CN106800598A - 一种抗体保存液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗体保存液，抗体保存液包括：缓冲液、4‑6%海藻糖、0.005‑0.01%叠氮钠、30%‑50%甘油、0.002‑0.0025%第一多肽、0.002‑0.0025%第二多肽，其中，缓冲液为pH7.0‑7.5、40‑100mmol/L Tris‑HCl缓冲液，海藻糖、叠氮钠、甘油、第一多肽、第二多肽的浓度均为质量比，第一多肽的氨基酸序列为Val‑Pro‑Thr‑Gly‑Ala‑Pro，第二多肽的氨基酸序列为Ile‑Pro‑Gly‑Pro‑Val‑Gly。本发明还公开一种抗体保存液的制备方法。本发明抗体保存液可在室温下长期保存抗体，且可使抗体保持较高的活性。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种抗体保存液及其制备方法。
背景技术
抗体指机体的免疫系统在抗原的刺激下，由B淋巴细胞分化成的浆细胞产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。由于抗体能够特异、稳定地结合特异性抗原，因此被广泛应用。在抗体利用过程中，其保存得当与否，直接影响抗体的活性和使用效果，对于多数抗体而言，通常进行低温保存，利用此方式保存，由于抗体进行反复冻融，会导致抗体变性、多聚体产生，从而降低抗体活性。
如何提供一种可在室温下长期保存的抗体保存液，是抗体应用领域亟待解决的问题之一。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是提供一种抗体保存液及其制备方法，可在室温下长期保存抗体，且可使抗体保持较高的活性。
为解决上述技术问题，本发明提供一种抗体保存液，抗体保存液包括：缓冲液、4-6%海藻糖、0.005-0.01%叠氮钠、30%-50%甘油、0.002-0.0025%第一多肽、0.002-0.0025%第二多肽，其中，缓冲液为pH7.0-7.5、40-100mmol/L Tris-HCl缓冲液，海藻糖、叠氮钠、甘油、第一多肽、第二多肽的浓度均为质量比，第一多肽的氨基酸序列为Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Pro，第二多肽的氨基酸序列为Ile-Pro-Gly-Pro-Val-Gly。
其中，抗体保存液包括：缓冲液、4.5-5.5%海藻糖、0.006-0.009%叠氮钠、35%-45%甘油、0.0021-0.0024%第一多肽、0.0021-0.0024%第二多肽，缓冲液为pH7.0-7.5、45-90mmol/L Tris-HCl缓冲液，海藻糖、叠氮钠、甘油、第一多肽、第二多肽的浓度均为质量比，第一多肽的氨基酸序列为Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Pro，第二多肽的氨基酸序列为Ile-Pro-Gly-Pro-Val-Gly。
其中，抗体保存液包括：缓冲液、5%海藻糖、0.007%叠氮钠、40%甘油、0.0022%第一多肽、0.0022%第二多肽，缓冲液为pH7.2、50mmol/L Tris-HCl缓冲液，海藻糖、叠氮钠、甘油、第一多肽、第二多肽的浓度均为质量比，第一多肽的氨基酸序列为Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Pro，第二多肽的氨基酸序列为Ile-Pro-Gly-Pro-Val-Gly。
其中，质量比为g/L。
为解决上述技术问题，本发明提供一种抗体保存液的制备方法，包括以下步骤：在pH7.0-7.5、40-100mmol/L Tris-HCl缓冲液中加入4-6%海藻糖、0.005-0.01%叠氮钠、30%-50%甘油、0.002-0.0025%第一多肽、0.002-0.0025%第二多肽，混合均匀，制备得到抗体保存液；其中，海藻糖、叠氮钠、甘油、第一多肽、第二多肽的浓度均为质量比，第一多肽的氨基酸序列为Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Pro，第二多肽的氨基酸序列为Ile-Pro-Gly-Pro-Val-Gly。
其中，抗体保存液包括：缓冲液、4.5-5.5%海藻糖、0.006-0.009%叠氮钠、35%-45%甘油、0.0021-0.0024%第一多肽、0.0021-0.0024%第二多肽；缓冲液为pH7.0-7.5、45-90mmol/L Tris-HCl缓冲液。
