CN107056894B - 一种片段法固相合成醋酸加尼瑞克的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于多肽合成领域，涉及一种片段法固相合成醋酸加尼瑞克的方法。本发明首先采用固相法合成醋酸加尼瑞克的片段A[6‑10]肽树脂和中间体片段B[1‑5]；再将中间体片段B[1‑5]连接到肽树脂A[6‑10]上，裂解得到醋酸加尼瑞克粗肽；最后纯化得到醋酸加尼瑞克精肽。此技术方案可以大大缩短合成周期，提高粗肽纯度达到93％以上，降低了纯化难度和生产成本，提高产品总收率达到77％以上，进一步降低了生产成本，利于工业大规模生产。
Description
技术领域
本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种片段法固相合成醋酸加尼瑞克的方法。
技术背景
醋酸加尼瑞克注射液(商品名：
)，由默沙东公司(在美国和加拿大被称为默克)研发、生产，2013年经中国国家食品药品监督管理总局批准在中国上市，用于预防过早出现促黄体激素(LH)峰。不孕症在全世界的发病率达到9％，在体外受精与胚胎移植过程控制超排卵方案(COH)中使用促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂调节已被常规采用。醋酸加尼瑞克注射液为第三代GnRH拮抗剂，能通过与垂体前叶的GnRH受体的竞争性结合，快速而可逆地抑制体内促卵泡激素(FSH)和促黄体激素(LH)的释放。醋酸加尼瑞克注射液为预防接受辅助生殖技术(ART)控制性超排卵(COH)方案的不孕症患者过早出现促黄体激素(LH)峰提供了最新的药物选择。
活性成分醋酸加尼瑞克(INN)是一种合成十肽，对天然生成的促性腺激素释放激素(GnRH)具有高的拮抗活性，是通过替代天然GnRH的第l、2、3、6、8、10位点上的氨基酸而形成的十肽化合物，氨基酸序列为：
Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tyr-D-HArg(Et2)-Leu-HArg(Et2)-Pro-D-Ala-NH2
结构式如下：
目前醋酸加尼瑞克的合成方法主要有传统Boc固相合成法和Fmoc固相合成法，US4801577、US5212288、US5767082公开的方法为Boc固相合成方法，该方法工艺落后、成本高、收率低，且需要使用HF进行裂解，对环境污染极大，不利于生产放大；CN102584945A公开的方法为Fmoc固相合成法，该方法使用Fmoc-HArg(Et)2-OH和Fmoc-D-HArg(Et)2-OH为原料，完成氨基酸偶联后去保护，在进行乙酰化反应，得到醋酸加尼瑞克肽树脂，裂解纯化后得醋酸加尼瑞克；CN104017058A、CN104231055A公开的方法为Fmoc固相合成法，分别使用不同的侧链保护基保护的Fmoc-Lys(Dde)-OH、Fmoc-Lys(Alloc)-OH和Fmoc-D-Lys(Dde)-OH、Fmoc-D-Lys(Alloc)-OH代替Fmoc-HArg(Et)2-OH和Fmoc-D-HArg(Et)2-OH，在氨基酸偶联结束后脱除Fmoc保护基，然后N端进行乙酰化反应，在对赖氨酸和D-赖氨酸的侧链进行修饰得到醋酸加尼瑞克肽树脂，形成Et修饰的胍基，裂解、纯化处理后可得醋酸加尼瑞克；CN104844694A提出在采用Fmoc-Lys(Boc)-OH和Fmoc-D-Lys(Boc)-OH分别替代Fmoc-HArg(Et)2-OH和Fmoc-D-HArg(Et)2-OH，偶联结束后裂解得到醋酸加尼瑞克前体，在以水代替有机溶剂作为反应溶剂对醋酸加尼瑞克前体进行修饰，得到醋酸加尼瑞克粗肽，纯化后得到醋酸加尼瑞克。
以上专利中的Boc固相合成策略要用到剧毒的HF，大批量生产受到限制，制约产业化放大；Fmoc固相合成策略在合成肽链的过程中均采用逐个氨基酸进行偶联的方法，合成周期长，线性粗肽纯度低。为此，本发明人对醋酸加尼瑞克的合成方法进行了研究，从而得到本发明的技术方案。
发明内容
