CN106727857A - 一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法,通过将菟丝子原料粉粹后,加入乙醇加热回流进行粗提取,接着采用大孔树脂柱提纯,并用薄层色谱法检测分析洗脱液,收集具有高占比目标化合物的洗脱液并合并,最后将所得洗脱液制备成产品。本发明所述菟丝子含有苯丙素类化合物,本发明所述单体由双骈四氢呋喃环连接糖基组成,在中等极性溶剂中如正丁醇、乙酸乙酯等溶解性较好,并且具有一定水溶性。本发明采用60%乙醇煎煮提取,极性大孔树脂纯化,有目的的富集目标单体化合物群,成本低,收率高,容易实现产业化和规模化。该发明制备的胶囊剂、片剂、保健茶剂等,服用方便化、具有多元化特点。
Description
技术领域
本发明涉及一种药食两用单体的制备方法,具体涉及一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法。
背景技术
中医药治疗高尿酸血症和原发性痛风的报道较多。在临床实践和日常生活中,人们发现一些能治疗高尿酸血症的行之有效的单味中药,其中很多药物的活性成分及药理作用已经被阐明。如萆薢、秦皮、白艾、朝鲜蓟、威灵仙、车前子、黄柏、金钱草、秦艽等有一定的降尿酸作用[1,2]。研究显示,淫羊藿、薏苡仁、泽泻、车前子、秦艽能增加尿酸排泄,秦艽还可增加尿酸的溶解;泽兰、当归可抑制尿酸合成。另有研究显示,秦皮、车前草、大黄、苍术可促尿酸从肾排除,大黄能促尿酸从大便排出体外;百合、山慈菇等具有类秋水仙碱样作用,可抑制白细胞趋化性,从而减轻痛风性关节炎的炎症反应;冬瓜皮、大腹皮、桑白皮、陈皮、木香、茯苓皮等行气利水药可提高内生肌酐清除率,增加尿量,排出尿酸,降低血尿酸[3,4]。
菟丝子为旋花科植物南方菟丝子(Cuscuta australis R.Br.)或菟丝子(Cuscutachinensis Lam.)的干燥成熟种子,甘、温,归肾、肝、脾经,具有滋补肝肾、固精缩尿、安胎、明目、止泻之功效。菟丝子的主要化学成分为树脂样糖甙、胆甾醇、芸苔甾醇(Campesterol)、谷甾醇、豆甾醇及三萜酸类、糖类等。菟丝子含有丰富的化学成分,在补肾壮阳、提高免疫能力、抗衰老、保肝明目、保胎、调节下丘脑-垂体-卵巢轴功能、调节内分泌、治疗心血管疾病、促进性腺激素样作用等方面具有广泛的药理作用。菟丝子有缩尿与抗遗尿作用,入肾经,“肾主水液”,味甘补肾,肾气足则固摄有力,使膀胱开合有度,司尿液排泄;入肝脾经,脾主运化水液,肝协助水液代谢。菟丝子复方给予小鼠灌胃,能降低排尿量和减少排尿次数。
中药治疗高尿酸血症及痛风的疗效显著,但中药在使用过程中存在不足表现在几个方面:1、常规制备及服用方法不方便,如煎煮法,耗时、服用时味道重,且因个人的煎煮时间和煎煮方法不同,疗效不能完全保证;2、服用剂量大,煎煮或直接粉碎制备的剂型,组成成分包括了有效组分和无效组分,服用剂量大,不能达到专病专治的效果,且有可能产生毒副作用;3、运用现代分离纯化技术获取单体化合物产率低、成本高,不易实现规模化和产业化;4、通过现代合成技术实现该单体化合物群尚有一定技术难度,且成本高。
[1]林伟青,谢健,王海东.白艾提取液对高尿酸血症大鼠的实验研究[J].中华风湿病学杂志,2005,9(8):509-510.
[2]林凤平,任开明,宋恩峰等.威灵仙对尿酸性肾病大鼠的实验研究[J].中成药,2006,28(6):842-845.
[3]李表,孙林.现代肾脏病治疗学[M].南昌:江西科学技术出版社,2000,537-543.
[4]沈庆法.中医临床肾脏病学[M].上海:上海科学技术文献出版社,1998,206-211.
