CN106967168A - 一种东海乌参胶原蛋白低聚肽的制备方法 - Google Patents
一种东海乌参胶原蛋白低聚肽的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106967168A CN106967168A CN201710150525.7A CN201710150525A CN106967168A CN 106967168 A CN106967168 A CN 106967168A CN 201710150525 A CN201710150525 A CN 201710150525A CN 106967168 A CN106967168 A CN 106967168A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- collagen
- east china
- sea
- sea cucumbers
- black
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims abstract description 58
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims abstract description 58
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims abstract description 58
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 title claims abstract description 25
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 title claims abstract description 25
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 title description 32
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 title description 32
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 title description 32
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 title description 32
- 241000251511 Holothuroidea Species 0.000 claims abstract description 39
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims abstract description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 13
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 12
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 11
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 11
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 claims description 10
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 claims description 10
- 239000002002 slurry Substances 0.000 claims description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 7
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims description 5
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims description 5
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims description 5
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 claims description 5
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 claims description 5
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 claims description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 5
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 5
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims description 5
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 5
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 5
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 claims description 5
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 claims description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims 1
- 210000002318 cardia Anatomy 0.000 claims 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 claims 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims 1
- 238000005360 mashing Methods 0.000 claims 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 claims 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 claims 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 19
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 13
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 abstract description 9
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 abstract description 9
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 abstract description 2
- 238000010009 beating Methods 0.000 abstract description 2
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 abstract description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 abstract description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 abstract description 2
- 235000009849 Cucumis sativus Nutrition 0.000 abstract 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 8
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 4
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 4
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 3
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 3
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 241001083841 Aquatica Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 description 1
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000879 anti-atherosclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 238000012993 chemical processing Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 description 1
- 229940126578 oral vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 1
- 230000037394 skin elasticity Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一种东海乌参胶原蛋白低聚肽的制备方法，将东海乌参浸泡打浆、不同阶段酶解后进行冷冻干燥或喷雾干燥得到海参胶原蛋白肽。本发明的制备方法生产周期短，得率高，产品纯度高，具有显著的抗氧化性，可溶性好，吸收性高，无异味和苦味；使海参得到充分的高值化加工利用。
Description
技术领域
本发明涉及一种胶原蛋白肽的制备，尤其涉及一种东海乌参胶原蛋白低聚肽的制备方法。
背景技术
胶原多肽是胶原或明胶经蛋白酶等降解处理后制得的介于蛋白质和氨基酸之间的产物，一般将由2到10个氨基酸通过肽键形成的直链肽称为寡肽或小肽；由肽键结合起来的多于10个氨基酸的聚合体则称为多肽。近年来，很多学者对肽的消化吸收机制进行了研究，认为肽甚至相当量的蛋白质在动物体内可以被完整吸收并被机体利用，如口服疫苗和酶法治疗疾病。肽的转运系统和游离氨基酸相比转运速度更快。许多试验表明，肽的添加还可以提高氨基酸的吸收速度。此外肽还能促进蛋白质沉积率，因为肽能直接用于人体蛋白质的合成。长期食用经过添加胶原蛋白肽的食品有助于改善皮肤弹性，延缓衰老，增强免疫力，同时食用方便，适合于大众人群。