针对目前醋酸加尼瑞克合成过程中遇到的难点，本发明提供一种片段法固相合成醋酸加尼瑞克的方法，缩短了合成周期，有效提高了粗肽的纯度，降低纯化难度，使生产成本进一步降低，利于工业上大规模生产醋酸加尼瑞克。
为实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
一种片段法固相合成加尼瑞克的方法，包括如下步骤：
(a)采用氨基树脂为固相载体，通过Fmoc固相合成法，按照醋酸加尼瑞克肽序依次偶联6～10位侧链保护氨基酸，其中6、8位氨基酸偶联分别采用Fmoc-D-Lys(X)-OH和Fmoc-Lys(X)-OH偶联，其中X为Mtt或Mmt；脱除侧链保护基X后对侧链氨基进行修饰得到醋酸加尼瑞克片段A[6-10]肽树脂：Fmoc-D-HArg(Et)2-Leu-HArg(Et)2-Pro-Ala-氨基树脂；
(b)采用CTC树脂为固相载体按照醋酸加尼瑞克肽序依次偶联1～5位侧链保护氨基酸，脱除最后一个Fmoc保护基，进行N端乙酰化反应，肽树脂经裂解后，得到醋酸加尼瑞克中间体片段B[1-5]：Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OH；
(c)醋酸加尼瑞克片段A[6-10]肽树脂脱除Fmoc保护基后与中间体片段B[1-5]在缩合剂存在下发生接肽反应，得到醋酸加尼瑞克肽树脂：Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-HArg(Et)2-Leu-HArg(Et)2-Pro-Ala-氨基树脂；
(d)肽树脂经裂解试剂裂解、纯化、转盐和冻干后获得醋酸加尼瑞克纯品。
其中以上技术方案步骤(a)中醋酸加尼瑞克片段[6-10]肽树脂A的合成方法为：
以氨基树脂为固相载体，以2-5倍摩尔量的投料比，加入相应的Fmoc保护氨基酸进行偶联反应，每一个偶联反应均是在缩合剂的存在下进行的固相接肽反应，反应完毕后用脱保护试剂脱除Fmoc，再与下一个Fmoc保护氨基酸进行偶联反应；依次分别与Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Lys(X)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Lys(X)-OH偶联反应，制备得到Fmoc-D-Lys(X)-Leu-Lys(X)-Pro-Ala-氨基树脂；加入脱保护基X的试剂处理后分别用DMF和THF洗涤，加入2-5倍摩尔量的N，N-二乙基碳二亚胺的THF溶液，在加入0.005-0.01倍量的Yb(OTf)，催化反应2-3h,得到醋酸加尼瑞克片段B[6-10]肽树脂：Fmoc-D-HArg(Et)2-Leu-HArg(Et)2-Pro-Ala-氨基树脂。步骤(a)中的氨基树脂固相载体为Rink Amide resin、RinkAmide AM resin或Rink Amide MBHAresin中的一种；步骤(a)中的X为Mtt或Mmt；步骤(a)中的脱保护基X的试剂为TFE/DCM、TFA/DCM、AcOH/TFE/DCM、HFIP/DCM组合中的一种。
其中以上技术方案步骤(b)中醋酸加尼瑞克中间体片段B[1-5]的合成方法为：
以CTC树脂为固相载体，Fmoc-Tyr(tBu)-OH与之偶联得到Fmoc-Tyr(tBu)-CTC树脂，脱除Fmoc保护后，以2～3倍摩尔量的投料比依次加入Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-D-Pal-OH、Fmoc-D-Cpa-OH、Fmoc-D-Nal-OH保护氨基酸进行偶联反应，每一个偶联反应均是在缩合剂的存在下进行的固相接肽反应，每一步偶联反应均以Kaiser试剂检测反应终点，反应完毕后用脱保护试剂脱除Fmoc，再与下一个Fmoc保护氨基酸进行偶联反应；重复操作直至偶联完成1～5位氨基酸；脱除Fmoc保护基团，加入乙酰化试剂反应2～3h，乙酰化反应结束后所得肽树脂经裂解得到醋酸加尼瑞克中间体片段B[1-5]：Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OH；步骤(b)中全保护肽树脂裂解试剂组合为TFE/DCM、TFA/DCM、AcOH/TFE/DCM、HFIP/DCM中的一种。
