CN107519232A - 一种提取米口袋总黄酮提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种米口袋总黄酮提取物及其提取方法，属于中药技术领域；该方法主要包括以下步骤：(1)米口袋药材的前处理；(2)酶解辅助微波法提取米口袋总黄酮；(3)大孔吸附树脂洗脱，真空干燥即得米口袋总黄酮提取物。本发明采用纤维素和果胶复合酶对米口袋在微波提取前进行酶解预处理，经处理后的米口袋再进行微波提取和大孔树脂纯化，提取纯化后的米口袋总黄酮含量达60％以上，提取率得到较大提高。本发明酶解、提取、纯化方法操作简单，生产成本降低，易于工业化使用和推广。
Description
技术领域
本发明属于天然产物分离领域，涉及一种提取米口袋总黄酮提取物及其制备方法。
背景技术
米口袋为豆科植物米口袋Gueldenstaedtia verna(Georgi)A.Bor.的干燥全草，夏、秋二季采挖。始载《本草纲目》。产于东北、华北、华东、陕西中南部、甘肃东部等地。米口袋味甘、苦，性寒，具有清热解毒的功效，主治痈肿疔疮、外耳道疖肿，阑尾炎。
米口袋化学成分的研究表明其含有黄酮萜类、挥发油、甾醇及有机酸等多种活性成分，其中黄酮类成分是其主要药效成分。药理研究表明米口袋具有抗菌、抗氧化、抗病毒、镇痛、抗炎等活性。
现有技术中，中国专利201621290486.8公开了一种米口袋循环萃取装置，采用多次循环蒸馏提取的技术，将米口袋进行多次新鲜提取液的浸泡提取，提取效果好，耗时短。史美荣采用超声波辅助法提取米口袋中总黄酮并对工艺进行优化。在单因素实验的基础上，确定料液比、超声温度、超声功率、超声时间4个因素的Box～benhnken的实验设计。以总黄酮的提取率为响应值，采用响应面法优化米口袋总黄酮的提取工艺，建立并分析各因素与指标值的数学模型。确定最佳工艺参数为：料液比1:40g/mL，超声温度45℃，超声功率300W，超声时间60min，总黄酮提取率理论值为8.08％，实际值为8.22％，相对标准偏差为0.33％(史美荣.响应面法优化米口袋总黄酮的超声提取工艺,中国农学通报,2017,33(23):129～137.)。
因此，为了更好地开发和利用米口袋，并为其相关产品的进一步开发提供物质基础，充分发挥药理作用，对米口袋总黄酮提取方法的研究一直是本领域技术人员值得探究的问题。本发明是通过酶解辅助微波法对米口袋总黄酮进行提取，再通过大孔树脂对其进行纯化，该方法简单、可行，为推进米口袋药用价值开发具有积极的现实意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种米口袋总黄酮提取物及其提取方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种米口袋总黄酮提取物及其提取方法，包括以下步骤：
(4)将米口袋干燥、粉碎，加入复合酶和缓冲液，进行酶解预处理，过滤，向滤渣中加入乙醇，微波提取，过滤，合并滤液；
(5)滤液减压浓缩，浓缩液上大孔树脂柱吸附，先用水洗脱树脂柱，再用乙醇洗脱树脂柱，收集洗脱液；
(6)洗脱液浓缩，真空干燥即得到米口袋总黄酮。
所述步骤(1)中的复合酶加入量为药材质量的1.3％～2.2％。
所述复合酶为纤维素酶:果胶酶为1:1～3:1。
所述步骤(1)中的缓冲液为醋酸-醋酸钠溶液，pH值为4.0～4.6。
所述步骤(1)中的酶解，酶解温度为40～60℃，酶解时间60～80min。
所述步骤(1)中乙醇浓度为60～80％(v/v)。
所述步骤(1)中微波提取，微波功率为380～420W；微波提取时间为4～7min。
所述步骤(2)中大孔树脂为D101大孔树脂。
一种米口袋总黄酮提取物及其提取方法，包括以下步骤：
(1)取米口袋药材干燥、粉碎成40～60目，得到米口袋粉末。称取米口袋粉末，按照药材质量比加入1.3～2.2％复合酶(纤维素酶:果胶酶＝1:1～3:1)，加入8～12倍量、pH值为4～4.6的醋酸-醋酸钠缓冲液，在酶解温度为40～60℃调节下酶解米口袋药材60～80min后，过滤，向滤渣中加入15～25倍量60～80％乙醇，在微波功率为380～420W条件下微波提取4～7min，过滤，合并滤液，滤液减压浓缩。
(2)将提取液浓缩至0.5～1.5g/ml，选用D101大孔树脂，上样体积与大孔树脂质量比值为8:1～12：1，湿法上样，上样吸附6～8h，先用4～8BV蒸馏水水洗，水洗速度为3～5BV/h，然后用3～5BV体积分数为40～70％乙醇洗脱，洗脱速度为3～5BV/h。
(3)将收集的乙醇洗脱液，浓缩，真空干燥，即可得到米口袋总黄酮提取物。
优选地，一种米口袋总黄酮的提取方法，具体包括以下步骤：
(1)将米口袋药材干燥、粉碎成40～60目，得到米口袋粉末。按照药材质量比加入0.78％复合酶(纤维素酶:果胶酶＝2:1)，加入10倍量、pH值为4.3的醋酸-醋酸钠缓冲液，在酶解温度为49℃调节下，酶解米口袋药材68min后，过滤，向滤渣中加入20倍量70％乙醇，在微波功率为400W条件下微波提取5min，过滤，合并滤液。
(2)滤液减压浓缩，将提取液浓缩至1.0g/ml，选用D101大孔树脂，上样体积与大孔树脂质量比值为10：1湿法上样，上样吸附7h，先用6BV蒸馏水水洗，水洗速度为4BV/h，然后用4BV 60％(v/v)的乙醇洗脱，洗脱速度为4BV/h，收集洗脱液；
(3)将收集的乙醇洗脱液，浓缩，真空干燥，即可得到米口袋总黄酮产品。
本发明的有益效果：
(1)本发明采用的是纤维素和果胶复合酶，这种多酶复合体系中一种酶的产物可以成为另一种酶的底物，从而使酶解作用更为顺利地进行。纤维素酶在提高纤维素、半纤维素分解的同时，可促进植物细胞壁的溶解使更多的植物细胞内溶物溶解出来并能将不易消化的大分子多糖、蛋白质和脂类降解成小分子物质；而半纤维素和果胶部分溶于水后会产生粘性溶液，添加果胶酶可协同纤维素酶降低粘度，增加内源酶的扩散，提高酶解效率。
(2)本发明利用生物酶降解原理，对米口袋在微波提取前进行酶解预处理，经处理后的米口袋再进行微波提取后，米口袋总黄酮的提取率得到较大提高。
(3)本发明结合大孔树脂纯化法，提取纯化的米口袋总黄酮含量达60％以上；本发明提取、纯化方法操作简单，生产成本降低，易于工业化使用和推广。
具体实施方式
下面结合实施例来对本发明进一步详细的描述，但要求保护的范围不仅局限于所作的描述。
实施例1
米口袋总黄酮提取步骤如下：
(1)取米口袋药材干燥、粉碎成50目，得到米口袋粉末。称取米口袋粉末50g，按照药材质量比加入0.78％复合酶(纤维素酶:果胶酶＝2:1)，加入10倍量、pH值为4.3的醋酸-醋酸钠缓冲液，在酶解温度为49℃调节下酶解米口袋药材68min后，过滤，向滤渣中加入20倍量70％乙醇，在微波功率为400W条件下微波提取5min，过滤，合并滤液，滤液减压浓缩。
(2)将提取液浓缩至1.0g/ml，选用D101大孔树脂，上样体积与大孔树脂质量比值为10：1湿法上样，上样吸附7h，先用6BV蒸馏水水洗，水洗速度为4BV/h，然后用4BV体积分数为60％乙醇洗脱，洗脱速度为4BV/h。
(3)将收集的乙醇洗脱液，浓缩，真空干燥，即可得到米口袋总黄酮纯度72％产品。
实施例2
米口袋总黄酮提取步骤如下：
(1)取米口袋药材干燥、粉碎成60目，得到米口袋粉末。称取米口袋粉末50g，按照药材质量比加入2.2％复合酶(纤维素酶:果胶酶＝3:1)，加入12倍量、pH值为4.6的醋酸-醋酸钠缓冲液，在酶解温度为60℃调节下酶解米口袋药材80min后，过滤，向滤渣中加入25倍量80％乙醇，在微波功率为420W条件下微波提取7min，过滤，合并滤液，滤液减压浓缩。
(2)将提取液浓缩至1.5g/ml，选用D101大孔树脂，上样体积与大孔树脂质量比值为12：1湿法上样，上样吸附8h，先用8BV蒸馏水水洗，水洗速度为5BV/h，然后用5BV体积分数为70％乙醇洗脱，洗脱速度为5BV/h。
(3)将收集的乙醇洗脱液，浓缩，真空干燥，即可得到米口袋总黄酮纯度70％产品。
实施例3
米口袋总黄酮提取步骤如下：
(1)取米口袋药材干燥、粉碎成40目，得到米口袋粉末。称取米口袋粉末50g，按照药材质量比加入1.3％复合酶(纤维素酶:果胶酶＝1:1)，加入8倍量、pH值为4的醋酸-醋酸钠缓冲液，在酶解温度为40℃调节下酶解米口袋药材60min后，过滤，向滤渣中加入15倍量60％乙醇，在微波功率为380W条件下微波提取4min，过滤，合并滤液，滤液减压浓缩。
(2)将提取液浓缩至0.5g/ml，选用D101大孔树脂，上样体积与大孔树脂质量比值为8：1湿法上样，上样吸附6h，先用4BV蒸馏水水洗，水洗速度为3BV/h，然后用3BV体积分数为40％乙醇洗脱，洗脱速度为3BV/h。
(3)将收集的乙醇洗脱液，浓缩，真空干燥，即可得到米口袋总黄酮纯度67％产品。
实施例4
米口袋总黄酮提取步骤如下：