其中，抗体保存液包括：缓冲液、5%海藻糖、0.007%叠氮钠、40%甘油、0.0022%第一多肽、0.0022%第二多肽；缓冲液为pH7.2、50mmol/L Tris-HCl缓冲液。
其中，质量比为g/L。
本发明的有益效果是：区别于现有技术的情况，本发明的抗体保存液包括：缓冲液、4-6%海藻糖、0.005-0.01%叠氮钠、30%-50%甘油、0.002-0.0025%第一多肽、0.002-0.0025%第二多肽，其中，缓冲液为pH7.0-7.5、40-100mmol/L Tris-HCl缓冲液，第一多肽的氨基酸序列为Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Pro，第二多肽的氨基酸序列为Ile-Pro-Gly-Pro-Val-Gly。上述组分的保存液具有以下特点：可在室温下长期保存抗体，且抗体保持较高的活性，其中，室温为26-29℃，保存期限为7年以上；第一多肽和第二多肽的加入，可防止保存液中的物质水解、酶解，使保存液中的物质保持稳定，具体为，第一多肽用于防止水解，第二多肽用于防止蛋白酶解。
具体实施方式
实施例1
抗体保存液的制备方法如下：在pH7.2、50mmol/L Tris-HCl缓冲液中加入5%海藻糖、0.007%叠氮钠、40%甘油、0.0022%第一多肽、0.0022%第二多肽，混合均匀，制备得到抗体保存液。其中，海藻糖、叠氮钠、甘油、第一多肽、第二多肽的浓度均为质量比，具体为g/L；第一多肽的氨基酸序列为Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Pro，第二多肽的氨基酸序列为Ile-Pro-Gly-Pro-Val-Gly。
下面对不同方式保存的抗体的活性进行检测，以说明本实施例抗体保存液的效用。抗体保存方式有：采用实施例1制备的抗体保存液保存抗体；现有室温抗体保存液保存抗体；现有低温（-20℃）抗体保存液保存抗体。其中，抗体为生长激素单克隆抗体，各保存方式均保存抗体1年。对于抗体活性的检测，采用酶联免疫吸附剂测定（enzyme linkedimmunosorbent assay，ELISA）进行检测。
检测方法具体为：将生长激素抗原用含5ppm Proclin300的0.05mol/L、pH9.6的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液进行稀释，以获得包被液，其中，包被液中生长激素抗原的浓度为10μg/ml；封闭液为含5.0g/L海藻糖、0.5%BSA的0.05mol/L、pH9.6的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液；在空白反应板中加入包被液90μl/孔，37℃温箱中孵育2h，倒去残液，在洗板机上用洗涤液PBST洗涤3次，拍干；加入封闭液200μl/孔，25℃孵育过夜，倒去残液，在洗板机上用洗涤液PBST洗涤3次，拍干；加入上述不同方式保存的抗体90μl/孔，37℃温箱中孵育1h，倒去残液，在洗板机上用洗涤液PBST洗涤3次，拍干；加入酶标抗体90μl/孔，37℃温箱中孵育1h，倒去残液，在洗板机上用洗涤液PBST洗涤3次，拍干；加入新鲜配制的显色液90μl/孔，避光置37℃温箱20min；加入硫酸终止反应；在酶标仪上测定450nm波长处各孔的吸光值。其中，不同方式保存的抗体的浓度相同，抗体的稀释度均为1:4000。
检测结果：实施例1制备的抗体保存液保存的抗体的吸光值为1.9，现有室温抗体保存液保存的抗体的吸光值为0.5，现有低温（-20℃）抗体保存液保存的抗体的吸光值为1.1。
根据检测结果，说明在同等条件下，实施例1制备的抗体保存液保存的抗体的活性高于其他方式保存的抗体的活性。
实施例2
抗体保存液的制备方法如下：在pH7.2、50mmol/L Tris-HCl缓冲液中加入5.3%海藻糖、0.008%叠氮钠、43%甘油、0.0023%第一多肽、0.0023%第二多肽，混合均匀，制备得到抗体保存液。其中，海藻糖、叠氮钠、甘油、第一多肽、第二多肽的浓度均为质量比，具体为g/L；第一多肽的氨基酸序列为Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Pro，第二多肽的氨基酸序列为Ile-Pro-Gly-Pro-Val-Gly。
下面对不同方式保存的抗体的活性进行检测，以说明本实施例抗体保存液的效用。抗体保存方式有：采用实施例2制备的抗体保存液保存抗体；现有室温抗体保存液保存抗体；现有低温（-20℃）抗体保存液保存抗体。其中，抗体为生长激素单克隆抗体，各保存方式均保存抗体1年。对于抗体活性的检测，采用酶联免疫吸附剂测定进行检测。
检测方法具体为：将生长激素抗原用含5ppm Proclin300的0.05mol/L、pH9.6的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液进行稀释，以获得包被液，其中，包被液中生长激素抗原的浓度为10μg/ml；封闭液为含5.0g/L海藻糖、0.5%BSA的0.05mol/L、pH9.6的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液；在空白反应板中加入包被液90μl/孔，37℃温箱中孵育2h，倒去残液，在洗板机上用洗涤液PBST洗涤3次，拍干；加入封闭液200μl/孔，25℃孵育过夜，倒去残液，在洗板机上用洗涤液PBST洗涤3次，拍干；加入上述不同方式保存的抗体90μl/孔，37℃温箱中孵育1h，倒去残液，在洗板机上用洗涤液PBST洗涤3次，拍干；加入酶标抗体90μl/孔，37℃温箱中孵育1h，倒去残液，在洗板机上用洗涤液PBST洗涤3次，拍干；加入新鲜配制的显色液90μl/孔，避光置37℃温箱20min；加入硫酸终止反应；在酶标仪上测定450nm波长处各孔的吸光值。其中，不同方式保存的抗体的浓度相同，抗体的稀释度均为1:4000。
检测结果：实施例2制备的抗体保存液保存的抗体的吸光值为1.95，现有室温抗体保存液保存的抗体的吸光值为0.5，现有低温（-20℃）抗体保存液保存的抗体的吸光值为1.1。
根据检测结果，说明在同等条件下，实施例2制备的抗体保存液保存的抗体的活性高于其他方式保存的抗体的活性。
对比例1
抗体保存液的制备方法如下：在pH7.2、50mmol/L Tris-HCl缓冲液中加入5%海藻糖、0.007%叠氮钠、40%甘油、0.0022%第一多肽，混合均匀，制备得到抗体保存液。其中，海藻糖、叠氮钠、甘油、第一多肽的浓度均为质量比，具体为g/L；第一多肽的氨基酸序列为Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Pro。
对比例2
抗体保存液的制备方法如下：在pH7.2、50mmol/L Tris-HCl缓冲液中加入5%海藻糖、0.007%叠氮钠、40%甘油、0.0022%第二多肽，混合均匀，制备得到抗体保存液。其中，海藻糖、叠氮钠、甘油、第二多肽的浓度均为质量比，具体为g/L；第二多肽的氨基酸序列为Ile-Pro-Gly-Pro-Val-Gly。
下面对不同抗体保存液保存的抗体的活性进行检测，以说明本发明抗体保存液的效用。抗体保存液有：实施例1制备的抗体保存液；实施例2制备的抗体保存液；对比例1制备的抗体保存液；对比例2制备的抗体保存液。其中，保存的抗体为生长激素单克隆抗体，各抗体保存液保存抗体1年。对于抗体活性的检测，采用酶联免疫吸附剂测定进行检测。
检测方法具体为：将生长激素抗原用含5ppm Proclin300的0.05mol/L、pH9.6的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液进行稀释，以获得包被液，其中，包被液中生长激素抗原的浓度为10μg/ml；封闭液为含5.0g/L海藻糖、0.5%BSA的0.05mol/L、pH9.6的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液；在空白反应板中加入包被液90μl/孔，37℃温箱中孵育2h，倒去残液，在洗板机上用洗涤液PBST洗涤3次，拍干；加入封闭液200μl/孔，25℃孵育过夜，倒去残液，在洗板机上用洗涤液PBST洗涤3次，拍干；加入上述不同保存液保存的抗体90μl/孔，37℃温箱中孵育1h，倒去残液，在洗板机上用洗涤液PBST洗涤3次，拍干；加入酶标抗体90μl/孔，37℃温箱中孵育1h，倒去残液，在洗板机上用洗涤液PBST洗涤3次，拍干；加入新鲜配制的显色液90μl/孔，避光置37℃温箱20min；加入硫酸终止反应；在酶标仪上测定450nm波长处各孔的吸光值。其中，不同保存液保存的抗体的浓度相同，抗体的稀释度均为1:4000。
检测结果：实施例1制备的抗体保存液保存的抗体的吸光值为1.9，实施例2制备的抗体保存液保存的抗体的吸光值为1.95，对比例1制备的抗体保存液保存的抗体的吸光值为1.2，对比例2制备的抗体保存液保存的抗体的吸光值为1.26。
根据检测结果，说明在同等条件下，本发明制备的抗体保存液保存的抗体的活性高于其他抗体保存液保存的抗体的活性。
综上所述，本发明抗体保存液具有以下特点：可在室温下长期保存抗体，且抗体保持较高的活性，其中，室温为26-29℃，保存期限为7年以上；第一多肽和第二多肽的加入，可防止保存液中的物质水解、酶解，使保存液中的物质保持稳定，具体为，第一多肽用于防止水解，第二多肽用于防止蛋白酶解。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
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<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Val Pro Thr Gly Ala Pro
1 5
<210> 2
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Ile Pro Gly Pro Val Gly
1 5
Claims (8)
1.一种抗体保存液，其特征在于，所述抗体保存液包括：缓冲液、4-6%海藻糖、0.005-0.01%叠氮钠、30%-50%甘油、0.002-0.0025%第一多肽、0.002-0.0025%第二多肽，其中，所述缓冲液为pH7.0-7.5、40-100mmol/L Tris-HCl缓冲液，所述海藻糖、叠氮钠、甘油、第一多肽、第二多肽的浓度均为质量比，所述第一多肽的氨基酸序列为Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Pro，所述第二多肽的氨基酸序列为Ile-Pro-Gly-Pro-Val-Gly。
2.根据权利要求1所述的抗体保存液，其特征在于，所述抗体保存液包括：缓冲液、4.5-5.5%海藻糖、0.006-0.009%叠氮钠、35%-45%甘油、0.0021-0.0024%第一多肽、0.0021-0.0024%第二多肽，其中，所述缓冲液为pH7.0-7.5、45-90mmol/L Tris-HCl缓冲液，所述海藻糖、叠氮钠、甘油、第一多肽、第二多肽的浓度均为质量比，所述第一多肽的氨基酸序列为Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Pro，所述第二多肽的氨基酸序列为Ile-Pro-Gly-Pro-Val-Gly。
3.根据权利要求2所述的抗体保存液，其特征在于，所述抗体保存液包括：缓冲液、5%海藻糖、0.007%叠氮钠、40%甘油、0.0022%第一多肽、0.0022%第二多肽，其中，所述缓冲液为pH7.2、50mmol/L Tris-HCl缓冲液，所述海藻糖、叠氮钠、甘油、第一多肽、第二多肽的浓度均为质量比，所述第一多肽的氨基酸序列为Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Pro，所述第二多肽的氨基酸序列为Ile-Pro-Gly-Pro-Val-Gly。
4.根据权利要求3所述的抗体保存液，其特征在于，所述质量比为g/L。
5.一种抗体保存液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
在pH7.0-7.5、40-100mmol/L Tris-HCl缓冲液中加入4-6%海藻糖、0.005-0.01%叠氮钠、30%-50%甘油、0.002-0.0025%第一多肽、0.002-0.0025%第二多肽，混合均匀，制备得到抗体保存液；
其中，所述海藻糖、叠氮钠、甘油、第一多肽、第二多肽的浓度均为质量比，所述第一多肽的氨基酸序列为Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Pro，所述第二多肽的氨基酸序列为Ile-Pro-Gly-Pro-Val-Gly。
6.根据权利要求5所述的抗体保存液的制备方法，其特征在于，所述抗体保存液包括：缓冲液、4.5-5.5%海藻糖、0.006-0.009%叠氮钠、35%-45%甘油、0.0021-0.0024%第一多肽、0.0021-0.0024%第二多肽；
其中，所述缓冲液为pH7.0-7.5、45-90mmol/L Tris-HCl缓冲液。
7.根据权利要求6所述的抗体保存液的制备方法，其特征在于，所述抗体保存液包括：缓冲液、5%海藻糖、0.007%叠氮钠、40%甘油、0.0022%第一多肽、0.0022%第二多肽；
其中，所述缓冲液为pH7.2、50mmol/L Tris-HCl缓冲液。
8.根据权利要求7所述的抗体保存液的制备方法，其特征在于，所述质量比为g/L。
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