海参是重要的海洋食物和药物资源。全世界有1000多种海参，其中40多种可供食用。近年来，我国海参养殖业发展极快，海参年产量已超过6万吨。因此，亟待进一步开发海参的高值化加工技术。海参体壁含有结构独特的活性物质如海参胶原蛋白、海参多糖、海参皂苷等。药理实验证明，海参具有抗肿瘤、提高免疫功能、降血脂、抗凝血、抗动脉粥样硬化等多种生理活性。目前，国内外对海参活性成分的研究和开发主要集中在海参多糖和海参皂苷等方面。
海参胶原蛋白含量占海参体壁粗蛋白的60％以上，有关海参胶原蛋白类型和理化性质的研究已有报道(Comp Biochem Physiol，1995，112A：463-478；Food ChemistryandToxicology，2002，67(4)：1319-132；水产学报，2006，4：549-553)，中国发明专利CN101215315A也公开了一种在低温下(0-25℃)利用胃蛋白酶促溶提取海参胶原蛋白的方法。与胶原蛋白相比，胶原蛋白肽具有更易吸收和高生理活性等特点。有关海参多肽的研究已有报道，目前已公开的发明专利有CN 1858222A和CN 101191139A。这些研究中所述的海参多肽是一种至少包括海参皂苷、蛋白多肽和胶原多肽等活性物质的混合物。有关海参胶原蛋白活性肽尚未见报道。
发明内容
本发明提供了一种提高纯度与提取率，去除苦腥味、提高口感、利于人体吸收的东海乌参胶原蛋白低聚肽的制备方法。
本发明通过以下技术方案：
一种东海乌参胶原蛋白低聚肽的制备方法，包括如下工艺步骤：
a.选取新鲜东海乌参为原料，4℃清水浸泡50-60min，捞出去除内脏后切成小块，用浸泡液浸泡搅拌5天，捞出后使用打浆机进行打浆处理，加入35-40倍体积的纯净水后采用胶体磨进行研磨细化处理，得浆状物；
b.将步骤a得到的浆状物加入乙酸进行提取2-3天，离心合并上清液，加入添加剂静置20-30min后15000r/min离心5min得到沉淀物，经盐析、透析后冻干得到东海乌参胶原蛋白；
c.在步骤b得到的东海乌参胶原蛋白中，加入东海乌参胶原蛋白重量0.1-2％的胃蛋白酶，打开电脑微波-超声波组合催化合成仪对酶解物进行超声波-微波辅助酶解，其中超声波的探头插入深度固定不变，微波功率800W、超声功率250W、超声-微波处理温度为41℃条件下处理15分钟后，继续酶解2h，加入东海乌参胶原蛋白重量0.2-0.5％的胰蛋白酶与1-3％的木瓜蛋白酶酶解30min，最后加入东海乌参胶原蛋白重量0.3-0.5％的丝氨酸蛋白酶继续酶解45min，升温至120℃灭酶30min，得到酶解液；
d步骤c得到的酶解液在-20℃预冻1h，然后在-70℃冷阱温度和＜150Pa真空度的条件下冷冻干燥8-10h，直接得到东海乌参胶原蛋白低聚肽；或者，步骤c得到的酶解液采用孔径为0.1-0.5μm的管式膜脱除大分子，然后采用截留分子量为3kDa的超滤膜截留分级，截留液采用纳滤膜浓缩脱盐，然后在175-185℃进风温度、75-85℃出风温度和0.35-0.45MPa喷雾压力的条件下喷雾干燥，得到东海乌参胶原蛋白低聚肽。在本技术方案中，步骤a中用浸泡液浸泡是为了去除钙、铁、锰、镁、铝、铅等污染元素。
作为优选，步骤a中浸泡液为0.2M EDTA，pH8.0。
作为优选，步骤b中乙酸的含量为0.5M乙酸，其中含质量分数为0.1％胃蛋白酶。
作为优选，步骤b中添加剂由以下重量份的原料组成：食盐5-7份、果糖6-10份、盐酸硫胺素6-8份、谷氨酰胺10-15份与丝氨酸12-15份，添加剂的加入量为上清液质量的10-15％。
作为优选，步骤a中用浸泡液浸泡时，每隔12h更换一次浸泡液。
本发明的有益效果是：本发明的制备方法生产周期短，得率高，产品纯度高，具有显著的抗氧化性，可溶性好，吸收性高，无异味和苦味；使海参得到充分的高值化加工利用，大大提高胶原蛋白低聚肽(分子量<1000Da)收率，最大收率可达80％以上。
具体实施方式
为使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案，但这些阐述并不对本发明做任何形式上的限定。除另有说明，否则本发明所用的所有科学和技术术语具有本发明所属和相关领域的一般技术人员通常所理解的含义。
下面结合具体实施例对本发明做出进一步详细的阐述，但应当明白，实施例不应理解为对本发明保护范围的限制。
实施例1
一种东海乌参胶原蛋白低聚肽的制备方法，包括如下工艺步骤：
a.选取新鲜东海乌参为原料，4℃清水浸泡50min，捞出去除内脏后切成小块，用浸泡液浸泡搅拌5天，每隔12h更换一次浸泡液；捞出后使用打浆机进行打浆处理，加入35倍体积的纯净水后采用胶体磨进行研磨细化处理，得浆状物；浸泡液为0.2M EDTA，pH8.0；
b.将步骤a得到的浆状物加入含质量分数为0.1％胃蛋白酶的0.5M乙酸，其中进行提取2天，离心合并上清液，加入添加剂静置20min后15000r/min离心5min得到沉淀物，经盐析、透析后冻干得到东海乌参胶原蛋白；添加剂由以下重量份的原料组成：食盐5份、果糖6份、盐酸硫胺素6份、谷氨酰胺10份与丝氨酸12份，添加剂的加入量为上清液质量的10％；
c.在步骤b得到的东海乌参胶原蛋白中，加入东海乌参胶原蛋白重量0.1％的胃蛋白酶，打开电脑微波-超声波组合催化合成仪对酶解物进行超声波-微波辅助酶解，其中超声波的探头插入深度固定不变，微波功率800W、超声功率250W、超声-微波处理温度为41℃条件下处理15分钟后，继续酶解2h，加入东海乌参胶原蛋白重量0.2％的胰蛋白酶与1％的木瓜蛋白酶酶解30min，最后加入东海乌参胶原蛋白重量0.3％的丝氨酸蛋白酶继续酶解45min，升温至120℃灭酶30min，得到酶解液；
d步骤c得到的酶解液在-20℃预冻1h，然后在-70℃冷阱温度和＜150Pa真空度的条件下冷冻干燥8h，直接得到东海乌参胶原蛋白低聚肽；或者，步骤c得到的酶解液采用孔径为0.1-0.5μm的管式膜脱除大分子，然后采用截留分子量为3kDa的超滤膜截留分级，截留液采用纳滤膜浓缩脱盐，然后在175℃进风温度、75℃出风温度和0.35MPa喷雾压力的条件下喷雾干燥，得到东海乌参胶原蛋白低聚肽。收率为85％。
实施例2
一种东海乌参胶原蛋白低聚肽的制备方法，包括如下工艺步骤：
