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CN107405358A - 调节脂肪代谢障碍群体中的载脂蛋白c‑iii(apociii)表达 - Google Patents

调节脂肪代谢障碍群体中的载脂蛋白c‑iii(apociii)表达 Download PDF

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CN107405358A
CN107405358A CN201680009110.1A CN201680009110A CN107405358A CN 107405358 A CN107405358 A CN 107405358A CN 201680009110 A CN201680009110 A CN 201680009110A CN 107405358 A CN107405358 A CN 107405358A
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CN
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apociii
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CN201680009110.1A
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A·迪杰尼欧
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Ionis Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
Ionis Pharmaceuticals Inc
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Abstract

本文提供用于降低局部脂肪代谢障碍患者中的ApoCIII mRNA和蛋白质表达的方法、化合物和组合物。本文还提供用于治疗、预防、延迟或改善患者中的局部脂肪代谢障碍的方法、化合物和组合物。本文还提供适用于治疗、预防、延迟或改善与患者中的局部脂肪代谢障碍相关的胰腺炎、心血管疾病或代谢病症或其症状中的任何一种或多种的方法、化合物和组合物。

Description

调节脂肪代谢障碍群体中的载脂蛋白C-III(APOCIII)表达
序列表
本申请连同序列表一起以电子格式提交。序列表作为在2016年2月24日创建的名称为BIOL0268WOSEQ_ST25.txt的文件提供，所述文件的大小为12Kb。电子格式的序列表中的信息以引用的方式整体并入本文。
发明领域
本文提供用于在局部脂肪代谢障碍(PL)患者中降低载脂蛋白C-III(ApoCIII)mRNA和蛋白质的表达、降低甘油三酯水平且增加高密度脂蛋白(HDL)水平或HDL活性的方法、化合物和组合物。此外，本文提供用于治疗局部脂肪代谢障碍或其相关病症的化合物和组合物。
背景
脂蛋白为球状、胶束状颗粒，其由被蛋白质、磷脂和胆固醇的两亲性涂层所包围的酰基甘油和胆固醇酯的非极性核心组成。脂蛋白基于其功能和物理特性被分为五个大类：乳糜微粒、极低密度脂蛋白(VLDL)、中密度脂蛋白(IDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。乳糜微粒将膳食脂质从肠运输到组织。VLDL、IDL和LDL均是将三酰基甘油和胆固醇从肝脏运输到组织。HDL将内源性胆固醇从组织运输到肝脏。
载脂蛋白C-III(也称为APOC3、APOC-III、ApoCIII和APO C-III)是HDL和富含甘油三酯(TG)的脂蛋白的成分。升高的ApoCIII与诸如心血管疾病、代谢综合征、肥胖和糖尿病(Chan等人,Int J Clin Pract,2008,62:799-809；Onat等人,Atherosclerosis,2003,168:81-89；Mendivil等人,Circulation,2011,124:2065-2072；Mauger等人,J.Lipid Res,2006.47:1212-1218；Chan等人,Clin Chem,2002,278-283；Ooi等人,Clin.Sci,2008,114:611-624；Davidsson等人,J.Lipid Res,2005.46:1999-2006；Sacks等人,Circulation,2000.102:1886-1892；Lee等人,Arterioscler Thromb Vasc Biol,2003,23:853-858)以及脂肪代谢障碍(Kassai等人,ENDO 2015会议摘要，电子出版于https://endo.confex.com/endo/2015endo/webprogram/Paper22544.html)的疾病中升高的TG水平相关。
脂肪代谢障碍综合征是一组罕见的代谢疾病，其特征在于脂肪组织的选择性丧失，其导致肝和肌肉中的异位脂肪沉积以及胰岛素抵抗、糖尿病、血脂异常和脂肪肝疾病的发展。这些综合征根据潜在的病因学(遗传或获得性)并且根据脂肪丧失到全身或局部脂肪代谢障碍中的分布进行分类(Garg等人,J Clin Endocrinol Metab,2011,96:3313-3325；Chan等人,Endocr Pract,2010,16:310-323；Simha等人,Curr Opin Lipidol,2006,17(2):162-169；Garg,N Engl J Med,2004,350:1220-1234)。
用于脂肪代谢障碍的当前治疗包括减少热量摄入并通过运动增加能量消耗的生活方式改变。用于治疗严重胰岛素抵抗(二甲双胍、噻唑烷二酮类、GLP-1、胰岛素)和/或高TG(贝特类、鱼油)的常规疗法在这些患者中不是非常有效(Chan等人,Endocr Pract,2010,16:310-323)。
在HIV相关性脂肪代谢障碍患者中，(替莫瑞林)可商业上用于减少过量腹部脂肪(包装说明书，2013)。
在全身性脂肪代谢障碍患者中，代谢并发症与瘦蛋白缺乏有关。瘦蛋白替代疗法(美曲普汀)可商业上用于全身性脂肪代谢障碍患者，但是由于在发展针对内源性瘦蛋白或美曲普汀和淋巴瘤的抗药物中和抗体中的相关风险，因此其只能通过风险评估和缓解策略(REMS)计划可用，所述计划需要开药者和药房认证以及特殊文件(Myalept,FDA Briefing Document,2013；Chang等人,Endocr Pract,2011,17(6):922–932)。
目前不存在用于局部脂肪代谢障碍的非医源性形式的特定药物治疗。
因此，仍然需要为脂肪代谢障碍患者提供新颖的治疗选项。反义技术作为用于降低某些基因产物的表达的有效手段而出现并且可证明在许多关于ApoCIII调节的治疗、诊断和研究应用中有独特适用性。先前已经在US 20040208856(US专利7,598,227)、US20060264395(US专利7,750,141)、WO 2004/093783、WO 2012/149495、WO 2014/127268、WO2014/205449和WO 2014/179626中公开了用于通过反义化合物抑制ApoCIII的组合物和方法，所述专利全部以引用的方式并入本文。靶向ApoCIII的反义寡核苷酸已经在I期和II期临床试验中进行了测试，并且目前正在III期试验中以测试其在家族性乳糜微粒血症综合征(FCS)和高甘油三酯血症患者中的有效性。
发明概述
某些实施方案提供一种治疗、预防、延迟或改善脂肪代谢障碍的方法，所述方法包括向动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物。某些实施方案提供一种用于治疗、预防、延迟或改善脂肪代谢障碍的ApoCIII特异性抑制剂。在某些实施方案中，脂肪代谢障碍是全身性脂肪代谢障碍或局部脂肪代谢障碍。
某些实施方案提供一种治疗、预防、延迟或改善具有脂肪代谢障碍的动物中的心血管和/或代谢疾病或病症或其症状的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物。在某些实施方案中，所述化合物通过降低TG水平、增加动物中的HDL水平和/或提高TG与HDL比例来预防、延迟或改善具有脂肪代谢障碍的动物中的心血管和/或代谢疾病、病症、病状或其症状。在某些实施方案中，
某些实施方案提供一种治疗、预防、延迟或改善具有脂肪代谢障碍的动物中的肝脂肪变性、NALFD或NASH或其症状的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物。在某些实施方案中，所述化合物通过降低TG水平、增加动物中的HDL水平和/或提高TG与HDL比例来预防、延迟或改善具有脂肪代谢障碍的动物中的肝脂肪变性、NALFD或NASH或其症状。在某些实施方案中，肝脂肪变性、NALFD或NASH或其症状或风险得以改善。在某些实施方案中，向具有脂肪代谢障碍相关的肝脂肪变性、NALFD或NASH的动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物预防或延迟肝或肝细胞癌的肝硬化的进展。
某些实施方案提供一种治疗、预防、延迟或改善具有脂肪代谢障碍的动物中的胰腺炎或其症状的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物。在某些实施方案中，所述化合物通过降低TG水平、增加动物中的HDL水平和/或提高TG与HDL比例来预防、延迟或改善具有脂肪代谢障碍的动物中的胰腺炎或其症状。在某些实施方案中，胰腺炎或其症状或风险得以改善。
某些实施方案提供一种降低具有脂肪代谢障碍的动物中的TG水平的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物。在某些实施方案中，高甘油三酯血症或其症状或风险得以改善。
某些实施方案提供一种在具有脂肪代谢障碍的动物中增加HDL水平和/或改善TG与HDL比例的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物。
某些实施方案提供一种在具有脂肪代谢障碍的动物中降低空腹TG、降低HbA1c、降低血浆葡萄糖、减小肝体积、减少肝体积的增加并且减轻肝脂肪变性的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物。在某些实施方案中，HbA1c被降低至小于9％、小于8％、小于7.5％或小于7％。在某些实施方案中，HbA1c被降低至少0.2％、至少0.5％、至少0.7％、至少1％、至少1.2％或至少1.5％。
在某些实施方案中，ApoCIII特异性抑制剂为能够抑制ApoCIII表达的核酸、肽、抗体、小分子或其他试剂。在某些实施方案中，核酸为靶向ApoCIII的反义化合物。在某些实施方案中，反义化合物为反义寡核苷酸。在某些实施方案中，反义寡核苷酸为修饰的寡核苷酸。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸具有核碱基序列，所述核碱基序列包含ISIS304801，AGCTTCTTGTCCAGCTTTAT(SEQ ID NO:3)的至少8个连续核碱基。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸由SEQ ID NO:3的核碱基序列组成。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％互补。
在某些实施方案中，脂肪代谢障碍是全身性脂肪代谢障碍。在某些实施方案中，脂肪代谢障碍是局部脂肪代谢障碍。
发明详述
应理解，以上概述和以下详述二者都仅为示例性和解释性的，并且不限制要求保护的本发明。在本文中，除非另外确切说明，否则单数的使用包括复数。如本文所使用，除非另外说明，否则“或”的使用是指“和/或”。此外，术语“包括(including)”以及其他形式诸如“包括(includes)”和“包括(included)”的使用不是限制性的。此外，除非另外明确陈述，否则如“要素”或“组分”的术语涵盖包含一个单元的要素和组分与包含一个以上亚单元的要素和组分两者。
本文所用的章节标题仅出于组织目的，并且不应解释为限制所述主题。本申请中引用的所有文献或文献的部分(包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍及论文)关于本文所论述的文献部分明确地以引用方式特此并入以及以引用方式特此整体并入。
定义
除非提供具体定义，否则关于本文所述的分析化学、合成有机化学和医学和药物化学所用的命名以及本文所述的分析化学、合成有机化学和医学和药物化学的工序和技术为本领域中熟知且常用的。标准技术可用于化学合成和化学分析。在允许的情况下，贯穿本公开中所提及的所有专利、申请、公布的申请及其他公布、可经由数据库(如美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information，NCBI))获得的GENBANK登录号及相关序列信息及其他数据关于本文所论述的文献部分以引用方式并入本文以及以引用方式整体并入本文。
除非另外指出，否则以下术语具有以下含义：
“2’-O-甲氧基乙基”(又为2’-MOE、2’-O(CH2)2-OCH3和2’-O-(2-甲氧基乙基))是指呋喃糖环的2’位的O-甲氧基-乙基修饰。2’-O-甲氧基乙基修饰的糖是修饰的糖。
“2’-O-甲氧基乙基核苷酸”是指包含2’-O-甲氧基乙基修饰的糖部分的核苷酸。
“3’靶位点”是指与特定反义化合物的最3’核苷酸互补的靶核酸的核苷酸。
“5’靶位点”是指与特定反义化合物的最5’核苷酸互补的靶核酸的核苷酸。
“5-甲基胞嘧啶”是指使用连接至5’位置的甲基修饰的胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶是修饰的核碱基。
“约”是指在值的±10％以内。例如，如果陈述“标志物可增加约50％”，则意味着标志物可增加45％-55％之间。
“活性药剂”是指当施用给个体时药物组合物中提供治疗益处的一种或多种物质。例如，在某些实施方案中，靶向ApoCIII的反义寡核苷酸为活性药剂。
“活性靶区域”或“靶区域”是指一种或多种活性反义化合物所靶向的区域。“活性反应化合物”是指降低靶核酸水平或蛋白质水平的反义化合物。
“伴随施用”是指在相同时间以任何方式对两种药剂同时施用，其中两种药剂的药理作用均在患者中显现。同时施用不要求以单一的药物组合物、以相同剂型或通过相同的施用途径来施用两种药剂。这两种药剂的作用本身不需要同时显现出来。这些作用仅需要一段时间重叠并且不需要共延。
“施用”是指向个体提供药剂，且包括但不限于由医学专业人员施用及自行施用。
“药剂”是指在施用给动物时可提供治疗益处的活性物质。“第一药剂”是指本发明的治疗性化合物。例如，第一药剂可以是靶向ApoCIII的反义寡核苷酸。“第二药剂”是指本发明的第二治疗化合物(例如，靶向ApoCIII的第二反义寡核苷酸)和/或非ApoCIII治疗化合物。
“改善”是指相关疾病、病症或病状的至少一种指标、体征或症状的减轻。指标的严重性可通过本领域的技术人员已知的主观或客观度量来确定。
“动物”是指人类或非人类动物，包括但不限于小鼠、大鼠、家兔、狗、猫、猪，以及非人灵长类，包括但不限于猴子和黑猩猩。
“反义活性”是指可归因于反义化合物与其靶核酸的杂交的任何可检测或可测量的活性。在某些实施方案中，反义活性为靶核酸或由此靶核酸所编码的蛋白质的量或表达的减少。
“反义化合物”是指能够经历通过氢键合与靶核酸进行杂交的低聚化合物。反义化合物的实例包括单链和双链化合物，诸如反义寡核苷酸、siRNA、shRNA、ssRNAi和占位型化合物。
“反义抑制”是指与在不存在与靶核酸互补的反义化合物的情况下的靶核酸水平或靶蛋白质水平相比，在存在反义化合物的情况下靶核酸水平或靶蛋白质水平的降低。
“反义寡核苷酸”是指具有允许与靶核酸的对应区域或片段杂交的核碱基序列的单链寡核苷酸。本文所用的术语“反义寡核苷酸”包括本文所述的化合物的药学上可接受的衍生物。
“ApoCIII”、“载脂蛋白C-III”或“ApoC3”是指编码ApoCIII的任何核酸或蛋白质序列。例如，在某些实施方案中，ApoCIII包括编码ApoCIII的DNA序列、从编码ApoCIII的DNA(包括含有内含子和外显子的基因组DNA)转录的RNA序列、编码ApoCIII的mRNA序列或编码ApoCIII的肽序列。
“ApoCIII特异性抑制剂”是指能够在分子水平上特异性地抑制ApoCIII mRNA的表达和/或ApoCIII蛋白的表达或活性的任何试剂。例如，ApoCIII特异性抑制剂包括核酸(包括反义化合物)、肽、抗体、小分子和其他能够抑制ApoCIII mRNA和/或ApoCIII蛋白的表达的试剂。在某些实施方案中，核酸为反义化合物。在某些实施方案中，反义化合物为靶向ApoCIII的寡核苷酸。在某些实施方案中，靶向ApoCIII的寡核苷酸为靶向ApoCIII的修饰寡核苷酸。在某些实施方案中，靶向ApoCIII的寡核苷酸具有如SEQ ID NO:3或另一序列(例如像在美国专利7,598,227、美国专利7,750,141、PCT公布WO 2004/093783或WO 2012/149495中公开的那些序列，所有专利均以引用的方式并入本文)中所示的序列。在某些实施方案中，通过特异性地调节ApoCIII mRNA水平和/或ApoCIII蛋白表达，ApoCIII特异性抑制剂可影响脂肪生成途径的组分。类似地，在某些实施方案中，ApoCIII特异性抑制剂可影响动物中的其他分子过程。
“ApoCIII mRNA”是指编码ApoCIII蛋白的mRNA。
“ApoCIII蛋白”是指编码ApoCIII的任何蛋白序列。
“动脉粥样硬化”是指影响大型和中型动脉的血管硬化，其特点是脂肪沉积物的存在。脂肪沉积物被称为“动脉粥样化”或“斑”，其主要由胆固醇和其他脂肪、钙和疤痕组织组成，并且损伤动脉的内衬。
“双环糖”是指通过两个非孪位环原子桥接而修饰的呋喃糖基环。双环糖是修饰的糖。
“双环核酸”或“BNA”是指其中核苷或核苷酸的呋喃糖部分包括连接呋喃糖环上的两个碳原子的桥联从而形成双环系统的核苷或核苷酸。
“帽结构”或“端帽部分”是指已在反义化合物的任一末端并入的化学修饰。
“心血管疾病”或“心血管病症”是指与心脏、血管或循环相关的一组病状。心血管疾病的实例包括但不限于动脉瘤、心绞痛、心律失常、动脉粥样硬化、脑血管疾病(中风)、冠状心脏疾病、高血压、血脂异常、高脂血症、高甘油三酯血症和高胆固醇血症。
“化学上不同的区域”是指以某种方式化学上不同于同一反义化合物的另一区域的反义化合物的区域。例如，具有2’-O-甲氧基乙基核苷酸的区域化学上不同于具有无2’-O-甲氧基乙基修饰的核苷酸的区域。
“嵌合反义化合物”是指具有至少两个化学上不同的区域的反义化合物。
“胆固醇”是在所有动物组织的细胞膜中发现的固醇分子。胆固醇必须通过包括极低密度脂蛋白(VLDL)、中密度脂蛋白(IDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)的脂蛋白在动物的血浆中运输。“血浆胆固醇”是指血浆或血清中存在的所有脂蛋白(VDL、IDL、LDL、HDL)、酯化的和/或未酯化的胆固醇的总和。
“胆固醇吸收抑制剂”是指抑制从饮食获得的外源性胆固醇的吸收的药剂。
“共同施用”是指对个体施用两种或更多种药剂。两种或更多种药剂可以在单一药物组合物中，或可在分开的药物组合物中。两种或更多种药剂中的每一种可通过相同或不同的施用途经进行施用。共同施用包括平行或相继施用。
“互补性”是指第一核酸与第二核酸的核碱基之间配对的能力。在某些实施方案中，第一与第二核酸之间的互补性可以在两条DNA链之间、两条RNA链之间，或DNA与RNA链之间。在某些实施方案中，一条链上的一些核碱基与另一条链上的互补氢键键结碱基匹配。在某些实施方案中，一条链上的所有核碱基与另一条链上的互补氢键键结碱基匹配。在某些实施方案中，第一核酸是反义化合物且第二核酸是靶核酸。在某些这类实施方案中，反义化合物为第一核酸且靶核酸为第二核酸。
“连续核碱基”是指彼此紧邻的核碱基。
“限制性乙基”或“cEt”是指具有呋喃糖的双环核苷，其包含4’与2’碳原子之间的甲基(亚甲基氧基)(4’-CH(CH3)-O-2’)桥。
“交叉反应性”是指靶向一种核酸序列的低聚化合物可以与不同核酸序列杂交。例如，在一些情况下，靶向人ApoCIII的反义寡核苷酸可与鼠ApoCIII交叉反应。是否低聚化合物与除了其指定目标以外的其他核酸序列交叉反应取决于所述化合物所具有的与非靶核酸序列的互补性程度。低聚化合物与非靶核酸之间的互补性越高，低聚化合物越有可能与核酸发生交叉反应。
“治愈”是指恢复健康的方法或针对疾病所开出的治疗。
“冠状动脉心脏疾病(CHD)”是指供应血液和氧气到心脏的小血管变窄，这往往是动脉粥样硬化所造成的。
“脱氧核糖核苷酸”是指在核苷酸的糖部分的2’位具有氢的核苷酸。脱氧核糖核苷酸可用多种取代基中的任一种进行修饰。
“糖尿病(Diabetes mellitus)”或“糖尿病(diabetes)”是一种综合征，其特征在于由胰岛素水平不足或胰岛素敏感性降低所导致的代谢紊乱和异常高血糖(高血糖症)。特征症状为由高血糖水平引起的过量尿产生(多尿)、试图补偿增加排尿的过度口渴和增加的液体摄取(烦渴)、由对眼睛光学系统的高血糖作用引起的视力模糊、原因不明的体重减轻和嗜睡。
“糖尿病性血脂异常”或“伴血脂异常的2型糖尿病”是指以2型糖尿病、HDL-C降低、甘油三酯升高以及小而密LDL颗粒的升高为特征的病状。
“稀释剂”是指组合物中缺乏药理活性但在药学上是必需的或期望的成分。例如，注射型组合物中的稀释剂可以是液体，例如盐水溶液。
“血脂异常”是指脂质和/或脂蛋白代谢的障碍，包括脂质和/或脂蛋白过度产生或缺乏。血脂异常可表现为诸如乳糜微粒、胆固醇和甘油三酯的脂质以及诸如低密度脂蛋白(LDL)胆固醇的脂蛋白的升高。血脂异常的一个例子是乳糜微粒血症或高甘油三酯血症。
“剂量单位”是指所提供的药剂的形式，例如丸剂、片剂或本领域中已知的其他剂量单位。在某些实施方案中，剂量单位为含有冻干反义寡核苷酸的小瓶。在某些实施方案中，剂量单位为含有重构反义寡核苷酸的小瓶。
“剂量”是指在单个施用中或在指定时间内提供的指定量的药剂。在某些实施方案中，剂量可在一个、两个或更多个大丸剂、片剂或注射剂中施用。例如，在某些实施方案中，当期望皮下施用时，所需剂量需要不易由单次注射调节的体积，因此，两个或更多个注射可用于实现所需剂量。在某些实施方案中，药剂通过在延长的时段内或连续地输注来施用。剂量可被陈述为每小时、每天、每周或每月药剂的量。剂量可表示为mg/kg或g/kg。
“有效量”或“治疗有效量”是指足以在需要活性药剂的个体中实现所需生理学结果的药剂的量。有效量可在个体间变化，取决于待治疗个体的健康和身体条件、待治疗个体的分类群、组合物的制剂、个体的医疗条件的评价以及其他相关因素。
“贝特类”为过氧化物酶体增殖物活化的受体α(PPAR-α)的激动剂，其通过调控脂质和脂蛋白代谢中的各种步骤的转录因子起作用。通过与PPAR-α相互作用，贝特类募集不同的辅因子并调控基因表达。因此，贝特类有效降低空腹TG水平以及餐后TG和TRL残留颗粒。贝特类还具有适度LDL-C降低和HDL-C升高作用。ApoC-III的表达和水平的降低为PPAR-α激动剂的一致作用(Hertz等人J Biol Chem,1995,270(22):13470-13475)。报道了在代谢综合征中使用非诺贝特治疗血浆ApoC-III水平的36％降低(Watts等人Diabetes,2003,52:803-811)。
“完全互补”或“100％互补”是指第一核酸的核碱基序列的每个核碱基在第二核酸的第二核碱基序列中具有互补核碱基。”在某些实施方案中，第一核酸是反义化合物且第二核酸是靶核酸。
“缺口聚物(Gapmer)”是指其中具有多个支持RNA酶H裂解的核苷的内部区域位于具有一个或多个核苷的外部区域之间的嵌合反义化合物，其中包含内部区域的核苷化学上不同于包含外部区域的核苷。内部区域可被称为“缺口”或“缺口区段”，且外部区域可被称为“翼”或“翼区段”。
“遗传筛选”是指筛选动物中的基因型变异或突变。在一些情况下，突变可导致动物的表型变化。在某些情况下，表型变化为动物的疾病、病症或病状或导致动物的疾病、病症或病状。例如，LMNA、PPARγ、PLIN1、AKT2、CIDEC和其他基因中的突变可导致脂肪代谢障碍。遗传筛选可通过任何本领域已知的技术进行，例如LMNA、PPARγ、PLIN1、AKT2、CIDEC基因或mRNA的测序以检测突变。将被筛选的动物的序列与正常动物的序列进行比较，以确定序列中是否存在任何突变。或者，例如，可使用PCR扩增和凝胶或芯片分析来进行LMNA、PPARγ、PLIN1、AKT2、CIDEC基因或mRNA的突变的鉴别。
“葡萄糖”是指被细胞用作能量源和炎性介体的单糖。“血浆葡萄糖”是指血浆中存在的葡萄糖。
“高密度脂蛋白”或“HDL”是指脂质(胆固醇、甘油三酯和磷脂)和蛋白质(载脂蛋白(apo)和酶))的大分子复合物。HDL的表面主要含有载脂蛋白A、C和E。这些脱辅基蛋白中的一些的功能为将HDL从外周组织引导至肝脏。血清HDL水平可能受潜在遗传原因的影响(Weissglas-Volkov和Pajukanta,J Lipid Res,2010,51:2032-2057)。流行病学研究已经表明，HDL的水平升高保护免于心血管疾病或冠心病(Gordon等人,Am.J.Med.1977.62:707-714)。HDL的这些作用与甘油三酯和LDL浓度无关。在临床实践中，低血浆HDL更通常与增加血浆甘油三酸酯的其他病症相关，例如中心性肥胖、胰岛素抵抗、2型糖尿病和肾脏疾病(慢性肾衰竭或肾病性蛋白尿)(Kashyap.Am.J.Cardiol.1998.82:42U-48U)。
“高密度脂蛋白-胆固醇”或“HDL-C”是指与高密度脂蛋白颗粒相关的胆固醇。血清(或血浆)中HDL-C的浓度通常以mg/dL或nmol/L计量。“HDL-C”和“血浆HDL-C”分别是指血清和血浆中的HDL-C。
“HMG-CoA还原酶抑制剂”是指通过抑制酶HMG-CoA还原酶起作用的药剂，例如阿托伐他汀、罗苏伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀和辛伐他汀。
“杂交”是指互补核酸分子的退火。在某些实施方案中，互补核酸分子包括反义化合物和靶核酸。
“高胆固醇血症”是指以胆固醇或循环(血浆)胆固醇、LDL-胆固醇和VLDL-胆固醇升高为特征的病状，根据检测、评估治疗成人高胆固醇的国家胆固醇教育计划(NCEP)的专家小组报告指导(参见Arch.Int.Med.(1988)148,36-39)。
“高脂血症(Hyperlipidemia)”或高脂血症(hyperlipemia)是以血清脂质或循环(血浆)脂质升高为特征的病状。此病状表现为异常高浓度的脂肪。循环血液中的脂质级分为胆固醇、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白、乳糜微粒和甘油三酯。
“高甘油三酯血症”是指以甘油三酯水平升高为特征的病状。高甘油三酯血症是富含甘油三酯(TG)的脂蛋白VLDL和(在较少程度上)乳糜微粒(CM)的产生增加和/或分解代谢减少或延迟的后果。其病因包括原发性(即遗传原因)和继发性(其他潜在原因如糖尿病、代谢综合征/胰岛素抵抗、肥胖症、身体不活动、吸烟、过量的酒精和非常高含量的碳水化合物的饮食)因素或最通常的是两者的组合(Yuan等人,CMAJ,2007,176:1113-1120)。高甘油三酯血症是与脂肪代谢障碍相关的常见临床性状。临界性高TG水平(150-199mg/dL)通常是在一般群体中发现的，并且是代谢综合征/胰岛素抵抗状态的共有成分。这同样适用于高TG水平(200-499mg/dL)，只是随着血浆TG水平增加，潜在的遗传因素起着越来越重要的病因作用。非常高的TG水平(≥500mg/dL)也通常与升高的CM水平相关，并且伴随有急性胰腺炎的风险增加。如果TG水平超过880mg/dL(>10mmol)，则胰腺炎的风险被认为是临床上显著的，并且欧洲动脉粥样硬化学会/欧洲心脏病学会(EAS/ESC)2011指南规定，预防急性胰腺炎的行为是强制性的(Catapano等人2011,Atherosclerosis,217S:S1-S44)。根据EAS/ESC2011指南，高甘油三酯血症是所有胰腺炎病例的约10％的病因，并且在440-880mg/dL之间的TG水平下可发生胰腺炎的发展。基于临床研究的证据表明TG水平升高是动脉粥样硬化性CVD的独立风险因素，来自国家胆固醇教育计划成人治疗小组III(NCEP 2002,Circulation,106:3143-421)和美国糖尿病协会(ADA 2008,Diabetes Care,31:S12-S54.)的指南推荐降低心血管风险的小于150mg/dL的目标TG水平。
“鉴别”或“诊断”具有指定疾病、病症或病状的动物意味着通过领域已知的方法鉴别易患或患有指定疾病、病症或病状的受试者。
“鉴别”或“诊断”具有脂肪代谢障碍(全身性或局部)的动物是指鉴别易患或患有脂肪代谢障碍的受试者。鉴别患有脂肪代谢障碍的受试者可通过与任何领域已知的筛选技术(例如遗传筛选)结合检查受试者的病史来进行。例如，然后针对与脂肪代谢障碍相关的基因(例如LMNA、PPARγ、PLIN1、AKT2、CIDEC等)中的突变筛选患有记录的500mg/dL以上的空腹TG病史的患者。
“鉴别”或“诊断”患有代谢或心血管疾病的动物是指鉴别易患或患有代谢性疾病、心血管疾病或代谢综合征的受试者；或者，鉴别具有代谢性疾病、心血管疾病或代谢综合征的任何症状的受试者，包括但不限于高胆固醇血症、高血糖症、高脂血症、高甘油三酯血症、高血压增加胰岛素抵抗、胰岛素敏感性降低、高于正常体重和/或高于正常人体脂肪含量或其任何组合。所述鉴定可通过任何方法来实现，所述方法包括但不限于标准临床试验或评价，如测量血清或循环(血浆)胆固醇，测量血清或循环(血浆)血液葡萄糖，测量血清或循环(血浆)甘油三酯，测量血压，测量体脂肪含量，测量体重等。
“改善心血管结果”是指心血管不良事件的发生或者它们的危险减少。不利心血管事件的实例包括但不限于死亡、再梗死、中风、心源性休克、肺水肿、心脏停搏和心房性心律失常。
“紧邻”是指在直接相邻的元件例如区域、片段、核苷酸和/或核苷之间没有中间元件。
“增加HDL”或“提高HDL”是指与不施用任何化合物的动物的HDL水平相比，在施用本发明的至少一种化合物之后，动物的HDL水平增加。
“个体”或“受试者”或“动物”是指对于治疗或疗法所选择的人或非人动物。
“诱导”、“抑制”、“增强”、“升高”、“增加”、“减少”、“降低”或其类似术语表示两种状态之间的定量差异。例如，“有效抑制ApoCIII的活性或表达的量”是指处理样品中ApoCIII的活性或表达的水平将不同于未处理样品中ApoCIII活性或表达的水平。所述术语例如适用于表达水平和活性水平。
“抑制表达或活性”是指RNA或蛋白质的表达或活性的降低或阻断并且不一定表示表达或活性的完全消除。
“胰岛素抵抗”被定义为其中正常胰岛素量不足以产生来自脂肪、肌肉和肝组织的正常胰岛素应答的病状。脂肪细胞中的胰岛素抵抗导致储存的甘油三酯水解，这升高血浆中的游离脂肪酸。肌肉中的胰岛素抵抗降低葡萄糖摄取，而肝脏中的胰岛素抵抗减少葡萄糖储存，两种作用都会升高血液葡萄糖。由胰岛素抵抗引起的胰岛素和葡萄糖的高血浆水平往往导致代谢综合征和2型糖尿病。
“胰岛素敏感性”是个体对葡萄糖加工的有效程度的量度。具有高胰岛素敏感性的个体有效地加工葡萄糖，而具有低胰岛素敏感性的个体不会有效地加工葡萄糖。
“核苷间键联”是指核苷之间的化学键。
“静脉内施用”是指进入静脉中的施用。
“连接核苷”是指键合在一起的相邻核苷。
“脂质降低”是指受试者的一种或多种脂质的减少。“提高脂质”是指受试者中脂质(例如HDL)的增加。降低脂质或提高脂质可随时间在一个或多个剂量下发生。
“降脂质疗法”或“降脂剂”是指提供给受试者以降低受试者中的一种或多种脂质的治疗方案。在某些实施方案中，提供降脂质疗法以降低受试者中的CETP、ApoB、总胆固醇、LDL-C、VLDL-C、IDL-C、非-HDL-C、甘油三酯、小而密LDL颗粒和Lp(a)中的一种或多种。降脂质疗法的实例包括他汀类、贝特类、MTP抑制剂。
“脂蛋白”(如VLDL、LDL和HDL)是指在血清、血浆和淋巴中发现的一组蛋白质并且对于脂质转运是重要的。每种脂蛋白的化学组成的不同之处在于HDL具有更高的蛋白质对脂质比例，而VLDL具有更低的蛋白质对脂质比例。
“低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)”是指低密度脂蛋白颗粒中携带的胆固醇。血清(或血浆)中LDL-C的浓度通常以mg/dL或nmol/L计量。“血清LDL-C”和“血浆LDL-C”分别是指血清和血浆中的LDL-C。
“主要风险因素”是指促成特定疾病或病状的高风险的因素。在某些实施方案中，心血管疾病的主要风险因素包括但不限于吸烟、高血压、低HDL-C、心血管疾病家族史、年龄和本文公开的其他因素。
“代谢失调”或“代谢性疾病”是指以代谢功能的改变或干扰为特征的病状。“代谢的”和“代谢”是本领域中熟知的术语并且通常包括发生在活有机体内的整个范围的生物化学过程。代谢病症包括但不限于高血糖症、前驱糖尿病、糖尿病(1型和2型)、肥胖症、胰岛素抵抗、代谢综合征和2型糖尿病引起的血脂异常。
“代谢综合征”是指以代谢来源的脂质和非脂质心血管风险因素的聚类为特征的病状。在某些实施方案中，通过以下因素中任何3个的存在来鉴定代谢综合征：男性中腰围大于102cm或女性中腰围大于88cm；至少150mg/dL的血清甘油三酯；男性中HDL-C小于40mg/dL或女性中小于50mg/dL；至少130/85mmHg的血压；以及至少110mg/dL的空腹葡萄糖。这些决定因素可在临床实践中容易地测量(JAMA,2001,285:2486-2497)。
“错配”或“非互补核碱基”是指当第一核酸的核碱基不能与第二或靶核酸的对应核碱基配对的情况。
“混合型血脂异常”是指以升高的胆固醇和升高的甘油三酯为特征的病状。
“修饰的核苷间键联”是指来自天然存在的核苷间键联的取代或任何变化。举例来说，硫代磷酸酯键为修饰的核苷间键联。
“修饰的核碱基”是指不是腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸苷或尿嘧啶的任何核碱基。举例来说，5-甲基胞嘧啶为修饰的核碱基。“未修饰的核碱基”是指嘌呤碱基腺嘌呤(A)和鸟嘌呤(G)，以及嘧啶碱基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)及尿嘧啶(U)。
“修饰的核苷”是指具有至少一个修饰的糖部分和/或修饰的核碱基的核苷。
“修饰的核苷酸”是指具有至少一个修饰的糖部分、修饰的核苷间键联和/或修饰的核碱基的核苷酸。
“修饰的寡核苷酸”是指包含至少一个修饰的核苷酸的寡核苷酸。
“修饰的糖”是指来自天然糖的取代或改变。举例来说，2’-O-甲氧基乙基修饰的糖为修饰的糖。
“基序”是指反义化合物中化学上不同的区域的模式(pattern)。
“天然存在的核苷间键联”是指3'至5'磷酸二酯键联。
“天然糖部分”是指DNA(2’-H)或RNA(2’-OH)发现的糖。
据报道，“烟酸(Nicotinic acid)”或“烟酸(niacin)”可减少脂肪酸向肝脏的流入和肝脏VLDL的分泌。这种作用似乎部分地由对脂肪组织中的激素敏感性脂肪酶的作用介导。烟酸在肝脏和脂肪组织两者中均具有关键作用部位。据报道，在肝脏中，烟酸抑制导致VLDL颗粒从肝脏的分泌减少的二酰基甘油酰基转移酶-2(DGAT-2)，这也反映在IDL和LDL颗粒两者的减少中，此外，烟酸主要通过刺激肝脏中的apo A1产生升高HDL-C和apo A1，并且还已经显示降低高脂血症患者的VLDL-ApoCIII浓度(Wahlberg等人Acta Med Scand 1988；224:319-327)。烟酸对脂肪细胞中的脂肪分解和脂肪酸动员的作用已经充分建立。
“核酸”是指由单体核苷酸组成的分子。核酸包括核糖核酸(RNA)、脱氧核糖核酸(DNA)、单链核酸(ssDNA)、双链核酸(dsDNA)、小干扰核糖核酸(siRNA)和微RNA(miRNA)。核酸还可包含单一分子中的这些要素的组合。
“核碱基”是指能够与另一核酸的碱基配对的杂环部分。
“核碱基互补性”是指能够与另一核碱基进行碱基配对的核碱基。例如，在DNA中，腺嘌呤(A)与胸腺嘧啶(T)互补。例如，在RNA中，腺嘌呤(A)与尿嘧啶(U)互补。在某些实施方案中，互补核碱基是指反义化合物中能够与其靶核酸的核碱基进行碱基配对的核碱基。举例来说，如果反义化合物的某一位置上的核碱基能够与靶核酸的某一位置上的核碱基进行氢键键结，那么在所述核碱基对处寡核苷酸与靶核酸被视作具互补性。
“核碱基序列”是指不依赖于任何糖、键联或核碱基修饰的连续核碱基的顺序。
“核苷”是指连接至糖的核碱基。
“核苷模拟物”包括用于在低聚化合物的一个或多个位置处置换糖或糖及碱基且不一定替换键的那些结构，如具有吗啉基、环己烯基、环己基、四氢吡喃基、双环或三环糖模拟物(例如非呋喃糖糖单位)的核苷模拟物。
“核苷酸”是指具有共价连接至核苷的糖部分的磷酸酯基团的核苷。
“核苷酸模拟物”包括用于在低聚化合物的一个或多个位置处置换核苷和键联的那些结构，例如像肽核酸或吗啉代类(由-N(H)-C(＝O)-O-或其他非磷酸二酯键连接的N-吗啉基)。
“低聚化合物”或“低聚物”是指具有连接的单体亚单位且能够与核酸分子的区域杂交的聚合物。在某些实施方案中，低聚化合物为寡核苷。在某些实施方案中，低聚化合物为寡核苷酸。在某些实施方案中，低聚化合物为反义化合物。在某些实施方案中，低聚化合物为反义寡核苷酸。在某些实施方案中，低聚化合物为嵌合寡核苷酸。
“寡核苷酸”是指连接的核苷的聚合物，其中每个可以彼此独立地经修饰或未经修饰。
“胃肠外施用”是指通过注射或输注来施用。胃肠外施用包括皮下施用、静脉内施用、肌肉内施用、动脉内施用、腹膜内施用或颅内施用，例如鞘内或脑室内施用。施用可以是连续的、长期的、短期的或间歇的。
“肽”是指通过由酰胺键连接至少两个氨基酸而形成的分子。肽是指多肽和蛋白质。
“药剂”是指当施用给个体时提供治疗益处的物质。例如，在某些实施方案中，靶向ApoCIII的反义寡核苷酸为药剂。
“药物组合物”或“组合物”是指适于向个体施用的物质的混合物。例如，药物组合物可包含一种或多种活性剂和药物载体，如无菌水溶液。
“药学上可接受的载体”是指不干扰化合物结构的介质或稀释剂。某些所述载体使得药物组合物能够配制成例如由受试者经口摄取的片剂、丸剂、糖衣药丸、胶囊、液体、凝胶剂、糖浆、浆料、混悬液及锭剂。某些所述载体使得药物组合物能够配制成用于注射、输注或局部施用。例如，药学上可接受的载体可以是无菌水溶液。
“药学上可接受的衍生物”或“盐”包括本文所述的化合物的衍生物，例如溶剂化物、水合物、酯、前药、多晶型物、异构体、同位素标记的变体、其药学上可接受的盐以及本领域中已知的其他衍生物。
“药学上可接受的盐”是指反义化合物的生理上和药学上可接受的盐，即保留了母体化合物的所需生物活性并且不赋予其不希望的毒理学效应的盐。术语“药学上可接受的盐”或“盐”包括由药学上可接受的无毒性酸或碱(包括无机或有机酸和碱)制备的盐。本文所述的化合物的“药学上可接受的盐”可通过本领域中熟知的方法制备。关于药学上可接受的盐的综述，参见Stahl和Wermuth,Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection and Use(Wiley-VCH,Weinheim,Germany,2002)。反义寡核苷酸的钠盐是有用的并且对于人类的治疗性施用是广泛接受的。因此，在一个实施方案中，本文所述的化合物是呈钠盐的形式。
“硫代磷酸酯键联”是指核苷之间的键联，其中磷酸二酯键通过用硫原子置换非桥联氧原子之一而被修饰。硫代磷酸酯键联为修饰的核苷间键联。
“部分”是指核酸的限定数目的连续(即连接的)核碱基。在某些实施方案中，部分是靶核酸的限定数目的连续核碱基。在某些实施方案中，部分是反义化合物的限定数目的连续核碱基。
“预防”是指延迟或阻止疾病、病症或病状的发作或发展达数分钟到无限期的时间段。预防还是指降低发展疾病、病症或病状的风险。
“前药”是指以非活性形式制备且在身体或其细胞内通过内源酶或其他化学物质和/或条件的作用转化成活性形式(即药物)的治疗剂。
“提高”是指量的增加。例如，提高血浆HDL水平是指增加血浆中HDL的量。
“TG与HDL的比例”是指相对于HDL水平的TG水平。高TG和/或低HDL的发生与心血管疾病发病率、结果和死亡率有关。“提高TG与HDL的比例”意味着降低TG和/或提高HDL水平。
“减少”是指将大小、数量或数目降低到较小的程度。例如，降低血浆甘油三酯水平是指减少血浆中甘油三酯的量。
“区”或“靶区”被定义为靶核酸中具有至少一个可鉴别的结构、功能或特征的部分。例如，靶区域可包含3’UTR、5’UTR、外显子、内含子、外显子/内含子接合部、编码区、翻译起始区、翻译终止区，或其他所定义的核酸区域。关于ApoCIII的结构上定义的区域可通过登录号从序列数据库如NCBI获得并且所述信息以引用的方式并入本文。在某些实施方案中，靶区域可涵盖从靶区域内一个靶区段的5’靶位点到所述靶区域内另一靶区段的3’靶位点的序列。
“核糖核苷酸”是指在核苷酸的糖部分的2’位上具有羟基的核苷酸。核糖核苷酸可被多种取代基中的任一种修饰。
“第二药剂”或“第二治疗剂”是指可结合“第一药剂”使用的药剂。第二治疗剂可包括但不限于siRNA或反义寡核苷酸，包括靶向ApoCIII的反义寡核苷酸。第二药剂还可包括瘦蛋白替代疗法、抗ApoCIII抗体、ApoCIII肽抑制剂、DGAT1抑制剂、降胆固醇剂、降脂剂、降血糖剂和抗炎剂。
“区段”被定义为核酸内的区的较小子部分。例如，“靶区段”是指一种或多种反义化合物所靶向的靶核酸的核苷酸的序列。“5’靶位点”是指靶区段的最5’核苷酸。“3’靶位点”是指靶区段的最3’核苷酸。
本文所教导的反义寡核苷酸或靶核酸的“缩短”或“截短”型式有一个、两个或更多个核苷缺失。
“副作用”是指可归因于治疗的非所需作用的生理应答。在某些实施方案中，副作用包括注射部位反应、肝功能测试异常、肾功能异常、肝毒性、肾毒性、中枢神经系统异常、肌病和不适。例如，血清中的转氨酶水平升高可指示肝中毒或肝功能异常。例如，胆红素增加可以表明肝毒性或肝功能异常。
“单链寡核苷酸”是指未与互补链杂交的寡核苷酸。
“可特异性杂交”是指反义化合物与靶核酸之间具有足够的互补度以在需要特异性结合的条件下，即在体内测定及治疗性治疗的状况下于生理条件下诱导所需作用，而对非靶核酸展现极小的影响或无影响。
“他汀类(statin)”是指HMG-CoA还原酶的活性的药剂。他汀类通过竞争性地抑制HMG-CoA还原酶活性来降低肝脏中胆固醇的合成。细胞内胆固醇浓度的降低诱导肝细胞表面上的LDL受体表达，这导致LDL-C从血液中的提取增加和循环LDL-C和其他含有apo-B的脂蛋白(包括富含TG的颗粒)的浓度降低。与其对LDL-C和LDL受体的作用无关，他汀类降低ApoC-III的血浆浓度和细胞mRNA水平(Ooi等人Clinical Sci,2008,114:611-624)。由于他汀类对死亡率以及大多数心血管疾病结果参数具有显著作用，因此这些药物是降低总体心血管疾病风险和中度升高TG水平的首要选择。更有效的他汀类(阿托伐他汀、罗苏伐他汀和匹伐他汀)展示TG水平的稳健降低，特别是在高剂量和TG升高的患者中。
“皮下施用”是指刚好在皮肤下方的施用。
“受试者”是指选择用于治疗或疗法的人或非人动物。
“心血管疾病或病症的症状”是指产生于和伴随心血管疾病或病症，并且作为它的一个指示的现象。例如，心绞痛；胸痛；呼吸短促；心悸；虚弱；头晕；恶心；出汗；心动过速；心动过缓；心律失常；心房纤维性颤动；下肢肿胀；发绀；疲劳；昏晕；面部发麻；四肢发麻；跛行或肌肉抽筋；腹部鼓胀；或发热是心血管疾病或病症的症状。
“靶向”或“靶向的”是指将与靶核酸特异性杂交并诱导所需效应的反义化合物的设计和选择的过程。
“靶核酸”、“靶RNA”和“靶RNA转录物”均是指能够由反义化合物靶向的核酸。
“治疗生活方式变化”是指意图降低脂肪/脂肪组织质量和/或胆固醇的饮食和生活方式变化。此类变化会降低发展心脏病的风险，并且可包括每日总卡路里、总脂肪、饱和脂肪、多不饱和脂肪、单不饱和脂肪、碳水化合物、蛋白质、胆固醇、不溶纤维的饮食摄取的推荐，以及身体活动的推荐。
“治疗”是指施用本发明的化合物以实现疾病、病症或病状的改变或改善。
“甘油三酯”或“TG”是指由与三个脂肪酸分子结合的甘油组成的脂质或中性脂肪。
“2型糖尿病(type 2diabetes)”(也称为“2型糖尿病(type 2diabetesmellitus)”、“糖尿病，2型”、“非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)”、“肥胖相关的糖尿病”或“成人发病型糖尿病”)是主要以胰岛素抵抗、胰岛素相对缺乏和高血糖症为特征的代谢疾病。
“未修饰的核苷酸”是指由天然存在的核碱基、糖部分和核苷间键联组成的核苷酸。在某些实施方案中，未修饰的核苷酸为RNA核苷酸(即，β-D-核糖核苷)或DNA核苷酸(即，β-D-脱氧核糖核苷)。
“翼区段”是指被修饰来赋予寡核苷酸以如抑制活性增强、对靶核酸的结合亲和力增强或对由体内核酸酶引起的降解具抗性的性质的一个或多个核苷。
某些实施方案
某些实施方案提供一种降低具有脂肪代谢障碍的动物中的ApoCIII水平的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物。在某些实施方案中，ApoCIII水平在肝脏、脂肪组织、心脏、骨骼肌或小肠中被降低。
在某些实施方案中，脂肪代谢障碍是全身性脂肪代谢障碍或局部脂肪代谢障碍。
某些实施方案提供一种治疗、预防、延迟或改善动物中的脂肪代谢障碍的方法，所述方法包括向动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物。在某些实施方案中，脂肪代谢障碍或其症状或风险得以改善。
某些实施方案提供一种治疗、预防、延迟或改善具有脂肪代谢障碍的动物中的心血管和/或代谢疾病或病症或其症状的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物。在某些实施方案中，所述化合物通过降低TG水平、增加动物中的HDL水平和/或提高TG与HDL比例来预防、延迟或改善具有脂肪代谢障碍的动物中的心血管和/或代谢疾病、病症、病状或其症状。在某些实施方案中，心血管和/或代谢疾病或病症或其症状或风险得以改善。
在某些实施方案中，心血管疾病是动脉瘤、心绞痛、心律失常、动脉粥样硬化、脑血管疾病、冠心病、高血压、血脂异常、高脂血症、高甘油三酯血症或高胆固醇血症。在某些实施方案中，血脂异常是高甘油三酯血症或乳糜微粒血症。在某些实施方案中，代谢疾病是糖尿病、肥胖或代谢综合征。
在某些实施方案中，心血管疾病的症状包括但不限于心绞痛；胸痛；呼吸短促；心悸；虚弱；头晕；恶心；出汗；心动过速；心动过缓；心律失常；心房纤维性颤动；下肢肿胀；发绀；疲劳；昏晕；面部发麻；四肢发麻；跛行或肌肉抽筋；腹部鼓胀；或发热。
某些实施方案提供一种治疗、预防、延迟或改善具有脂肪代谢障碍的动物中的肝脂肪变性、NALFD或NASH或其症状的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物。在某些实施方案中，所述化合物通过降低TG水平、增加动物中的HDL水平和/或提高TG与HDL比例来预防、延迟或改善具有脂肪代谢障碍的动物中的肝脂肪变性、NALFD或NASH或其症状。在某些实施方案中，肝脂肪变性、NALFD或NASH或其症状或风险得以改善。在某些实施方案中，向具有脂肪代谢障碍相关的肝脂肪变性、NALFD或NASH的动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物预防或延迟肝或肝细胞癌的肝硬化的进展。
某些实施方案提供一种治疗、预防、延迟或改善具有脂肪代谢障碍的动物中的胰腺炎或其症状的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物。在某些实施方案中，所述化合物通过降低TG水平、增加动物中的HDL水平和/或提高TG与HDL比例来预防、延迟或改善具有脂肪代谢障碍的动物中的胰腺炎或其症状。在某些实施方案中，胰腺炎或其症状或风险得以改善。
某些实施方案提供一种降低具有脂肪代谢障碍的动物中的TG水平的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物。在某些实施方案中，高甘油三酯血症或其症状或风险得以改善。
在某些实施方案中，动物具有至少≥1200mg/dL、≥1100mg/dL、≥1000mg/dL、≥900mg/dL、≥880mg/dL、≥850mg/dL、≥800mg/dL、≥750mg/dL、≥700mg/dL、≥650mg/dL、≥600mg/dL、≥550mg/dL、≥500mg/dL、≥450mg/dL、≥440mg/dL、≥400mg/dL、≥350mg/dL、≥300mg/dL、≥250mg/dL、≥200mg/dL、≥150mg/dL的TG水平。在某些实施方案中，动物具有≥880mg/dL的TG水平、≥750mg/dL的空腹TG水平和/或饮食后≥440mg/dL的TG水平。
在某些实施方案中，化合物使TG(餐后或空腹)从基线TG水平降低至少90％、至少80％、至少70％、至少60％、至少50％、至少45％、至少40％、至少35％、至少30％、至少25％、至少20％、至少15％、至少10％、至少5％或至少1％。在某些实施方案中，TG(餐后或空腹)水平为≤1900mg/dL、≤1800mg/dL、≤1700mg/dL、≤1600mg/dL、≤1500mg/dL、≤1400mg/dL、≤1300mg/dL、≤1200mg/dL、≤1100mg/dL、≤1000mg/dL、≤900mg/dL、≤800mg/dL、≤750mg/dL、≤700mg/dL、≤650mg/dL、≤600mg/dL、≤550mg/dL、≤500mg/dL、≤450mg/dL、≤400mg/dL、≤350mg/dL、≤300mg/dL、≤250mg/dL、≤200mg/dL、≤150mg/dL或≤100mg/dL。
某些实施方案提供一种在具有脂肪代谢障碍的动物中增加HDL水平和/或改善TG与HDL比例的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物。在某些实施方案中，化合物使HDL(餐后或空腹)从基线HDL水平增加至少90％、至少80％、至少70％、至少60％、至少50％、至少45％、至少40％、至少35％、至少30％、至少25％、至少20％、至少15％、至少10％、至少5％或至少1％。
某些实施方案提供一种在具有脂肪代谢障碍的动物中降低空腹TG、降低HbA1c、降低血浆葡萄糖、减小肝体积、减少肝体积的增加并且减轻肝脂肪变性的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物。在某些实施方案中，HbA1c被降低至小于9％、小于8％、小于7.5％或小于7％。在某些实施方案中，HbA1c被降低至少0.2％、至少0.5％、至少0.7％、至少1％、至少1.2％或至少1.5％。
另外的实施方案提供一种改善患有脂肪代谢障碍的患者中的生理标志物(如血糖指标、脂质参数、脂肪组织参数和患者报告的后果)的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物。
待改善的血糖指标的实例包括但不限于葡萄糖水平、稳态模型评估(HOMA)、胰岛素抵抗、空腹胰岛素水平、C-肽水平和胰岛素使用。在某些实施方案中，期望的是
待改善的脂质参数的实例包括但不限于HDL-C、LDL-C、总胆固醇、VLDL-C、非HDL-C、apoB、apoA1、apoC3(总、乳糜微粒、VLDL、LDL和HDL)、游离脂肪酸和/或脂蛋白粒度和/或数量将针对改善评估。
待改善的脂肪组织参数的实例包括但不限于皮褶厚度、身体脂肪百分比(DEXA扫描)、脂连蛋白、瘦蛋白、体重和腰围。
待改善的患者报告的结果参数的实例包括但不限于生活质量(EQ-5D、SF36调查)和饥饿量表。
某些实施方案提供一种用于治疗患有严重或多发性胰腺炎发作的脂肪代谢障碍患者的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物。在某些实施方案中，尽管膳食脂肪限制，患者仍然患有胰腺炎。
某些实施方案提供一种用于鉴别患有脂肪代谢障碍的受试者的方法，所述方法包括遗传筛选所述受试者。某些实施方案提供一种用于鉴别处于脂肪代谢障碍风险的受试者的方法，所述方法包括遗传筛选所述受试者。在某些实施方案中，通过编码LMNA、PPARγ、PLIN1、AKT2、CIDEC或与脂肪代谢障碍相关的任何其他基因或RNA的基因或RNA转录物的序列分析进行遗传筛选。
某些实施方案提供一种用于鉴别患有脂肪代谢障碍的受试者的方法，所述方法包括通过临床评估和/或遗传筛选来筛选所述受试者。
在某些实施方案中，ApoCIII核酸为在GENBANK登录号NM_000040.1(作为SEQ IDNO:1并入本文)、从核苷酸20262640至20266603截短的GENBANK登录号NT_033899.8(作为SEQ ID NO:2并入本文)和从核苷酸6238608至6242565截短的GenBank登录号NT_035088.1(作为SEQ ID NO:4并入本文)中列出的序列中的任一个。
在某些实施方案中，ApoCIII特异性抑制剂包含能够抑制ApoCIII表达的核酸、肽、抗体、小分子或其他试剂。在某些实施方案中，核酸包含靶向ApoCIII的反义化合物。在某些实施方案中，反义化合物包含靶向ApoCIII的反义寡核苷酸。在某些实施方案中，反义寡核苷酸包含靶向ApoCIII的修饰的寡核苷酸。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸具有与SEQID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4互补的序列。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％互补。
在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸具有核碱基序列，所述核碱基序列包含与ApoCIII互补的反义寡核苷酸的至少8个连续核碱基。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸具有核碱基序列，所述核碱基序列包含ISIS 304801(SEQ ID NO:3)的至少8个连续核碱基。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸具有ISIS 304801(SEQ ID NO:3)的核碱基序列。在某些实施方案中，靶向ApoCIII的修饰的寡核苷酸具有不同于SEQ ID NO:3的序列的序列。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸具有包含选自美国专利7,598,227、美国专利7,750,141、PCT公布WO 2004/093783或PCT公布WO 2012/149495中的任何序列的序列的至少8个连续核碱基的核碱基序列，所述专利均以引用的方式并入本文。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸具有选自美国专利7,598,227、美国专利7,750,141、PCT公布WO 2004/093783或PCT公布WO 2012/149495中公开的任何序列的序列，所述专利均以引用的方式并入本文。
在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸由单链修饰的寡核苷酸组成。
在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸由12-30个连接的核苷组成。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸由19-22个连接的核苷组成。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸由20个连接的核苷组成。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸由20个连接的核苷和ISIS 304801(SEQ ID NO:3)的核碱基序列组成。
在某些实施方案中，化合物包含至少一个修饰的核苷间键联。在某些实施方案中，核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
在某些实施方案中，化合物包含至少一个包含修饰的糖的核苷。在某些实施方案中，至少一个修饰的糖为双环糖。在某些实施方案中，至少一个修饰的糖包含2’-O-甲氧基乙基。
在某些实施方案中，化合物包含至少一个包含修饰的核碱基的核苷。在某些实施方案中，修饰的核碱基为5-甲基胞嘧啶。
在某些实施方案中，化合物包含修饰的寡核苷酸，所述修饰的寡核苷酸包含：(i)由连接的脱氧核苷组成的缺口区段；(ii)由连接的核苷组成的5’翼区段；(iii)由连接的核苷组成的3’翼区段，其中所述缺口区段位于紧邻且介于5’翼区段与3’翼区段之间，并且其中每个翼区段的每个核苷包含修饰的糖。
在某些实施方案中，化合物包含修饰的寡核苷酸，所述修饰的寡核苷酸包含：(i)由8-12个连接的脱氧核苷组成的缺口区段；(ii)由1-5个连接的核苷组成的5’翼区段；(iii)由1-5个连接的核苷组成的3’翼区段，其中所述缺口区段位于紧邻且介于5’翼区段与3’翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶，并且其中至少一个核苷间键联是硫代磷酸酯键联。在某些实施方案中，每个核苷间键联为硫代磷酸酯键联。
在某些实施方案中，化合物包含修饰的寡核苷酸，所述修饰的寡核苷酸包含：(i)由10个连接的脱氧核苷组成的缺口区段；(ii)由5个连接的核苷组成的5’翼区段；(iii)由5个连接的核苷组成的3’翼区段，其中所述缺口区段位于紧邻且介于5’翼区段与3’翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶，并且其中至少一个核苷间键联是硫代磷酸酯键联。在某些实施方案中，每个核苷间键联为硫代磷酸酯键联。
某些实施方案提供一种治疗、预防、延迟或改善动物中的局部脂肪代谢障碍或与局部脂肪代谢障碍相关的疾病的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含具有SEQ ID NO:3的序列的修饰的寡核苷酸的化合物，所述修饰的寡核苷酸包含：(i)由10个连接的脱氧核苷组成的缺口区段；(ii)由5个连接的核苷组成的5’翼区段；(iii)由5个连接的核苷组成的3’翼区段，其中所述缺口区段位于紧邻且介于5’翼区段与3’翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶，并且其中至少一个核苷间键联是硫代磷酸酯键联。在某些实施方案中，每个核苷间键联为硫代磷酸酯键联。
某些实施方案提供一种治疗、预防、延迟或改善动物中的局部脂肪代谢障碍或与局部脂肪代谢障碍相关的疾病的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸与ApoCIII核酸互补，并且其中所述修饰的寡核苷酸降低TG水平、增加HDL水平和/或提高TG与HDL的比例。在某些实施方案中，ApoCIII核酸为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％互补。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸包含靶向ApoCIII的反义寡核苷酸的至少8个连续核碱基。在其他实施方案中，修饰的寡核苷酸包含ISIS 304801(SEQ ID NO:3)的核碱基序列的至少8个连续核碱基。
某些实施方案提供一种降低具有局部脂肪代谢障碍的动物中的甘油三酯水平的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含具有SEQ ID NO:3的序列的修饰的寡核苷酸的化合物，所述修饰的寡核苷酸包含：(i)由10个连接的脱氧核苷组成的缺口区段；(ii)由5个连接的核苷组成的5’翼区段；(iii)由5个连接的核苷组成的3’翼区段，其中所述缺口区段位于紧邻且介于5’翼区段与3’翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶，并且其中至少一个核苷间键联是硫代磷酸酯键联。在某些实施方案中，每个核苷间键联为硫代磷酸酯键联。
某些实施方案提供一种降低具有局部脂肪代谢障碍的动物中的甘油三酯水平的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸与ApoCIII核酸互补，并且其中所述修饰的寡核苷酸降低TG水平、增加HDL水平和/或提高TG与HDL的比例。在某些实施方案中，ApoCIII核酸为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％互补。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸包含靶向ApoCIII的反义寡核苷酸的至少8个连续核碱基。在其他实施方案中，修饰的寡核苷酸包含ISIS 304801(SEQ ID NO:3)的核碱基序列的至少8个连续核碱基。
某些实施方案提供一种预防、延迟或改善具有局部脂肪代谢障碍的动物中的心血管和/或代谢疾病、病症、病状或其症状的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含具有SEQ ID NO:3的序列的修饰的寡核苷酸的化合物，所述修饰的寡核苷酸包含：(i)由10个连接的脱氧核苷组成的缺口区段；(ii)由5个连接的核苷组成的5’翼区段；(iii)由5个连接的核苷组成的3’翼区段，其中所述缺口区段位于紧邻且介于5’翼区段与3’翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶，并且其中至少一个核苷间键联是硫代磷酸酯键联。在某些实施方案中，每个核苷间键联为硫代磷酸酯键联。
某些实施方案提供一种预防、延迟或改善具有局部脂肪代谢障碍的动物中的心血管和/或代谢疾病、病症、病状或其症状的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸与ApoCIII核酸互补，并且其中所述修饰的寡核苷酸降低TG水平、增加HDL水平和/或提高TG与HDL的比例。在某些实施方案中，ApoCIII核酸为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％互补。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸包含靶向ApoCIII的反义寡核苷酸的至少8个连续核碱基。在其他实施方案中，修饰的寡核苷酸包含ISIS 304801(SEQ ID NO:3)的核碱基序列的至少8个连续核碱基。
某些实施方案提供一种预防、延迟或改善具有局部脂肪代谢障碍的动物中的胰腺炎或其症状的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含具有SEQ ID NO:3的序列的修饰的寡核苷酸的化合物，所述修饰的寡核苷酸包含：(i)由10个连接的脱氧核苷组成的缺口区段；(ii)由5个连接的核苷组成的5’翼区段；(iii)由5个连接的核苷组成的3’翼区段，其中所述缺口区段位于紧邻且介于5’翼区段与3’翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶，并且其中至少一个核苷间键联是硫代磷酸酯键联。在某些实施方案中，每个核苷间键联为硫代磷酸酯键联。
某些实施方案提供一种预防、延迟或改善具有局部脂肪代谢障碍的动物中的胰腺炎或其症状的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸与ApoCIII核酸互补，并且其中所述修饰的寡核苷酸降低TG水平、增加HDL水平和/或提高TG与HDL的比例。在某些实施方案中，ApoCIII核酸为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％互补。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸包含靶向ApoCIII的反义寡核苷酸的至少8个连续核碱基。在其他实施方案中，修饰的寡核苷酸包含ISIS 304801(SEQ ID NO:3)的核碱基序列的至少8个连续核碱基。
在某些实施方案中，动物为人。
在某些实施方案中，具有脂肪代谢障碍的动物处于胰腺炎的风险。在某些实施方案中，降低肝脏和/或小肠中的ApoCIII水平可预防胰腺炎。在某些实施方案中，降低TG水平、提高HDL水平和/或提高TG与HDL的比例可预防胰腺炎。
在某些实施方案中，降低具有脂肪代谢障碍的动物的肝脏和/或小肠中的ApoCIII水平增强餐后TG的清除。在某些实施方案中，升高HDL水平和/或提高TG与HDL的比例增强具有脂肪代谢障碍的动物中的餐后TG的清除。在某些实施方案中，降低肝脏和/或小肠中的ApoCIII水平降低具有脂肪代谢障碍的动物中的餐后甘油三酯。在某些实施方案中，升高HDL水平和/或提高TG与HDL的比例降低餐后TG。
在某些实施方案中，化合物是胃肠外施用的。在另外的实施方案中，胃肠外施用是皮下的。
在某些实施方案中，所述化合物与第二药剂或疗法共同施用。在某些实施方案中，第二药剂是生长激素释放因子(GRF)、瘦蛋白替代剂、ApoCIII降低剂、Apo C-II降低剂、DGAT1降低剂、LPL升高剂、胆固醇降低剂、非HDL降脂剂、LDL降低剂、TG降低剂、胆固醇降低剂、HDL升高剂、鱼油、烟酸(烟酸)、贝特类、他汀类、DCCR(二氮嗪盐)、葡萄糖降低剂或抗糖尿病剂。在某些实施方案中，第二疗法为膳食脂肪限制。
瘦蛋白替代剂的一个实例为
生长激素释放因子(GRF)的一个实例为
在某些实施方案中，ApoCIII降低剂包括不同于第一药剂、贝特类或Apo B反义寡核苷酸的ApoCIII反义寡核苷酸。
在某些实施方案中，DGAT1降低剂为LCQ908。
在某些实施方案中，LPL升高剂包括升高LPL的水平的基因治疗剂(例如，GlyberaR，当突变时可导致功能失调的LPL的ApoC-II、GPIHBP1、APOA5、LMF1或其他基因的正常拷贝)。
在某些实施方案中，降血糖和/或抗糖尿病剂包括但不限于PPAR激动剂、二肽基肽酶(IV)抑制剂、GLP-1类似物、胰岛素或胰岛素类似物、胰岛素促分泌剂、SGLT2抑制剂、人胰淀素类似物、双胍类、α-葡萄糖苷酶抑制剂、二甲双胍、磺酰脲类、罗格列酮、氯茴苯酸、噻唑烷二酮、α-葡萄糖苷酶抑制剂等。磺酰脲可为醋磺己脲(acetohexamide)、氯磺丙脲(chlorpropamide)、甲苯磺丁脲(tolbutamide)、妥拉磺脲(tolazamide)、格列美脲(glimepiride)、格列吡嗪(glipizide)、格列本脲(glyburide)或格列齐特(gliclazide)。氯茴苯酸可为那格列奈(nateglinide)和瑞格列奈(repaglinide)。噻唑烷二酮可以为吡格列酮(pioglitazone)和罗格列酮。α葡萄糖苷酶可以是阿卡波糖(acarbose)或米格列醇(miglitol)。
在某些实施方案中，胆固醇或降脂剂包括但不限于他汀类、胆汁酸螯合剂、烟酸和贝特类。他汀类可以是阿托伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、瑞舒伐他汀和辛伐他汀等。胆汁酸螯合剂可以是考来维仑(colesevelam)、考来烯胺(cholestyramine)、考来替泊(colestipol)和类似物。贝特类药物可以是吉非贝齐、非诺贝特(fenofibrate)、氯贝丁酯(clofibrate)等。治疗性生活方式改变可为膳食脂肪限制。
在某些实施方案中，HDL增加剂包括胆固醇酯转移蛋白(CETP)抑制药物(如托塞匹布)、过氧化物酶体增殖活化的受体激动剂、Apo-A1、吡格列酮等。
在某些实施方案中，化合物和第二药剂同时或相继施用。
在某些实施方案中，化合物为盐形式。
在某些实施方案中，化合物还包含药学上可接受的载体或稀释剂。
在某些实施方案中，化合物为缀合的。在某些实施方案中，化合物为GalNAc缀合的。在某些实施方案中，化合物包含具有下式的GalNAc缀合物基团：
在某些实施方案中，缀合的化合物具有下式：
某些实施方案提供包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物用于降低具有脂肪代谢障碍的动物中的ApoCIII水平的用途。在某些实施方案中，ApoCIII水平在肝脏或小肠中降低。
某些实施方案提供一种包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物，所述化合物用于：治疗、预防、延迟或改善动物中的局部脂肪代谢障碍或与局部脂肪代谢障碍相关的疾病；降低具有局部脂肪代谢障碍的动物中的甘油三酯水平；增加HDL水平和/或提高具有局部脂肪代谢障碍的动物中TG与HDL的比例；预防、延迟或改善具有局部脂肪代谢障碍的动物中的心血管和/或代谢疾病、病症、病状或其症状；和/或预防、延迟或改善具有局部脂肪代谢障碍的动物中的胰腺炎或其症状。
某些实施方案提供一种包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物，其用于制备用以治疗、预防、延迟或改善脂肪代谢障碍的药物。
某些实施方案提供包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物在制备用于降低具有脂肪代谢障碍的动物中的ApoCIII水平的药物中的用途。在某些实施方案中，ApoCIII水平在肝脏或小肠中降低。
某些实施方案提供一种包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物在制备用于降低具有脂肪代谢障碍的动物中的TG水平、增加HDL水平和/或提高TG与HDL的比例的药物中的用途。
某些实施方案提供包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物在制备用于预防、治疗、改善或减轻具有脂肪代谢障碍的动物中的心血管或代谢疾病的药物中的用途。
某些实施方案提供包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物在制备用于预防、治疗、改善或减轻具有脂肪代谢障碍的动物中的胰腺炎的药物中的用途。
某些实施方案提供包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物在制备用于预防、治疗、改善或减轻具有脂肪代谢障碍的动物中的肝脂肪变性、NAFLD、NASH、肝硬化或肝癌的药物中的用途。
在某些实施方案中，用于制备药物的ApoCIII特异性抑制剂为能够抑制ApoCIII表达的核酸、肽、抗体、小分子或其他试剂。在某些实施方案中，核酸为反义化合物。在某些实施方案中，反义化合物为靶向ApoCIII的修饰寡核苷酸。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸具有核碱基序列，所述核碱基序列包含ISIS 304801(SEQ ID NO:3)的至少8个连续核碱基。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％互补。
在某些实施方案中，所使用的ApoCIII特异性抑制剂为能够抑制ApoCIII表达的核酸、肽、抗体、小分子或其他试剂。在某些实施方案中，核酸为反义化合物。在某些实施方案中，反义化合物为靶向ApoCIII的修饰寡核苷酸。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸具有核碱基序列，所述核碱基序列包含ISIS 304801(SEQ ID NO:3)的至少8个连续核碱基。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％互补。
反义化合物
低聚化合物包括但不限于寡核苷酸、寡核苷、寡核苷酸类似物、寡核苷酸模拟物、反义化合物、反义寡核苷酸和siRNA。低聚化合物可为靶核酸的“反义序列”，意味着其能够与靶核酸经由氢键键结进行杂交。
本文提供的反义化合物是指能够经历通过氢键合与靶核酸杂交的低聚化合物。反义化合物的实例包括单链和双链化合物，诸如反义寡核苷酸、siRNA、shRNA和miRNA。
在某些实施方案中，反义化合物具有在按5'至3'方向书写时包含其所靶向的靶核酸的靶区段的反向互补序列的核碱基序列。在某些这类实施方案中，反义寡核苷酸具有在按5'至3'方向书写时包含其所靶向的靶核酸的靶段的反向互补序列的核碱基序列。
在某些实施方案中，靶向ApoCIII核酸的反义化合物的长度为12至30个核苷酸。换句话说，反义化合物为12至30个连接的核碱基。在其他实施方案中，反义化合物包含由8至80个、10至80个、12至50个、15至30个、18至24个、19至22个或20个连接的核碱基组成的修饰的寡核苷酸。在某些这类实施方案中，反义化合物包含由8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个、55个、56个、57个、58个、59个、60个、61个、62个、63个、64个、65个、66个、67个、68个、69个、70个、71个、72个、73个、74个、75个、76个、77个、78个、79个或80个连接的核碱基长度，或处于由任何两个上述值所界定的范围组成的修饰的寡核苷酸。在一些实施方案中，反义化合物为反义寡核苷酸。
在某些实施方案中，反义化合物包括缩短或截短的修饰的寡核苷酸。缩短或截短的修饰的寡核苷酸可在5'端缺失一个或多个核苷(5'截短)、在3'端缺失一个或多个核苷(3'截短)或在中心部分缺失一个或多个核苷。或者，缺失的核苷可散布于整个反义化合物中，例如在5'端有一个核苷缺失和3'端有一个核苷缺失的反义化合物中。
当单一额外核苷存在于延长的寡核苷酸中时，额外核苷可位于寡核苷酸的中心部分、5'或3'端。当存在两个或更多个额外亚单位时，所添加的亚单位可彼此邻近，例如在寡核苷酸的中心部分、5'端(5'添加)或3'端(3'添加)上添加有两个核苷的寡核苷酸中。或者，所添加的核苷可散布于整个反义化合物中，例如在5'端上添加有一个核苷并且3'端上添加有一个亚单位的寡核苷酸中。
有可能增加或减少反义化合物(如反义寡核苷酸)的长度和/或引入错配碱基而不消除活性。例如，在Woolf等人(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:7305-7309,1992)中，测试长度为13-25个核碱基的一系列反义寡核苷酸在卵母细胞注射模型中诱导目标RNA裂解的能力。长度为25个核碱基且在接近反义寡核苷酸的末端处具有8或11个错配碱基的反义寡核苷酸能够导引靶mRNA进行特异性裂解，但程度低于不含错配的反义寡核苷酸。同样，目标特异性裂解可使用具有13个核碱基的反义寡核苷酸(包括具有1或3个错配者)达成。
Gautschi等人(J.Natl.Cancer Inst.93:463-471,2001年3月)证明与bcl-2mRNA具有100％互补性且与bcl-xL mRNA具有3个错配的寡核苷酸在体外及体内减少bcl-2及bcl-xL两者的表达的能力。此外，这个寡核苷酸展现有效的体内抗肿瘤活性。
Maher和Dolnick(Nuc.Acid.Res.16:3341-3358,1988)分别测试一系列具有14个核碱基的串联反义寡核苷酸以及包含所述串联反义寡核苷酸中的两个或三个的序列的具有28个及42个核碱基的反义寡核苷酸在家兔网状红血球测定中阻止人DHFR转译的能力。3个具有14个核碱基的反义寡核苷酸各自能够单独抑制转译，但程度相较于具有28个或42个核碱基的反义寡核苷酸而言更适中。
反义化合物基序
在某些实施方案中，靶向ApoCIII核酸的反义化合物具有排列成一定型态或基序的化学上修饰的亚单位，以赋予反义化合物以如抑制活性增强、对靶核酸的结合亲和力增强或对由体内核酸酶引起的降解具抗性的性质。
嵌合反义化合物通常含有至少一个修饰的以赋予增强的核酸酶降解抗性、增加的细胞吸收、增强的对靶核酸的结合亲和力和/或增强的抑制活性的区。嵌合反义化合物的第二区可任选用作细胞核酸内切酶RNA酶H的底物，所述酶裂解RNA:DNA双螺旋体的RNA链。
具有缺口聚物基序的反义化合物被认为是嵌合反义化合物。在缺口聚物中，具有多个支持RNA酶H裂解的核苷酸的内部区位于具有多个在化学上与内部区的核苷不同的核苷酸的外部区之间。在具有缺口聚物基序的反义寡核苷酸的状况下，缺口区段一般用作核酸内切酶裂解的底物，而翼区段包含修饰的核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的区由构成每个相异区的糖部分的类型来区分。用于区分缺口聚物的各区的糖部分的类型在一些实施方案中可包括β-D-核糖核苷、β-D-脱氧核糖核苷、2'-修饰的核苷(所述2'-修饰的核苷可尤其包括2'-MOE和2’-O-CH3)，以及双环糖修饰的核苷(所述双环糖修饰的核苷可包括具有4’-(CH2)n-O-2’桥的那些核苷，其中n＝1或n＝2)。优选地，每一个不同的区域包括均一的糖部分。翼-缺口-翼基序常被描述为“X-Y-Z”，其中“X”表示5'翼区的长度，“Y”表示缺口区的长度，且“Z”表示3'翼区的长度。本文所用的描述为“X-Y-Z”的缺口聚物具有一定构型以使缺口段位于紧邻5'翼段及3'翼段中的每一个。因此，在5'翼段与缺口段之间，或缺口段与3'翼段之间不存在介入的核苷酸。本文所述的任何反义化合物均可具有缺口聚物基序。在某些实施方案中，X与Z相同；在其他实施方案中，它们不同。在某些实施方案中，Y为8至15个核苷。X、Y或Z可为1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个或更多核苷中的任一个。因此，缺口聚物包括但不限于例如5-10-5、4-8-4、4-12-3、4-12-4、3-14-3、2-13-5、2-16-2、1-18-1、3-10-3、2-10-2、1-10-1、2-8-2、6-8-6、5-8-5、1-8-1、2-6-2、2-13-2、1-8-2、2-8-3、3-10-2、1-18-2或2-18-2。
在某些实施方案中，反义化合物具有“翼聚体(wingmer)”基序，其具有翼-缺口或缺口-翼构型，即如上文对于缺口聚物构型所述的X-Y或Y-Z构型。因此，翼聚体构型包括但不限于例如5-10、8-4、4-12、12-4、3-14、16-2、18-1、10-3、2-10、1-10、8-2、2-13或5-13。
在某些实施方案中，靶向ApoCIII核酸的反义化合物拥有5-10-5缺口聚物基序。
在某些实施方案中，靶向ApoCIII核酸的反义化合物具有缺口加宽的基序。
靶核酸、靶区域和核苷酸序列
编码ApoCIII的核苷酸序列包括但不限于以下：GENBANK登录号NM_000040.1(作为SEQ ID NO:1并入本文)、从核苷酸20262640至20266603截短的GENBANK登录号NT_033899.8(作为SEQ ID NO:2并入本文)和从核苷酸6238608至6242565截短的GenBank登录号NT_035088.1(作为SEQ ID NO:4并入本文)。
应了解，本文中所含的实例中的各SEQ ID NO中所列的序列与糖部分、核苷间键联或核碱基的任何修饰无关。因而，由SEQ ID NO定义的反义化合物可独立地包含糖部分、核苷间键联或核碱基的一个或多个修饰。由Isis编号(Isis No)描述的反义化合物指示核酸碱基序列与基序的组合。
在某些实施方案中，靶区域为靶核酸的结构明确的区。例如，靶区域可包含3’UTR、5’UTR、外显子、内含子、外显子/内含子接合部、编码区、翻译起始区、翻译终止区，或其他所定义的核酸区域。关于ApoCIII的结构上定义的区域可通过登录号从序列数据库如NCBI获得并且所述信息以引用的方式并入本文。在某些实施方案中，靶区域可涵盖从靶区域内一个靶区段的5’靶位点到所述靶区域内另一靶区段的3’靶位点的序列。
在某些实施方案中，“靶区段”是核酸内的靶区域的较小分部分。例如，靶区段可为一个或多个反义化合物靶向的靶核酸的核苷酸序列。“5’靶位点”是指靶区段的最5’核苷酸。“3’靶位点”是指靶区段的最3’核苷酸。
靶区域可含有一个或多个靶区段。靶区域内的多个靶区段可重叠。或者，它们可不相重叠。在某些实施方案中，靶区域内的靶区段相隔至多约300个核苷酸。在某些实施方案中，靶区域内的靶区段相隔靶核酸上一定数目的核苷酸，所述数目为、为约、为至多、为至多约250个、200个、150个、100个、90个、80个、70个、60个、50个、40个、30个、20个或10个核苷酸，或为由前述任何两个值所界定的范围。在某些实施方案中，靶区域内的靶区段相隔靶核酸上的至多或至多约5个核苷酸。在某些实施方案中，靶区段为连续的。涵盖由具有为本文所列的5'靶位点或3'靶位点中的任一个的起始核酸的范围所界定的靶区。
靶向包括确定至少一个与反义化合物杂交，从而出现所需作用的靶区段。在某些实施方案中，所需作用为mRNA靶核酸水平降低。在某些实施方案中，所需作用为由靶核酸编码的蛋白质水平的降低或与靶核酸有关的表型改变。
适合的靶区段可见于5'UTR、编码区、3'UTR、内含子、外显子或外显子/内含子接合点内。含有起始密码子或终止密码子的靶区段也为适合的靶区段。适合的靶区段可尤其排除某一结构明确的区，诸如起始密码子或终止密码子。
确定适合的靶区段可包括将靶核酸的序列与整个基因组中的其他序列相比较。举例来说，可使用BLAST算法来鉴别不同核酸当中具相似性的区域。这个比较可预防选择可能以非特异性方式与除所选靶核酸以外的序列(即非靶或脱靶序列)杂交的反义化合物序列。
反义化合物在活性靶区内的活性(例如如由靶核酸水平的降低百分比所定义)可能不同。在某些实施方案中，ApoCIII mRNA水平的降低指示对ApoCIII表达的抑制。ApoCIII蛋白质水平的降低可指示靶mRNA表达的抑制。此外，表型改变可指示ApoCIII表达的抑制。例如，HDL水平的增加、LDL水平的降低或TG水平的降低为可针对ApoCIII表达的抑制来进行评估的表型变化。还可评估其他表型指标，例如，与心血管或代谢疾病相关的症状，例如，心绞痛、胸痛、气短、心悸、无力、头晕、恶心、出汗、心动过速、心动过缓、心律失常、房颤、下肢肿胀、紫绀、疲劳、昏厥、面部麻木、四肢麻木、跛行或肌肉痉挛、腹部胀气或发烧。
杂交
在一些实施方案中，在本文公开的反义化合物与ApoCIII核酸之间进行杂交。杂交的最常见机制涉及核酸分子的互补核碱基之间的氢键键结(例如沃森-克里克、霍氏或反霍氏氢键键结)。
杂交可在不同条件下进行。严格条件具序列依赖性且由待杂交的核酸分子的性质和组成决定。
确定序列是否特异性杂交至靶核酸的方法是本领域中熟知的(Sambrook和Russell,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第3版,2001,CSHL Press)。在某些实施方案中，本文提供的反义化合物可与ApoCIII核酸特异性杂交。
互补性
当反义化合物中足够数目的核碱基可与靶核酸中的相应核碱基进行氢键合，从而出现所需作用(例如对靶核酸(诸如ApoCIII)的反义抑制)时，反义化合物与靶核酸彼此互补。
反义化合物可在ApoCIII核酸的一个或多个区段上杂交，以使得介入或相邻区段不参与杂交事件(例如环结构、错配或发夹结构)。
在某些实施方案中，本文提供的反义化合物或其指定部分与ApoCIII核酸、靶区域、靶区段或其指定部分为或为至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％互补。反义化合物与靶核酸的互补性百分比可使用常规方法测定。
举例来说，反义化合物中反义化合物的20个核碱基中有18个核碱基与靶区互补且因此特异性杂交将表示90％互补性。在这个实施例中，其余非互补核碱基可与互补核碱基丛集或交替并且不需要彼此相邻或与互补核碱基相邻。因此，长18个核苷酸并且具有4(四)个非互补核碱基且所述非互补核碱基侧接有两个与靶核酸完全互补的区的反义化合物将与靶核酸具有77.8％总体互补性且因此将处于本发明的范围内。反义化合物与靶核酸的区域的互补性百分比可常规地使用本领域中已知的BLAST程序(基本局部比对搜寻工具)和PowerBLAST程序来测定(Altschul等人，J.Mol.Biol.,1990,215,403410；Zhang和Madden，Genome Res.,1997,7,649 656)。同源性、序列同一性或互补性的百分比可通过例如使用Smith和Waterman(Adv.Appl.Math.,1981,2,482-489)的算法的Gap程序(WisconsinSequence Analysis Package,Version 8for Unix,Genetics Computer Group,University Research Park,Madison Wis.)使用默认设置来测定。
在某些实施方案中，本文提供的反义化合物或其指定部分与靶核酸或其指定部分完全互补(即100％互补)。例如，反义化合物可与ApoCIII核酸或其靶区域或靶区段或靶序列完全互补。本文所用的“完全互补”是指反义化合物的每个核碱基皆能够与靶核酸的相应核碱基进行准确碱基配对。举例来说，具有20个核碱基的反义化合物与长度为400个核碱基的靶序列完全互补，只要靶核酸中有具有20个核碱基的相应部分与反义化合物完全互补即可。完全互补还可参考第一和/或第二核酸的指定部分来使用。举例来说，具有30个核碱基的反义化合物中的20个核碱基的部分可与长度为400个核碱基的靶序列“完全互补”。具有30个核碱基的寡核苷酸中的20个核碱基的部分在靶序列具有含20个核碱基且每个核碱基与反义化合物中的所述20个核碱基的部分互补的相应部分的情况下与靶序列完全互补。同时，整个具有30个核碱基的反义化合物与靶序列可能完全互补或可能不是完全互补，这取决于反义化合物的其余10个核碱基是否也与靶序列互补。
非互补核碱基的位置可处于反义化合物的5'端或3'端处。或者，一个或多个非互补核碱基可处于反义化合物的内部位置处。当存在两个或更多个非互补核碱基时，它们可为连续(即连接的)或不连续的。在一个实施方案中，非互补核碱基位于缺口聚物反义寡核苷酸的翼段中。
在某些实施方案中，长度为或为达12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个或20个核碱基的反义化合物相对于靶核酸(诸如ApoCIII核酸)或其指定部分包含至多4个、至多3个、至多2个或至多1个非互补核碱基。
在某些实施方案中，长度为或为达12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个或30个核碱基的反义化合物相对于靶核酸(诸如ApoCIII核酸)或其指定部分包含至多6个、至多5个、至多4个、至多3个、至多2个或至多1个非互补核碱基。
本文提供的反义化合物还包括与靶核酸的一部分互补的反义化合物。本文所用的“部分”是指靶核酸的区或段内确定数目的连续(即连接的)核碱基。“部分”还可指反义化合物中确定数目的连续核碱基。在某些实施方案中，反义化合物与靶区段中具有至少8个核碱基的部分互补。在某些实施方案中，反义化合物与靶区段中具有至少10个核碱基的部分互补。在某些实施方案中，反义化合物与靶区段中具有至少12个核碱基的部分互补。在某些实施方案中，反义化合物与靶区段中具有至少15个核碱基的部分互补。还涵盖与靶区段中具有至少9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或更多个(或由这些值中的任何两个所界定的范围)核碱基的部分互补的反义化合物。
同一性
本文提供的反义化合物还可与特定核苷酸序列SEQ ID NO或由特定Isis编号表示的化合物或其部分的序列具有确定的同一性百分比。如本文所用，如果反义化合物具有相同的核碱基配对能力，那么其与本文公开的序列同一。举例来说，在所公开的DNA序列中含有尿嘧啶代替胸苷的RNA将被视作与DNA序列同一，因为尿嘧啶和胸苷皆与腺嘌呤配对。还涵盖本文所述的反义化合物的缩短及延长型式以及相对于本文提供的反义化合物具有不一致碱基的化合物。不一致碱基可彼此相邻或散布于整个反义化合物中。反义化合物的同一性百分比是根据相对于与其比较的序列具有同一碱基配对的碱基的数目来计算的。
在某些实施方案中，反义化合物或其部分与本文公开的一种或多种反义化合物或SEQ ID NO或其部分具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。
修饰
核苷为碱基-糖组合。核苷的核碱基(又称为碱基)部分通常为杂环碱基部分。核苷酸为还包括共价连接至核苷的糖部分的磷酸酯基团的核苷。对于包括呋喃戊糖基糖的那些核苷，磷酸酯基可连接至糖的2'、3'或5'羟基部分。寡核苷酸是经由相邻核苷彼此共价键联形成线性聚合寡核苷酸而形成的。在寡核苷酸结构内，磷酸酯基通常被视作形成寡核苷酸的核苷间键联。
反义化合物的修饰涵盖核苷间键联、糖部分或核碱基的取代或改变。修饰的反义化合物常因具有如以下的所需性质而优于原生形式：细胞吸收增强、对核酸目标的亲和力增强、在核酸酶存在下的稳定性增强或抑制活性增强。
化学上修饰的核苷还可用于增强缩短或截短型反义寡核苷酸对其靶核酸的结合亲和力。因此，常可以具有所述化学上修饰的核苷的较短反义化合物获得类似结果。
修饰的核苷间键联
RNA和DNA的天然存在的核苷间键联为3'至5'磷酸二酯键联。相较于具有天然存在的核苷间键联的反义化合物，具有一个或多个修饰的(即非天然存在)的核苷间键联的反义化合物常会因具有所需性质(如细胞吸收增强、对靶核酸的亲和力增强及在核酸酶存在下的稳定性增强)而被优先选择。
具有修饰的核苷间键联的寡核苷酸包括保留磷原子的核苷间键联以及不具磷原子的核苷间键联。代表性含磷的核苷间键联包括但不限于磷酸二酯、磷酸三酯、甲基膦酸酯、氨基磷酸酯及硫代磷酸酯。制备含磷键及不含磷键的方法为熟知的。
在某些实施方案中，靶向ApoCIII核酸的反义化合物包含一个或多个修饰的核苷间键联。在某些实施方案中，修饰的核苷间键联为硫代磷酸酯键联。在某些实施方案中，反义化合物的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
修饰的糖部分
本发明的反义化合物可任选含有其中糖基已被修饰的一个或多个核苷。所述糖修饰的核苷可赋予反义化合物以增强的核酸酶稳定性、增强的结合亲和力或某种其他有利生物性质。在某些实施方案中，核苷包含化学上修饰的呋喃核糖环部分。化学上修饰的呋喃核糖环的实例包括不限于添加取代基(包括5'及2'取代基)；非偕位环原子桥连形成双环核酸(BNA)；核糖基环氧原子用S、N(R)或C(R1)(R2)(R、R1和R2各自独立地为H、C1-C12烷基或保护基)置换；及其组合。化学上修饰的糖的实例包括2'-F-5'-甲基取代的核苷(关于其他所公开的5',2'-双取代的核苷，参见08年8月21日公开的PCT国际申请WO2008/101157)或核糖基环氧原子被S置换且2'位上被进一步取代(参见2005年6月16日公开的公开美国专利申请US2005-0130923)；或者BNA的5'-取代(参见07年11月22日公开的PCT国际申请WO2007/134181，其中LNA被例如5'-甲基或5'-乙烯基取代)。
具有修饰的糖部分的核苷的实例包括不限于包含5'-乙烯基、5'-甲基(R或S)、4'-S、2'-F、2'-OCH3、2’-OCH2CH3、2’-OCH2CH2F和2'-O(CH2)2OCH3取代基的核苷。2’位置处的取代基还可以选自烯丙基、氨基、叠氮基、巯基、O-烯丙基、O-C1-C10烷基、OCF3、OCH2F、O(CH2)2SCH3、O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)、O-CH2-C(＝O)-N(Rm)(Rn)和O-CH2-C(＝O)-N(Rl)-(CH2)2-N(Rm)(Rn)，其中Rl、Rm和Rn各自独立地为H或取代的或未取代的C1-C10烷基。
本文所用的“双环核苷”是指包含双环糖部分的修饰的核苷。双环核酸(BNA)的实例包括不限于在4'与2'核糖基环原子之间包含桥的核苷。在某些实施方案中，本文提供的反义化合物包含一个或多个BNA核苷，其中桥包含下式的一个：4'-(CH2)-O-2'(LNA)；4'-(CH2)-S-2'；4'-(CH2)2-O-2'(ENA)；4'-CH(CH3)-O-2'和4'-CH(CH2OCH3)-O-2'(以及其类似物，参见2008年7月15日颁发的美国专利7,399,845)；4'-C(CH3)(CH3)-O-2'(以及其类似物，参见2009年1月8日公布的以WO 2009/006478公布的PCT/US2008/068922)；4'-CH2-N(OCH3)-2'(以及其类似物，参见2008年12月11日公布的以WO/2008/150729公布的PCT/US2008/064591)；4'-CH2-O-N(CH3)-2'(参见2004年9月2日公布的已公布的美国专利申请US2004-0171570)；4'-CH2-N(R)-O-2'，其中R为H、C1-C12烷基或保护基(参见2008年9月23日颁发的美国专利7,427,672)；4'-CH2-C(H)(CH3)-2'(参见Chattopadhyaya等人，J.Org.Chem.,2009,74,118-134)；以及4'-CH2-C(＝CH2)-2'(以及其类似物，参见2008年12月8日公布的以WO 2008/154401公布的PCT/US2008/066154)。
其他双环核苷已经在公开的文献中进行了报道(参见例如：Srivastava等人,J.Am.Chem.Soc.,2007,129(26)8362-8379；Frieden等人,Nucleic Acids Research,2003,21,6365-6372；Elayadi等人,Curr.Opinion Invens.Drugs,2001,2,558-561；Braasch等人,Chem.Biol.,2001,8,1-7；Orum等人,Curr.Opinion Mol.Ther.,2001,3,239-243；Wahlestedt等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,2000,97,5633-5638；Singh等人,Chem.Commun.,1998,4,455-456；Koshkin等人,Tetrahedron,1998,54,3607-3630；Kumar等人,Bioorg.Med.Chem.Lett.,1998,8,2219-2222；Singh等人,J.Org.Chem.,1998,63,10035-10039；美国专利号：7,399,845；7,053,207；7,034,133；6,794,499；6,770,748；6,670,461；6,525,191；6,268,490；美国专利公布号：US2008-0039618；US2007-0287831；US2004-0171570；美国专利申请序列号：12/129,154；61/099,844；61/097,787；61/086,231；61/056,564；61/026,998；61/026,995；60/989,574；国际申请WO 2007/134181；WO2005/021570；WO 2004/106356；WO 94/14226；以及PCT国际申请号：PCT/US2008/068922；PCT/US2008/066154；和PCT/US2008/064591)。上述各双环核苷可被制备而具有一种或多种立体化学糖构型，包括例如α-L-呋喃核糖及β-D-呋喃核糖(参见1999年3月25日公开为WO99/14226的PCT国际申请PCT/DK98/00393)。
本文所用的“单环核苷”是指包含不为双环糖部分的修饰的糖部分的核苷。在某些实施方案中，核苷的糖部分或糖部分类似物可在任何位置上被修饰或取代。
本文所用的“4'-2'双环核苷”或“4'至2'双环核苷”是指包含含连接2'碳原子与4'碳原子的桥基的呋喃糖环的双环核苷。
在某些实施方案中，BNA核苷的双环糖部分包括但不限于在呋喃戊糖基糖部分的4'与2'碳原子之间具有至少一个桥的化合物，所述桥包括但不限于包含1个或1至4个独立地选自以下的连接基团的桥：-[C(Ra)(Rb)]n-、-C(Ra)＝C(Rb)-、-C(Ra)＝N-、-C(＝NRa)-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-O-、-Si(Ra)2-、-S(＝O)x-以及-N(Ra)-；其中：x是0、1或2；n是1、2、3或4；每个Ra和Rb独立地为H、保护基团、羟基、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C5-C20芳基、取代的C5-C20芳基、杂环基、取代的杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、C5-C7脂环基、取代的C5-C7脂环基、卤素、OJ1、NJ1J2、SJ1、N3、COOJ1、酰基(C(＝O)-H)、取代的酰基、CN、磺酰基(S(＝O)2-J1)或亚磺酰基(S(＝O)-J1)；以及
各J1和J2独立地为H、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C5-C20芳基、取代的C5-C20芳基、酰基(C(＝O)-H)、取代的酰基、杂环基、取代的杂环基、C1-C12氨基烷基、取代的C1-C12氨基烷基或保护基团。
在某些实施方案中，双环糖部分的桥为-[C(Ra)(Rb)]n-、-[C(Ra)(Rb)]n-O-、-C(RaRb)-N(R)-O-或–C(RaRb)-O-N(R)-。在某些实施方案中，桥为4'-CH2-2'、4'-(CH2)2-2'、4'-(CH2)3-2'、4'-CH2-O-2'、4'-(CH2)2-O-2'、4'-CH2-O-N(R)-2'和4'-CH2-N(R)-O-2'-，其中每个R独立地为H、保护基团或C1-C12烷基。
在某些实施方案中，双环核苷进一步由异构构型定义。例如，包含4'-(CH2)-O-2'桥的核苷可呈α-L构型或呈β-D构型。α-L-亚甲基氧基(4'-CH2-O-2')BNA先前已并入展示反义活性的反义寡核苷酸中(Frieden等人,Nucleic Acids Research,2003,21,6365-6372)。
在某些实施方案中，双环核苷包括具有4'至2'桥的那些，其中此类桥包括但不限于α-L-4'-(CH2)-O-2'、β-D-4'-CH2-O-2'、4'-(CH2)2-O-2'、4'-CH2-O-N(R)-2'、4'-CH2-N(R)-O-2'、4'-CH(CH3)-O-2'、4'-CH2-S-2'、4'-CH2-N(R)-2'、4'-CH2-CH(CH3)-2'以及4'-(CH2)3-2'，其中R为H、保护基团或C1-C12烷基。
在某些实施方案中，双环核苷具有式：
其中:
Bx为杂环碱基部分；
-Qa-Qb-Qc-为-CH2-N(Rc)-CH2-、-C(＝O)-N(Rc)-CH2-、-CH2-O-N(Rc)-、-CH2-N(Rc)-O-或-N(Rc)-O-CH2；
Rc为C1-C12烷基或氨基保护基团；以及
Ta和Tb各自独立地为H、羟基保护基团、缀合物基团、反应性磷基、磷部分或与支撑介质的共价连接。
在某些实施方案中，双环核苷具有式：
其中:
Bx为杂环碱基部分；
Ta和Tb各自独立地为H、羟基保护基团、缀合物基团、反应性磷基、磷部分或与支撑介质的共价连接；
Za为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基、酰基、取代的酰基、取代的酰胺、巯基或取代的巯基。
在一个实施方案中，每个取代的基团独立地被独立地选自以下的取代基单取代或多取代：卤素、氧代、羟基、OJc、NJcJd、SJc、N3、OC(＝X)Jc、以及NJeC(＝X)NJcJd，其中每个Jc、Jd和Je独立地为H、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基且X为O或NJc。
在某些实施方案中，双环核苷具有式：
其中:
Bx为杂环碱基部分；
Ta和Tb各自独立地为H、羟基保护基团、缀合物基团、反应性磷基、磷部分或与支撑介质的共价连接；
Zb为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基或取代的酰基(C(＝O)-)。
在某些实施方案中，双环核苷具有式：
其中:
Bx为杂环碱基部分；
Ta和Tb各自独立地为H、羟基保护基团、缀合物基团、反应性磷基、磷部分或与支撑介质的共价连接；
Rd为C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或取代的C2-C6炔基；
各qa、qb、qc和qd独立地为H、卤素、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或取代的C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、取代的C1-C6烷氧基、酰基、取代的酰基、C1-C6氨基烷基或取代的C1-C6氨基烷基；
在某些实施方案中，双环核苷具有式：
其中:
Bx为杂环碱基部分；
Ta和Tb各自独立地为H、羟基保护基团、缀合物基团、反应性磷基、磷部分或与支撑介质的共价连接；
qa、qb、qe和qf各自独立地为氢、卤素、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、取代的C1-C12烷氧基、OJj、SJj、SOJj、SO2Jj、NJjJk、N3、CN、C(＝O)OJj、C(＝O)NJjJk、C(＝O)Jj、O-C(＝O)NJjJk、N(H)C(＝NH)NJjJk、N(H)C(＝O)NJjJk或N(H)C(＝S)NJjJk；
或qe和qf一起为＝C(qg)(qh)；
qg和qh各自独立地为H、卤素、C1-C12烷基或取代的C1-C12烷基；
已描述了具有4'-CH2-O-2'桥的腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、5-甲基-胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶双环核苷的合成和制备连同其低聚化以及核酸识别性质(Koshkin等人,Tetrahedron,1998,54,3607-3630)。双环核苷的合成还已描述于WO 98/39352和WO 99/14226中。
还已制备具有4'至2'桥连基团诸如4'-CH2-O-2'和4'-CH2-S-2'的各种双环核苷的类似物(Kumar等人,Bioorg.Med.Chem.Lett.,1998,8,2219-2222)。包含双环核苷作为核酸聚合酶的底物的寡脱氧核糖核苷酸双螺旋体的制备也已有所描述(Wengel等人,WO 99/14226)。此外，2'-氨基-BNA(一种新颖的构形受限的高亲和力寡核苷酸类似物)的合成在本领域中已有所描述(Singh等人,J.Org.Chem.,1998,63,10035-10039)。另外，2'-氨基-BNA和2'-甲基氨基-BNA已被制备且它们与互补的RNA及DNA链的双螺旋体的热稳定性先前已有所报道。
在某些实施方案中，双环核苷具有式：
其中:
Bx为杂环碱基部分；
Ta和Tb各自独立地为H、羟基保护基团、缀合物基团、反应性磷基、磷部分或与支撑介质的共价连接；
各qi、qj、qk和ql独立地为H、卤素、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、取代的C1-C12烷氧基、OJj、SJj、SOJj、SO2Jj、NJjJk、N3、CN、C(＝O)OJj、C(＝O)NJjJk、C(＝O)Jj、O-C(＝O)NJjJk、N(H)C(＝NH)NJjJk、N(H)C(＝O)NJjJk或N(H)C(＝S)NJjJk；以及
qi和qj或ql和qk一起为＝C(qg)(qh)，其中qg和qh各自独立地为H、卤素、C1-C12烷基或取代的C1-C12烷基。
一种具有4'-(CH2)3-2'桥和烯基类似物桥4'-CH＝CH-CH2-2'的碳环双环核苷已有所描述(Freier等人,Nucleic Acids Research,1997,25(22),4429-4443和Albaek等人,J.Org.Chem.,2006,71,7731-7740)。碳环双环核苷的合成和制备连同其低聚化和生物化学研究也已有所描述(Srivastava等人,J.Am.Chem.Soc.2007,129(26),8362-8379)。
在某些实施例中，双环核苷包括但不限于如下所描绘的(A)α-L-亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA；(B)β-D-亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA；(C)亚乙基氧基(4’-(CH2)2-O-2’)BNA；(D)氨基氧基(4’-CH2-O-N(R)-2’)BNA；(E)氧基氨基(4’-CH2-N(R)-O-2’)BNA；(F)甲基(亚甲基氧基)(4’-CH(CH3)-O-2’)BNA(又称为约束的乙基或cEt)；(G)亚甲基硫代(4’-CH2-S-2’)BNA；(H)亚甲基-氨基(4’-CH2-N(R)-2’)BNA；(I)甲基碳环(4’-CH2-CH(CH3)-2’)BNA；(J)亚丙基碳环(4’-(CH2)3-2’)BNA以及(K)乙烯基BNA。
其中Bx为碱基部分且R独立地为H、保护基团、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
如本文所用，“修饰的四氢吡喃核苷”或“修饰的THP核苷”是指具有取代普通核苷中的呋喃戊糖基残基的6元四氢吡喃“糖”的核苷并且也可以称为糖替代物。修饰的THP核苷包括但不限于在本领域中称为己糖醇核酸(HNA)、anitol核酸(ANA)、甘露醇核酸(MNA)(参见Leumann,Bioorg.Med.Chem.,2002,10,841-854)或具有如下所示的四氢吡喃环系统的氟HNA(F-HNA)：
在某些实施方案中，选择具有下式的糖替代物：
其中:
Bx为杂环碱基部分；
T3和T4各自独立地为将四氢吡喃核苷类似物连接至低聚化合物的核苷间连接基团，或者T3和T4中的一个为将四氢吡喃核苷类似物连接至低聚化合物或寡核苷酸的核苷间连接基团，且T3和T4中的另一个为H、羟基保护基团、连接的缀合物基团或5'或3'-端基；
q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7各自独立地为H、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或取代的C2-C6炔基；以及
R1和R2中的一个为氢且另一个选自卤素、取代或未取代的烷氧基、NJ1J2、SJ1,N3、OC(＝X)J1、OC(＝X)NJ1J2、NJ3C(＝X)NJ1J2和CN，其中X为O、S或NJ1，且J1、J2和J3各自独立地为H或C1-C6烷基。
在某些实施方案中，q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7各自独立地为H。在某些实施方案中，q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7中至少一个不为H。在某些实施方案中，q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7中至少一个为甲基。在某些实施方案中，提供THP核苷，其中R1和R2中的一个为F。在某些实施方案中，R1为氟且R2为H；R1为甲氧基并且R2为H，以及R1为甲氧基乙氧基并且R2为H。
在某些实施方案中，糖替代物包含具有多于5个原子和多于一个杂原子的环。例如包含吗啉代糖部分的核苷以及它们在低聚化合物中的用途已有所报道(参见例如：Braasch等人,Biochemistry,2002,41,4503-4510；和美国专利5,698,685；5,166,315；5,185,444以及5,034,506)。如在此所使用，术语“吗啉代”是指具有以下式的糖替代物：
在某些实施方案中，可例如通过添加或改变来自以上吗啉代结构的各种取代基来修饰吗啉代。所述糖替代物在本文中称为“修饰的吗啉代”。
还提供了修饰的组合，不限于如2'-F-5'-甲基取代的核苷(对于其他公开的5',2'-双取代核苷，参见8/21/08公布的PCT国际申请WO2008/101157)和用S替代核糖基环氧原子以及在2'-位上的进一步取代(参见2005年6月16日公布的已公布的美国专利申请US2005-0130923)或替代地双环核酸的5'-取代(参见11/22/07公布的PCT国际申请WO2007/134181，其中4'-CH2-O-2'双环核苷在5'位上被5'-甲基或5'-乙烯基进一步取代)。碳环双环核苷的合成和制备连同其低聚和生物化学研究也已有所描述(参见，例如，Srivastava等人,J.Am.Chem.Soc.2007,129(26),8362-8379)。
在某些实施方案中，反义化合物包含一个或多个修饰的环己烯基核苷，其为用六元环己烯基替代天然存在的核苷中的呋喃戊糖基残基的核苷。修饰的环己烯基核苷包括但不限于本领域中描述的那些(参见例如共同拥有的已公布的2010年4月10日公布的PCT申请WO 2010/036696；Robeyns等人,J.Am.Chem.Soc.,2008,130(6),1979-1984；Horváth等人,Tetrahedron Letters,2007,48,3621-3623；Nauwelaerts等人,J.Am.Chem.Soc.,2007,129(30),9340-9348；Gu等人,Nucleosides,Nucleotides&Nucleic Acids,2005,24(5-7),993-998；Nauwelaerts等人,Nucleic Acids Research,2005,33(8),2452-2463；Robeyns等人,Acta Crystallographica,Section F:Structural Biology and CrystallizationCommunications,2005,F61(6),585-586；Gu等人,Tetrahedron,2004,60(9),2111-2123；Gu等人,Oligonucleotides,2003,13(6),479-489；Wang等人,J.Org.Chem.,2003,68,4499-4505；Verbeure等人,Nucleic Acids Research,2001,29(24),4941-4947；Wang等人,J.Org.Chem.,2001,66,8478-82；Wang等人,Nucleosides,Nucleotides&Nucleic Acids,2001,20(4-7),785-788；Wang等人,J.Am.Chem.,2000,122,8595-8602；已公布的PCT申请WO06/047842；以及已公布的PCT申请WO 01/049687；其各自的内容以引用的方式整体并入本文)。某些修饰的环己烯基核苷具有式X。
其中独立地对于所述至少一种式X的环己烯基核苷类似物中的每一个：
Bx为杂环碱基部分；
T3和T4各自独立地为将环己烯基核苷类似物连接至反义化合物的核苷间连接基团，或者T3和T4中的一个为将四氢吡喃核苷类似物连接至反义化合物的核苷间连接基团且T3和T4中的另一个为H、羟基保护基、连接的缀合物基团或5'或3'-端基；以及
q1、q2、q3、q4、q5、q6、q7、q8以及q9各自独立地为H、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C2-C6炔基或其他糖取代基团。
许多其他单环、双环和三环的环系统为本领域中已知的并且适合作为可用来修饰用于并入本文所提供的低聚化合物中的核苷的糖替代物(参见，例如，综述文章：Leumann,Christian J.Bioorg.&Med.Chem.,2002,10,841-854)。可对所述环系统进行各种其他的取代以进一步增强活性。
本文所用的“2’-修饰的糖”是指在2’位上修饰的呋喃糖基糖。在某些实施方案中，所述修饰包括选自以下的取代基：包括但不限于卤基、取代和未取代的烷氧基、取代和未取代的硫烷基、取代和未取代的氨基烷基、取代和未取代的烷基、取代和未取代的烯丙基以及取代和未取代的炔基。在某些实施方案中，2’修饰选自包括但不限于以下的取代基：O[(CH2)nO]mCH3、O(CH2)nNH2、O(CH2)nCH3、O(CH2)nF、O(CH2)nONH2、OCH2C(＝O)N(H)CH3、以及O(CH2)nON[(CH2)nCH3]2，其中n和m为1至约10。其他2'取代基还可选自：C1-C12烷基、取代的烷基、烯基、炔基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基或O-芳烷基、SH、SCH3、OCN、Cl、Br、CN、F、CF3、OCF3、SOCH3、SO2CH3、ONO2、NO2、N3、NH2、杂环烷基、杂环烷芳基、氨基烷氨基、聚烷氨基、取代的硅烷基、RNA裂解基团、报告基团、嵌入剂、改进药物动力学性质的基团、或改进反义化合物的药效学性质的基团，以及其他具有类似性质的取代基。在某些实施方案中，修饰的核苷包含2'-MOE侧链(Baker等人,J.Biol.Chem.,1997,272,11944-12000)。所述2'-MOE取代已被描述为相较于未修饰的核苷及其他修饰的核苷(如2'-O-甲基、O-丙基及O-氨基丙基)具有改善的结合亲和力。具有2'-MOE取代基的寡核苷酸还已展示为基因表达的反义抑制剂且具有有希望用于体内使用的特征(Martin,Helv.Chim.Acta,1995,78,486-504；Altmann等人,Chimia,1996,50,168-176；Altmann等人,Biochem.Soc.Trans.,1996,24,630-637；以及Altmann等人,Nucleosides Nucleotides,1997,16,917-926)。
本文所用的“2'-修饰的核苷”或“2'-取代的核苷”是指包含在2'位上包含除H或OH以外的取代基的糖的核苷。2'-修饰的核苷包括但不限于其中连接糖环的两个碳原子的桥连接糖环的2'碳与另一个碳的双环核苷以及具有如以下的非桥连2'取代基的核苷：烯丙基、氨基、叠氮基、硫基、O-烯丙基、O-C1-C10烷基、-OCF3、O-(CH2)2-O-CH3、2'-O(CH2)2SCH3、O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)或O-CH2-C(＝O)-N(Rm)(Rn)，其中Rm和Rn各自独立地为H或取代或未取代的C1-C10烷基。2'-修饰的核苷可进一步例如在糖的其他位置上和/或在核碱基上包含其他修饰。
本文所用的“2’-F”是指包括在糖环的2'位上包含氟基的糖的核苷。
本文所用的“2’-OMe”或“2’-OCH3”、“2’-O-甲基”或“2’-甲氧基”各自是指包含在糖环的2'位上包含-OCH3基团的糖的核苷。
本文所用的“MOE”或“2’-MOE”或“2’-OCH2CH2OCH3”或“2’-O-甲氧基乙基”各自是指包含在糖环的2'位上包含-OCH2CH2OCH3基团的糖的核苷。
用于制备修饰的糖的方法为本领域技术人员所熟知。教导此类修饰的糖的制备的一些代表性美国专利包括但不限于U.S.：4,981,957；5,118,800；5,319,080；5,359,044；5,393,878；5,446,137；5,466,786；5,514,785；5,519,134；5,567,811；5,576,427；5,591,722；5,597,909；5,610,300；5,627,053；5,639,873；5,646,265；5,670,633；5,700,920；5,792,847和6,600,032，以及2005年6月2日提交且2005年12月22日公布为WO 2005/121371的国际申请PCT/US2005/019219，并且其各自以引用的方式整体并入本文。
本文所用的“寡核苷酸”是指包含多个连接的核苷的化合物。在某些实施方案中，多个核苷中的一或多个是修饰的。在某些实施方案中，寡核苷酸包含一个或多个核糖核苷(RNA)和/或脱氧核糖核苷(DNA)。
在具有修饰的糖部分的核苷酸中，核碱基部分(天然、修饰的或其组合)被维持以便与适当核酸目标杂交。
在某些实施方案中，反义化合物包含一个或多个具有修饰的糖部分的核苷酸。在某些实施方案中，修饰的糖部分为2'-MOE。在某些实施方案中，2'-MOE修饰的核苷酸排列于缺口聚物基序中。在某些实施方案中，修饰的糖部分是具有(4’-CH(CH3)-O-2’)桥接基团的双环核苷。在某些实施方案中，(4’-CH(CH3)-O-2’)修饰的核苷布置在整个缺口聚物基序的翼中。
修饰的核碱基
核碱基(或碱基)修饰或取代与天然存在的或合成的未修饰核碱基在结构上不同，但在功能上是可以互换的。天然和修饰的核碱基能够参与氢键合。这样的核碱基修饰可赋予反义化合物以核酸酶稳定性、结合亲和力或某种其他有益的生物学特性。修饰的核碱基包括合成的和天然的核碱基，诸如，例如，5-甲基胞嘧啶(5-me-C)。某些核碱基取代，包括5-甲基胞嘧啶取代，对于增加反义化合物的靶核酸结合亲和力是特别有用的。例如，5-甲基胞嘧啶取代已显示出增加核酸双链体稳定性0.6-1.2℃(Sanghvi,Y.S.,Crooke,S.T.和Lebleu,B.编,Antisense Research and Applications,CRC Press,Boca Raton,1993,第276-278页)。
额外修饰核碱基包括但不限于5-羟甲基胞嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基及其他烷基衍生物、腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基及其他烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶和2-硫代胞嘧啶、5-卤代尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基(-C≡C-CH3)尿嘧啶和胞嘧啶以及嘧啶碱基的其他炔基衍生物、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫代尿嘧啶、8-卤基、8-氨基、8-硫醇、8-硫代烷基、8-羟基和其他8-位取代的腺嘌呤和鸟嘌呤、5-卤基尤其是5-溴基、5-三氟甲基和其他5-位取代的尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤、2-F-腺嘌呤、2-氨基腺嘌呤、8-氮鸟嘌呤和8-氮腺嘌呤、7-脱氮鸟嘌呤和7-脱氮腺嘌呤和3-脱氮鸟嘌呤和3-脱氮腺嘌呤。
杂环碱基部分可包括嘌呤或嘧啶碱基被其他杂环类取代的碱基部分，例如7-脱氮腺嘌呤、7-脱氮鸟嘌呤、2-氨基吡啶和2-吡啶酮。尤其可用于提高反义化合物的结合亲和性的核碱基包括5-位上被取代的嘧啶、6-氮嘧啶和N-2、N-6和O-6位上被取代的嘌呤，包括2-氨丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。
在某些实施方案中，靶向ApoCIII核酸的反义化合物包含一个或多个修饰的核碱基。在某些实施方案中，靶向ApoCIII核酸的缺口加宽的反义寡核苷酸包含一个或多个修饰的核碱基。在某些实施方案中，修饰的核碱基为5-甲基胞嘧啶。在某些实施方案中，每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。
某些反义化合物基序和机制
在某些实施方案中，反义化合物具有排列成一定型态或基序的化学上修饰的亚单位，以赋予反义化合物以诸如抑制活性增强、对靶核酸的结合亲和力增强或对由体内核酸酶引起的降解具抗性的性质。
嵌合反义化合物通常含有至少一个修饰的以赋予增强的核酸酶降解抗性、增加的细胞吸收、增强的对靶核酸的结合亲和力和/或增强的抑制活性的区。嵌合反义化合物的第二区可赋予另一个所需的性质，例如用作细胞核酸内切酶RNA酶H的底物，所述酶裂解RNA:DNA双螺旋体的RNA链。
反义活性可以从涉及反义化合物(例如，寡核苷酸)与靶核酸的杂交的任何机制获得，其中杂交最终产生生物作用。在某些实施方案中，调节靶核酸的量和/或活性。在某些实施方案中，减少靶核酸的量和/或活性。在某些实施方案中，反义化合物与靶核酸的杂交最终导致靶核酸降解。在某些实施方案中，反义化合物与靶核酸的杂交未导致靶核酸降解。在某些实施方案中，反义化合物与靶核酸杂交的出现(占位)导致反义活性的调节。在某些实施方案中，具有特定化学基序或化学修饰的模式的反义化合物特别适合采用一种或多种机制。在某些实施方案中，反义化合物通过一种以上的机制和/或通过从未被阐述的机制起作用。因此，本文所述的反义化合物不限于特定机制。
反义机制包括但不限于RNA酶H介导的反义；RNAi机制，其利用RISC途径并且包括但不限于siRNA、ssRNA和微RNA机制；以及占位型机制。某些反义化合物可通过一种以上的此机制和/或通过另外的机制起作用。
RNA酶H介导的反义
在某些实施方案中，反义活性通过RNA酶H导致靶RNA的至少部分地裂解。RNA酶H为裂解RNA:DNA双链体的RNA链的细胞核酸内切酶。本领域已知“DNA样”的单链反义化合物在哺乳动物细胞中引发RNA酶H活性。因此，包含DNA或DNA状核苷的至少一部分的反义化合物可激活RNA酶H，导致靶核酸的裂解。在某些实施方案中，利用RNA酶H的反义化合物包含一种或多种修饰核苷。在某些实施方案中，此类反义化合物包含至少一个1-8修饰核苷的嵌段。在某些实施方案中，修饰核苷不支持RNA酶H活性。在某些实施方案中，此类反义化合物为如本文所述的缺口聚物。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口包含DNA核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口包含DNA样核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口包含DNA核苷和DNA样核苷。
具有缺口聚物基序的某些反义化合物被认为是嵌合反义化合物。在缺口聚物中，具有多个支持RNA酶H裂解的核苷酸的内部区位于具有多个在化学上与内部区的核苷不同的核苷酸的外部区之间。在具有缺口聚物基序的反义寡核苷酸的状况下，缺口区段一般用作核酸内切酶裂解的底物，而翼区段包含修饰的核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的区由构成每个相异区的糖部分的类型来区分。用于区分缺口聚物的每个区的糖部分的类型在一些实施方案中可包括β-D-核糖核苷、β-D-脱氧核糖核苷、2'-修饰的核苷(此2'-修饰的核苷可尤其包括2'-MOE和2’-O-CH3)，以及双环糖修饰的核苷(此双环糖修饰的核苷可包括具有限制性乙基的核苷)。在某些实施方案中，翼中的核苷可包括若干修饰的糖部分，包括例如2'-MOE及双环糖部分，如限制性乙基或LNA。在某些实施方案中，翼可包括若干修饰的和未修饰的糖部分。在某些实施方案中，翼可包括2'-MOE核苷、双环糖部分(如限制性乙基核苷或LNA核苷)及2'-脱氧核苷的各种组合。
每个相异区可包含均一糖部分、变体或交替的糖部分。翼-缺口-翼基序常被描述为“X-Y-Z”，其中“X”表示5'翼的长度，“Y”表示缺口的长度，且“Z”表示3'翼的长度。“X”及“Z”可包含均一、变体或交替的糖部分。在某些实施方案中，“X”及“Y”可包含一个或多个2'-脱氧核苷。“Y”可包含2’-脱氧核苷。本文所用的描述为“X-Y-Z”的缺口聚物具有一定构型以使缺口位于紧邻5'翼及3'翼中的每一个。因此，在5'翼与缺口之间，或缺口与3'翼之间不存在介入的核苷酸。本文所述的任何反义化合物均可具有缺口聚物基序。在某些实施方案中，“X”与“Z”相同；在其他实施方案中，它们不同。在某些实施方案中，“Y”为8至15个核苷。X、Y或Z可为1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、25个、30个或超过30个核苷中的任一个。
在某些实施方案中，靶向APOCIII核酸的反义化合物具有其中缺口由6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个或16个连接核苷组成的缺口聚物基序。
在某些实施方案中，反义寡核苷酸具有由如下的式A描述的糖基序：(J)m-(B)n-(J)p-(B)r-(A)t-(D)g-(A)v-(B)w-(J)x-(B)y-(J)z
其中:
每个A独立地为2'-取代的核苷；
每个B独立地为双环核苷；
每个J独立地为2'-取代的核苷或2'-脱氧核苷；
每个D为2'-脱氧核苷；
m为0-4；n为0-2；p为0-2；r为0-2；t为0-2；v为0-2；w为0-4；x为0-2；y为0-2；z为0-4；g为6-14；
其限制条件为：
m、n及r中的至少一个不为0；
w和y中的至少一个不为0；
m、n、p、r及t的总和为2至5；并且
v、w、x、y及z的总和为2至5。
RNAi化合物
在某些实施方案中，反义化合物干扰RNA化合物(RNAi)，所述RNA化合物包括双链RNA化合物(也称为短干扰RNA或siRNA)和单链RNAi化合物(或ssRNA)。此化合物至少部分地通过RISC途径起作用以降解和/或螯合靶核酸(因此包括微RNA/微RNA模拟化合物)。在某些实施方案中，反义化合物包含使其特别适合于此机制的修饰。
i.ssRNA化合物
在某些实施方案中，包括特别适合用作单链RNAi化合物(ssRNA)的那些的反义化合物包含修饰的5’末端。在某些实施方案中，5’末端包含修饰的磷酸酯部分。在某些实施方案中，此修饰的磷酸酯是稳定的(例如，与未修饰的5’磷酸酯相比，对降解/裂解有抗性)。在某些实施方案中，此5’末端核苷使5’磷酸酯部分保持稳定。某些修饰的5’末端核苷可见于本领域，例如WO/2011/139702中。
在某些实施方案中，ssRNA化合物的5’核苷具有式IIc：
其中:
T1为任选保护的磷部分；
T2为连接式IIc的化合物与低聚化合物的核苷间连接基团；
A具有下式的一个：
Q1和Q2各自独立地为H、卤素、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、取代的C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C2-C6炔基或N(R3)(R4)；
Q3为O、S、N(R5)或C(R6)(R7)；
各R3、R4、R5、R6和R7独立地为H、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基或C1-C6烷氧基；
M3为O、S、NR14、C(R15)(R16)、C(R15)(R16)C(R17)(R18)、C(R15)＝C(R17)、OC(R15)(R16)或OC(R15)(Bx2)；
R14为H、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、取代的C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或取代的C2-C6炔基；
R15、R16、R17和R18各自独立地为H、卤素、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、取代的C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或取代的C2-C6炔基；
Bx1为杂环碱基部分；
或如果Bx2存在，则Bx2为杂环碱基部分且Bx1为H、卤素、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、取代的C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或取代的C2-C6炔基；
J4、J5、J6和J7各自独立地为H、卤素、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、取代的C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或取代的C2-C6炔基；
或J4与J5或J7中的一个形成桥，其中所述桥包含1至3个选自以下的连接的双基：O、S、NR19、C(R20)(R21)、C(R20)＝C(R21)、C[＝C(R20)(R21)]和C(＝O)，且J5、J6和J7中的其他两个各自独立地为H、卤素、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、取代的C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或取代的C2-C6炔基；
各R19、R20和R21独立地为H、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、取代的C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或取代的C2-C6炔基；
G为H、OH、卤素或O-[C(R8)(R9)]n-[(C＝O)m-X1]j-Z；
各R8和R9独立地为H、卤素、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基；
X1为O、S或N(E1)；
Z为H、卤素、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C2-C6炔基或N(E2)(E3)；
E1、E2和E3各自独立地为H、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基；
n为1至约6；
m为0或1；
j为0或1；
每个取代基包含一个或多个任选受保护的取代基，所述取代基独立地选自卤素、OJ1、N(J1)(J2)、＝NJ1、SJ1、N3、CN、OC(＝X2)J1、OC(＝X2)N(J1)(J2)以及C(＝X2)N(J1)(J2)；
X2为O、S或NJ3；
各J1、J2和J3独立的为H或C1-C6烷基；
当j为1时，则Z不为卤素或N(E2)(E3)；以及
其中所述低聚化合物包含8至40个单体亚单位并且与靶核酸的至少一部分是可杂交的。
在某些实施方案中，M3为O、CH＝CH、OCH2或OC(H)(Bx2)。在某些实施方案中，M3为O。
在某些实施方案中，J4、J5、J6和J7各自为H。在某些实施方案中，J4与J5或J7中的一者形成桥。
在某些实施方案中，A具有下式的一个：
其中:
Q1和Q2各自独立的为H、卤素、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或取代的C1-C6烷氧基。在某些实施方案中，Q1和Q2各自为H。在某些实施方案中，Q1和Q2各自独立地为H或卤素。在某些实施方案中，Q1和Q2为H，并且Q1和Q2中的另一者为F、CH3或OCH3。
在某些实施方案中，T1具有下式：
其中:
Ra和Rc各自独立地为保护的羟基、保护的巯基、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、取代的C1-C6烷氧基、保护的氨基或取代的氨基；以及
Rb为O或S。在某些实施方案中，Rb为O且Ra和Rc各自独立地为OCH3、OCH2CH3或CH(CH3)2。
在某些实施方案中，G为卤素、OCH3、OCH2F、OCHF2、OCF3、OCH2CH3、O(CH2)2F、OCH2CHF2、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(C H2)2-OCH3、O(CH2)2-SCH3、O(CH2)2-OCF3、O(CH2)3-N(R10)(R11)、O(C H2)2-ON(R10)(R11)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(R10)(R11)、OCH2C(＝O)-N(R10)(R11)、OCH2C(＝O)-N(R12)-(CH2)2-N(R10)(R11)或O(CH2)2-N(R12)-C(＝NR13)[N(R10)(R11)]，其中R10、R11、R12和R13各自独立地为H或C1-C6烷基。在某些实施方案中，G为卤素、OCH3、OCF3、OCH2CH3、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3、O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2、OCH2C(＝O)-N(H)CH3、OCH2C(＝O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2或OCH2-N(H)-C(＝NH)NH2。在某些实施方案中，G为F、OCH3或O(CH2)2-OCH3。在某些实施方案中，G为O(CH2)2-OCH3。
在某些实施方案中，5’末端核苷具有式IIe：
在某些实施方案中，反义化合物(包括特别适合于ssRNA的那些)包含以限定的模式或糖修饰基序沿着寡核苷酸或其区布置的一种或多种类型的修饰的糖部分和/或天然存在的糖部分。所述基序可包括本文讨论的任何糖修饰和/或其他已知的糖修饰。
在某些实施方案中，寡核苷酸包含具有均匀糖修饰的区或者由具有均匀糖修饰的区组成。在某些实施方案中，所述区的每一个核苷均包含相同的RNA样糖修饰。在某些实施方案中，所述区的每一个核苷均为2’-F核苷。在某些实施方案中，所述区的每一个核苷均为2’-OMe核苷。在某些实施方案中，所述区的每一个核苷均为2’-MOE核苷。在某些实施方案中，所述区的每一个核苷均为cEt核苷。在某些实施方案中，所述区的每一个核苷均为LNA核苷。在某些实施方案中，统一区构成了寡核苷酸的全部或基本上全部。在某些实施方案中，所述区构成了全部寡核苷酸，除1-4个末端核苷之外。
在某些实施方案中，寡核苷酸包含重复糖修饰的一个或多个区，其中所述核苷在具有第一类型的糖修饰的核苷与具有第二类型的糖修饰的核苷之间交替。在某些实施方案中，两种类型的核苷均为RNA样核苷。在某些实施方案中，交替核苷选自2’-OMe、2’-F、2’-MOE、LNA以及cEt。在某些实施方案中，交替修饰为2’-F和2’-OMe。此类区可以是连续的或可以夹杂不同修饰的核苷或缀合核苷。
在某些实施方案中，交替修饰的交替区各自由单个核苷组成(即模式为(AB)xAy，其中A为具有第一类型的糖修饰的核苷并且B为具有第二类型的糖修饰的核苷；x为1-20并且y为0或1)。在某些实施方案中，交替基序中的一个或多个交替区包括不只一种类型的单个核苷。例如，寡核苷酸可包括以下核苷基序中的任一个的一个或多个区：
AABBAA、
ABBABB、
AABAAB、
ABBABAABB、
ABABAA、
AABABAB、
ABABAA、
ABBAABBABABAA、
BABBAABBABABAA、或
ABABBAABBABABAA；
其中，A为第一类型的核苷并且B为第二类型的核苷。在某些实施方案中，A和B各自选自2’-F、2’-OMe、BNA以及MOE。
在某些实施方案中，具有此交替基序的寡核苷酸还包含修饰的5’末端核苷，诸如式IIc或IIe的那些。
在某些实施方案中，寡核苷酸包含具2-2-3基序的区。此类区包含以下基序：
-(A)2-(B)x-(A)2-(C)y-(A)3-
其中:A为第一类型的修饰核苷；
B和C为具有与A不同修饰的核苷，然而，B和C两者彼此可具有相同或不同的修饰；
x和y为1至15。
在某些实施方案中，A为2'-OMe修饰核苷。在某些实施方案中，B和C两者均为2’-F修饰核苷。在某些实施方案中，A为2'-OMe修饰核苷并且B和C两者均为2’-F修饰核苷。
在某些实施方案中，寡核苷酸具有以下糖基序：
5’-(Q)-(AB)xAy-(D)z
其中:
Q为包含稳定的磷酸酯部分的核苷。在某些实施方案中，Q为具有式IIc或IIe的核苷；
A为第一类型的修饰核苷；
B为第二类型的修饰核苷；
D为包含与其邻近的核苷不同的修饰的经修饰核苷。因此，如果y为0，那么D与B必须是不同修饰的并且如果y为1，那么D与A必须是不同修饰的。在某些实施方案中，D不同于A和B两者。
X为5-15；
Y为0或1；
Z为0-4。
在某些实施方案中，寡核苷酸具有以下糖基序：
5’-(Q)-(A)x-(D)z
其中:
Q为包含稳定的磷酸酯部分的核苷。在某些实施方案中，Q为具有式IIc或IIe的核苷；
A为第一类型的修饰核苷；
D为包含不同于A的修饰的修饰核苷。
X为11-30；
Z为0-4。
在某些实施方案中，以上基序中的A、B、C以及D选自：2’-OMe、2’-F、2’-MOE、LNA以及cEt。在某些实施方案中，D表示末端核苷。在某些实施方案中，此类末端核苷不被设计来与靶核酸杂交(尽管一个或多个可能偶然杂交)。在某些实施方案中，每个D核苷的核碱基为腺嘌呤，与靶核酸的相应位置处的核碱基的同一性无关。在某些实施方案中，每个D核苷的核碱基为胸腺嘧啶。
在某些实施方案中，包括特别适合用作ssRNA的那些的反义化合物包含以限定的模式或修饰的核苷间键联基序沿着寡核苷酸或其区布置的修饰的核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含具有交替的核苷间键联基序的区。在某些实施方案中，寡核苷酸包含具有统一修饰的核苷间键联的区。在某些所述实施方案中，寡核苷酸包含通过硫代磷酸酯核苷间键联统一连接的区。在某些实施方案中，寡核苷酸通过硫代磷酸酯核苷间键联统一连接。在某些实施方案中，寡核苷酸的每个核苷间键联选自磷酸二酯和硫代磷酸酯。在某些实施方案中，寡核苷酸的每个核苷间键联选自磷酸二酯和硫代磷酸酯并且至少一个核苷间键联为硫代磷酸酯。
在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少6个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少8个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少10个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少一个具有至少6个连续的硫代磷酸酯核苷间键联的嵌段。在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少一个具有至少8个连续的硫代磷酸酯核苷间键联的嵌段。在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少一个具有至少10个连续的硫代磷酸酯核苷间键联的嵌段。在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少一个具有至少12个连续的硫代磷酸酯核苷间键联的嵌段。在某些所述实施方案中，至少一个所述嵌段位于寡核苷酸的3’末端。在某些所述实施方案中，至少一个所述嵌段位于寡核苷酸的3’末端的3个核苷内。
具有本文所述的各种糖基序中的任一个的寡核苷酸可以具有任何键联基序。例如，包括但不限于以上所述的那些的寡核苷酸可以具有选自非限制性下表的键联基序：
5’最末端键联 中心区 3’区
PS 交替PO/PS 6PS
PS 交替PO/PS 7PS
PS 交替PO/PS 8PS
ii.siRNA化合物
在某些实施方案中，反义化合物为双链RNAi化合物(siRNA)。在此类实施方案中，一条或两条链可以包含针对ssRNA的以上所述的任何修饰基序。在某些实施方案中，ssRNA化合物可以是未修饰的RNA。在某些实施方案中，siRNA化合物可以包含未修饰的RNA核苷，但是是修饰的核苷间键联。
若干实施方案涉及双链组合物，其中每条链包含由一个或多个修饰或未修饰的核苷的位置限定的基序。在某些实施方案中，提供包含完全或至少部分杂交以形成双链体的第一和第二低聚化合物并且还包含与核酸目标互补并且杂交的区的组合物。此组合物包含第一低聚化合物(其为与核酸目标具有完全或部分互补性的反义链)和第二低聚化合物(其为与第一低聚化合物的一个或多个区具有互补性并且形成至少一个双链体区的有义链)是合适的。
若干实施方案的所述组合物通过与核酸目标杂交调节基因表达，从而导致正常功能的损失。在一些实施方案中，靶核酸为APOCIII。在某些实施方案中，通过活化用本文公开的组合物形成的RISC复合物促进靶向APOCIII的降解。
若干实施方案涉及双链组合物，其中所述链中的一条用于例如影响相反的链优选装载入(或裂解)RISC复合物中。所述组合物用于靶向所选择的核酸分子并且调节一个或多个基因的表达。在一个实施方案中，本发明的组合物与靶RNA的一部分杂交，导致靶RNA的正常功能的损失。
若干实施方案涉及双链组合物，其中两条链均包括半修饰基序、完全修饰的基序、定位修饰的基序或交替基序。本发明的组合物的每条链可被修饰以在例如siRNA途径中充当特定的角色。使用每条链中的不同基序或每条链中具有不同化学修饰的相同基序使得靶向RISC复合物的反义链，同时抑制有义链的并入。在该模型中，每条链可以独立地被修饰以使得增强其特定的作用。反义链可以在5'末端进行修饰以增强在RISC的一个区的作用，而3'末端可以进行不同修饰以增强在RISC的不同区域的作用。
双链寡核苷酸分子可以是包含自身互补的有义和反义区的双链多核苷酸分子，其中反义区包含与靶核酸分子或其一部分中的核苷酸序列互补的核苷酸序列，并且有义区具有与靶核酸序列或其一部分对应的核苷酸序列。双链寡核苷酸分子可以由两个单独的寡核苷酸组装，其中一条链是有义链并且另一条链是反义链，其中反义链和有义链是自身互补的(即，每条链包含与另一条链中的核苷酸序列互补的核苷酸序列；诸如其中反义链和有义链形成双链体或双链结构，例如其中双链区为约15至约30，例如约15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个碱基对；反义链包括与靶核酸分子或其一部分中的核苷酸序列互补的核苷酸序列，并且有义链包含与靶核酸序列或其一部分对应的核苷酸序列(例如，双链寡核苷酸分子的约15至约25个或更多个核苷酸与靶核酸或其一部分互补)。或者，双链寡核苷酸由单一寡核苷酸组装，其中siRNA的自身互补的有义和反义区借助于基于核酸或不基于核酸的接头连接。
双链寡核苷酸可以是具有双链体、不对称双链体、发夹或不对称发夹二级结构的多核苷酸，其具有自身互补的有义和反义区，其中反义区包含与单独的靶核酸分子或其一部分中的核苷酸序列互补的核苷酸序列，并且有义区具有与靶核酸序列或其一部分对应的核苷酸序列。双链寡核苷酸可以是具有两个或更多个环结构以及茎的环形单链多核苷酸，所述主干包含自身互补的有义和反义区，其中反义区包括与靶核酸分子或其一部分中的核苷酸序列互补的核苷酸序列，并且有义区具有与靶核酸序列或其一部分对应的核苷酸序列，并且其中环形多核苷酸可以在体内或体外处理产生能够介导RNAi的活性siRNA分子。
在某些实施方案中，双链寡核苷酸包含分开的有义和反义序列或区，其中有义和反义区通过如本领域已知的核苷酸或非核苷酸接头分子共价连接，或者可替代地通过离子相互作用、氢键合、范德华相互作用、疏水性相互作用和/或堆积相互作用非共价连接。在某些实施方案中，双链寡核苷酸包含与靶基因的核苷酸序列互补的核苷酸序列。在另一个实施方案中，双链寡核苷酸以引起靶基因表达抑制的方式来与靶基因的核苷酸序列相互作用。
如本文所用，双链寡核苷酸无需限于仅含有RNA的那些分子，而是进一步涵盖化学修饰的核苷酸和非核苷酸。在某些实施方案中，短干扰核酸分子缺乏含有2'-羟基(2'-OH)的核苷酸。在某些实施方案中，短干扰核酸任选地不包括任何核糖核苷酸(例如，具有2'-OH基团的核苷酸)。然而，不要求分子内存在核糖核苷酸来支持RNAi的这类双链寡核苷酸可以具有连接的一个或多个接头或其他连接或缔合的基团、部分或含有一个或多个具有2'-OH基团的核苷酸的链。任选地，双链寡核苷酸可以在约5％、10％、20％、30％、40％或50％的核苷酸位置上包括核糖核苷酸。如本文所用，术语siRNA意指等同于用来描述能够介导序列特异性RNAi的核酸分子的其他术语，例如，短干扰RNA(siRNA)、双链RNA(dsRNA)、微RNA(miRNA)、短发夹RNA(shRNA)、短干扰寡核苷酸、短干扰核酸、短干扰修饰寡核苷酸、化学修饰的siRNA、转录后基因沉默RNA(ptgsRNA)以及其他。此外，如本文所用，术语RNAi意指等同于用来描述序列特异性RNA干扰，诸如转录后基因沉默、转录抑制或表观遗传的其他术语。例如，双链寡核苷酸可以以转录后水平和转录前水平二者用于表观遗传学沉默基因。在非限制性实例中，通过本发明的siRNA分子表观遗传学调节基因表达可以由染色质结构的siRNA介导的修饰或甲基化模式以改变基因表达导致(参见例如，Verdel等,2004,Science,303,672-676；Pal-Bhadra等,2004,Science,303,669-672；Allshire,2002,Science,297,1818-1819；Volpe等,2002,Science,297,1833-1837；Jenuwein,2002,Science,297,2215-2218以及Hall等,2002,Science,297,2232-2237)。
可以设想本文提供的若干实施方案的化合物和组合物可以通过dsRNA介导的基因沉默或RNAi机制靶向APOCIII，包括例如“发夹”或茎-环双链RNA效应分子，其中具有自身互补序列的单个RNA链能够形成双链构型或包含两个单独的RNA链的双链体dsRNA效应分子。在各种实施方案中，dsRNA完全由核糖核苷酸组成或由核糖核苷酸和脱氧核苷酸的混合物(诸如例如通过2000年4月19日提交的WO 00/63364或1999年4月21日提交的美国序列号60/130,377所公开的RNA/DNA杂合体)组成。dsRNA或dsRNA效应分子可以是具有自身互补性的区的单个分子使得分子的一个区段中的核苷酸与分子的另一个区段中的核苷酸进行碱基配对。在各种实施方案中，由单个分子组成的dsRNA完全由核糖核苷酸组成或包括与脱氧核糖核苷酸的区互补的核糖核苷酸的区。或者，dsRNA可以包括具有彼此互补的区的两个不同的链。
在各种实施方案中，两条链完全由核糖核苷酸组成，一条链完全由核糖核苷酸组成并且一条链完全由脱氧核糖核苷酸组成，或者一条或两条链含有核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸的混合物。在某些实施方案中，互补的区彼此或与靶核酸序列具有至少70％、80％、90％、95％、98％或100％互补性。在某些实施方案中，以双链构型存在的dsRNA的区包括至少19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、50、75、100、200、500、1000、2000或5000个核苷酸或者包括所有的cDNA中或由dsRNA表示的其他靶核酸序列中的核苷酸。在一些实施方案中，dsRNA不含有任何单链区诸如单链区末端或者dsRNA为发夹。在其他实施方案中，dsRNA具有一个或多个单链区或突出端。在某些实施方案中，RNA/DNA杂合体包括为反义链或区的DNA链或区(例如，与靶核酸具有至少70、80、90、95、98或100％互补性)以及为有义链或区的RNA链或区(例如，与靶核酸具有至少70、80、90、95、98或100％互补性)，并且反之亦然。
在各种实施方案中，RNA/DNA杂合体是使用酶法或化学合成方法诸如本文所述的那些或在2000年4月19日提交的WO 00/63364或1999年4月21日提交的美国序列号60/130,377中所述的那些在体外制成的。在其他实施方案中，体外所合成的DNA链在其转化进入细胞之前、之后或同时与体内或体外所制成的RNA链复合。在其他实施方案中，dsRNA为含有有义和反义区的单环核酸，或者dsRNA包括环状核酸和第二个环状核酸或线性核酸(参见，例如2000年4月19日提交的WO 00/63364或1999年4月21日提交的美国序列号60/130,377)。示例性环状核酸包括套索结构，其中核苷酸的游离5'磷酰基以环回方式连接到另一个核苷酸的2'羟基。
在其他实施方案中，dsRNA包括其中糖的2'位含有卤素(诸如氟基)或者含有烷氧基(诸如甲氧基)的一个或多个修饰的核苷酸，其相比于其中相应的2'位含有氢或羟基的相应的dsRNA增加了体外或体内dsRNA的半衰期。在其他实施方案中，dsRNA包括相邻核苷酸之间的一个或多个键而非自然存在的磷酸二酯键联。此类键联的实例包括磷酰胺、硫代磷酸酯以及二硫代磷酸酯键联。dsRNA还可以是如美国专利号6,673,661中所教导的化学修饰地核酸分子。在其他实施方案中，dsRNA含有一个或两个加帽链，如例如由2000年4月19日提交的WO 00/63364或1999年4月21日提交的美国序列号60/130,377所公开的。
在其他实施方案中，dsRNA可以是任何WO 00/63364中所公开的至少部分dsRNA分子，以及任何美国临时申请60/399,998以及美国临时申请60/419,532和PCT/US2003/033466中所述的dsRNA分子，所述申请的教义以引用的方式并入本文。任何dsRNA可使用本文所述的方法或标准方法诸如WO 00/63364中所述的那些在体外或体内进行表达。
占位
在某些实施方案中，预期反义化合物或靶核酸不通过RNA酶H导致裂解或者通过RISC途径导致裂解或螯合。在某些此类实施方案中，反义活性可以由占位产生，其中杂交反义化合物的存在破坏了靶核酸的活性。在某些此类实施方案中，反义化合物可以是统一修饰的或者可以包含修饰的混合和/或包含修饰的和未修饰的核苷酸。
用于配制药物组合物的组合物和方法
反义化合物可与药学上可接受的活性或惰性物质混合以制备药物组合物或制剂。组合物和用于配制药物组合物的方法取决于许多标准，包括但不限于施用途径、疾病程度或所施用的剂量。
靶向ApoCIII核酸的反义化合物可通过将反义化合物与适合的药学上可接受的稀释剂或载体组合而用于药物组合物中。在某些实施方案中，“药用载体”或“赋形剂”是药学上可接受的溶剂、悬浮剂或用于将一种或多种核酸递送至动物的任何其他药理学上惰性的载体。赋形剂可以是液体或固体，并且可以基于预先设计的施用方式来选择以便在与核酸和给定药物组合物的其他组分组合时提供所希望的体积、稠度等。典型的药物载体包括但不限于结合剂(例如，预胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素等)；填充剂(例如乳糖和其他糖类、微晶纤维素、果胶、明胶、硫酸钙、乙基纤维素、聚丙烯酸酯或磷酸氢钙等)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石、二氧化硅、胶体二氧化硅、硬脂酸、金属硬脂酸盐、氢化植物油、玉米淀粉、聚乙二醇、苯甲酸钠、乙酸钠等)；崩解剂(例如淀粉、淀粉羟乙酸钠等)；和润湿剂(如月桂基硫酸钠等)。
不有害地与核酸反应的适合于胃肠外或非胃肠外施用的药学上可接受的有机或无机赋形剂也可用于配制本发明的组合物。适当的药学上可接受载体包括但不限于：水、盐溶液、醇、聚乙二醇、明胶、乳糖、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石、硅酸、粘性石蜡、羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等。
药学上可接受的稀释剂包括磷酸盐缓冲的生理盐水(PBS)。PBS是适用于以胃肠外方式递送的组合物中的稀释剂。因此，在一个实施方案中，在本文所述的方法中使用包含靶向ApoCIII核酸的反义化合物及药学上可接受的稀释剂的药物组合物。在某些实施方案中，药学上可接受的稀释剂为PBS。在某些实施方案中，反义化合物为反义寡核苷酸。
包含反义化合物的药物组合物涵盖在动物(包括人)施用时能够提供(直接或间接)其生物活性代谢物或残余物的任何药学上可接受的盐、酯或所述酯的盐，或寡核苷酸。因此，例如，本公开还涉及反义化合物的药学上可接受的盐、前药、所述前药的药学上可接受的盐以及其他生物等效物。合适的药学上可接受的盐包括但不限于钠盐和钾盐。
前药可包括在反义化合物的一端或两端上并入可由体内内源性核酸酶裂解而形成活性反义化合物的额外核苷。
缀合的反义化合物
反义化合物可共价连接至一个或多个增强所得反义寡核苷酸的活性、细胞分布或细胞吸收的部分或缀合物。典型缀合物基团包括胆固醇部分和脂质部分。额外的缀合物基团包括碳水化合物、磷脂、生物素、啡嗪、叶酸盐、啡啶、蒽醌、吖啶、荧光素、若丹明、香豆素和染料。在某些实施方案中，缀合物包含碳水化合物在某些实施方案中，缀合物基团包含一个或多个N-乙酰基半乳糖胺(或“GalNAc”)部分。在某些实施方案中，缀合物基团包含一个、两个或三个N-乙酰基半乳糖胺(或“GalNAc”)部分。
教导某些GalNAc缀合物、缀合低聚化合物如反义化合物、系链、缀合物接头、支链基团、配体、可裂解部分以及其他修饰的制备的代表性美国专利、美国专利申请公布和国际专利申请公布包括但不限于US 5,994,517、US 6,300,319、US 6,660,720、US 6,906,182、US 7,262,177、US 7,491,805、US 8,106,022、US 7,723,509、US 2006/0148740、US 2011/0123520、WO 2013/033230、WO 2012/037254和WO 2014022739，其各自均以引用的方式整体并入本文。
教导某些GalNAc缀合物、缀合低聚化合物如反义化合物、系链、缀合物接头、支链基团、配体、可裂解部分以及其他修饰的制备的代表性出版物包括但不限于BIESSEN等人,"The Cholesterol Derivative of a Triantennary Galactoside with High Affinityfor the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor:a Potent Cholesterol LoweringAgent"J.Med.Chem.(1995)38:1846-1852；BIESSEN等人,"Synthesis of ClusterGalactosides with High Affinity for the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor"J.Med.Chem.(1995)38:1538-1546；LEE等人,"New and more efficient multivalentglyco-ligands for asialoglycoprotein receptor of mammalian hepatocytes"Bioorganic&Medicinal Chemistry(2011)19:2494-2500；RENSEN等人,"Determination ofthe Upper Size Limit for Uptake and Processing of Ligands by theAsialoglycoprotein Receptor on Hepatocytes in Vitro and in Vivo"J.Biol.Chem.(2001)276(40):37577-37584；RENSEN等人,"Design and Synthesis of Novel N-Acetylgalactosamine-Terminated Glycolipids for Targeting of Lipoproteins tothe Hepatic Asialoglycoprotein Receptor"J.Med.Chem.(2004)47:5798-5808；SLIEDREGT等人,"Design and Synthesis of Novel Amphiphilic DendriticGalactosides for Selective Targeting of Liposomes to the HepaticAsialoglycoprotein Receptor"J.Med.Chem.(1999)42:609-618；R.T.Lee等人,“New andmore efficient multivalent glyco-ligands for asialoglycoprote in receptor ofmammalian hepatocytes,”Bioorg.Med.Chem.19(2011)2494–2500；以及Valentijn等人,“Solid-phase synthesis of lysine-based cluster galactosides with highaffinity for the Asialoglycoprotein Receptor”Tetrahedron,1997,53(2),759-770，其各自以引用的方式整体并入本文。
反义化合物还可被修饰以具有一个或多个稳定化基团，所述一个或多个稳定化基团一般连接至反义化合物的一端或两端以增强如核酸酶稳定性的性质。在稳定化基团中包括帽结构。这些末端修饰保护具有末端核酸的反义化合物免遭核酸外切酶降解，且可有助于递送和/或定位于细胞内。帽可存在于5'端(5'帽)或3'端(3'帽)上，或可存在于这两端上。帽结构在本领域中为熟知的且包括例如反向脱氧无碱基帽。其他可用于对反义化合物的一端或两端进行封端以赋予核酸酶稳定性的3'及5'-稳定化基团包括2003年1月16日公开的WO 03/004602中所公开的那些基团。
细胞培养和反义化合物处理
可在多种细胞类型中体外测试反义化合物对ApoCIII核酸或蛋白质的水平、活性或表达的作用。用于所述分析的细胞类型可获自商业供货商(例如American Type CultureCollection,Manassus,VA；Zen-Bio,Inc.,Research Triangle Park,NC；CloneticsCorporation,Walkersville,MD)且根据供货商的说明书使用商购的试剂(例如InvitrogenLife Technologies,Carlsbad,CA)培养细胞。例示性细胞类型包括但不限于HepG2细胞、Hep3B细胞、Huh7(肝细胞癌)细胞、原代肝细胞、A549细胞、GM04281成纤维细胞和LLC-MK2细胞。
体外测试反义寡核苷酸
本文描述用反义寡核苷酸处理细胞的方法，所述方法可被适当修改以用于用其他反义化合物进行的处理。
通常，可当细胞在培养中达到约60-80％汇合度时，用反义寡核苷酸处理细胞。
一种通常用于将反义寡核苷酸引入培养细胞中的试剂包括阳离子型脂质转染试剂(Invitrogen,Carlsbad,CA)。可将反义寡核苷酸与在1(Invitrogen,Carlsbad,CA)中混合以达成反义寡核苷酸的所需最终浓度及可在每100nM反义寡核苷酸2至12ug/mL范围内的浓度。
另一种用于将反义寡核苷酸引入培养细胞中的试剂包括LIPOFECTAMINE(Invitrogen,Carlsbad,CA)。将反义寡核苷酸与LIPOFECTAMINE在1血清减少型培养基(Invitrogen,Carlsbad,CA)中混合以达成反义寡核苷酸的所需浓度及可在每100nM反义寡核苷酸2至12ug/mL范围内的浓度。
另一种用于将反义寡核苷酸引入培养细胞中的试剂包括(Invitrogen,Carlsbad,CA)。将反义寡核苷酸与在1血清减少型培养基(Invitrogen,Carlsbad,CA)中混合以达成反义寡核苷酸的所需浓度及可在每100nM反义寡核苷酸2至12ug/mL范围内的浓度。
另一种用于将反义寡核苷酸引入培养细胞中的试剂包括OligofectamineTM(Invitrogen Life Technologies,Carlsbad,CA)。反义寡核苷酸与OligofectamineTM在Opti-MEMTM-1血清减少型培养基(Invitrogen Life Technologies,Carlsbad,CA)中混合以达成寡核苷酸的所需浓度，其中OligofectamineTM与寡核苷酸的比率为每100nM约0.2至0.8μL。
另一种用于将反义寡核苷酸引入培养细胞中的试剂包括FuGENE 6(RocheDiagnostics Corp.,Indianapolis,IN)。反义低聚化合物与FuGENE 6在1mL无血清的RPMI中混合以达成寡核苷酸的所需浓度，其中FuGENE 6与低聚化合物的比率是每100nM为1至4μL的FuGENE 6。
用于将反义寡核苷酸引入培养细胞中的另一种技术包括电穿孔(Sambrook和Russell，Molecular Cloning.A Laboratory Manual.第3版.Cold Spring HarborLaboratory Press,Cold Spring Harbor,New York.2001)。
通过常规方法用反义寡核苷酸处理细胞。可在反义寡核苷酸处理后16-24小时收获细胞，此时通过本领域中已知及本文所述的方法测量靶核酸的RNA或蛋白质水平(Sambrook和Russell，Molecular Cloning.A Laboratory Manual.第3版.Cold SpringHarbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York.2001)。一般来说，当在多次重复实验中进行处理时，数据呈现为重复处理的平均值。
所用的反义寡核苷酸浓度在细胞系之间有所不同。确定用于特定细胞系的最佳反义寡核苷酸浓度的方法在本领域中为熟知的(Sambrook和Russell，Molecular Cloning.ALaboratory Manual.第3版.Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold SpringHarbor,New York.2001)。在用LIPOFECTAMINE(Invitrogen,Carlsbad,CA)、(Invitrogen,Carlsbad,CA)或CytofectinTM(Genlantis,San Diego,CA)转染时，反义寡核苷酸通常以1nM至300nM范围内的浓度使用。当使用电穿孔进行转染时，使用625nM至20,000nM范围内的较高浓度的反义寡核苷酸。
RNA分离
可对总细胞RNA或聚(A)+mRNA进行RNA分析。RNA分离的方法在本领域中是众所周知的(Sambrook和Russell，Molecular Cloning.A Laboratory Manual.第3版.ColdSpring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York.2001)。RNA是使用本领域中熟知的方法，例如使用试剂(Invitrogen,Carlsbad,CA)，根据制造商推荐的方案来制备。
分析对目标水平或表达的抑制
ApoCIII核酸水平或表达的的抑制可以本领域已知的多种方法来测定(Sambroo和Russell,Molecular Cloning.A Laboratory Manual.第3版.Cold Spring HarborLaboratory Press,Cold Spring Harbor,New York,2001)。举例来说，靶核酸水平可通过例如RNA印迹分析、竞争性聚合酶链反应(PCR)或定量实时PCR来定量。可对总细胞RNA或聚(A)+mRNA进行RNA分析。RNA分离方法在本领域中是熟知的。RNA印迹分析在本领域中也是常规的。定量实时PCR可以使用可从PE-Applied Biosystems,Foster City,CA商购，并根据制造商说明书来使用的市售ABI7600、7700或7900序列检测系统来方便地完成。
对靶RNA水平的定量实时PCR分析
可通过定量实时PCR，使用ABI7600、7700或7900序列检测系统(PE-Applied Biosystems,Foster City,CA)根据制造商说明书来对靶RNA水平进行定量。定量实时PCR的方法在本领域中为熟知的。
在实时PCR之前，使分离的RNA经历逆转录酶(RT)反应，产生互补的DNA(cDNA)，其接着用作实时PCR扩增的底物。在同一样品孔中依序进行RT和实时PCR反应。RT和实时PCR试剂可获自Invitrogen(Carlsbad,CA)。RT和实时PCR反应通过本领域技术人员熟知的方法进行。
通过实时PCR获得的基因(或RNA)目标量是使用表达恒定的基因(如亲环素A(cyclophilin A))的表达水平或通过使用(Invitrogen,Inc.Carlsbad,CA)定量总RNA来标准化。亲环素A表达是通过实时PCR，通过与目标同时操作、复合操作或分开操作来定量。总RNA是使用RNA定量试剂(Invitrogen,Inc.Carlsbad,CA)来定量。通过定量RNA的方法是教导于Jones,L.J.等人,(AnalyticalBiochemistry,1998,265,368-374)中。使用4000仪器(PE AppliedBiosystems,Foster City,CA)来测量荧光。
探针和引物被设计来与ApoCIII核酸杂交。用于设计实时PCR探针及引物的方法在本领域中为熟知的，且可包括使用软件，如PRIMER软件(AppliedBiosystems,Foster City,CA)。
通过RT、实时PCR获得的基因目标量可使用表达恒定的基因GAPDH或亲环素A的表达水平或通过使用RiboGreenTM(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR)定量总RNA。GAPDH或亲环素A表达可通过RT、实时PCR，通过与目标同时操作、复合操作或分开操作来定量。总RNA使用RiboGreenTM RNA定量试剂(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR)来定量。
分析蛋白质水平
对ApoCIII核酸的反义抑制可通过测量ApoCIII蛋白质水平来评估。ApoCIII的蛋白质水平可以本领域中熟知的多种方式来评价或定量，如免疫沉淀法、蛋白质印迹分析(免疫印迹法)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、定量蛋白质测定、蛋白质活性测定(例如卡斯蛋白酶活性测定)、免疫组织化学、免疫细胞化学或荧光活化细胞分选法(FACS)(Sambrook和Russell，Molecular Cloning.A Laboratory Manual.第3版.Cold Spring HarborLaboratory Press,Cold Spring Harbor,New York.2001)。针对目标的抗体可被识别且获自多种来源，如MSRS抗体目录(Aerie Corporation,Birmingham,MI)，或可经由本领域中熟知的常规单克隆或多克隆抗体生成方法来制备。适用于检测人和小鼠ApoCIII的抗体是市售的。
体内测试反义化合物
在动物体内测试反义化合物(例如反义寡核苷酸)以评估它们抑制ApoCIII表达及引起表型改变的能力。可在正常动物或实验疾病模型中进行测试。为了向动物施用，在药学上可接受的稀释剂(如磷酸盐缓冲的生理盐水)中配制反义寡核苷酸。施用包括胃肠外施用途径。反义寡核苷酸剂量和施用频率的计算取决于许多因素，如施用途径和动物体重。在用反义寡核苷酸处理一段时间后，自肝脏组织分离RNA且测量ApoCIII核酸表达的改变。还测量ApoCIII蛋白质水平的改变。
某些适应症
本文已经鉴别和公开了ApoCIII抑制在脂肪代谢障碍(全身性脂肪代谢障碍或局部脂肪代谢障碍)患者中的新作用。下文公开的实施例公开了脂肪代谢障碍患者中的其他生物标志物之中TG的降低和HDL的增加。
在某些实施方案中，本文提供治疗具有脂肪代谢障碍的受试者的方法，所述方法包括施用如本文所述的一种或多种药物组合物。在某些实施方案中，药物组合物包含靶向ApoCIII的反义化合物。
在某些实施方案中，向具有脂肪代谢障碍的受试者施用靶向ApoCIII核酸的反义化合物使得ApoCIII表达减少至少约15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％，或由这些值中的任何两个所界定的范围。在某些实施方案中，ApoCIII表达被降低至≤50mg/L、≤60mg/L、≤70mg/L、≤80mg/L、≤90mg/L、≤100mg/L、≤110mg/L、≤120mg/L、≤130mg/L、≤140mg/L、≤150mg/L、≤160mg/L、≤170mg/L、≤180mg/L、≤190mg/L或≤200mg/L。
在某些实施方案中，受试者具有与脂肪代谢障碍相关的疾病或病症。在某些实施方案中，受试者具有与全身性脂肪代谢障碍相关的疾病或病症。在某些实施方案中，受试者具有与局部脂肪代谢障碍相关的疾病或病症。在某些实施方案中，疾病或病症是具有脂肪代谢障碍的受试者中的心血管或代谢疾病或病症。在某些实施方案中，心血管疾病或病症包括但不限于动脉瘤、心绞痛、心律失常、动脉粥样硬化、脑血管疾病、冠心病、高血压、血脂异常、高脂血症、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、中风等。在某些实施方案中，代谢疾病或病症包括但不限于高血糖症、前驱糖尿病、糖尿病(I型和II型)、肥胖症、胰岛素抵抗、代谢综合征和糖尿病性血脂异常。在某些实施方案中，疾病或病症是具有脂肪代谢障碍的受试者中的高甘油三酯血症。在某些实施方案中，疾病或病症是具有脂肪代谢障碍的受试者中的胰腺炎。在某些实施方案中，疾病或病症是具有脂肪代谢障碍的受试者中的NAFLD或NASH。在某些实施方案中，疾病或病症是具有脂肪代谢障碍的受试者中的肝硬化或肝癌。
在某些实施方案中，如本文所述的靶向ApoCIII的化合物调节具有脂肪代谢障碍的受试者中的胰腺炎、心血管或代谢疾病或病症的生理学标志物或表型。在某些实验中，与未处理的动物相比，化合物可增加或减少生理学标志物或表型。在某些实施方案中，生理学标志物或表型的增加或减少与通过本文所述的化合物抑制ApoCIII相关。
在某些实施方案中，心血管疾病或病症的生理学标志物或表型可以是可量化的。例如，可例如通过标准脂质测试来测量和量化TG或HDL水平。在某些实施方案中，生理学标志物或表型如HDL可被增加约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％或由这些值中的任意两个所限定的范围。在某些实施方案中，生理学标志物表型如TG(餐后或空腹)可被减少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％或由这些值中的任意两个所限定的范围。在某些实施方案中，TG(餐后或空腹)被降低至≤100mg/dL、≤110mg/dL、≤120mg/dL、≤130mg/dL、≤140mg/dL、≤150mg/dL、≤160mg/dL、≤170mg/dL、≤180mg/dL、≤190mg/dL、≤200mg/dL、≤210mg/dL、≤220mg/dL、≤230mg/dL、≤240mg/dL、≤250mg/dL、≤260mg/dL、≤270mg/dL、≤280mg/dL、≤290mg/dL、≤300mg/dL、≤350mg/dL、≤400mg/dL、≤450mg/dL、≤500mg/dL、≤550mg/dL、≤600mg/dL、≤650mg/dL、≤700mg/dL、≤750mg/dL、≤800mg/dL、≤850mg/dL、≤900mg/dL、≤950mg/dL、≤1000mg/dL、≤1100mg/dL、≤1200mg/dL、≤1300mg/dL、≤1400mg/dL、≤1500mg/dL、≤1600mg/dL、≤1700mg/dL、≤1800mg/dL或≤1900mg/dL。
在某些实施方案中，代谢疾病或病症的生理学标志物或表型可以是可量化的。例如，可通过本领域中已知的标准测试来测量和量化葡萄糖水平或胰岛素抵抗。在某些实施方案中，生理学标志物或表型如葡萄糖水平或胰岛素抵抗可被减少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％或由这些值中的任意两个所限定的范围。在某些实施方案中，生理学标志物表型如胰岛素敏感性可被增加约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％或由这些值中的任意两个所限定的范围。
此外，本文提供使用本文所述的化合物预防、治疗或改善与具有脂肪代谢障碍的受试者中的疾病或病症相关的症状的方法。在某些实施方案中，提供一种用于降低与脂肪代谢障碍相关的症状或相关的疾病的发作率的方法。在某些实施方案中，提供一种用于降低与脂肪代谢障碍相关的症状或疾病的严重性的方法。在此类实施方案中，所述方法包括向脂肪代谢障碍个体施用治疗有效量的靶向ApoCIII核酸的化合物。在某些实施方案中，疾病或病症是胰腺炎或心血管或代谢疾病或病症。
心血管疾病或病症以诸多身体症状为特征。本领域技术人员所知与心血管疾病相关的任何症状可如本文所述的方法中所阐述得以预防、治疗、改善或另外调节。在某些实施方案中，症状可为以下中的任一个，但不限于心绞痛、胸痛、呼吸短促、心悸、虚弱、头晕、恶心、出汗、心动过速、心动过缓、心律失常、心房纤维性颤动、下肢肿胀、发绀、疲劳、昏晕、面部发麻、四肢发麻、跛行或肌肉抽筋、腹部鼓胀或发热。
代谢疾病或病症以诸多身体症状为特征。本领域技术人员所知与代谢病症相关的任何症状可如本文所述的方法中所阐述得以预防、治疗、改善或另外调节。在某些实施方案中，症状可以为以下中的任一个，但不限于过量尿产生(多尿)、过度口渴和增加的液体摄取(烦渴)、视力模糊、原因不明的体重减轻和嗜睡。
胰腺炎以诸多身体症状为特征。本领域技术人员所知与胰腺炎相关的任何症状可如本文所述的方法中所阐述得以预防、治疗、改善或另外调节。在某些实施方案中，症状可以是以下中的任一种但不限于以下：腹痛、呕吐、恶心和腹部对压力的敏感性。
在某些实施方案中，提供治疗具有脂肪代谢障碍的受试者的方法，所述方法包括施用治疗有效量的一种或多种如本文所述的药物组合物。在某些实施方案中，施用治疗有效量的靶向ApoCIII核酸的反义化合物伴随监测与脂肪代谢障碍相关的ApoCIII水平或疾病标志物以测定受试者对反义化合物的反应。受试者对施用反义化合物的反应可由医师用于确定治疗性干预的量及持续时间。
在某些实施方案中，包含靶向ApoCIII的反义化合物的药物组合物用于制备用以治疗具有脂肪代谢障碍的受试者的药物。
施用
取决于希望局部或全身性治疗并且取决于有待治疗的区域，可以将本发明的化合物或药物组合物按许多方式施用。施用可为口服或胃肠外。
在某些实施方案中，如本文所述的化合物和组合物以胃肠外方式施用。胃肠外施用包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内或肌内注射或输注。
在某些实施方案中，胃肠外施用是通过输注。输注可以是长期的或连续的或短期的或间歇的。在某些实施方案中，输注的药物试剂是用泵递送的。在某些实施方案中，输注是静脉内的。
在某些实施方案中，胃肠外施用是通过注射。注射可用注射器或泵递送。在某些实施方案中，注射是快速浓注。在某些实施方案中，注射被直接施用至组织或器官。在某些实施方案中，胃肠外施用是皮下的。
在某些实施方案中，用于胃肠外施用的制剂可包括无菌水溶液，所述无菌水溶液还可含有缓冲剂、稀释剂和其他合适添加剂，如但不限于渗透促进剂、载体化合物和其他药学上可接受的载体或赋形剂。
在某些实施方案中，用于口服施用本发明的化合物或组合物的制剂可包括但不限于药物载体、赋形剂、粉末或颗粒、微粒、纳米颗粒、水或非水介质中的悬浮液或溶液、胶囊、凝胶胶囊、囊剂、片剂或小片剂。增稠剂、调味剂、稀释剂、乳化剂、分散助剂或粘合剂可为需要的。在某些实施方案中，口服制剂是本发明的化合物与一种或多种渗透促进剂、表面活性剂和螯合剂结合施用的那些。
给药
在某些实施方案中，药物组合物根据给药方案(例如，剂量、施用频率和持续时间)来施用，其中所述给药方案可经选择以实现期望的效果。所需作用可以是例如如降低ApoCIII或预防、减少、改善与脂肪代谢障碍相关的疾病或病状或减缓其进展。
在某些实施方案中，将给药方案的变量调整以产生受试者中的药物组合物的所需浓度。关于剂量方案所用的“药物组合物的浓度”可以涉及药物组合物的化合物、寡核苷酸或活性成分。例如，在某些实施方案中，剂量和剂量频率被调整以提供足以达到所期望效果的量的药物组合物的组织浓度或血浆浓度。
剂量取决于所欲治疗的疾病病况的严重性和反应性，其中治疗过程持续若干天至若干个月，或者直至实现治愈或达成疾病病况的减少。剂量也依赖于药物效力和代谢。在某些实施方案中，剂量为每kg体重0.01μg至100mg，或在0.001mg-1000mg的剂量范围内，并且可以每日、每周、每月或每年给予一次或多次，甚至每2到20年给予一次。成功治疗后，可能需要对患者进行维持疗法以预防疾病病况复发，其中寡核苷酸以维持剂量施用，所述维持剂量在每千克体重0.01μg至100mg范围内，每天一次或多次至每20年一次或在0.001mg至1000mg给药的范围内。
某些组合疗法
在某些实施方案中，包含本文所述的化合物的第一药剂与一种或多种第二药剂共同施用。在某些实施方案中，这样的第二药剂被设计来治疗与本文所述的第一药剂相同的疾病、病症或病状。在某些实施方案中，这样的第二药剂被设计来治疗与本文所述的第一药剂不同的疾病、病症或病状。在某些实施方案中，第一药剂被设计来治疗第二药剂的不期望的副作用。在某些实施方案中，第二药剂与第一药剂共同施用以治疗第一药剂的不期望的作用。在某些实施方案中，第二药剂可用于治疗如本文所述的一种或多种药物组合物的不期望的副作用。在某些实施方案中，第二药剂与第一药剂共同施用以产生组合效果。在某些实施方案中，第二药剂与第一药剂共同施用以产生协同效果。在某些实施方案中，与在药剂作为独立疗法施用时达到治疗或预防效果所需要的剂量相比，第一药剂和第二药剂的共同施用允许使用较低剂量。在某些实施方案中，第一药剂施用于对第二药剂无效或对第二药剂无反应的受试者。在某些实施方案中，第一药剂代替第二药剂施用于受试者。
在某些实施方案中，本文所述的一种或多种组合物与一种或多种其他药剂同时施用。在某些实施方案中，本发明的一种或多种组合物与一种或多种其他药剂在不同时间施用。在某些实施方案中，本文所述的一种或多种组合物与一种或多种其他药剂一起制备成单个制剂。在某些实施方案中，本文所述的一种或多种组合物与一种或多种其他药剂是单独制备的。
在某些实施方案中，第二药剂包括但不限于生长激素释放因子(GRF)、瘦蛋白替代剂、ApoCIII降低剂、DGAT1抑制剂、降胆固醇剂、非HDL降脂药(例如LDL)、HDL升高剂、鱼油、烟酸(烟酸)、贝特类、他汀类、DCCR(二氮嗪盐)、葡萄糖降低剂和/或抗糖尿病药。在某些实施方案中，第一药剂与最大耐受剂量的第二药剂组合施用。在某些实施方案中，第一药剂施用于未对最大耐受剂量的第二药剂作出响应的受试者。
瘦蛋白替代剂的一个实例为
生长激素释放因子(GRF)的一个实例为
ApoCIII降低剂的实例包括不同于第一药剂、贝特类或Apo B反义寡核苷酸的ApoCIII反义寡核苷酸。
DGAT1抑制剂的一个实例是LCQ908(Novartis Pharmaceuticals)。
降血糖和/或抗糖尿病剂的实例包括但不限于治疗性生活方式改变、PPAR激动剂、二肽基肽酶(IV)抑制剂、GLP-1类似物、胰岛素或胰岛素类似物、胰岛素促分泌剂、SGLT2抑制剂、人胰淀素类似物、双胍类、α-葡萄糖苷酶抑制剂、二甲双胍、磺酰脲类、罗格列酮、氯茴苯酸、噻唑烷二酮、α-葡萄糖苷酶抑制剂等。磺酰脲可为醋磺己脲(acetohexamide)、氯磺丙脲(chlorpropamide)、甲苯磺丁脲(tolbutamide)、妥拉磺脲(tolazamide)、格列美脲(glimepiride)、格列吡嗪(glipizide)、格列本脲(glyburide)或格列齐特(gliclazide)。氯茴苯酸可为那格列奈(nateglinide)和瑞格列奈(repaglinide)。噻唑烷二酮可以为吡格列酮(pioglitazone)和罗格列酮。α葡萄糖苷酶可以是阿卡波糖(acarbose)或米格列醇(miglitol)。
降胆固醇或脂质治疗可包括但不限于治疗性生活方式改变、他汀类、胆汁酸螯合剂、烟酸和贝特类。他汀类可以是阿托伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、瑞舒伐他汀和辛伐他汀等。胆汁酸螯合剂可以是考来维仑(colesevelam)、考来烯胺(cholestyramine)、考来替泊(colestipol)和类似物。贝特类药物可以是吉非贝齐、非诺贝特(fenofibrate)、氯贝丁酯(clofibrate)等。治疗性生活方式改变可为膳食脂肪限制。
HDL增加剂包括胆固醇酯转移蛋白(CETP)抑制药物(如托塞匹布)、过氧化物酶体增殖活化的受体激动剂、Apo-A1、吡格列酮等。
某些治疗群体
在某些实施方案中，本文所述的化合物、组合物和方法适用于治疗患有脂肪代谢障碍的受试者。患有脂肪代谢障碍的受试者处于胰腺炎、心血管和代谢疾病的重大风险。对于这些受试者，复发性胰腺炎是虚弱的和潜在致命的并发症；其他临床后遗症包括动脉粥样硬化和糖尿病的趋势增加。
脂肪代谢障碍综合征是一组罕见的代谢疾病，其特征在于脂肪组织的选择性丧失，其导致肝和肌肉中的异位脂肪沉积以及胰岛素抵抗、糖尿病、血脂异常和脂肪肝疾病的发展。这些综合征根据潜在的病因学(遗传或获得性)并且根据脂肪丧失到全身或局部脂肪代谢障碍中的分布进行分类(Garg等人,J Clin Endocrinol Metab,2011,96:3313-3325；Chan等人,Endocr Pract,2010,16:310-323；Simha等人,Curr Opin Lipidol,2006,17(2):162-169；Garg,N Engl J Med,2004,350:1220-1234)。
A.全身性脂肪代谢障碍
全身性脂肪代谢障碍的发病率为百万分之一(Garg等人,J Clin EndocrinolMetab,2011,96:3313-3325)。先天性全身性脂肪代谢障碍(CGL)是遗传性脂肪代谢障碍的主要亚型，发病率为千万分之一(美国罕见疾病组织[NORD],The Physician’s Guide toLipodystrophy Disorders,2012)。CGL的诊断通常在出生时进行且已经报道了大约300例。获得性全身性脂肪代谢障碍通常呈现于儿童期或青春期，且已经报道于大约100个病例中。脂肪丧失的确切机制尚不清楚：50％为特发性，25％之前为脂膜炎，25％具有相关的自身免疫性疾病(即幼年型皮肌炎)。全身性脂肪代谢障碍的临床表型包括皮下和内脏脂肪的总体损失、瘦蛋白和脂联素水平低、高胰岛素血症、糖尿病、高甘油三酯血症和非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)。肝硬化在CGL中更常见。
B.局部脂肪代谢障碍
局部脂肪代谢障碍是超级孤立适应症，对于其存在显著未满足的医疗需求。与这种病状相关的糖尿病和/或高甘油三酯血症可导致严重的并发症Handelsman等人,Endocrine Practice,2013；19(1):107-116)：急性胰腺炎，特别是当甘油三酯水平>1000mg/dL时；来自非控制性糖尿病的加速微血管并发症；来自脂质异常和胰岛素抵抗的加速心血管疾病；可能进展为肝硬化的脂肪性肝炎；和/或可进展至终末期肾病的蛋白尿肾病。
局部脂肪代谢障碍可能比全身性脂肪代谢障碍患病率更高，但是真正的患病率是未知的，因为这些患者非常诊断不足(Garg等人,J Clin Endocrinol Metab,2011,96:3313-3325；Chan等人,Endocr Pract,2010,16:310-323)。
存在局部脂肪代谢障碍的遗传性和获得性形式。获得性脂肪代谢障碍是由药物、自身免疫机制或其他未知机制(特发性)引起的。在服用蛋白酶抑制剂的人免疫缺陷病毒(HIV)患者中观察到的获得性形式已经成为局部脂肪代谢障碍的最普遍形式，在美国估计有100,000例患者，而在其他国家则更多。
已报道了大约250例获得性局部脂肪代谢障碍(APL，Barraquer-Simons综合征)。疾病的发病通常发生在15岁之前。患者从脸部开始逐渐失去皮下脂肪并且向下扩散，且大多数患者从面部、颈部、上肢和躯干中出现脂肪丧失，而腹部和下肢得以幸免。脂肪组织的丧失可能是自身免疫介导的，如由补体3和补体3-肾炎因子的低血清水平证明。代谢并发症是罕见的，但五分之一的患者发展膜增生性肾小球性肾炎。
家族性局部脂肪代谢障碍(FPL)在20世纪70年代由Kobberling和Dunnigan独立地描述，是遗传性局部脂肪代谢障碍的最常见亚型(美国罕见疾病组织[NORD],ThePhysician’s Guide to Lipodystrophy Disorders,2012)。FPL包含由潜在的遗传突变所区分的几种亚型(6种FPL亚型和5种基因突变已被鉴定)。1型FPL(Kobberling品种)已被报道于少数个体中且其分子基础是未知的。2型FPL(Dunnigan品种)是最常见的形式和表征最好的病症，并且是由于A和C LMNA基因中的错义突变所致。30例患者报告了3型FPL，并且其是由于PPARγ基因突变所致。5例患者报告了4型FPL，并且其是由于PLIN1基因突变所致。已经在具有胰岛素抵抗和糖尿病的家族的4名成员中报道了5型FPL，且其是由于AKT2基因突变所致。最近在一例具有CIDEC中的纯合突变的患者中鉴别了最后一种亚型，常染色体隐性FPL。一些具有FPL的个体在这些基因的任一个中都没有突变，从而表明另外的尚未鉴定的基因可能导致所述病症。
局部脂肪代谢障碍的诊断主要是临床的，并且需要在患有胰岛素抵抗(有或没有明显糖尿病)、高甘油三酯血症形式的显著血脂异常和脂肪肝的三联征患者中考虑(Huang-Dorang等人,J Endocrinol,2010,207:245-255)。患者经常出现糖尿病和需要高剂量胰岛素的严重胰岛素抵抗。存在严重胰岛素抵抗的其他证据是由黑棘皮病和多囊卵巢综合症(具有如雄激素过多症和月经过多的症状)的存在提供。一些患者发展严重的高甘油三酯血症，从而导致胰腺炎发作。在许多患者中，尽管完全优化了治疗或饮食修改，但甘油三酯(TG)水平仍然持续升高。具有肝肿大和/或升高的转氨酶的肝脂肪变性或脂肪性肝炎的放射学证据并不罕见(Handelsman等人,Endocrine Practice,2013,19(1):107-116)。与其他亚型相比，3型FPL似乎具有较轻的代谢异常。这些患者也可能具有异常LH/FSH分泌和生殖问题，以及心血管和肾脏病理学(Handelsman等人,Endocrine Practice,2013,19(1):107-116)。Dunnigan品种的患者具有冠状动脉疾病和其他类型的动脉粥样硬化性血管疾病的较高风险。虽然非常罕见的是，具有LMNA基因中的特异性突变的患者处于心肌病及其相关并发症、充血性心力衰竭和传导缺陷的增加的风险。
通过视觉和体检仔细临床评估脂肪分布可以确认诊断。患有FPL的患者在肢体和截肢区域具有减少的皮下脂肪，并且可能在颈部、面部和腹内区域具有过量的皮下脂肪沉积。Dunnigan品种的患者在儿童期具有正常的身体脂肪分布，并逐渐在青春期内从四肢和躯干中丧失皮下脂肪。在女性身上，脂肪的丧失在臀部和髋部可能最为突出。同时，这些患者在面部(“双下巴”)以及颈部和上背部(“具有水牛背的库兴氏(Cushingoid)外观”)积累脂肪。在Kobberling品种中，脂肪丧失通常限于胳膊和腿部。在具有PPARγ突变的患者中，快速损失的更远端分布在小腿和前臂中比在大腿和手臂中更突出。在具有PLIN1突变的患者中，下肢和臀部的脂肪丧失更为突出。在具有AKT2突变的患者中，脂肪丧失在胳膊和腿部更突出。脂肪组织丧失的程度通常决定代谢异常的严重程度。患者在四肢显示出突出的肌肉发育和血栓形成(扩大的静脉)，并且抱怨不成比例的食欲不振。女性的病状比男性更容易识别，且因此报道更多。患者也可能具有类似身体外观和/或脂肪丧失的家族史。
遗传测试(如果可用)是确认性的。(Hegele等人,J.Lipid Res,2007,48:1433-1444；Garg等人,J Clin Endocrinol Metab,2011,96:3313-3325；Huang-Dorang等人,JEndocrinol,2010,207:245-255)。
C.用于脂肪代谢障碍的当前可用治疗
用于脂肪代谢障碍的当前治疗包括减少热量摄入并通过运动增加能量消耗的生活方式改变。用于治疗严重胰岛素抵抗(例如，二甲双胍、噻唑烷二酮类、GLP-1、胰岛素)和/或高TG(例如，贝特类、鱼油)的常规疗法在这些患者中不是非常有效(Chan等人,EndocrPract,2010,16:310-323)。
在HIV相关性脂肪代谢障碍患者中，(替莫瑞林)可商业上用于减少过量腹部脂肪(包装说明书，2013)。(一种生长激素释放因子)在两项临床试验中进行了评估，其涉及具有脂肪代谢障碍和过量腹部脂肪的816例感染HIV的成年男性和女性。与安慰剂相比，显示出腹部脂肪的更大减少，如通过CT扫描所测量。一些患者报告自己的形象有所改善(包装说明书，2013)。
在全身性脂肪代谢障碍患者中，代谢并发症与瘦蛋白缺乏有关。(美曲普汀)已被批准为瘦蛋白替代疗法，用于治疗除了患有先天性或获得性全身性脂肪代谢障碍患者的饮食以外的瘦蛋白缺乏症的并发症(包装说明书，2014)。在NIH进行的两项开放标签研究中评估了的安全性和有效性，其包括具有糖尿病、高TG和空腹胰岛素水平升高的72名患者(48名患有全身性脂肪代谢障碍和24名患有局部脂肪代谢障碍)。有效降低HbA1c、空腹葡萄糖和甘油三酯(FDA BriefingDocument,2013；Oral等人,N Engl J Med,2002,346:570-578；Chan等人,Endocr Pract,2011,17(6):922–932)。
在局部脂肪代谢障碍患者中，在NIH进行的临床试验中具有更多变化和减弱的反应。虽然所有患有全身性脂肪代谢障碍的患者瘦蛋白水平较低[平均(SD)：1.3(1.1)ng/mL]，患有局部脂肪代谢障碍的患者的基线瘦蛋白值范围较宽[平均(SD)：4.9(3.1)ng/mL。在局部脂肪代谢障碍患者中，对于基线瘦蛋白浓度低的患者，观察到代谢变量的较大改善。例如，尽管对于具有局部脂肪代谢障碍和低瘦蛋白水平的患者，在第12月从HbA1c基线的平均变化为-0.9％，但对于具有局部脂肪代谢障碍和较高瘦蛋白水平的患者其仅为-0.1％(FDA Briefing Document,2013)。
由于安全问题，仅通过风险评估和减轻策略(REMS)计划提供，所述计划需要开药者和药学认证以及特殊文件FDA Briefing Document,2013；Chan等人,Endocr Pract,2011,17(6):922–932)。已经在服用的患有获得性全身性脂肪代谢障碍的患者中报道了三例T细胞淋巴瘤。暴露于治疗的大多数患者发展了具有对内源性瘦蛋白或的中和活性的抗药物抗体；这可能潜在导致严重的感染或治疗有效性的丧失。
目前不存在用于局部脂肪代谢障碍的非医源性形式的特定药物治疗。
因此，仍然需要为脂肪代谢障碍患者提供新颖的治疗选项。
已知ApoCIII抑制降低TG水平、降低HbA1c水平和/或升高受试者的HDL水平。用本文所述的化合物和组合物降低TG、HbA1c和/或提高HDL水平、抑制ApoCIII可预防、治疗、延迟或改善患者的脂肪代谢障碍或其症状。用本文所述的化合物和组合物降低TG、HbA1c和/或提高HDL水平、抑制ApoCIII可预防、治疗、延迟或改善与脂肪代谢障碍相关的疾病、病症或其症状。用本文所述的化合物和组合物抑制ApoCIII可预防、治疗、延迟、改善脂肪代谢障碍患者的心血管疾病或降低其风险。用本文所述的化合物和组合物抑制ApoCIII可预防、治疗、延迟、改善脂肪代谢障碍患者的代谢疾病或降低其风险。用本文所述的化合物和组合物抑制ApoCIII可预防、治疗、延迟、改善脂肪代谢障碍患者的胰腺炎或降低其风险。用本文所述的化合物和组合物抑制ApoCIII可改善脂肪代谢障碍患者的代谢特征。用本文所述的化合物和组合物抑制ApoCIII可预防、治疗、延迟、改善与脂肪代谢障碍患者中与糖尿病相关的并发症或减少所述并发症的数量和/或降低所述并发症的严重程度。用本文所述的化合物和组合物抑制ApoCIII可预防、治疗、延迟、改善与脂肪代谢障碍患者中与糖尿病相关的并发症或减少所述并发症的数量和/或降低所述并发症的严重程度。用本文所述的化合物和组合物抑制ApoCIII可改善脂肪代谢障碍患者的胰岛素敏感性。用本文所述的化合物和组合物抑制ApoCIII可预防、治疗、延迟、改善或减轻脂肪代谢障碍患者的肝脂肪变性、NAFLD、NASH和/或肝硬化。
某些化合物
先前已经在US 20040208856(US专利7,598,227)、US 20060264395(US专利7,750,141)、WO 2004/093783和WO 2012/149495中公开了包含靶向ApoCIII的反义化合物的组合物以及用于通过所述反义化合物抑制ApoCIII的方法，所述专利全部以引用的方式并入本文。在这些应用中，使用公开的序列(GenBank登录号NT_035088.1的核苷酸6238608至6242565，其代表基因组序列，作为SEQ ID NO:4并入本文；和GenBank登录号NM_000040.1，作为SEQ ID NO:1并入本文)，设计了一系列反义化合物来靶向人ApoCIII RNA的不同区域。这些化合物是长度为20个核苷酸的嵌合寡核苷酸(“缺口聚物”)，其由由两侧(5'和3'方向)上侧接五个核苷酸“翼”的2'-脱氧核苷酸组成的中心“缺口”区构成。翼由2’-O-(2-甲氧基乙基)核苷酸组成，也称为(2’-MOE)核苷酸。核苷间(主链)键联在整个寡核苷酸中是硫代磷酸酯(P＝S)。所有胞嘧啶残基是5-甲基胞嘧啶。
通过定量实时PCR分析反义化合物对HepG2细胞中的人ApoCIII mRNA水平的影响。一些化合物表现出至少45％的ApoCIII mRNA抑制，且因此是优选的。一些化合物表现出至少50％的人ApoCIII mRNA抑制，且因此是优选的。一些化合物表现出至少60％的人ApoCIIImRNA抑制，且因此是优选的。一些化合物表现出至少70％的人ApoCIII mRNA抑制，且因此是优选的。一些化合物表现出至少80％的人ApoCIII mRNA抑制，且因此是优选的。一些化合物表现出至少90％的人ApoCIII mRNA抑制，且因此是优选的。
这些优选的反义化合物所互补的靶区域被称为“优选的靶区段”，且因此优选用于通过反义化合物靶向。
实施例
非限制性公开且以引用方式并入
虽然已根据某些实施方案具体描述了本文所述的某些化合物、组合物和方法，但以下实施例仅用以说明本文所述的化合物并且不意图限制所述化合物。本申请中所述的各参考文献以引用的方式整体并入本文。
实施例1：ISIS 304801局部脂肪代谢障碍临床试验
如本文所述，将对患有局部脂肪代谢障碍的患者进行多中心、随机化双盲、安慰剂对照研究，以评估研究药物ISIS 304801的反应和药效学作用。部分脂肪代谢障碍的患者具有糖尿病和其他代谢异常，包括升高的甘油三酯，这增加了其胰腺炎的风险。ISIS 304801先前在美国专利7,598,227中公开，并且具有从SEQ ID NO:1(GENBANK登录号NM_000040.1)上的位置508起始或从SEQ ID NO:2(从核苷酸20262640至20266603截短的GENBANK登录号NT_033899.8)上的位置3139起始的序列5’-AGCTTCTTGTCCAGCTTTAT-3’(SEQ ID NO:3)。ISIS 304801具有5-10-5MOE缺口聚物基序，其包含由10个连接的脱氧核苷组成的缺口区段；由5个连接的核苷组成的5’翼区段；由5个连接的核苷组成的3’翼区段，其中所述缺口区段位于紧邻且介于5’翼区段与3’翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶，并且其中每个核苷间键联是硫代磷酸酯键联。已经显示ISIS 304801在施用于受试者时有效抑制ApoC-III并且是可耐受的。
患者群体
符合以下标准的达60名合格患者将被纳入此临床研究。
A.脂肪代谢障碍的临床诊断基于通过体检以及至少1个MAJOR标准和1个MINOR标准(以下)评估的局部形式的皮下体脂缺乏症：
MAJOR标准
a)通过卡尺测量，大腿前部的皮褶厚度较低：男性(≤10mm)和女性(≤22mm)或
b)家族性PL的遗传学诊断(例如，LMNA、PPAR-γ、AKT2、CIDEC或PLIN1基因中的突变)
MINOR标准
a)胰岛素抵抗定义为空腹胰岛素≥20mcU/mL
b)糖尿病
c)黑棘皮症
d)多囊卵巢综合征(PCOS)或PCOS样症状(多毛症、月经过少和/或多囊卵巢)
e)与高甘油三酯血症相关的胰腺炎病史
f)肝脂肪变性或脂肪性肝炎病史
g)类似的脂肪分布和/或一度相对脂肪丧失病史
h)肢体的突出肌肉发育和血栓形成(扩大的静脉)
i)不成比例的食欲过盛
B.在筛选和基线随访时禁食TG水平≥500mg/dL(≥5.7mmol/L)。如果在筛选和/或基线随访时的空腹TG值<500mg/dL(<5.7mmol/L)但≥350mg/dL(≥4.0mmol/L)，则可进行多达两次额外的测试以便符合条件。
研究设计
将患者随机分配为1:1(ISIS 304801:安慰剂)，并通过ALT水平(>正常的2x上限[ULN]对≤2x ULN)分层。对于每个患者，参与期间包括≤8周的筛选期，其包括约6周的饮食稳定期，在此期间将鼓励患者继续其当前饮食。基线评估将在筛选期的第-2周至第-1周和研究第1天(第一剂量的药物给予至患者)进行。
在饮食稳定后，多达60名合格患者将1:1随机分配以每周一次接受ISIS 304801300mg或安慰剂，持续52周。患者将接受药物自我施用教育。在治疗期期间，患者将在1-52周期间向研究中心报告就诊随访至少10次(大约第1、4、8、12、13、19、25、26、32、38、44、51和52周)。研究药物将每周施用一次。收集和测量生命体征、体检结果、腰围、皮褶测量、DEXA扫描、心电图(ECG)、肝脏MRI、超声心动图、临床实验室参数(包括血液学；血清化学；脂质组；血浆葡萄糖、胰岛素、C-肽和CRP；尿液分析和其他分析物)、ISIS 304801血浆谷浓度、免疫原性测试、7点SMBG、SMBG和饥饿日记结果的收集、AE、伴随药物/程序信息以及生活质量评估将根据程序的时间表进行。注射部位的不良事件(AE)应作为AE收集。在饮食稳定期开始时，饮食/酒精咨询将在整个治疗和随访期间的时间间隔加强。
在抽取所有脂质样品之前，患者将禁食，并且必须将局部抽取的样品送至中心实验室进行分析。如果对患者更方便，则可由家庭保健护理人员在第12、25和51周对脂质组进行血液取样。应该尽全力确保上周的剂量是在定期诊所访问前7天给予的。如果适用，则将向患者提供给药指导和培训。
所有访问将具有至少±2天的访问窗口。应该做出合理的尝试，以确保遵守访问时间表。但是，如果访问未发生或延迟，则所有后续访问将基于自第1天以后经过的时间而不是从上次访问之日起计算。
在第52周访问评估完成后，患者将进入13周的治疗后评估期。此时期由第58周和第65的两次研究中心访问组成。或者，在第52周访问评估结束后，符合条件的患者可选择在公开标签延伸(OLE)研究(由IRB/IEC和适当的监管机构批准的待定研究)中接受ISIS304801。在这种情况下，患者不会参加治疗后评估期。
在研究的所有期间记录伴随药物和AE
研究药物
将提供包含在预充式注射器(PFS)中的研究药物ISIS 304801(200mg/mL，1.5mL)的溶液。在每个给药日，受过训练的专业人员将施用或患者将自我施用300mg研究药物作为腹部、大腿或上臂的外部区域中的单次SC注射。
结果
将进行主要功效分析，以比较完全分析集(FAS)中ISIS 304801治疗组与安慰剂组之间的空腹TG中从基线至主要分析时间点的百分比变化。主要功效分析将在最后一个患者已经完成第52周访问之后发生，并且数据库已被锁定，并将基于从主要分析时间点(第3个月末)的空腹TG基线的变化百分比。
待分析的次要终点包括：第3、6和12个月的空腹TG的绝对变化；第3、6和12个月时空腹TG实现≥40％降低的患者的比例；在第6、9和12个月时HbA1c的变化；在第6、9和12个月时空腹血糖的变化；以及在第6和12个月时肝脏体积和肝脂肪变性的变化(如通过MRI评估)。
可评估的第三/探索性终点包括：
血糖
·具有HbA1c<7％的患者百分比
·具有从基线的HbA1c减少>1％的患者的百分比
·24小时葡萄糖的变化(使用7点SMBG)
·HOMA-IR的变化
·空腹胰岛素和C-肽的变化
·胰岛素使用的减少
脂质
·其他空腹脂质测量的变化：HDL-C、LDL-C、总胆固醇、VLDL-C、非-HDL-C、apoB(例如，apoB-48或apoB-100)、apoA1、apoC-III(总、乳糜微滴、VLDL、LDL和HDL)以及游离脂肪酸(FFA)
·脂蛋白粒度/数量的变化
脂肪组织
·皮褶厚度和DEXA的变化
·腹部VAT和SAT体积的变化
·脂联素和瘦蛋白的变化
·体重和腰围的变化
患者报告的结果
·生活质量的改变(EQ-5D，SF36)
·饥饿量表的变化
·广泛性疼痛的变化
其他
·睾酮的变化
结果将在可用时公开。
药代动力学(PK)、药效动力学(PD)和免疫原性(IM)分析
ISIS 304801的药代动力学(PK)、药效动力学(PD)和免疫原性性质将在可用时进行评估和公开。
安全性评估
待评估的安全终点或安全评估方法包括以下：
·包括胰腺炎和MACE的裁定事件的AE
·生命体征和体重
·体检
·临床实验室测试(血清化学、血液学、凝血、尿分析)
·超声心动图
·ECG
·伴随药物的使用
·MRI
安全评估将在可用时公开。
序列表
<110> Ionis制药公司
<120> 调节脂肪代谢障碍群体中的载脂蛋白C-III（ApoCIII）表达
<130> BIOL0268WO
<150> 62/126,439
<151> 2015-02-27
<160> 4
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 533
<212> DNA
<213> 智人
<400> 1
tgctcagttc atccctagag gcagctgctc caggaacaga ggtgccatgc agccccgggt 60
actccttgtt gttgccctcc tggcgctcct ggcctctgcc cgagcttcag aggccgagga 120
tgcctccctt ctcagcttca tgcagggtta catgaagcac gccaccaaga ccgccaagga 180
tgcactgagc agcgtgcagg agtcccaggt ggcccagcag gccaggggct gggtgaccga 240
tggcttcagt tccctgaaag actactggag caccgttaag gacaagttct ctgagttctg 300
ggatttggac cctgaggtca gaccaacttc agccgtggct gcctgagacc tcaatacccc 360
aagtccacct gcctatccat cctgcgagct ccttgggtcc tgcaatctcc agggctgccc 420
ctgtaggttg cttaaaaggg acagtattct cagtgctctc ctaccccacc tcatgcctgg 480
cccccctcca ggcatgctgg cctcccaata aagctggaca agaagctgct atg 533
<210> 2
<211> 3964
<212> DNA
<213> 智人
<400> 2
ctactccagg ctgtgttcag ggcttggggc tggtggaggg aggggcctga aattccagtg 60
tgaaaggctg agatgggccc gaggcccctg gcctatgtcc aagccatttc ccctctcacc 120
agcctctccc tggggagcca gtcagctagg aaggaatgag ggctccccag gcccaccccc 180
agttcctgag ctcatctggg ctgcagggct ggcgggacag cagcgtggac tcagtctcct 240
agggatttcc caactctccc gcccgcttgc tgcatctgga caccctgcct caggccctca 300
tctccactgg tcagcaggtg acctttgccc agcgccctgg gtcctcagtg cctgctgccc 360
tggagatgat ataaaacagg tcagaaccct cctgcctgtc tgctcagttc atccctagag 420
gcagctgctc caggtaatgc cctctgggga ggggaaagag gaggggagga ggatgaagag 480
gggcaagagg agctccctgc ccagcccagc cagcaagcct ggagaagcac ttgctagagc 540
taaggaagcc tcggagctgg acgggtgccc cccacccctc atcataacct gaagaacatg 600
gaggcccggg aggggtgtca cttgcccaaa gctacacagg gggtggggct ggaagtggct 660
ccaagtgcag gttcccccct cattcttcag gcttagggct ggaggaagcc ttagacagcc 720
cagtcctacc ccagacaggg aaactgaggc ctggagaggg ccagaaatca cccaaagaca 780
cacagcatgt tggctggact ggacggagat cagtccagac cgcaggtgcc ttgatgttca 840
gtctggtggg ttttctgctc catcccaccc acctcccttt gggcctcgat ccctcgcccc 900
tcaccagtcc cccttctgag agcccgtatt agcagggagc cggcccctac tccttctggc 960
agacccagct aaggttctac cttaggggcc acgccacctc cccagggagg ggtccagagg 1020
catggggacc tggggtgccc ctcacaggac acttccttgc aggaacagag gtgccatgca 1080
gccccgggta ctccttgttg ttgccctcct ggcgctcctg gcctctgccc gtaagcactt 1140
ggtgggactg ggctgggggc agggtggagg caacttgggg atcccagtcc caatgggtgg 1200
tcaagcagga gcccagggct cgtccagagg ccgatccacc ccactcagcc ctgctctttc 1260
ctcaggagct tcagaggccg aggatgcctc ccttctcagc ttcatgcagg gttacatgaa 1320
gcacgccacc aagaccgcca aggatgcact gagcagcgtg caggagtccc aggtggccca 1380
gcaggccagg tacacccgct ggcctccctc cccatccccc ctgccagctg cctccattcc 1440
cacccgcccc tgccctggtg agatcccaac aatggaatgg aggtgctcca gcctcccctg 1500
ggcctgtgcc tcttcagcct cctctttcct cacagggcct ttgtcaggct gctgcgggag 1560
agatgacaga gttgagactg cattcctccc aggtccctcc tttctccccg gagcagtcct 1620
agggcgtgcc gttttagccc tcatttccat tttcctttcc tttccctttc tttctctttc 1680
tatttctttc tttctttctt tctttctttc tttctttctt tctttctttc tttctttctt 1740
tctttctttc ctttctttct ttcctttctt tctttccttt ctttctttct ttcctttctt 1800
tctctttctt tctttctttc ctttttcttt ctttccctct cttcctttct ctctttcttt 1860
cttcttcttt tttttttaat ggagtctccc tctgtcacct aggctggagt gcagtggtgc 1920
catctcggct cactgcaacc tccgtctccc gggttcaacc cattctcctg cctcagcctc 1980
ccaagtagct gggattacag gcacgcgcca ccacacccag ctaatttttg tatttttagc 2040
agagatgggg tttcaccatg ttggccaggt tggtcttgaa ttcctgacct caggggatcc 2100
tcctgcctcg gcctcccaaa gtgctgggat tacaggcatg agccactgcg cctggcccca 2160
ttttcctttt ctgaaggtct ggctagagca gtggtcctca gcctttttgg caccagggac 2220
cagttttgtg gtggacaatt tttccatggg ccagcgggga tggttttggg atgaagctgt 2280
tccacctcag atcatcaggc attagattct cataaggagc cctccaccta gatccctggc 2340
atgtgcagtt cacaataggg ttcacactcc tatgagaatg taaggccact tgatctgaca 2400
ggaggcggag ctcaggcggt attgctcact cacccaccac tcacttcgtg ctgtgcagcc 2460
cggctcctaa cagtccatgg accagtacct atctatgact tgggggttgg ggacccctgg 2520
gctaggggtt tgccttggga ggccccacct gacccaattc aagcccgtga gtgcttctgc 2580
tttgttctaa gacctggggc cagtgtgagc agaagtgtgt ccttcctctc ccatcctgcc 2640
cctgcccatc agtactctcc tctcccctac tcccttctcc acctcaccct gactggcatt 2700
agctggcata gcagaggtgt tcataaacat tcttagtccc cagaaccggc tttggggtag 2760
gtgttatttt ctcactttgc agatgagaaa attgaggctc agagcgatta ggtgacctgc 2820
cccagatcac acaactaatc aatcctccaa tgactttcca aatgagaggc tgcctccctc 2880
tgtcctaccc tgctcagagc caccaggttg tgcaactcca ggcggtgctg tttgcacaga 2940
aaacaatgac agccttgacc tttcacatct ccccaccctg tcactttgtg cctcaggccc 3000
aggggcataa acatctgagg tgacctggag atggcagggt ttgacttgtg ctggggttcc 3060
tgcaaggata tctcttctcc cagggtggca gctgtggggg attcctgcct gaggtctcag 3120
ggctgtcgtc cagtgaagtt gagagggtgg tgtggtcctg actggtgtcg tccagtgggg 3180
acatgggtgt gggtcccatg gttgcctaca gaggagttct catgccctgc tctgttgctt 3240
cccctgactg atttaggggc tgggtgaccg atggcttcag ttccctgaaa gactactgga 3300
gcaccgttaa ggacaagttc tctgagttct gggatttgga ccctgaggtc agaccaactt 3360
cagccgtggc tgcctgagac ctcaataccc caagtccacc tgcctatcca tcctgcgagc 3420
tccttgggtc ctgcaatctc cagggctgcc cctgtaggtt gcttaaaagg gacagtattc 3480
tcagtgctct cctaccccac ctcatgcctg gcccccctcc aggcatgctg gcctcccaat 3540
aaagctggac aagaagctgc tatgagtggg ccgtcgcaag tgtgccatct gtgtctgggc 3600
atgggaaagg gccgaggctg ttctgtgggt gggcactgga cagactccag gtcaggcagg 3660
catggaggcc agcgctctat ccaccttctg gtagctgggc agtctctggg cctcagtttc 3720
ttcatctcta aggtaggaat caccctccgt accctgcctt ccttgacagc tttgtgcgga 3780
aggtcaaaca ggacaataag tttgctgata ctttgataaa ctgttaggtg ctgcacaaca 3840
tgacttgagt gtgtgcccca tgccagccac tatgcctggc acttaagttg tcatcagagt 3900
tgagactgtg tgtgtttact caaaactgtg gagctgacct cccctatcca ggccccctag 3960
ccct 3964
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 3
agcttcttgt ccagctttat 20
<210> 4
<211> 3958
<212> DNA
<213> 智人
<400> 4
ctactccagg ctgtgttcag ggcttggggc tggtggaggg aggggcctga aattccagtg 60
tgaaaggctg agatgggccc gaggcccctg gcctatgtcc aagccatttc ccctctcacc 120
agcctctccc tggggagcca gtcagctagg aaggaatgag ggctccccag gcccaccccc 180
agttcctgag ctcatctggg ctgcagggct ggcgggacag cagcgtggac tcagtctcct 240
agggatttcc caactctccc gcccgcttgc tgcatctgga caccctgcct caggccctca 300
tctccactgg tcagcaggtg acctttgccc agcgccctgg gtcctcagtg cctgctgccc 360
tggagatgat ataaaacagg tcagaaccct cctgcctgtc tgctcagttc atccctagag 420
gcagctgctc caggtaatgc cctctgggga ggggaaagag gaggggagga ggatgaagag 480
gggcaagagg agctccctgc ccagcccagc cagcaagcct ggagaagcac ttgctagagc 540
taaggaagcc tcggagctgg acgggtgccc cccacccctc atcataacct gaagaacatg 600
gaggcccggg aggggtgtca cttgcccaaa gctacatagg gggtggggct ggaagtggct 660
ccaagtgcag gttcccccct cattcttcag gcttagggct ggaggaagcc ttagacagcc 720
cagtcctacc ccagacaggg aaactgaggc ctggagaggg ccagaaatca cccaaagaca 780
cacagcatgt tggctggact ggacggagat cagtccagac cgcaggtgcc ttgatgttca 840
gtctggtggg ttttctgctc catcccaccc acctcccttt gggcctcgat ccctcgcccc 900
tcaccagtcc cccttctgag agcccgtatt agcagggagc cggcccctac tccttctggc 960
agacccagct aaggttctac cttaggggcc acgccacctc cccagggagg ggtccagagg 1020
catggggacc tggggtgccc ctcacaggac acttccttgc aggaacagag gtgccatgca 1080
gccccgggta ctccttgttg ttgccctcct ggcgctcctg gcctctgccc gtaagcactt 1140
ggtgggactg ggctgggggc agggtggagg caacttgggg atcccagtcc caatgggtgg 1200
tcaagcagga gcccagggct cgtccatagg ccgatccacc ccactcagcc ctgctctttc 1260
ctcaggagct tcagaggccg aggatgcctc ccttctcagc ttcatgcagg gctacatgaa 1320
gcacgccacc aagaccgcca aggatgcact gagcagcgtg caggagtccc aggtggccca 1380
gcaggccagg tacacccgct ggcctccctc cccatccccc ctgccagctg cctccattcc 1440
cacccacccc tgccctggtg agatcccaac aatggaatgg aggtgctcca gcctcccctg 1500
ggcctgtgcc tcttcagcct cctctttcct cacagggcct ttgtcaggct gctgcgggag 1560
agatgacaga gttgagactg cattcctccc aggtccctcc tttctcccca gagcagtcct 1620
agggcgcgcc gttttagccc tcatttccat tttcctttcc tttccctttc tttccctttc 1680
tatttctttc tttctttctt tctttctttc tttctttctt tctttctttc tttctttctt 1740
tctttctttc ctttctttct ttcttttctt ctttctttct ttcctttctt tctctttctt 1800
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cttttttttt taatggagtc tccctctgtc acccaggctg gagtgcagtg gtgccatctc 1920
ggctcactgc aacctccgtc tcccgggttc aacccattct cctgcctcag cctcccaagt 1980
agctgggatt acaggcacgc gccaccacac ccagctaatt tttgtatttt tagcagagat 2040
ggggtttcac catgttggcc aggttggtct tgaattcctg acctcagggg atcctcctgc 2100
ctcggcctcc caaagcgctg ggattacagg catgagccac tgcgcctggc cccattttcc 2160
ttttctgaag gtctggctag agcagtggtc ctcagccttt ttggcaccag ggaccagttt 2220
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ctaagacctg gggccagtgt gagcagaagt gtgtccttcc tctcccatcc tgcccctgcc 2640
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actgatttag gggctgggtg accgatggct tcagttccct gaaagactac tggagcaccg 3300
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tggctgcctg agacctcaat accccaagtc cacctgccta tccatcctgc cagctccttg 3420
ggtcctgcaa tctccagggc tgcccctgta ggttgcttaa aagggacagt attctcagtg 3480
ctctcctacc ccacctcatg cctggccccc ctccaggcat gctggcctcc caataaagct 3540
ggacaagaag ctgctatgag tgggccgtcg caagtgtgcc atctgtgtct gggcatggga 3600
aagggccgag gctgttctgt gggtgggcac tggacagact ccaggtcagg caggcatgga 3660
ggccagcgct ctatccacct tctggtagct gggcagtctc tgggcctcag tttcttcatc 3720
tctaaggtag gaatcaccct ccgtaccctg ccttccttga cagctttgtg cggaaggtca 3780
aacaggacaa taagtttgct gatactttga taaactgtta ggtgctgcac aacatgactt 3840
gagtgtgtgc cccatgccag ccactatgcc tggcacttaa gttgtcatca gagttgagac 3900
tgtgtgtgtt tactcaaaac tgtggagctg acctccccta tccaggccac ctagccct 3958

Claims (33)

1.一种治疗、预防、延迟或改善动物中的脂肪代谢障碍的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物，从而预防、延迟或改善所述动物中的脂肪代谢障碍。
2.如权利要求1所述的方法，其中施用所述化合物降低所述动物中的甘油三酯水平。
3.如权利要求1所述的方法，其中胰腺炎、心血管和/或代谢疾病或病症的症状或风险得以改善。
4.一种降低具有脂肪代谢障碍的动物中的甘油三酯水平的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物，由此降低所述具有脂肪代谢障碍的动物中的甘油三酯水平。
5.一种预防、延迟或改善具有脂肪代谢障碍的动物中的心血管和/或代谢疾病、病症、病状或其症状的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物，由此预防、延迟或改善所述具有脂肪代谢障碍的动物中的所述心血管和/或代谢疾病、病症、病状或其症状。
6.一种预防、延迟或改善具有脂肪代谢障碍的动物中的胰腺炎或其症状的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物，由此预防、延迟或改善所述具有脂肪代谢障碍的动物中的胰腺炎或其症状。
7.如权利要求1、4、5或6所述的方法，其中所述脂肪代谢障碍是局部脂肪代谢障碍。
8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中ApoCIII具有如在SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2或SEQ ID NO:4中所示的核酸序列。
9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述化合物包含ApoCIII的核酸抑制剂。
10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述化合物包含靶向ApoCIII的修饰的寡核苷酸。
11.如权利要求10所述的方法，其中所述修饰的寡核苷酸具有核碱基序列，所述核碱基序列包含SEQ ID NO:3的核碱基序列的至少8个连续核碱基。
12.如权利要求10所述的方法，其中所述修饰的寡核苷酸的所述核碱基序列与SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4的核碱基序列至少80％、至少90％或100％互补。
13.如权利要求10-12中任一项所述的方法，其中所述修饰的寡核苷酸由单链修饰的寡核苷酸组成。
14.如权利要求10-13中任一项所述的方法，其中所述修饰的寡核苷酸由12至30个连接的核苷组成。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述修饰的寡核苷酸由20个连接的核苷组成。
16.如权利要求10-15中任一项所述的方法，其中所述修饰的寡核苷酸包含至少一个修饰的核苷间键联、糖部分或核碱基。
17.如权利要求16所述的方法，其中所述修饰的寡核苷酸的所述至少一个修饰的核苷间键联是硫代磷酸酯核苷间键联，所述至少一种修饰的糖是双环糖或2'-O-甲氧基乙基，并且所述至少一个修饰的核碱基是5-甲基胞嘧啶。
18.如权利要求10所述的方法，其中所述修饰的寡核苷酸包含：
(a)由连接的脱氧核苷组成的缺口区段；
(b)由连接的核苷组成的5’翼区段；
(c)由连接的核苷组成的3’翼区段；
其中所述缺口区段位于紧邻所述5’翼区段和所述3’翼区段且在所述5’翼区段与所述3’翼区段之间，并且其中每个翼区段的每个核苷包含修饰的糖。
19.如权利要求10所述的方法，其中所述修饰的寡核苷酸包含：
(a)由10个连接的脱氧核苷组成的缺口区段；
(b)由5个连接的核苷组成的5’翼区段；
(c)由5个连接的核苷组成的3’翼区段；
其中所述缺口区段位于紧邻所述5’翼区段和所述3’翼区段且在所述5’翼区段与所述3’翼区段之间，并且其中每个翼区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5'-甲基胞嘧啶，并且其中至少核苷间键联是硫代磷酸酯键联。
20.一种治疗、预防、延迟或改善动物中的局部脂肪代谢障碍或与局部脂肪代谢障碍相关的疾病的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含具有SEQ ID NO:3的序列的修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含：
(a)由10个连接的脱氧核苷组成的缺口区段；
(b)由5个连接的核苷组成的5’翼区段；
(c)由5个连接的核苷组成的3’翼区段；
其中所述缺口区段位于紧邻所述5’翼区段和所述3’翼区段且在所述5’翼区段与所述3’翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5'-甲基胞嘧啶，其中至少核苷间键联是硫代磷酸酯键联，并且其中治疗、预防、延迟或改善所述动物中的所述局部脂肪代谢障碍或与局部脂肪代谢障碍相关的疾病。
21.一种降低具有局部脂肪代谢障碍的动物中的甘油三酯水平的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含具有SEQID NO:3的序列的修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含：
(a)由10个连接的脱氧核苷组成的缺口区段；
(b)由5个连接的核苷组成的5’翼区段；
(c)由5个连接的核苷组成的3’翼区段；
其中所述缺口区段位于紧邻所述5’翼区段和所述3’翼区段且在所述5’翼区段与所述3’翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5'-甲基胞嘧啶，其中至少一个核苷间键联是硫代磷酸酯键联，并且其中所述修饰的寡核苷酸降低所述具有局部脂肪代谢障碍的动物中的甘油三酯水平。
22.一种预防、延迟或改善具有局部脂肪代谢障碍的动物中的心血管和/或代谢疾病、病症、病状或其症状的方法，所述方法通过向所述动物施用治疗有效量的包含具有SEQ IDNO:3的序列的修饰的寡核苷酸的化合物来进行，其中所述修饰的寡核苷酸包含：
(a)由10个连接的脱氧核苷组成的缺口区段；
(b)由5个连接的核苷组成的5’翼区段；
(c)由5个连接的核苷组成的3’翼区段；
其中所述缺口区段位于紧邻所述5’翼区段和所述3’翼区段且在所述5’翼区段与所述3’翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5'-甲基胞嘧啶，并且其中至少一个核苷间键联是硫代磷酸酯键联，其中所述修饰的寡核苷酸预防、延迟、改善或减轻所述具有局部脂肪代谢障碍的动物中的所述心血管和/或代谢疾病、病症、病状或其症状。
23.一种预防、延迟或改善具有局部脂肪代谢障碍的动物中的胰腺炎或其症状的方法，所述方法通过向所述动物施用治疗有效量的包含具有SEQ ID NO:3的序列的修饰的寡核苷酸的化合物来进行，其中所述修饰的寡核苷酸包含：
(a)由10个连接的脱氧核苷组成的缺口区段；
(b)由5个连接的核苷组成的5’翼区段；
(c)由5个连接的核苷组成的3’翼区段；
其中所述缺口区段位于紧邻所述5’翼区段和所述3’翼区段且在所述5’翼区段与所述3’翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5'-甲基胞嘧啶，其中至少一个核苷间键联是硫代磷酸酯键联，并且其中所述修饰的寡核苷酸预防、延迟、改善或减轻所述胰腺炎或其症状。
24.一种包含ApoCIII特异性抑制剂的化合物，其用于：
a.治疗、预防、延迟或改善动物中的局部脂肪代谢障碍或与局部脂肪代谢障碍相关的疾病；
b.降低具有局部脂肪代谢障碍的动物中的甘油三酯水平；
c.增加具有局部脂肪代谢障碍的动物中的HDL水平和/或提高TG与HDL的比例；
d.预防、延迟或改善具有局部脂肪代谢障碍的动物中的心血管和/或代谢疾病、病症、病状或其症状；和/或
e.预防、延迟或改善具有局部脂肪代谢障碍的动物中的胰腺炎或其症状。
25.如前述权利要求中任一项所述的方法或用途，其中所述化合物是胃肠外施用的。
26.如权利要求25所述的方法或用途，其中所述胃肠外施用是皮下施用。
27.如前述权利要求中任一项所述的方法或用途，其还包括第二药剂。
28.如权利要求27所述的方法或用途，其中所述第二药剂选自瘦蛋白替代疗法、ApoCIII降低剂、胆固醇降低剂、非HDL降脂剂、LDL降低剂、TG降低剂、胆固醇降低剂、HDL升高剂、鱼油、烟酸、贝特类、他汀类、DCCR(二氮嗪盐)、葡萄糖降低剂或抗糖尿病剂。
29.如权利要求27所述的方法或用途，其中所述第二药剂与所述化合物同时或相继施用。
30.如前述权利要求中任一项所述的方法或用途，其中所述化合物呈盐形式。
31.如前述权利要求中任一项所述的方法或用途，其还包括药学上可接受的载体或稀释剂。
32.如前述权利要求中任一项所述的方法或用途，其中所述化合物是缀合的。
33.如前述权利要求中任一项所述的方法或用途，其中所述局部脂肪代谢障碍患者通过遗传筛选来鉴定。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HRP20231076T1 (hr) 2016-09-12 2023-12-22 Amryt Pharmaceuticals Inc. Postupci detektiranja neutralizirajućih protutijela protiv leptina
US20180193270A1 (en) 2016-11-29 2018-07-12 PureTech Health LLC Exosomes for delivery of therapeutic agents
AU2021353849A1 (en) * 2020-10-02 2023-03-23 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing apociii expression
CN120989078A (zh) * 2021-07-16 2025-11-21 瑞博泰克(山东)生物医药科技有限公司 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130317085A1 (en) * 2003-04-16 2013-11-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of apolipoprotein c-iii expression
CN103547271A (zh) * 2011-04-27 2014-01-29 Isis制药公司 载脂蛋白ciii（apociii）表达的调节
WO2014127268A2 (en) * 2013-02-14 2014-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of apolipoprotein c-iii (apociii) expression in lipoprotein lipase deficient (lpld) populations
US20150045431A1 (en) * 2013-08-06 2015-02-12 Amarin Pharmaceuticals Ireland Limited Methods of treating a cardiovascular disorder in a subject on apo-c3 modulating therapy

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101733414B1 (ko) * 2011-01-31 2017-05-10 카딜라 핼쓰캐어 리미티드 지방이상증의 치료
US9909124B2 (en) * 2013-06-21 2018-03-06 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating apolipoprotein C-III expression for improving a diabetic profile

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130317085A1 (en) * 2003-04-16 2013-11-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of apolipoprotein c-iii expression
CN103547271A (zh) * 2011-04-27 2014-01-29 Isis制药公司 载脂蛋白ciii（apociii）表达的调节
WO2014127268A2 (en) * 2013-02-14 2014-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of apolipoprotein c-iii (apociii) expression in lipoprotein lipase deficient (lpld) populations
US20150045431A1 (en) * 2013-08-06 2015-02-12 Amarin Pharmaceuticals Ireland Limited Methods of treating a cardiovascular disorder in a subject on apo-c3 modulating therapy

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CATHERINE COFFINIER ET AL: "A Potent HIV Protease Inhibitor, Darunavir, Does Not Inhibit ZMPSTE24 or Lead to an Accumulation of Farnesyl-prelamin A in Cells", 《JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY》 *
ERIC BONNET ET AL: "Apoprotein C-III and E-Containing Lipoparticles Are Markedly Increased in HIV-Infected Patients Treated with Protease Inhibitors: Association with the Development of Lipodystrophy", 《THE JOURNAL OF CLINICAL ENDOCRINOLOGY & METABOLISM》 *
SIMHA V ET AL: "Inherited lipodystrophies and hypertriglyceridemia", 《CURR OPIN LIPIDOL》 *

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