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CN106715411A - 苯并二氮杂*衍生物 - Google Patents

苯并二氮杂*衍生物 Download PDF

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CN106715411A CN201580042316.XA CN201580042316A CN106715411A CN 106715411 A CN106715411 A CN 106715411A CN 201580042316 A CN201580042316 A CN 201580042316A CN 106715411 A CN106715411 A CN 106715411A
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L·汤姆森
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Abstract

本发明涉及用作CCK2/胃泌素受体拮抗剂的苯并二氮杂衍生物，它们的制备和它们在治疗或预防与CCK2/胃泌素受体相关的疾病，由高胃泌素血症引起或相关的疾病以及与胃酸相关疾病中的用途。

Description

苯并二氮杂*衍生物
发明领域
本发明涉及用作CCK2/胃泌素受体拮抗剂的新的苯并二氮杂*衍生物，它们的制备和它们在治疗或预防与CCK2/胃泌素受体相关的疾病，由高胃泌素血症引起或相关的疾病以及与胃酸相关疾病中的用途。
技术背景
胃泌素是由单个基因产生的肽激素并由前体肽前胃泌素合成，其通过顺序酶切加工成各种大小的前胃泌素和胃泌素肽段。胃泌素有三种主要形式：胃泌素34(G34或“大胃泌素”)，胃泌素17(G17或“小胃泌素”)和胃泌素14(G14或“迷你胃泌素”)。所有胃泌素具有C-末端酰胺化的四肽(Trp-Met-Asp-Phe-NH2)，其在胃和中枢及外周神经系统中作用于特异性G蛋白偶联胃泌素受体(也称为CCK2受体；以前称为CCKB受体)。
胃泌素在结构和功能上与另一种肽激素，胆囊收缩素(CCK)相关，其也由单个基因产生并通过顺序酶切加工成几种分子形式。CCK在血液和组织中的主要形式是CCK-58,CCK-33和CCK-8。所有片段在其羧基末端具有八肽Asp-Tyr(SO3H)-Met-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH2，其刺激胰腺腺泡细胞、胆囊平滑肌、小肠中的迷走神经传入神经元以及中枢神经系统细胞上的特异性G蛋白偶联的CCK1受体。C-末端四肽(Trp-Met-Asp-Phe-NH2)与胃泌素相同。结果是CCK具有弱的胃泌素样活性，胃泌素具有弱的CCK样活性。因为CCK的抗体可能与胃泌素交叉反应，常见的C末端四肽阻碍了对CCK1或CCK2受体的选择性拮抗剂的研发，并且使CCK的分析混乱。
胃泌素通过涉及激活胃泌素(CCK2)受体的机制刺激胃酸分泌。
胃泌素还引起胃上皮细胞的增殖、迁移和分化，并上调各种基因，如嗜铬粒蛋白A(CgA)、组氨酸脱羧酶(HDC)、囊泡单胺转运蛋白2(VMAT2)、基质金属蛋白酶(MMP)、蛋白Reg1A，并刺激旁分泌级联(cascade)，包括细胞因子、生长因子如三叶因子和前列腺素。胃酸分泌通过至少三种信号传导途径由内分泌，旁分泌和神经分泌机制调节：胃泌素-组胺(兴奋)，CCK1/生长抑素(抑制)和神经网络(兴奋和抑制)。根据情况，抑制或主导不同的途径。
在以下情况下循环胃泌素增加：由于自身免疫性慢性萎缩性胃炎(CAG)或幽门螺杆菌诱导的胃炎引起的胃酸减少；卓-艾综合征(ZES)患者胃泌素瘤；和通过组胺H2-受体拮抗剂、质子泵抑制剂(PPIs)、钾竞争性酸抑制剂或迷走神经切断术的酸抑制。CAG高胃泌素血症导致ECL细胞增生，并且导致在一些患者中胃类癌(1型神经内分泌肿瘤)的发展，其大多是良性的但可以变成恶性。表现为恶性贫血(萎缩性胃炎可能的临床表现之一)的患者患上胃癌的风险增加了近7倍。ZES高胃泌素血症导致胃酸过多、消化性溃疡和胃类癌(2型神经内分泌肿瘤)，其恶性的可能性更大，特别是在具有多发性内分泌肿瘤1型基因的患者中。幽门螺旋杆菌感染是消化性溃疡病和胃癌的主要危险因素。PPI诱导的高胃泌素血症导致：肠嗜铬细胞样(ECL)细胞增生；壁细胞增生；胃底腺息肉；骨丢失，骨质量受损和骨折；和在某些患者中可能的恶性ECL细胞肿瘤。PPI戒断导致反弹性过酸，并导致一些人消化不良。胃泌素受体也在胰腺癌，结肠癌，甲状腺髓样癌和巴雷特食管细胞上表达。PPI诱导的高胃泌素血症与巴雷特氏食管的晚期瘤形成有关。因此，存在各种潜在的胃泌素/CCK2受体拮抗剂的临床适应症。
已知的1,4-苯并二氮杂-衍生的CCK2受体拮抗剂是L-365,260，其具有对CCK2受体的纳摩尔亲和力，并且相对于CCK1受体的合理的选择性(140倍)。然而，口服L-365,260在健康男性中仅产生适度且短暂持续的抑制胃泌素-刺激的酸分泌，并且在限制患者的惊恐发作中是无效的，该结果是由于L-365,260的水溶性低，且口服生物利用度差(Murphy等Clin Pharmacol Ther 1993；54:533–39以及Kramer等Biol Psychiatry 1995；37:462–466)。
另一种已知的基于1,4-苯并二氮杂的CCK2受体拮抗剂是YM022。YM022显示对大鼠脑CCK2受体的亚纳摩尔的亲和力，这比YM022显示的对大鼠胰腺CCK1受体的亚纳摩尔亲和力高两个数量级。
然而，YM022的水溶性低，并且必须配制成固体分散体以实现足够的口服生物利用度(Yano等Chem Pharm Bull(东京)1996；44:2309–2313)。
随后，开发了YF476，其具有与YM022相似的对CCK2受体的结合亲和力，但对CCK2受体的选择性比对CCK1受体的选择性高5倍(Semple等J Med Chem1997；40:331–341)。
作为CCK2受体拮抗剂的苯并二氮杂衍生物的实施例还在美国专利4,820,834和欧洲专利0 628 033 B1和欧洲专利1 342 719 B1中给出。
尽管三十年来制药公司付出了相当大的努力，但是没有CCK2/胃泌素受体拮抗剂被开发成药物，主要是由于效力、CCK1和CCK2受体之间的选择性、激动剂活性、溶解性和口服生物利用度的问题。
因此，仍然需要有效的CCK2/胃泌素受体拮抗剂，其可以成功地用于药物组合物中，以在药代动力学方面提供有益的性质、改善生物利用度、避免需要与食物一起给药以及尽可能减少制剂所需加工步骤等。
已经确定，当YF476以结晶形式向健康受试者给药时，YF476的血清浓度极低并且非常易变。可以通过制备和给予无定形YF476的制剂来改善生物利用度，但是这需要稳定化，例如通过喷雾干燥来以羟丙基甲基纤维素的固体分散体的形式。即使使用这种处理，YF476的生物利用度仍然很低。因为在健康受试者中食物使YF476的生物利用度增加1.6倍，所以在患者研究中与食物一起给药。然而，宜提供不需要与食物一起给药的CCK2/胃泌素受体拮抗剂。
本发明人现在确定了一类化合物，其表现出有利于成功用作CCK2/胃泌素受体拮抗剂的性质，并且如果以药物组合物的形式向患者给药，则解决了先前妨碍CCK2/胃泌素受体拮抗剂成功开发为药物的问题。
发明内容
在第一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含式(A)的化合物或者药学上可接受的盐、酯、硫酯、酯或硫酯的盐或其前药：
其中，R1和R2各自独立地为H，C1–3脂族基团，卤素或C1–3卤代脂族基团，或其中R1和R2与与它们键合的间隔碳原子一起形成C3–6碳环部分；
L是键或C1–3亚烷基；
R3是-OR6或-SR6；
W和X独立地是氢，卤素，C1–8烷基或C1–8烷氧基；
R4和R5均独立地是单环芳基或杂芳基，其任选被一个或多个独立地选自下组的基团取代：卤素、羟基、氨基、硝基、羧基、甲酰胺基、氰基、-SO3H，和任选取代的C1–8烷基，C1–8烷氧基，C1–8烷基氨基或二(C1–8烷基)氨基；和
R6是氢或烷基(优选甲基)；
和任选的一种或多种药学上可接受的赋形剂。