a.选取新鲜东海乌参为原料，4℃清水浸泡55min，捞出去除内脏后切成小块，用浸泡液浸泡搅拌5天，每隔12h更换一次浸泡液；捞出后使用打浆机进行打浆处理，加入37倍体积的纯净水后采用胶体磨进行研磨细化处理，得浆状物；浸泡液为0.2M EDTA，pH8.0；
b.将步骤a得到的浆状物加入含质量分数为0.1％胃蛋白酶的0.5M乙酸，其中进行提取3天，离心合并上清液，加入添加剂静置25min后15000r/min离心5min得到沉淀物，经盐析、透析后冻干得到东海乌参胶原蛋白；添加剂由以下重量份的原料组成：食盐6份、果糖8份、盐酸硫胺素7份、谷氨酰胺12份与丝氨酸13份，添加剂的加入量为上清液质量的12％；
c.在步骤b得到的东海乌参胶原蛋白中，加入东海乌参胶原蛋白重量0.5％的胃蛋白酶，打开电脑微波-超声波组合催化合成仪对酶解物进行超声波-微波辅助酶解，其中超声波的探头插入深度固定不变，微波功率800W、超声功率250W、超声-微波处理温度为41℃条件下处理15分钟后，继续酶解2h，加入东海乌参胶原蛋白重量0.3％的胰蛋白酶与2％的木瓜蛋白酶酶解30min，最后加入东海乌参胶原蛋白重量0.4％的丝氨酸蛋白酶继续酶解45min，升温至120℃灭酶30min，得到酶解液；
d步骤c得到的酶解液在-20℃预冻1h，然后在-70℃冷阱温度和＜150Pa真空度的条件下冷冻干燥9h，直接得到东海乌参胶原蛋白低聚肽；或者，步骤c得到的酶解液采用孔径为0.1-0.5μm的管式膜脱除大分子，然后采用截留分子量为3kDa的超滤膜截留分级，截留液采用纳滤膜浓缩脱盐，然后在180℃进风温度、80℃出风温度和0.4MPa喷雾压力的条件下喷雾干燥，得到东海乌参胶原蛋白低聚肽。收率为88％。
实施例3
一种东海乌参胶原蛋白低聚肽的制备方法，包括如下工艺步骤：
a.选取新鲜东海乌参为原料，4℃清水浸泡60min，捞出去除内脏后切成小块，用浸泡液浸泡搅拌5天，每隔12h更换一次浸泡液；捞出后使用打浆机进行打浆处理，加入40倍体积的纯净水后采用胶体磨进行研磨细化处理，得浆状物；浸泡液为0.2M EDTA，pH8.0；
b.将步骤a得到的浆状物加入含质量分数为0.1％胃蛋白酶的0.5M乙酸，其中进行提取3天，离心合并上清液，加入添加剂静置30min后15000r/min离心5min得到沉淀物，经盐析、透析后冻干得到东海乌参胶原蛋白；添加剂由以下重量份的原料组成：食盐7份、果糖10份、盐酸硫胺素8份、谷氨酰胺15份与丝氨酸15份，添加剂的加入量为上清液质量的15％；
c.在步骤b得到的东海乌参胶原蛋白中，加入东海乌参胶原蛋白重量2％的胃蛋白酶，打开电脑微波-超声波组合催化合成仪对酶解物进行超声波-微波辅助酶解，其中超声波的探头插入深度固定不变，微波功率800W、超声功率250W、超声-微波处理温度为41℃条件下处理15分钟后，继续酶解2h，加入东海乌参胶原蛋白重量0.5％的胰蛋白酶与3％的木瓜蛋白酶酶解30min，最后加入东海乌参胶原蛋白重量0.5％的丝氨酸蛋白酶继续酶解45min，升温至120℃灭酶30min，得到酶解液；
d步骤c得到的酶解液在-20℃预冻1h，然后在-70℃冷阱温度和＜150Pa真空度的条件下冷冻干燥10h，直接得到东海乌参胶原蛋白低聚肽；或者，步骤c得到的酶解液采用孔径为0.1-0.5μm的管式膜脱除大分子，然后采用截留分子量为3kDa的超滤膜截留分级，截留液采用纳滤膜浓缩脱盐，然后在185℃进风温度、85℃出风温度和0.45MPa喷雾压力的条件下喷雾干燥，得到东海乌参胶原蛋白低聚肽。收率为82％。
本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备；本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变换，均仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (5)
1.一种东海乌参胶原蛋白低聚肽的制备方法，其特征在于，包括如下工艺步骤：
a.选取新鲜东海乌参为原料，4℃清水浸泡50-60min，捞出去除内脏后切成小块，用浸泡液浸泡搅拌5天，捞出后使用打浆机进行打浆处理，加入35-40倍体积的纯净水后采用胶体磨进行研磨细化处理，得浆状物；
b.将步骤a得到的浆状物加入乙酸进行提取2-3天，离心合并上清液，加入添加剂静置20-30min后15000r/min离心5min得到沉淀物，经盐析、透析后冻干得到东海乌参胶原蛋白；
c.在步骤b得到的东海乌参胶原蛋白中，加入东海乌参胶原蛋白重量0.1-2％的胃蛋白酶，打开电脑微波-超声波组合催化合成仪对酶解物进行超声波-微波辅助酶解，其中超声波的探头插入深度固定不变，微波功率800W、超声功率250W、超声-微波处理温度为41℃条件下处理15分钟后，继续酶解2h，加入东海乌参胶原蛋白重量0.2-0.5％的胰蛋白酶与1-3％的木瓜蛋白酶酶解30min，最后加入东海乌参胶原蛋白重量0.3-0.5％的丝氨酸蛋白酶继续酶解45min，升温至120℃灭酶30min，得到酶解液；
d步骤c得到的酶解液在-20℃预冻1h，然后在-70℃冷阱温度和＜150Pa真空度的条件下冷冻干燥8-10h，直接得到东海乌参胶原蛋白低聚肽；或者，步骤c得到的酶解液采用孔径为0.1-0.5μm的管式膜脱除大分子，然后采用截留分子量为3kDa的超滤膜截留分级，截留液采用纳滤膜浓缩脱盐，然后在175-185℃进风温度、75-85℃出风温度和0.35-0.45MPa喷雾压力的条件下喷雾干燥，得到东海乌参胶原蛋白低聚肽。
2.根据权利要求1所述的一种东海乌参胶原蛋白低聚肽的制备方法，其特征在于，步骤a中浸泡液为0.2M EDTA，pH8.0。
3.根据权利要求1所述的一种东海乌参胶原蛋白低聚肽的制备方法，其特征在于，步骤b中乙酸的含量为0.5M乙酸，其中含质量分数为0.1％胃蛋白酶。