发明内容
针对上述中药在使用过程中存在不足表现的问题,本发明提供一种用量小、使用方便、不良反应少、成本低、功效明显、易于工业化的防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法。
本发明的目的将通过以下技术方案实现:一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法,包括以下步骤:
步骤一,粗提取:将菟丝子原料粉粹后,称取一定质量的原料,加入20倍量60%乙醇加热回流2h后,分离出药渣,将药渣中加入15倍量60%乙醇加热回流1.5h,合并提取液,高速离心,弃去不溶物,减压蒸馏乙醇得到粗提取液;
步骤二,色谱柱纯化:将步骤一中粗提取液上AB-8型大孔树脂柱,静态吸附2小时,用10BV水洗脱,弃去洗脱液,再用不同浓度乙醇由低至高依次洗脱,即为提取液;
步骤三,检测分析:将步骤二中的提取液用薄层色谱法鉴别洗脱液中是否含有单体化合物群中某一单体及其相对含量,收集具有高占比目标化合物的洗脱液并合并,将所得洗脱液制备成产品。
优选的,所述的一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法,所述步骤一中,菟丝子包括菟丝子苷A、菟丝子苷B、新菟丝子苷A、新菟丝子苷B、新菟丝子苷C中的一种或多种。
优选的,所述的一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法,所述步骤三中,洗脱液加工的产品包括胶囊剂、片剂、合剂、食品添加剂以及保健茶。
优选的,所述的一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法,所述胶囊剂的制备方法为:真空浓缩,真空干燥或喷雾干燥得细粉,加6倍量20%淀粉糊,制粒装胶囊。
优选的,所述的一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法,所述片剂的制备方法为:所得洗脱液真空干燥或喷雾干燥得细粉,加入6倍量20%淀粉糊、1倍量10%PVP(聚维酮)乙醇液,制粒,烘干,压片。
优选的,所述的一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法,所述合剂的制备方法为:所得洗脱液浓缩或稀释至相对密度1.2的浸膏,装瓶制作口服液。
优选的,所述的一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法,所述食品添加剂的制备方法为:所得洗脱液真空浓缩,真空干燥或喷雾干燥得细粉,即可作为食品添加剂。
优选的,所述的一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法,所述食品添加剂的制备方法为:所得洗脱液浓缩为相对密度1.2的浸膏,即可作为保健食品添加剂。
优选的,所述的一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法,所述保健茶的制备方法为:所得洗脱液减压浓缩至相对密度1.2的浸膏,与铁观音茶叶按1:25的质量比混合,置于55℃条件下烘干8小时,再粉碎成20目,灭菌包装入库,制成6g一包的降尿酸保健茶。
本发明的有益效果是:本发明所述菟丝子含有苯丙素类化合物,本发明所述单体由双骈四氢呋喃环连接糖基组成,在中等极性溶剂中如正丁醇、乙酸乙酯等溶解性较好,并且具有一定水溶性。本发明采用60%乙醇煎煮提取,极性大孔树脂纯化,有目的的富集目标单体化合物群,成本低,收率高,容易实现产业化和规模化。该发明制备的胶囊剂、片剂、保健茶剂等,服用方便化、具有多元化特点。
附图说明
图1为本发明实施例6空白组的病理解剖图;
图2为本发明实施例6模型组的病理解剖图;
图3为本发明实施例6高剂量组的病理解剖图。
具体实施方式
为更好地理解本发明,下面通过以下实施例对本发明作进一步具体的阐述,但不可理解为对本发明的限定,对于本领域的技术人员根据上述发明内容所作的一些非本质的改进与调整,也视为落在本发明的保护范围内。