在一些实施方式中，R4和R5中的至少一个是未取代的或取代的苯基或吡啶基。R4和R5中的至少一个可以是未取代的、单取代，或二取代的苯基，或未取代的、单取代、或二取代的2-，3-或4-吡啶基。R4和R5可以独立地选自未取代或取代的苯基或吡啶基。
其中R4和/或R5被任选取代的C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基或二(C1–8烷基)氨基取代，所述C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基或二(C1–8烷基)氨基上的任选取代基包括任何如本文所述的用于脂族基团上的取代基的取代基，例如卤素、-NO2、-CN、氨基、C1–8烷基氨基、二(C1–8烷基)氨基、-S(O)H或-CO2H。
在一些实施方式中，R5是具有间位取代基的苯基，所述间位取代基选自：NHMe、NMeEt、NEt2、F、Cl、Br、OH、OCH3、NH2、NMe2、NO2、Me、(CH2)n-CO2H、CN、CH2NMe2、NHCHO和(CH2)n-SO3H，其中n为0-2；未取代的苯基或任选地具有选自F、Cl、CH3和CO2H的取代基的2-，3-或4-吡啶基；和R4是2-、3-或4-吡啶基或苯基。
在任何上述实施方式中，W和X可以独立地为H、卤素、C1–3烷基或C1–3烷氧基。优选地，W和X都是H。
式(A)的化合物可以是式(B)的化合物或其药学上可接受的盐、酯、硫酯、酯或硫酯的盐，或其前药：
其中，R1，R2，L，R3和R6如式(A)所定义。
在式(A)或(B)的任何上述实施方式中，R1和R2与与它们键合的间隔碳原子一起形成碳环部分，所述碳环部分可以是C3–4碳环部分。
在式(A)或者式(B)的任何上述实施方式中，R1和R2可各自独立地为H或C1–2烷基，L可为键或C1–3亚烷基，R3可为-OH或-SH。在一些实施方式中，R1和R2可各自独立地为H或C1–2烷基，L可为C1亚烷基(-CH2-)，且R3可为-OH或-SH。
在式(A)或(B)的任何上述实施方式中，R1和R2可各自独立地为C1–2烷基，L可为C1–3亚烷基且R3可为-OH。在一些实施方式中，R1和R2可各自独立地为C1–2烷基，L可为C1亚烷基(-CH2-)且R3可为-OH。
式(A)和(B)的化合物包含在以下标记*的位置的手性中心：
并且可以以对映异构体的形式存在：
化合物可以以对映异构体的外消旋混合物、对映异构体的非外消旋混合物提供，或以光学纯形式的单一对映异构体(例如标*的R-对映异构体)提供。
式(A)或(B)的化合物可以是，例如，选自以下的化合物，或其药学上可接受的盐，酯，硫酯，酯或硫酯的盐或其前药：
在一些实施方式中，所述化合物可以选自是以下化合物或其药学上可接受的盐、酯、硫酯、酯或硫酯的盐或其前药：
在优选的实施方式中，式(A)或(B)的化合物是化合物(TR)或其药学上可接受的盐、酯、酯的盐或其前药：
化合物(TR)含有手性中心，因此以两种对映异构体存在，记为(TR2)(R-对映异构体)和(TR3)(S-对映异构体)。
在本发明的组合物中，TR可以以对映异构体(TR2)和(TR3)的外消旋混合物，对映异构体(TR2)和(TR3)的非外消旋混合物提供或以光学纯形式的单一对映异构体(TR2或TR3)提供。(TR2)和(TR3)的外消旋混合物在本文中记为“(TR1)”。
在一些实施方式中，所述组合物包含本文所述任何实施方式的式(A)、(B)或(TR)化合物的酯或硫酯、或其药学上可接受的盐，其中R3是-OH或-SH，并且R3的H被-C(O)R替代，其中R是任选取代的脂族、杂脂族、芳族或杂芳族部分。因此，所述组合物可包含式(A)或(B)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3为-OR6、-SR6、-OC(O)R7或–SC(O)R7，R6是氢或烷基(优选甲基)，并且R7是任选取代的脂族、杂脂族、芳族或杂芳族部分。例如，组合物可以包含式(C)的化合物或其药学上可接受的盐：
其中，R1，R2，L，W，X，R4，R5如在本文任何实施方式中对式(A)，(B)或(TR)化合物所定义；Y是-O-或-S-；和R7是任选取代的脂族、杂脂族、芳族或杂芳族部分。式(C)的化合物可以是式(D)的化合物或其药学上可接受的盐：
其中R1，R2，L，Y和R7如上所定义。
在一些实施方式中，R7是任选取代的脂族部分，例如R7是取代或未取代的C1–6脂族基团，优选取代或未取代的C1–3脂族基团，更优选甲基。在一些实施方式中，Y是–O–。
式(C)或(D)的化合物可以是下式化合物或其药学上可接受的盐：
在优选的实施方式中，式(C)或(D)的化合物是化合物(TR-A)或其药学上可接受的盐：
化合物(TR-A)可以以对映异构体(TR2-A)(R-对映异构体)和(TR3-A)(S-对映异构体)的外消旋混合物(TR1-A)，对映体(TR2-A)和(TR3-A)的非外消旋混合物或以光学纯形式的单一对映异构体(TR2-A)或(TR3-A)提供。
本发明所述组合物可以以口服剂型或舌下剂型提供，例如以片剂或者胶囊提供。在其他实施方式中，本发明所述组合物可以以胃肠外剂型提供，例如以可注射溶液或悬浮液或长效制剂提供。
本发明所述组合物还可以任选地进一步包含一种或多种额外的活性剂。额外的活性剂可以是例如组胺H2-受体拮抗剂、PPI、钾-竞争性酸抑制剂或任何其它胃酸抑制剂。组胺H2-受体拮抗剂可以是例如竞争性组胺H2-受体拮抗剂，例如西咪替丁、法莫替丁、尼扎替丁、罗沙替丁或雷尼替丁；或难以超越(insurmountable)的组胺H2-受体拮抗剂，例如洛克替丁(loxt idine)或拉米替啶(lamit idine)。PPI可以是例如艾美拉唑、奥美拉唑、兰索拉唑、右兰索拉唑、泮托拉唑、雷贝拉唑或艾普拉唑。钾-竞争性酸抑制剂可以是例如瑞伐拉赞或TAK-438。
在其它实施方式中，额外的活性剂可以是细胞毒性剂或肿瘤特异性抗体。
在其它实施方式中，额外的活性剂可以是止痛剂，例如阿片类物质或双氢可待因。
第二方面，本发明提供了式(C)的化合物或其药学上可接受的盐:
其中R1和R2各自独立地为H、C1–3脂族基团、卤素或C1–3卤代脂族基团，或其中R1和R2与与它们键合的间隔碳原子一起形成C3–6碳环部分；
L是键或C1–3亚烷基；
Y是–O–或–S–；
W和X独立地是氢、卤素、C1–8烷基或C1–8烷氧基；
R4和R5均独立地是单环芳基或杂芳基，其任选地被一个或多个独立地选自以下基团的取代基取代：卤素、羟基、氨基、硝基、羧基、甲酰胺基、氰基、-SO3H、和任选取代的C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基或二(C1–8烷基)氨基；和
R7是任选取代的脂族、杂脂族、芳族或杂芳族部分。
在一些实施方式中，R4和R5中的至少一个是未取代的或取代的苯基或吡啶基。R4和R5中的至少一个可以是未取代的、单取代或二取代的苯基，或未取代的、单取代或二取代的2-，3-或4-吡啶基。R4和R5可以独立地选自未取代或取代的苯基或吡啶基。
如果R4和/或R5被任选取代的C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基或者二(C1–8烷基)氨基取代，C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基和二(C1–8烷基)氨基上任选的取代基包括本文所述的在脂族基团上的任何取代基，例如，卤素、–NO2、–CN、氨基、C1–8烷基氨基、二(C1–8烷基)氨基、–S(O)H或–CO2H。
在一些实施方式中，R5是具有间位取代基的苯基，所述间位取代基选自NHMe、NMeEt、NEt2、F、Cl、Br、OH、OCH3、NH2、NMe2、NO2、Me、(CH2)n-CO2H、CN、CH2NMe2、NHCHO和(CH2)n-SO3H，其中n是0–2；未取代的苯基或任选地具有选自F、Cl、CH3和CO2H的取代基的2-、3-或4-吡啶基；以及R4是2-、3-或4-吡啶基或苯基。
在任意上述实施方式中，W和X可以独立地为H、卤素、C1–3烷基或C1–3烷氧基。优选地，W和X均是H。
式(C)化合物可以是式(D)化合物或其药学上可接受的盐:
其中R1,R2,L,Y和R7如式(C)所定义。
在式(C)或(D)的任意上述实施方式中，R1和R2与与它们键合的间隔碳原子一起形成碳环部分，所述碳环部分可以是C3–4碳环部分。