4.根据权利要求1所述的一种东海乌参胶原蛋白低聚肽的制备方法，其特征在于，步骤b中添加剂由以下重量份的原料组成：食盐5-7份、果糖6-10份、盐酸硫胺素6-8份、谷氨酰胺10-15份与丝氨酸12-15份，添加剂的加入量为上清液质量的10-15％。
5.根据权利要求1所述的一种东海乌参胶原蛋白低聚肽的制备方法，其特征在于，步骤a中用浸泡液浸泡时，每隔12h更换一次浸泡液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710150525.7A CN106967168A (zh) | 2017-03-14 | 2017-03-14 | 一种东海乌参胶原蛋白低聚肽的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710150525.7A CN106967168A (zh) | 2017-03-14 | 2017-03-14 | 一种东海乌参胶原蛋白低聚肽的制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106967168A true CN106967168A (zh) | 2017-07-21 |
Family
ID=59328535
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710150525.7A Pending CN106967168A (zh) | 2017-03-14 | 2017-03-14 | 一种东海乌参胶原蛋白低聚肽的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106967168A (zh) |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107586819A (zh) * | 2017-09-27 | 2018-01-16 | 舟山达康科技有限公司 | 一种蛋白酶酶解法制备蛋白肽的方法 |
| CN107822147A (zh) * | 2017-11-13 | 2018-03-23 | 中国科学院兰州化学物理研究所 | 一种海地瓜降压肽及其制备的冲剂 |
| CN108192938A (zh) * | 2018-01-16 | 2018-06-22 | 浙江海洋大学 | 一种东海乌参胶原蛋白抗菌肽的制备方法 |
| CN108208306A (zh) * | 2017-12-15 | 2018-06-29 | 黑龙江珍宝岛药业股份有限公司 | 一种海参肽提取工艺及其应用 |
| CN108294163A (zh) * | 2018-02-06 | 2018-07-20 | 吉林大学 | 超声波-微波辅助酶解河蚌蛋白工艺 |
| CN108410934A (zh) * | 2018-03-19 | 2018-08-17 | 温州科技职业学院 | 一种海地瓜胶原蛋白低聚肽的制备方法 |
| CN108588051A (zh) * | 2018-05-10 | 2018-09-28 | 浙江海洋大学 | 一种用于制备手性苯基乙二醇的环氧化物水解酶的制备方法 |
| CN108611391A (zh) * | 2018-05-10 | 2018-10-02 | 浙江海洋大学 | 一种东海乌参胶原蛋白低聚肽的修饰方法及其应用 |
| CN108617912A (zh) * | 2018-05-10 | 2018-10-09 | 浙江海洋大学 | 一种含牛磺酸乌参胶原蛋白寡肽功能饮料的制备方法 |
| CN109652869A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-04-19 | 江苏康溢臣生命科技有限公司 | 一种胶原多肽再生纤维素纤维及其制备方法 |
| CN113796476A (zh) * | 2020-06-16 | 2021-12-17 | 中国热带农业科学院农产品加工研究所 | 一种白沙参抗疲劳多肽复合饮料及其制备方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102251006A (zh) * | 2011-07-29 | 2011-11-23 | 宁波超星海洋生物制品有限公司 | 一种东海乌参胶原蛋白的制造方法 |
| CN102649974A (zh) * | 2012-05-14 | 2012-08-29 | 上海海洋大学 | 一种超声波-微波协同酶解制备抗氧化肽的方法 |
| CN103184262A (zh) * | 2013-03-22 | 2013-07-03 | 浙江工业大学 | 一种东海乌参酶溶性胶原蛋白的提取纯化方法 |
| CN104878062A (zh) * | 2015-05-18 | 2015-09-02 | 华南理工大学 | 一种微生物法制备海洋鱼蛋白降血压肽的方法 |
-
2017
- 2017-03-14 CN CN201710150525.7A patent/CN106967168A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102251006A (zh) * | 2011-07-29 | 2011-11-23 | 宁波超星海洋生物制品有限公司 | 一种东海乌参胶原蛋白的制造方法 |
| CN102649974A (zh) * | 2012-05-14 | 2012-08-29 | 上海海洋大学 | 一种超声波-微波协同酶解制备抗氧化肽的方法 |
| CN103184262A (zh) * | 2013-03-22 | 2013-07-03 | 浙江工业大学 | 一种东海乌参酶溶性胶原蛋白的提取纯化方法 |