实施例1、基于本发明胶囊剂的制备
1)称取原料药菟丝子,3#空胶囊壳若干备用;
2)原料药材加20倍量60%乙醇冷浸泡1d,加热回流提取2h,药渣加15倍量60%乙醇加热回流1.5h,合并提取液次,减压回收乙醇,高速离心浓缩液得滤液,上AB-8型大孔树脂柱,静态吸附2小时,用10BV水洗脱,弃去洗脱液,再用不同浓度乙醇由低至高依次洗脱,用薄层色谱法鉴别洗脱液中是否含有单体化合物群中某一单体及其相对含量,收集具有高占比目标化合物的洗脱液并合并,真空干燥或喷雾干燥得细粉,加入6倍量的20%淀粉糊,制粒,烘干,装入3#空胶囊壳,每粒空胶囊壳装内容物约0.32g,洁净、选粒,制成适当包装规格的成品。
实施例2、基于本发明片剂的制备
1)称取原料药菟丝子备用;
2)原料药材加20倍量60%乙醇冷浸泡1d,加热回流提取2h,药渣加15倍量60%乙醇加热回流1.5h,合并提取液次,减压回收乙醇,高速离心浓缩液得滤液,上AB-8型大孔树脂柱,静态吸附2小时,用10BV水洗脱,弃去洗脱液,再用不同浓度乙醇由低至高依次洗脱,用薄层色谱法鉴别洗脱液中是否含有单体化合物群中某一单体及其相对含量,收集具有高占比目标化合物的洗脱液并合并,真空干燥或喷雾干燥得细粉,加入5倍量20%淀粉糊、1倍量10%PVP(聚维酮)乙醇液,制粒,烘干,压制成片重为约0.4g的原片,包糖衣,选片,制成适当包装规格的成品。
实施例3、基于本发明合剂的制备
1)称取原料药菟丝子,10ml规格口服液小瓶及瓶盖备用;
2)原料药材加20倍量60%乙醇冷浸泡1d,加热回流提取2h,药渣加15倍量60%乙醇加热回流1.5h,合并提取液次,减压回收乙醇,高速离心浓缩液得滤液,上AB-8型大孔树脂柱,静态吸附2小时,用10BV水洗脱,弃去洗脱液,再用不同浓度乙醇由低至高依次洗脱,用薄层色谱法鉴别洗脱液中是否含有单体化合物群中某一单体及其相对含量,收集具有高占比目标化合物的洗脱液并合并,浓缩至相对密度1.2,加入甜味剂、防腐剂、澄清剂等,放置,滤过,取滤液,灭菌,灌装成10ml/支的口服液,轧盖,制成适当包装规格的成品。
实施例4、基于本发明保健食品添加剂的制备
1)称取原料药菟丝子备用;
2)原料药材加20倍量60%乙醇冷浸泡1d,加热回流提取2h,药渣加15倍量60%乙醇加热回流1.5h,合并提取液次,减压回收乙醇,高速离心浓缩液得滤液,上AB-8型大孔树脂柱,静态吸附2小时,用10BV水洗脱,弃去洗脱液,再用不同浓度乙醇由低至高依次洗脱,用薄层色谱法鉴别洗脱液中是否含有单体化合物群中某一单体及其相对含量,收集具有高占比目标化合物的洗脱液并合并,浓缩至相对密度1.2,灭菌,适当容器密封,作为保健食品添加剂;或真空浓缩,真空干燥或喷雾干燥得细粉,适当容器密封,作为保健食品添加剂。
实施例5、基于本发明保健茶的制备
1)称取原料药菟丝子,铁观音茶若干备用;
2)原料药材加20倍量60%乙醇冷浸泡1d,加热回流提取2h,药渣加15倍量60%乙醇加热回流1.5h,合并提取液次,减压回收乙醇,高速离心浓缩液得滤液,上AB-8型大孔树脂柱,静态吸附2小时,用10BV水洗脱,弃去洗脱液,再用不同浓度乙醇由低至高依次洗脱,用薄层色谱法鉴别洗脱液中是否含有单体化合物群中某一单体及其相对含量,收集具有高占比目标化合物的洗脱液并合并,浓缩至相对密度1.2,与铁观音茶叶按1:25质量比混合,置于55℃条件下烘干8小时,再粉碎成20目,灭菌,制成6g一包的降尿酸保健茶。
实施例6、本发明改善痛风性肾病病理
实验动物:KM小鼠,SPF级,雄性,体重18-22g,由广州中医药大学实验动物中心提供。正常饲养3天后供试。
药物与试剂:菟丝子(广州市药材公司中药饮片厂)。
本发明产品制备:原料药材菟丝子加20倍量60%乙醇冷浸泡1d,加热回流提取2h,药渣加15倍量60%乙醇加热回流1.5h,合并提取液次,减压回收乙醇,高速离心浓缩液得滤液,上AB-8型大孔树脂柱,静态吸附2小时,用10BV水洗脱,弃去洗脱液,再用不同浓度乙醇由低至高依次洗脱,用薄层色谱法鉴别洗脱液中是否含有单体化合物群中某一单体及其相对含量,收集具有高占比目标化合物的洗脱液并合并,真空干燥或喷雾干燥得细粉,,临用前用蒸馏水配制成所需浓度。