在式(C)或(D)的任意上述实施方式中，R1和R2可以各自独立地为H或C1–2烷基，L可以是键或C1-3亚烷基。在一些实施方式中，R1和R2可以各自独立地为H或C1–2烷基，L可以是C1亚烷基(-CH2-)。
在式(C)或(D)的任意上述实施方式中，R1和R2可以各自独立地为C1–2烷基，L可以为C1–3亚烷基以及Y可以为–O–。在一些实施方式中，R1和R2可以各自独立地为C1–2烷基，L可以为C1亚烷基(-CH2-)，Y可以为–O–。
在式(C)或(D)的任意上述实施方式中，R7可以为任选取代的脂族基团，例如R7可以是取代的或未取代的C1–6脂族基团，优选取代的或未取代的C1–3脂族基团，更优选甲基。
式(C)或(D)化合物可以是例如下式化合物或其药学上可接受的盐：
式(C)或(D)化合物可以是式(E)化合物或其药学上可接受的盐：
其中R8选自下组：
其中R7如以上式(C)或(D)的任意实施方式所定义。
在一些实施方式中，式(E)化合物可以是式(F)化合物或其药学上可接受的盐：
优选地，R8选自下组：
其中R7如以上式(C)或(D)的任意实施方式所定义。
在一个优选的实施方式中，式(C)或(D)化合物是化合物(TR-A)或其药学上可接受的盐：
在一些实施方式中，化合物(TR-A)是(TR2-A)或(TR3-A)。
在第三方面，本发明提供根据本发明第一方面任意实施方式的药物组合物或根据本发明第二方面任意实施方式的化合物，用于治疗。
在第四方面，本发明提供根据本发明第一方面任意实施方式的药物组合物，或根据本发明第二方面任意实施方式的化合物，用于治疗或预防与CCK2/胃泌素受体相关的疾病、由高胃泌素血症引起的或相关的疾病或与胃酸相关的疾病。在一些实施方式中，本发明的药物组合物或化合物可用于治疗或预防与CCK2受体携带细胞相关的疾病或涉及胃泌素的生理功能丧失或功能障碍的疾病。因此，本发明的药物组合物或化合物可用于治疗或预防的疾病的实例包括但不限于任意一种或多种以下疾病：胃和十二指肠溃疡，非甾体抗炎药(NSAID)诱导的胃溃疡，消化不良，胃食管反流性疾病(GORD)，巴雷特氏(Barrett)食管，ZES，由PPI或其它酸抑制剂诱导的高胃泌素血症(包括戒断的效果)和由高胃泌素血症导致的病症(例如骨丢失，骨质量受损和骨折)，胃炎(包括幽门螺杆菌诱发的胃炎和自身免疫性慢性萎缩性胃炎的并发症，例如胃类癌和ECL细胞增生)，神经内分泌肿瘤(不限于胃类癌)，壁细胞增生，胃基底腺息肉，胃癌，结肠直肠癌，甲状腺髓样癌，胰腺癌和小细胞肺癌。可提供本发明的药物组合物或化合物用于治疗包括具有CCK2受体携带细胞的肿瘤(例如，胰腺肿瘤、胃肿瘤、结肠肿瘤或甲状腺髓样瘤，或其他CCK2受体携带肿瘤)。还可以提供本发明的药物组合物或化合物用于预防和/或治疗由中枢或外周CCK2受体相关的失去生理功能所引起的疾病，例如焦虑，伤害感受，疼痛，药物成瘾，镇痛依赖和镇痛戒断反应。所述药物组合物或化合物可以与额外的活性剂(如细胞毒性剂或肿瘤特异性抗体)一起给药使用。可以以单一的剂型给药或以分开的剂型同时、依次或分别给药。
在一些实施方式中，提供本发明的药物组合物或化合物通过与组胺H2-受体拮抗剂、PPI、钾-竞争性酸抑制剂或任何其它胃酸抑制剂一起联合给药用于治疗或预防酸相关的疾病(例如胃和十二指肠溃疡、胃炎、NSAID‐诱导的胃溃疡、GORD、巴雷特氏食管、ZES或消化不良)。可以以单一的剂型给药或以分开的剂型同时、依次或分别给药。
在一些实施方式中，提供本发明的药物组合物或化合物通过与细胞毒性治疗剂或肿瘤特异性抗体一起联合给药来治疗胰腺肿瘤、胃肿瘤、结肠肿瘤或甲状腺髓样瘤，或其他CCK2受体携带肿瘤。可以以单一的剂型给药或以分开的剂型同时、依次或分别给药。
在一些实施方式中，提供本发明的药物组合物或化合物通过与止痛剂一起联合给药来治疗疼痛。可以以单一的剂型给药或以分开的剂型同时、依次或分别给药。
在一些实施方式中，提供本发明的药物组合物或化合物通过将本发明的药物组合物或化合物单独给药或将本发明的药物组合物或化合物与PPI、组胺H2-受体拮抗剂、钾-竞争性酸抑制剂或任何其它胃酸抑制剂一起联合给药来治疗或预防高胃泌素血症导致的骨疾病(例如骨丢失，骨质量受损和骨折)。可以以单一的剂型给药或以分开的剂型同时、依次或分别给药。
在第五方面，本发明提供一种在有需要的对象中治疗或预防与CCK2/胃泌素受体相关的疾病、由高胃泌素血症引起的或相关的疾病或与胃酸相关的疾病的方法，所述方法包括向所述对象给予治疗有效量的根据本发明第一方面任意实施方式的药物组合物，或根据本发明第二方面任意实施方式的化合物。这样的疾病包括与CCK2受体携带细胞相关的疾病或涉及胃泌素的生理功能丧失或功能障碍的疾病。因此，可以用本发明的方法治疗和/或预防的疾病包括但不限于以下任意一种或多种疾病：胃和十二指肠溃疡、NSAID-诱导的胃溃疡、消化不良、GORD、巴雷特氏食管、ZES、由PPI或其它酸抑制剂诱导的高胃泌素血症(包括戒断的效果)和由高胃泌素血症引起的病症(例如骨丢失，骨质量受损和骨折)、胃炎(包括幽门螺杆菌诱发的胃炎和自身免疫性慢性萎缩性胃炎的并发症，例如胃类癌和ECL细胞增生)、神经内分泌肿瘤(不限于胃类癌)、壁细胞增生、胃基底腺息肉、胃癌、结肠直肠癌、甲状腺髓样癌、胰腺癌和小细胞肺癌。可以用本发明方法治疗的疾病包括具有CCK2受体携带细胞的肿瘤(例如，胰腺肿瘤、胃肿瘤、结肠肿瘤或甲状腺髓样瘤，或其他CCK2受体携带肿瘤)。可以用本发明方法治疗的疾病还包括由中枢或外周CCK2受体控制的生理功能的功能障碍相关的疾病，例如焦虑、伤害感受、疼痛、药物成瘾、镇痛依赖和镇痛戒断反应。相应地，在一些实施方式中，本发明提供一种在有需要的对象中治疗或预防由中枢或外周CCK2受体控制的生理功能的功能障碍相关的疾病(例如焦虑、伤害感受、疼痛、药物成瘾、镇痛依赖或镇痛戒断反应)的方法，所述方法包括向所述对象给予治疗有效量的根据本发明第一方面任意实施方式的药物组合物，或根据本发明第二方面任意实施方式的化合物。
在一些实施方式中，本发明提供一种在有需要的对象中治疗或预防酸相关的疾病(例如胃和十二指肠溃疡、胃炎、NSAID-诱导的胃溃疡、GORD、巴雷特氏食管、ZES或消化不良)的方法，所述方法包括将治疗有效量的本发明的药物组合物，或根据本发明第二方面任意实施方式的化合物与组胺H2-受体拮抗剂、PPI、钾-竞争性酸抑制剂或任何其它胃酸抑制剂一起联合给药。可以以单一的剂型给药或以分开的剂型同时、依次或分别给药。
在一些实施方式中，本发明提供一种在有需要的对象中治疗胰腺肿瘤、胃肿瘤、结肠肿瘤或甲状腺髓样瘤，或其他CCK2受体携带肿瘤的方法，所述方法包括将治疗有效量的本发明的药物组合物或化合物与细胞毒性治疗剂或肿瘤特异性抗体一起联合给药。可以以单一的剂型给药或以分开的剂型同时、依次或分别给药。
在一些实施方式中，本发明提供一种在有需要的对象中治疗疼痛的方法，所述方法包括将治疗有效量的本发明的药物组合物或化合物与止痛剂一起联合给药可以以单一的剂型给药或以分开的剂型同时、依次或分别给药。
在一些实施方式中，本发明提供一种在有需要的对象中治疗或预防由高胃泌素血症导致的骨疾病(例如骨丢失，骨质量受损和骨折)的方法，所述方法包括将治疗有效量的本发明的药物组合物或化合物单独给药或将治疗有效量的本发明的药物组合物或化合物与PPI、组胺H2-受体拮抗剂、钾-竞争性酸抑制剂或任何其它胃酸抑制剂一起联合给药。可以以单一的剂型给药或以分开的剂型同时、依次或分别给药。
在第六方面，本发明提供如本发明第一方面所定义的式(A)或(B)化合物或其药学上可接受的盐、酯、硫酯、酯或硫酯的盐或其前药在制备用于治疗或预防通过CCK2/胃泌素受体介导的疾病、由高胃泌素血症引起的或相关的疾病或与胃酸相关的疾病的药物中的用途。在一些实施方式中，所述化合物是本发明第一和第二方面所定义的式(C)或(D)化合物。优选地，式(A)或(B)化合物是化合物(TR)或其药学上可接受的盐、酯、酯的盐或其前药：
例如式(TR-A)化合物或其药学上可接受的盐：
在第七方面，本发明提供如本发明第一方面所定义的用作药物的式(A)或(B)化合物或其药学上可接受的盐、酯、硫酯、酯或硫酯的盐或其前药。在一些实施方式中，所述化合物是本发明第一或第二方面所定义的式(C)或(D)化合物。优选地，式(A)或(B)化合物是化合物(TR)或其药学上可接受的盐、酯、酯的盐或其前药，其用作药物：