| CN104878062A (zh) * | 2015-05-18 | 2015-09-02 | 华南理工大学 | 一种微生物法制备海洋鱼蛋白降血压肽的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 童静静: "东海乌参蛋白肽的酶法制取及精制研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技I辑》 * |
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107586819B (zh) * | 2017-09-27 | 2021-06-08 | 舟山市常青海洋食品有限公司 | 一种蛋白酶酶解法制备蛋白肽的方法 |
| CN107586819A (zh) * | 2017-09-27 | 2018-01-16 | 舟山达康科技有限公司 | 一种蛋白酶酶解法制备蛋白肽的方法 |
| CN107822147A (zh) * | 2017-11-13 | 2018-03-23 | 中国科学院兰州化学物理研究所 | 一种海地瓜降压肽及其制备的冲剂 |
| CN108208306A (zh) * | 2017-12-15 | 2018-06-29 | 黑龙江珍宝岛药业股份有限公司 | 一种海参肽提取工艺及其应用 |
| CN108192938A (zh) * | 2018-01-16 | 2018-06-22 | 浙江海洋大学 | 一种东海乌参胶原蛋白抗菌肽的制备方法 |
| CN108294163A (zh) * | 2018-02-06 | 2018-07-20 | 吉林大学 | 超声波-微波辅助酶解河蚌蛋白工艺 |
| CN108410934A (zh) * | 2018-03-19 | 2018-08-17 | 温州科技职业学院 | 一种海地瓜胶原蛋白低聚肽的制备方法 |
| CN108588051A (zh) * | 2018-05-10 | 2018-09-28 | 浙江海洋大学 | 一种用于制备手性苯基乙二醇的环氧化物水解酶的制备方法 |
| CN108617912A (zh) * | 2018-05-10 | 2018-10-09 | 浙江海洋大学 | 一种含牛磺酸乌参胶原蛋白寡肽功能饮料的制备方法 |
| CN108611391A (zh) * | 2018-05-10 | 2018-10-02 | 浙江海洋大学 | 一种东海乌参胶原蛋白低聚肽的修饰方法及其应用 |
| CN109652869A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-04-19 | 江苏康溢臣生命科技有限公司 | 一种胶原多肽再生纤维素纤维及其制备方法 |
| CN109652869B (zh) * | 2018-12-21 | 2021-07-13 | 江苏康溢臣生命科技有限公司 | 一种胶原多肽再生纤维素纤维及其制备方法 |
| CN113796476A (zh) * | 2020-06-16 | 2021-12-17 | 中国热带农业科学院农产品加工研究所 | 一种白沙参抗疲劳多肽复合饮料及其制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106967168A (zh) | 一种东海乌参胶原蛋白低聚肽的制备方法 | |
| CN109735591B (zh) | 一种牛骨胶原蛋白肽及其生产方法 | |
| CN103598544A (zh) | 以大蒜为原料进行综合利用的提取工艺 | |
| CN102232574B (zh) | 一种高压蒸煮酶解法制备鳗鱼头脂肪、蛋白和骨粉的方法 | |
| CN102391549A (zh) | 一种黄秋葵水溶性多糖喷雾干燥粉的制备方法 | |
| CN104513843A (zh) | 一种多糖和蛋白肽的联合制备方法 | |
| CN102232464A (zh) | 一种花生分离蛋白的制备方法 | |
| CN105255979B (zh) | 一种同步制取沙丁鱼油与鲜味肽的方法 | |
| CN110734948A (zh) | 一种从大豆中提取硒多肽的提取装置及工艺 | |
| CN105779542A (zh) | 一种酶法制备有机菜籽多肽的方法 | |
| CN111635923A (zh) | 一种鳗鱼免疫调节糖肽及其高效制备方法 | |
| CN106749151A (zh) | 一种蓝莓果渣花青素的快速提取方法 | |
| CN106755240A (zh) | 一种微波/超声波辅助、微生物蛋白酶水解制备乌参胶原蛋白低聚肽的方法 | |
| CN107502645B (zh) | 一种椰子多肽的制备方法 | |
| CN102080107A (zh) | 微波辅助蛋白酶水解同步制备核桃油和核桃蛋白肽的方法 | |
| CN113785860B (zh) | 香菇多糖-鱼鳞胶原蛋白肽共轭物的制备方法及其应用 | |
| CN108546281A (zh) | 一种人参低聚肽及其制备方法和应用 | |
| CN109170922B (zh) | 一种麦麸可溶性膳食纤维的制备方法 | |
| CN105238545A (zh) | 一种小分子甲鱼肽和甲鱼油联产的制备方法 | |
| CN117562205B (zh) | 一种鱿鱼内脏酶解液的脱镉方法 | |
| CN104531814B (zh) | 一种油茶粕酶法改性蛋白的制备方法 | |
| CN106591408A (zh) | 一种微生物发酵法制备的海参胶原蛋白肽的方法 | |
| CN107686856B (zh) | 一种火龙果花蛋白多肽的制备方法 | |
| CN109400699A (zh) | 甲鱼肽的制备方法 | |
| CN106188329A (zh) | 一种扇贝多糖的提取方法和制品 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20170721 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |