CN107421939A - 一种快速定量检测抗菌药物敏感性的试剂及其应用方法 - Google Patents
一种快速定量检测抗菌药物敏感性的试剂及其应用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107421939A CN107421939A CN201710875113.XA CN201710875113A CN107421939A CN 107421939 A CN107421939 A CN 107421939A CN 201710875113 A CN201710875113 A CN 201710875113A CN 107421939 A CN107421939 A CN 107421939A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- detection
- reagent
- antibacterials
- bacterium
- atp
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 91
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 title claims abstract description 65
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 54
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 title claims abstract description 13
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 50
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 29
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000005336 cracking Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims description 55
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 39
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 14
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 claims description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 8
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 claims description 7
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 claims description 6
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 claims description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 claims description 4
- 229960003260 chlorhexidine Drugs 0.000 claims description 4
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 3
- GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N Chlorhexidine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1NC(N)=NC(N)=NCCCCCCN=C(N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 2
- SWLVFNYSXGMGBS-UHFFFAOYSA-N ammonium bromide Chemical compound [NH4+].[Br-] SWLVFNYSXGMGBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229940077484 ammonium bromide Drugs 0.000 claims 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 claims 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 22
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 6
- 239000011148 porous material Substances 0.000 abstract description 5
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 11
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 9
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 5
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229960001139 cefazolin Drugs 0.000 description 4
- MLYYVTUWGNIJIB-BXKDBHETSA-N cefazolin Chemical compound S1C(C)=NN=C1SCC1=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](NC(=O)CN3N=NN=C3)[C@H]2SC1 MLYYVTUWGNIJIB-BXKDBHETSA-N 0.000 description 4
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 4
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 3
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 3
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 238000002815 broth microdilution Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 3
- DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L magnesium dichloride hexahydrate Chemical class O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[Cl-].[Cl-] DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 238000005142 microbroth dilution method Methods 0.000 description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J sodium diphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 3
- PUZPDOWCWNUUKD-UHFFFAOYSA-M sodium fluoride Chemical class [F-].[Na+] PUZPDOWCWNUUKD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 235000019818 tetrasodium diphosphate Nutrition 0.000 description 3
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 3
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 2
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 2
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000255964 Pieridae Species 0.000 description 2
- GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N Piperazine Chemical compound C1CNCCN1 GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002152 chlorhexidine acetate Drugs 0.000 description 2
- -1 chlorhexidine acetates Chemical class 0.000 description 2
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000205 computational method Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- XZUAPPXGIFNDRA-UHFFFAOYSA-N ethane-1,2-diamine;hydrate Chemical compound O.NCCN XZUAPPXGIFNDRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002796 luminescence method Methods 0.000 description 2
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- MCSINKKTEDDPNK-UHFFFAOYSA-N propyl propionate Chemical compound CCCOC(=O)CC MCSINKKTEDDPNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000013024 sodium fluoride Nutrition 0.000 description 2
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- UEUXEKPTXMALOB-UHFFFAOYSA-J tetrasodium;2-[2-[bis(carboxylatomethyl)amino]ethyl-(carboxylatomethyl)amino]acetate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC([O-])=O)CC([O-])=O UEUXEKPTXMALOB-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 2
- FFRBMBIXVSCUFS-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitro-1-naphthol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C2=C1 FFRBMBIXVSCUFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IBOFVQJTBBUKMU-UHFFFAOYSA-N 4,4'-methylene-bis-(2-chloroaniline) Chemical compound C1=C(Cl)C(N)=CC=C1CC1=CC=C(N)C(Cl)=C1 IBOFVQJTBBUKMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001478240 Coccus Species 0.000 description 1
- 101100202428 Neopyropia yezoensis atps gene Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 description 1
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 description 1
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 description 1
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 description 1
- LPNITZFOZWXKMB-UHFFFAOYSA-N acetic acid;molecular chlorine Chemical compound ClCl.CC(O)=O LPNITZFOZWXKMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 229960003405 ciprofloxacin Drugs 0.000 description 1
- WQPDQJCBHQPNCZ-UHFFFAOYSA-N cyclohexa-2,4-dien-1-one Chemical compound O=C1CC=CC=C1 WQPDQJCBHQPNCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000014670 detection of bacterium Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 229960001484 edetic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000003682 fluorination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 235000011147 magnesium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 229960004023 minocycline Drugs 0.000 description 1