例如，所述化合物可以是式(TR-A)化合物或其药学上可接受的盐：
所述药物可用于预防或治疗通过CCK2/胃泌素受体介导的疾病、由高胃泌素血症引起的或相关的疾病或与胃酸相关的疾病，如本文所述。
在第八方面，本发明提供如本发明第一方面所定义的分离的式(A)或(B)化合物或其药学上可接受的盐、酯、硫酯、酯或硫酯的盐或其前药。优选地，所述分离的(A)或(B)化合物是分离的化合物(TR)或其药学上可接受的盐、酯、酯的盐或其前药:
在本发明的任意方面，式(A),(B),(C),(D)或(E)化合物可以对映异构体的外消旋混合物、对映异构体的非外消旋混合物提供或以光学纯形式的单一对映异构体提供。在本发明的任意方面，(TR)可以对映异构体(TR2)和(TR3)的外消旋混合物，对映异构体(TR2)和(TR3)的非外消旋混合物提供，或以光学纯形式的单一对映异构体(TR2或TR3)提供。在本发明的任意方面，(TR-A)可以对映异构体(TR2-A)和(TR3-A)的外消旋混合物(TR1-A)，对映异构体(TR2-A)和(TR3-A)的非外消旋混合物提供，或以光学纯形式的单一对映异构体(TR2-A)或(TR3-A)提供。
在第九方面，本发明提供一种用于制备式(A-iii)化合物的方法：
所述方法包括将式(A-i)化合物与式(A-ii)化合物偶联以形成式(A-iii)化合物；其中R1、R2、L、W和X如本发明第一和第二方面所定义，R3是-OR6,-SR6,-OC(O)R7或–SC(O)R7，R6是氢或烷基(优选甲基)，R7是任选取代的脂族、杂脂族、芳族或杂芳族部分；R4’和R5’独立地是单环芳基或杂芳基，所述单环芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自以下基团的取代基取代：卤素、羟基、氨基、硝基、羧基、甲酰胺基、氰基、-SO3H和任选取代的C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基或二(C1-8烷基)氨基；或其保护形式。偶联可以在有机非质子溶剂的存在下进行。所述溶剂可以是例如二氯甲烷、乙腈、丙酮、四氢呋喃、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺或二甲亚砜，或它们的混合物。应理解，与本发明第一和第二方面的R4和R5相关的本发明所述实施方式已做必要的修改，适用于R4’和R5’。
在一些实施方式中，所述方法包括将式(C-i)化合物与式(A-ii)化合物偶联以形成式(C-iii)化合物。
其中R4’和/或R5’以受保护的形式提供，所述方法可包括对式(A-iii)或(C-iii)化合物脱保护的额外步骤，以形成式(A)或(C)化合物：
其中，R1和R2各自独立地是H、C1–3脂族基团、卤素或C1–3卤代脂族基团，或者R1和R2与与它们键合的间隔碳原子一起形成C3–6碳环部分；L是键或C1–3亚烷基；R3是-OR6、-SR6、-OC(O)R7或–SC(O)R7；W和X独立地是氢、卤素、C1–8烷基或C1–8烷氧基；R4和R5独立地是单环芳基或杂芳基，其任选地被一个或多个独立地选自以下基团的取代基取代：卤素、羟基、氨基、硝基、羧基、甲酰胺基、氰基、-SO3H、和任选取代的C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基或二(C1–8烷基)氨基；R6是氢或烷基(优选甲基)；以及R7是任选取代的脂族、杂脂族、芳族或杂芳族部分。
当所述方法形成式(A)化合物，其中R3是-OC(O)R7或–SC(O)R7，或形成式(C)化合物时，所述方法可任选地包括通过暴露于酸或碱将-OC(O)R7或–SC(O)R7转化为–OH或–SH的额外步骤。例如，该步骤可包括暴露于K2CO3的甲醇和水溶液。
在一些实施方式中，式(C-i)化合物是式(C-i-2)化合物，其可以与式(A-ii)化合物偶联以形成式(C-iii-2)化合物：
在一些实施方式中，式(A-i)化合物是式(A-i-a)化合物(例如式(A-i-b)化合物)，优选式(A-i-c)化合物：
在一些实施方式中，式(C-i)化合物是式(C-i-a)化合物(例如式(C-i-b)化合物)，优选式(C-i-c)化合物，更优选式(C-i-d)化合物：
在一些实施方式中，式(A-ii)化合物是式(A-ii-a)化合物：
其中PG是保护基团，优选Boc保护基团。将式(C-i-a)或(C-i-d)化合物与式(A-ii-a)化合物偶联、接着脱保护，分别产生式(TR-A)或(TR2-A)的化合物。将式(A-i-a)化合物与式(A-ii-a)化合物偶联、接着脱保护，产生式(TR)化合物。
在一些实施方式中，当式(C-i)化合物是式(C-i-2)化合物时，所述方法可包括对其对应异构体混合物(例如外消旋混合物)形式的式(C-i)化合物进行手性拆分，以提供式(C-i-2)化合物，其中手性拆分在溶剂中采用手性酸进行。在手性拆分中，手性酸可以是例如R-扁桃酸、R-樟脑-10-磺酸、或二苯甲酰基D-酒石酸，优选为R-扁桃酸。所述溶剂可以是例如乙腈、异丙醇或乙酸乙酯，优选为乙腈。例如，所述方法可包括拆分外消旋的(C-i-a)以形成(C-i-b)，之后将(C-i-d)与式(A-ii-a)化合物偶联以形成式(TR2-A)化合物的步骤。手性拆分可包括通过在溶剂中将式(C-i)化合物暴露于手性酸来形成式(C-i-2)化合物的相应手性酸盐。这之后可以将所述盐转化为式(C-i-2)的游离碱化合物，例如使用NaHCO3进行。应理解也可以通过相应的手性拆分制备(S)-对映异构体。
应理解式(A-i),(A-iii),(C-i),(C-iii),(A-i-a),(A-i-c),(C-i-a)和(C-i-c)化合物可以对映异构体的外消旋混合物、对映异构体的非外消旋混合物提供或以光学纯形式的单一对映异构体提供。
与本发明第一和第二方面的式(A),(B),(C),(D),(E),(F),(TR)和(TR-A)化合物的R1,R2,R3,L,W,X,R4,R5,R6和R7相关的本发明所述实施方式已做必要的修改，适用于本发明的第九方面。
在第十方面，本发明提供如本发明第九方面所定义的式(A-i),(C-i)或(C-i-2)的中间体。在一些实施方式中，所述中间体是式(A-i-a),(A-i-b),(A-i-c),(C-i-a),(C-i-b),(C-i-c)或(C-i-d)化合物。
在第十一方面，本发明提供用于制备式(C-i-2)化合物的方法，所述方法包括手性拆分其对映异构体混合物(例如外消旋混合物)形式的式(C-i)化合物，所述手性拆分包括在溶剂中将所述式(C-i)化合物暴露于手性酸。在一些实施方式中，所述方法包括手性拆分化合物(C-i-a)以产生化合物(C-i-b)。优选地，所述方法包括手性拆分化合物(C-i-c)以产生化合物(C-i-d)。所述手性酸可以是例如R-扁桃酸、R-樟脑-10-磺酸、或二苯甲酰基D-酒石酸，优选为R-扁桃酸。所述溶剂可以是例如乙腈、异丙醇或乙酸乙酯，优选为乙腈。手性拆分可包括通过在溶剂中将式(C-i)化合物暴露于手性酸来形成式(C-i-2)化合物的相应手性酸盐。这之后可以将所述盐转化为式(C-i-2)的游离碱化合物，例如使用NaHCO3进行。应理解也可以通过相应的手性拆分制备(S)-对映异构体。
附图说明
图1显示将(TR2-A)剂量与五肽胃泌素输注给药后的H+浓度均值与时间的图。
发明详述
下面将解释在本申请的说明书中使用的术语的含义，并且将详细描述本发明。
本文所用的术语“脂族”是指取代或未取代的直链、支链或环状烃，其是完全饱和的或含有一个或多个非芳族的不饱和单元。脂族基团包括取代或未取代的直链、支链或环状烷基、烯基、炔基及其杂化物，例如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。在各种实施方式中，脂族基团具有1至12个、1至8个、1至6个或1至3个碳。例如，C1–3脂族基团包括直链和支链C1–3烷基、烯基和炔基以及环丙基。术语“杂脂族”是指其中一个或多个碳原子被杂原子代替的脂族基团。术语“杂原子”是指氮(N)、氧(O)或硫(S)。
术语“亚烷基”是指二价烷基。“亚烷基”是亚甲基或聚亚甲基，即-(CH2)n-，其中n是正整数。亚烷基可以是取代的或未取代的。取代的亚烷基是其中一个或多个亚甲基氢原子被取代基替代的亚烷基。合适的取代基包括以下对取代的脂族基团描述的那些。亚烷基链还可以在一个或多个位置被脂族基团或取代的脂族基团取代。