其中以上技术方案步骤(a)(b)(c)中的脱保护试剂体积百分比为20-25％哌啶的DMF溶液(体积比)；偶联反应中所用的缩合剂为以下组合DIC/HOBT、DIC/HOAT、HBTU/HOBT/DIPEA、HATU/HOAT/DIPEA中的的一种。
其中以上技术方案步骤(d)中的肽树脂裂解试剂为加入体积百分比1～20％清除剂的TFA溶液，清除剂为苯甲醚、苯甲硫醚、乙二硫醇、巯基乙醇、苯酚、水和三异丙基硅烷中的一种或几种。
相对于现有技术，本发明的有益效果是：
本发明采用片段法固相合成醋酸加尼瑞克线性肽，两个片段可以同时合成，缩短了合成周期。降低合成难度，使线性肽粗肽纯度超过93％；提高产物的总收率至77％以上。降低了纯化难度，使最终产品的纯度超过99.7％，进一步降低了纯化成本，利于工业大规模生产。
具体实施方式
下面用具体实施例对本发明进行详细说明，但不限定本专利；根据本发明改变原料的投料比、或是反应溶剂或及缩合剂等，均在本发明的保护范围内。
说明书和权利要求书中所使用的缩写含义如下：
Fmoc 9-芴甲氧羰基
tBu 叔丁基
Mmt 4-甲氧基三苯甲基
Mtt 4-甲基三苯甲基
Ac 乙酰基
Pro 脯氨酸
Lys 赖氨酸
Leu 亮氨酸
Tyr 酪氨酸
Ser 丝氨酸
D-Ala D-丙氨酸
D-Lys D-赖氨酸
D-Pal 3-(3-吡啶基)-D-丙氨酸
D-Cpa 4-氯-D-苯丙氨酸
D-Nal 3-(2-萘基)-D-丙氨酸
CTC树脂 2-氯三苯甲基氯树脂
DCM 二氯甲烷
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DIPEA N,N-二异丙基乙胺
DIC N,N-二异丙基碳二亚胺
HBTU 苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐
HATU 2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯
TBTU O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸
HOBT 1-羟基苯并三唑
HOAT 1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑
TFA 三氟乙酸
TFE 三氟乙醇
HFIP 六氟异丙醇
实施例1：Fmoc-D-Ala-Rink Amide Resin的制备
准确称取Rink Amide Resin 20.0g(sub＝0.65mmol/g)放入合成柱中，用160mLDMF洗涤两次，加入160mL DCM溶胀30min，抽滤掉DCM后，用160mL DMF洗涤两次；加入20％哌啶/DMF溶液160ml脱保护2次，分别反应10min和15min；然后用160ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；抽滤掉DMF，加入Fmoc-D-Ala-OH/DIC/HOBT的混合DMF溶液[称取8.09g(26.00mmol)Fmoc-D-Ala-OH和3.81g(28.20mmol)HOBT置于锥形瓶中，加入80mL DMF溶液搅拌溶解，低温(0℃)下加入4.37ml(28.20mmol)DIC，活化3min；反应2h，抽掉反应液，用160mL DMF洗涤两次，加入封端试剂250mL(50ml乙酸酐、42.5ml吡啶、157.5mL DCM)反应2h，抽滤掉反应液，分别用DMF、DCM、甲醇洗涤3次，真空干燥得Fmoc-D-Ala-Rink Amide Resin 20.84g；测替代度为0.58mmol/g。
实施例2：Fmoc-D-Ala-Rink Amide AM Resin的制备