取KM小鼠80只,平均分为四组,,灌胃前禁食10h,禁水6h。每天灌胃两次,每次0.6ml,连续14天,停药后再观察14天。本发明空白组:给予等量蒸馏水;模型组:别嘌呤醇0.04g/kg/d给药,高剂量组:所述产品剂量为6.00g/kg/d,相当于人用量的3000倍。
试验结果:(1)空白组(10只):由图1可知,肾皮质内肾小球分布均匀,10倍物镜下肾小球数量为15~20个,肾小管上皮细胞分布完整,肾小管管腔内未见管型,肾间质未见出血、炎细胞浸润及尿酸盐结晶。(2)模型组(10只):由图2可知,肾皮质肾小球数量有所减少,10倍物镜下肾小球数量为5~10个,肾小管灶状萎缩,个别肾小管管腔内见蛋白管型,未见尿酸盐沉积,肾间质见出血及灶性淋巴细胞浸润。(3)高剂量组(10只):由图3可知,肾小球减少程度、肾小管萎缩均较模型组为轻,肾小管管腔内未见管型及尿酸盐结晶,肾间质未见出血及淋巴细胞浸润。
试验结论:本发明之单体可改善痛风性肾病
实施例7、本发明亚慢毒性试验
实验动物:KM小鼠,SPF级,雄性,体重18-22g,由广州中医药大学实验动物中心提供。正常饲养3天后供试。
药物与试剂:菟丝子(广州市药材公司中药饮片厂)。
本发明产品制备:原料药材加20倍量60%乙醇冷浸泡1d,加热回流提取2h,药渣加15倍量60%乙醇加热回流1.5h,合并提取液次,减压回收乙醇,高速离心浓缩液得滤液,上AB-8型大孔树脂柱,静态吸附2小时,用10BV水洗脱,弃去洗脱液,再用不同浓度乙醇由低至高依次洗脱,用薄层色谱法鉴别洗脱液中是否含有单体化合物群中某一单体及其相对含量,收集具有高占比目标化合物的洗脱液并合并,真空干燥或喷雾干燥得细粉,临用前用蒸馏水配制成所需浓度。
取KM小鼠80只,平均分为四组,,灌胃前禁食10h,禁水6h。每天灌胃两次,每次0.6ml,连续14天,停药后再观察14天。本发明药物小剂量组:剂量为0.06g/kg/d,相当于人用量30倍;本发明药物中剂量组:剂量为0.60g/kg/d,相当于人用量的300倍;本发明药物大剂量组:剂量为6.00g/kg/d,相当于人用量的3000倍;对照组:给予等量蒸馏水。
试验结果:各组小鼠动物给药5h内食量减少,活动减弱,药物色溏便等,停药后恢复正常。各试验组在给药14d和停药后第14天时的平均体重与对照组相比无显著差异(P>0.05)。试验组小鼠的红细胞总数、白细胞总数、血红蛋白含量、血小板数在停药后第1天及停药后第14天与对照组相比无显著差异(P>0.05)。各个试验组小鼠的血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶在停药后第1天及停药后第14天与对照组相比无显著差异(P>0.05)。在停药后第1天和第14天,剖检见各组心、肝、脾、肺、肾、胃和肠的形态、颜色、质地正常。病理组织学检查。本发明的高、中、低剂量组和对照组小鼠均未见明显病理变化。
经过实验,本发明的高、中、低剂量组均高于临床治疗剂量,在相应疗程内未发现任何亚慢性毒性反应。结合急性毒性试验,其用量相当于人用量的3000倍也未见任何毒副反应,因此本发明可作为防治高尿酸血症、痛风药用保健食品两用配方及制剂。
试验结论:本发明之亚慢性毒性试验表明本发明安全无毒。
实施例8、本发明急性毒性试验
实验动物:KM小鼠,SPF级,雄性,体重18-22g,由广州中医药大学实验动物中心提供。正常饲养3天后供试。
药物与试剂:菟丝子(广州市药材公司中药饮片厂)。
本发明产品制备:原料药材加20倍量60%乙醇冷浸泡1d,加热回流提取2h,药渣加15倍量60%乙醇加热回流1.5h,合并提取液次,减压回收乙醇,高速离心浓缩液得滤液,上AB-8型大孔树脂柱,静态吸附2小时,用10BV水洗脱,弃去洗脱液,再用不同浓度乙醇由低至高依次洗脱,用薄层色谱法鉴别洗脱液中是否含有单体化合物群中某一单体及其相对含量,收集具有高占比目标化合物的洗脱液并合并,真空干燥或喷雾干燥得细粉,临用前用蒸馏水配制成所需浓度。
取KM小鼠80只,平均分为四组,灌胃前禁食10h,禁水6h。每天灌胃两次,每次0.6ml,连续7天。本发明药物小剂量组:剂量为0.06g/kg/d,相当于人用量30倍;本发明药物中剂量组:剂量为0.60g/kg/d,相当于人用量的300倍;本发明药物大剂量组:剂量为6.00g/kg/d,相当于人用量的3000倍;对照组:给予等量蒸馏水。
试验结果:实验7天小鼠全部存活,仅见动物给药5h内食量减少,活动减弱,药物色溏便等,停药后恢复正常。4组动物在饮水、毛色、体重、粪便、及心、肝、脾、肺、肾、胸腺、脑、舌、胃、肠、膀胱、性腺(子宫、卵巢或睾丸和附睾)等主要脏器的形态、大小、光滑度等方面均无明显差异。以上说明,本发明毒副作用小,而且因受药物浓度和体积限制,找不出引起小鼠死亡的剂量,故无法测出本发明的LD50。
实验结论:本发明之急性毒性试验表明本发明安全无毒。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤一,粗提取:将菟丝子原料粉粹后,称取一定质量的原料,加入20倍量60%乙醇加热回流2h后,分离出药渣,将药渣中加入15倍量60%乙醇加热回流1.5h,合并提取液,高速离心,弃去不溶物,减压蒸馏乙醇得到粗提取液;
步骤二,色谱柱纯化:将步骤一中粗提取液上AB-8型大孔树脂柱,静态吸附2小时,用10BV水洗脱,弃去洗脱液,再用不同浓度乙醇由低至高依次洗脱,即为提取液;
步骤三,检测分析:将步骤二中的提取液用薄层色谱法鉴别洗脱液中是否含有单体化合物群中某一单体及其相对含量,收集具有高占比目标化合物的洗脱液并合并,将所得洗脱液制备成产品。
2.根据权利要求1所述的一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法,其特征在于:所述步骤一中,菟丝子包括菟丝子苷A、菟丝子苷B、新菟丝子苷A、新菟丝子苷B、新菟丝子苷C中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法,其特征在于:所述步骤三中,洗脱液加工的产品包括胶囊剂、片剂、合剂、食品添加剂以及保健茶。
4.根据权利要求3所述的一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法,其特征在于,所述胶囊剂的制备方法为:真空浓缩、真空干燥或喷雾干燥得细粉,加6倍量20%淀粉糊,制粒装胶囊。
5.根据权利要求3所述的一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法,其特征在于,所述片剂的制备方法为:所得洗脱液真空干燥或喷雾干燥得细粉,加入6倍量20%淀粉糊、1倍量10%PVP(聚维酮)乙醇液,制粒,烘干,压片。
6.根据权利要求3所述的一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法,其特征在于,所述合剂的制备方法为:所得洗脱液浓缩或稀释至相对密度1.2的浸膏,装瓶制作口服液。
7.根据权利要求3所述的一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法,其特征在于,所述食品添加剂的制备方法为:所得洗脱液真空浓缩,真空干燥或喷雾干燥得细粉,即可作为食品添加剂。
8.根据权利要求3所述的一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法,其特征在于,所述食品添加剂的制备方法为:所得洗脱液浓缩为相对密度1.2的浸膏,即可作为食品添加剂。
9.根据权利要求3所述的一种从菟丝子中提取防治高尿酸血症及痛风药食两用单体的制备方法,其特征在于,所述保健茶的制备方法为:所得洗脱液减压浓缩至相对密度1.2的浸膏,与铁观音茶叶按1:25的质量比混合,置于55℃条件下烘干8小时,再粉碎成20目,灭菌包装入库,制成6g一包的降尿酸保健茶。
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