术语“碳环部分”是指环状脂族基团并且包括例如环烷基部分。
术语“芳基”是指包含一至三个环的C6–14(优选C6–10)芳族烃，其各自是任选取代的。芳基包括但不限于苯基、萘基、和蒽基。在一些实施方式中，芳环上的两个相邻取代基与间隔环原子一起形成任选取代的稠合的5-至6-元芳族或4-至8-元非芳族环，其具有0-3个选自N，O和S的环杂原子。因此，如本文所用的术语“芳基”包括其中芳环与一个或多个杂芳族环、脂环族环或杂环稠合的基团，其中连接的基团或连接点在芳环上。
术语“杂芳基”和“杂芳基-”是指具有5至14个环原子，优选5、6、9或10个环原子并且除了碳原子外还具有一至四个杂原子作为环原子的芳族基团。术语“杂原子”是指N，O或S。在一些实施方式中，杂芳基上的两个相邻取代基与间隔环原子一起形成任选取代的稠合的5-至6-元芳族环或4-至8-元具有0-3个选自N，O和S的环杂原子的非芳环。因此，本文所用的术语“杂芳基”和“杂芳基-”还包括其中杂芳环与一个或多个芳族环、脂环族环或杂环稠合的基团，其中连接的基团或连接点在杂芳环上。
本文所用的“卤素”指的是氟、氯、溴和碘。
本文所用的“卤代脂肪族”是指上述定义的被一个或多个卤素部分取代的脂族部分。
本文所用的“烷氧基”是指-O-烷基部分。烷基如本文所定义，并且因此，可如本文中对脂肪族部分的任选取代基所定义的那样被任选地取代。
本文所用的“甲酰胺基”是指-C(O)NR2部分，其中，每个R独立地为H或脂族基团，优选H。
本文所用的“氨基”是指-NH2，“烷基氨基”是指-NH烷基，“二烷基氨基”是指-N(烷基)2，其中每个烷基可以相同或不同。
如本文所使用的，术语“包括”是指“包括但不限于”。
本文所用的术语“取代的”是指特定部分的氢基被指定取代基的基团取代，条件是该取代产生稳定或化学上可行的化合物。本文所用的短语“一个或多个取代基”是指取代基数量等于一个至最大可能的取代基数量，基于可成键位点的数量。除非另有说明，当存在多个取代基时，取代基可以相同或不同。
芳基或杂芳基可以任选被取代。在芳基或杂芳基的不饱和碳原子上的合适的取代基包括：卤素、-NO2、-CN、-R’、-C(R’)＝C(R’)2、-C≡C-R’、-OR’、-SR’、-S(O)R’、-SO2R’、-SO3R’、-SO2N(R’)2、-N(R’)2、-NR’C(O)R’、-NR’C(O)N(R’)2、-NR’CO2R’、-NR’SO2R’、-NR’SO2N(R’)2、-O-C(O)R’、-O-CO2R’、-OC(O)N(R’)、-C(O)R’、-CO2R’、-C(O)N(R’)2、-P(O)(R’)2、-P(O)(OR’)2、-O-P(O)-OR’，其中R'独立地为氢或任选取代的脂族、杂脂族、芳族或杂芳族部分，或两次出现的R'与它们的间隔原子一起形成任选取代的5-7元芳族环、杂芳族环、脂环族环或杂环。
脂族或杂脂族基团(包括碳环或杂环)可以是“任选取代的”。除非另有定义，任选取代的脂族或杂脂族基团的饱和碳上的合适取代基选自上文针对芳基或杂芳基的不饱和碳所列举的取代基，并且所述合适的取代基还包括以下：＝O、＝S、＝C(R”)2,其中R”是氢或任选取代的C1–6脂族基团。
除了上述定义的取代基外，非芳族杂环的氮上的任选取代基还包括并通常选自R’、-N(R’)2、-C(O)R’、-C(O)OR’、-S(O)2R’、-S(O)2N(R’)2，其中每个R'如上所定义。杂芳基或非芳族杂环的环氮原子也可以被氧化以形成相应的N-羟基或N-氧化物化合物。
如本文所用，化合物的“保护形式”是指其中功能部分被保护基团保护的化合物。要保护的官能部分可以是羟基、羧基、氨基或烷基氨基。因此，本文使用的受保护形式可以包含受保护的羟基、受保护的羧基或受保护的氨基或烷基氨基部分。保护包括暂时封闭所述部分，使得反应可以选择性地在多官能化合物中的另一个反应位点进行。受保护的氨基或烷基氨基可以被选自以下保护基团的保护基团保护，所述保护基团包括但不限于：氨基甲酸酯(包括氨基甲酸甲酯，氨基甲酸乙酯和取代的氨基甲酸乙酯(例如Troc)，苄氧羰基(Cbz)，叔丁氧羰基(BOC)，9-芴基甲氧基羰基(FMOC)，对甲氧基苄氧基羰基(Moz或MeOZ)，乙酰基(Ac)，苯甲酰基(Bz)，苄基(Bn)，对甲氧基苄基(PMB)，3,4-二甲氧基苄基(DMPM)，对甲氧基苯基(PMP)，琥珀酰基(Suc)，甲氧基琥珀酰基(MeOSuc)，甲酰基，氨基甲酸酯保护基团，甲苯磺酰基(Ts)，其它磺酰胺(例如Nosyl和Nps)。例如，在某些实施方式中，如本文所详述的，使用某些示例性的氧保护基团。受保护的羟基或羧基可以被选自以下保护基团的氧保护基保护，所述保护基团包括但不限于乙酰基(Ac)、苯甲酰基(Bz)、苄基(Bn)、新戊酰基(Piv)、甲基醚，取代的甲基醚(例如MOM(甲氧基甲基醚)、β-甲氧基乙氧基甲基醚(MEM)、MTM(甲基硫代甲基醚)、BOM(苄氧基甲基醚)、对甲氧基苄基(PMB)、PMBM(对甲氧基苄氧基甲基醚))、取代的乙基醚、乙氧基乙基醚、取代的苄基醚、甲氧基三苯甲基(MMT)、四氢吡喃基(THP)、三苯甲基(Tr)、甲硅烷基醚(例如TMS(三甲基甲硅烷基醚)、TES(三乙基甲硅烷基醚)、TIPS(三异丙基甲硅烷基醚)、TBDMS(叔丁基二甲基甲硅烷基醚)、三苄基甲硅烷基醚、TBDPS(叔丁基二苯基甲硅烷基醚、TOM(三异丙基甲硅烷氧基甲基))、酯(例如甲酸酯、乙酸酯、苯甲酸酯(Bz)、三氟乙酸酯、二氯乙酸酯)、碳酸酯、环状缩醛和缩酮。应当理解，本发明不旨在限于这些保护基团；而是，可以使用上述标准容易地鉴定各种另外的等效保护基团并且在本发明中使用。另外，各种保护基团描述于“有机合成中的保护基团(ProtectiveGroups in Organic Synthesis)”第三版，Greene，T.W，和Wuts，P.G.，Eds.，John Wiley&Sons，纽约：1999，其全部内容通过引用并入本文。
根据本领域的标准术语，本文中使用的“有机非质子溶剂”是指不能用作质子供体的有机溶剂。非质子溶剂包括但不限于二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙腈、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、丙酮、己烷、戊烷、苯、甲苯、1,4-二噁烷、乙醚和氯仿。
如本文所述，式(A),(B),(C),(D),(E),(F),(TR),(TR2),(TR-A)和(TR2-A)化合物是CCK2/胃泌素受体拮抗剂。本发明的药物组合物和化合物可用于预防和/或治疗与CCK2/胃泌素受体相关的疾病、由高胃泌素血症引起或相关的疾病或与胃酸相关的疾病。这样的疾病包括与CCK2受体-携带细胞相关的疾病或涉及胃泌素的生理功能丧失或功能障碍的疾病。因此，可以治疗和/或预防的疾病的实例包括但不限于以下任意一种或多种疾病：胃和十二指肠溃疡、NSAID诱导的胃溃疡、消化不良、GORD、巴雷特氏食管、ZES、由PPI或其它酸抑制剂诱导的高胃泌素血症(包括戒断的效果)和由高胃泌素血症导致的病症(例如骨丢失，骨质量受损和骨折)、胃炎(包括幽门螺杆菌诱发的胃炎和自身免疫性慢性萎缩性胃炎的并发症，例如胃类癌和ECL细胞增生)、神经内分泌肿瘤(不限于胃类癌)、壁细胞增生、胃基底腺息肉、胃癌、结肠直肠癌、甲状腺髓样癌、胰腺癌和小细胞肺癌。本发明的药物组合物还可用于预防和/或治疗由中枢或外周CCK2受体控制的生理功能的功能障碍所引起的疾病，例如焦虑、伤害感受、疼痛、药物成瘾、镇痛依赖和镇痛戒断反应。
当用于预防或治疗疾病时，本发明的组合物可以以“有效量”给药。“有效量”是指“治疗有效量”，即与没有治疗的情况下所预期的相比，在单剂量或多剂量给药时足以引起疾病严重程度可检测的降低、防止疾病进展或缓解疾病症状的化合物的量。本发明的治疗方法治疗的对象优选为人对象。
本发明的组合物可用于降低任何上述需要治疗的疾病的症状的严重性。本发明的组合物还可用于向任何上述疾病的易感患者、处于任何上述疾病风险中的患者或罹患任何上述疾病的患者给药。用于预防上述疾病的组合物不需要在所有情况下绝对预防疾病的发生，但是当向易患该疾病或处于疾病风险中的患者给药时可以预防或延迟所述病症的发生。一种或多种上述疾病可能在对象中组合存在，因此，本发明的药物组合物可以组合治疗一种或多种上述疾病。
本文所述的式(A),(B),(C),(D),(E),(F),(TR)和(TR-A)化合物及其实施方式具有至少一个手性碳原子，并且可以具有超过一个手性碳原子。本发明包括任何光学纯度水平的任何对映异构体形式及其混合物，包括外消旋和非外消旋混合物。因此，本文公开的化合物的所有立体异构形式形成本发明的一部分。例如，化合物(TR)具有手性碳原子，并且本发明被理解为同时包括任何光学纯度水平的两种对映异构体形式及其混合物，包括外消旋和非外消旋混合物。本文所述的光学纯形式的对映异构体具有至少90％、优选至少95％、更优选至少98％、甚至更优选至少99％的对映异构体过量(ee)。ee可以例如通过手性HPLC评估。
本文公开的化合物可以以非溶剂化形式以及溶剂化形式存在(例如与药学上可接受的溶剂例如水，乙醇等的溶剂化形式)，并且意图是本发明包括溶剂化和非溶剂化形式。式(A),(B),(C),(D),(E),(F),(TR),(TR2),(TR-A)和(TR2-A)化合物和本文所述的实施方式，其对映异构体及其混合物可以游离化合物或其合适的盐或水合物形式提供。盐应该是药学上可接受的盐，并且盐和水合物可以通过常规方法制备，例如使本发明的化合物与其抗衡离子不干扰化合物的预期用途的酸或碱接触。药学上可接受的盐的实例包括氢卤酸盐、无机酸盐、有机羧酸盐、有机磺酸盐、氨基酸盐、季铵盐、碱金属盐、碱土金属盐等。碱性化合物可以与各种无机酸和有机酸形成无毒的酸加成盐，即含有药理学上可接受的阴离子的盐，包括但不限于苹果酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、单宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖二酸盐、糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐。酸性化合物可与各种药理学上可接受的阳离子形成盐，包括碱金属或碱土金属盐，特别是钙、镁、钠、锂、锌、钾和铁盐。包括碱性或酸性部分的化合物也可以与各种氨基酸形成药学上可接受的盐。
术语“前药”是指通过各种机制，例如通过酯酶、酰胺酶、磷酸酶、氧化和/或还原性代谢，在体内转化以产生所公开的化合物或药学上可接受的盐的化合物。
式(A),(B)或(TR)的化合物的酯或硫酯是其中R3(-OH或-SH)的H被部分-C(O)R替代的化合物，其中R是任选取代的脂族、杂脂族、芳族或杂芳族部分。前药还可以通过用基团诸如-P(O)(OH)2、-P(O)(O(C1–6)烷基)2、烷基羰基氧基烷基(例如，(C1–6)烷基羰基氧基甲基)、1-甲基-1-((C1–6)烷基羰基氧基)乙基、(C1–6)烷基羰基氧基甲基)、N-(C1–6)烷氧基羰基氨基甲基、琥珀酰基或α-氨基烷基羰基(例如，天然存在的L-氨基酸)替换R3的-OH或-SH基团的氢原子形成。前药可以由胺官能团形成，例如，通过产生酰胺或氨基甲酸酯、N-烷基羰基氧基烷基衍生物、(氧代二氧杂环戊烯基)甲基衍生物，N-曼尼西碱(N-Mannich base)、亚胺或烯胺形成。
本发明包括提供基本上无定形或基本上结晶形式的本文所述的化合物。例如，本发明包括基本上无定形或基本上结晶形式的化合物(TR2-A)。“基本上结晶的”和“基本上无定形的”是指其可以分别为至少特定重量百分比的结晶或无定形化合物。在一些实施方式中，基本上结晶或基本上无定形是指分别为至少70％、至少80％、至少90％或至少95％结晶或无定形的化合物。
本发明的药物组合物可另外包含一种或多种药学上可接受的赋形剂，例如药学上可接受的载体、稀释剂、防腐剂、增溶剂、稳定剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、着嗅剂、盐、缓冲剂、包衣剂和抗氧化剂。用于配制药物组合物的合适的赋形剂和技术是本领域熟知的(参见例如Remington:(药剂科学和实践)The Science andPractice of Pharmacy,第20版，A.Gennaro,Lippincott Williams&Wilkins,2000)。合适的赋形剂包括但不限于药物级淀粉、甘露醇、乳糖、玉米淀粉、硬脂酸镁、硬脂酸、海藻酸、糖精钠、滑石、纤维素、纤维素衍生物(例如羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素)、葡萄糖、蔗糖(或其他糖)、碳酸钠、碳酸钙、碳酸镁、磷酸钠、磷酸钙、明胶、琼脂、果胶、液体石蜡油、橄榄油、醇、洗涤剂、乳化剂或水(优选无菌)。
药物组合物可以进一步包含佐剂和/或一种或多种另外的治疗活性剂。
药物组合物可以以单位剂型提供，通常在密封容器中提供，并且可以作为试剂盒的一部分提供。这种试剂盒将通常(虽然不必需)包括使用说明。其可包括多种所述的单位剂型。
药物组合物可适于通过任何合适的途径给药，例如通过口服、口腔或舌下途径或肠胃外途径给药，包括皮下、肌内、静脉内、腹膜内和皮内、直肠和局部给药和吸入给药。这样的组合物可以通过药学领域中已知的任何方法制备，例如通过在无菌条件下将活性成分与赋形剂混合。
适合于口服给药的药物组合物可以以离散单元，例如胶囊或片剂；以粉末或颗粒；以溶液、糖浆或悬浮液(在水性或非水性液体中；或以可食用泡沫或可打发体(whips)；或以乳液)存在。用于片剂或硬明胶胶囊的合适的赋形剂包括乳糖、玉米淀粉或其衍生物、硬脂酸或其盐。与软明胶胶囊一起使用的合适的赋形剂包括例如水或油(例如植物油、液体石蜡油或橄榄油)、蜡、脂肪、半固体或液体多元醇等。对于溶液和糖浆的制备，可以使用的赋形剂包括例如水、多元醇和糖。对于悬浮液的制备，油(例如植物油)可用于提供水包油或油包水悬浮液。
适于通过吸入给药的药物组合物包括细颗粒粉剂或雾剂，其可通过各种类型的计量剂量的加压气溶胶、喷雾器或吹入器产生。
适用于肠胃外给药(例如皮下、肌内、静脉内、腹膜内)的药物组合物包括水性和非水性无菌注射溶液，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与预期接受者的血液基本等渗的溶质；和水性和非水性无菌悬浮液，所述悬浮液可以包括悬浮剂、增稠剂和润湿剂。可用于注射溶液的赋形剂包括例如水，醇，多元醇，甘油和植物油。合适的水性载体包括林格氏溶液和等渗氯化钠。水性悬浮液可以例如包括悬浮剂，例如纤维素衍生物，藻酸钠，黄蓍胶，聚乙烯吡咯烷酮和润湿剂例如卵磷脂。组合物可以存在于单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿和小瓶中，并且可以以冷冻干燥(冻干)条件储存，只需要加入无菌液体载体，例如用于注射的水，立即使用。可由无菌粉末剂、颗粒剂和片剂制备临时注射溶液剂和混悬剂。
在一些实施方式中，本发明的药物组合物是长效制剂，其配制成在例如数周或数月的期间内提供受控的药物释放到血流中，这取决于确切的制剂。长效制剂可以是例如包含式(A),(B),(C),(D),(E),(F),(TR),(TR2),(TR-A)或(TR2-A)化合物或如本文所述的任何实施方式的纳米颗粒以及一种或多种赋形剂，例如表面稳定剂，填充剂或载体的纳米颗粒制剂，或包含包封在胶束纳米颗粒中的式(A),(B),(C),(D),(E),(F),(TR),(TR2),(TR-A)或(TR2-A)化合物或如本文所述的任何其实施方式的制剂。制剂通常是皮下或肌肉注射，以在肌肉或皮肤下产生药物储库。长效制剂通常是固体或油基的。
当用于预防或治疗疾病时，本发明的组合物可以“有效量”给药。对于用作单一疗法，“有效量”是指“治疗有效量”，即与没有治疗的情况下所预期的相比，在单剂量或多剂量给药时，所述化合物的量足以引起疾病严重程度的可检测的降低，以防止疾病的发展或者减轻疾病的症状。在本发明与另一种药剂组合使用的情况下，与没有治疗的情况或单独使用第二药剂治疗的情况下所预期的相比，“有效量”是指当与另一种药剂组合通过单次或多次剂量给药时，该量足以引起疾病严重程度的可检测的降低，以防止疾病的发展或减轻疾病症状。当用作单一治疗时，“有效量”可以与与第二药剂组合使用时相同或不同。
本发明物质的剂量可以在宽范围内变化，这取决于多种因素，包括待治疗的疾病或病症，要治疗的个体的年龄、体重和状况，给药途径等。由药师最终确定使用的合适剂量。然而，通常，当给予本发明化合物时，对于每种给药途径采用的每日剂量(以一次剂量或多次分剂量给药)将为0.001至5,000毫克/天，通常为1至1,000毫克/天，更多通常为2-200毫克/天，更通常为2-50毫克/天。典型的剂量可以为在0.01μg/kg和50mg/kg之间，优选在10μg/kg和10m/kg之间，例如在100μg/kg和2mg/kg之间，以剂量/单位体重表示。
以下实施例描述了本发明的示例性化合物(TR)，其包括光学纯形式的对映异构体(TR2)和(TR3)或这些对映异构体的任何混合物和(TR2-A)。这些化合物被证明是CCK2/胃泌素受体拮抗剂，与成功用作药物的YF476相比显示出有利的性质。这些性质包括改善的溶解性、生物利用度、无定形形式的稳定性和对CCK2受体的选择性(超过CCK1受体)。
实施例
缩写
DCM 二氯甲烷
DIPEA N,N’-二异丙基乙胺
DMF N,N’-二甲基甲酰胺
DMS 硫酸二甲酯
GC 气相色谱
HPLC 高效液相色谱
MeI 甲基碘
MTBE 甲基叔丁基醚
THF 四氢呋喃
TLC 薄层层析
UV 紫外线
气相色谱在Shimadzu GC2014上进行。HPLC在安捷伦/HP1100逆相HPLC系统上进行。在具有QNP(1H/13C/19F/31P/冷冻器)的400Mz Bruker Avance 111光谱仪或500Mz双重(1H/13C)Bruker Avance 111HD光谱仪上记录NMR光谱。在Exeter Analytical CE-440元素分析仪上进行元素分析(CHN)。XPRD光谱在Panalytical X'pert Pro衍射仪上获得。
提供本发明的以下实施例以帮助理解本发明，但不应被认为是限制本发明的范围。除非另有说明，试剂可以是市售的或根据文献中的方法制备。
实施例1：(TR1)的合成
(TR1)根据以下方案1合成。应当理解，通过适当改变起始材料3、4和7，该方案通常可以适用于合成式(A)和(B)的化合物。
根据以下方案2、3和4合成用于合成(TR1)的试剂3、4和7：
4-羟基-3,3-二甲基-2-丁酮(1)
将3-甲基-2-丁酮(250mL，201.3g，2.34摩尔)，多聚甲醛(84.2g，2.80摩尔)和三氟乙酸(365mL，4.77摩尔)的混合物在氮气气氛下在90℃加热7小时(h)。将所得溶液冷却至0-5℃，并用2M氢氧化钠溶液中和，同时保持温度在0-5℃。混合物用二氯甲烷(3×1L)萃取。合并的萃取液用无水硫酸钠干燥，在真空下仔细汽提除去溶剂，得到油状物(260g)。将粗产物在90℃/50mmHg下通过15cm Fenski填充柱蒸馏，得到两个主要馏分。包含的馏分1为71.5克，经气相色谱(GC)检测纯度为89.7％，包含的馏分2为75.7克，经GC纯度检测纯度为95.6％。馏分2用于下一步骤。
1-溴-4-羟基-3,3-二甲基-2-丁酮(2)
化合物1(75.7克，652毫摩尔)在无水甲醇(400mL)中溶解，并在氮气气氛下冷却至-10℃。将溴(104.1克，652毫摩尔)在黑暗中在30分钟内缓慢加入，同时保持-10℃的温度。然后将混合物在0℃下搅拌1小时。GC显示几乎所有的起始材料已经被消耗，并且95％的产品组分已经形成。加入乙酸乙酯(600毫升)，并用冷水(600毫升)洗涤混合物。水层用氯化钠饱和，并用乙醚(4×300mL)萃取。合并的乙酸乙酯和乙醚萃取液用10％碳酸钠溶液(300mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在40℃的真空下除去溶剂，得到浅橙色/棕色的油状物(118.6g)。
1-溴-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-3,3-二甲基-2-丁酮(3)
将咪唑(43.0g，631毫摩尔)在二氯甲烷(530mL)中的溶液冷却至-15℃至-20℃，同时在氮气气氛下搅拌。加入化合物2(102.7g，527毫摩尔)，得到澄清溶液。缓慢加入叔丁基-二甲基-甲硅烷基氯化物(91.1g，604毫摩尔)，同时保持温度在-15℃至-20℃。然后将混合物在该温度下搅拌2.5小时。少量水淬样品的GC表明所有化合物2已经消耗。加入水(500mL)，除去下层有机层，用更多的水(2×500mL)洗涤。将合并的水层用乙醚(2×800mL)重新萃取。合并的二氯甲烷和乙醚层用硫酸钠干燥，在真空下汽提除去溶剂，得到油状物(187g)。通过硅胶(3kg)色谱，在1％三乙胺的己烷溶液中浆料填充，用3％乙酸乙酯的己烷溶液作洗脱剂，得到产物。在真空下汽提除去良好馏分的溶剂，得到几乎无色的油(113.8g，经GC测定为94.2％A)。纯度较差的馏分也汽提除去溶剂，再得到33g(经GC测定为85％A)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.24(s,2H)；3.55(s,2H)；1.17(s,6H)；0.86(s,9H)；0.02(s,6H)。
2-(2-氨基苯甲酰基)吡啶(4)
将2-溴吡啶(307.6g，1.95摩尔)溶解在甲苯(1.2L)中并在氮气气氛下冷却至低于-60℃。缓慢加入正丁基锂(1.6M，在己烷中；1190mL，1.91摩尔)，同时保持温度低于-60℃。将混合物在该温度下搅拌15分钟。少量淬灭样品的GC表明大部分2-溴吡啶已被消耗。在20分钟内缓慢加入2-氨基苄腈(100g，0.85摩尔)的甲苯(590mL)溶液，同时保持温度低于-60℃。使混合物升温至室温过夜。将混合物倒入3M盐酸(1.9L)中，并在室温下搅拌1小时。除去有机层并用1M盐酸萃取。合并的水层用甲苯(500mL)洗涤。然后将酸性溶液用25％氨溶液碱化至pH＝9，同时，保持温度在约0-5℃。将混合物在该温度下搅拌1小时。将所得沉淀物过滤，用水洗涤并干燥，得到黄色/棕色粉末(171g，GC＝95.7％(总未校正面积％)，具有邻近的4.3％A的后峰(after-peak))。将其直接用于下一步骤。
3-叔丁氧基羰基氨基-苯甲酸甲酯(5)
在氮气气氛下将二碳酸二叔丁酯(56g，257毫摩尔)加入到3-氨基苯甲酸甲酯(19.4g，128毫摩尔)和N,N-二异丙基乙胺(33.2g，257毫摩尔)的乙腈(150mL)溶液中。将混合物在70℃下加热65小时(整个周末)。薄层层析(TLC；洗脱液50％乙酸乙酯的己烷溶液)表明几乎所有的3-氨基苯甲酸甲酯(Rf＝0.65)已被消耗，并且形成了新的组分(Rf＝0.8)。在真空下汽提混合物以除去乙腈和N,N-二异丙基乙胺，得到橙色油状物。将粗产物在己烷(3体积)中溶解/研磨。将混合物在4℃(冰箱)下静置1小时，同时固体完全形成。将混合物过滤并用少量冷己烷洗涤。将固体在己烷(100mL)中浆料化1小时，然后重新过滤。将产物真空干燥过夜，得到浅黄色/乳霜状固体(19.5g)。
3-(N-叔丁氧基羰基-N-甲基-氨基)-苯甲酸(6)
向化合物5(19.4g，77.2毫摩尔)的无水N，N-二甲基甲酰胺(250mL)溶液中分批加入氢化钠(60％分散在油中；7.72g，193毫摩尔)，同时保持温度低于10℃。然后将混合物加热至室温并搅拌1小时。将混合物再冷却至5℃，并在该温度下在30分钟内滴加甲基碘(35.6g，251毫摩尔)。然后将混合物加热至室温并搅拌2小时。TLC(洗脱液：20％乙酸乙酯的己烷溶液)表明反应完成。经TLC，化合物5和甲基化产物具有相同的Rf＝0.55。然而，当用茚三酮显影时，仅化合物5产生有色斑点。在高真空下除去大部分N，N-二甲基甲酰胺，残余物分配在乙酸乙酯(700mL)和5％碳酸氢钠溶液(250mL)之间。然后用水(5×100mL)洗涤有机层，然后用无水硫酸钠干燥并汽提，得到油状物(21.7g)。将油状物溶于甲醇(420mL)中并冷却至5℃，然后加入1M氢氧化锂水溶液(78mL，78毫摩尔)。然后将混合物在室温下搅拌过夜。再加入1M氢氧化锂溶液(38mL，38毫摩尔)，将混合物搅拌1小时。在加入更多的水(400mL)并用33％乙酸乙酯的己烷溶液(150mL，然后75mL)洗涤之前，在真空下除去大部分甲醇。使用校准的pH计非常小心地将搅拌的溶液调节至pH＝4.0，并缓慢滴加5M盐酸(过酸化可导致除去BOC基团)。用乙酸乙酯(2x 10mL)萃取混合物。合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，然后汽提成油状物(19.3g)。将油状物从5％乙酸乙酯的己烷溶液(170mL)中结晶，同时在0℃下搅拌1小时。将产物过滤并用少量冷的己烷洗涤，然后在30℃真空干燥过夜，得到乳白色粉末(15.5g)。TLC(洗脱液50％甲苯、40％乙酸乙酯、10％甲酸溶液)表明水解产物的Rf＝0.60，而甲基化酯中间体的Rf＝0.75。