- DYKFCLLONBREIL-KVUCHLLUSA-N minocycline Chemical compound C([C@H]1C2)C3=C(N(C)C)C=CC(O)=C3C(=O)C1=C(O)[C@@]1(O)[C@@H]2[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C1=O DYKFCLLONBREIL-KVUCHLLUSA-N 0.000 description 1
- 229960000808 netilmicin Drugs 0.000 description 1
- ZBGPYVZLYBDXKO-HILBYHGXSA-N netilmycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](N)C[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O[C@@H]1[C@]([C@H](NC)[C@@H](O)CO1)(C)O)NCC)[C@H]1OC(CN)=CC[C@H]1N ZBGPYVZLYBDXKO-HILBYHGXSA-N 0.000 description 1
- 229960001699 ofloxacin Drugs 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229960002292 piperacillin Drugs 0.000 description 1
- IVBHGBMCVLDMKU-GXNBUGAJSA-N piperacillin Chemical compound O=C1C(=O)N(CC)CCN1C(=O)N[C@H](C=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2[C@@H](C(O)=O)C(C)(C)S[C@@H]21 IVBHGBMCVLDMKU-GXNBUGAJSA-N 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011896 sensitive detection Methods 0.000 description 1
- 239000011775 sodium fluoride Substances 0.000 description 1
- 229940048086 sodium pyrophosphate Drugs 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000001577 tetrasodium phosphonato phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004879 turbidimetry Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/645—Specially adapted constructive features of fluorimeters
- G01N21/6452—Individual samples arranged in a regular 2D-array, e.g. multiwell plates
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
- G01N21/763—Bioluminescence
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
- G01N33/56916—Enterobacteria, e.g. shigella, salmonella, klebsiella, serratia
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
- G01N33/56938—Staphylococcus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/94—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving narcotics or drugs or pharmaceuticals, neurotransmitters or associated receptors
- G01N33/9446—Antibacterials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/24—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
- G01N2333/245—Escherichia (G)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/305—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Micrococcaceae (F)
- G01N2333/31—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Micrococcaceae (F) from Staphylococcus (G)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
一种快速定量检测抗菌药物敏感性的试剂盒，具有可直接检测细菌ATP的试剂；一次加入所述试剂后一步实现细菌的裂解和ATP的释放与检测。本发明的试剂盒2小时便可得到药敏实验结果。对硬件要求低，可以使用任何微孔板式发光检测仪，而且不需要使用自动进样系统。本发明方法操作简便，一步加样操作，不需要分别注入裂解液和ATP检测试剂。可以确定MIC值，并同时报告耐药与否。
Description
技术领域：
本发明涉及一种快速检测病原微生物对抗菌药物敏感性的试剂及其应用方法。
背景技术：
目前临床微生物实验室使用的常规的抗菌药物敏感性试验(AntimicrobialSusceptibility Tests，AST)的方法主要有纸片扩散法、稀释法、E-test法等。这些方法由于通过肉眼观察微生物生长情况进行结果评判，往往必须培养16个小时以上才能报告药敏结果。
中国专利《快速药敏检测试剂盒》(ZL201120469811)采用稀释法进行药敏试验，通过显色检测方法缩短了试验用时，但由于显色检测方法的灵敏度较低，需9-11小时才能得到药敏结果。
尽管自动化仪器极大地提高了药敏试验的速度，但仍需要至少4小时得到药敏结果。而且这些仪器成本均较高，基层医院和相关临床科室使用受限。
例如Biomerieux的VITEK 2自动化仪器，最快也需要4小时得到药敏结果。其它临床检测的自动化仪器还包括：BD的Phoenix-100全自动细菌鉴定/药敏系统、Beckman-Coulter的MicroScan微生物鉴定与药敏分析系统和Thermo Scientific的SensititreARIS 2X ID/AST系统等。这些仪器普遍采用比浊法观测细菌数量的动力学变化，受限于比浊法的低灵敏度，药敏试验所需的菌液浓度较大，且需要培养4h以上。
吴潇等采用三磷酸腺苷-生物发光法建立了一种快速检测细菌抗生素药敏的方法，以微量肉汤稀释法为基础，采用ATP生物发光法检测培养一段时间后的细菌，通过计算与空白比较的发光率来判断细菌的耐药与否。由于ATP生物发光检测技术灵敏度高，可以缩短培养用时，在4h内判读结果，且无需高浓度菌液(ATP生物发光法检测细菌药敏技术的建立及应用，《浙江临床医学》2015年10月第17卷第10期：1680)。
但上述方法仍有如下缺点：
一是对检测仪的硬件配置有较高要求：
必须使用基层医疗机构较少配备的微孔板式发光检测仪，而且需要额外配备自动进样系统。
二是操作较繁琐，因此该技术较难在基层医院使用：
1)需要通过自动进样系统先后分别注入两种试剂
因为该方法需要分别加入两种试剂：细菌裂解液和ATP检测试剂，通过微孔板发光检测仪的自动进样系统先后注入裂解液和ATP检测试剂；需要至少配备有两个自动进样系统。
2)采用的是闪光型发光试剂，必须在加入ATP检测试剂后立刻检测发光值
闪光型发光试剂的发光持续时间较短，发光强度随时间衰减比较快，必须在加入ATP检测试剂后“立刻检测发光值”，否则影响检测结果。
三是无法满足MIC(最低抑菌浓度)测定的需求：
该方法中设置的抗菌药物的浓度梯度少，无法测定MIC(最低抑菌浓度)。因此该方法只是定性报告敏感性，并没有提供确切的MIC值。而定量结果MIC值对于指导临床医生用药则更为重要。
因此，需要开发一种对设备要求较低，而且能够测定MIC(最低抑菌浓度)值的快速的抗菌药物敏感试验的方法和试剂盒，便于各级医院和相关临床科室及时检测和监测药敏结果，为抗菌治疗提供简单、快速的解决方案。
发明内容
本发明的目的是研制一种快速检测抗菌药物敏感性的试剂盒，不仅能够在更短的时间内给出药敏结果，并提供确切的MIC(最低抑菌浓度)值，而且对硬件要求低。
本发明提供了一种新的快速检测抗菌药物敏感性的试剂盒，该试剂盒以微量肉汤稀释法为基础，包括有抗菌药物板、培养基和细菌ATP检测试剂。应用该试剂盒时，将待测细菌用试剂盒提供的培养基调至合适的浓度加入到抗菌药物板中，培养2小时后，将细菌ATP检测试剂加入到抗菌药物板中，而后将抗菌药物板放入多功能读板仪中检测发光强度，根据相对发光强度确定MIC值，并报告敏感、中介或耐药。
本发明提供了一种快速检测抗菌药物敏感性的试剂盒，其特征是，：
1)具有可直接检测细菌ATP的试剂：
所述试剂是含有细菌ATP释放剂和生物发光物质的检测试剂，可以一步实现细菌的裂解和ATP的释放与检测。
所述生物发光物质是辉光型生物发光物质；
辉光型生物发光物质的主要成分虽然也是萤光素酶和D-萤光素，但二者的比例不同，这两种物质的质量比是1:4至1:6，优选为1:4.7。
优选的细菌ATP检测试剂含有细菌ATP释放剂、缓冲液、萤光素酶、D-萤光素和稳定剂等。
其中，所述细菌ATP释放剂优选为表面活性剂，选自十六烷基三甲基溴化铵、苯扎氯铵、氯己定和曲拉通中的一种或多种。
优选的细菌ATP检测试剂是含有醋酸氯己定(0.15％-1.20％)、曲拉通X-100(1.5％-2.5％)、萤光素酶(0.02％-0.05％)和D-萤光素(0.1％-0.2％)的水溶液。所述百分比是质量比。
本发明的一个实例中所用的细菌ATP检测试剂由以下成分组成：N-2-羟乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸(150-250mM)、十六烷基三甲基溴化铵(0.06％-0.10％)、醋酸氯己定(0.15％-1.2％)、曲拉通(1.5％-2.5％)、氯化镁(0.3％-0.5％)、乙二胺四乙酸(0.7％-1.0％)、氟化钠(0.05％-0.1％)、焦磷酸钠(0.01％-0.02％)、萤光素酶(0.02％-0.05％)、D-萤光素(0.1％-0.2％)和水。
本发明的细菌ATP检测试剂可以一步实现现有技术中细菌裂解液和ATP检测试剂两种试剂的功能。检测时，不需要先注入裂解液，再注入ATP检测试剂，不仅可以减少操作步骤，也不需要配置自动进样系统。
2)具有系列浓度梯度的抗菌药物板
本发明的抗菌药物板中具有系列浓度梯度的抗菌药物，所述系列浓度梯度是每种药物具有十个或以上的浓度。
对于不同的检测药物的具体浓度值根据实际需要设定。比如，参考CLSI文件设定，浓度范围包括CLSI文件所列的解释折点，且包含质控菌的值，可以满足MIC测定的需求。
抗菌药物的具体浓度梯度因为抗菌药物的性质而存在比较大的差异，例如哌拉西林的浓度为12800、6400、3200、1600、800、400、200、100、50和25μg/mL，而环丙沙星的浓度为200、100、50、25、12.5、6.25、3.12、1.56、0.78和0.39μg/mL。
3)可使用任何具有发光检测功能的仪器进行检测
使用任何具有发光检测功能的仪器都可以进行检测，得到所需的结果。而且不需要额外配备自动进样装置。
如，不仅可以使用现有技术使用的微孔板式发光检测仪，还可以用基层医疗机构都有配备的多功能读板仪(见本发明实施例)，无论使用何种仪器都不需要额外配备自动进样系统。
由于本发明的细菌ATP检测试剂是辉光型发光试剂，加入试剂后发光强度相对稳定且能持续一段时间，不需要加入试剂后立即检测，在使用时该检测试剂加入到抗菌药物板后，再将抗菌药物板放入到仪器中检测，就可以不需要自动进样系统。
多功能读板仪是多数基层医疗机构和相关临床科室都有配备的仪器。而微孔板式发光检测仪是专用化仪器，在上述机构的配置率比较低。
而对比文件方法并没有提示使用多功能读板仪可以实现其方法所要求的检测精度。
本发明的试剂盒提供的抗菌药物板中可以根据实际需要设置多种抗菌药物；抗菌药物的种类根据待测菌的种类变化，每种抗菌药物包括有多个浓度，抗菌药物的形态根据不同药物的具体情况而定。条件允许的情况下，优选的药物形态是固着在孔板底部的干燥粉状或颗粒状，便于试剂盒的保管运输。
本发明的试剂盒提供的培养基是参照CLSI(美国临床和实验室标准协会)的标准，根据待测菌的种类变化而定，可选用调节阳离子的Mueller-Hinton肉汤(CAMHB)、RPMI-1640肉汤培养基或其它药敏试验所需培养基。
本发明的试剂盒的应用方法是：将待测细菌加入到抗菌药物板中培养2h后，将所述细菌ATP检测试剂加入到抗菌药物板中，然后将整个抗菌药物板放入多功能读板仪中检测发光强度，计算抗菌药物孔相对无抗菌药物的阳性孔的相对发光强度。
上述加入到抗菌药物板中的待测细菌是用培养基调至所需浓度的待测细菌，所述所需浓度，根据实际需要而定，如参照CLSI标准确定合适的浓度(非苛养菌的浓度为约5×105CFU/mL)。
相对发光强度的计算方法如下：
相对发光强度＝(抗菌药物孔发光强度/阳性孔发光强度)×100％
从相对发光强度≤80％的最小药物浓度得到该药物的MIC值(最低抑菌浓度)，同时参照CLSI标准获得耐药与否的结论。根据CLSI提供的折点浓度，当MIC≤敏感折点时，待测菌对该抗菌药物敏感；当MIC≥耐药折点时，待测菌对抗菌药物耐药；当MIC介于两个折点之间时，待测菌对该抗菌药物的敏感度为中介。
采用本发明的试剂盒分别检测了大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌对30种不同的抗菌药物的敏感性；同时分别检测了10株肠杆菌对氨苄西林和头孢唑啉，10株葡萄球菌对红霉素和青霉素的敏感性。以上的检测都可以在2h内报告MIC值，且与CLSI的标准方法报告的值相比都在CLSI标准允许的误差范围内。
本发明的试剂盒不仅可以定量检测，也可以定性检测。
实际应用中，如果只需要快速地得知抗菌药物耐药与否的结论，而不需要获得MIC值的情况下，用本发明的试剂盒操作更为简便：只使用抗菌药物板的阴性孔、阳性孔和抗菌药物折点浓度孔(包括敏感折点和耐药折点)，其余的操作与上述定量检测时一致。
具体操作方法是：将待测细菌加入到抗菌药物板中培养2h后，将所述细菌ATP检测试剂加入到抗菌药物板中，然后将抗菌药物板放入多功能读板仪中检测对应孔的发光强度，计算抗菌药物孔相对无抗菌药物的阳性孔的相对发光强度。抗菌药物折点浓度孔参照CLSI标准确定，不同的微生物以及抗菌药物存在比较大的差异。例如检测肠杆菌科对氨苄西林的敏感性时选取阴性孔、阳性孔、400μg/mL(敏感折点)和1600μg/mL(耐药折点)的孔；检测肠杆菌科对头孢唑啉的敏感性时选取阴性孔、阳性孔、100μg/mL(敏感折点)和400μg/mL(耐药折点)的孔。
相对发光强度的计算方法如下：
相对发光强度＝(抗菌药物孔发光强度/阳性孔发光强度)×100％
当敏感折点和耐药折点浓度的相对发光强度都≤80％，则待测微生物对该抗菌药物敏感；当敏感折点浓度的相对发光强度＞80％，而耐药折点浓度的相对发光强度≤80％，则待测微生物对该抗菌药物敏感程度中介；当敏感折点和耐药折点浓度的相对发光强度都＞80％，则待测微生物对该抗菌药物耐药。
本发明的优点是：
1、更快速得到药敏实验结果
与对比文件相比，时间节约了一半。2小时便可得到药敏实验结果。
2、硬件要求低，可满足基层医院和相关临床科室的需要
可以使用微孔板式发光检测仪或常用的具有发光检测功能的多功能读板仪进行监测，不需要使用自动进样系统。
3、操作简便
一步加样操作，不需要分别注入裂解液和ATP检测试剂。
4、可以确定MIC值，并同时报告耐药与否
并不是仅仅定性确定药敏结果，而是得到MIC值，可以帮助临床医生适时选择合适的药物，及早避免产生或加重细菌的耐药。
附图说明：
图1不同数量的大肠埃希氏菌检测的发光值；
图2不同数量的金黄色葡萄球菌检测的发光值。
具体实施方式
以下实例仅用于说明和解释本发明，并不能限定本发明。本领域人员根据本发明的原理和方法用其它不同的药物、细菌和ATP检测试剂均有可能达到本发明的效果。
实施例1配制细菌ATP检测试剂
按照以下步骤配制细菌ATP检测试剂：
(1)使用新鲜制备的高纯水配制100mL 150-250mM的N-2-羟乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸(HEPES)溶液；加入0.15-1.20g醋酸氯己定，1.5-2.5mL曲拉通X-100(Triton X-100)，0.3-0.5g六水合氯化镁，0.7-1.0g二水合乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)；使用1M的氢氧化钠调节溶液pH为7.5后，使用0.22μm的滤膜过滤除菌；加入20-50mg萤光素酶(Sigma)和100-200mg D-萤光素(Sigma)，溶解，-20℃保存。
或(2)使用新鲜制备的高纯水配制100mL 150-250mM的N-2-羟乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸(HEPES)溶液；加入0.06-0.10g十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)，0.15-1.20g醋酸氯己定，1.5-2.5mL曲拉通X-100(Triton X-100)，0.3-0.5g六水合氯化镁，0.7-1.0g二水合乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)，0.05-0.10g氟化钠和0.01-0.02g焦磷酸钠溶解；使用1M的氢氧化钠调节溶液pH为7.5后，使用0.22μm的滤膜过滤除菌；加入20-50mg萤光素酶(Sigma)和100-200mg D-萤光素(Sigma)，溶解，-20℃保存。
又或(3)使用新鲜制备的高纯水配制100mL 200mM的N-2-羟乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸(HEPES)溶液；加入0.08g十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)，0.16g醋酸氯己定，1mL曲拉通X-100(Triton X-100)，0.4g六水合氯化镁，0.86g二水合乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)，0.08g氟化钠和0.01g焦磷酸钠溶解；使用1M的氢氧化钠调节溶液pH为7.5后，使用0.22μm的滤膜过滤除菌；加入35.8mg萤光素酶(Sigma)和168mg D-萤光素(Sigma)，溶解，-20℃保存。
实施例2细菌ATP检测试剂检测细菌
为了考察细菌ATP检测试剂的性能，复苏大肠埃希氏菌(ATCC 25922)和金黄色葡萄球菌(ATCC 29213)于TSA平板培养基上，37℃培养18-24h。用CAMHB肉汤将两种菌分别稀释成一系列浓度，移取一定体积的稀释菌液到空白多孔板中，加入一定体积的实施例1中配制的细菌ATP检测试剂，放入多功能读板仪(PerkinElmer)中，检测各孔的发光值，每个浓度重复三个孔。
表1和表2分别是检测不同数量的大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌的发光值，图1和图2所示的是检测的发光强度与细菌数量之间的关系。从图中可以看到，在很大的范围内发光强度与细菌数成正相关性。考虑到背景及其标准偏差，发光法检测大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌的最低检测限分别可以达到25CFU和20CFU。该结果表明配制的细菌ATP检测试剂可以应用于细菌的检测，且具有非常高的检测灵敏度，可以检测非常低数量的细菌。
表1检测不同数量大肠埃希氏菌的发光值
表2检测不同数量金黄色葡萄球菌的发光值
| 细菌数(CFU) | 发光强度(RLU) |
| 0 | 95.3±20.8 |
| 20 | 464.7±56.1 |
| 200 | 1472.3±167.7 |
| 2000 | 13032.0±1926.1 |
| 20000 | 122109.3±2550.2 |
| 200000 | 1552810.0±78042.5 |
实施例3检测抗生素作用后细菌数量
为了检测抗生素作用2h后细菌数量的变化，复苏大肠埃希氏菌(ATCC 25922)和金黄色葡萄球菌(ATCC 29213)于TSA平板培养基上，37℃培养18-24h。在96孔板中以1号列作为阴性对照，6号列作为阳性对照；A行是头孢唑啉，B和E行是哌拉西林，C和G行是奈替米星，D行是左氧氟沙星，F行是米诺环素。在孔板的1到6号列各孔均加入50μL的CAMHB肉汤，将抗生素使用CAMHB肉汤稀释到所需浓度(头孢唑啉4μg/mL，哌拉西林16μg/mL，奈替米星2μg/mL，左氧氟沙星0.125μg/mL，米诺环素1μg/mL)，在2号列加入50μL上述浓度的抗生素稀释液到对应的行中，采用逐级倍比稀释的方法稀释抗生素至3-5号列，5号列多余的50μL溶液去掉。从培养的琼脂平皿中挑选几个菌落直接在肉汤中制成0.5麦氏单位浊度的菌悬液，并进一步使用肉汤稀释150倍；A-D行加入大肠埃希氏菌稀释液，E-G行加入金黄色葡萄球菌稀释液，在1号列加入50μL肉汤，在2-6号列分别加入50μL的稀释菌液。37℃培养2h后，在各孔加入100μL的细菌ATP检测试剂，放入多功能读板仪中，记录各孔的发光值。实验重复3块多孔板，对数据进行处理。
表3是不同浓度抗生素作用2h后检测的相对发光强度，由于发光强度与细菌数量之间的正相关性，相对发光强度的变化反映了细菌数量的变化。抗生素浓度增大，相对发光强度降低，则可以认为细菌的数量的降低，这一结果表明，抗生素作用2h后的细菌数量的变化是可以通过发光法检测出来的，同时表明使用本发明的细菌ATP检测试剂有望在2h内报告药敏结果。
表3检测不同浓度抗生素作用后细菌的相对发光强度
实施例4抗菌药物敏感性快速检测试剂盒的制备
包含如下：
1)抗菌药物板：
制备方法：384孔板中，1号列为阴性对照，24号列为阳性对照，2-11号列和14-23号列是抗生素列。将头孢唑啉配成3200、1600、800、400、200、100、50、25、12.5、6.25μg/mL的浓度，分别加入到A行的2-11号孔，每孔0.5μL。将苯唑西林配成1600、800、400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125μg/mL的浓度，分别加入到A行的14-23号孔，每孔0.5μL。类似地将其它浓度的抗菌药物加入到对应的孔中，最后负压干燥。
2)10mL细菌ATP检测试剂一瓶(成分如前述)。
3)20mL的CAMHB肉汤(或其他肉汤，依据检测菌的不同而配备不同培养基)一瓶。
实施例5试剂盒应用于检测多种抗菌药物的MIC值
为了考察试剂盒应用于检测多种抗菌药物的MIC值，复苏大肠埃希氏菌(CMCC44103)和金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)于TSA平板培养基上，37℃培养18-24h。使用抗菌药物敏感性快速检测试剂盒进行快速检测MIC值：从培养的琼脂平皿中挑选几个菌落直接在CAMHB肉汤中制成0.5麦氏单位浊度的菌悬液，并进一步使用肉汤稀释300倍；在抗菌药物板中，阴性列加入25μL肉汤，在抗菌药物列和阳性列分别加入25μL的稀释菌液；37℃培养2h后，在各孔加入25μL的细菌ATP检测试剂，放入多功能读板仪中，记录各孔的发光值；对数据进行处理，以相对发光强度≤80％的最小浓度确定为检测MIC值。同时采用微量肉汤稀释法进行实验，确定标准MIC值。
表4所示的是试剂盒检测多种抗生素对细菌MIC值与标准方法检测的MIC的比较。结果表明，试剂盒检测法与标准法的MIC值多数相同，虽然偶尔出现结果差一个倍比梯度的情况，但标准方法的方法学允许误差是偏差一个倍比梯度，因此可以说试剂盒检测法的结果与稀释法是一致的。本发明的试剂盒是可以应用于检测常见的多种抗生素的MIC值的。
表4试剂盒检测法与标准法测定的MIC结果(μg/mL)
实施例6试剂盒应用于检测多株菌的MIC值
为了考察试剂盒应用于检测多株菌的情况，复苏实验菌株于TSA平板培养基上，37℃培养18-24h。使用抗菌药物敏感性快速检测试剂盒进行快速检测MIC值：从培养的琼脂平皿中挑选几个菌落直接在CAMHB肉汤中制成0.5麦氏单位浊度的菌悬液，并进一步使用肉汤稀释300倍；在抗菌药物板中，阴性列加入25μL肉汤，在抗菌药物列和阳性列分别加入25μL的稀释菌液；37℃培养2h后，在各孔加入25μL的细菌ATP检测试剂，放入多功能读板仪中，记录各孔的发光值；对数据进行处理，以相对发光强度≤80％的最小浓度为确定检测MIC值。同时采用微量肉汤稀释法进行实验，确定标准MIC值。
表5和表6分别是采用试剂盒检测肠杆菌和葡萄球菌的MIC值及与标准方法的比较。检测结果表明，试剂盒检测法与标准法的MIC值多数相同，虽然偶尔出现结果差一个倍比梯度的情况，但标准方法的方法学允许误差是偏差一个倍比梯度，因此可以说试剂盒检测法的结果与稀释法是一致的。本发明的试剂盒可以适用于多株菌的MIC值的测定。
表5试剂盒检测法与标准法测定的MIC结果(μg/mL)
表6试剂盒检测法与标准法测定的MIC结果(μg/mL)
Claims (10)
1.一种快速定量检测抗菌药物敏感性的试剂盒，其特征是，具有可直接检测细菌ATP的试剂；所述直接检测，是一次加入所述试剂后一步实现细菌的裂解和ATP的释放与检测。
2.权利要求1所述的试剂盒，其特征是，还含有具有系列浓度梯度的抗菌药物板，所述系列浓度梯度是每种药物具有十个或以上的浓度，且所述药物固着于孔板底部。
3.权利要求1所述的试剂盒，其特征是，可使用任何具有发光检测功能的仪器进行检测，且不需要配备自动进样装置。
4.权利要求1所述的试剂盒，所述试剂是含有细菌ATP释放剂和辉光型生物发光物质的检测试剂。
5.权利要求4所述的试剂盒，所述细菌ATP释放剂为表面活性剂，选自十六烷基三甲基溴化铵、苯扎氯铵、氯己定和曲拉通中的一种或多种；
所述辉光型生物发光物质是含萤光素酶、D-萤光素的物质，特征是：萤光素酶与D-萤光素的质量比是1:4～6。
6.权利要求5所述的试剂盒，萤光素酶与D-萤光素的质量比是1:4.7。
7.权利要求1所述的试剂盒的使用方法，其特征是：将待测细菌加入到抗菌药物板中培养后，加入所述可直接检测细菌ATP的检测试剂，将整个抗菌药物板放入检测仪中检测各孔的发光强度，然后计算抗菌药物孔相对无抗菌药物的阳性孔的相对发光强度；
其特征是：
1)一步加样操作，不需要先注入裂解液；
2)不要求加入试剂后立即检测；
3)不需要自动进样设备；
4)培养2小时后获得结果。
8.权利要求7所述的使用方法，所述检测仪是任何具有发光检测功能的仪器。
9.权利要求7所述的使用方法，当只需要定性获得抗菌药物耐药与否的结论时，所用抗菌药物板不需要具有系列浓度梯度，只有抗菌药物折点浓度；对比阴性孔、阳性孔和抗菌药物折点浓度孔的发光强度即可，其余操作与权利要求7的方法一致；所述抗菌药物折点是敏感折点和耐药折点两个浓度。
10.一种快速定量检测抗菌药物敏感性的方法，其特征是，使用可直接检测细菌ATP的试剂；所述直接检测，是一次加入所述试剂后一步实现细菌的裂解和ATP的释放与检测。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710875113.XA CN107421939A (zh) | 2017-09-25 | 2017-09-25 | 一种快速定量检测抗菌药物敏感性的试剂及其应用方法 |
| PCT/CN2018/102508 WO2019056926A1 (zh) | 2017-09-25 | 2018-08-27 | 一种快速定量检测抗菌药物敏感性的试剂及其应用方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710875113.XA CN107421939A (zh) | 2017-09-25 | 2017-09-25 | 一种快速定量检测抗菌药物敏感性的试剂及其应用方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107421939A true CN107421939A (zh) | 2017-12-01 |
Family
ID=60435855
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710875113.XA Pending CN107421939A (zh) | 2017-09-25 | 2017-09-25 | 一种快速定量检测抗菌药物敏感性的试剂及其应用方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107421939A (zh) |
| WO (1) | WO2019056926A1 (zh) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019056926A1 (zh) * | 2017-09-25 | 2019-03-28 | 江苏中新医药有限公司 | 一种快速定量检测抗菌药物敏感性的试剂及其应用方法 |
| CN110699421A (zh) * | 2019-11-12 | 2020-01-17 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种快速检测菌株耐药表型的方法 |
| CN110904185A (zh) * | 2019-12-25 | 2020-03-24 | 武汉市农业科学院 | 一种基于碘硝基氯化四氮唑显色的鸭致病菌药敏快速检测试剂盒 |
| CN110964781A (zh) * | 2019-12-25 | 2020-04-07 | 武汉市农业科学院 | 一种基于atp生物发光的鸭致病菌药敏快速检测试剂盒 |
| CN111705107A (zh) * | 2020-07-13 | 2020-09-25 | 浙江工业大学 | 基于ezmtt试剂的抗生素药敏和化合物抗菌活性检测方法 |
| CN112424370A (zh) * | 2018-07-16 | 2021-02-26 | 细菌组学物种公司 | 快速测试抗菌剂敏感性的方法和系统 |
| CN113845798A (zh) * | 2021-09-15 | 2021-12-28 | 丹娜(天津)生物科技股份有限公司 | 一种抗菌药物墨水及利用其制备Etest药敏试条的方法 |
| CN118652955A (zh) * | 2024-08-08 | 2024-09-17 | 广东省大湾区华南理工大学聚集诱导发光高等研究院 | 一种快速检测抗菌药物敏感性的aie试剂及方法 |
| CN119061108A (zh) * | 2024-11-04 | 2024-12-03 | 广东省大湾区华南理工大学聚集诱导发光高等研究院 | 一种药敏检测方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110658234B (zh) * | 2019-09-30 | 2021-02-26 | 浙江大学 | 一种可抛弃式快拆型污染物阻抗检测装置 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1680803A (zh) * | 2004-04-08 | 2005-10-12 | 广东省微生物研究所 | Atp生物发光法在快速评估消毒剂消杀效果的应用 |
| CN1876829A (zh) * | 2006-03-17 | 2006-12-13 | 广东省微生物研究所 | 生物发光微生物数量抗干扰快速检测试剂盒 |
| CN101040054A (zh) * | 2004-07-02 | 2007-09-19 | 普罗美加公司 | 微生物atp提取及检测系统 |
| CN102183648A (zh) * | 2011-01-26 | 2011-09-14 | 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 | 生物发光检测特种致病菌使用的检测方法和检测用试剂盒 |
| CN203715637U (zh) * | 2014-02-15 | 2014-07-16 | 江苏中新医药有限公司 | 细菌/真菌药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒 |
| CN105358982A (zh) * | 2013-07-04 | 2016-02-24 | Abm科技公司 | 用于快速确定细菌对抗生素的敏感性或耐药性的方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4014745A (en) * | 1975-04-30 | 1977-03-29 | Nasa | Application of luciferase assay for ATP to antimicrobial drug susceptibility |
| CN103512871B (zh) * | 2012-06-28 | 2017-04-12 | 上海百可生物科技股份有限公司 | 一种细菌耐药性荧光检测方法及其诊断试剂盒 |
| CN103483229B (zh) * | 2013-09-12 | 2015-06-17 | 杭州隆基生物技术有限公司 | 一种atp释放剂及包含该释放剂的细菌快速检测试剂 |
| CN105087752A (zh) * | 2015-07-30 | 2015-11-25 | 北京鑫骥金诺医疗器械有限公司 | 一种药敏试剂盒的制备方法 |
| CN106248922A (zh) * | 2016-07-22 | 2016-12-21 | 嘉兴鼎诺生物科技有限公司 | 一种肿瘤细胞药敏检测板及检测方法 |
| CN107421939A (zh) * | 2017-09-25 | 2017-12-01 | 江苏中新医药有限公司 | 一种快速定量检测抗菌药物敏感性的试剂及其应用方法 |
-
2017
- 2017-09-25 CN CN201710875113.XA patent/CN107421939A/zh active Pending
-
2018
- 2018-08-27 WO PCT/CN2018/102508 patent/WO2019056926A1/zh not_active Ceased
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1680803A (zh) * | 2004-04-08 | 2005-10-12 | 广东省微生物研究所 | Atp生物发光法在快速评估消毒剂消杀效果的应用 |
| CN101040054A (zh) * | 2004-07-02 | 2007-09-19 | 普罗美加公司 | 微生物atp提取及检测系统 |
| CN1876829A (zh) * | 2006-03-17 | 2006-12-13 | 广东省微生物研究所 | 生物发光微生物数量抗干扰快速检测试剂盒 |
| CN102183648A (zh) * | 2011-01-26 | 2011-09-14 | 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 | 生物发光检测特种致病菌使用的检测方法和检测用试剂盒 |
| CN105358982A (zh) * | 2013-07-04 | 2016-02-24 | Abm科技公司 | 用于快速确定细菌对抗生素的敏感性或耐药性的方法 |
| CN203715637U (zh) * | 2014-02-15 | 2014-07-16 | 江苏中新医药有限公司 | 细菌/真菌药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒 |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019056926A1 (zh) * | 2017-09-25 | 2019-03-28 | 江苏中新医药有限公司 | 一种快速定量检测抗菌药物敏感性的试剂及其应用方法 |
| CN112424370A (zh) * | 2018-07-16 | 2021-02-26 | 细菌组学物种公司 | 快速测试抗菌剂敏感性的方法和系统 |
| CN110699421A (zh) * | 2019-11-12 | 2020-01-17 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种快速检测菌株耐药表型的方法 |
| CN110904185A (zh) * | 2019-12-25 | 2020-03-24 | 武汉市农业科学院 | 一种基于碘硝基氯化四氮唑显色的鸭致病菌药敏快速检测试剂盒 |
| CN110964781A (zh) * | 2019-12-25 | 2020-04-07 | 武汉市农业科学院 | 一种基于atp生物发光的鸭致病菌药敏快速检测试剂盒 |
| CN111705107A (zh) * | 2020-07-13 | 2020-09-25 | 浙江工业大学 | 基于ezmtt试剂的抗生素药敏和化合物抗菌活性检测方法 |
| CN113845798A (zh) * | 2021-09-15 | 2021-12-28 | 丹娜(天津)生物科技股份有限公司 | 一种抗菌药物墨水及利用其制备Etest药敏试条的方法 |
| CN118652955A (zh) * | 2024-08-08 | 2024-09-17 | 广东省大湾区华南理工大学聚集诱导发光高等研究院 | 一种快速检测抗菌药物敏感性的aie试剂及方法 |
| CN118652955B (zh) * | 2024-08-08 | 2025-02-14 | 广东省大湾区华南理工大学聚集诱导发光高等研究院 | 一种快速检测抗菌药物敏感性的aie试剂及方法 |
| CN119061108A (zh) * | 2024-11-04 | 2024-12-03 | 广东省大湾区华南理工大学聚集诱导发光高等研究院 | 一种药敏检测方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2019056926A1 (zh) | 2019-03-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107421939A (zh) | 一种快速定量检测抗菌药物敏感性的试剂及其应用方法 | |
| Puttaswamy et al. | A comprehensive review of the present and future antibiotic susceptibility testing (AST) systems | |
| Lyu et al. | Phenotyping antibiotic resistance with single-cell resolution for the detection of heteroresistance | |
| Chandra et al. | Bacterial growth sensing in microgels using pH-dependent fluorescence emission | |
| Extremina et al. | Optimization of processing conditions for the quantification of enterococci biofilms using microtitre-plates | |
| Zhu et al. | Immuno‐affinity amperometric detection of bacterial infections | |
| Kumaravel et al. | Convenient and ultrasensitive detection of live Salmonella using ratiometric electrochemical molecular substrates | |
| CN102288586B (zh) | 测定药物最低抑菌浓度的方法 | |
| CN110760559B (zh) | 一种快速微生物抗生素敏感性检测方法 | |
| JP2020022374A (ja) | 微生物検査 | |
| ES3030837T3 (en) | Electrochemical detection of bacterial and/or fungal infections | |
| CN105132519B (zh) | 一种用于大肠杆菌定量检测的选择性培养基及大肠杆菌定量检测方法 | |
| EP3134538B1 (en) | Rapid determination of bacterial susceptibility to an antibiotic at the point of care | |
| EP3085790B1 (en) | Method for the microbiological determination of traces of antibiotics in low volume biological samples | |
| CN112961805B (zh) | 一种喹诺酮类药物耐药基因gyrA和parE同时发生突变的鼠伤寒沙门菌及其应用 | |
| WO2013155525A1 (en) | Ultra rapid blood culturing and susceptibility testing system | |
| Khomtchouk et al. | Quantitative assessment of bacterial growth phase utilizing flow cytometry | |
| Pacocha et al. | You will know by its tail: a method for quantification of heterogeneity of bacterial populations using single-cell MIC profiling | |
| EP0632131B1 (en) | Method of examining with antibacterial and apparatus therefor | |
| KR20140072480A (ko) | 플로르퀴놀론 항생제에 대한 민감도 보유 미생물이용 색소환원법의 개발 및 이를 이용한 진단법 | |
| CN110632044A (zh) | 一种基于aie荧光探针检测细菌抗药性的方法 | |
| Aguilera et al. | Measuring Cytosolic Translocation of Mycobacterium marinum in RAW264. 7 Macrophages with a CCF4-AM FRET Assay | |
| US5654165A (en) | Antibacterial drug inspection method and apparatus therefor | |
| CN103060186A (zh) | 一种水产迟钝爱德华氏菌快速药敏检测试剂盒 | |
| CN111662950B (zh) | 重组发光铜绿假单胞菌PAO1-lux在医用材料细菌粘附性检测中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20171201 |
|
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |