CN107207517A

CN107207517A - 稠合嘧啶化合物的新型的盐及其结晶

Info

Publication number: CN107207517A
Application number: CN201680007403.6A
Authority: CN
Inventors: 鸳海宏美
Original assignee: Taiho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taiho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2015-01-30
Filing date: 2016-01-29
Publication date: 2017-09-26
Anticipated expiration: 2036-01-29
Also published as: CN107207517B; TW201632525A; US20180127428A1; PL3115365T3; CA2974335A1; RU2017127128A; HUE038041T2; RU2702660C2; PH12017501335A1; KR101852738B1; TWI605049B; EP3115365B1; AU2016213031B2; MX2017009864A; MY196997A; RU2017127128A3; ES2667247T3; PH12017501335B1; BR112017016318A2; US9908889B2

Abstract

本发明提供一种对于BTK的选择性高、能够有效用作医药品原料药的盐。发现式(1)所示的(R)－1－(1－丙烯酰哌啶－3－基)－4－氨基－N－(苯并[d]噁唑－2－基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－3－甲酰胺(化合物A)的富马酸盐与化合物A或其他的盐相比，没有通道水合的性质，稳定且吸收性优异。

Description

稠合嘧啶化合物的新型的盐及其结晶

技术领域

本发明涉及具有布鲁顿氏酪氨酸激酶(Bruton′s tyrosine kinase，BTK)抑制活性的化合物的新型的盐及其结晶。

背景技术

众所周知生物体内存在各种蛋白激酶，它们参与宽范围的功能调节。布鲁顿氏酪氨酸激酶(BTK)是属于Tec激酶家族的蛋白激酶，是承担着在B细胞抗原受体(BCR)信号的下游控制B细胞的增殖、生存、分化和活化等的重要作用的非受体型酪氨酸激酶(非专利文献1)。可以认为能够控制BTK的活性的抑制剂能够有效地用作与BTK信号通路的异常亢进相关的疾病(例如癌等)的治疗药。

作为具有BTK抑制活性的化合物，已知PCI－32765(非专利文献2)以及专利文献1和2所记载的化合物。

已知专利文献1和2所公开的化合物除了对BTK显示高抑制活性之外，对EGFR(表皮生长因子受体，Epidermal Growth Factor Receptor)、JAK3(杰纳斯激酶3，Janus kinase3)等也显示出高抑制活性。但是，这种多激酶抑制剂通过抑制各种信号通路来抑制细胞增殖等，因而可能存在各种各样的副作用。例如，已知EGFR与作为配体的表皮生长因子(Epidermal Growth Factor，EGF)等结合，参与各种细胞的增殖和生存(抑制凋亡等)等(非专利文献3)，但是已知以EGFR为靶标的抑制剂，普遍地有皮肤障碍或消化道障碍等副作用，通常认为这些副作用可能与野生型EGFR信号通路的抑制相关(非专利文献4)。

于是，作为具有BTK抑制活性、且EGFR抑制活性弱的化合物，已知PCI－45292(非专利文献5)。

在先技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2011/090760号

专利文献2：国际公开第2009/158571号

非专利文献

非专利文献1：Curr Opin Immunol.,2000Jun；12(3)：282－8.

非专利文献2：Proc Natl Acad Sci USA.2010Jul 20；107(29)：13075－80.

非专利文献3：Nature Rev.Cancer,vol.6,pp803－811(2006)

非专利文献4：Nature Rev.Clin.Oncol.,vol.6,pp98－109(2012)

非专利文献5：American College of Rheumatology Annual Meeting,Atlanta,GA,6－11November,2010)

发明内容

发明所要解决的课题

本发明的课题在于提供一种对BTK具有高抑制活性、而对EGFR等其他激酶的抑制活性低的、选择性高的BTK抑制剂，还提供作为医药品原料药有用的盐。

用于解决课题的手段

本发明的发明人为了解决上述课题进行了深入研究，结果发现：下述式(1)所示的(R)－1－(1－丙烯酰哌啶－3－基)－4－氨基－N－(苯并[d]噁唑－2－基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－3－甲酰胺(化合物A)对BTK具有高抑制活性、并且对于EGFR等其他激酶的抑制活性低，能够有效地作为用于治疗癌、自身免疫疾病、过敏性疾病等的医药。

于是，本发明的发明人为了开发化合物A的制剂，对化合物A的物理化学性质进行了研究，发现：(1)将化合物A的游离体暴露在高湿度下时，吸收空气中的水分，而在暴露在低湿度下时，放出水分，具有作为通道水合(channel hydrate)的性质，难以作为医药品原料药使用；(2)作为化合物A的酸加成盐，仅与酒石酸、磷酸、富马酸生成酸加成盐；(3)更令人惊奇的是这些酸加成盐中，仅富马酸盐不具有通道水合的性质，从而完成了本发明。

进一步详细而言，医药品的工业生产中需要原料药的稳定性等，但这些依赖于各种化合物的属性。因此，在复杂的化合物中，难以预测具备适合作为医药品原料药的性质的盐，需要对每种化合物找出作为医药品有用的各种盐。从这样的观点出发，本发明的发明人合成了化合物A的各种盐，对其特性和稳定性进行了研究，根据我们的研究，能够形成盐的是富马酸盐、酒石酸盐、磷酸盐、镁盐。但是，在这些盐和游离体中，酒石酸盐和游离体具有通道水合的性质，固体稳定性欠缺；另外，磷酸盐在水分吸附解吸试验中无法维持原本的结晶形态、并且固体稳定性欠缺；镁盐含有大量类似物质，因而结晶的纯度低。发现唯有富马酸盐能够避免通道水合的性质、并且取得操作性、再现性优异、稳定且吸收性，从而完成了本发明。

即，本发明涉及以下的1)～18)。

1)(R)－1－(1－丙烯酰哌啶－3－基)－4－氨基－N－(苯并[d]噁唑－2－基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－3－甲酰胺(化合物A)的富马酸盐。

2)(R)－1－(1－丙烯酰哌啶－3－基)－4－氨基－N－(苯并[d]噁唑－2－基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－3－甲酰胺(化合物A)·1/2富马酸盐。

3)(R)－1－(1－丙烯酰哌啶－3－基)－4－氨基－N－(苯并[d]噁唑－2－基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－3－甲酰胺(化合物A)·1富马酸盐。

4)以上述化合物A的富马酸盐为有效成分的BTK抑制剂。

5)含有上述化合物A的富马酸盐的医药组合物。

6)以上述化合物A的富马酸盐为有效成分的抗肿瘤剂或过敏性疾病、自身免疫疾病、炎症性疾病的预防剂和/或治疗剂。

7)以上述化合物A的富马酸盐为有效成分的针对血液肿瘤的抗肿瘤剂、或过敏性鼻炎、花粉过敏症、特异性皮炎、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮的预防剂和/或治疗剂。

8)上述化合物A的富马酸盐用于制造BTK抑制剂的使用。

9)上述化合物A的富马酸盐用于制造医药组合物的使用。

10)上述化合物A的富马酸盐用于制造抗肿瘤剂或过敏性疾病、自身免疫疾病、炎症性疾病的预防剂和/或治疗剂的使用。

11)上述化合物A的富马酸盐用于制造针对血液肿瘤的抗肿瘤剂、或过敏性鼻炎、花粉过敏症、特异性皮炎、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮的预防剂和/或治疗剂的使用。

12)用于BTK抑制的上述化合物A的富马酸盐。

13)作为医药使用的上述化合物A的富马酸盐。

14)用于肿瘤、过敏性疾病、自身免疫疾病或炎症性疾病的预防或治疗的上述化合物A的富马酸盐。

15)用于血液肿瘤、过敏性鼻炎、花粉过敏症、特异性皮炎、类风湿性关节炎或全身性红斑狼疮的预防或治疗的上述化合物A的富马酸盐。

16)一种BTK抑制方法，包括向需要BTK抑制的对象给予有效量的上述化合物A的富马酸盐的步骤。

17)一种肿瘤、过敏性疾病、自身免疫疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗方法，包括向需要预防和/或治疗肿瘤、过敏性疾病、自身免疫疾病或炎症性疾病的对象，给予有效量的上述化合物A的富马酸盐的步骤。

18)一种血液肿瘤、过敏性鼻炎、花粉过敏症、特异性皮炎、类风湿性关节炎或全身性红斑狼疮的治疗方法，包括向需要治疗血液肿瘤、过敏性鼻炎、花粉过敏症、特异性皮炎、类风湿性关节炎或全身性红斑狼疮的对象，给予有效量的上述化合物A的富马酸盐的步骤。

发明效果

本发明的化合物A的富马酸盐具有作为医药品原料药优异的固体稳定性，与化合物A、或化合物A的富马酸盐以外的盐相比，能够避免通道水合的性质，取得操作性和再现性优异。并且，本发明的化合物A的富马酸盐显示优异的口服吸收性，作为医药品或医药品原料药极为有用。

附图说明

图1表示实施例1中合成的化合物A的1富马酸盐(非晶体)的粉末X射线衍射图谱(竖轴表示强度(cps)、横轴表示衍射角(2θ±0.1°))。

图2表示实施例2中合成的化合物A的1/2富马酸盐(结晶)的粉末X射线衍射图谱(竖轴表示强度(cps)、横轴表示衍射角(2θ±0.1°))。

图3表示实施例2中合成的化合物A的1/2富马酸盐(结晶)的差示扫描量热(DSC)曲线。

图4表示实施例3中合成的化合物A的1富马酸盐(结晶)的粉末X射线衍射图谱(竖轴表示强度(cps)、横轴表示衍射角(2θ±0.1°))。

图5表示实施例3中合成的化合物A的1富马酸盐(结晶)的差示扫描量热(DSC)曲线。

图6表示化合物A的水分吸附解吸等温曲线。

图7表示化合物A的1富马酸盐(结晶)的水分吸附解吸等温曲线。

图8表示化合物A的1/2富马酸盐(结晶)的水分吸附解吸等温曲线。

图9表示化合物A的1/2酒石酸盐的水分吸附解吸等温曲线。

图10表示化合物A的1磷酸盐的水分吸附解吸等温曲线。

图11表示化合物A的1富马酸盐(结晶)针对小鼠胶原诱导关节炎模型的效果。

具体实施方式

以下对本发明进行详细说明。

本说明书中仅记作“化合物A”的情况下，意指作为游离体的(R)－1－(1－丙烯酰哌啶－3－基)－4－氨基－N－(苯并[d]噁唑－2－基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－3－甲酰胺。

本说明书中仅记作“化合物A的富马酸盐”的情况下，只要是化合物A与富马酸的盐体均可，其含义包括1富马酸盐、1/2富马酸盐。并且，其含义还包括化合物A的富马酸盐的结晶、以及化合物A的富马酸盐的非晶体的任意情况。作为化合物A的富马酸盐，优选化合物A的1富马酸盐(有时简记作“化合物A·1富马酸盐”)、化合物A的1/2富马酸盐(有时简记作“化合物A·1/2富马酸盐”)，更优选化合物A的1富马酸盐(结晶)、化合物A的1/2富马酸盐(结晶)、化合物A的1富马酸盐(非晶体)，特别优选化合物A的1富马酸盐(结晶)、化合物A的1/2富马酸盐(结晶)。

本说明书中，“结晶”、“非晶体”的术语以通常的含义使用。

有时生成空间上规则的的原子配列和物理化学性质不同的多种结晶(多晶型)，本发明的盐可以是这些多晶型中的任一种，还可以是2种以上晶型的混合物、以及结晶与非晶体的混合物。

另外，化合物A的富马酸盐的标记体、即化合物A或富马酸的1个以上的原子被放射性同位素或非放射性同位素取代的化合物也包括在本发明中。

另外，粉末X射线衍射图谱在数据的性质方面，在确认结晶的同一性时，衍射角和整体的图案是至关重要的。粉末X射线衍射图谱的相对强度因结晶生长的方向、颗粒的大小、测定条件会稍有变动，不应严格地解释。

由各种图案得到的数值有时会因其结晶生长的方向、颗粒的大小、测定条件等而出现少许误差。因此，在本说明书中，粉末X射线衍射图谱中的衍射角(2θ±0.1°)的术语表示位于该值的±0.1°的范围内即可。

另外，差示扫描量热(DSC)曲线中的吸热峰的峰温度所使用的“附近”的术语表示大约该温度的值，优选表示处于该值的±5℃的范围内即可。更优选表示处于该值的±2℃的范围内即可。

化合物A的1富马酸盐(结晶)优选具有图4所示的粉末X射线衍射图谱和/或图5所示的差示扫描量热(DSC)曲线。

在此，化合物A的1富马酸盐(结晶)的粉末X射线衍射图谱中的特征峰，以衍射角(2θ±0.1°)表示可以列举7.2°、12.4°、15.6°、25.9°和27.6°，更优选列举7.2°、12.4°、14.4°、15.0°、15.6°、19.0°、22.3°、22.6°、23.4°、25.5°、25.9°和27.6°。

本发明的化合物A的1富马酸盐(结晶)为具有选自上述更优选峰中的至少2个以上峰的结晶，优选为具有选自上述峰中的至少3个以上峰的结晶，更优选为具有选自上述峰中的至少5个以上峰的结晶，进一步优选为具有选自上述峰中的至少8个以上峰的结晶，特别优选为具有上述所有峰的结晶。

另外，化合物A的1富马酸盐(结晶)的差示扫描量热(DSC)曲线中的吸热峰可以列举219℃～224℃附近、优选为223℃附近。

作为本发明的化合物A的1富马酸盐(结晶)的另外的优选方式，为在粉末X射线衍射图谱中具有选自衍射角(2θ±0.1°)为7.2°、12.4°、15.6°、25.9°和27.6°中的至少2个以上、优选至少3个以上、进一步优选5个峰、并且在差示扫描量热(DSC)曲线中在峰温度219～224℃附近、优选223℃附近具有吸热峰的结晶。另外，作为其他的优选方式，为在粉末X射线衍射图谱中具有选自衍射角(2θ±1°)为7.2°、12.4°、14.4°、15.0°、15.6°、19.0°、22.3°、22.6°、23.4°、25.5°、25.9°和27.6°中的至少2个以上、优选至少3个以上、进一步优选至少5个以上、更进一步优选至少8个以上、特别优选上述所有峰、并且在差示扫描量热(DSC)曲线中在峰温度219℃～224℃附近、优选223℃附近具有吸热峰的结晶。

化合物A的1/2富马酸盐(结晶)优选具有图2所示的粉末X射线衍射图谱和/或图3所示的差示扫描量热(DSC)曲线。

在此，化合物A的1/2富马酸盐(结晶)的粉末X射线衍射图谱中的特征峰，以衍射角(2θ±0.1°)表示可以列举4.5°、5.8°、16.6°、20.2°和26.4°，更优选列举4.5°、5.8°、11.2°、12.1°、12.4°、13.4°、16.6°、17.3°、18.2°、20.2°、26.4°和27.1°。

本发明的化合物A的1/2富马酸盐(结晶)为具有选自上述更优选的峰中的至少2个以上峰的结晶，优选为具有选自上述峰中的至少3个以上峰的结晶，更优选为具有选自上述峰中的至少5个以上峰的结晶，进一步优选为具有选自上述峰中的至少8个以上峰的结晶，特别优选为具有上述所有峰的结晶。

另外，化合物A的1/2富马酸盐(结晶)的差示扫描量热(DSC)曲线中的吸热峰可以列举197℃～199℃附近、优选198℃附近。

作为本发明的化合物A的1/2富马酸盐(结晶)的另外的优选方式，为在粉末X射线衍射图谱中具有选自衍射角(2θ±0.1°)为4.5°、5.8°、16.6°、20.2°和26.4°中的至少2个以上、优选至少3个以上、进一步优选5个峰、并且在差示扫描量热(DSC)曲线中在峰温度为197～199℃附近、优选198℃附近具有吸热峰的结晶。另外，作为其他的方式，为在粉末X射线衍射图谱中具有选自衍射角(2θ±1°)为4.5°、5.8°、11.2°、12.1°、12.4°、13.4°、16.6°、17.3°、18.2°、20.2°、26.4°和27.1°中的至少2个以上、优选至少3个以上、更优选至少5个以上、进一步优选至少8个以上、更进一步优选上述所有峰、并且在差示扫描量热(DSC)曲线中在峰温度为197℃～199℃附近、优选198℃附近具有吸热峰的结晶。

本发明的化合物A的富马酸盐还可以以非晶体的形态获得。本发明的化合物A的富马酸盐的非晶体，具体在粉末X射线衍射图谱中显示出衍射图像宽度宽且不明确的晕环图案(halo pattern)，更优选具有图1所示的粉末X射线衍射图谱。

化合物A例如可以按照后述的参考例1～2合成。化合物A的合成方法并不限定于后述的参考例1～2。

进一步详细而言，在三乙胺等叔胺的存在下，使甲磺酰氯与(S)－N－Boc－3－哌啶醇反应，得到(S)－叔丁基3－(甲磺酰氧)哌啶－1－羧酸酯。接着，在碳酸钾等碱的存在下，使3－碘－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－4－胺与该化合物反应，得到(R)－叔丁基3－(4－氨基－3－碘－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－1－基)哌啶－1－羧酸酯。接着，在一氧化碳氛围下，在存在苯并[d]噁唑－2－胺的条件下，使该化合物与钯催化剂和碱反应，得到(R)－叔丁基3－(4－氨基－3－((苯并[d]噁唑－2－基)氨基甲酰基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－1－基)哌啶－1－羧酸酯。接着，使Boc保护基从该化合物脱离，使丙烯酰氯反应，从而得到化合物A。

本发明的化合物A的1富马酸盐(非晶体)例如可以通过以下方法制造。

在化合物A中添加100～300倍量、优选150倍量的四氢呋喃(THF)和0.01～1倍量、优选0.1倍量的水，之后添加与化合物A同摩尔用量的富马酸使其溶解。

利用THF进行多次、优选2次～5次边共沸边蒸馏除去溶剂的操作，由此，以白色粉末的形态获得化合物A的1富马酸盐的非晶体。

本发明的化合物A的1富马酸盐(结晶)例如可以通过使化合物A的1富马酸盐(非晶体)悬浮在5～50倍量、优选20倍量的乙腈中，进行12～72小时、优选24小时悬浮加热，从而以白色粉末的形态获得。

本发明的化合物A的1/2富马酸盐(结晶)例如可以通过使化合物A的1富马酸盐(非晶体)悬浮在10～100倍量、优选60倍量的甲乙酮中，进行12～72小时、优选24小时的悬浮加热，从而以白色粉末的形态获得。

根据本发明的化合物A的富马酸盐，能够避免化合物A的通道水合的性质。

通常情况下，使用避免了通道水合性质的化合物的医药品或医药品原料药，已知其保管状态下的湿度的保存方面和品质管理方面的问题减轻，并且在制造片剂或胶囊剂等固态制剂时，还能够减轻因有效成分的重量变化而引起的制剂方面的问题。

因此，本发明的化合物A的富马酸盐可以说是能够期待稳定的保存、容易的品质管理、并且在制剂方面操作容易的优异的化合物。

本发明的化合物A的富马酸盐与化合物A的其他盐相比，取得操作性、再现性优异。具体而言，例如化合物A与盐酸、硫酸、琥珀酸、苹果酸、柠檬酸或乙酸的盐通过本说明书记载的研究方法未能形成。另外，例如在形成化合物A的钠盐时，明显地发生分解，在合成化合物A的1/2镁盐时，类似物质的数量增多，并且取得盐时的操作繁杂，对于水和有机溶剂的溶解性低、再溶解困难。

本发明的化合物A的富马酸盐容易作为医药品原料药处理，是有助于稳定品质的医药品的工业的生产的物质。

本发明的化合物A的富马酸盐的固体稳定性优异。医药品的开发候选化合物具备固体稳定性无论在工业上的操作方面、还是在确保品质方面，都是至关重要的。因此，本发明的化合物A的富马酸盐具有作为医药品或医药品原料药必要的优异的性质。

本发明的化合物A的富马酸盐的口服吸收性优异，是有助于提供品质高的优异的医药品。

在化合物A的盐中，在避免化合物A所具有的通道水合的性质、确保作为医药品原料药的充分的溶解性、并且取得操作性、再现性、固体稳定性、口服吸收性均优异的盐是本发明的化合物A的富马酸盐。

本发明的化合物A的富马酸盐具有优异的BTK抑制活性，作为例如癌或肿瘤、各种免疫疾病(例如过敏性疾病、自身免疫疾病、炎症性疾病)的预防和/或治疗剂是有用的。并且，具有对于BTK的优异的选择性，具有因其他激酶(例如EGFR)也被抑制而引起的副作用少的优点。

本发明的化合物A的富马酸盐具有优异的BTK抑制活性。本说明书中，“BTK”包括人或非人哺乳动物的BTK，优选为人BTK。并且，“BTK”的术语包括亚型。

另外，本发明的化合物A的富马酸盐因其优异的BTK抑制活性，作为用于预防或治疗有BTK参与的疾病的医药是有用的。“有BTK参与的疾病”可以列举通过使BTK的功能缺失、被抑制和/或被阻碍来降低发病率、缓解、缓和和/或治愈症状的疾病。作为这样的疾病，例如，可以列举癌或肿瘤、过敏性疾病、自身免疫疾病、炎症性疾病、移植物抗宿主病等，但不限于这些，优选癌、肿瘤、过敏性疾病、自身免疫疾病。

作为对象的癌或肿瘤没有特别限制，例如，可以列举上皮性癌(例如，可以列举呼吸系统癌、消化系统癌、生殖系统癌、分泌系统癌等)、肉瘤、造血细胞系统肿瘤、中枢神经系统肿瘤、末梢神经肿瘤等，优选造血细胞系统肿瘤(例如，白血病、多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤等)。另外，肿瘤的发生脏器的种类也没有特别限制，例如可以列举头颈部癌、食管癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、胆嚢-胆管癌、胆道癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、精巢肿瘤、骨-软组织肉瘤、血液瘤、多发性骨髓瘤、皮肤癌、脑肿瘤、间皮癌等。作为造血细胞系统肿瘤，优选急性白血病、急性早幼粒细胞白血病、急性淋巴母细胞白血病、慢性髄细胞性白血病、淋巴母细胞性淋巴瘤、骨髄增殖性肿瘤、慢性淋巴细胞性白血病、小淋巴细胞性淋巴瘤、骨髓增生异常综合征、滤泡性淋巴瘤、MALT淋巴瘤、边缘带淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、套细胞淋巴瘤、弥漫性大细胞型B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤等。特别优选B淋巴母细胞白血病/淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、淋巴结滤泡边缘带淋巴瘤、弥漫性大细胞型B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、小淋巴细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、结外NK/T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、骨髓增生异常综合征、急性骨髄性白血病、急性淋巴细胞白血病等血液肿瘤。

作为对象的过敏性疾病没有特别限制，例如可以列举支气管哮喘、过敏性鼻炎、花粉过敏症、特异性皮炎、食物过敏、过敏反应(anaphylaxis)、药物过敏、荨麻疹、结膜炎等。优选支气管哮喘、过敏性鼻炎、花粉过敏症、特异性皮炎，特别优选过敏性鼻炎、花粉过敏症、特异性皮炎。

作为对象的自身免疫疾病没有特别限制，例如可以列举类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、硬皮病、多肌症、干燥综合症、白塞氏病。优选类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮，特别优选类风湿性关节炎。

作为对象的炎症性疾病没有特别限制，例如可以列举阑尾炎、睑缘炎、细支气管炎、支气管炎、粘液囊炎、宫颈炎、胆管炎、胆囊炎、溃疡性大肠炎、克罗恩病、过敏性肠疾病、膀胱炎、泪腺炎、接触性皮炎、皮肌炎、脑炎、心内膜炎、子宫内膜炎、附睾炎、筋膜炎、纤维组织炎、胃肠炎、肝炎、汗腺脓肿、喉炎、乳腺炎、脑膜炎、脊髄炎、心肌炎、肾炎、卵巢炎、精巢炎、胰腺炎、腮腺炎、心包炎、腹膜炎、咽炎、胸膜炎、静脉炎、肺炎、直肠炎、前列腺炎、肾盂肾炎、耳管炎、鼻窦炎、口腔炎、骨性关节炎、滑膜炎、肌腱炎、扁桃体炎、葡萄膜炎、阴道炎、血管炎、外阴炎。优选溃疡性大肠炎、克罗恩病、过敏性肠疾病、接触性皮炎、膀胱炎、骨性关节炎。特别优选接触性皮炎、膀胱炎、骨性关节炎。

在将本发明的化合物A的富马酸盐制成医药组合物时，可以根据需要配合药学的载体，根据预防或治疗目的，可以采用各种给药形态，作为该形态，例如口服剂、注射剂、栓剂、软膏剂、贴附剂等均可。这些给药形态可以通过各种本领域技术人员公知惯用的制剂方法来制造。特别是将化合物A的富马酸盐的结晶作为制造原料药的、制成口服给药用的片剂、包衣片剂、丸剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂和稳定的固态制剂是有利的。

作为药学的载体，可以使用作为制剂原料惯用的各种有机或无机载体物质，在固态制剂中可以配合赋形剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、包衣剂等，在液态制剂中可以配合溶剂、助溶剂、悬浮剂、等渗剂、pH调节剂-缓冲剂、镇痛剂等。并且，还可以根据需要使用防腐剂、抗氧化剂、着色剂、矫味-矫臭剂、稳定剂等制剂添加物。

作为赋形剂，可以列举乳糖、白糖、D－甘露醇、淀粉、结晶纤维素、硅酸钙等。

作为结合剂，可以列举羟丙基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、糖粉、羟丙甲纤维素等。

作为崩解剂，可以列举乙醇酸淀粉钠、羧甲基纤维素钙、交联羧甲基纤维素纳、交聚维酮、低取代度羟丙基纤维素、部分α化淀粉等。

作为润滑剂，可以列举滑石、硬脂酸镁、蔗糖脂肪酸酯、硬脂酸、富马酸硬脂酸钠等。

作为包衣剂，可以列举乙基纤维素、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物RS、羟丙甲纤维素、白糖等。

作为溶剂，可以列举水、丙二醇、生理盐水。

作为助溶剂，可以列举聚乙二醇、乙醇、α-环糊精、聚乙二醇400(Macrogol 400)、聚山梨醇酯80(Polysorbate 80)等。

作为悬浮剂，可以列举卡拉胶、结晶纤维素-羧甲基纤维素钠、聚氧乙烯氢化蓖麻油。

作为等渗剂，可以列举氯化钠、甘油、氯化钾等。

作为pH调节剂-缓冲剂，可以列举柠檬酸钠、盐酸、乳酸、磷酸、磷酸二氢钠等。

作为镇痛剂，可以列举普鲁卡因盐酸盐、利多卡因等。

作为防腐剂，可以列举对羟基苯甲酸乙酯、甲酚、苯扎氯铵等。

作为抗氧化剂，可以列举亚硫酸钠、抗坏血酸、天然维生素E等。

作为着色剂，可以列举氧化钛、三氧化二铁、食用蓝1号、叶绿素铜等。

作为矫味-矫臭剂，可以列举阿巴斯甜、糖精、三氯蔗糖、l-薄荷醇、薄荷香料等。

作为稳定剂，可以列举焦亚硫酸钠、依地酸钠、异抗坏血酸、氧化镁、二丁基羟基甲苯等。

制备口服用固态制剂时，能够根据需要在化合物A的富马酸盐中添加赋型剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、矫味-矫臭剂等，之后根据通常方法制造片剂、包衣片剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂等。

在制备注射剂时，能够在化合物A的富马酸盐中添加pH调节剂-缓冲剂、稳定剂、等渗剂、局部麻醉剂等，根据通常方法制造皮下、肌肉和静脉内用注射剂。

在上述的各给药单位形态中应该配合的化合物A的富马酸盐的量，根据要应用该化合物的患者的症状或者其剂形等不能一概而论，一般而言，每给药单元形态，口服剂时期望为0.05～1000mg，注射剂时期望为0.01～500mg，栓剂时期望为1～1000mg。

另外，具有上述给药形态的药剂的每1天的给药量根据患者的症状、体重、年龄、性别等而有所不同，不能一概而论，以化合物A的富马酸盐计，通常成人(体重50kg)每天为0.05～5000mg、优选为0.1～1000mg即可，优选将其以1天1次或分2～3次左右给药。

实施例

下面，列举实施例对本发明进行更具体的说明，但本发明完全不限定于这些实施例。通过实施例充分地对本发明进行了说明，但本领域技术人员能够理解可以进行各种变更或修饰。因此，这种变更或修饰只要不脱离本发明的范围，也包括在本发明中。

实施例中使用的各种试剂只要没有特别说明，使用市售品。硅胶柱色谱使用Moritex Corp.制的PURIF-PACK(注册商标)SI、Biotage公司制的KP－Sil(注册商标)Silica预填充柱、或Biotage公司制的HP－Sil(注册商标)Silica预填充柱。碱性硅胶柱色谱使用Moritex Corp.制的PURIF-PACK(注册商标)NH或Biotage公司制的KP－NH(注册商标)预填充柱。分离用薄层色谱使用Merck公司制的Kieselgel TM60F254，Art.5744或WakoPure Chemical Industries,Ltd.制的NH2硅胶60F254板。NMR图谱使用AL400(400MHz，日本电子(JEOL))、Mercury400(400MHz，Agilent Technologies,Inc.)型分光计、或装备有400MNMR探针(Protasis)的Inova400(400MHz，Agilent Technologies,Inc.)型分光计，在氘代溶剂中含有四甲基硅烷时，使用四甲基硅烷作为内标、此外的情况使用NMR溶剂作为内标进行测定，以ppm表示全部δ值。

另外，LCMS图谱使用Waters公司制的ACQUITY SQD(四极型)以下述条件进行测定。

柱：YMC公司制YMC－Triart C18，2.0X50mm，1.9μm

MS检测：ESI positive

UV检测：254和210nm

柱流速：0.5mL/min

流动相：水/乙腈(0.1％甲酸)

注射量：1μL

梯度(表1)

[表1]

时间(分钟)	水	乙腈
			0～0.1	95％	5％
0.1～2.1	95％→5％	5％→95％
			2.1～3.1	5％	95％

另外，反相分离HPLC精制使用WATERS公司制的分离系统以下述条件实施。

柱：使用将YMC公司制的YMC－Actus Triart C18，20×50mm，5μm和YMC公司制的YMC－Actus Triart C18，20×10mm，5μm连接而成的柱。

UV检测：254nm

MS检测：ESI positive

柱流速：25mL/min

流动相：水/乙腈(0.1％甲酸)

注射量：0.1－0.5mL

简写符号的含义如下。

s：单峰

d：二重峰

t：三重峰

q：四重峰

dd：双二重峰

dt：二重三重峰

td：三重二重峰

tt：双三重峰

ddd：二重二重二重峰

ddt：二重二重三重峰

dtd：二重三重二重峰

tdd：三重二重二重峰

m：多重峰

br：宽峰

brs：宽单峰

CDI：羰基二咪唑

DMSO-d₆：氘代二甲亚砜

CDCl₃：氘代氯仿

CD₃OD：氘代甲醇

THF：四氢呋喃

DMF：N,N-二甲基甲酰胺

DMA：N,N-二甲基乙酰胺

NMP：1-甲基-2-吡咯烷酮

DMSO：二甲亚砜

TFA：三氟乙酸

WSC：1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐

HOBt：1-羟基苯并三唑1水合物

HATU：(二甲基氨基)-N,N-二甲基(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)甲烷亚铵六氟磷酸盐

DIAD：偶氮二甲酸二异丙酯

TBAF：四丁基氟化铵

DIPEA：二异丙基乙胺

Boc：叔丁氧羰基

Boc₂O：二碳酸二叔丁酯

DMAP：二甲基氨基吡啶

粉末X射线衍射测定

粉末X射线衍射中，根据需要用玛瑙制研钵将适量的试验物质轻轻研碎后，按照下述试验条件进行测定。

装置：Rigaku MiniFlexII

靶：Cu

X射线输出设定：15mA，30kV

扫描范围：2.0～40.0°

步长：0.010°

扫描速度：5.00°/min.

发散狭缝：1.25°

散射狭缝：开放

接收狭缝：开放

包括数据处理在内的装置的处置依照各装置中指示的方法和步骤。

其中，由各种图谱得到的数值有时因其结晶生长的方向、颗粒的大小、测定条件等而稍有变动。因此，这些数值不应该严格地理解。

热分析测定(差示扫描量热测定(DSC测定))

DSC测定按照下述试验条件进行测定。

装置：TA INSTRUMENTS Q1000

试样：约1mg

试样容器：铝制

升温速度：以5℃/min.升温至250℃

氛围气体：氮

氮气流量：50mL/min.

参考例1(R)－叔丁基3－(4－氨基－3－碘－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－1－基) 哌啶－1－羧酸酯的合成

(工序1)(S)－叔丁基3－(甲基磺酰氧基)哌啶－1－羧酸酯的合成

将(S)－N－Boc－3－哌啶醇20g溶解在甲苯100mL中，以0℃添加三乙胺21mL、甲磺酰氯9.2mL。在冰冷下搅拌1小时后，加入乙酸乙酯和水，将有机层分离。利用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化铵水溶液、水对有机层进行清洗后，用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到作为无色固体的标题化合物26.8g。

(工序2)(R)－叔丁基3－(4－氨基－3－碘－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－1－基)哌啶－1－羧酸酯的合成

将按照国际公开第2007/126841号公报记载的方法合成的3－碘－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－4－胺14.6g、工序1中得到的(S)－叔丁基3－(甲基磺酰氧基)哌啶－1－羧酸酯25g、碳酸钾69g的DMA150mL的悬浊液加热到100℃，搅拌10小时。冷却到室温后，加入水300mL，过滤分离生成的固体，用水清洗后进行干燥，得到作为黄色固体的标题化合物26.9g。

参考例2(R)－1－(1－丙烯酰哌啶－3－基)－4－氨基－N－(苯并[d]噁唑－2－基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－3－甲酰胺(化合物A)的合成

(工序1)(R)－叔丁基3－(4－氨基－3－((苯并[d]噁唑－2－基)氨基甲酰基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－1－基)哌啶－1－羧酸酯的合成

将参考例1中得到的(R)－叔丁基3－(4－氨基－3－碘－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－1－基)哌啶－1－羧酸酯300mg溶解在NMP 3mL中。添加苯并[d]噁唑－2－胺118mg、xantphos(4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽)20mg、N－甲基吗啉0.15mL，进行脱气操作。之后，添加乙酸钯7.6mg，在一氧化碳氛围下加热至110℃，搅拌2小时。冷却后，添加甲醇4.5mL和5N氢氧化钠水溶液0.45mL，在室温搅拌30分钟。之后，用2N HCl将pH调节至5.3，过滤分离生成的固体。利用硅胶柱对粗产品进行精制(氯仿-甲醇)，得到作为白色固体的标题化合物257mg。

(工序2)化合物A的合成

使工序1中得到的(R)－叔丁基3－(4－氨基－3－((苯并[d]噁唑－2－基)氨基甲酰基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－1－基)哌啶－1－羧酸酯5.0g悬浮在乙腈50mL中，添加碘化钠7.85g。在室温搅拌下，滴加三甲基氯化硅6.65mL，搅拌1小时。添加水87.5mL和5N氢氧化钠水溶液12.5mL后，进行冰冷。滴加将丙烯酰氯0.895mL溶解在乙腈4.1mL中而得到的溶液，在冰冷下搅拌1小时。添加水50mL，过滤分离生成的固体，进行水洗，在减压下干燥，得到作为白色固体的标题化合物4.13g(化合物A)。

¹H－NMR(DMSO－d₆)：δppm 1.53－1.68(m，1H)，1.86－1.98(m，1H)，2.08－2.21(m，1H)，2.25－2.39(m，1H)，2.82－2.95(m，0.5H)，3.10－3.22(m，0.5H)，3.23－3.37(m，0.5H)，3.68－3.78(m，0.5H)，4.04－4.14(m，0.5H)，4.22－4.38(m，1H)，4.52－4.65(m，0.5H)，4.67－4.81(m，1H)，5.58－5.74(m，1H)，6.03－6.19(m，1H)，6.68－6.92(m，1H)，7.28－7.40(m，2H)，7.59－7.71(m，2H)，8.22(brs，2H)，8.28(s，1H)，12.15(brs，1H)

参考例3(R)－1－(1－丙烯酰哌啶－3－基)－4－氨基－N－(苯并[d]噁唑－2－基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－3－甲酰胺(化合物A)与酸或碱的加成盐的研究

(1)化合物A的酸加成盐的研究

在无机酸中，进行了与盐酸、硫酸和磷酸形成盐的研究。具体而言，使化合物A溶解在适当的溶剂中，在其中添加适量的各种酸(0.5～1.5当量)，搅拌一整夜，判断是否形成盐。结果，在盐酸和硫酸与化合物A加合时，明显地发生了分解，因而中止进一步的研究。在磷酸与化合物A加合时，得到了化合物A的1磷酸盐(参考例4)。

另外，在有机酸中，进行了与富马酸、琥珀酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸和乙酸形成盐的研究。具体而言，使化合物A溶解在适当的溶剂中，在其中添加与化合物A同摩尔用量的各种酸，之后，蒸馏除去溶剂，由此制备各种有机酸的非晶体。接着，使该非晶体加热悬浮在适当的有机溶剂(例如甲乙酮、乙醇、乙酸乙酯和乙酸丁酯)中，判断是否形成盐。结果，与苹果酸、柠檬酸和乙酸未形成盐。由琥珀酸的非晶体得到了结晶性的物质，但未能得到相当于理论量的琥珀酸盐。由富马酸得到了化合物A的1富马酸盐(非晶体)，由酒石酸得到了化合物A的1/2酒石酸盐(实施例1和参考例5)。

(2)化合物A的碱加成盐的研究

在无机碱中，进行了与钠和镁形成盐的研究。具体而言，使化合物A溶解在适当的溶剂中，在其中添加适量的各种碱(0.5～1.5当量)，搅拌一整夜，判断是否形成盐。结果，在与钠形成盐时，明显地发生了分解，因而中止进一步的研究。另外，由镁得到了化合物A的1/2镁盐(参考例6)。但是，化合物A的1/2镁盐的类似物质的数量多，并且获取盐时的操作繁杂，对于有机溶剂的溶解性，再溶解困难，因而判断不适合实际制造。

参考例4(R)－1－(1－丙烯酰哌啶－3－基)－4－氨基－N－(苯并[d]噁唑－2－基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－3－甲酰胺·1磷酸盐(化合物A的1磷酸盐)的合成

在上述得到的化合物A(150mg)中加入THF(18mL)，加温到70℃后，添加磷酸(27.3μL)。之后，在该温度下搅拌72小时，过滤分离析出的固体后进行减压干燥，得到白色固体。收量：158mg、收率：85.9％

¹H－NMR(DMSO－d₆)：δppm 1.51－1.69(m，1H)，1.87－1.97(m，1H)，2.09－2.21(m，1H)，2.25－2.41(m，1H)，2.84－2.95(m，0.5H)，3.09－3.22(m，0.5H)，3.22－3.38(m，0.5H)，3.67－3.83(m，0.5H)，4.04－4.17(m，0.5H)，4.23－4.40(m，1H)，4.54－4.65(m，0.5H)，4.66－4.83(m，1H)，5.58－5.76(m，1H)，6.05－6.22(m，1H)，6.70－6.96(m，1H)，7.32－7.48(m，2H)，7.61－7.75(m，2H)，8.15－8.26(brs，2H)，8.30(s，1H)

参考例5(R)－1－(1－丙烯酰哌啶－3－基)－4－氨基－N－(苯并[d]噁唑－2－基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－3－甲酰胺·1/2－L－(+)－酒石酸盐(化合物A的1/2酒石酸盐)的合成

将上述得到的化合物A(600mg)溶解在THF(90mL)和水(60μL)中后，投入L－(+)－酒石酸盐(209mg)使其完全溶解。边用THF共沸2次边蒸馏除去溶剂，由此得到白色固体。在该白色固体(130mg)中加入甲乙酮(1.5mL)，以70℃悬浮加热21小时。过滤后进行减压干燥，得到白色固体。收量：96mg，收率：85.9％

¹H－NMR(DMSO－d₆)：δppm 1.55－1.68(m，1H)，1.89－1.97(m，1H)，2.10－2.21(m，1H)，2.25－2.40(m，1H)，2.85－2.95(m，0.5H)，3.15－3.65(m，1H)，3.68－3.80(m，0.5H)，4.05－4.15(m，0.5H)，4.24－4.36(m，1H)，4.30(s，2H)，4.53－4.62(m，0.5H)，4.67－4.79(brs，1H)，5.67(dd，J＝9.99Hz，1H)，6.08－6.18(m，1H)，6.71－6.92(m，1H)，7.30－7.41(m，2H)，7.61－7.73(m，2H)，8.22(brs，2H)，8.29(s.，1H)

参考例6(R)－1－(1－丙烯酰哌啶－3－基)－4－氨基－N－(苯并[d]噁唑－2－基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－3－甲酰胺·1/2镁盐(化合物A的1/2镁盐)的合成

在上述得到的化合物A(159.8mg)中添加THF(3mL)和甲醇(1mL)使其悬浊后，添加2M氢氧化钠水溶液(185μL)使其完全溶解。之后，投入氯化镁(17.6mg)并进行搅拌，从而析出白色固体。在添加水(2mL)后过滤分离。使用水(1mL)清洗2次，进行减压干燥，从而得到白色固体。在该白色固体(50mg)中加入甲乙酮(1mL)，在70℃悬浮加热24小时。过滤分离后进行减压干燥，从而得到白色固体。收量：44.7mg，收率：57.3％

¹H－NMR(DMSO－d₆)：δppm 1.52－1.67(m，1H)，1.88－2.01(m，1H)，2.19－2.41(m，2H)，2.75－2.89(m，0.5H)，3.07－3.21(m，1H)，3.57－3.71(m，0.5H)，4.15－4.23(m，0.5H)，4.36－4.55(m，1H)，4.69－4.88(m，2H)，5.60－5.80(m，1H)，6.08－6.22(m，1H)，6.79－6.96(m，1H)，7.08－7.23(m，2H)，7.47－7.56(m，2H)，8.13－8.22(brs，2H)，8.49(s，1H)，10.42－10.50(brs，1H)

实施例1(R)－1－(1－丙烯酰哌啶－3－基)－4－氨基－N－(苯并[d]噁唑－2－基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－3－甲酰胺·1富马酸盐(化合物A的1富马酸盐(非晶体)) 的合成

在室温下使参考例2中得到的化合物A(1.4g)溶解在THF(210mL)和水(140μL)中，之后加入富马酸(376mg)使其完全溶解。边用THF共沸2次边蒸馏除去溶剂，从而得到作为白色粉末的化合物A的1富马酸盐(非晶体)。收量：1.57g，收率：90.1％

¹H－NMR(DMSO－d₆)：δppm 1.53－1.68(m，1H)，1.86－1.98(m，1H)，2.08－2.21(m，1H)，2.25－2.39(m，1H)，2.82－2.95(m，0.5H)，3.10－3.22(m，0.5H)，3.23－3.37(m，0.5H)，3.68－3.78(m，0.5H)，4.04－4.14(m，0.5H)，4.22－4.38(m，1H)，4.52－4.65(m，0.5H)，4.67－4.81(m，1H)，5.58－5.74(m，1H)，6.03－6.19(m，1H)，6.62(s，2H)，6.68－6.92(m，1H)，7.28－7.40(m，2H)，7.59－7.71(m，2H)，8.22(brs，2H)，8.28(s，1H)，12.15(brs，1H)

粉末X射线衍射图谱：示于图1。

实施例2(R)－1－(1－丙烯酰哌啶－3－基)－4－氨基－N－(苯并[d]噁唑－2－基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－3－甲酰胺·1/2富马酸盐(化合物A的1/2富马酸盐(结晶))的合成

使实施例1中得到的化合物A的1富马酸盐(非晶体)(450mg)悬浮在甲乙酮(27mL)中，以80℃悬浮加热24小时。过滤分离后进行减压干燥，从而得到作为白色粉末的化合物A的1/2富马酸盐(结晶)。收量：279mg，收率：62.0％

¹H－NMR(DMSO－d₆)：δppm 1.53－1.68(m，1H)，1.86－1.98(m，1H)，2.08－2.21(m，1H)，2.25－2.39(m，1H)，2.82－2.95(m，0.5H)，3.10－3.22(m，0.5H)，3.23－3.37(m，0.5H)，3.68－3.78(m，0.5H)，4.04－4.14(m，0.5H)，4.22－4.38(m，1H)，4.52－4.65(m，0.5H)，4.67－4.81(m，1H)，5.58－5.74(m，1H)，6.03－6.19(m，1H)，6.62(s，1H)，6.68－6.92(m，1H)，7.28－7.40(m，2H)，7.59－7.71(m，2H)，8.22(brs，2H)，8.28(s，1H)，12.15(brs，1H)

粉末X射线衍射图谱：示于图2。

特征的衍射角(2θ±0.1°)：4.5°、5.8°、11.2°、12.1°、12.4°、13.4°、16.6°、17.3°、18.2°、20.2°、26.4°、27.1°

差示扫描量热(DSC)曲线：示于图3。

差示扫描量热(DSC)曲线中的吸热峰：197℃～199℃附近

实施例3(R)－1－(1－丙烯酰哌啶－3－基)－4－氨基－N－(苯并[d]噁唑－2－基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－3－甲酰胺·1富马酸盐(化合物A的1富马酸盐(结晶))的合成

使实施例1中得到的化合物A的1富马酸盐(非晶体)(500mg)悬浮在乙腈(10mL)中，以80℃悬浮加热24小时。过滤分离后进行减压干燥，从而得到作为白色粉末的化合物A的1富马酸盐(结晶)。收量：448mg，收率：89.6％

粉末X射线衍射图谱：示于图4。

特征的衍射角(2θ±0.1°)：7.2°、12.4°、14.4°、15.0°、15.6°、19.0°、22.3°、22.6°、23.4°、25.5°、25.9°和27.6°

差示扫描量热(DSC)曲线：示于图5。

差示扫描量热(DSC)曲线中的吸热峰：219℃～224℃附近

比较例1(R)－1－(3－(4－氨基－3－(4－苯氧基苯基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－1－基)哌啶－1－基)丙－2－烯－1－酮(比较例化合物1)的合成

按照国际公开第2008/121742号小册子的方法进行合成，得到作为白色固体的标题化合物。

¹H－NMR(DMSO－d₆)：δppm 1.21－1.28(m，1H)，1.42－1.71(m，1H)，1.91(brs，1H)，2.04－2.36(m，2H)，2.91－3.10(m，1H)，3.13－3.27(m，1H)，3.59－3.76(m，1H)，4.04－4.26(m，2H)，4.47－4.80(m，2H)，5.51－5.78(m，1H)，5.96－6.21(m，1H)，6.64－6.95(m，1H)，7.14(dd，J＝11.46，8.54Hz，6H)，7.40－7.47(m，2H)，7.63－7.70(m，2H)，8.26(s，1H)

本发明的化合物A的富马酸盐的效果通过以下试验例得到了验证。其中，本试验例的化合物A或其盐只要没有特别说明均使用结晶体。

试验例1水分吸附解吸试验

进行实施例和参考例中得到的化合物A、化合物A的1富马酸盐、化合物A的1/2富马酸盐、化合物A的1/2酒石酸盐、化合物A的1磷酸盐的水分吸附解吸试验，研究是否存在通道水合的性质。

水分吸附解吸试验按照下述条件进行测定。

将约5～10mg试样填充在转用的石英制样品盘上，在以下条件下连续地测定并记录试样在各湿度时的重量。其中，包括数据处理在内的装置的处置按照各装置中指示的方法和步骤进行。

装置：VTI SA+(TA Instruments Inc.制)

干燥温度：60℃

升温速度：1℃/min

干燥的平衡：确认在不超过300分钟的范围内、在5分钟内不减少0.01wt％

测定温度：25℃

加湿的平衡：确认在不超过120分钟的范围内、在5分钟内不增加0.01wt％

相对湿度程序：以每5％RH从5％RH升高至95％RH，以每5％RH从95％RH降低至5％RH

将这些试验得到的谱图示于图6～图10。并且将测定条件范围内的重量变化示于表2－1～表2－5。

[表2-1]

化合物A的水分吸附解吸试验结果

[表2-2]

化合物A的1富马酸盐的水分吸附解吸试验结果

[表2-3]

化合物A的1/2富马酸盐的水分吸附解吸试验结果

[表2-4]

化合物A的1/2酒石酸盐的水分吸附解吸试验结果

[表2-5]

化合物A的1磷酸盐的水分吸附解吸试验结果

由表2－1～2－5所示，化合物A在作为测定条件范围内的5～95％的相对湿度下进行加湿时，其重量变化最大约为4.4％。并且确认使湿度从95％的相对湿度下降时，基本恢复到初始状态。即，可知化合物A具有与湿度相应地发生水分的吸附解吸的通道水合的性质。

同样，在化合物A的1/2酒石酸盐中，在5～95％的相对湿度下加湿时，其重量变化最大约为3.3％。并且确认使湿度从95％的相对湿度下降时，基本恢复到初始状态。即，可知化合物A的1/2酒石酸盐也具有与湿度相应地发生水分的吸附解吸的通道水合的性质

另外，化合物A的1磷酸盐中，可知水分吸附解吸试验后的结晶形态未维持原来的结晶形态。

另一方面，可知本发明的化合物A的1富马酸盐和化合物A的1/2富马酸盐在95％的相对湿度下质量变化的增加均停留在低于约1％，在湿度下降时基本恢复到初始状态。因此，本发明的化合物A的富马酸盐能够避免通道水合的性质，确认作为医药品或医药品原料药具有更优异的性质。

试验例2固体稳定性试验(加速试验)

将实施例和参考例中得到的化合物A的1富马酸盐、化合物A的1/2富马酸盐、化合物A的1/2酒石酸盐、化合物A的1磷酸盐在40℃/75％RH(密闭条件和开放条件)在保存2周或4周，以下述条件测定此时的固体稳定性。

保存条件：40℃/75％RH(密闭和开放)(开放的意思是取下玻璃瓶的盖并用无尘纸(KimWipe)覆盖的状态)

测定时间点：2周后和4周后

保存量：约30mg

保存容器：褐色玻璃瓶

试样溶液的制备方法：以试样的浓度达到0.4mg/mL的方式溶解于50％乙腈。

通过HPLC分析测定试样溶液中的类似物质的量。其中，包括数据处理在内的装置的处置依照各装置中指示的方法和步骤。(装置：岛津制作所SIL－HTc/LC－20AB)

柱：GL Sciences Inc.制InertSustein C18，4.6×150mm，3μm

MS检测：ESI positive

UV检测：220nm

柱温度：40℃

柱流速：1.0mL/min

流动相：A：10mmol/L磷酸缓冲液(pH6.0)：乙腈混液(17：3)，B：乙腈

注射量：5μL

梯度：表3

[表3]

Time(min)	A	B
			0～18	100％→90％	0％→10％
18～30	90％→55％	10％→45％
			30～35	55％→45％	45％→55％
35～45	45％	55％
			45～55	100％	0％

表4表示评价测得的总类似物质量的结果。表中的○表示低于0.1％、△表示在0.1％以上且低于0.5％、×表示0.5％以上的、总类似物质量的比例。其中，对于标记有※的是在2周后测定的，对于其他的是在4周后测定的。

[表4]

该结果明确可知：化合物A的1富马酸盐和化合物A的1/2富马酸盐的类似物质的生成少，与化合物A的1/2酒石酸盐和化合物A的1磷酸盐相比，表现出优异的固体稳定性。因此，可以确认本发明的化合物A的富马酸盐表现出优异的固体稳定性。

试验例3固体稳定性试验(严酷条件试验)

将实施例和参考例中得到的化合物A的1富马酸盐、化合物A的1/2酒石酸盐、化合物A的1磷酸盐在60℃保存2周或4周，以下述条件测定此时的固体稳定性。

保存条件：60℃(密闭)

测定时间点：2周后和4周后

保存量：约30mg

保存容器：褐色玻璃瓶

试样溶液的制备方法：以试样的浓度达到0.4mg/mL方式溶解于50％乙腈。

与试验例2同样地通过HPLC分析测定试样溶液中的类似物质量，将评价的结果示于表5。表中的○表示低于0.1％、△表示在0.1％以上且低于0.5％的总类似物质量的比例。其中，对于标记有※的是在2周后测定的，对于其他的是在4周后测定的。

[表5]

	60℃
		化合物A的1富马酸盐	○
化合物A的1/2酒石酸盐	△
		化合物A的1磷酸盐	△^*

该结果明确可知：化合物A的1富马酸盐的类似物质的生成少，与化合物A的1/2酒石酸盐和化合物A的1磷酸盐相比，表现出优异的固体稳定性。因此，可以确认本发明的化合物A的富马酸盐表现出优异的固体稳定性。

试验例4血中浓度测定试验

对于实施例中得到的化合物A、化合物A的1/2富马酸盐和化合物A的1富马酸盐，使用0.5％HPMC，分别换算为化合物A的分子量制作50mg/10mL/kg的悬浊液。使用口服给药用探针，对喂食条件下饲养的小鼠(Balb/cA)以每1kg体重10mL的用量口服给药这些给药液。给药后，送回小鼠用笼确认状态。在笼内为自由地摄取水和饲料的状态。给药0.25、0.5、1、2、4、6小时后用异氟烷将小鼠麻醉，毛细采血管从眼窝静脉窦采血60μL。

对采集的血液进行冰冷、离心操作，从而将血浆分离。采血结束后的小鼠送回动物饲养笼，确认麻醉苏醒后的状态。最终采血结束后，确认异氟烷麻醉的深度后，通过颈椎脱位使其安乐死。

使用LC－MS/MS，根据通过MRM法测得的各血浆中的化合物A的浓度，使用Pharsight公司制的软件Phoenix WinNonlin(v6.3.0)，利用对数线性梯形法算出AUC_0-6hr、C_max、T_max。

将结果示于表6。由本试验可知，在C_max(最高血中浓度)中，化合物A的1/2富马酸盐显示与化合物A同等的值，化合物A的1富马酸盐显示化合物A的约2倍的值；在AUC_0-6hr(给药后0～6小时的血中浓度－时间曲线下面积)中，化合物A的1/2富马酸盐显示化合物A的约2倍的值，化合物A的1富马酸盐显示化合物A的约1.3倍的值。因此，可以确认本发明的化合物A的富马酸盐表现出优异的口服吸收性。

[表6]

试验例5 BTK抑制活性(体外in vitro)的测定

在化合物在体外对BTK激酶活性的抑制活性测定法的条件设定中，在PerkinElmer公司的LabChip(注册商标)系列试剂消耗品价格表中记载了FL－Peptide 2在BTK激酶活性测定中对应于底物肽，因此，底物使用FL－Peptide 2。试验中所使用的精制重组人BTK蛋白质从CarnaBiosciences公司购得。

化合物的抑制活性测定中，首先，将化合物A的1富马酸盐用二甲亚砜(DMSO)逐级稀释。接着，在激酶反应用缓冲液(20mM HEPES(pH7.5)、2mM二硫苏糖醇(dithiotheitol)、0.01％TritonX-100)中添加BTK蛋白质、底物肽(最终浓度1μM)、氯化镁(最终浓度10mM)、ATP(最终浓度45μM)和被检验化合物的DMSO溶液(DMSO的最终浓度5％)，在25℃保温40分钟进行激酶反应。向其中添加EDTA使得最终浓度为30mM，由此使反应停止。最后，用LabChipEZ Reader II(PerkinElmer公司)对未磷酸化的底物肽(S)和磷酸化后的肽(P)通过微通道毛细管电泳进行分离、检测。由S和P各自的峰高求出磷酸化反应量，将能够抑制50％磷酸化反应的化合物浓度定义为IC50值(nM)，并示于以下的表7中。

[表7]

被检验化合物	BTK抑制活性IC50值(nM)
		化合物A的1富马酸盐	1.19

由该试验结果可知，本发明的化合物A的富马酸盐在in vitro具有BTK抑制活性。

试验例6与EGFR激酶抑制活性比较的BTK抑制选择性(in vitro)

1)BTK抑制活性测定

与试验例5同样操作测得BTK抑制活性。

2)EGFR抑制活性测定

在化合物在体外对EGFR激酶活性的抑制活性测定法的条件设定中，在PerkinElmer公司的LabChip(注册商标)系列试剂消耗品价格表中记载了FL－Peptide 22在EGFR激酶活性测定中对应于底物肽，因此，参考其氨基酸序列，制作生物素化肽(biotin－EEPLYWSFPAKKK)。试验中所使用的精制重组人EGFR蛋白质从CarnaBiosciences公司购得。

在化合物的抑制活性测定中，首先将化合物A的1富马酸盐用二甲亚砜(DMSO)逐级稀释。接着，在激酶反应用缓冲液(20mM HEPES(pH 7.5)、2mM二硫苏糖醇、0.01％TritonX－100)中添加EGFR蛋白质、底物肽(最终浓度250nM)、氯化镁(最终浓度10mM)、氯化锰(最终浓度10mM)、ATP(最终浓度1.5μM)和被检验化合物的DMSO溶液(DMSO的最终浓度2.5％)，在25℃保温120分钟进行激酶反应。在其中添加EDTA使得最终浓度为24mM，由此使反应停止后，添加含有Eu标签化抗磷酸化酪氨酸抗体PT66(PerkinElmer公司)和SureLight APC－SA(PerkinElmer公司)的检测液，在室温静置2小时以上。最后，用PHERAstar FS(BMG LABTECH公司)以620nm和665nm两个波长测定照射波长337nm的激发光时的荧光量。根据两个波长的荧光量比求出磷酸化反应量，将能够抑制50％磷酸化反应的化合物浓度定义为IC50值(nM)。

3)BTK抑制选择性

根据上述1)和2)中得到的结果，算出“EGFR抑制活性IC50值(nM)/BTK抑制活性IC50值(nM)”，由此来确认被检验化合物的BTK抑制选择性。

[表8]

根据该试验结果明确可知：在in vitro中，本发明的化合物A的1富马酸盐的相对于EGFR激酶的BTK抑制选择性为比较例化合物1的约13倍，具有优异的BTK抑制选择性。该结果表明本发明的化合物A的富马酸盐与已知的BTK抑制剂相比，有可能减轻副作用。

试验例7对BTK和EGFR表达细胞株的增殖抑制活性测定试验(in vitro)及其选择性的比较

使表达BTK的弥漫性大细胞型B细胞性淋巴瘤株TMD8细胞悬浮于含有10％胎牛血清的RPMI1640培养基(LifeTechnologies公司制)中。使作为EGFR过量表达、高活化人类上皮癌细胞株的A431细胞悬浮于含有10％胎牛血清的DMEM、高糖(high glucose)培养基(LifeTechnologies公司制)中。将细胞悬浊液接种于384孔平底微孔板的各孔中，在含有5％二氧化碳的培养器中在37℃培养1天。将化合物A的1富马酸盐和比较例化合物1溶解于DMSO，使用DMSO将被检验化合物稀释为最终浓度的500倍的浓度。将被检验化合物的DMSO溶液用各细胞的悬浊所使用的培养基进行稀释，将其添加到细胞的培养板的各孔中使得DMSO的最终浓度达到0.2％，在含有5％二氧化碳的培养器中在37℃再培养3天。化合物添加前以及化合物存在下培养3天后的细胞数计数使用CELLTITERGLO(Promega公司制)，基于Promega公司推荐的操作方案进行。由以下的式子算出增殖抑制率，求出抑制50％的被检验化合物的浓度(GI50(nM))。

增殖抑制率(％)＝(C－T)/(C－C0)×100

T：添加被检验化合物后的孔的发光强度

C：未添加被检验化合物的孔的发光强度

C0：添加被检验化合物前测得的孔的发光强度

比较对于依赖EGFR增殖信号的A431细胞的细胞增殖抑制活性和对于增殖依赖BTK信号的TMD8细胞的细胞增殖抑制活性，能够评价细胞水平上对各个激酶的影响。即，算出“A431细胞增殖抑制率/TMD8细胞增殖抑制率”的值，可以认为该值越大，细胞中相对于EGFR的BTK的选择性越高。在表9中表示“A431细胞增殖抑制率/TMD8细胞增殖抑制率”的值。

[表9]

由该试验结果可知，in vitro的细胞增殖抑制率中本发明的化合物A的1富马酸盐相对于EGFR激酶的BTK抑制选择性为比较例化合物1的约65倍。因此，本发明的化合物A的富马酸盐不仅是对激酶，而且在细胞中也具有优异的BTK抑制选择性。该结果表明本发明的化合物A的富马酸盐与现有的BTK抑制剂相比，有可能减轻副作用。

试验例8小鼠胶原诱导关节炎模型(治疗效果)

本试验按照非专利文献(Brand DD,et al.,Nat Protoc.2007；2,1269－1275、XuD.et al.,JPET,2012Apr；341(1)：90－103)中记载的方法进行。对7周龄雄性/DBA/1小鼠(CHARLES RIVER LABORATORIES JAPAN,INC.)背部皮内注射4mg/mL牛型2胶原溶液(Collagen Research Center)与弗氏完全佐剂(DIFCO)的等量的混合溶液(乳液，emulsion)100μL/body(初次免疫)。在注射的21天后，向尾根部皮内注射4mg/mL牛型2胶原溶液(Collagen Research Center)与弗氏完全佐剂(DIFCO)的等量的混合溶液(乳液)100μL/body，进行追加免疫。将追加免疫8天后作为给药开始日(day0)，实施17天、1天1次的口服给药。在day0、day3、day7、day10、day14、day17用肉眼对关节炎的症状评分(0：无变化、1：有1根趾头肿胀、2：有2根以上趾头肿胀、3：脚背肿胀、4：全部趾头肿胀并且肿胀蔓延到腕部)，将四肢合计作为个体的点数(最高16点)。将结果示于图11。

根据图11，设定为试验体系的阳性对象化合物的泼尼松龙(3mg/kg)给药组为维持在已上升的关节炎得分的程度，但给予了本发明的化合物A的1富马酸盐(0.381mg/kg)的组，能够有效地降低关节炎得分。由该结果可以确认，本发明的化合物A的富马酸盐针对已经发病的类风湿性关节炎具有优异的治疗效果。

Claims

1.一种(R)－1－(1－丙烯酰哌啶－3－基)－4－氨基－N－(苯并[d]噁唑－2－基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－3－甲酰胺的富马酸盐。

2.如权利要求1所述的盐，其特征在于：

其为(R)－1－(1－丙烯酰哌啶－3－基)－4－氨基－N－(苯并[d]噁唑－2－基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－3－甲酰胺·1/2富马酸盐。

3.如权利要求2所述的盐，其特征在于：

其为在粉末X射线衍射图谱中，在衍射角2θ±0.1°为选自4.5°、5.8°、11.2°、12.1°、12.4°、13.4°、16.6°、17.3°、18.2°、20.2°、26.4°和27.1°中的至少2处以上具有峰的结晶。

4.如权利要求2或3所述的盐，其特征在于：

其为在粉末X射线衍射图谱中，在衍射角2θ±0.1°为选自4.5°、5.8°、11.2°、12.1°、12.4°、13.4°、16.6°、17.3°、18.2°、20.2°、26.4°和27.1°中的至少5处以上具有峰的结晶。

5.如权利要求2～4中任一项所述的盐，其特征在于：

其为在粉末X射线衍射图谱中，在衍射角2θ±0.1°为4.5°、5.8°、11.2°、12.1°、12.4°、13.4°、16.6°、17.3°、18.2°、20.2°、26.4°和27.1°处具有峰的结晶。

6.如权利要求2～5中任一项所述的盐，其特征在于：

具有图2所示的粉末X射线衍射图谱的结晶。

7.如权利要求2～6中任一项所述的盐，其特征在于：

在差示扫描量热DSC曲线中在峰温度197℃～199℃附近具有吸热峰的结晶。

8.如权利要求1所述的盐，其特征在于：

其为(R)－1－(1－丙烯酰哌啶－3－基)－4－氨基－N－(苯并[d]噁唑－2－基)－1H－吡唑并[3,4－d]嘧啶－3－甲酰胺·1富马酸盐。

9.如权利要求8所述的盐，其特征在于：

其为在粉末X射线衍射图谱中，在衍射角2θ±0.1°为选自7.2°、12.4°、14.4°、15.0°、15.6°、19.0°、22.3°、22.6°、23.4°、25.5°、25.9°和27.6°中的至少2处以上具有峰的结晶。

10.如权利要求8或9所述的盐，其特征在于：

其为在粉末X射线衍射图谱中，在衍射角2θ±0.1°为选自7.2°、12.4°、14.4°、15.0°、15.6°、19.0°、22.3°、22.6°、23.4°、25.5°、25.9°和27.6°中的至少5处以上具有峰的结晶。

11.如权利要求8～10中任一项所述的盐，其特征在于：

其为在粉末X射线衍射图谱中，在衍射角2θ±0.1°为7.2°、12.4°、14.4°、15.0°、15.6°、19.0°、22.3°、22.6°、23.4°、25.5°、25.9°和27.6°处具有峰的结晶。

12.如权利要求8～11中任一项所述的盐，其特征在于：

具有图4所示的粉末X射线衍射图谱的结晶。

13.如权利要求8～12中任一项所述的盐，其特征在于：

在差示扫描量热DSC曲线中在峰温度219℃～224℃附近具有吸热峰的结晶。

14.如权利要求8所述的盐，其特征在于：

其为在粉末X射线衍射图谱中显示晕环图案的非晶体。

15.如权利要求8或14所述的盐，其特征在于：

具有图1所示的粉末X射线图谱的非晶体。

16.一种将权利要求1～15中任一项所述的盐作为有效成分的BTK抑制剂。

17.一种含有权利要求1～15中任一项所述的盐的医药组合物。

18.一种将权利要求1～15中任一项所述的盐作为有效成分的抗肿瘤剂或过敏性疾病、自身免疫疾病、炎症性疾病的预防剂和/或治疗剂。

19.一种将权利要求1～15中任一项所述的盐作为有效成分的、对于血液肿瘤的抗肿瘤剂、或过敏性鼻炎、花粉过敏症、特异性皮炎、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮的预防剂和/或治疗剂。

20.一种权利要求1～15中任一项所述的盐的在制造BTK抑制剂中的使用。

21.一种权利要求1～15中任一项所述的盐的在制造医药组合物中的使用。

22.一种权利要求1～15中任一项所述的盐在制造抗肿瘤剂、或过敏性疾病、自身免疫疾病、炎症性疾病的预防剂和/或治疗剂中的使用。

23.一种权利要求1～15中任一项所述的盐在制造对于血液肿瘤的抗肿瘤剂、或过敏性鼻炎、花粉过敏症、特异性皮炎、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮的预防剂和/或治疗剂中的使用。

24.如权利要求1～15中任一项所述的盐，其特征在于：

用于抑制BTK。

25.如权利要求1～15中任一项所述的盐，其特征在于：

作为医药使用。

26.如权利要求1～15中任一项所述的盐，其特征在于：

用于肿瘤、过敏性疾病、自身免疫疾病或炎症性疾病的预防或治疗。

27.如权利要求1～15中任一项所述的盐，其特征在于：

用于血液肿瘤、过敏性鼻炎、花粉过敏症、特异性皮炎、类风湿性关节炎或全身性红斑狼疮的预防或治疗。

28.一种BTK抑制方法，

对需要抑制BTK的对象给予有效量的权利要求1～15中任一项所述的盐的步骤。

29.一种肿瘤、过敏性疾病、自身免疫疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗方法，其特征在于：包括：

对需要预防和/或治疗肿瘤、过敏性疾病、自身免疫疾病或炎症性疾病的对象给予有效量的权利要求1～15中任一项所述的盐的步骤。

30.一种血液肿瘤、过敏性鼻炎、花粉过敏症、特异性皮炎、类风湿性关节炎或全身性红斑狼疮的治疗方法，其特征在于：包括：

对需要治疗血液肿瘤、过敏性鼻炎、花粉过敏症、特异性皮炎、类风湿性关节炎或全身性红斑狼疮的对象给予有效量的权利要求1～15中任一项所述的盐的步骤。