(1)取米口袋药材干燥、粉碎成60目，得到米口袋粉末。称取米口袋粉末50g，按照药材质量比加入1.3％复合酶(纤维素酶:果胶酶＝3:1)，加入8倍量、pH值为4.6的醋酸-醋酸钠缓冲液，在酶解温度为40℃调节下酶解米口袋药材80min后，过滤，向滤渣中加入15倍量80％乙醇，在微波功率为380W条件下微波提取7min，过滤，合并滤液，滤液减压浓缩。
(2)将提取液浓缩至0.5g/ml，选用D101大孔树脂，上样体积与大孔树脂质量比值为12：1湿法上样，上样吸附6h，先用8BV蒸馏水水洗，水洗速度为3BV/h，然后用5BV体积分数为40％乙醇洗脱，洗脱速度为5BV/h。
(3)将收集的乙醇洗脱液，浓缩，真空干燥，即可得到米口袋总黄酮纯度68％产品。
实施例5
米口袋总黄酮提取步骤如下：
(1)取米口袋药材干燥、粉碎成40目，得到米口袋粉末。称取米口袋粉末50g，按照药材质量比加入2.2％复合酶(纤维素酶:果胶酶＝1:1)，加入12倍量、pH值为4的醋酸-醋酸钠缓冲液，在酶解温度为60℃调节下酶解米口袋药材60min后，过滤，向滤渣中加入25倍量60％乙醇，在微波功率为420W条件下微波提取4min，过滤，合并滤液，滤液减压浓缩。
(2)将提取液浓缩至1.5g/ml，选用D101大孔树脂，上样体积与大孔树脂质量比值为8：1湿法上样，上样吸附8h，先用4BV蒸馏水水洗，水洗速度为5BV/h，然后用3BV体积分数为70％乙醇洗脱，洗脱速度为3BV/h。
(3)将收集的乙醇洗脱液，浓缩，真空干燥，即可得到米口袋总黄酮纯度70％产品。
Claims (10)
1.一种米口袋总黄酮的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将米口袋干燥、粉碎，加入复合酶和缓冲液，进行酶解预处理，过滤，向滤渣中加入乙醇，微波提取，过滤，合并滤液；
(2)滤液减压浓缩，浓缩液上大孔树脂柱吸附，先用水洗脱树脂柱，再用乙醇洗脱树脂柱，收集洗脱液；
(3)洗脱液浓缩，真空干燥即得到米口袋总黄酮。
2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中的复合酶加入量为药材质量的1.3％～2.2％。
3.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述复合酶为纤维素酶和果胶酶的组合物。
4.如权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述纤维素酶:果胶酶为1:1～3:1。
5.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中的缓冲液为醋酸-醋酸钠溶液，pH值为4.0～4.6。
6.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中的酶解，酶解温度为40～60℃，酶解时间60～80min。
7.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中乙醇浓度为60～80％(v/v)。
8.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中微波提取，微波功率为380～420W；微波提取时间为4～7min。
9.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中大孔树脂为D101大孔树脂。
10.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取米口袋药材干燥、粉碎成40～60目，得到米口袋粉末。称取米口袋粉末，按照药材质量比加入1.3～2.2％复合酶(纤维素酶:果胶酶＝1:1～3:1)，加入8～12倍量、pH值为4～4.6的醋酸-醋酸钠缓冲液，在酶解温度为40～60℃调节下酶解米口袋药材60～80min后，过滤，向滤渣中加入15～25倍量60～80％乙醇，在微波功率为380～420W条件下微波提取4～7min，过滤，合并滤液，滤液减压浓缩；
(2)将提取液浓缩至0.5～1.5g/ml，选用D101大孔树脂，上样体积与大孔树脂质量比值为8:1～12：1，湿法上样，上样吸附6～8h，先用4～8BV蒸馏水水洗，水洗速度为3～5BV/h，然后用3～5BV体积分数为40～70％乙醇洗脱，洗脱速度为3～5BV/h；
(3)将收集的乙醇洗脱液，浓缩，真空干燥，即可得到米口袋总黄酮提取物。
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