体量的自由度。

另外，对于前述的构成，前述阶梯部优选具有遮挡波长为可见区域的光的遮光性。由此，在因弯月面效应而曲面化的液体状试样的液面中，对于入射至孔的周壁部附近的光，能够用阶梯部准确地进行遮挡。其结果，能够在更亮的状态下观察孔的底面部的周缘。此外，“可见区域的光”是指波长区域为360nm～780nm的范围的光。

另外，为了解决前述课题，本发明的孔板的使用方法是在板的上表面具有开口的孔的孔板的使用方法，其特征在于，前述孔具有平坦的底面部和从该底面部的周缘向上方立起的周壁部；前述周壁部在任意高度位置沿周向具有阶梯部；并且，前述周壁部的位于前述阶梯部上方的周壁上部比位于前述阶梯部下方的周壁下部，横截面积更大；进一步地，前述阶梯部表示收纳在前述孔中的液体状试样的液面高度的下限，在前述孔中注入该液体状试样以使液面高于表示前述液体状试样的液面高度的下限的阶梯部。

根据前述的构成，阶梯部表示收纳在孔中的液体状试样的液面高度的下限，当将液体状试样注入孔时，使其液面高于该阶梯部。由此，在从孔板的下方观察该孔的底面部的情况下，能够用阶梯部对液体状试样浸润周壁部从而成为曲面状的周缘部进行遮挡，从而能够使孔的底面部的周缘比以往的孔板更亮。即，如果是前述的构成，就能够实现可视性的改善，即使不用昂贵的光学系统装置、图像处理系装置也能够高精度地观察和分析液体状试样。

对于前述的构成，优选的是，从前述孔板的上方对注入了前述液体状试样的前述孔照射光，从前述孔板的下方拍摄前述孔的底面部的液体状试样。在从孔板的上方拍摄液体状试样的情况下，由于因弯月面效应而导致曲面化的液面的透镜效应，有时会产生拍摄图像的变形(失真)。而且，在液体状试样是细胞培养液的情况下，通常培养液被保温在36℃左右，在这样的情况下，为了防止混入杂物等而用盖等封闭孔的开口时，有时该盖等会产生雾。因此，在从孔板的上方拍摄液体状试样的情况下，也存在因在盖等上的雾而引起的拍摄图像不清晰的问题。然而，根据前述的构成，因为从孔板的上方对注入有液体状试样的孔照射光，并从该孔板的下方拍摄孔的底面部的液体状试样，所以能够防止失真而得到清晰的拍摄图像。

根据本发明，孔板在孔的周壁部沿其周向具有阶梯部；位于该阶梯部上方的周壁上部比位于该阶梯部下方的周壁下部，横截面积更大。而且，因为阶梯部表示收纳在孔中的液体状试样的液面高度的下限，所以在液体状试样注入该孔时使用阶梯部，以使液面到达位于阶梯上方的周壁上部。

而且，当将液体状试样注入孔中以使液面到达存在于阶梯部的上方的周壁上部时，在例如从孔的底面部观察该孔的情况下，就能够用阶梯部遮挡液体状试样因弯月面效应而成的曲面状的液面的周缘。因此，能够在明亮的状态下观察孔的底面部的周缘，能够实现可视性的改善。而且，因为即使不使用昂贵的光学系统装置、图像处理系装置也能实现可视性的改善，所以能够避免装置的复杂化、实现成本的降低。

附图说明

图1是概略性地表示本发明的一个实施方式的孔板的平面图。

图2A是表示前述孔板中的孔的说明图，是表示从板的上面观察到的孔的平面图。

图2B是前述孔板中的孔的截面示意图。

图3是表示前述孔的周壁部中的阶梯部的局部放大图。

图4是表示用摄像装置拍摄前述孔板的情形的示意图。

图5是表示液体状试样被注入到前述孔板中的状态的侧面图。

图6是拍摄的注入到本发明的实施例1的孔板的孔中的培养液的拍摄图。

图7是拍摄的注入到本发明的实施例2的孔板的孔中的培养液的拍摄图。

图8是拍摄的注入到比较例1的孔板的孔中的培养液的拍摄图。

图9是拍摄的注入到比较例2的孔板的孔中的培养液的拍摄图。

图10是拍摄的注入在比较例3的孔板的孔中的培养液的拍摄图。

具体实施方式

(孔板)

基于图1～图4，对本实施方式的孔板进行以下的说明。图1是概略性地表示本实施方式的孔板的平面图。图2A是表示前述孔板中的孔的说明图，是表示从板的上面观察到的孔的平面图。图2B是前述孔板中的孔的截面示意图。图3是表示前述孔的周壁部的阶梯部的局部放大图。

如图1所示，在板11的上表面多排列地排列多个孔12而构成孔板10。板11有光透过性，但是，也能够使用将除了孔12的底面部(后面进行详细的说明。)以外制成黑色等赋予了遮光性的板。此处，光透过性是指对可见光区域(360nm～780nm)的光具有透过性。另外，板11的整体形状为矩形，在本发明中也可以是其他的形状。

作为板11的构成材料，没有特别的限定，例如优选对液体状试样的观察、检测、测定等没有影响且表面处理、成型加工性优异的材料。具体而言，例如可举出：聚苯乙烯、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯系树脂等的聚苯乙烯系树脂；聚丙烯树脂、聚乙烯树脂、乙烯-丙烯共聚物等聚烯烃系树脂或环状聚烯烃系树脂；聚碳酸酯树脂、聚对苯二甲酸乙二醇酯树脂、聚甲基丙烯酸甲酯树脂等甲基丙烯酸系树脂；氯乙烯树脂、聚对苯二甲酸丁二醇酯树脂、聚芳酯树脂、聚砜树脂、聚醚砜树脂、聚醚醚酮树脂、聚醚酰亚胺树脂、聚四氟乙烯等氟系树脂；聚甲基戊烯树脂、聚丙烯腈等丙烯酸树脂；丙酸酯树脂等纤维素系树脂等。在这些树脂中，从对细胞毒性低的观点出发，优选聚对苯二甲酸乙二醇酯树脂、聚苯乙烯系树脂以及聚碳酸酯树脂。

对于板11的尺寸而言，能够根据用途进行各种改变。例如，在图1所示的孔板10的形态的情况下，能够将装置尺寸(长度L、高度H、宽度W)设为L＝82～88mm、H＝12～18mm、W＝124～130mm左右。

如图2A和2B所示，孔12作为为了收纳并保持液体状试样的收纳部发挥功能。在本实施方式中，孔12的总数是8×12共计96个，但是，能够根据用途进行改变。具体而言，在4～1536个的范围，更优选在96～1536个的范围。另外，对孔12的宽度尺寸(开口尺寸)以及深度尺寸而言，只要是落入板11内的范围内，就没有特别的限定，能够根据板11的尺寸等进行适当设定。在本实施方式中，宽度尺寸w为1.5mm～60mm的范围，深度尺寸d能够设为2mm～18mm的范围。需要说明的是，如果孔12的宽度尺寸以及深度尺寸增大，因为也能够使反应等所需的液体量增加，所以多数情况下优选。但是，在必要成分的量超过反应等所需的足够的量的情况下，会导致不必要的液体成本。

孔12的开口形状在平面视图中呈圆形。但是，本发明不限于圆形的情况，例如，也可以是矩形、多边形。孔12的底面部13呈平坦的圆形。底面部13也不限于圆形的情况，能够与孔12的开口形状相应地制成矩形等。而且，底面部13需要对可见光区域的光具有透过性。由此，例如能够使从孔12的上方照射的光透过，使后述的利用摄像装置进行拍摄成为可能。

孔12的周壁部14大致设置成从底面部13的周缘向上方立起的形态，沿其周向具有阶梯部15。更详细而言，阶梯部15的下方为周壁下部14b，设置成从底面部13的周缘向上方立起的形态。另外，阶梯部15的上方为周壁上部14a，设置成从阶梯部15的周缘向上方立起的形态。

另外，形成了周壁上部14a的横截面积比周壁下部14b大的构成。对于周壁上部14a的横截面积相对于周壁下部14b的大小的程度而言，只要是在从底面部13侧观察孔12的情况下、液体状试样的液面的周缘部至少被阶梯部15遮挡的程度即可。由此，能够以明亮的状态对所观察的孔12的周缘部进行观察，能够确实地实现可视性的改善。

周壁下部14b可以大致垂直于底面部13，或者也可以朝着开口方向呈锥状(taper)扩展。如果是锥状的情况，在通过使用模具的成型来制造孔板10时，能够容易地进行该模具的起模。而且，周壁上部14a也可以大致垂直于阶梯部15，或者可以朝着开口方向呈锥状扩展。在使周壁上部14a呈锥状立起的情况下，与周壁下部14b的情况相同，能够容易地进行模具的起模。需要说明的是，优选的是，将锥角设定在液体状试样的弯月面效应对观察画面的影响被尽可能抑制的范围内。

阶梯部15表示收纳在孔12中的液体状试样的液面高度的下限。因此，使用本实施方式的孔板10时，需要注入至液面至少到达阶梯部15上方的周壁上部14a的高度位置。此处，所谓液面，例如在液体状试样形成凹型的弯月面的情况下，是指弯月面的水平切面。

对于周壁部14的阶梯部15的高度位置H没有特别的限定，优选设定以使周壁下部14b的容量相对于孔12的容量成为1/2以下的高度位置。由此，即使要注入孔12中的液体状试样的量是微量时，也能够改善因弯月面效应导致的可视性的降低。另外，对于液体状试样的液量，能够在液面高度不低于阶梯部15的高度的范围内进行适当设定。对于阶梯部15的高度H的下限没有特别的限定，例如在将培养液用作液体状试样的情况下，优选在底面部13将培养液保持为不妨碍进行细胞培养的程度。需要说明的是，“阶梯部15的高度位置H”是指从底面部13至该底面部13与阶梯部15的边界部分的距离，换言之，也能够称作周壁下部14b的高度。

对于阶梯部15的倾斜角θ而言，只要是0°以上且小于90°的范围，就没有特别的限定(参照图3)。但是，例如在将培养液用作液体状试样并使用该培养液进行细胞培养的情况下，优选能使培养的细胞(球状体(spheroid)/菌落(colony))不会停留在阶梯部15而以自身重量沉降至底面部13的程度。由此，能够防止细胞滞留并培养于阶梯部15。另外，优选阶梯部15的倾斜角θ在周壁部14的整个圆周都是相同的值。需要说明的是，前述倾斜角θ的前述数值范围更优选为30°以上且75°以下，进一步优选为40°以上且50°以下。此外，“倾斜角θ”是指，在将孔板10放置于水平的面的情况下，水平面与阶梯部15的倾斜面所成的角度。

对于阶梯部15的高度h没有特别的限定，只要根据周壁上部14a的横截面积以及倾斜角θ的值，设定成液体状试样的液面的周缘部至少被阶梯部15遮挡即可。

另外，为了遮挡波长在可见光区域的光，能够对阶梯部15赋予遮光性。由此，能够使孔12的底面部13的周缘明亮，进一步实现可视性的改善。作为赋予遮光性的具体方法，例如可举出使阶梯部15成为黑色等的方法。此处，遮光性是指，在从底面部13侧观察阶梯部15的情况下，使可见光(380～780nm)的波长范围的平均全光线透过率衰减至70％以下、优选30％以下、更优选10％以下。

需要说明的是，为了促进检测体成分的物理化学吸附，也可以对孔12的底面部13实施等离子体处理、电晕处理、微波处理等亲水处理。另一方面，为了防止细胞等滞留于阶梯部15，也能够对周壁部14实施氟化处理等憎水处理。

作为前述液体状试样，例如可举出细胞的培养液、试剂等。在培养液的情况下，在规定的培养条件下培养的细胞、细菌等的生物试样成为观察、生化分析、拍摄的对象。

对于孔板10的制造方法，没有特别的限定。例如，在孔板10由树脂材料构成的情况下，能够容易地通过注射成型、吹塑成型、注射吹塑成型、3D打印等制作孔板。另外，在孔板10由玻璃构成的情况下，能够通过使用模具的成型、切削加工来制作孔板。

(孔板的使用方法)

以下基于图4和图5对本实施方式的孔板10的使用方法进行说明。图4是表示用摄像装置拍摄孔板10的情形的示意图。图5是表示在孔板10中注入了液体状试样的状态的侧视图。另外，图4中的XY平面代表水平面，Z轴代表垂直轴。

首先，针对本实施方式中使用的摄像装置20进行说明。如图4所示，摄像装置20具备将孔板10保持大致水平姿势的保持部(图中未示出)、配置于孔板10上方的照明部21、配置于孔板10下方的摄像部22、具有对所述各部件动作进行控制的CPU等的控制部23。

照明部21从由保持部保持的孔板10的上方照射漫射光(例如白色光)而进行落射照明。对于照明部21的光源的形态没有特别的限定，例如能够使用点光源、面光源等。更具体而言，能够使用白色LED(Light Emitting Diode)光源等。另外，也可以在照明部21设置以使从光源照射的光扩散、成为面光源的扩散板。利用照明部21进行的照射通过以下方式进行，利用控制部23使该照明部21在XY平面上移动，使其配置在作为照射对象的任意的孔12上。

摄像部22配置于孔板10的下方，摄像部22的焦点与作为拍摄对象物的生物试样等存在的孔12的底面部13对准。通过控制部23使摄像部22在Z轴方向上下移动，能进行摄像部22的焦点调节。另外，通过来自控制部23的控制，能够使摄像部22与照明部21一起在XY平面上移动。由此，在拍摄任意的孔12时，能够使该孔12的中心位于照明部21和摄像部22的中心轴上。其结果，因为使照射光路和摄像光路一致并使照射条件恒定，所以能够良好地保持摄像条件。需要说明的是，作为摄像装置20，具体而言例如可举出倒置显微镜等。

此处，如图5所示地进行向孔板10的孔12注入液体状试样16。即，如该图所示，液体状试样16至少注入至其液面17到达周壁上部14a的程度。此时，液面17由于液体状试样的表面张力而浸润周壁部，其结果是，变成凹状的曲面从而形成弯月面。

通过由摄像装置20的照明部21从孔12的上方照射照射光，并由摄像部22接收从孔12内的液体状试样16以及底面部13透过来的光，从而进行液体状试样16的拍摄。此时，在因弯月面效应而凹面化的液面17中，到达周壁上部14a附近的周缘的照射光，通过折射进一步从孔12的中心呈放射状前进。但是，如果从孔12的底面部13观察，因为该液面17的周缘被阶梯部15遮挡，所以摄像部22能够在使该底面部13的周缘变得明亮的状态下进行拍摄。

此外，在注入到孔12中的液体状试样16的液面比阶梯部15的高度位置更低的情况下(在图5中以液面18表示。)，因为通过阶梯部15未能遮挡周壁上部14a附近的液面的周缘，所以在底面部13的周缘昏暗的状态下通过摄像部22进行拍摄。

另外，在本实施方式中，虽然也考虑了将照明部21设置于孔板10的下方并将摄像部22设置于该孔板10的上方、进行液体状试样16的拍摄的方法，但是存在如下所述的不良情况。即，虽然摄像部22与孔12的底面部13对焦并进行拍摄，但是，因为由液体状试样16的液面的凹状弯月面带来的镜片效果，有时导致拍摄的图像发生变形(失真)。因此，与从孔板10的下方拍摄的情况相比，有时会导致分析精度下降。另外，从防止杂物等混入的观点出发，通常，用能与孔12嵌合的盖、板密封件等封闭孔12的开口部分。但是，在液体状试样16例如是细胞的培养液且被保温在36℃左右的情况下，有时在盖等上会产生雾。在该情况下，还存在由摄像部22拍摄的图像不清晰的问题。由上所述，对于本实施方式的孔板10而言，优选的是，通过来自该孔板10上方的落射照明，从下方对注入于孔12内的液体状试样进行拍摄。

以下，对该发明优选的实施例进行详细的示例性说明。但是，除非有特别限定性的记载，否则本发明的范围不限于仅在下述实施例中记载的材料、使用量等。

(实施例1)

在本实施例中，作为孔板，使用了由丙烯酸树脂构成的下述规格的孔板。需要说明的是，作为孔，使用了周壁上部和周壁下部分别大致垂直于底面部而立起的孔。

周壁上部的内径：5.6mm

周壁下部的内径：5mm

阶梯部的倾斜角：0度

孔的容量：250μl

周壁下部的容量：50.04μl

阶梯部的高度位置：自底面部2.55mm

孔的深度(从底面部至开口的距离)：10.8mm

在前述孔板的孔中，滴入作为培养液的DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle’sMedium，达尔伯克改良伊格尔培养基)100μl，使用倒置显微镜拍摄孔底面部。将结果示于图6。

(实施例2)

在本实施例中，作为孔板，使用下述规格的孔板。除此以外，与实施例1同样地操作，用倒置显微镜对孔底面部进行拍摄。将结果示于图7。

周壁上部的内径：5.6mm

周壁下部的内径：5mm

阶梯部的倾斜角：45度

孔的容量：250μl

周壁下部的容量：50.04μl

阶梯部的高度位置：自底面部2.55mm

孔的深度(从底面部至开口的距离)：10.8mm

(比较例1)

在本比较例中，作为孔板，使用了下述规格的孔板，该孔板由聚苯乙烯树脂构成，并且未在孔的周壁部设置阶梯部。

周壁部的内径：5.6mm

孔的容量：266μl

孔的深度(从底面部至开口的距离)：10.8mm

在前述孔板的孔中，滴入DMEM 100μl，用前述倒置显微镜拍摄孔底面部。将结果示于图8。

(比较例2)

在本比较例中，将DMEM的滴入量变更为50μl。除此以外，与前述实施例1同样地操作，用倒置显微镜拍摄孔底面部。将结果示于图9。

(比较例3)

在本比较例中，作为孔板，使用了未在孔的周壁部设置阶梯部的下述规格的孔板。

周壁部的内径：5.6mm

孔的容量：266μl

孔的深度(从底面部至开口的距离)：10.8mm

在前述孔板的孔中，滴入DMEM 100μl，用前述倒置显微镜拍摄孔底面部。将结果示于图10。

(结果)

由图6和图7显而易见的是，在实施例1和2中，即使在孔底面部的周缘也能够在明亮的状态下进行拍摄，确认了可视性已加以改善。另一方面，如图8和10所示，在使用了以往的孔板的比较例1和3中，由于弯月面的影响，在整个拍摄范围的区域内产生暗处，难以进行充分的观察以及分析。另外，在虽然使用了与实施例1相同的孔板、但DMEM的滴入量变更为50μl的比较例2中，如图9所示，由于弯月面的影响，在孔底面部的周缘为昏暗的状态下进行了拍摄。

Claims (13)

1.一种孔板，其是在板上表面具有开口的孔的孔板，其中，

所述孔具有平坦的底面部和从该底面部的周缘向上方立起的周壁部；

所述周壁部在任意的高度位置沿周向具有阶梯部；

所述周壁部的位于所述阶梯部上方的周壁上部比位于所述阶梯部下方的周壁下部，横截面积更大；

所述阶梯部表示收纳在所述孔中的液体状试样的液面高度的下限。

2.如权利要求1所述的孔板，其中，在所述周壁部，所述阶梯部设置于使所述周壁下部的容量相对于所述孔的容量成为1/2以下的高度位置。

3.如权利要求1所述的孔板，其中，所述阶梯部具有对波长在可见光区域的光进行遮挡的遮光性。

4.如权利要求1所述的孔板，其中，所述周壁下部与所述底面部大致垂直、或朝向开口的方向呈锥状立起。

5.如权利要求1所述的孔板，其中，所述周壁上部与所述阶梯部大致垂直、或朝向开口的方向呈锥状立起。

6.如权利要求1所述的孔板，其中，所述阶梯部的倾斜面与水平面所成的倾斜角θ为0°以上且小于90°的范围。

7.一种孔板的使用方法，其是在板上表面具有开口的孔的孔板的使用方法，其中，

所述孔具备平坦的底面部和从该底面部的周缘向上方立起的周壁部；

所述周壁部在任意的高度位置沿周向具有阶梯部；

所述周壁部的位于所述阶梯部上方的周壁上部比位于所述阶梯部下方的周壁下部，横截面积更大；

所述阶梯部表示收纳在所述孔中的液体状试样的液面高度的下限；

在所述孔中注入所述液体状试样，使液面高于表示该液体状试样的液面高度的下限的阶梯部。

8.如权利要求7所述的孔板的使用方法，其中，从所述孔板的上方对注入了所述液体状试样的所述孔照射光，从所述孔板的下方对所述孔的底面部的液体状试样进行拍摄。

9.如权利要求7所述的孔板的使用方法，其中，在所述周壁部，所述阶梯部设置于使所述周壁下部的容量相对于所述孔的容量成为1/2以下的高度位置。

10.如权利要求7所述的孔板的使用方法，其中，所述阶梯部具有对波长在可见光区域的光进行遮挡的遮光性。

11.如权利要求7所述的孔板的使用方法，其中，所述周壁下部与所述底面部大致垂直、或朝向开口的方向呈锥状立起。

12.如权利要求7所述的孔板的使用方法，其中，所述周壁上部与所述阶梯部大致垂直、或朝向开口的方向呈锥状立起。

13.如权利要求7所述的孔板的使用方法，其中，所述阶梯部的倾斜面与水平面所成的倾斜角θ为0°以上且小于90°的范围。