准确称取Rink Amide AM Resin 20.0g(sub＝0.71mmol/g)放入合成柱中，用200mL DMF洗涤两次，加入200mL DCM溶胀30min，抽滤掉DCM后，用200mL DMF洗涤两次；加入20％哌啶/DMF溶液200ml脱保护2次，分别反应10min和15min；然后用200ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；抽滤掉DMF，加入Fmoc-D-Ala-OH/DIC/HOBT的混合DMF溶液[称取8.84g(28.40mmol)Fmoc-D-Ala-OH和4.22g(31.24mmol)HOBT置于锥形瓶中，加入100mL DMF溶液搅拌溶解，低温(0℃)下加入4.84ml(31.24mmol)DIC，活化3min；反应2h，抽掉反应液，用200mL DMF洗涤两次，加入封端试剂300mL(60ml乙酸酐、51ml吡啶、189mL DCM)反应2h，抽滤掉反应液，分别用DMF、DCM、甲醇洗涤3次，真空干燥得Fmoc-D-Ala-Rink Amide AM Resin20.90g；测替代度为0.63mmol/g。
实施例3：Fmoc-Tyr(tBu)-CTC Resin的制备
称取CTC树脂80.0g(sub＝1.00mmol/g)置于合成柱中，用500mL DMF洗涤两次，加入600mL DCM溶胀30min；抽滤掉DCM后，加入溶有73.52g(160.00mmol)Fmoc-Tyr(tBu)-OH的DCM溶液350ml，低温(0℃)下加入48.61ml(640.00mmol)DIPEA，反应60min，抽掉反应液，加入DCM/甲醇/DIPEA(体积比17：2：1)混合溶液480ml封端30min；然后用DMF、DCM、甲醇分别洗涤3次，真空干燥得Fmoc-Tyr(tBu)-CTC Resin 109.49g；测替代度为0.63mmol/g。
实施例4：醋酸加尼瑞克片段A[6-10]肽树脂的制备
准确称取实施例1中替代度为0.58mmol/g Fmoc-D-Ala-Rink Amide Resin17.24g(合成规模10.00mmol)置于合成柱中，加入120ml DCM溶胀30min，抽滤掉DCM后，120ml DMF洗涤2次；加入20％哌啶/DMF溶液170ml脱保护2次，分别反应10min和15min；然后用120ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；加入Fmoc-Pro-OH 6.75g(20.00mmol)、HOBT2.97g(22.00mmol)和DIC 3.41ml(22.00mmol)的DMF溶液80ml，鼓N2搅拌反应2h，反应终点以Kaiser试剂检测结果为准，反应达终点后，抽掉反应液，用120ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；随后再脱保护。如此反复循环操作，依次连接的保护氨基酸为：Fmoc-Lys(Mmt)-OH或Fmoc-Lys(Mtt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Lys(Mmt)–OH。
保护氨基酸偶联结束后，向反应器中加入TFE：DCM为1:4的比例配制200ml混合溶液反应30min，处理2次，抽掉反应液，用120ml然后用DMF、DCM、甲醇分别洗涤3次，真空干燥。
将干燥后的树脂置于圆底烧瓶中，加入200ml DMF和三乙胺10.12g(100.00mmol)，冰浴下缓慢滴加含有100ml乙氨基乙亚胺基甲磺酸10.80g(60.00mmol)的DMF溶液，滴加完毕后恢复至室温，搅拌反应24h，将反应液移至固相合成反应器内，抽掉反应液，用120mlDMF、DCM分别洗涤6次，再用甲醇收缩3次，真空干燥，得醋酸加尼瑞克片段A[6-10]肽树脂24.05g。
实施例5：醋酸加尼瑞克片段A[6-10]肽树脂的制备
准确称取实施例2中替代度为0.63mmol/g Fmoc-D-Ala-Rink Amide AM Resin15.87g(合成规模10.00mmol)置于合成柱中，加入100ml DCM溶胀30min，抽滤掉DCM后，100ml DMF洗涤2次；加入20％哌啶/DMF溶液150ml脱保护2次，分别反应10min和15min；然后用100ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；加入Fmoc-Pro-OH 6.75g(20.00mmol)、HOBT 2.97g(22.00mmol)和DIC 3.41ml(22.00mmol)的DMF溶液70ml，鼓N2搅拌反应2h，反应终点以Kaiser试剂检测结果为准，反应达终点后，抽掉反应液，用100ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；随后再脱保护。如此反复循环操作，依次连接的保护氨基酸为：Fmoc-Lys(Mmt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Lys(Mtt)-OH。
保护氨基酸偶联结束后，向反应器中加入TFE：DCM为1:4的比例配制200ml混合溶液反应30min，处理2次，抽掉反应液，用100ml然后用DMF、DCM、甲醇分别洗涤3次，真空干燥。
将干燥后的树脂置于圆底烧瓶中，加入200ml DMF和三乙胺10.12g(100.00mmol)，冰浴下缓慢滴加含有100ml乙氨基乙亚胺基甲磺酸10.80g(60.00mmol)的DMF溶液，滴加完毕后恢复至室温，搅拌反应24h，将反应液移至固相合成反应器内，抽掉反应液，用100mlDMF、DCM分别洗涤6次，再用甲醇收缩3次，真空干燥，得醋酸加尼瑞克片段A[6-10]肽树脂22.68g。
实施例6：醋酸加尼瑞克片段B[1-5]肽树脂的制备
准确称取实施例3中替代度为0.63mmol/g Fmoc-Tyr(tBu)-CTC Resin 103.17g(合成规模65mmol)置于合成柱中，加入800ml DCM溶胀30min，抽滤掉DCM后，800ml DMF洗涤2次；加入20％哌啶/DMF溶液800ml脱保护2次，分别反应10min和15min；然后用800ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；加入49.85g(130mmol)Fmoc-Ser(tBu)-OH、19.32g(143mmol)HOBT和22.14ml(143mmol)DIC的DMF溶液450ml，鼓N2搅拌反应2h，反应终点以Kaiser试剂检测结果为准，反应达终点后，抽掉反应液，用800ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；随后再脱保护。如此反复循环操作，依次连接的保护氨基酸为：Fmoc-D-Pal-OH、Fmoc-D-Cpa-OH、Ac-D-Nal-OH。保护氨基酸偶联结束后再加入20％哌啶/DMF溶液800ml脱保护2次，分别反应10min和15min；然后用800ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次，加入乙酰化试剂800mL(160ml乙酸酐、136ml吡啶、504mL DCM)反应2h，抽滤掉反应液，分别用800ml DMF、DCM、甲醇洗涤3次，真空干燥，得醋酸加尼瑞克片段B[1-5]肽树脂132.18g。
实施例7：醋酸加尼瑞克中间体片段B[1-5]的制备
按照TFE：DCM为1:4的比例配制1.5L混合溶液于圆底烧瓶中，将实施例6中得到的肽树脂缓慢加入到溶液中，室温搅拌反应4-5h，过滤除去树脂，滤液减压浓缩后，用-20℃预冷的甲基叔丁基醚沉降、离心、洗涤5次，干燥后得到中间体片段B[1-5]58.33g，收率为94.51％。
实施例8：醋酸加尼瑞克肽树脂的制备
将实施例4中10mmol的肽树脂A放入固相合成反应器中，加入240ml的DCM溶胀30min；抽滤掉DCM，用240ml的DMF洗3次；加入20％哌啶/DMF溶液240ml脱保护2次，分别反应10min和15min；然后用240ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；加入中间体片段B 28.49g(30mmol)、HOAT 4.49g(33mmol)和DIC 5.11ml(33mmol)的DMF溶液100ml，鼓N2搅拌反应3-4h，反应终点以Kaiser试剂检测结果为准，反应达终点后，抽掉反应液，用240ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；在用240ml DCM和甲醇分别洗涤3次，真空干燥得肽树脂31.17g。
实施例9：醋酸加尼瑞克肽树脂的制备
将实施例5中10mmol的肽树脂A放入固相合成反应器中，加入220ml的DCM溶胀30min；抽滤掉DCM，用220ml的DMF洗3次；加入20％哌啶/DMF溶液220ml脱保护2次，分别反应10min和15min；然后用220ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；加入中间体片段B 28.49g(30mmol)、HOAT 4.49g(33mmol)和DIC 5.11ml(33mmol)的DMF溶液100ml，鼓N2搅拌反应3-4h，反应终点以Kaiser试剂检测结果为准，反应达终点后，抽掉反应液，用220ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；在用220ml DCM和甲醇分别洗涤3次，真空干燥得肽树脂29.75g。
实施例10：醋酸加尼瑞克粗肽的制备
按照三氟醋酸/苯酚/苯甲硫醚/水/乙二硫醇＝82.5/5/5/5/2.5(V/V)的比例配制裂解液350ml于圆底烧瓶中，在冰浴下将实施例8中所得醋酸加尼瑞克肽树脂31.17g缓慢加入到烧瓶中，然后升至室温，N2保护搅拌反应4h后，抽滤除去树脂，将滤液缓慢倾倒入-20℃预冷的3.5L甲基叔丁基醚中，冰柜内静置1h，离心得到的固体，用甲基叔丁基醚洗涤6次后真空干燥得醋酸加尼瑞克粗肽16.88g，纯度93.82％，收率107.51％。
实施例11：醋酸加尼瑞克粗肽的制备
按照三氟醋酸/苯酚/苯甲硫醚/水/乙二硫醇＝82.5/5/5/5/2.5(V/V)的比例配制裂解液300ml于圆底烧瓶中，在冰浴下将实施例9中所得醋酸加尼瑞克肽树脂29.75g缓慢加入到烧瓶中，然后升至室温，N2保护搅拌反应4h后，抽滤除去树脂，将滤液缓慢倾倒入-20℃预冷的3.0L甲基叔丁基醚中，冰柜内静置1h，离心得到的固体，用甲基叔丁基醚洗涤6次后真空干燥得醋酸加尼瑞克粗肽17.33g，纯度92.17％，收率110.37％。
实施例12：醋酸加尼瑞克粗肽的纯化
取实施例10中所得醋酸加尼瑞克粗肽加入到10％乙腈/水溶液中，振荡溶解后，用0.45um滤膜过滤后备用。
采用高效液相色谱法进行纯化，色谱填料为10μm的反相C18，流动相系统为0.1％TFA/水溶液-0.1％TFA/乙腈溶液，77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰蒸去乙腈后，得醋酸加尼瑞克纯化中间体浓缩液，转盐后冻干得醋酸加尼瑞克精肽13.18g，总收率77.96％，纯度99.7％，最大单一杂质均小于0.10％。
实施例13：醋酸加尼瑞克粗肽的纯化
取实施例11中所得醋酸加尼瑞克粗肽加入到10％乙腈/水溶液中，振荡溶解后，用0.45um滤膜过滤后备用。
采用高效液相色谱法进行纯化，色谱填料为10μm的反相C18，流动相系统为0.1％TFA/水溶液-0.1％TFA/乙腈溶液，77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰蒸去乙腈后，得醋酸加尼瑞克纯化中间体浓缩液，转盐后冻干得醋酸加尼瑞克精肽11.14g，总收率70.96％，纯度99.7％，最大单一杂质均小于0.10％。
Claims (6)
1.一种片段法固相合成醋酸加尼瑞克的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)以氨基树脂为固相载体，以2-5倍摩尔量的投料比，加入相应的Fmoc保护氨基酸进行偶联反应，每一个偶联反应均是在缩合剂的存在下进行的固相接肽反应，反应完毕后用脱保护试剂脱除Fmoc，再与下一个Fmoc保护氨基酸进行偶联反应；依次分别与Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Lys(X)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Lys(X)-OH偶联反应，制备得到Fmoc-D-Lys(X)-Leu-Lys(X)-Pro-Ala-氨基树脂；所述X为Mtt或Mmt；加入TFE：DCM为1:4的比例配制200ml混合溶液反应30min，处理2次，抽掉反应液，用120ml然后用DMF、DCM、甲醇分别洗涤3次，真空干燥，脱除侧链保护基X，加入DMF和三乙胺，冰浴下缓慢滴加含有乙氨基乙亚胺基甲磺酸的DMF溶液，搅拌反应24h，抽掉反应液，用DMF、DCM分别洗涤6次，再用甲醇收缩3次，真空干燥，得到醋酸加尼瑞克片段A[6-10]肽树脂：Fmoc-D-HArg(Et)2-Leu-HArg(Et)2-Pro-Ala-氨基树脂；
(b)采用CTC树脂为固相载体按照醋酸加尼瑞克肽序依次偶联1～5位侧链保护氨基酸，脱除最后一个Fmoc保护基，进行N端乙酰化反应，肽树脂经裂解后，得到醋酸加尼瑞克中间体片段B[1-5]：Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)- OH，具体为：以CTC树脂为固相载体，Fmoc-Tyr(tBu)-OH与之偶联得到Fmoc-Tyr(tBu)-CTC树脂，脱除Fmoc保护后，以2～3倍摩尔量的的投料比依次加入Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-D-Pal-OH、Fmoc-D-Cpa-OH、Fmoc-D-Nal-OH保护氨基酸进行偶联反应，每一个偶联反应均是在缩合剂的存在下进行的固相接肽反应，每一步偶联反应均以Kaiser试剂检测反应终点，反应完毕后用脱保护试剂脱除Fmoc，再与下一个Fmoc保护氨基酸进行偶联反应；重复操作直至偶联完成1～5位氨基酸；脱除Fmoc保护基团，加入乙酰化试剂反应2～3h，乙酰化反应结束后所得肽树脂经裂解得到醋酸加尼瑞克中间体片段B[1-5]；
(c)醋酸加尼瑞克片段A[6-10]肽树脂脱除Fmoc保护基后与中间体片段B[1-5]在缩合剂存在下发生接肽反应，得到醋酸加尼瑞克肽树脂Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-HArg(Et)2-Leu-HArg(Et)2-Pro-Ala-氨基树脂；
(d)肽树脂经裂解试剂裂解、纯化、转盐和冻干后获得醋酸加尼瑞克纯品。
2.根据权利要求1所述的片段法固相合成醋酸加尼瑞克的制备方法，其特征在于，步骤(a)中所述氨基树脂为Rink Amide resin、Rink Amide AM resin或Rink Amide MBHAresin中的一种。
3.根据权利要求1所述的片段法固相合成醋酸加尼瑞克的制备方法，其特征在于，步骤(a)中所述脱保护基X的试剂为TFE/DCM、TFA/DCM、AcOH/TFE/DCM、HFIP/DCM组合中的一种。
4.根据权利要求1所述的片段法固相合成醋酸加尼瑞克的制备方法，其特征在于，步骤(b)中肽树脂裂解所用的试剂组合为TFE/DCM、TFA/DCM、AcOH/TFE/DCM、HFIP/DCM中的一种。
5.根据权利要求1所述的片段法固相合成醋酸加尼瑞克的制备方法，其特征在于，所述脱除Fmoc保护基所用的试剂为体积百分比为20-25％哌啶的DMF溶液；偶联反应中所用的缩合剂为以下组合DIC/HOBT、DIC/HOAT、HBTU/HOBT/DIPEA、HATU/HOAT/DIPEA中的一种。
6.根据权利要求1所述的片段法固相合成醋酸加尼瑞克的制备方法，其特征在于，步骤(d)中所述肽树脂裂解试剂为加入体积比1～20％清除剂的TFA溶液，所述清除剂为苯甲醚、苯甲硫醚、乙二硫醇、巯基乙醇、苯酚、水和三异丙基硅烷中的一种或几种。
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