CN107075452A - 来源于解脂耶氏酵母和解腺嘌呤阿氏酵母的启动子及其使用方法 - Google Patents

Abstract

公开了来自解腺嘌呤阿氏酵母(Arxula adeninivorans)和解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)的启动子的核苷酸序列，其可以用于驱动细胞中的基因表达。验证启动子、筛选选择的启动子以确定哪些启动子可用于增加含油酵母的脂质生产效率。

Description

来源于解脂耶氏酵母和解腺嘌呤阿氏酵母的启动子及其使用 方法

相关申请

本申请要求于2014年7月25日提交的美国临时专利申请号62/028,946的优先权的权益，其全部内容通过引用并入本文。

序列表

本申请包含以ASCII格式电子提交的序列表，并通过引用全文纳入本文。所述ASCII副本，于2015年7月16日创建，名为NGX_03425_SL.txt，大小为71,975字节。

背景技术

含脂肪酵母例如解脂耶氏酵母(Yarrowia lipofytica)和解腺嘌呤阿氏酵母(Arxula adeninivorans)可以被工程改造用于脂质的工业生产，脂质是食品和化妆品工业中不可或缺的成分，并且是生物柴油和生物化学工业中的重要前体。可以通过上调或下调调节细胞代谢和脂质途径的基因来提高含油生物体的脂质产量。

上调基因的一种方法是使用强组成型启动子控制其表达。例如，可以使用强组成型启动子来上调解脂耶氏酵母(Y.lipolytica)二酰基甘油酰基转移酶DGA1，并且这种遗传工程改造显着增加生物体的脂质产量和生产力(参见例如Tai和Stephanopoulos,Metabolic Engineering 12:1-9(2013))。

选择用于控制基因表达的最佳启动子是遗传工程改造的关键部分，但不同的启动子可能对于不同的应用是最佳的。例如，用于酵母的工业菌株的最佳启动子可以不同于在实验室菌株中最佳的启动子。

已经鉴定和验证了一些解脂耶氏酵母(Y.lipolytica)和解腺嘌呤阿氏酵母(A.adeninivorans)(参见例如美国专利号7,259,255(通过引用并入)和7,264,949(通过引用并入)；美国专利申请号2012/0289600(通过引用并入)，2006/0094102(通过引用并入)和2003/0186376(通过引用并入)；Wartmann等，FEMS Yeast Research 2:363-69(2002))。然而，两种生物体都含有数百个尚待鉴定的启动子，并且许多这些启动子可用于工程改造酵母和其他生物体。此外，启动子可以在相同物种的不同菌株之间显著变化，并且这种遗传多态性的鉴定和筛选为遗传工程改造提供了更丰富的工具箱。

发明概述

公开了解腺嘌呤阿氏酵母(Arxula adeninivorans)和解脂耶氏酵母(Yarrowialipolytica)的启动子的核苷酸序列，其可以用于驱动细胞中的基因表达。验证这些启动子、筛选选择的启动子以确定哪些启动子可用于增加含油酵母的脂质生产效率。

附图说明

图1描绘了pNC303构建体的图谱，其用作模板以扩增包含酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)转化酶基因SUC2和TER1终止子的DNA片段。“Sc URA3”表示用于在酵母中选择的酿酒酵母URA3营养缺陷型标记；“2u ori”表示来自2μm圆形质粒的酿酒酵母复制起点；“pMB1ori”表示来自pBR322质粒的大肠杆菌(E.coli)pMB1复制起点；“AmpR”表示用作用氨苄青霉素选择的标记的bla基因；“ScFBA1p”表示酿酒酵母FBA1启动子-822至-1；“hygR(NG4)”表示由GenScript合成的大肠杆菌hygR基因cDNA(SEQ ID NO：2)；“ScFBA1t”表示终止后205bp的酿酒酵母FBA1终止子；“YlTEFlp(PR3)”表示解脂耶氏酵母TEF1启动子-406至+125；“NG102”表示酿酒酵母SUC2基因(SEQ ID NO：1)；“YlCYClt(TER1)”表示在终止密码子之后300bp的解脂耶氏酵母CYC1终止子。

图2描述了在14种不同启动子和相同TER1终止子(终止密码子后300bp的解脂耶氏酵母CYC1终止子)的控制下表达酿酒酵母转化酶基因SUC2的解脂耶氏酵母菌株NS18转化体的转化酶活性。x轴标记对应于表II中的启动子ID。通过二硝基水杨酸(DNS)试验来测量活性。在30℃下在96孔板中的YPD培养基中细胞生长48小时后分析样品。在不同的96孔板中分析2A和2B中的样品。亲本解脂耶氏酵母菌株NS18(“C”)用作每个平板上的阴性对照。

图3描述了用于在解脂耶氏酵母菌株NS18和解腺嘌呤阿氏酵母菌株NS252中表达潮霉素抗性基因(hygR，SEQ ID NO：2)的pNC161构建体的图谱。载体pNC161在转化前通过PacI/PmeI限制性消化进行线性化。“pMB1ori”表示来自pBR322质粒的大肠杆菌pMB1复制起点；“AmpR”表示用作用氨苄青霉素选择的标记的bla基因；“Sc URA3”表示用于在酵母中选择的酿酒酵母URA3营养缺陷型标记；“2u ori”表示来自2μm圆形质粒的酿酒酵母复制起点；“ScFBA1p”表示酿酒酵母FBA1启动子-822至-1；“hygR(NG4)”表示由GenScript合成的大肠杆菌hygR基因cDNA(SEQ ID NO：2)；“ScFBA1t”表示在终止密码子之后205bp的酿酒酵母FBA1终止子。

图4描述了在不同解腺嘌呤阿氏酵母启动子的控制下表达大肠杆菌潮霉素抗性基因(SEQ ID NO：2)的解腺嘌呤阿氏酵母菌株NS2S2转化体的琼脂平板。标记对应于表I中的启动子ID。转化体在含有YPD和300μg/μL潮霉素B的平板上在37℃下生长2天。阴性对照由亲本解腺嘌呤阿氏酵母菌株NS252组成，用水代替DNA。

图5描述了在不同解腺嘌呤阿氏酵母启动子的控制下表达大肠杆菌潮霉素抗性基因(SEQ ID NO：2)的解脂耶氏酵母菌株NS18转化体的琼脂平板。标记对应于表I中的启动子ID。转化体在含有YPD和300μg/μL潮霉素B的平板上在37℃下生长2天。阴性对照由亲本解脂耶氏酵母菌株NS18组成，用水代替DNA。

图6描述了用于在解脂耶氏酵母菌株NS18中过表达编码二酰基甘油酰基转移酶DGA1(SEQ ID NO：3)的基因的pNC336构建体的图谱。载体pNC336在转化前通过PacI/NotI限制性消化进行线性化。“Sc URA3”表示用于在酵母中选择的酿酒酵母URA3营养缺陷型标记；“2u ori”表示来自2μm圆形质粒的酿酒酵母复制起点；“pMB1ori”表示来自pBR322质粒的大肠杆菌pMB1复制起点；“AmpR”表示用作用氨苄青霉素选择的标记的bla基因；“PR14AaTEFlp”表示解腺嘌呤阿氏酵母TEF1启动子-427至-1(SEQ ID NO：5)；NG66(RtDGA1)表示由GenScript合成的红冬孢酵母DGA1cDNA(SEQ ID NO：3)；“YlCYClt(TER1)”表示在终止密码子之后300bp的解脂耶氏酵母CYC1终止子；“ScTEF1p”表示酿酒酵母TEF1启动子-412至-1；“NAT”表示用作用诺尔丝菌素选择的标记物的链霉菌属Natl基因；“ScCYClt”表示终止密码子后275bp的酿酒酵母CYC1终止子。

图7描述了在不同的解腺嘌呤阿氏酵母启动子和相同的TER1终止子(终止密码子之后300bp的解脂耶氏酵母CYC1终止子)的控制下表达红冬孢酵母(Rhodosporidiumtoruloides)DGA1蛋白的解脂耶氏酵母菌株NS18转化体的脂质试验结果。x轴标记对应于表I中的启动子ID。对于每个构建体，通过实施例7中描述的脂质试验分析12个转化体。在含有脂质生产诱导培养基的96孔板中细胞生长72小时后分析样品。样品“C”描绘了亲本菌株NS18作为对照，误差棒描绘了从三种不同试验获得的一个标准偏差。

图8描绘了在不同解脂耶氏酵母启动子和相同TER1终止子(解脂耶氏酵母CYC1终止子，终止密码子后300bp)控制下表达红冬孢酵母DGA1的解脂耶氏酵母菌株NS18转化体的脂质试验结果。x轴标记对应于表II中的启动子ID。对于每个构建体，通过实施例7中描述的脂质试验分析12个转化体。在含有脂质生产诱导培养基的96孔板中细胞生长72小时后分析样品。样品“C”描绘了亲本菌株NS18作为对照，误差棒描绘了从三种不同试验获得的一个标准偏差。

图9描述了用于在解腺嘌呤阿氏酵母菌株NS252中过表达编码来自红冬孢酵母的二酰基甘油酰基转移酶DGA1的基因的pNC378构建体的图。载体pNC378在转化前通过PmeI/AscI限制性消化进行线性化。“Sc URA3”表示用于在酵母中选择的酿酒酵母URA3营养缺陷型标记；“2u ori”表示来自2μm圆形质粒的酿酒酵母复制起点；“pMB1ori”表示来自pBR322质粒的大肠杆菌pMB1复制起点；“AmpR”表示用作用氨苄青霉素选择的标记的bla基因；“PR26AaPGKlp”表示解腺嘌呤阿氏酵母PGK1启动子-524至-1(SEQ ID NO：14)；“PR25AaADH1p”表示解腺嘌呤阿氏酵母ADH1启动子-877至-1(SEQ ID NO：13)；“NG66(RtDGA1)”表示红冬孢酵母DGA1cDNA；“ScFBAlt(TER6)”表示终止密码子后205bp的酿酒酵母终止子；“NAT”表示用作用诺尔丝菌素选择的标记物的链霉菌属(Streptomyces noursei)Natl基因；“AaCYClt”表示终止密码子后301bp的解腺嘌呤阿氏酵母CYC1终止子。

图10描述了解腺嘌呤阿氏酵母菌株NS252转化体的脂质试验结果，该转化体表达在解腺嘌呤阿氏酵母启动子ADH1和TER16终止子(终止密码子后301bp的解腺嘌呤阿氏酵母CYC1终止子)控制下的来自各种宿主生物的不同DGA蛋白。x轴标记对应于表III中的DGA基因。对于每个构建体，通过实施例7和8中描述的脂质试验分析8个转化体。在含有脂质生产诱导培养基的96孔板中细胞生长72小时后分析样品。样品“C”描绘了亲本菌株NS252作为对照，误差棒描绘了从8种不同试验获得的一个标准偏差。

图11描述了解腺嘌呤阿氏酵母菌株NS252转化体的脂质试验结果，该转化体表达在解腺嘌呤阿氏酵母启动子ADH1和TER16终止子(终止密码子后301bp的解腺嘌呤阿氏酵母CYC1终止子)控制下的来自各种宿主生物的不同DGA蛋白。x轴标记对应于表III中的DGA基因。对于每个构建体，通过实施例7和8中描述的脂质试验分析8个转化体。在含有脂质生产诱导培养基的96孔板中细胞生长72小时后分析样品。样品“C”描绘了亲本菌株NS252作为对照，误差棒描绘了从8种不同试验获得的一个标准偏差。

图12描述了解腺嘌呤阿氏酵母菌株NS252转化体的脂质试验结果，该转化体表达在解腺嘌呤阿氏酵母启动子ADH1和TER16终止子(终止密码子后301bp的解腺嘌呤阿氏酵母CYC1终止子)控制下的来自各种宿主生物的不同DGA蛋白。x轴标记对应于表III中的DGA基因。对于每个构建体，通过实施例7和8中描述的脂质试验分析8个转化体。在含有脂质生产诱导培养基的96孔板中细胞生长72小时后分析样品。样品“C”描绘了亲本菌株NS252作为对照，误差棒描绘了从8种不同试验获得的一个标准偏差。

发明详述

概述

在一些方面，本发明涉及载体，其包含编码衍生自解腺嘌呤阿氏酵母或解脂耶氏酵母的启动子的核苷酸序列，其中所述载体是质粒。在一些方面，本发明涉及载体，其包含编码衍生自解腺嘌呤阿氏酵母或解脂耶氏酵母的启动子的核苷酸序列，其中所述载体是线性DNA片段。

在某些方面，本发明涉及包含遗传修饰的转化的细胞，其中所述遗传修饰是用编码衍生自解腺嘌呤阿氏酵母或解脂耶氏酵母的启动子的核酸转化。

在其它方面，本发明涉及在细胞中表达基因的方法，包括用编码衍生自解腺嘌呤阿氏酵母或解脂耶氏酵母的启动子的核酸转化亲本细胞。在一些实施方式中，核酸包含基因，并且基因和启动子可操作地连接。在其他实施方式中，设计核酸使得启动子在转化亲本细胞后变得可操作地连接到基因。

定义

本文使用冠词“一个”和“一种”表示一个或一个以上的(即至少一个)该冠词语法上的宾语。举例而言，“一种元件”表示一个元件或者一个以上的元件。

术语“DGAT2”是指编码2型二酰甘油酰基转移酶蛋白的基因，例如编码DGA1蛋白的基因。

“二酰基甘油酯”，“二酰基甘油”和“甘油二酯”是由甘油和两种脂肪酸组成的酯。

术语“二酰基甘油酰基转移酶”和“DGA”是指催化由二酰基甘油形成三酰基甘油酯的任何蛋白质。二酰基甘油酰基转移酶包括1型二酰基甘油酰基转移酶(DGA2)、2型二酰基甘油酰基转移酶(DGA1)和催化上述反应的所有同系物。

术语“二酰基甘油酰基转移酶，2型”和“2型二酰基甘油酰基转移酶”是指DGA1和DGA1直向同源物。

术语“结构域”是指蛋白质的氨基酸序列的一部分，其能够折叠成独立于蛋白质其余部分的稳定的三维结构。

“干重”和“干细胞重量”是指在相对不存在水时测定的平均重量。例如，以干重提及油性细胞包括特定成分的指定百分比是指基本上所有的水已经被除去后，基于细胞的重量计算百分比。

术语“编码”是指核苷酸序列，其(a)编码氨基酸序列，(b)可以结合蛋白质例如聚合酶或转录因子，(c)调节结合核酸的蛋白质，例如作为转录起始位点，和(d)(a)、(b)和(c)中所述的核苷酸序列的互补序列。例如，核苷酸序列可以编码结合聚合酶的基因，其编码氨基酸序列和/或启动子。DNA和RNA都可以编码基因。DNA和RNA都可以编码蛋白质。

术语“内源的”是指存在于天然的、未转化的细胞中的任何物质，即，没有被引入细胞的一切。“内源核酸”是存在于天然的、未转化的细胞中的核酸，例如染色体或从染色体中天然存在的基因转录的mRNA。内源核酸包括内源基因和内源启动子。术语“内源基因”和“内源启动子”是指天然存在于细胞基因组中的核苷酸序列，其没有通过转化或转染引入。

术语“外源的”是指引入细胞的任何物质。“外源核酸”是通过细胞膜进入细胞的核酸。外源核酸可以含有先前不存在于细胞的天然基因组中的核苷酸序列和/或已经存在于基因组中但被重新引入基因组的核苷酸序列，例如通过用其他拷贝的核苷酸序列转化。外源核酸包括外源基因和外源启动子。“外源基因”是已经被引入细胞(例如通过转化/转染)并编码RNA和/或蛋白质的核苷酸序列，外源基因也称为“转基因”。类似地，“外源启动子”是已被引入细胞(例如通过转化/转染)并编码启动子的核苷酸序列。包含外源基因或外源启动子的细胞可以称为重组细胞，其中可以引入额外的外源基因或启动子。外源基因或外源启动子可以来自相对于被转化的细胞的相同物种或不同物种。因此，外源基因可以包括占据细胞基因组中不同于内源基因的位置的基因，或者相对于基因的内源性拷贝处于不同的可操作的连接。类似地，外源启动子可以包括占据细胞基因组中不同于内源启动子位置的启动子或可操作地连接于与内源启动子不同的基因的启动子。外源基因或外源启动子可以以超过一个拷贝存在于细胞中。外源基因或外源启动子可以作为插入基因组(核或质体)或作为游离分子保持在细胞中。

术语“表达”是指细胞中核酸或氨基酸序列(例如肽，多肽或蛋白质)的量。基因的增加的表达是指该基因的增加的转录。氨基酸序列、肽、多肽或蛋白质的增加的表达是指增加的编码氨基酸序列、肽、多肽或蛋白质的核酸的翻译。

本文使用的术语“基因”可以包括含有内含子的基因组序列，特别是编码涉及特定活性的多肽序列的多核苷酸序列。该术语还包括不衍生自基因组序列的合成核酸。在某些实施方式中，基因缺乏内含子，因为它们基于cDNA和蛋白质序列的已知DNA序列合成。在其它实施方式中，基因是合成的非天然cDNA，其中已基于密码子使用而优化密码子以在解脂耶氏酵母或解腺嘌呤阿氏酵母腺中表达。该术语还可以包括包含上游、下游和/或内含子核苷酸序列的核酸分子，包括启动子。

术语“遗传修饰”是指转化的结果。每个转化通过定义(definition)引起遗传修饰。

本文所用的术语“同源物”是指(a)相对于在研的未修饰蛋白质具有氨基酸取代、缺失和/或插入的肽、寡肽、多肽、蛋白质和酶，并且具有与它们来源的未修饰的蛋白质相似的生物学和功能活性，和(b)相对于在研的未修饰核酸具有核苷酸取代、缺失和/或插入的核酸，并且具有与它们来源的未修饰的核酸相似的生物学和功能活性。例如，解脂耶氏酵母可以与由相同转录调节子调节的解腺嘌呤阿氏酵母启动子同源。

术语“整合的”是指作为插入细胞基因组中(例如插入染色体，包括插入质体基因组中)的插入物而维持在细胞中的核酸。

“可操作连接”是两个核酸序列(例如控制序列(通常是启动子)和连接的序列(通常是编码蛋白质的序列，也称为编码序列)之间的功能性连接。如果启动子可以介导基因的转录，则其与基因可操作地连接(或“可操作连接”)。

术语“天然”是指在转化事件之前的细胞或亲本细胞的组成。

术语“核酸”是指任何长度的核苷酸聚合形式，不论是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或它们的类似物。多核苷酸可以具有任意的三维结构，且可以执行任何功能。以下是多核苷酸的非限制性例子：基因或基因片段的编码或非编码区域、由连锁分析定义的基因座、外显子、内含子、信使RNA(mRNA)、转移RNA、核糖体RNA、核酶、cDNA、重组多核苷酸、支链多核苷酸、质粒、载体、任意序列的分离DNA、任意序列的分离RNA、核酸探针和引物。多核苷酸可包括修饰的核苷酸，如甲基化的核苷酸和核苷酸类似物。如果存在，对核苷酸结构的修饰可在聚合物的组装之前或之后赋予。多核苷酸可进一步被修饰，如通过与标记组分结合。在本文提供的所有核酸序列中，U核苷酸可与T核苷酸互换。

术语“亲本细胞”是指细胞从其传承的每个细胞。细胞的基因组由亲本细胞的基因组和对其基因组的任何后续遗传修饰组成。

如本文所用，术语“质粒”是指与生物体的基因组DNA物理分离的环状DNA分子。质粒可以在引入宿主细胞之前线性化(本文称为线性化质粒)。线性化质粒可以不是自我复制的，而是可以整合到生物体的基因组DNA中并与其一起复制。

“启动子”是指导核酸转录的核酸控制序列。如本文所用，启动子包括靠近转录起始位点的必需的核酸序列。启动子还任选地包括远端增强子或阻抑物元件，其可位于距转录起始位点多达几千个碱基对处。

“重组”是指由于外源核酸的引入或天然核酸的改变而被修饰的细胞，核酸，蛋白质或载体。因此，例如，重组细胞可以表达在天然(非重组)形式的细胞中没有发现的基因，或者表达与非重组细胞表达的基因不同的天然基因。重组细胞可以包括但不限于编码基因产物或抑制元件例如降低细胞中活性基因产物水平的突变、敲除、反义、干扰RNA(RNAi)或dsRNA的重组核酸。“重组核酸”衍生自最初在体外，通常通过操纵核酸，例如使用聚合酶、连接酶、外切核酸酶和内切核酸酶，或以其它方式在自然界中通常不存在的形式形成的核酸。可以产生重组核酸，例如，将两个或更多个核酸置于可操作连接中。因此，出于本发明的目的，在体外通过将正常状态天然不相连的DNA分子连接形成的分离核酸或表达载体都被认为是重组的。一旦制备重组核酸并引入宿主细胞或生物体中，其可以使用宿主细胞的体内细胞机制进行复制；然而，此类核酸一旦重组产生，尽管随后在细胞内复制，仍然被认为是用于本发明目的的重组。另外，重组核酸是指包含内源核苷酸序列和外源核苷酸序列的核苷酸序列；因此，已经与外源启动子重组的内源基因是重组核酸。“重组蛋白”是使用重组技术，即通过表达重组核酸而制备的蛋白质。

术语“调节区”是指影响基因的转录或翻译但不编码氨基酸序列的核苷酸序列。调节区包括启动子，操纵子，增强子和沉默子。

术语“子序列”是指在核苷酸序列内发现的小于全长核苷酸序列的连续核苷酸序列。例如，子序列可以由选自427个核苷酸长的SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列的100个连续核苷酸组成；可以在427个核苷酸长的序列中发现328个100连续核苷酸长的子序列。由在全长核苷酸序列的3'-末端的100个连续核苷酸组成的子序列是指在该序列中发现的最后100个核苷酸。例如，子序列可以由SEQ ID NO：5的3'-末端的100个连续核苷酸组成，并且该子序列是SEQ ID NO：5的最后100个核苷酸。换句话说，SEQ ID NO：5的3'端的100个连续核苷酸是具有前327个核苷酸缺失的SEQ ID NO：5的核苷酸序列，其是单个子序列。如本文所用，子序列由至少50个核苷酸组成。

“转化”是指将核酸转移到宿主生物体或宿主生物体的基因组中，导致遗传上稳定的遗传。包含转化的核酸片段的宿主生物体称为“重组”、“转基因”或“转化”生物体。因此，本发明的分离的多核苷酸可以掺入能够引入宿主细胞并在宿主细胞中复制的重组构建体，通常是DNA构建体。这种构建体可以是包含能够在给定宿主细胞中转录和翻译多肽编码序列的复制系统和序列的载体。通常，表达载体包括例如在5'和3'调节序列和可选择标记的转录控制下的一个或多个克隆基因。这样的载体还可以含有启动子调节区(例如，控制诱导型或组成型，环境或发育调节或位置特异性表达的调节区)，转录起始起始位点，核糖体结合位点，转录终止位点，和/或多聚腺苷酸化信号。或者，细胞可以用单个遗传元件如启动子转化，其可以在整合到宿主生物体的基因组中，例如通过同源重组时导致遗传上稳定的遗传。

术语“转化的细胞”是指经历转化的细胞。因此，转化的细胞包含亲本的基因组和可遗传的遗传修饰。

术语“三酰基甘油酯”，“三酰基甘油”，“甘油三酯”和“TAG”是由甘油和三个脂肪酸组成的酯。

术语"载体"是核酸能增殖和/或在生物体、细胞或细胞组分之间转移的方法。载体包括可能或可能不能自主复制或整合到宿主细胞的染色体中的质粒，线性DNA片段，病毒，噬菌体，原病毒，噬菌粒，转座子和人工染色体等。

微生物工程改造

A.概述

外源启动子和基因可以引入许多不同的宿主细胞中。合适的宿主细胞是可广泛存在于真菌家族中的微生物宿主。合适的宿主菌株的实例包括但不限于真菌或酵母物种，如阿氏菌属(Arxula)、曲霉属(Aspegillus)、奥兰氏菌属(Aurantiochytrium)、念珠菌属(Candida)、麦角菌属(Claviceps)、隐球菌属(Cryptococcus)、小坎宁安霉属(Cunninghamella)、汉逊酵母属(Hansenula)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、白冬孢酵母属(Leucosporidiella)、油脂酵母属(Lipomyces)、被孢霉属(Mortierella)、欧格氏霉属(Ogataea)、毕赤酵母属(Pichia)、原囊藻属(Prototheca)、根霉属(Rhizopus)、红冬孢酵母属(Rhodosporidium)、红酵母属(Rhodotorula)、酵母菌属(Saccharomyces)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)、银耳属(Tremella)、丝孢酵母属(Trichosporon)和耶氏酵母属(Yarrowia)。解脂耶氏酵母和解腺嘌呤阿氏酵母非常适合用作宿主微生物，因为它们可以以三酰基甘油积累大部分的重量。

本发明的微生物经遗传工程改造成含有外源启动子，其可以是强启动子或弱启动子。强启动子驱动可操作连接的基因的相当大的转录。弱启动子对于许多应用可能是有价值的。例如，弱启动子可优选用以驱动编码在高浓度下显示毒性的蛋白质的基因的转录或编码针对必需蛋白质的干扰RNA的核苷酸序列的转录。因此，当强启动子产生致死量的蛋白质产物时，优选弱启动子用于表达蛋白质。类似地，当基底水平的靶标是细胞存活所必需的时，优选弱启动子用于表达干扰RNA。

微生物表达系统和表达载体是本领域技术人员熟知的。任何这样的表达载体可以用于将即时启动子引入生物体。可以通过转化技术将启动子引入合适的微生物中，以指导可操作连接的基因的表达。例如，可将启动子克隆到合适的质粒中，并用所得质粒转化亲本细胞。该方法可用于驱动与启动子可操作地连接或在转化事件后变得可操作地连接于启动子的基因的表达。所述质粒没有特别限制，只要其能产生对微生物后代可遗传的所需启动子。

用于转化合适的宿主细胞的载体或盒是本领域熟知的。通常，载体或盒含有基因，指导相关基因的转录和翻译的序列，包括启动子，选择标记和允许自主复制或染色体整合的序列。合适的载体包含具有启动子和其它转录起始控制的基因的5'区域和控制转录终止的DNA片段的3'区域。优选两个控制区来源于与转化的宿主细胞同源或来自密切相关物种的基因，尽管应理解这种控制区不需要来源于选择作为生产宿主的特定物种的天然基因。例如，解腺嘌呤阿氏酵母启动子可以用于驱动其他酵母菌种的表达。

启动子，cDNA和3'UTR以及载体的其他元件可以通过使用从天然来源分离的片段的克隆技术产生(Green和Sambrook，《分子克隆：实验室手册》(第四版，2012)；美国专利号4,683,202；通过引用并入)。或者，可以使用已知方法(Gene 164：49-53(1995))合成地产生元件。

B.启动子序列

在一些实施方式中，本发明涉及启动子。在一些实施方式中，启动子包含SEQ IDNO：5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53中所示的核苷酸序列。启动子可以包含保守取代、缺失和/或插入，同时仍然起驱动转录的作用。因此，启动子序列可包含与SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高相同性的核苷酸序列。

为了确定两个核苷酸序列的百分比同一性，可以为了最佳比较目的而对序列进行比对(例如，可以在第一和第二核苷酸序列的一个或两个中引入间隙用于最佳比对，并且出于比较目的可以不考虑非相同序列)。然后可以比较相应核苷酸位置处的核苷酸。当第一序列中的位置由与第二序列中的相应位置相同的核苷酸占据时，则分子在该位置是相同的(如本文所使用的，核苷酸“同一性”等同于核苷酸“同源性”)。考虑到用于两个序列的最佳比对而需要引入的间隙数目和每个间隙的长度，两个序列之间的百分比同一性是序列共有的相同位置的数目的函数。

序列的比较和两个序列之间百分比同一性的确定可以使用数学算法来完成。可用于测定两个核苷酸序列之间同一性的示例性计算机程序包括但不限于BLAST程序套件，例如BLASTN、MEGABLAST和Clustal程序，例如ClustalW，ClustalX和Clustal Omega。

当相对于GenBank DNA序列和其他公共数据库中的核苷酸序列评估给定的核苷酸序列时，通常使用BLASTN程序进行序列搜索。使用例如CLUSTAL-W程序进行选定序列的比对以确定两个或多个序列之间的“％同一性”。

在整个说明书中用于指包含核苷酸序列和/或由核苷酸序列组成的核酸的缩写是常规的单字母缩写。因此，当包括在核酸中时，天然存在的编码核苷酸缩写如下：腺嘌呤(A)，鸟嘌呤(G)，胞嘧啶(C)，胸腺嘧啶(T)和尿嘧啶(U)。此外，本文呈现的核苷酸序列是5'→3'方向。

如本文所使用的，术语“互补”及其衍生物用于通过众所周知的规则来配对核酸，即A与T或U配对，和C与G配对。互补可以是“部分的”或“完整的”。在部分互补中，根据碱基配对规则只有一些核苷酸匹配；而在完全或全部互补中，所有碱基根据配对规则匹配。核酸链之间的互补程度可以对本领域熟知的两条核酸链之间的杂交效率和强度具有显着的影响。杂交的效率和强度取决于检测方法。

启动子的全核苷酸序列对于驱动转录不是必需的，并且比启动子的全核苷酸序列短的序列可以驱动可操作连接的基因的转录。称为核心启动子的启动子的最小部分包括转录起始位点，RNA聚合酶的结合位点和转录因子的结合位点。RNA聚合酶结合到启动子的3'末端。因此，启动子可包含与SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53的3’-端的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高相同性的核苷酸序列。

另外，可以组合两个启动子。例如，结合RNA聚合酶的第一启动子的区域可以与结合一种或多种转录因子的第二启动子的区域组合以产生杂合启动子。因此，启动子的子序列可以与另一个启动子组合以改变调节可操作地连接的基因的转录的转录因子。因此，启动子可包含与SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53中任何位置的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高相同性的核苷酸序列。

C.载体和载体组分

根据本发明的用于转化微生物的载体可以通过本领域技术人员熟知的已知技术根据本文的公开内容制备。载体通常含有一个或多个基因，其中每个基因编码所需产物(基因产物)的表达，并可操作地连接到调节基因表达的一个或多个调控序列(即启动子)，或载体将基因、控制序列或其它核苷酸序列靶向重组细胞中的特定位置。

任何核酸载体可以编码启动子。质粒可以是方便的载体，因为质粒可以在细菌宿主中操作和复制。在一些实施方式中，线性DNA分子可以是优选的载体，例如，在转化前消除质粒核苷酸序列。线性DNA可以从质粒的限制性消化或通过PCR扩增获得。PCR可用于通过扩增质粒DNA、基因组DNA、合成DNA或任何其它模板产生线性DNA载体。例如，PCR可用于从重叠的寡核苷酸片段产生线性DNA载体。合适的载体不限于DNA；例如，逆转录病毒载体的RNA可用于转化具有所需启动子的细胞。

载体可以包含启动子和基因，使得启动子和基因可操作地连接。或者，可以设计载体使得启动子在转化亲本细胞后变得可操作地连接到基因。例如，含有启动子的第一载体可以设计为与含有基因的第二载体重组，从而成功的转化和重组事件使得启动子和基因在宿主细胞中可操作地连接。或者，可以将含有启动子的载体设计为与宿主细胞基因组中的基因重组。在该实施方式中，外源启动子取代内源启动子。

1.控制序列

控制序列是调节编码序列表达或将基因产物导向细胞内或细胞外特定位置的核酸。调节表达的调控序列包括例如调节编码序列转录的启动子和终止编码序列转录的终止子。另一个控制序列是位于编码多聚腺苷酸化信号的编码序列末端的3'非翻译序列。将基因产物导向特定位置的控制序列包括编码信号肽的那些，其将它们所连接的蛋白质导向细胞内或细胞外的特定位置。

因此，用于在微生物中表达启动子的示例性载体设计包含与在酵母中有活性的启动子可操作连接的所需基因产物(例如，选择性标记或酶)的编码序列。或者，如果载体不含有与启动子可操作连接的基因，则启动子可以转化到细胞中，使得其在载体整合的位点变得可操作地连接到内源基因。

用于表达基因的启动子可以是与该基因天然连接的启动子或不同的启动子。

任选包括终止区控制序列，并且如果使用，则选择主要是方便之一，因为终止区是相对可互换的。终止区可以对于转录起始区(启动子)是天然的，对感兴趣的DNA序列可以是天然的，或者可以从另一个来源获得(参见例如Chen和Orozco，Nucleic Acids Research16:8411(1988))。

2.基因

通常，基因包括启动子，编码序列和终止控制序列。当通过重组DNA技术组装时，基因可以称为表达盒，并且可以侧接限制性位点以方便地插入用于将重组基因导入宿主细胞的载体中。表达盒可以侧接来自基因组或其他核酸靶的DNA序列，以利于通过同源重组将表达盒稳定整合到基因组中。或者，载体及其表达盒可以保持未整合(例如附加体)，在这种情况下，载体通常包括复制起点，其能够提供载体DNA的复制。

载体上存在的常见基因是编码蛋白质的基因，该基因的表达允许含有该蛋白质的重组细胞与不表达该蛋白质的细胞进行区分。这样的基因及其相应的基因产物称为选择性标记或选择标记。在用于转化本发明生物体的转基因构建体中可以使用多种选择标记中的任一种。

为了最佳表达重组蛋白，使用产生具有待转化宿主细胞最佳使用的密码子的编码序列是有益的。因此，转基因的正确表达可能需要转基因的密码子使用与其中表达转基因的生物体的特异性密码子偏好相匹配。这种效应背后的精确机制有许多，但包括可用的氨酰基化tRNA库与细胞中合成的蛋白质的适当平衡，以及当满足该需要时更高效地翻译转基因信使RNA(mRNA)。当不优化转基因中的密码子使用时，可用的tRNA库不足以允许转基因mRNA的高效翻译，导致核糖体停滞和终止以及转基因mRNA的可能的不稳定性。

D.同源重组

同源重组可用于用不同的核苷酸序列替代一个核苷酸序列。因此，可以使用同源重组来用外源启动子的全部或部分来替代驱动生物体中的基因表达的内源启动子的全部或部分。另外，同源重组可用于组合含有同源核苷酸序列的两种核酸。

同源重组是互补DNA序列比对和交换同源区的能力。例如，可以产生含有与被靶向的基因组序列(“模板”)同源的序列的转基因DNA(“供体”)，并将其引入生物体中以与生物体的基因组序列进行重组。

在宿主生物体中进行同源重组的能力对于可以在分子遗传水平上进行的事物具有许多实际意义，并且可用于生产产生所需产物的微生物。根据其本质，同源重组是精确的基因靶向事件；因此，用相同的靶向序列产生的大多数转基因品系在表型方面将是基本相同的，需要筛选少得多的转化事件。同源重组也将基因插入事件靶向宿主染色体，潜在地导致优异的遗传稳定性，即使在没有遗传选择的情况下。

因为同源重组是精确的基因靶向事件，所以其可以用于精确修饰目的基因或区域内的任何核苷酸，只要已经鉴定了足够的侧翼区。因此，同源重组可用于修饰影响RNA和/或蛋白质表达的调节序列。其还可以修饰蛋白质编码区，例如通过修饰酶活性例如底物特异性，结合亲和力和Km，因此其可以影响宿主细胞的代谢的所需变化。同源重组提供了操纵宿主基因组的有效手段，导致基因靶向，基因转化，基因缺失，基因重复，基因倒置和交换基因表达调节元件，例如启动子，增强子和3'UTR。因此，同源重组允许用不同的启动子取代生物体中的内源启动子。外源启动子可以提供优于内源启动子的优点；例如，外源启动子可以增加或降低可操作连接的基因的转录，或者外源启动子可允许通过有关内源启动子的不同细胞过程调节转录。

同源重组可以通过使用含有内源序列片段的靶向构建体来实现，以“靶向”内源性宿主细胞基因组内的感兴趣的基因或区域。这种靶向序列可以位于感兴趣的基因或区域的上游或下游，或位于感兴趣的基因/区域的侧翼。这种靶向构建体可以作为环状质粒DNA转化到宿主细胞中，任选地包括来自质粒的核苷酸序列；线性化DNA，例如质粒限制性消化；PCR产物，例如重叠寡核苷酸的扩增；或将DNA引入细胞的任何其它方式。在一些情况下，可能有利的是通过用限制酶切割转基因DNA首先暴露转基因DNA(供体DNA)内的同源序列，这可以提高重组效率并减少非特异性重组事件的发生。提高重组效率的其它方法包括使用PCR产生含有与被靶向的基因组序列同源的线性末端的转化转基因DNA。

E.转化

可以通过任何合适的技术转化细胞，包括例如生物弹射，电穿孔，玻璃珠转化和碳化硅晶须转化。用于将转基因导入微生物的任何方便的技术都可用于本发明。转化可以通过例如D.M.Morrison的方法(Methods in Enzymology 68:326(1979))，通过用氯化钙增加受体细胞对DNA的渗透性的方法(Mandel&Higa，J.Molecular Biology,53:159(1970))等来实现。

在产油酵母(例如解脂耶氏酵母)中表达转基因的实例可以在文献中找到(Bordes等人，J.Microbiological Methods,70:493(2007)；Chen等人，AppliedMicrobiology&Biotechnology 48:232(1997))。

用于转化微生物的载体可以通过已知技术制备。在一个实施方式中，用于在微生物中表达基因的示例性载体包含编码与启动子可操作连接的蛋白质的基因。或者，如果启动子不与感兴趣基因可操作地连接，则启动子可以转化到细胞中，使得其在载体整合的位点变得可操作地连接到天然基因。另外，微生物可以用两种载体同时转化(参见，例如，Protist 155:381-93(2004))。转化的细胞可以任选地基于其在未转化的细胞不会生长的抗生素或其它选择性标记存在的条件下生长的能力来选择。

示例性核酸、细胞和方法

1.衍生自解腺嘌呤阿氏酵母和解脂耶氏酵母的核苷酸序列

在一些实施方式中，本发明涉及编码启动子的核酸分子。在一些实施方式中，启动子来源于编码下述的基因：翻译延伸因子EF-1α；甘油-3-磷酸脱氢酶；磷酸丙糖异构酶1；果糖-1,6-二磷酸醛缩酶；磷酸甘油酸变位酶；丙酮酸激酶；输出蛋白EXP1；核糖体蛋白S7；醇脱氢酶；磷酸甘油酸激酶；己糖转运蛋白；一般氨基酸通透酶；丝氨酸蛋白酶；异柠檬酸裂解酶；酰基辅酶A氧化酶；ATP-硫酸化酶；己糖激酶；3-磷酸甘油酸脱氢酶；丙酮酸脱氢酶α亚基；丙酮酸脱氢酶β亚基；乌头酸；烯醇酶；肌动蛋白；多药耐药蛋白(ABC-转运蛋白)；泛素；GTP酶；质膜Na+/Pi共转运蛋白；丙酮酸脱羧酶；植酸酶；或α-淀粉酶。在一些实施方式中，启动子源自编码下述的基因：TEF1；GPD1；TPI1；FBA1；GPM1；PYK1；EXP1；RPS7；ADH1；PGK1；HXT7；GAP1；XPR2；ICL1；POX；MET3；HXK1；SER3；PDA1；PDB1；ACO1；ENO1；ACT1；MDR1；UBI4；YPT1；PHO89；PDC1；PHY；或AMYA。

在一些实施方式中，启动子来源于编码下述的基因：磷酸甘油酸激酶；己糖激酶；6-磷酸果糖激酶α亚基；磷酸丙糖异构酶1；3-磷酸甘油酸脱氢酶；丙酮酸激酶1；丙酮酸脱氢酶α亚基；丙酮酸脱氢酶β亚基；乌头酸；烯醇酶；肌动蛋白；核肌动蛋白相关蛋白；多药耐药蛋白(ABC-转运蛋白)；泛素；参与ER/高尔基体囊泡运输的亲水蛋白；或质膜Na+/Pi共转运蛋白。在一些实施方式中，启动子来源于编码下述的基因：PGK1；HXK1；PFK1；TPI1；SER3；PYK1；PDA1；PDB1；ACO1；ENO1；ACT1；ARP4；MDR1；UBI4；SLY1；或PH089。

在一些实施方式中，核酸包含与SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53所示序列具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高序列同源性的核苷酸序列。在其他实施方式中，核酸包含与SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53的子序列具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高序列同源性的核苷酸序列。在一些实施方式中，核酸包含SEQ ID NO：5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53中所示的核苷酸序列。在其他实施方式中，核酸包含由SEQ ID NO：5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53的子序列组成的核苷酸序列。在某些实施方式中，所述子序列保留启动子活性。在某些实施方式中，子序列保留全长核苷酸序列的至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的启动子活性。在某些实施方案中，子序列保留了全长核苷酸序列的启动子活性。

在一些实施方案中，子序列为50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个核苷酸长或更长。在一些实施方案中，子序列包含SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53中任意位置处的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸。在一些实施方案中，子序列包含SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53的3’端的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸。

在一些实施方案中，核酸包含与SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53中任意位置的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸具有至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高序列同源性的核苷酸序列。在一些实施方案中，核酸包含由SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53中任意位置的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸组成的核苷酸序列。在某些实施方式中，核苷酸序列保留启动子活性。在某些实施方式中，核苷酸序列保留全长核苷酸序列的至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的启动子活性。在某些实施方案中，核苷酸序列保留了全长核苷酸序列的启动子活性。

在一些实施方案中，核酸包含与SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53中的3’端的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高序列同源性的核苷酸序列。在一些实施方案中，核酸包含由SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53中的3’端的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸组成的核苷酸序列。在某些实施方式中，核苷酸序列保留启动子活性。在某些实施方式中，核苷酸序列保留全长核苷酸序列的至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的启动子活性。在某些实施方案中，核苷酸序列保留了全长核苷酸序列的启动子活性。

2.包含源自解腺嘌呤阿氏酵母的启动子的载体

在一些实施方案中，本发明涉及包含编码来自解腺嘌呤阿氏酵母的启动子的核苷酸序列的载体，其中所述启动子来源于编码下述的基因：翻译延伸因子EF-1α；甘油-3-磷酸脱氢酶；磷酸丙糖异构酶1；果糖-1,6-二磷酸醛缩酶；磷酸甘油酸变位酶；丙酮酸激酶；输出蛋白EXP1；核糖体蛋白S7；醇脱氢酶；磷酸甘油酸激酶；己糖转运蛋白；一般氨基酸通透酶；丝氨酸蛋白酶；异柠檬酸裂解酶；酰基辅酶A氧化酶；ATP-硫酸化酶；己糖激酶；3-磷酸甘油酸脱氢酶；丙酮酸脱氢酶α亚基；丙酮酸脱氢酶β亚基；乌头酸；烯醇酶；肌动蛋白；多药耐药蛋白(ABC-转运蛋白)；泛素；GTP酶；质膜Na+/Pi共转运蛋白；丙酮酸脱羧酶；植酸酶；或α-淀粉酶。

在一些实施方案中，载体是质粒。在其他实施方案中，载体是线性DNA分子。

在一些实施方案中，载体包含编码来自解腺嘌呤阿氏酵母的启动子的核苷酸序列，其中所述启动子源自编码下述的基因：TEF1；GPD1；TPI1；FBA1；GPM1；PYK1；EXP1；RPS7；ADH1；PGK1；HXT7；GAP1；XPR2；ICL1；POX；MET3；HXK1；SER3；PDA1；PDB1；ACO1；ENO1；ACT1；MDR1；UBI4；YPT1；PHO89；PDC1；PHY；或AMYA。

在一些实施方案中，核苷酸序列与SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53所示序列具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高序列同源性。在其他实施方案中，核苷酸序列与SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53的子序列具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高序列同源性。在一些实施方案中，核苷酸序列包含SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53所示序列。在其他实施方案中，核苷酸序列包含SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53的子序列。在某些实施方案中，所述子序列保留启动子活性。在其他实施方式中，子序列保留全长核苷酸序列的至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的启动子活性。在某些实施方案中，子序列保留了全长核苷酸序列的启动子活性。

在一些实施方案中，子序列为50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个核苷酸长或更长。在一些实施方案中，子序列包含SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53中任意位置处的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸。在一些实施方案中，子序列包含SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53中的3’端的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸。

在一些实施方案中，核苷酸序列与SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53中任意位置的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高序列同源性。在一些实施方案中，核苷酸序列包含SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53中任意位置处的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸。在某些实施方式中，核苷酸序列保留启动子活性。在某些实施方式中，核苷酸序列保留全长核苷酸序列的至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的启动子活性。在某些实施方案中，核苷酸序列保留了全长核苷酸序列的启动子活性。

在一些实施方案中，核苷酸序列与SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53的3’端的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高序列同源性。在一些实施方案中，核苷酸序列包含SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53的3’端的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸。在某些实施方式中，核苷酸序列保留启动子活性。在某些实施方式中，核苷酸序列保留全长核苷酸序列的至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的启动子活性。在某些实施方案中，核苷酸序列保留了全长核苷酸序列的启动子活性。

在一些实施方案中，载体还包含基因，并且基因和启动子可操作地连接。在其它实施方案中，设计载体使得在用载体转化细胞时启动子与基因可操作地连接。

3.包含源自解脂耶氏酵母的启动子的载体

在一些实施方案中，本发明涉及包含编码来自解脂耶氏酵母的启动子的核苷酸序列的载体，其中所述启动子来源于编码下述的基因：磷酸甘油酸激酶；己糖激酶；6-磷酸果糖激酶α亚基；磷酸丙糖异构酶1；3-磷酸甘油酸脱氢酶；丙酮酸激酶1；丙酮酸脱氢酶α亚基；丙酮酸脱氢酶β亚基；乌头酸；烯醇酶；肌动蛋白；核肌动蛋白相关蛋白；多药耐药蛋白(ABC-转运蛋白)；泛素；参与ER/高尔基体囊泡运输的亲水蛋白；或质膜Na+/Pi共转运蛋白。

在一些实施方案中，载体是质粒。在其他实施方案中，载体是线性DNA分子。

在一些实施方案中，载体包含编码来自解脂耶氏酵母的启动子的核苷酸序列，其中所述启动子衍生自编码下述的基因：PGK1；HXK1；PFK1；TPI1；SER3；PYK1；PDA1；PDB1；ACO1；ENO1；ACT1；ARP4；MDR1；UBI4；SLY1；或PHO89。

在一些实施方案中，核苷酸序列与SEQ ID NO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34所示序列具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高序列同源性。在其他实施方案中，核苷酸序列与SEQ ID NO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34的子序列具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高序列同源性。在一些实施方式中，核苷酸序列包含SEQ ID NO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34所示的序列。在其他实施方式中，核苷酸序列包含SEQ ID NO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34的子序列。在某些实施方案中，所述子序列保留启动子活性。在某些实施方式中，子序列保留全长核苷酸序列的至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的启动子活性。在某些实施方案中，子序列保留了全长核苷酸序列的启动子活性。

在某些实施方案中，子序列为50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个核苷酸长或更长。在一些实施方案中，子序列包含SEQ ID NO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34中任意位置处的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸。在一些实施方案中，子序列包含SEQID NO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34的3’端的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸。

在一些实施方案中，核苷酸序列与SEQ ID NO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34中任意位置的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高序列同源性。在一些实施方案中，核苷酸序列包含SEQ ID NO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34中任意位置处的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸。在某些实施方式中，核苷酸序列保留启动子活性。在某些实施方式中，核苷酸序列保留全长核苷酸序列的至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的启动子活性。在某些实施方案中，核苷酸序列保留了全长核苷酸序列的启动子活性。

在一些实施方案中，核苷酸序列与SEQ ID NO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34的3’端的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高序列同源性。在一些实施方案中，核苷酸序列包含SEQ ID NO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34的3’端的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸。在某些实施方式中，核苷酸序列保留启动子活性。在某些实施方式中，核苷酸序列保留全长核苷酸序列的至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的启动子活性。在某些实施方案中，核苷酸序列保留了全长核苷酸序列的启动子活性。

4.包含源自解腺嘌呤阿氏酵母的启动子的转化的细胞和用源自解腺嘌呤阿氏酵 母的启动子转化细胞的方法

在某些方面，本发明涉及包含遗传修饰的转化的细胞，其中所述遗传修饰是用编码来自解腺嘌呤阿氏酵母的启动子的核酸转化。在一些方面，本发明涉及在细胞中表达基因的方法，包括用编码来自解腺嘌呤阿氏酵母的启动子的核酸转化亲本细胞。在一些实施方案中，核酸包含基因，并且基因和启动子可操作地连接。在其他实施方案中，设计核酸使得启动子在转化亲本细胞后变得可操作地连接到基因。

在一些实施方案中，启动子来源于编码下述的基因：翻译延伸因子EF-1α；甘油-3-磷酸脱氢酶；磷酸丙糖异构酶1；果糖-1,6-二磷酸醛缩酶；磷酸甘油酸变位酶；丙酮酸激酶；输出蛋白EXP1；核糖体蛋白S7；醇脱氢酶；磷酸甘油酸激酶；己糖转运蛋白；一般氨基酸通透酶；丝氨酸蛋白酶；异柠檬酸裂解酶；酰基辅酶A氧化酶；ATP-硫酸化酶；己糖激酶；3-磷酸甘油酸脱氢酶；丙酮酸脱氢酶α亚基；丙酮酸脱氢酶β亚基；乌头酸；烯醇酶；肌动蛋白；多药耐药蛋白(ABC-转运蛋白)；泛素；GTP酶；质膜Na+/Pi共转运蛋白；丙酮酸脱羧酶；植酸酶；或α-淀粉酶。在一些实施方案中，启动子源自编码下述的基因：TEF1；GPD1；TPI1；FBA1；GPM1；PYK1；EXP1；RPS7；ADH1；PGK1；HXT7；GAP1；XPR2；ICL1；POX；MET3；HXK1；SER3；PDA1；PDB1；ACO1；ENO1；ACT1；MDR1；UBI4；YPT1；PHO89；PDC1；PHY；或AMYA。

在一些实施方案中，核酸包含与SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53所示序列具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高序列同源性的核苷酸序列。在其他实施方案中，核酸包含与SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53的子序列具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高序列同源性的核苷酸序列。在一些实施方案中，核酸包含SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53所示的核苷酸序列。在其他实施方案中，核酸包含由SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53的子序列组成的核苷酸序列。在某些实施方案中，所述子序列保留启动子活性。在某些实施方式中，子序列保留全长核苷酸序列的至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的启动子活性。在某些实施方案中，子序列保留了全长核苷酸序列的启动子活性。

在一些实施方案中，子序列为50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个核苷酸长或更长。在一些实施方案中，子序列包含SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53中任意位置处的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸。在一些实施方案中，子序列包含SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53中的3’端的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸。

在一些实施方案中，核酸包含与SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53中任意位置的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高序列同源性的核苷酸序列。在一些实施方案中，核酸包含由SEQ IDNO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53中任意位置处的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸组成的核苷酸序列。在某些实施方式中，核苷酸序列保留启动子活性。在某些实施方式中，核苷酸序列保留全长核苷酸序列的至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的启动子活性。在某些实施方案中，核苷酸序列保留了全长核苷酸序列的启动子活性。

在一些实施方案中，核酸包含与SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53的3’端的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高序列同源性的核苷酸序列。在一些实施方案中，核酸包含由SEQ ID NO:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53的3’端的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸组成的核苷酸序列。在某些实施方式中，核苷酸序列保留启动子活性。在某些实施方式中，核苷酸序列保留全长核苷酸序列的至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的启动子活性。在某些实施方案中，核苷酸序列保留了全长核苷酸序列的启动子活性。

5.包含源自解脂耶氏酵母的启动子的转化的细胞和用源自解脂耶氏酵母的启动 子转化细胞的方法

在某些方面，本发明涉及包含遗传修饰的转化的细胞，其中所述遗传修饰是用编码来自解脂耶氏酵母的启动子的核酸转化。在一些方面，本发明涉及在细胞中表达基因的方法，包括用编码来自解脂耶氏酵母的启动子的核酸转化亲本细胞。在一些实施方案中，核酸包含基因，并且基因和启动子可操作地连接。在其他实施方案中，设计核酸使得启动子在转化亲本细胞后变得可操作地连接到基因。

在一些实施方案中，启动子来源于编码下述的基因：磷酸甘油酸激酶；己糖激酶；6-磷酸果糖激酶α亚基；磷酸丙糖异构酶1；3-磷酸甘油酸脱氢酶；丙酮酸激酶1；丙酮酸脱氢酶α亚基；丙酮酸脱氢酶β亚基；乌头酸；烯醇酶；肌动蛋白；核肌动蛋白相关蛋白；多药耐药蛋白(ABC-转运蛋白)；泛素；参与ER/高尔基体囊泡运输的亲水蛋白；或质膜Na+/Pi共转运蛋白。在一些实施方案中，启动子来源于编码下述的基因：PGK1；HXK1；PFK1；TPI1；SER3；PYK1；PDA1；PDB1；ACO1；ENO1；ACT1；ARP4；MDR1；UBI4；SLY1；或PHO89。

在一些实施方案中，核酸包含与SEQ ID NO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34所示序列具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高序列同源性的核苷酸序列。在其他实施方案中，核酸包含与SEQ IDNO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34的子序列具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高序列同源性的核苷酸序列。在一些实施方式中，核酸包含SEQ ID NO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34所示的核苷酸序列。在其他实施方式中，核酸包含由SEQ ID NO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34的子序列组成的核苷酸序列。在某些实施方案中，所述子序列保留启动子活性。在某些实施方式中，子序列保留全长核苷酸序列的至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的启动子活性。在某些实施方案中，子序列保留了全长核苷酸序列的启动子活性。

在某些实施方案中，子序列为50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个核苷酸长或更长。在一些实施方案中，子序列包含SEQ ID NO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34中任意位置处的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸。在一些实施方案中，子序列包含SEQID NO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34的3’端的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸。

在一些实施方案中，核酸包含与SEQ ID NO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34中任意位置的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高序列同源性的核苷酸序列。在一些实施方案中，核酸包含由SEQ ID NO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34中任意位置处的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸组成的核苷酸序列。在某些实施方式中，核苷酸序列保留启动子活性。在某些实施方式中，核苷酸序列保留全长核苷酸序列的至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的启动子活性。在某些实施方案中，核苷酸序列保留了全长核苷酸序列的启动子活性。

在一些实施方案中，核酸包含与SEQ ID NO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34的3’端的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或更高序列同源性的核苷酸序列。在一些实施方案中，核酸包含由SEQ ID NO:16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34的3’端的50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300个连续核苷酸组成的核苷酸序列。在某些实施方式中，核苷酸序列保留启动子活性。在一些实施方式中，核苷酸序列保留全长核苷酸序列的至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的启动子活性。在某些实施方案中，核苷酸序列保留了全长核苷酸序列的启动子活性。

6.细胞，亲本细胞和转化的细胞的种类

细胞可以选自藻类，细菌，霉菌，真菌，植物和酵母。在一些实施方式中，细胞选自下组：阿氏菌属(Arxula)、曲霉属(Aspegillus)、奥兰氏菌属(Aurantiochytrium)、念珠菌属(Candida)、麦角菌属(Claviceps)、隐球菌属(Cryptococcus)、小坎宁安霉属(Cunninghamella)、地霉属(Geotrichum)、汉逊酵母属(Hansenula)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、柯达酵母(Kodamaea)、白冬孢酵母属(Leucosporidiella)、油脂酵母属(Lipomyces)、被孢霉属(Mortierella)、欧格氏霉属(Ogataea)、毕赤酵母属(Pichia)、原囊藻属(Prototheca)、根霉属(Rhizopus)、红冬孢酵母属(Rhodosporidium)、红酵母属(Rhodotorula)、酵母菌属(Saccharomyces)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)、银耳属(Tremella)、丝孢酵母属(Trichosporon)、威克汉姆酵母属(Wickerhamomyces)和耶氏酵母属(Yarrowia)。在某些实施方式中，细胞选自下组：解腺嘌呤阿氏酵母(Arxulaadeninivorans)、黑曲霉(Aspergillus niger)、米曲霉(Aspergillus orzyae)、土曲霉(Aspergillus terreus)、裂殖壶奥兰氏菌(Aurantiochytrium limacinum)、产朊假丝酵母(Candida utilis)、麦角菌(Claviceps purpurea)、浅白隐球酵母(Cryptococcusalbidus)、弯曲隐球菌(Cryptococcus curvatus)、拉米隐球菌(Cryptococcusramirezgomezianus)、地生隐球菌(Cryptococcus terreus)、威氏隐球菌(Cryptococcuswieringae)、刺孢小坎宁安霉(Cunninghamella echinulata)、贴梗海棠小坎宁安霉(Cunninghamellajaponica)、发酵性地霉(Geotrichum fermentans)、多形汉森酵母(Hansenulapolymorpha)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)、奥默柯达酵母(Kodamaea ohmeri)、克雷氏白冬孢酵母(Leucosporidiella creatinivora)、产油油脂酵母(Lipomyces lipofer)、斯达氏油脂酵母(Lipomyces starkeyi)、子囊菌油脂酵母(Lipomyces tetrasporus)、深黄被孢霉(Mortierella isabellina)、高山被孢霉(Mortierella alpina)、马兜铃欧格氏霉(Ogataea polymorpha)、塞佛式毕赤酵母(Pichia ciferrii)、季氏毕赤氏酵母(Pichiaguilliermondii)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、叶柄毕赤酵母(Pichiastipites)、小型原藻(Prototheca zopfii)、隐根根霉(Rhizopus arrhizus)、巴氏红冬孢酵母(Rhodosporidium babjevae)、圆红冬孢酵母(Rhodosporidiumtoruloides)、帕鲁氏红冬孢酵母(Rhodosporidium paludigenum)、粘红酵母(Rhodotorula glutinis)、胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、脑状银耳(Tremella enchepala)、皮状丝孢酵母(Trichosporon cutaneum)、发酵性丝孢酵母(Trichosporon fermentans)、塞佛式威克汉姆酵母(Wickerhamomycesciferrii)、和解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)。因此，细胞可以是解脂耶氏酵母。细胞可以是解腺嘌呤阿氏酵母。

通过以下实施例进一步说明本说明书，这些实施例不应被解释为以任何方式构成限制。所有引用文献的内容(包括本申请通篇引用的文献参考文献，授权专利，公开的专利申请和GenBank登录号)通过引用明确地并入本文。当通过引用并入本文的文献中的术语定义与本文所使用的定义冲突时，以本文使用的定义为主。

实施例

实施例1：测序解腺嘌呤阿氏酵母基因组和鉴定启动子序列

鉴定并筛选解腺嘌呤阿氏酵母启动子。首先，为了获得选定基因的启动子序列，解腺嘌呤阿氏酵母NS252株(ATCC 76597)的基因组进行测序，并通过合成基因组公司(Synthetic Genomics Inc.)(美国加州)注释。

基于关于酵母和真菌中常用的启动子的公开数据列举了可能特别用于驱动转录的启动子。例如，鉴定和筛选涉及重要代谢途径例如糖酵解的基因的启动子。可特别用于驱动转录的解腺嘌呤阿氏酵母启动子序列示于SEQ ID NO：5-15和35-53中，并列于下表I中。

表I，解腺嘌呤阿氏酵母启动子

实施例2：解脂耶氏酵母启动子的鉴定

解脂耶氏酵母基因组在KEGG数据库中是公开可获得的，但是每个解脂耶氏酵母启动子的精确序列尚未被鉴定或验证。

基于关于酵母和真菌中常用的启动子的公开数据列举了可能特别用于驱动转录的启动子。例如，鉴定和筛选涉及重要代谢途径例如糖酵解的基因的启动子。可特别用于驱动转录的解脂耶氏酵母启动子序列示于SEQ ID NO：16-34中并列于下表II中。

表II.解脂耶氏酵母启动子

*表示启动子和连续转录序列。

实施例3：验证解脂耶氏酵母启动子序列并评估其使用转化酶报告物基因的强度

使用酿酒酵母转化酶基因SUC2(SEQ ID NO：1)作为报告物，在解脂耶氏酵母菌株NS18中筛选选择的解脂耶氏酵母启动子的功能性和强度。转化酶基因既用作选择标记，筛选用于在蔗糖上生长的细胞，又用作用于定量评价启动子强度的报告物。另外，通过实施例4中描述的DNS试验来测量启动子强度。

酿酒酵母转化酶基因在解脂耶氏酵母菌株NS18中在十四种不同的解脂耶氏酵母启动子和相同的TER1终止子的控制下表达。使用含有与转化酶基因的5'末端同源的30-35个碱基对的反向引物，从宿主解脂耶氏酵母菌株NS18(从NRRL#YB-392获得)的基因组DNA扩增启动子，以允许同源重组启动子和转化酶DNA。从pNC303质粒扩增转化酶核苷酸序列和TER1终止子(图1)。将每个扩增的启动子的DNA与扩增的转化酶-TER1片段的DNA组合，并使用Chen等人描述的转化方案转化到NS18菌株中(Applied Microbiology&Biotechnology48:232-35(1997))。启动子DNA片段和转化酶-TER1DNA片段在体内组装并随机整合到宿主解脂耶氏酵母菌株NS18的基因组中。

将转化体铺板，并在具有2％蔗糖的YNB板上选择，并通过实施例4中所述的DNS试验筛选转化酶活性。就每个启动子分析了几个转化体。DNS试验的结果显示在图2中。大多数启动子在转化体之间显示出显着的集落变异，可能是由于转化酶的整合位点对表达的影响。图2证明所有十四个启动子都允许转化酶表达。对于具有较低表达水平和较低集落数(PR39，PR41，PR43，PR45和PR46)的那些启动子，其转化体在YNB+2％蔗糖选择性平板上生长的事实表明启动子能够实现转化酶的充分转录，以在蔗糖上生长。

实施例4：二硝基水杨酸试验

将细胞在30℃下在YPD琼脂平板上温育1至2天。来自每个琼脂平板的细胞用于在96孔板的孔中接种300μL培养基。96孔板用多孔盖覆盖并在InforsMultitron ATR振荡器中在30℃，70-90％湿度和900rpm下孵育。

将96孔板在3000rpm离心2分钟。在新96孔板中，将50μL上清液加入到150μL含有40mM乙酸钠，pH为4.5-5的50mM蔗糖中，并在30℃温育30-60分钟。

在新96孔板中，将30μL蔗糖/上清液混合物加入到60μL DNS试剂(1％二硝基水杨酸，30％酒石酸钠钾，0.4M NaOH)中并用PCR膜覆盖。将板在热循环器中加热至99℃持续5分钟。

然后将70μL混合物转移至康宁96孔透明平底板中，在SpectraMax M2分光光度计(分子装置公司(Molecular Devices))上监测540nm处的吸光度。

实施例5：利用hygR报告物基因验证解腺嘌呤阿氏酵母启动子序列

实施例3和4中所述的转化酶报告物试验不适用于解腺嘌呤阿氏酵母菌株NS252，因为该菌株具有在蔗糖上生长的天然能力。因此，大肠杆菌hygR基因(SEQ ID NO：2)用作解腺嘌呤阿氏酵母中的报告物并且用作通过潮霉素B(HYG)选择的转化选择标记。在十一个选择的启动子和相同的终止子的控制下，hygR基因在解脂耶氏酵母和解腺嘌呤阿氏酵母中表达(图4和5)。图3显示了使用来自酿酒酵母的FBA1启动子(SEQ ID NO：4)作为示例，用于在解脂耶氏酵母和解腺嘌呤阿氏酵母中过表达hygR基因的表达构建体pNC161的图谱。FBA1启动子也用作阳性对照，因为它可以驱动解脂耶氏酵母和解腺嘌呤阿氏酵母中的hygR表达。所有hygR表达构建体与pNC161相同，除了启动子序列。用水转化细胞作为阴性对照。

在通过PacI/PmeI限制性消化转化之前将表达构建体线性化。每个线性表达构建体包括hygR基因的表达盒和不同的启动子。将表达构建体随机整合到解脂耶氏酵母菌株NS18和解腺嘌呤阿氏酵母菌株NS252的基因组中，使用Chen等人所述的转化方案(AppliedMicrobiology&Biotechnology 48:232-35(1997))。

在具有300μg/mL HYG的YPD平板上选择转化体，并基于在平板上生长的菌落的大小筛选启动子强度。每个转化体的YPD+HYG平板的照片示于图4和5中。解腺嘌呤阿氏酵母的转化效率远低于解脂耶氏酵母，可能是因为转化方案针对解脂耶氏酵母优化而不是解腺嘌呤阿氏酵母。转化体的数目在不同构建体之间不同，可能是由于在不同转化期间使用的DNA量略有不同，尽管启动子的强度可能导致这种变化。图4和5仍然证明所有11种启动子在解脂耶氏酵母和解腺嘌呤阿氏酵母中有功能。

不同的解腺嘌呤阿氏酵母启动子的解腺嘌呤阿氏酵母转化体的菌落大小没有显著变化，表明当与hygR报告物连接时天然的解腺嘌呤阿氏酵母启动子具有相似效率。同时，解脂耶氏酵母菌落的大小显着变化。该数据可以表明不同的解腺嘌呤阿氏酵母启动子与解腺嘌呤阿氏酵母调节因子类似地相互作用，并与解脂耶氏酵母调节因子不同地相互作用。

在解腺嘌呤阿氏酵母和解脂耶氏酵母中筛选的每个启动子能够在解腺嘌呤阿氏酵母和解脂耶氏酵母中驱动基因表达，这表明SEQ ID NO：6-53中鉴定的所有启动子在所有酵母中都是有功能的。

实施例6：使用DGA2作为报告物评估解腺嘌呤阿氏酵母和解脂耶氏酵母启动子序 列的强度

选择通过实施例3-5中所述的转化酶和hygR试验评估的最有效的启动子，用于在解脂耶氏酵母中使用二酰基甘油酰基转移酶DGA1作为报告物进一步定量测试。DGA1蛋白催化三酰基甘油(TAG)合成的最后步骤，因此DGA1是脂质合成途径中的关键组分。DGA1在解脂耶氏酵母中的过表达显著增加其脂质生产效率。因此，在DGA1试验中启动子的强度与脂质生产效率相关。

编码来自红冬孢酵母菌的DGA1的基因(SEQ ID NO：3)在解脂耶氏酵母中在十二个选定的启动子和相同的终止子的控制下表达。图6显示了作为示例的表达构建体pNC336的图谱；该构建体用于用来自解腺嘌呤阿氏酵母的TEF1启动子(SEQ ID NO：5)过表达DGA1。所有其他DGA1表达构建体与pNC336相同，除了它们的启动子序列。

在通过PacI/NotI限制性消化转化之前将表达构建体线性化。每个线性表达构建体包括编码DGA1的基因的表达盒和用于通过诺尔丝菌素(NAT)进行选择的用作标记物的Nat1基因的表达盒。将表达构建体随机整合到解脂耶氏酵母菌株NS18的基因组中，使用Chen等人所述的转化方案(Applied Microbiology&Biotechnology 48:232-35(1997))。在具有500μg/mL NAT的YPD平板上选择转化体，并通过实施例7中所述的荧光染色脂质试验来筛选累积脂质的能力。

使用实施例7中描述的荧光染色脂质试验分析12个转化体的每个表达构建体(图7和8)。大多数构建体在转化体之间显示出显著的集落变异，这可能是由于在仅获得功能性Nat1盒的一些转化体中缺乏功能性DGA1表达盒，或者DGA1表达盒整合位点对DGA1表达的负效应。然而，图7和8证明所有十二种启动子增加解脂耶氏酵母的脂质含量，这证实了每种启动子用于增加脂质产生的功能性并再次确认它们驱动基因表达的功能性。

实施例7：脂质荧光试验

将含有0.5g L尿素，1.5g/L酵母提取物，0.85g/L酪蛋白氨基酸，1.7g LYNB(无氨基酸和硫酸铵)，100g/L葡萄糖和5.11g L邻苯二甲酸氢钾(25mM)的过滤灭菌的培养基装入高压灭菌的多孔板的每个孔中。针对24孔板，每孔使用1.5mL培养基，针对96孔板，每孔使用300μl培养基。或者，使用酵母培养物在高压灭菌的250mL烧瓶中接种50ml灭菌的培养基。使用在30℃下在YPD琼脂平板上温育1-2天的酵母菌株接种多壁板的每个孔。

多孔板用多孔盖覆盖并在Infors Multitron ATR振荡器中在30℃，70-90％湿度和900rpm下孵育。或者，用铝箔覆盖烧瓶，并在New Brunswick Scientific烧瓶中于30℃，70-90％湿度和900rpm下孵育。96小时后，将20μL 100％乙醇加入到在分析微量培养板中的20μL细胞中，并在4℃下孵育30分钟。然后将20μL细胞/乙醇混合物加入到Costar 96孔、黑色、透明底板中的80μL预混合的溶液中并覆盖有透明密封物，该预混合的溶液含有50μL1M碘化钾，1mMμL Bodipy493/503，0.5μL 100％DMSO，1.5μL 60％PEG 4000和27μL水。30℃下用SpectraMax M2分子光度计(分子装置公司)动力学试验监测Bodipy荧光，并通过用荧光除以600nm处的吸光度来标准化。

实施例8：解腺嘌呤阿氏酵母启动子增加酵母中的脂质生产

选择通过实施例5中所述的hygR试验评估的启动子，以筛选来自解腺嘌呤阿氏酵母中的各种生物体的编码二酰基甘油酰基转移酶(DGA)的基因，从而增加脂质产生。DGA蛋白催化三酰基甘油(TAG)合成的最后步骤，因此DGA是脂质合成途径中的关键组分。

编码来自各种宿主生物体的DGA1，DGA2和DGA3的基因在解腺嘌呤阿氏酵母菌株NS252中在解腺嘌呤阿氏酵母ADH1启动子(SEQ ID NO：13)和CYC1终止子控制下表达，所述宿主生物体例如解腺嘌呤阿氏酵母、解脂耶氏酵母、红冬孢酵母菌、斯达氏油脂酵母、土曲霉、麦角菌、裂殖壶奥兰氏菌、球毛壳菌(Chaetomium globosum)、牧草红酵母(Rhodotorulagraminis)、花药黑粉菌(Microbotryum violaceum)、禾柄锈菌(Puccinia graminis)、密粘褶菌(Gloeophyllum trabeum)、倒卵形红冬孢酵母(Rhodosporidium diobovatum)、三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)、蛾幼虫被虫草菌(Ophiocordycepssinensis)、绿木霉(Trichoderma virens)、蓖麻(Ricinus communis)、和落花生(Arachis hypogaea)。图9显示了表达构建体pNC378的图谱作为示例。该构建体用于用来自解腺嘌呤阿氏酵母的启动子ADH1(SEQ ID NO：13)过表达红冬孢酵母DGA1。所有其他DGA表达构建体与pNC378相同，除了DGA序列。使用解腺嘌呤阿氏酵母PGK1启动子(SEQ ID NO：14)驱动所有构建体中选择标记物NAT的表达。

表III.用解腺嘌呤阿氏酵母ADH1启动子筛选DGA的列表

在通过PmeI/AscI限制性消化转化之前将表达构建体线性化。每个线性表达构建体包括编码DGA的基因的表达盒和用于通过诺尔丝菌素(NAT)进行选择的用作标记物的Nat1基因的表达盒。将表达构建体随机整合到解腺嘌呤阿氏酵母菌株NS252的基因组中。简言之，将5mL YPD培养基用来自过夜集落的NS252在YPD平板上接种，并在37℃下孵育16-24小时。接下来，将2.5mL的过夜培养物用于在250mL摇瓶中接种22.5mL的YPD培养基。在37℃下3-4小时后，将培养物在3000rpm离心3分钟。弃去上清液，用水洗涤细胞，离心，弃去上清液。

为了使细胞具有感受态，将2mL的100mM LiAc和40μL的2M DTT加入到细胞沉淀中并在37℃下孵育1小时。将细胞溶液以10,000rpm离心10秒，弃去上清液。先用水洗涤沉淀，然后用冷的1M山梨醇洗涤沉淀。将洗涤的沉淀重悬于2mL冷的1M山梨醇中并置于冰上。将40μL细胞-山梨糖醇溶液和5μL消化的构建体加入预冷的0.2cm电穿孔比色皿内。将细胞在25uF，200欧姆和1.5kV下电穿孔，时间常数为约4.9-5.0ms。在1mL YPD中在37℃下回收细胞过夜。将100μL-500μL回收的培养物在具有50μg/mL NAT的YPD平板上铺板。

使用实施例7中描述的荧光染色脂质试验分析每个表达构建体的八个转化体。大多数构建体在转化体之间显示出显著的集落变异，这可能是由于在仅获得功能性Nat1盒的一些转化体中缺乏功能性DGA表达盒，或者DGA表达盒整合位点对DGA表达的负效应。然而，图10、11和12证明两个解腺嘌呤阿氏酵母启动子ADH1和PGK1可用作构建可行的表达盒的工具。

参考文献的引用

本文引用的所有专利，公开的专利申请和其他文献通过引用并入本文。

等同形式

本领域技术人员应了解或能够确定采用不超过常规实验即可获得本文所述的本发明具体实施方式的许多等同形式。这类等同形式应包含在所附权利要求书的范围内。

序列表

<110> 诺沃吉股份有限公司（NOVOGY, INC.）

<120> 来源于解脂耶氏酵母和解腺嘌呤阿氏酵母的启动子及其使用方法

<130> NGX-034.25

<140>

<141>

<150> 62/028,946

<151> 2014-07-25

<160> 53

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1599

<212> DNA

<213> 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）

<400> 1

atgcttttgc aagctttcct tttccttttg gctggttttg cagccaaaat atctgcatca 60

atgacaaacg aaactagcga tagacctttg gtccacttca cacccaacaa gggctggatg 120

aatgacccaa atgggttgtg gtacgatgaa aaagatgcca aatggcatct gtactttcaa 180

tacaacccaa atgacaccgt atggggtacg ccattgtttt ggggccatgc tacttccgat 240

gatttgacta attgggaaga tcaacccatt gctatcgctc ccaagcgtaa cgattcaggt 300

gctttctctg gctccatggt ggttgattac aacaacacga gtgggttttt caatgatact 360

attgatccaa gacaaagatg cgttgcgatt tggacttata acactcctga aagtgaagag 420

caatacatta gctattctct tgatggtggt tacactttta ctgaatacca aaagaaccct 480

gttttagctg ccaactccac tcaattcaga gatccaaagg tgttctggta tgaaccttct 540

caaaaatgga ttatgacggc tgccaaatca caagactaca aaattgaaat ttactcctct 600

gatgacttga agtcctggaa gctagaatct gcatttgcca atgaaggttt cttaggctac 660

caatacgaat gtccaggttt gattgaagtc ccaactgagc aagatccttc caaatcttat 720

tgggtcatgt ttatttctat caacccaggt gcacctgctg gcggttcctt caaccaatat 780

tttgttggat ccttcaatgg tactcatttt gaagcgtttg acaatcaatc tagagtggta 840

gattttggta aggactacta tgccttgcaa actttcttca acactgaccc aacctacggt 900

tcagcattag gtattgcctg ggcttcaaac tgggagtaca gtgcctttgt cccaactaac 960

ccatggagat catccatgtc tttggtccgc aagttttctt tgaacactga atatcaagct 1020

aatccagaga ctgaattgat caatttgaaa gccgaaccaa tattgaacat tagtaatgct 1080

ggtccctggt ctcgttttgc tactaacaca actctaacta aggccaattc ttacaatgtc 1140

gatttgagca actcgactgg taccctagag tttgagttgg tttacgctgt taacaccaca 1200

caaaccatat ccaaatccgt ctttgccgac ttatcacttt ggttcaaggg tttagaagat 1260

cctgaagaat atttgagaat gggttttgaa gtcagtgctt cttccttctt tttggaccgt 1320

ggtaactcta aggtcaagtt tgtcaaggag aacccatatt tcacaaacag aatgtctgtc 1380

aacaaccaac cattcaagtc tgagaacgac ctaagttact ataaagtgta cggcctactg 1440

gatcaaaaca tcttggaatt gtacttcaac gatggagatg tggtttctac aaatacctac 1500

ttcatgacca ccggtaacgc tctaggatct gtgaacatga ccactggtgt cgataatttg 1560

ttctacattg acaagttcca agtaagggaa gtaaaatag 1599

<210> 2

<211> 1026

<212> DNA

<213> 大肠杆菌（Escherichia coli）

<400> 2

atgaagaagc ccgagctgac cgctacctct gttgagaagt tcctgattga gaagtttgat 60

tccgtttccg acctgatgca gctgtccgag ggcgaggagt ctcgagcctt ctcctttgac 120

gtgggcggac gaggttacgt tctgcgagtg aactcgtgtg ccgacggctt ctacaaggat 180

cgatacgtct accgacactt tgcttctgcc gctctgccca tccctgaggt tctcgacatt 240

ggcgagttct ctgagtccct cacctactgc atctctcgac gagctcaggg agtcaccctg 300

caggacctcc ctgagactga gctgcctgct gtcctccagc ctgttgctga ggccatggac 360

gctatcgctg ctgctgatct gtcccagacc tcgggtttcg gcccctttgg acctcaggga 420

attggacagt acaccacttg gcgagacttc atctgtgcta ttgccgatcc tcacgtctac 480

cattggcaga ccgttatgga cgatactgtg tcggcttctg tcgctcaggc tctggacgag 540

ctgatgctct gggccgagga ttgccccgag gttcgacacc tggtgcatgc tgacttcggt 600

tccaacaacg ttctcaccga caacggccga atcactgccg tgattgactg gtccgaggct 660

atgtttggcg actcgcagta cgaggtggcc aacatcttct tttggcgacc ctggctggct 720

tgtatggagc agcagacccg atacttcgag cgacgacatc ctgagctcgc tggatcccct 780

cgactgcgag cttacatgct ccgaattggt ctggaccagc tctaccagtc gctggtggat 840

ggcaactttg acgatgctgc ctgggctcag ggacgatgtg acgccatcgt gcgatctggc 900

gctggaaccg tcggacgaac tcagattgcc cgacgatccg ctgctgtctg gaccgacgga 960

tgcgtggagg tcctggctga ttcgggtaac cgacgaccct ctactcgacc tcgagctaag 1020

gagtaa 1026

<210> 3

<211> 1047

<212> DNA

<213> 红冬孢酵母（Rhodosporidium toruloides）

<400> 3

atgggccagc aggcgacgcc cgaggagcta tacacacgct cagagatctc caagatcaag 60

ttcgcaccct ttggcgtccc gcggtcgcgc cggctgcaga ccttctccgt ctttgcctgg 120

acgacggcac tgcccatcct actcggcgtc ttcttcctcc tctgctcgtt cccaccgctc 180

tggccggctg tcattgccta cctcacctgg gtctttttca ttgaccaggc gccgattcac 240

ggtggacggg cgcagtcttg gctgcggaag agtcggatat gggtctggtt tgcaggatac 300

tatcccgtca gcttgatcaa gagcgccgac ttgccgcctg accggaagta cgtctttggc 360

taccacccgc acggcgtcat aggcatgggc gccatcgcca acttcgcgac cgacgcaacc 420

ggcttctcga cactcttccc cggcttgaac cctcacctcc tcaccctcca aagcaacttc 480

aagctcccgc tctaccgcga gttgctgctc gctctcggca tatgctccgt ctcgatgaag 540

agctgtcaga acattctgcg acaaggtcct ggctcggctc tcactatcgt cgtcggtggc 600

gccgccgaga gcttgagtgc gcatcccgga accgccgatc ttacgctcaa gcgacgaaaa 660

ggcttcatca aactcgcgat ccggcaaggc gccgaccttg tgcccgtctt ttcgttcggc 720

gagaacgaca tctttggcca gctgcgaaac gagcgaggaa cgcggctgta caagttgcag 780

aagcgtttcc aaggcgtgtt tggcttcacc ctccctctct tctacggccg gggactcttc 840

aactacaacg tcggattgat gccgtatcgc catccgatcg tctctgtcgt cggtcgacca 900

atctcggtag agcagaagga ccacccgacc acggcggacc tcgaagaagt tcaggcgcgg 960

tatatcgcag aactcaagcg gatctgggaa gaatacaagg acgcctacgc caaaagtcgc 1020

acgcgggagc tcaatattat cgcctga 1047

<210> 4

<211> 822

<212> DNA

<213> 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）

<400> 4

gatccaactg gcaccgctgg cttgaacaac aataccagcc ttccaacttc tgtaaataac 60

ggcggtacgc cagtgccacc agtaccgtta cctttcggta tacctccttt ccccatgttt 120

ccaatgccct tcatgcctcc aacggctact atcacaaatc ctcatcaagc tgacgcaagc 180

cctaagaaat gaataacaat actgacagta ctaaataatt gcctacttgg cttcacatac 240

gttgcatacg tcgatataga taataatgat aatgacagca ggattatcgt aatacgtaat 300

agttgaaaat ctcaaaaatg tgtgggtcat tacgtaaata atgataggaa tgggattctt 360

ctatttttcc tttttccatt ctagcagccg tcgggaaaac gtggcatcct ctctttcggg 420

ctcaattgga gtcacgctgc cgtgagcatc ctctctttcc atatctaaca actgagcacg 480

taaccaatgg aaaagcatga gcttagcgtt gctccaaaaa agtattggat ggttaatacc 540

atttgtctgt tctcttctga ctttgactcc tcaaaaaaaa aaaatctaca atcaacagat 600

cgcttcaatt acgccctcac aaaaactttt ttccttcttc ttcgcccacg ttaaatttta 660

tccctcatgt tgtctaacgg atttctgcac ttgatttatt ataaaaagac aaagacataa 720

tacttctcta tcaatttcag ttattgttct tccttgcgtt attcttctgt tcttcttttt 780

cttttgtcat atataaccat aaccaagtaa tacatattca aa 822

<210> 5

<211> 427

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 5

catggctcac ttgcggtcac cgcttgcatg aagcgcagat taccacaaag gtcctagtag 60

cttgaagggt gaaaacttga ggtttacaag ggcccaaaaa ctcaattgca gccactaaaa 120

tgagcattca atctataatc agtccatagt caacaagagc gctcaaaatt gatacagttt 180

agtgaatctt gctcgagatg agcgggcgat agttgctttt ggggagccct aagtggtacg 240

tgcggcgcgc gggatgtttc cctattaggc aaaggccgac cgggtaaccc ctcgagaaaa 300

aaaaattttt cgccgctaat ctggtgttat ataaagctcc ccctgctctt ggattttttc 360

cttgtcaact cacaccggaa atcgaaggca tttcattctg agtagttctc aaaaaacata 420

atcaaca 427

<210> 6

<211> 910

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 6

cctggtcgtc ctcctcttcc tcctggtgtg gatcctgcaa tacctcagcg atccggttcc 60

atgcaattgc ctgcgctcgt gtcaactggt actcaggcca ttgattggtg tagccagaat 120

aggtgcgaga gaagaacatc aaaatctgct gccagggctc tactgcgctc cggcggtcgc 180

tttcatccat gtacgccatc aatggctctt ccggttcatt cttatcaacc cgcatcgcgt 240

cgtagatgat cggctggaac cctatcgatt taaggtgtag ttcggcagac atgaacagcg 300

actccatggc gttccaaatt cgctcccgcc attccaggtc ttggccgctg ctgttaacat 360

gactgggctt ttcgaccaga gccgcaaggt cgatggggtt aaaatctgcc acgtactttc 420

cggccgccca cttctctata aactggttgc gtgccatggc aatccacacg cgtcgtcaag 480

ctaatgtccc ttccacatta ctgcggcttt gcaatgtgag gttcggtaca attacatcat 540

acgccgcaac tacaccagca accttaaaga actagtccga atctgtccag aaaccaattg 600

tcagcaaaca atcagacaca catacatgtt ttgaccacac aaacaccaca ccattatgac 660

cagtcatcat tgcgtcctac aaggtcatgt taccatgact gcggtggtat tttgtttgcc 720

atttgtcata ccttcattat gctgcaacgt tagacggctg tgtcgatctc cgtggtgaca 780

ccacaatagg ccacgtttat ccgttgttcc gctcattact acaccccttg tgccctgtgt 840

ttggtgttgt catgccttta attcagtatc tgaggccact ttaacggaat cacccctgag 900

aatcgcaatc 910

<210> 7

<211> 499

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 7

cgttccgttc actttcccgt cgcgaccaaa ttgacttctg ttgcctattt ttcaactctc 60

cgggactggc tcgtaagccg cacgcgcttg ttatgacagg gtcaagctgc ccccaacaag 120

ctttcaaggc acgccgttat gacgaattgg atgacgatta tgatcaaacc ccgggtcaat 180

cggccgcccg agagacccct tttcgacgca tttgaaaatt caaactcccc tagcctagcc 240

gacccgcatt cggggagtcc gcgaaaagtt cccggaacag cccatacggt ggcctaccgc 300

ctcacttgct cggtaatcac cgtataaagc caataaggtg acagagctgt tctttgtgac 360

tgatagttcg gttgatacaa gaaggaaaga aaaaaatatc acaatggtga gtagaatttg 420

cgagacgaca gtatggcaat tgattgtgac gctaacattt ccgtaggctc gaaagttctt 480

tgtcggagga aacttcaag 499

<210> 8

<211> 882

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 8

ttgctgccat accacagtcc acctggtaca tttctacgct gttccaaggg gaataaccga 60

gccgcatgat aaccgacccg atcgcaagct caacaaattg ccgtacgggc atacgcgacg 120

agaatttctc ggagacctgg gagtacggaa acgggtgtcg gatttcagtc cattggcaac 180

tcaaaccgac aattgacaag actcaattgc tggaagacaa tgccaaaggt ataacccacg 240

ttacccgcct cactggctac cgggtccgcg atacgaggtc cttgtcatgc accgtggtca 300

gggtccattg tacggtttga atttgcggtt gctcaggcgg agccgaacaa aagtcgtggc 360

acgagaataa tcgtgcgggg gtacacttcc ccatacctcg tgtatataag tatccatccc 420

tactctgttt ccatcacctc ttgctacggt gaatacacaa aaggtaagtc aattgttggg 480

acctctgtag tatgacgcat taggctaggc tgtttttttt tcaaacggtt tcaccggcat 540

caccgcaggg tcagccttag gggccaccgt tgcaaggtac tgtttagtgg gctcattgtg 600

tgacggttgc agggcaggaa ttgaccccta tctgaggcaa agacgtcatt ggccccgcaa 660

ccaacacaac cagcccctat tcacgccatt gtcctgatta gttttggcac aattgcaatt 720

ggctcctaat gcagagagaa ccctgcaaat gttgcttgat tggtcgcccc actacagata 780

gtgatgtagt ggtgaaccac ccaacattgg tgtgatatat ataaaagccc ttgtttgtct 840

attgtgtcat tctttcttga accaaaaaag actaattcca ga 882

<210> 9

<211> 741

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 9

ccaaacgcga atccgcccga tgtagaagct ccaaacagcg gtttggattc agaactagag 60

gtagtagtag tggcaggagt agtggatcca gccgaagcgc caaacagtcc ccccgaagga 120

ttgcccgccg gcgtcgtcga cccaaaactg aacccgccct gtttaggagt ggcagacccg 180

ctgttctgtc caaacattgt tgcactggtc aaacctgaag gttggtaaac agtagaaatg 240

tgttttcgca cgtgccgtcc acatgaacag agtcagatga cagtcagatg acatacggct 300

ataaaagcgt cataaatcac ctgactaccg catgactacc acgcgataat cacctgacta 360

caacccgaag attcatcacc tcatacccct cggcagatgc cgaaagtccg ggcaattatc 420

gtgataatca tgacgcccaa ttgggcacca attgcgagag caacaccaaa cgacacgcag 480

tgtcaccgca attgggcctc tggtgccact ggtgctggcg ctgacgttgc ctgtcggaca 540

aggaccaccg ccctccaatc tggccaccag cggcccacgt tgatacgttg gataagcctt 600

tgttgggccg ccagccgcgc acccgttgtg ttttcagaac tgtacctcag ggtggtgagg 660

ctgcaagggc caagcagtat atataggccc cttcggaacc atgggatgtg attagttgaa 720

cagacagcag ctgattgaat a 741

<210> 10

<211> 983

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 10

gaacacttca ggcacccaca cacataccaa ctcagacaca aacacaaaca cagacaaaca 60

caatcgtatg acctgacagc atagtgcatt atctatgctc ccttcccagc tatacacgtc 120

acaatctcag ctaatagacc taatagggtg acagttgcac tttccccctt gatgtctcat 180

ccagaccctc gtcatcccat ccgcccaatc cttcccagtg cattccaacg ccctctcaat 240

ggcaaggcca acctctgagc cattgaccct taaccagcca tagtttactc aactggccga 300

ccgccgtccc tttacccatt gccatacgca atattccaat ggcctagagg ggctgtacgg 360

cccattgtcc attgtccatt gttactgctg gtatttttat ctcaacgtcc ccaaaaccgt 420

tgtggacagc cgcgccgggt gtataggccg ccgatcgcag cctctccgga agcggcgcag 480

agcaaaacga gcccagtcgg gagtcaaatt ccgctccttg tatgaattag tccggcacaa 540

agagccccaa cggggttacc atgagatgcg gaacggcggc aatcagttca gaggctacag 600

tcgtccccta atcgccatcg gatactgccg attgtcgttg tactttacag ttttacaagc 660

atagcgataa gcccgaagcc aaccactcat caacgagctt aacctgttgg gtcgcgtaag 720

cgagcggggg gatgctgagt caggacaaca tttgggttgg tcagccgcgg cccgtagggt 780

agtcgtcgct gaggtcacgg ctgagtaagc ggcaccaatt aatccgtttg ttacatccgt 840

atgggtggtt gctttttttt acctgtacgg tttggaacaa caaaaatttg gcagggaccc 900

attttttttc cttttccctt ataagcacct cctaggtccc ttttagtagc attcgaattt 960

ttgacacaca caaaaaaggt acc 983

<210> 11

<211> 930

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 11

gggtgcggca tttagacagc aacaaagact gcgatcggcg atcagcacta ccgttccctg 60

taaatggtat caacaaagag cgttccaatt cgtcgcttcc agcgccggta cccgtaattt 120

tctacgtaaa agtgccccca gcactgctgc gcccatgtct aacctaatca taggctcagt 180

gggaaccacc agaccaccct ccgactgtgt ctgactgtct ctgactctct ctggccccag 240

aacggctacc gcggagaaag ggtaatcgga actttgttct gatgggttgc atgtttgttt 300

tgtcccaatg gggttagtgc ggcaggtacg gcaggtgaca ggatggcatc gtctcacaag 360

ggaacgcagt ggaagatgag ttttgggggg aattagacag agaaatgggc aatttggtgg 420

actagggagc agtccatgtg tatctagcag tctccattta gtggcctatg ttttttctta 480

tttctttttt gtcaaaaagg agcatttacg taaccatcta caaaaaaaag aattactaaa 540

atgacacaaa ccggggggag ccgggatgcc gctcacaggg tacgcagcgt ttgtgcaatt 600

caataaccac caacaatagg agaatatatt aacaaagcat acaacagatg tatccccctt 660

ggctttgtgc atcgcactgt acctttaatg tttgtgttga cagtcctcag acgcaacccg 720

attgtcccga gtctttgtga tcaaaccgcc tcattgtgca tctatttccc attcgggctt 780

gtttgcttat ttcccaaaag caatccccca gggtatataa aggcgcaacg acccgcaccg 840

acggggaact gataaactaa gtacagttgt tttcaccgtt accggattga ttaatctttt 900

ttttaactaa aaactactag tacaacaaac 930

<210> 12

<211> 602

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 12

cgaggcagta acctcccgtt gtcgtcagta attggggccg aagccgagag aattgacgac 60

ggggtgacta ccgaatggag gcaggaaacc tgttcgtttg tgttccatgt atacgagggc 120

aaaggtcgga ccatcgtaca cactgagaat gaggaaaaga taattgaatg ggaaaaggca 180

gatactttct gcgttcccag ctgggcaaag tttcggcaca ttgctgaggg aaacgctgac 240

ggcccagctt atttgtttag tttttcagac aagccattac tagatagctt ggccttttac 300

cgagcaaata gcgtatagca atacattcta tatttttttc gagttaaagg tactgataag 360

ataagggatc cgtcacccat tttttgactt gacaccacga ctgggagcgg agagccgcac 420

aacggttttg tatggggcac agcgaaaggg agggagggaa aaaatgaaaa aaatgtgagc 480

cgcattagcc ctaagcagtc acacgcggac ccacgattac tcctctccca tcgcagcacc 540

atacagagta aggacgattc aaactgtcaa agtgttcgac tgcccaactg aagactcaca 600

tc 602

<210> 13

<211> 877

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 13

tgcgtcggaa cgggatatgc attcccctag tttcgccgca gtgcagaatc aggcggtttc 60

tttgcaccac accacatacg gaggatgacg ggcattattg atgttgaata gtaacctgat 120

cgtgactagt atgacggaac ccaacagcaa cagccgaccg tttgtgagcg tttttgcggc 180

cggtcaggcg agtttttccg gcctgccaat ggtccttccg taccctttac cctgtacgct 240

gtacctgcca cggataggcc gtgctccacc tgctcactat ggtgggtgcg gggaaaacaa 300

caggcaggct caattgctct gcaaatgggt tgagggggtg attgatgtca ctggtacacc 360

aacaggggaa tgctcggcgt tgattttggg ccacctcttt tgtttgccag agcttgtctc 420

tattgtcaaa tttaacggtc tgcaactgtt gcccaaaatg ggacaatgat ccgatgcctg 480

catagacacc ctgcttgagg gtgcgatcgc cctaatacga ggcaaaccaa gttttccaat 540

tgaccttcaa ttgacgagcg gttgttgcga caggggactg gagtgctacc tgtttagagt 600

tcaaatccgt cacccagcat tgaaagtttt tccccgcatt ggatgattgc aatgccgcta 660

acccgctcat ccgccaaagt tcatagtccc accctgcctc gacttatcgg accacatggg 720

gctcccttat gcgcgcgcat atggcgcttg attgcttttt ggtcaacgtt tgggacaaat 780

ttcctttgtt aaggcggacc cgccagcaga tacgaaggta taaatagggc tcactttcac 840

catcttgtcc attcaattgc aagactcaaa agtaata 877

<210> 14

<211> 524

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 14

cccagcccga cttttaacct caatagctag ctacgcaaca gacagttaaa gctacgtact 60

caactatata ttccattgac aattgacaat tacaactgtt tcttctcctg catcgttctc 120

atcctcattg gcttatctcc tgttatcaat taattataat aatatagtag ttctgaacta 180

attacgtgat cgcacgcagt acggctgacg cgtattattg gaccaacaaa ccctaaaaat 240

tgtttcatcc aattgaacag ttcacgcaac cgtgattgtg ccaaaaaggc attgccggcc 300

tcaagtaggc gcccatgcta cgactactgc ggtctaggcg ctcccgtatc cctcaatcgt 360

ggcccttttc cggtctaccc gctgagtcag ccccgcccaa caaaaaaagc acaccacaag 420

ttcgacatgg tccaggggca cggctgcagg gttgcggtat aaatacagtc accatttcca 480

ccgcacctcc gtgctttgtt tttcaattgg caacctataa caca 524

<210> 15

<211> 668

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 15

caggtcgcat gtatgcacgg tttttccggc agcaatgctg ccgcctccct tgggagtaac 60

atgaacactc acaccaatgt gtggtccaaa aaactgctga cattagttgc aactccggat 120

ctttttgcca acggtttgcc ccggcaccgc ccatggggcc ccagtatacg gggttaactt 180

acagtcccac tggaagcctt tgttcaccga tggcaatgtc gcaccggacc gtgagccgta 240

catgagacgc acgcaaaact ttgtagccga ggcgaaggac aacaattggg ttgaatagag 300

ccaggggaga gctcagggtc cctcgggttt tgaattatcc ctgaacctct agcaaaaggt 360

tccaaactaa gggttgcgct taactgtacg ccttttgatt tccggcctgt gaattgttgc 420

cccattaggg actcaaaccc tctaccggca cctcccgacc gagggccgtc ctgtgccgaa 480

aaagcaatgt gagattccct tgtggcaggt tgggatttgt tataattttt ttttttatgg 540

ttggttgaat atataaagaa gcagaggccc ccaatagaat tgtcatcagt cactttttaa 600

cactgaacta acaatcatac attaccatta attgatagac attggagaag gaaaagtact 660

aactctaa 668

<210> 16

<211> 1366

<212> DNA

<213> 解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）

<400> 16

tggcagacag tgacgagtca tacattctcc gtataatatc gtgtatgtcc agacgatagt 60

cgtactcgta ctcgttactg taactactgt gcgagtactc gtgcatgtat cgtaggtatt 120

gtatgttcga gtacatacac atacgatacc aaacactgcc cactgttctg tcatgttaga 180

tcatggccaa tccacgtgac ttgcatgcag gtttggcatt gaatattcag cgtggctact 240

acaagtagta catactgtat caatacgatt gtacatacgg tactcaccct ttgctacagt 300

atgtacatac aagggcgcac atggcagaat accatgggag aattggcccg catggagttc 360

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tggcgagtga acaatggcgt gtatggagcc gtattcgtgc tggtgcttgt tgaatcagcc 480

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ctgtctattg ctcattctcc ccggcgctct ccgatctctt ccgacgaaaa tgagcacatt 720

tcacacgcat ctcaagtcag tttggaggca gtagggcgag ggtagaggtc tggataggga 780

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atcagttgtg ttctttttct ttgaacttca cgatatttcg tttattcagg tgagtaccca 900

cgaaacgcag ccaattggtt ccaattgagt cctagggagg tgacacaaac acacagcgac 960

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ggcgcccaat gccgtgagcg agagtgtcag caaagtagta tatggagcta tgcacaaatg 1080

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caggatctat caatgccacg gaccagtcac aacactgcca cgtccgcctc tgcgaccttc 1320

tacctcctct tcgactgcac atgttccctc attctaacta actcag 1366

<210> 17

<211> 1000

<212> DNA

<213> 解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）

<400> 17

gggagagcat ggagcagaaa cggttcgatg cttcaagttc gagtacaagt gcacagtgat 60

gttgcaacac agtcaccact gcctgagtca ctctggctgc ctatcaggat gtactctcac 120

acatctcacg ttcggctcac ctcttctttg tcaaggcata aagttcttag accattgtga 180

ctacgcagtt tgctccgaaa agatgcatga tcccacccac ttgcgcctgg aaccggtgga 240

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gggcagtggg gaatcaggtc atgtgtttgt ttctttgcca tattttgctt gtccaatgag 540

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gggtccagtc tcgtgccaaa cctccgatcc actcttcctg gtcatctcac tttatctggc 840

agtaactctg gtccccatac cttgctgtca gactctccgc atttaacctg cacaacccta 900

attcggcctc acacactctc caaatacaga taaaacacaa aggtttcgtt caccctatac 960

tccgaatcaa cgctacctac tgcatttctc taccgcaaca 1000

<210> 18

<211> 971

<212> DNA

<213> 解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）

<400> 18

gaggtacggc ctcgttcagg ctatacggaa aagttttctt ttgacgtttt tttgagtgga 60

tttccacgag ccatttaggt catggttgga tatcaggtca tggccttggt acgagaagca 120

tcttgtcgac tgattagctt ggactcatgt tatctgcctc ggtagcaact ccagtgcgaa 180

caagcacact gtactgctgc tcacatgcgg tttcaaatgc acggggagac gcccagtgcc 240

aatgtcgcca catttccagg tcgtcgagtt gaccttttcc gcacaattga gtccacattg 300

tctacttggt cctggtacta cactcgtacc ggtacctttt gatccgatgg ttacttttta 360

tgttctattt tacattagcg tggaaataga ccatgccatc tttggcaccc cggaaaaact 420

tgatccaata gagttgttgg gtggagctag tgactggcgg caattggaga gcttctagaa 480

gacgaaccag gagcccgata ggaactccgt tggcgtgagt cggcccccca gtagcaattc 540

gaatcacgtg acgtggagtt ttccctcgcc cgcgttcctg gattgtcccg gtgtgacgag 600

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gtacatgccc gagtctaatg attggctggt tcacggggac cgggagcgtc cagtgggccg 720

tatggcggtg gttcaaacac ctcagatcag ctcactatcg gctgagacaa tccttaactg 780

ttggtcggtt gccgtttttg cctgctccta acagctcgca ccgactctaa aaaacctata 840

cgacctggcc ggcgtaactt tgagtgtcgt caaactctga tatatatata gagagacgta 900

tcccaacagt tgatagtcga caaacgcaaa acagacggac actgaacccc ccgcgcttca 960

aaacaccgac a 971

<210> 19

<211> 1076

<212> DNA

<213> 解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）

<400> 19

gttggattta gttagaaatt agttgactgg aaaagtcacc tgggggttca tttctggtgt 60

tacaagaatg gaagaacatt gagatgtagt ttagtagatg gagaagactt gagttctaaa 120

caaaagagct gaaatcatat ccttcagtag tagtatagtc ctgttatcac agcatcaatt 180

acccccgtcc aagtaagttg attgggattt ttgtttacag atacagtaat atacttgact 240

atttctttac aggtgactca gaaagtgcat gttggaaatg agccacagac caagacaaga 300

tatgacaaaa ttgcactatt cgatgcagaa ttcgacggtg tttccattgg tgttatgaca 360

ttcatctgca ttcatacaaa aaagtcttgg tagtggtact tttgcgttat tacctccgat 420

atctacgcac cccccaaccc ccctgctaca gtaaagagtg tgagtctact gtacatgctt 480

actaaaccac ctactgtaca gcgaaacccc tcagcaaaat cacacaatca gctcattaca 540

acacacccaa tgacctcacc acaaattcta tacgcctttt gacgccatta ttacagtagc 600

ttgcaacgcc gttgtcttag gttccatttt tagtgctcta ttacctcact taacccgtat 660

aggcagatca ggccatggca ctaagtgtag agctagaggt tgatatcgcc acgagtgctc 720

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ccttcgtact cgtacataca acacaactac attcaaaatg gtgagtgatt gaggagacaa 1020

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<210> 20

<211> 997

<212> DNA

<213> 解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）

<400> 20

cccttccgta cctctctgcc ccttctggac aggtcaatga tagactcaga gcgacacaca 60

tgtctgacgt accatgttag accttgtatt gacctggacg aatgtgtgtg aggagtgagg 120

caggccaaga cgaaccacgg tctttatata tgcccacgga gtgacacggt ctgtgtcgtc 180

accgcagctc cactcaccac ccgcatcatg atcgtccaac cagaacccac tccccagttt 240

cgacccaaca ccattctcaa ctgtaagtat gagtaccaca gtgatactcg cccagtgccg 300

cactcgtact gtagccactc cactgcaaca tccgtatcgt attgcaccgc cccgattcac 360

ctgcttcctt caagccttca accacgtact gctccacctc ctaccgttga gcccactcgg 420

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cgttgcagag accaagactt ccgtcacgtg accgctgttt ggtcaattct aacgcagtta 600

ttttccgtct gattcgctga tacgagtact cgcttgctgt agatgactca gaccaagaca 660

agagaagggg aaataaaaaa aacttccaaa aaaaacttcc aaaaaaaaaa aatcaaaatt 720

tgacaaacct tttctgcctg ggaccaggaa ctttgtgagt ccattgaggg agttagccac 780

ccatcagcca cagccacagt ttggacaaga agtaaaagtg gatatattta tgttatggag 840

accatgtagt gttgtgggag ggaggggttt ttttgtttgt tttggctgag taatcaacag 900

caagtggcgt atatcgtata tctatcgtga ctcagactat tcaccgcttg tatggtgcta 960

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<210> 21

<211> 1691

<212> DNA

<213> 解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）

<400> 21

tgcaaccagt ctccgtggtg tgcagcatac attgttcccg cctctccttg tcttgttgga 60

aggccgatgt cgctgactgt atgtaccgtt ttttttgtac cgtagtacat gcagggcttg 120

gtattttcca actacagtac atacaggtct tagagtgctg attggagata gatatgaatg 180

gagtgtacga gtggaaacaa agcgggttag atatgtgtac ttgtacatct gtgatattgg 240

tagtattgac aagcggtagt catttcagtg catcgccgtg ccctttctac tatccccttg 300

cgccatcaat ctcccccttc atcaatccac ctctggcagc tcttctagaa gaccttttta 360

cagtctccca attttatcgt ctagtgacgg cagaccttgt aagcagatat gtatcatgag 420

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ccggcgcaca aagcctcgtg ctctgaacac gccccagttg atttgacagc tctcaacatt 540

cgtgtgaact tttttagcgg gaaaaagtaa catgacgttg accgtgcggg gctacatgta 600

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gacgcggaaa caggagcccg caaaagagga gaaaaacaac ggcgagactc gggggcggag 720

tgggtcacgt gactttcctt tttcccctca cctggcccgc tccgtccata tctctgtcgt 780

acaagacaat attgtcgcaa cgcaaaaggt ccataaatta ctgggtagac gcaactctat 840

ttgaaggcaa cctaccgttt gcttttagtg ttttggtttt gttaccatat ccaaaaaaaa 900

accatatatc caaaaattcc gctgcaccat ctcttcttct ctccatcaac tacccctgcg 960

gagaaattca caccacagtt acaatgattt acaccgccaa ttcgtcccct tccaccaacc 1020

tgcagtggct cagtaccctg aacacggatg acattcccac caagaactac cgaaagtcgt 1080

ccatcattgg tactatcggt gagtatactt atccacagac cagacgccga ttgcgcggtt 1140

tggtgcacaa ttcgacgagc ccacaagagg taggcgtcac aggataacgg acccgctcat 1200

gtgaacatgt ggcgagccca ttgtacccgt gtcgcctgcc cccaagtcga ttcgccgaat 1260

gcgctcaaac gctggctcgg tctccgcctc aggcctcagt aaaaacggca aactaacagc 1320

aggtcccaac acaaactccg ccgagatgat ctccaagctt cgacaaggtg agtaaccata 1380

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tgacaaacat gaaatgaaaa cgacgcaagt ggtaagggcg ctaatggtga cgttcatgac 1620

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actaaccaca g 1691

<210> 22

<211> 996

<212> DNA

<213> 解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）

<400> 22

tccagactac ttgccacaaa tgcagcgagc tgcacattga tgcgttcatg caagctacaa 60

gtacgagtaa tttgacgtat tgggcacttc aaggcagtct ttcgaaatgg ccaatctggg 120

agctcgctca ccctccgaga taactgttgg gcacaccagc aggtctcagc aacggttgaa 180

aatgggctct cagttcaact aatgatccaa gaaaatacaa gtacgatgtt gtgattggtc 240

ggactacttg tagacgacac tagccaaagc gaaaaggcac ccaccctatc tgaatgctga 300

gctgtgttca gccccaactc ggaatgctga actgttgtaa gtcgatagcc gatagatata 360

tatcgtagca aacacaagtt gttgactcaa acgcattgac aaggaagtac agatccgaga 420

aattgtgccg tgtcaactgc tcccaggcac ggtctcaatt ggggctatat ctctgtatag 480

agtaagccag gttggccccc cacccacgag aaatgcacca accagtcggc gagctcaaca 540

gccgtatggg agcctctcgt ttgatgtatg tgtgacagga ggtgtatatt ggggctactg 600

ggtgaaaata aaaacgcgag agagaatata ggggtttcag cgaaatccca gtggagagac 660

cgaatcatag tattataact atgacagtat cgtgcgctct cctctttcat cacttctctc 720

caatatgcgt accatctatc accactctct tgcttagcct ccctccctcc ctctctctct 780

gttagacccc cacacgctca acagtactca atatccgcgc agaaaaataa ggttggtggg 840

acatttctcc ggtgtgagcg attagtgggt tgtggtggtg cccatagcag acctaaaatt 900

gactctcctc acttgacaac acacagatag aacctgcaac ttcatccaag tggcgctttt 960

ctcaatccag tccgtgtgaa aacaagacaa ttgacc 996

<210> 23

<211> 985

<212> DNA

<213> 解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）

<400> 23

gaccaaccta aattagtccg ggtggacgtg tcactagaac gttgtaatac caaggtagtt 60

gcgcttgttt tgaccaaaaa tgtgtgacaa aacattgcca gtgtatccag tctgggaatt 120

gagtcgttct ataaccgtca tttccactcc acttccgcgc aacgcgctgc tgagcactcg 180

gaaaattagc tcgaaaagtt tttccgggtt atgtgacccg ccagcaggtt aggctctatt 240

ctgttgggaa ataactctca accgcccctc cgagctaaat ctctcactac aagactcttc 300

atcgacaaac gatatctgag atctttttcg gtcccacagc aacaagccac aaacatgtct 360

gccatcaagc aattgaaccg tctggccgcc accgccaaga cctctgttct caagcccgcc 420

tccaagcaga ttctgctgcc cactgctggc cagcaggctg ccatccgaat gatgggccag 480

acccgagctg cctcaaccga aggcggcgcc actaacgtga gtattttttg tgtgaacgac 540

acgatatata cacgacggcc gtgcgcttgc ggcttcgcga tgcgccctga atggggcaac 600

tcgagcgttg tgtaacgggt gttcatcaac agcaaacagt gcttttcgga cttaagacat 660

ggcagaagaa gcaaacacgg ttatagcgag agagatcaca atggagtgac gagctttcag 720

tgatatttgc caccagtcaa attttcagca actcctgaaa cgcacccatt ttatcatcat 780

tgtgacgcgg acattcagcc tcatgctgta actgcactcc gtgtctggag ctgccggagt 840

tatcaaagct gtaggtgcca attgtgaaat agcgattcgg cgattcagcc gttgattgcg 900

ttcctgctat gtcgcaattg tacaatgctc tgtacacttc caacaacatc aacatgacaa 960

cacccaaaac aacgtactaa cctag 985

<210> 24

<211> 999

<212> DNA

<213> 解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）

<400> 24

ggtgagtcgt gtcgctaaaa ggtttgcaat gggctccccc aaaggctttt ggtggtttgt 60

agggcggtga aaaatttgtc cattttaggg ccaagattta gacgtgtcga gatggggagg 120

ttttggaaca cgccgaatcg catcgacacg actcccctcc gcctgaacca caacctcgcc 180

ggtcacatga catggctcct gcacttcgga tacggaagcc cggatccttt atgctctacc 240

ccggagttgt acctgtccaa tagaacaaga gtcaattggc cttactcgca tgcaactcaa 300

acttgggccg gggttgagag gtacagttga caacgtgaaa ataagagggg ggggaggtta 360

aggcctcagg ggcgaatttg agagcactta tatagacaaa tccgcaccga agtgacaaca 420

tggacaatgt gacacgtaga tacacgccgg atccagctgt ccacacacat ttatcccgaa 480

aaatagcccg catcacatgc acgtctcgta aaaaaaaaag agctgcgggc caaaggacca 540

ataagtgccg aggaatgtta agccaaaaga acaacgacga tcgccagaca ggtttagtgg 600

gagcagcagc agcagaggcc gtgcaacggc aggagagaga ggtctggcga aaaggaggag 660

acggggtgtt aattgatttg cggattttcc gcccagccac aaaaatggcc tattttggcg 720

ggtttaacgg cgtcccctcc aattaatccg aaccccgttt accacgcagc ctacactatg 780

tactgttgac aacaccccat gacggtagtc tccggagccg agccggactt gtgtttaaaa 840

tcggcacgat tttgttcaga ggttagggtt caccctggct aatagattgg cgctgattgg 900

cccgaccaaa cccaaaatgg gcactctgca gtgtttataa aacctctccg aggcccacga 960

ttcaactttc tcctttccgc tctaacacca catatcaca 999

<210> 25

<211> 999

<212> DNA

<213> 解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）

<400> 25

atggtgcgtg gaggctttgg catcctttct acttgtagtg gctatagtac ttgcagtcca 60

agcaaacatg agtatgtgct tgtatgtact gaaacccgtc tacggtaata ttttagagtg 120

tggaactatg ggatgagtgc tcattcgata ctatgttgtc acccgatttg ccgtttgcga 180

ggtaagacac attcggtggt tcaggcggct acttgtatgt agcatccacg ttcatgtttt 240

gtggatcaga ttaatggtat ggatatgcac ggggcgtttc cccggtaacg tgtaggcagt 300

ccagtgcaac ccagacagct gagctctcta tagccgtgcg tgtgcggtca tatcacgcta 360

cacttagcta cagaataaag ctcggtagcg ccaacagcgt tgacaaatag ctcaagggcg 420

tggagcacag ggtttaggag gttttaatgg gcgagaaggc gcgtagatgt agtcttcctc 480

ggtcccatcg gtaatcacgt gtgtgccgat ttgcaagacg aaaagccacg agaataaacc 540

gggagagggg atggaagtcc ccgaacagca accagccctt gccctcgtgg acataacctt 600

tcacttgcca gaactctaag cgtcaccacg gtatacaagc gcacgtagaa gattgtggaa 660

gtcgtgttgg agactgttga tttgggcggt ggaggggggt atttgagagc aagtttgaga 720

tttgtgccat tgagggggag gttattgtgg ccatgcagtc ggatttgccg tcacgggacc 780

gcaacatgct tttcattgca gtccttcaac tatccatctc acctccccca atggctttta 840

actttcgaat gacgaaagca cccccctttg tacagatgac tatttgggac caatccaata 900

gcgcaattgg gtttgcatca tgtataaaag gagcaatccc ccactagtta taaagtcaca 960

agtatctcag tatacccgtc taaccacaca tttatcacc 999

<210> 26

<211> 999

<212> DNA

<213> 解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）

<400> 26

tgaccaacct tgtttggtag atggggggga agcgaaccgg caatattcca caatgtgctg 60

gcatttactt gtgctggcaa aagaggcaca aagaatactt gtagtcggag ccactcactg 120

tcccacaaat agctccccgc tgtcaatctc tcctgcaccg cctgctcaca tggatgctaa 180

gccgcactag gtcgcatata tggctctgca ctaaaaatta ggggtcaacc acagtgcggt 240

atttttagat tcgcaccaag cagcgagtaa gcaaaaatac gcctaccggg gtccgatatt 300

attcaggagg tgccattaga ggagggcaga tgagagtcgg atatcggaga tattaccgag 360

gctataatta ccccatccac gcctttcacc cctcccactc tctccctcac cgcacaccaa 420

cccaccactt tcaaaatata ccgcaacatt gacataatct ccggtacagt ggttagcacc 480

gagaggaccc caaaaagctt gggggagata gaggtaggct tttttttgtc agtcaaatcg 540

tatatgccaa tacacacaca cacacacaca cacacacaca gtttcgtaca taacagtata 600

ttggaaggga gtgtgcttgg caaagacagg agaagacggt gctgttagag ggcaatccag 660

acgggctaga gctctgtaac tttcggatcg atttcaattc ctctagaata ccaaatacca 720

gtggttaagc ggctcattta ccagtcctaa taccccctcc accagccacc ttcccctatt 780

cctcggcagt gcttttttac ctttgagatg tggccttgtc tccgttactt cccaaccgtg 840

agtgctgtgt ggtgtgctgg acagtgcgac ataactaacc ctaacccaga cgagccagcg 900

caccccaatt ttgtgtttgc caactcctac ttttctcctc tcctccatcg gtatttcatc 960

gacaaatctc tttgctacca acaaccacac aaattaaaa 999

<210> 27

<211> 452

<212> DNA

<213> 解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）

<400> 27

tgtgtgtttg gtcgaggttt ttttctgttc agtacagacc ttgtgtggtg aggaacagca 60

atagcaaggg tggcttttga ttgggtgcag gtgcccttac cctgttggga ggtttgtcta 120

ggtgcctggg atggaggaca atgttttgtc actgtcaaga cgggatattg tggggatttg 180

agaaatatat ttgatcagcc ggtctcgaag attatattcg cgctttcgcc tttgaaattg 240

ctccttttgt tgccgtttcg aactgtagtc tcgtgctact gagtctcatg ttaatttttg 300

tttcggcctc gacttaatta actctaacca atgttatttt cgtgcattaa cgaaactcga 360

acgcacgatc agtcacactc tccaccatca aatatcacgt acagactggt accccataca 420

tactaccatc tgaagacgac acaccaccca tc 452

<210> 28

<211> 1000

<212> DNA

<213> 解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）

<400> 28

ctcgaataag gcactattta ggaccagacc acaccccgcg gatgtcaagc cgaaccttgt 60

tgcataaaga taatactagt caagtggggt gtcgacccga tgagagaata aaccgattgc 120

aacggttttt atttcattcg cttcttccag cagacactct tggttttctt cctcacagct 180

ttccgccatt atcagctgcg tgtatcgtga gtatattggg agtgagagat gccctcacga 240

taagacaaca gctatagtac aaatgttaac acagatgtca gatcaagcgc cgccaaactc 300

gcccggaaca cgggtaccag gggagatcgg tccccaacaa tcttcccagc aagttcccat 360

ggcttatacc atcccaggaa caacaagtac agctctagat gaggagatct cggagtaccg 420

tgacaccaac cgaacgacca agacccctgg gatagacgag ctgacaccca cagcgtttta 480

tgacaatcgt ggtgttaggc atgagcatag gggaatatct gaagagatga agaaggagct 540

caagagacag gagagacgcc agcacgagat gttgcaacag aagcagcttg agctgagaca 600

acaggaagcc ctacaccaac accaaatgct tatcattgag cagcagaagc aagatcagat 660

tattcaacag cagaaacagc tgcaacaact gcagcggcag caacaggaag aggtggtcag 720

acaacagcag ctgcagcaac agcagcaact gtaccagtac tatcagcaac agcaacagca 780

gcaacagcag tatgccgcac acatgttaca attcgagcaa caaaggcggg agcagatgcg 840

acaacttcag ttggcccagt accaggcatc tcaggctgtt cagacacatc atcaagatgt 900

ttctcatcta accccgtctg ttcccgtacc tgcagccgta acacagcctc ctgcctccgt 960

agcacgtacg gcatcagtct cagacatgtt ggtacctcct 1000

<210> 29

<211> 1000

<212> DNA

<213> 解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）

<400> 29

gtagatacac ggtaagtaca tactatatct atagatgata cattttcttt ttataccgac 60

cgcccaagcc acacggcacc ttaattaaac ggccactttg acatgagacc gagctacaaa 120

ccagtcgact acaagtactg tcaaagagtc gaaatttgtg gagtcgggag tttataatgt 180

ccatccaaga acaccctcat ttcctgctcg tcttgtgttt cagtagctaa tttcacatgt 240

aaaacggcgg tcttgatcca ccctgtctta actccggtcg gactttgctg ccataacgtt 300

cggacacgca actctttccc aaatccaact tacagcatct tacctaatca cacctgccct 360

cacattaggc accaacctaa acccaagctc aaccgtcgtc gactcagccc cgaagaagca 420

ggtactcgtg caaatatata acgaacagtt taacggcggc ccggaaaaag attcggtcgt 480

cacgtgacct acctccaccc taagccggtc ccttcacccc ccacttttct cactgttctc 540

acttttctca cccccactgt ggctctatca aactctacga tgacacacaa tggcagaaaa 600

gtgcctctgc atacacgatc caataaaacg gtcagtacac gcaacttagt gagggggagg 660

ggttacatcc agcaggtggt gctaatgtta cggcagcttt tcagtagtgt gctcgatatt 720

tcagcccccg ttggaccgcg aaaagcactc tacactcgtc ttctagtatg ttcggtcgtg 780

tcccacgcac ttagttgcga taagcgctaa tcatgctttt ctttgtctgt gcggtggcga 840

ttcggaacat aatcactgta agcggcgcat gttgaacctt attttgcctt tgagcccaca 900

catggataac acctcatata taacctgtcc cctccgctaa ctctcttgct tctctacaac 960

ataacctgtt gaaccacaaa acacctaatc aacaaacaac 1000

<210> 30

<211> 989

<212> DNA

<213> 解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）

<400> 30

gtcttagtgg gactggaagg agtatcagtc tcactggtta actgtactgg ctagaccccg 60

gaaagggatg gctgtgtgct tgtggttcat tgggtgcggt gtggtgtcta caactcgtgt 120

tgccagacct ggacaagggc atttgtgaat gtgacggtac tcgtaggttc accagagatg 180

gtgtcgaacg acacatgatg agagtggaag ctccttggat gccatcgaca tcacgtgaac 240

ctgtctgatc gtccatcgct ggtttgtagg acgcgtttga aggttccgac ttgacgttgt 300

tggtatgatg cacgagtaca ggcgattgta aggtggtcga gcgtgtttta atgtacaggt 360

ggaagtaatt gtacttgtat cagggcctct tgcagctcgt cttgtgttgt tcgcatcaaa 420

tgacactcgt cttgtacagt acagtctcca tgacttgctc cagattatgt atccaaaaca 480

ggggttgtat acttgcagag tacaagcaca ggcatacgta tgtacaagcc tctttatatc 540

tttaagagta caagtaaacg tactcgcact tgtacttgca ccggcgagat gtatggtcgc 600

agaaaacctg tcggcagccc tccgtcctcc acatacgaac atgactgact tgcatctttc 660

acctgttcag caagtttcat actgcactag tccaaatagg taaatcacct tggcctccta 720

tttgggacag ggtaagggcg tccagaagag gacaccagtg aaattacata atacaagctg 780

cagtacttgt ccgatacgac ctgtctcgaa acagccgttt ggagcagcgc atttcttgcc 840

caatcaattc cctgactact ctcactcttc cccaacacgg tgctttttcc ccattctggt 900

cacatgactg acacgctcca cctaacctta tctccaaaga ccacgacata cgcatctctc 960

cttcagagga gtttcggaag tctagccca 989

<210> 31

<211> 940

<212> DNA

<213> 解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）

<400> 31

aaggcgagcg aacggctttg tccagtggtc aattttcaag tcaatttttg gctaaaaaaa 60

agaccaaatt gcagccatcc aaactggtca ctactcgacc aatatggccg atatttcaat 120

ccacatcgaa ccagtaaatc agaatgaacc accagatcaa tgaagaacaa caaaatcaaa 180

cgaaaaactc cctcgggccc gcatgctccc gccaaatcga caaaatctct tctcccatag 240

gcgacattga ccccatgcaa tatcggtgac atttgtaaat aagatctgaa ctttaaatta 300

tcatactttg gtggtgtatg gtgcgtggtc cacgtggggt aggggaataa aaaaattgga 360

acaaattggg aaatatataa aaattgaaaa ataaatggaa aataaaaaaa acgtggatct 420

ttcgatgaat aaaaatcagg ctaatcccag acaaagatcg ggagtctttc tccctgagcc 480

aacgtcatcc tgactaatga aaacatcaaa taaaataaat ctgacaccta aactaaccaa 540

ctttatttgg gccaatgaga cggctgaaag tccgcacgtt gtggggggaa atggacaaag 600

tttattttaa acgtgaaaag ttggggggaa aaaacaaaaa aatacgaaaa tgtagccctg 660

atcggtcaca gcccaattat cccctcgaaa aaaatcccct ccaaatcccc atttttctac 720

cgccattttc gtccatactt ttcgataacc ctaaaaaagg tcatctatca gtctaaatct 780

tgtattaacc tcgaagacta accgtaactt agactaatgc taacgttaaa atacaactct 840

aaatattaac cgacatcaaa ccccgaaaag aatatataat cgtgaggcca tcctgaggat 900

tttgtctcca tcgaattcga ccaccacaaa ctcctctaca 940

<210> 32

<211> 709

<212> DNA

<213> 解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）

<400> 32

tggcagacag tgacgagtca tacattctcc gtataatatc gtgtatgtcc agacgatagt 60

cgtactcgta ctcgttactg taactactgt gcgagtactc gtgcatgtat cgtaggtatt 120

gtatgttcga gtacatacac atacgatacc aaacactgcc cactgttctg tcatgttaga 180

tcatggccaa tccacgtgac ttgcatgcag gtttggcatt gaatattcag cgtggctact 240

acaagtagta catactgtat caatacgatt gtacatacgg tactcaccct ttgctacagt 300

atgtacatac aagggcgcac atggcagaat accatgggag aattggcccg catggagttc 360

agatgagccc taacaacgcc cctgttcggc ttcagaagca attggctttt ggaaattatt 420

tggcgagtga acaatggcgt gtatggagcc gtattcgtgc tggtgcttgt tgaatcagcc 480

cattgcgcga aattgttggc tctcacaact caacggtctc ttttaccctg tcgtgacgag 540

acgctactgt agcgcttgtc ggtcggacca caccaaaact gggcctgtat tgcattgtac 600

tcagatgtaa gcaccaagag ctgggatcca cgtgatcgcc cccacacaag acgcgtccat 660

ctgtctattg ctcattctcc ccggcgctct ccgatctctt ccgacgaaa 709

<210> 33

<211> 997

<212> DNA

<213> 解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）

<400> 33

gttggattta gttagaaatt agttgactgg aaaagtcacc tgggggttca tttctggtgt 60

tacaagaatg gaagaacatt gagatgtagt ttagtagatg gagaagactt gagttctaaa 120

caaaagagct gaaatcatat ccttcagtag tagtatagtc ctgttatcac agcatcaatt 180

acccccgtcc aagtaagttg attgggattt ttgtttacag atacagtaat atacttgact 240

atttctttac aggtgactca gaaagtgcat gttggaaatg agccacagac caagacaaga 300

tatgacaaaa ttgcactatt cgatgcagaa ttcgacggtg tttccattgg tgttatgaca 360

ttcatctgca ttcatacaaa aaagtcttgg tagtggtact tttgcgttat tacctccgat 420

atctacgcac cccccaaccc ccctgctaca gtaaagagtg tgagtctact gtacatgctt 480

actaaaccac ctactgtaca gcgaaacccc tcagcaaaat cacacaatca gctcattaca 540

acacacccaa tgacctcacc acaaattcta tacgcctttt gacgccatta ttacagtagc 600

ttgcaacgcc gttgtcttag gttccatttt tagtgctcta ttacctcact taacccgtat 660

aggcagatca ggccatggca ctaagtgtag agctagaggt tgatatcgcc acgagtgctc 720

catcagggct agggtggggt tagaaataca gtccgtgcgc actcaaaagg cgtccgggtt 780

agggcatccg ataatatcgc ctggactcgg cgccatattc tcgacttctg ggcgcgttgt 840

attcatctcc tccgcttccc aacacttcca cccgtttctc catcccaacc aatagaatag 900

ggtaacctta ttcgggacac tttcgtcata catagtcaga tatacaagca atgtcactct 960

ccttcgtact cgtacataca acacaactac attcaaa 997

<210> 34

<211> 983

<212> DNA

<213> 解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）

<400> 34

tgcaaccagt ctccgtggtg tgcagcatac attgttcccg cctctccttg tcttgttgga 60

aggccgatgt cgctgactgt atgtaccgtt ttttttgtac cgtagtacat gcagggcttg 120

gtattttcca actacagtac atacaggtct tagagtgctg attggagata gatatgaatg 180

gagtgtacga gtggaaacaa agcgggttag atatgtgtac ttgtacatct gtgatattgg 240

tagtattgac aagcggtagt catttcagtg catcgccgtg ccctttctac tatccccttg 300

cgccatcaat ctcccccttc atcaatccac ctctggcagc tcttctagaa gaccttttta 360

cagtctccca attttatcgt ctagtgacgg cagaccttgt aagcagatat gtatcatgag 420

tcacgatagc tggacagacc aatggcatgc gggcaaataa ctcccacaga cgctctccct 480

ccggcgcaca aagcctcgtg ctctgaacac gccccagttg atttgacagc tctcaacatt 540

cgtgtgaact tttttagcgg gaaaaagtaa catgacgttg accgtgcggg gctacatgta 600

gcagctgggt gtgctaacta cggatacatg cctacaaccc ccacaagtca agaccattgc 660

gacgcggaaa caggagcccg caaaagagga gaaaaacaac ggcgagactc gggggcggag 720

tgggtcacgt gactttcctt tttcccctca cctggcccgc tccgtccata tctctgtcgt 780

acaagacaat attgtcgcaa cgcaaaaggt ccataaatta ctgggtagac gcaactctat 840

ttgaaggcaa cctaccgttt gcttttagtg ttttggtttt gttaccatat ccaaaaaaaa 900

accatatatc caaaaattcc gctgcaccat ctcttcttct ctccatcaac tacccctgcg 960

gagaaattca caccacagtt aca 983

<210> 35

<211> 1000

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 35

tgcacctcca ggctcagggt ccccctgtcc actgtcctat ccaccatcca ctgttccacc 60

ccctcttaga cctcagccag acgccgcagc gggcaagcag cccgggttta cagagcgctg 120

cgggcatcgg catgatgcga cagggcctcg atgagcgggg atactggacc agaccacgga 180

ataaatcctt cggaaaagtg cgctttttga aattggccga cccggcgaat caggccaggt 240

caaatcccgc ccccgcttcc ccacaattga ccgatcctga acatgcacaa tctatgacaa 300

tggtccgcat caaattcgct tgcaatagca cttagcggtc gaggtgtcta accctgtcga 360

ggtttgtgac cgctaacttc ttgcaagagc gaaggatgca aggcgctcct tcctgaatag 420

gcaattgagc cccatgtcgt gaggcttaaa gcgtgcttct tgccgaatcc ggaaacaacg 480

ccgccgatga tatgacaaaa gccaacaaaa tacccgctgg agcgataacg taaggggttg 540

gggtatcaac ggacgcggca aacaagcctg tgaacccttt gcgagccatg gtttggcctt 600

agtttttgtc tcccgctatg gttacattgg ctctcgcatg ctatggtacc tcatctcatc 660

gaaaattttt caagaggcgc ataatggctg tctcgggcaa cggtttgcac acggctacgt 720

cggttctcgg cctatgattg gctctggctt tatctctatc cgcccacaca tacttcaaaa 780

ggaaattgag actatgcaaa aagcaattct gggtgtcgga gtgctgtatg acgattccat 840

aagattttgc cgggtcgtat cgaataaaaa cccctctttt ccccccattg tcaccagatt 900

cctgttgtgt ttttttaata atctcctttt caacccgctt gttggtggtt tgaaaatata 960

cccatttttt ctaatttaat ttgctctttg ttagcgtaaa 1000

<210> 36

<211> 1000

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 36

caacttgtgt agtagacaaa gtgtaaaaga aagcaatttg cgactttagc gctgctctgg 60

cacgtgtata cccggtcaga gtgatgcaat tgagtgagcc tggcatggag attatgaccg 120

ggcccatcgg attccgagtt ttttgatccc ggctccaact tcattgctca tcgcacccta 180

ctgtattgaa ctgacgacca acagggccag tttctccaac caaaacagtg cagtctaatt 240

agtttgtaat tggcaacttt agccttagtc tctctgaaga gttctacccc aattccccct 300

ggaccacccc agaacccatg ttgaccagga tagcgccgca tgcaggggcc acgtgaagca 360

gcgcgataag attgataatt gataatgttg cggtgcatgg ccagaggcag agcgacggtg 420

ctgaacacac aactggcgca acattggtgt atatgactgc cggggcactg tatccgtgtt 480

gacacggtgt gctcaccgtt gctagcaaag ttagggttta atcggctatt aatggtaggt 540

gttgagttgg ttgagttggg atgagcctca ggatcgccgc acagggctat acgctcacac 600

gagcaacgcg acaaatgacg taaccttgag ggttaatatg agctctgtgg acgctcgttc 660

ttgttgcaaa cgttctgaga gaacactcac ggtgtagcga tcgaagcgcg cgtgggttgt 720

tatacctgtg tccagcgctc ctggcagtgc acttttgata tcagtgtgtt ccgtgccccc 780

gcttcttatc tgagccgcac cgcttatccc gacacaagaa aactataaag aaggctggac 840

ccccagattg ctcatcatct tgccacagga actctgagat acctgtggat atacagcttt 900

ctcaggtcta gactgcgcgt tttctgtttt attttccctt tttagatcga ctggattgat 960

tcctagttga tttcattttt attccgtttg tctgaacaca 1000

<210> 37

<211> 1000

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 37

agctaggtca agcgacgcct gttagcgata acgaccttga aatatctacg cgtgggccgt 60

gtgtcgtaac tgtacagtga cgttacgacc agacaatagt ggtggagggg tagccagtgg 120

gaatggagct tgagcgagag aaaaatgaca tcaccgaaaa aaaggcggtg agggttttgt 180

tactggggag acgcgcgtgc gccccgtggt gtgcggcgtg gggctcggca gtgccgaccc 240

atttcaccca tggaatcgtc tagacaggca aaatggcgtg agcgcctgcc ggagatacta 300

aagtttgcag cgaaagaagg agaacaaacg cacgaaccaa atcagagcca aattggccag 360

gtggcaaagc caacgggcaa gtccacgggc aattgcattg cccttgcccc tctttggccg 420

atactcggac atggtcggga tagaattgtg aagaacgata agctttagtt aaaactgagt 480

cattccctca tcggctaacg tgatggaggc acgtgattct ccgggggttt ttcgctcggt 540

caggctcggc cgaccgtcgg acggcacggc gcggtaattg tccggccccc ttgtgagtgt 600

cacctaccct gcagggccca ggcaattagt caatcccgag gacagatgga cgagaggtta 660

ggcggtattt tgagaggatg ttggccattg tgtagaatat aaaggagact aaaaaattgc 720

gagaattttt ccgagtagaa ccatgtaact tttgtctgtc caaatcggta catttccgtg 780

tctttgtttg gaaaagctgt ctctccttcc ctccctaagc ccgaatctgg ggtgcagacg 840

ataaccccag accacgaggc tgcctcggcc ctcggatcat tgacagaaca agaatgaatc 900

acctgaaaat ttggtctata taaagggccc catcccctct ccatgttcga tcattaatca 960

accaattggt ttttaagtta ttgacattat aaaaacaaaa 1000

<210> 38

<211> 1000

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 38

gccgcgggtg tattttcaat ccaataattc acagttctga gcgttgtgaa tagcatctcc 60

cgataacttc aggcatcatg ccacagatca gcaacccgag tacacacacg tgaccagtag 120

gcacgtgaca tccccccatt tcggcatttg cgatcgttca tgtgccagca tatgaccaca 180

gagcttgtga tagtttagct ccatcaggtg attttattag aattatcaac ctctggagtg 240

gtcagagatg gcaccagggg cacccgaagt gtagtggtgc gtgcagacat ccaatgtccg 300

aagggcttat tgacccttct gccatagtgt gcaagtagag ccgacgagat cggtccagca 360

ccgctttgtc aattaatttt ttcccttgta aaaaggctgc ttgccattgt ctcgacaaat 420

cgactgaaaa gtggcccgat ttggatctcg acaatcattt gcaatcattt ggagaggcca 480

cagttgtctg cggtggcatt gtcatgtccc cctgttgcta tgtgtgccag tgactcgctc 540

cgcctgcaat ttagttcccc attcataccc cgtaaccccg gggcgtttcc ccagatttcc 600

tcggcaccgc tcaccgaagc ccttaacccc ccgagtgccg aaaagtcggt attctcggaa 660

ggcatataga gaattatgaa ataaaaagag gacaataaag cacgccggat acagagcgag 720

cggtagccaa ccctctaccg tcttgtccca ttctctagca tcatttctcc gtccgtacct 780

tcacccaatc ctacctcccg gacttgtcct acgcgggtcc catcgccgag cgcagccgca 840

cactttcacg agccgaggtc cacccccctt cttcttcttt gggaccacac acttccccca 900

cattgcacat ataaagctcc cgaatcagcc atcatacgac ttcctcacaa agcctttggc 960

cggttctatt ttatcacaaa accttcgata atataacaca 1000

<210> 39

<211> 1000

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 39

attgggtgtg gacaaagctg ctagccccga gcccgaggag gatgaacagg aggattctga 60

caagcgtgag tatcccatga tggagaccct ccctcaccct cgattcaatg ctgctacatg 120

cgtagttgat gacactctat ttatctttgg aggcacctat gaggatggcg agcgggagat 180

ttatctcaat tccatgtatg cagttgatct aggccgtctg gatggtgtta gggtgttctg 240

ggaggatcta cgggagctgg agcaggccgg ctcagacgat gaagacgatg acgacgatga 300

agatgatgac gaagaggacg atgatggtga agatggagag gatcacgacg aggatcagga 360

tcaagtcgaa gccgaggacg aaaaggacaa tcaagaagag gaggaggaag ctgaaaagag 420

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tcggtatcag gctatgaaac tatcaatctg tcaaaatctg tcaacatatc agctactaat 780

cctacgaagc ctacactacc aatcctaatc ctatcaatcc tatcagccta tcaagctatc 840

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tatcaaccta tcaatcctat caacctgtca acctaccaac ccaccagcct ataaaccctg 960

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<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 40

taagtcttgt atctgttacg acgctcccag tctccgccct tgtcgatgag cagtttgacc 60

gcctccagct cctgggccac aaacaccttg tcgtcgaaaa agaagccaat acggatgatg 120

gttagcgaaa tgtcaatctt gactccggac gagcccgtga gctcaaacgc ctttcgcagc 180

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ttcagcacaa agatgcattg cgccagatta taatcgggca ctcggtcaat tggagtcgcg 540

gctccttcgt tcacacccat cctacctgtc tatttactcc agcagtgtgt gttagtggca 600

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caactgtagt tttgttgtaa ttctgccaat tgcacaacaa attcacagaa aaattcacaa 780

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ctctctgtca ctttcacttt tttcactagc agcttgtaca 1000

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<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 41

gtctgagttt ggtcagattt tcaaaaaccc atcaaaggag ttcttccaga aggcagagct 60

tcgagctgcc agagcgacat ggcccaagat gtcccacatt cacaaccgtg tggccatcga 120

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<211> 1000

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 42

tcagaatgtt atcgacgagg ccaacaaggc cacccaatct taatgatcta cgattggact 60

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<211> 1000

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 43

ggagaagatg tgggatatta ttggtcttgt aggagcccga ttagggtatg attgggaccg 60

acaaggaagg attgtctaga ctagtctagc ctagtccaga ctaggtctgt accattacga 120

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<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 44

tatattgaat tgatacctaa tatacaatag attgtccctg ggacattaca cgtagacgtt 60

gaattgtcaa ctacagtatc gtcaacagga agaacattct gtatgcccga attgccatta 120

ccaatcctgg tattcaattc cctgtcccct gctgtctctt gctgtctctg tggtctctat 180

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<211> 1000

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 45

tcgcaggccg ctaatagaac agtgggctca tttgggcggc tcaagccgca ttaccactgt 60

ggcctcacgg ggcttacggg gctcctgcgg ctcctgcggc gcacaaccgt gtatatattt 120

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attgctaaac ttgctaaatt gctaaacttc tgaacgctaa aactgctaaa ttgcttactt 240

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<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 46

aaaaggggag acgtcagcca tcctgttagt gtcagtttgc cctacatttg cgcgtccctg 60

tgtcctttta tattcctctc tcctgaagcc gaaaaaagta attgcaaact accatgcggt 120

ggggacatga tggcagataa tcaccgatga tgattatcgc acaccgtgat tagcggctca 180

tgtcccatga tgtggcgcta ccctgccgga gcgccgaaaa acctaccgca gcagctagtt 240

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ggggccagct gggggccatt gaggtgtcat tgaagtgtca ttggcttgcc atagaatcta 360

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<211> 1000

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 47

agcaatccaa acagtcacgt ggccgttgtc aagtgaggac tgcccgtgag tgcccccgcc 60

atggatgtgt cattatcacg tgactctgac aaccaagcca attgcccccg tgtctcacac 120

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<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 48

ctaattcaag cccactgttg ctaatctctc gacaaagcgt tgagaaactg tcagaggatg 60

ctcaaacggt tgtggatcca tcggtattca ggggtaacat tgtcatctct ggtacaccag 120

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<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 49

acggcggtat ccgcagcttt gttgacgaca aggctctgcg atggttggca gtcaactttg 60

cataccacga ccttctggcg tcttcggcgt gctcccgcaa cactcacttt ccatccgcag 120

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tcagcaccaa atcccctttc gagcttaacc gacgacagca 1000

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<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 50

aatgattgat acaccttgtt acgaccttgc tgcgtggtgg gcaagtaaac tggaacttga 60

tatatgcgtg ccgtttatct gtcataagcc aatcgtcaat cacacaatca aatcaaaaac 120

tactgctagc atggcgaacc taaatgggca tcaatggaaa ttatacaaac agtacgagat 180

gaaaacagtc agctatgtca tggtgtgata gttaccaggt tcattttctg atttcctttg 240

ccagttctgt gcgcctgcct cattggattt gactcttttt ggcatcatgc tcacctctgg 300

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taccagggac ccaatcatat cgggacccta cgcaacgtga atccggggta ggatatcgag 540

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ataatctgca gtcgcaacca tcacagacct ccgtgaagtg atatagaatc gctccagaaa 660

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attcaccaag aatccaataa aaaaaagaag tcactgaaaa 1000

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<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 51

agctcgttcc accccctttc cccctgtctc caccctaacc ctccggtcat actagcacca 60

ctaccgaatg agagtagcac catgtatcat aataaccgcg ccagggcgac acaacattga 120

ccgaacaata tcaatatcga ggtacaataa ctgcgtgtct gtgaggccag attacatgcg 180

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tgggtccctt tagccattgt aactaaatag ctggacctgc aggacaaaga ccctgtacac 780

ggaacaattt aagcccttag ctgtacccac aggcatcccc caccgtttta agggacgtcg 840

caactaacgc ctaaacggaa caaggacccg gaaagtcgta cgtctaatac ggcaaagtgg 900

gctataaaag ggggcgctac tgccaaccca atgagttcat ccgatcacca ttgacagttg 960

tcaattaaca atacacatcc atcttgtacc ctaaacaata 1000

<210> 52

<211> 1000

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 52

tctaccatca ggaaactgga ggggcgtctt cagtacgaca aggcggagag gtatcgtact 60

ctttggcaac tgctcctagg atcgattcta ctcctttgtg tctatgccat tactaatttt 120

ttatttttta tggccgaaga accgaccctg gattccagca gcacttggaa gtctcgttgg 180

ttcattctgg aagaatttcc taatctggtt tacttcgttg actttagcgt tattgcctac 240

atttggcggc ccaatactaa cgacgtcagg ttcatgtcgt ccaagattgc ccaggatgag 300

aatgaagttc aagagtttga aattggatct ctccgagagt ctatggacga gtaagagata 360

ttaaggaatt gaaaaagggc aagaaaagag cgatgagcgt agaaattgcg tagaaattgt 420

agcagtatca atacccttac catcacctaa agcaaaccaa aagatcccgg gtgaatctcc 480

gggacctgag tagatggtaa tacagaatac tggcagaata ctgcactcag aagaactctg 540

gaagaactct ggaagcagtc taacggaccc cagtttggct cttgaacatt cacgtgactg 600

gaaacttaac atcacgtgac ctcgtccagt ctggattgaa atagggctga aataaaaaat 660

cagtacacaa tgagagtttg gccgagtggt ctatggcgtc agatttaggt aaaccctaaa 720

gtgaattctc tgatatcttc ggatgcgcga gttcgaatct cgtagctctc attatctttt 780

ttactccctt tccgtttcgg actaaccacg gatacctttt ccaagcaatt tgcgatccaa 840

ttatttttgt tcttttaatt aaatttagtt tcattcatct ccggtccccc ttgatagatg 900

aacgtccgta tttaccgtta agccgcataa ccgccaggaa agccccgatc tgtcaacctt 960

ggcatctact acgtttcgtt tataactctc gctcgtttta 1000

<210> 53

<211> 1000

<212> DNA

<213> 解腺嘌呤阿氏酵母（Arxula adeninivorans）

<400> 53

gcccagtgca ttgtccttgt cattctagga gtggcctttt tcattgcatt tgtacttgta 60

gaacgagctg tggacacccc tctagtaccg gttcgcaagt ttaacactaa tatggccaga 120

gtgctcgctt gtgtggcctt tggatggggc acttttggta tctggattta ctacctttgg 180

cagattatgg aatacctgcg acacaactcc ccattgttgg cttcagctca gttctctcca 240

gctgccgcga tgggtgccat tgctgcaatt gctactggat acctcatgtc aaagctacat 300

cctttccgag tgctggcaat ttccctgttg gcgttcctgg tcgcttcaat tatcaccgcc 360

acggcgcctg taaaccaaac gttctgggct cagacgtttg tatcaatctt agtagcttct 420

tggggtatgg acatgaactt ccctgctgcg acccttatct tatcagagac cgtgcccagg 480

gaacagcagg gaattgccgc ctctttagtg gccactgtgg tcaattattc aatctcccta 540

agcctgggag ttgcaggtac tatcattgag caggtatctc caggtttgga ccctaattca 600

tatttaaagg gcgtccgaag cgccctatat ttctgcattg gcctctctgc cgccggcctt 660

cttgtcgctc tctatggtgt catcagagac gacattcttg ctaaccatgg gaaatcctct 720

aacgacgaag aaaagaatac tgcttgaaat gcttttttaa tagaattttg ctcttatttg 780

tcctatttaa tctatatttc atgtacgaat cgatttctaa tcttaacacc gcggagattc 840

ttttgttatt actaaatcag gaaaagatgc acggagaact cggcccgagt tggatttgat 900

ggcatctcgg tccgagttaa acgtggggta atcttttagc ggggaaagtt ataaaacccc 960

tacaaagccc aggatttgtg aattcacatt tgacaacaca 1000

Claims (25)

1.一种编码来自解腺嘌呤阿氏酵母(Arxula adeninivorans)的启动子的核酸，其中所述启动子是用于下述的启动子：翻译延伸因子EF-1α；甘油-3-磷酸脱氢酶；磷酸丙糖异构酶1；果糖-1,6-二磷酸醛缩酶；磷酸甘油酸变位酶；丙酮酸激酶；输出蛋白EXP1；核糖体蛋白S7；醇脱氢酶；磷酸甘油酸激酶；己糖转运蛋白；一般氨基酸通透酶；丝氨酸蛋白酶；异柠檬酸裂解酶；酰基辅酶A氧化酶；ATP-硫酸化酶；己糖激酶；3-磷酸甘油酸脱氢酶；丙酮酸脱氢酶α亚基；丙酮酸脱氢酶β亚基；乌头酸；烯醇酶；肌动蛋白；多药耐药蛋白(ABC-转运蛋白)；泛素；GTP酶；质膜Na+/Pi共转运蛋白；丙酮酸脱羧酶；植酸酶；或α-淀粉酶。

2.如权利要求1所述的核酸，其中所述启动子源自编码下述的基因：TEF1；GPD1；TPI1；FBA1；GPM1；PYK1；EXP1；RPS7；ADH1；PGK1；HXT7；GAP1；XPR2；ICL1；POX；MET3；HXK1；SER3；PDA1；PDB1；ACO1；ENO1；ACT1；MDR1；UBI4；YPT1；PHO89；PDC1；PHY；或AMYA。

3.如权利要求1或2所述的核酸，其中：

所述核酸与SEQ ID NO:5；SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9；SEQID NO:10；SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQID NO:35；SEQ ID NO:36；SEQ ID NO:37；SEQ ID NO:38；SEQ ID NO:39；SEQ ID NO:40；SEQID NO:41；SEQ ID NO:42；SEQ ID NO:43；SEQ ID NO:44；SEQ ID NO:45；SEQ ID NO:46；SEQID NO:47；SEQ ID NO:48；SEQ ID NO:49；SEQ ID NO:50；SEQ ID NO:51；SEQ ID NO:52；或SEQ ID NO:53所示的核苷酸序列具有至少90％的序列同源性；或

所述核酸与SEQ ID NO:5；SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9；SEQID NO:10；SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQID NO:35；SEQ ID NO:36；SEQ ID NO:37；SEQ ID NO:38；SEQ ID NO:39；SEQ ID NO:40；SEQID NO:41；SEQ ID NO:42；SEQ ID NO:43；SEQ ID NO:44；SEQ ID NO:45；SEQ ID NO:46；SEQID NO:47；SEQ ID NO:48；SEQ ID NO:49；SEQ ID NO:50；SEQ ID NO:51；SEQ ID NO:52；或SEQ ID NO:53的子序列具有至少90％序列同源性，并且所述子序列保留启动子活性。

4.如权利要求3所述的核酸，其中所述核酸包含SEQ ID NO:5；SEQ ID NO:6；SEQ IDNO:7；SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ IDNO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:35；SEQ ID NO:36；SEQ ID NO:37；SEQ IDNO:38；SEQ ID NO:39；SEQ ID NO:40；SEQ ID NO:41；SEQ ID NO:42；SEQ ID NO:43；SEQ IDNO:44；SEQ ID NO:45；SEQ ID NO:46；SEQ ID NO:47；SEQ ID NO:48；SEQ ID NO:49；SEQ IDNO:50；SEQ ID NO:51；SEQ ID NO:52；或SEQ ID NO:53的子序列，并且所述子序列保留启动子活性。

5.如权利要求3所述的核酸，其中所述核酸包含SEQ ID NO:5；SEQ ID NO:6；SEQ IDNO:7；SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ IDNO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:35；SEQ ID NO:36；SEQ ID NO:37；SEQ IDNO:38；SEQ ID NO:39；SEQ ID NO:40；SEQ ID NO:41；SEQ ID NO:42；SEQ ID NO:43；SEQ IDNO:44；SEQ ID NO:45；SEQ ID NO:46；SEQ ID NO:47；SEQ ID NO:48；SEQ ID NO:49；SEQ IDNO:50；SEQ ID NO:51；SEQ ID NO:52；或SEQ ID NO:53所示的核苷酸序列。

6.如权利要求1-5中任一项所述的核酸，其还包含基因，其中所述启动子和基因可操作地连接。

7.一种载体，其包含权利要求1-6中任一项所述的核酸。

8.如权利要求7所述的载体，其中所述载体是质粒。

9.一种转化的细胞，其包含权利要求1-6中任一项所述的核酸。

10.一种包含遗传修饰的转化的细胞，其中所述遗传修饰是用编码启动子的核酸转化，其中所述启动子与SEQ ID NO:5；SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:17；SEQ ID NO:18；SEQ ID NO:19；SEQ ID NO:20；SEQ IDNO:21；SEQ ID NO:22；SEQ ID NO:23；SEQ ID NO:24；SEQ ID NO:25；SEQ ID NO:26；SEQ IDNO:27；SEQ ID NO:28；SEQ ID NO:29；SEQ ID NO:30；SEQ ID NO:31；SEQ ID NO:32；SEQ IDNO:33；SEQ ID NO:34；SEQ ID NO:35；SEQ ID NO:36；SEQ ID NO:37；SEQ ID NO:38；SEQ IDNO:39；SEQ ID NO:40；SEQ ID NO:41；SEQ ID NO:42；SEQ ID NO:43；SEQ ID NO:44；SEQ IDNO:45；SEQ ID NO:46；SEQ ID NO:47；SEQ ID NO:48；SEQ ID NO:49；SEQ ID NO:50；SEQ IDNO:51；SEQ ID NO:52；或SEQ ID NO:53的子序列具有至少90％的序列同源性，并且所述子序列保留启动子活性。

11.如权利要求9或10所述的转化的细胞，其中所述细胞选自藻类、细菌、霉菌、真菌、植物和酵母。

12.如权利要求11所述的转化的细胞，其中所述细胞是酵母。

13.如权利要求12所述的转化的细胞，其中所述细胞选自：阿氏菌属(Arxula)、曲霉属(Aspegillus)、奥兰氏菌属(Aurantiochytrium)、念珠菌属(Candida)、麦角菌属(Claviceps)、隐球菌属(Cryptococcus)、小坎宁安霉属(Cunninghamella)、地霉属(Geotrichum)、汉逊酵母属(Hansenula)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、柯达酵母(Kodamaea)、白冬孢酵母属(Leucosporidiella)、油脂酵母属(Lipomyces)、被孢霉属(Mortierella)、欧格氏霉属(Ogataea)、毕赤酵母属(Pichia)、原囊藻属(Prototheca)、根霉属(Rhizopus)、红冬孢酵母属(Rhodosporidium)、红酵母属(Rhodotorula)、酵母菌属(Saccharomyces)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)、银耳属(Tremella)、丝孢酵母属(Trichosporon)、威克汉姆酵母属(Wickerhamomyces)和耶氏酵母属(Yarrowia)。

14.如权利要求13所述的转化的细胞，其中所述细胞选自：黑曲霉(Aspergillusniger)、米曲霉(Aspergillus orzyae)、土曲霉(Aspergillus terreus)、裂殖壶奥兰氏菌(Aurantiochytrium limacinum)、产朊假丝酵母(Candida utilis)、麦角菌(Clavicepspurpurea)、浅白隐球酵母(Cryptococcus albidus)、弯曲隐球菌(Cryptococcuscurvatus)、拉米隐球菌(Cryptococcus ramirezgomezianus)、地生隐球菌(Cryptococcusterreus)、威氏隐球菌(Cryptococcus wieringae)、刺孢小坎宁安霉(Cunninghamellaechinulata)、贴梗海棠小坎宁安霉(Cunninghamella japonica)、发酵性地霉(Geotrichumfermentans)、多形汉森酵母(Hansenula polymorpha)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyceslactis)、马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)、奥默柯达酵母(Kodamaeaohmeri)、克雷氏白冬孢酵母(Leucosporidiella creatinivora)、产油油脂酵母(Lipomyces lipofer)、斯达氏油脂酵母(Lipomyces starkeyi)、子囊菌油脂酵母(Lipomyces tetrasporus)、深黄被孢霉(Mortierella isabellina)、高山被孢霉(Mortierella alpina)、马兜铃欧格氏霉(Ogataea polymorpha)、塞佛式毕赤酵母(Pichiaciferrii)、季氏毕赤酵母(Pichia guilliermondii)、巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)、叶柄毕赤酵母(Pichia stipites)、小型原藻(Prototheca zopfii)、隐根根霉(Rhizopus arrhizus)、巴氏红冬孢酵母(Rhodosporidium babjevae)、圆红冬孢酵母(Rhodosporidium toruloides)、帕鲁氏红冬孢酵母(Rhodosporidium paludigenum)、粘红酵母(Rhodotorula glutinis)、胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、脑状银耳(Tremella enchepala)、皮状丝孢酵母(Trichosporon cutaneum)、发酵性丝孢酵母(Trichosporon fermentans)、和塞佛式威克汉姆酵母(Wickerhamomyces ciferrii)。

15.如权利要求13所述的转化的细胞，其中所述细胞是解脂耶氏酵母。

16.如权利要求13所述的转化的细胞，其中所述细胞是解腺嘌呤阿氏酵母。

17.一种在细胞中表达基因的方法，包括用编码启动子的核酸转化亲本细胞，其中：

所述启动子与SEQ ID NO:5；SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:17；SEQ ID NO:18；SEQ ID NO:19；SEQ ID NO:20；SEQ IDNO:21；SEQ ID NO:22；SEQ ID NO:23；SEQ ID NO:24；SEQ ID NO:25；SEQ ID NO:26；SEQ IDNO:27；SEQ ID NO:28；SEQ ID NO:29；SEQ ID NO:30；SEQ ID NO:31；SEQ ID NO:32；SEQ IDNO:33；SEQ ID NO:34；SEQ ID NO:35；SEQ ID NO:36；SEQ ID NO:37；SEQ ID NO:38；SEQ IDNO:39；SEQ ID NO:40；SEQ ID NO:41；SEQ ID NO:42；SEQ ID NO:43；SEQ ID NO:44；SEQ IDNO:45；SEQ ID NO:46；SEQ ID NO:47；SEQ ID NO:48；SEQ ID NO:49；SEQ ID NO:50；SEQ IDNO:51；SEQ ID NO:52；或SEQ ID NO:53的子序列具有至少90％序列同源性；

所述子序列保留启动子活性；并且或：

所述核酸包含所述基因，并且所述基因和所述启动子可操作地连接；或设计所述核酸使得所述启动子在转化亲本细胞后变得可操作地连接到所述基因。

18.一种在细胞中表达基因的方法，包括用权利要求1-5中任一项所述的核酸转化亲本细胞；

其中：

所述核酸包含所述基因，并且所述基因和所述启动子可操作地连接；或

设计所述核酸使得所述启动子在转化亲本细胞后变得可操作地连接到所述基因。

19.如权利要求17或18所述的方法，其中所述核酸包含所述基因，并且所述基因和所述启动子可操作地连接。

20.如权利要求17或18所述的方法，其中设计所述核酸使得所述启动子在转化所述亲本细胞后变得可操作地连接到所述基因。

21.如权利要求17-20中任一项所述的方法，其中所述细胞是酵母。

22.如权利要求21所述的方法，其中所述细胞选自：阿氏菌属(Arxula)、曲霉属(Aspegillus)、奥兰氏菌属(Aurantiochytrium)、念珠菌属(Candida)、麦角菌属(Claviceps)、隐球菌属(Cryptococcus)、小坎宁安霉属(Cunninghamella)、地霉属(Geotrichum)、汉逊酵母属(Hansenula)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、柯达酵母(Kodamaea)、白冬孢酵母属(Leucosporidiella)、油脂酵母属(Lipomyces)、被孢霉属(Mortierella)、欧格氏霉属(Ogataea)、毕赤酵母属(Pichia)、原囊藻属(Prototheca)、根霉属(Rhizopus)、红冬孢酵母属(Rhodosporidium)、红酵母属(Rhodotorula)、酵母菌属(Saccharomyces)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)、银耳属(Tremella)、丝孢酵母属(Trichosporon)、威克汉姆酵母属(Wickerhamomyces)和耶氏酵母属(Yarrowia)。

23.如权利要求22所述的方法，其中所述细胞选自：黑曲霉(Aspergillusniger)、米曲霉(Aspergillus orzyae)、土曲霉(Aspergillus terreus)、裂殖壶奥兰氏菌(Aurantiochytrium limacinum)、产朊假丝酵母(Candida utilis)、麦角菌(Clavicepspurpurea)、浅白隐球酵母(Cryptococcus albidus)、弯曲隐球菌(Cryptococcuscurvatus)、拉米隐球菌(Cryptococcus ramirezgomezianus)、地生隐球菌(Cryptococcusterreus)、威氏隐球菌(Cryptococcus wieringae)、刺孢小坎宁安霉(Cunninghamellaechinulata)、贴梗海棠小坎宁安霉(Cunninghamella japonica)、发酵性地霉(Geotrichumfermentans)、多形汉森酵母(Hansenula polymorpha)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyceslactis)、马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)、奥默柯达酵母(Kodamaeaohmeri)、克雷氏白冬孢酵母(Leucosporidiella creatinivora)、产油油脂酵母(Lipomyces lipofer)、斯达氏油脂酵母(Lipomyces starkeyi)、子囊菌油脂酵母(Lipomyces tetrasporus)、深黄被孢霉(Mortierella isabellina)、高山被孢霉(Mortierella alpina)、马兜铃欧格氏霉(Ogataea polymorpha)、塞佛式毕赤酵母(Pichiaciferrii)、季氏毕赤氏酵母(Pichia guilliermondii)、巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)、叶柄毕赤酵母(Pichia stipites)、小型原藻(Prototheca zopfii)、隐根根霉(Rhizopus arrhizus)、巴氏红冬孢酵母(Rhodosporidium babjevae)、圆红冬孢酵母(Rhodosporidium toruloides)、帕鲁氏红冬孢酵母(Rhodosporidium paludigenum)、粘红酵母(Rhodotorula glutinis)、胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、脑状银耳(Tremella enchepala)、皮状丝孢酵母(Trichosporon cutaneum)、发酵性丝孢酵母(Trichosporon fermentans)、和塞佛式威克汉姆酵母(Wickerhamomyces ciferrii)。

24.如权利要求22所述的方法，其中所述细胞是解脂耶氏酵母。

25.如权利要求22所述的方法，其中所述细胞是解腺嘌呤阿氏酵母。