3-[N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-氨基]苯基异氰酸酯(7)
在氮气气氛下，向化合物6(15.2g，60.5毫摩尔)的丙酮(120mL)溶液中加入三乙胺(7.05g，69.7毫摩尔)，将所得溶液冷却至0-5℃。滴加氯甲酸乙酯(8.19g，75.5毫摩尔)的丙酮(20mL)溶液，同时保持温度在0-5℃。将混合物在该温度下搅拌30分钟，在此期间形成沉淀。逐滴加入叠氮化钠(5.9g，90.6毫摩尔)的水(20mL)溶液，同时保持温度在0-5℃。将混合物在该温度下搅拌1小时。TLC(洗脱液50％甲苯，40％乙酸乙酯，10％甲酸溶液)表明所有的化合物16(Rf＝0.60)已经转化为中间体有机叠氮化物(Rf＝0.75)。将溶液倒入甲苯(150mL)和水(300mL)的搅拌混合物中。去除甲苯层并用盐水洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。注意不让溶液蒸发导致更高的浓度，因为有机叠氮化物可能剧烈热不稳定。在氮气气氛下将干燥的甲苯溶液加热至回流(约105℃)2小时。约70℃的温度时注意到气体逸出。TLC表明所有中间体有机叠氮化物已经被消耗。在高真空下将溶液汽提得到黄色油状物(13.8g，GC纯度＝96.9％A)。使用前，将该湿敏材料在4℃下在氮气中储存。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.27-7.17(位于CHCl3峰下方,m)；7.08(1H,d)；7.02(1H,s)；6.89(1H,m)；3.24(3H,s)；1.46(9H,s)ppm。
2-(苯并三唑-1-基)-2-(苄氧基羰基氨基)-乙酸(8)
将氨基甲酸苄酯(82.1g，0.54mol)、乙醛酸一水合物(50g，0.54mol)和苯并三唑(64.7g，0.54mol)在甲苯(2.5L)中的混合物用迪安-斯塔克(Dean and Stark)水去除装置加热回流2小时。在第一小时内收集总共23mL的水，然后停止水蒸发。使混合物冷却至室温，过滤所得固体，用乙醚(200mL)洗涤。将湿滤饼在40℃/50mmHg下干燥过夜，得到乳白色粉末(134.9g)。
苄基-(苯并三唑-1-基-[2-(吡啶-2-羰基)-苯基氨基甲酰基]-甲基)-氨基甲酸酯(9)
在氮气气氛下将化合物4(16.39g，82.7毫摩尔)和化合物8(35.97g，110.2毫摩尔)在二氯甲烷(300mL)中的混合物冷却至0℃。向混合物中加入4-二甲基氨基吡啶(1.2g，9.8毫摩尔)，然后加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(23g，120.0毫摩尔)。将混合物在0℃下搅拌10分钟，然后加热至室温，再搅拌10分钟。TLC(洗脱液：50％乙酸乙酯的己烷溶液)表明所有化合物4(Rf＝0.60)已经被消耗，形成新产物(Rf＝0.20)。在真空下汽提混合物除去溶剂，然后分配在乙酸乙酯(300mL)和饱和碳酸氢钠溶液(300mL)之间。有机层用盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，然后汽提，得到油状物(65g)。该粗物质直接用于下一步骤。
3-(苄氧羰基)氨基-2,3-二氢-5-(2-吡啶基)-1H-1,4-苯并二氮杂-2-酮(10)
将粗化合物9(65g)溶于氨饱和的甲醇(710mL)中并在室温下搅拌1小时。TLC(洗脱液：50％乙酸乙酯的己烷溶液)表明化合物9(Rf＝0.20)已被消耗，所需产物(Rf＝0.15)与副产物(Rf＝0.5)一起形成。在真空下汽提溶液除去溶剂(和氨)并溶解在乙酸(450mL)中。将该溶液在室温下搅拌4小时。在真空下汽提混合物以除去大部分乙酸，然后分配在氯仿(300mL)和1M氢氧化钠溶液(200mL)之间。有机层用盐水(200mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，并在真空下汽提，得到油状物。将粗油状物溶于乙酸乙酯(100mL)中并使其结晶过夜。将混合物过滤并用少量冰冷的乙酸乙酯和己烷(100mL)洗涤。将产物在40℃真空干燥过夜，得到棕褐色固体(15.9g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.67(1H,br s)；8.61(1H,d,J＝4.1Hz)；8.10(1H,d,J＝7.5Hz)；7.84(1H,dt,J＝7.5Hz和1.4Hz),7.5-7.25(8H,m)；7.20(1H,t,J＝7.5Hz)；6.99(1H,d,J＝7.5Hz)；6.65(1H,d,J＝8.2Hz)；5.37(1H,d,J＝8.2Hz)；5.16(2H,d,J＝2.7Hz)ppm。
3-(苄氧基羰基)氨基-1-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-3,3-二甲基-2-氧代-丁基]-2,3-二氢-5-(2-吡啶基)-1H-1,4-苯并二氮杂-2-酮(11)
将化合物10(14.6克，37.8毫摩尔)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(150毫升)中并在氮气气氛下冷却至0℃。分批加入氢化钠(60％油分散体；1.96克，49.0毫摩尔)，同时保持温度在0-5℃。然后将混合物加热至室温并搅拌1小时。在此期间形成悬浮液。将混合物再冷却至0-5℃，缓慢加入化合物3(33.9克，109.6毫摩尔)，同时保持温度低于10℃。然后将混合物加热至室温并搅拌1小时。形成接近澄清的溶液。少量淬灭样品的TLC(洗脱液：50％乙酸乙酯的己烷溶液)表明化合物10(Rf＝0.15)已被消耗以形成新化合物(Rf＝0.55)。将混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液(100mL)中，然后在高真空下汽提以除去大部分二甲基甲酰胺(和水)。将残余物溶于二氯甲烷(150mL)中，并用饱和碳酸氢钠溶液(5×150mL)洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，汽提得到油状物。通过硅胶(500g)层析，用1％三乙胺的己烷溶液浆料填充，使用20％-50％乙酸乙酯的己烷溶液作为洗脱液，得到产物。在真空下汽提良好馏分除去溶剂，得到浅黄色固体。将产物在己烷中研磨，过滤并干燥，得到粉末(19.2g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.62(1H,d,J＝4.8Hz)；8.15(1H,d,J＝8.2Hz)；7.81(1H,t,J＝7.5Hz)；7.47(1H,t,J＝7.5Hz)；7.42-7.27(6H,m)；7.24(partly under CHCl3,m)；7.10(1H,d,J＝8.2Hz)；6.73(1H,d,J＝8.2Hz)；5.49(1H,d,J＝8.2Hz)；5.20-5.10(3H,m)；4.46(1H,d,J＝17.7Hz)；3.67(2H,s)；1.24(2H,s)；1.19(3H,s)；0.90(9H,s)；0.08(3H,s)；0.05(3H,s)ppm。
3-氨基-1-(4-羟基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-2,3-二氢-5-(2-吡啶基)-1H-1,4-苯并二氮杂-酮(12)
化合物11(19.0克，30.90毫摩尔)溶解于无水二氯甲烷(400mL)中，并在氮气气氛下冷却至-10℃。将溶液用溴化氢气体缓慢饱和，同时保持温度在-10℃至0℃之间。混合物迅速出油并粘在烧瓶的侧壁。然后将混合物在0℃下搅拌2小时。TLC(洗脱液：10％甲醇的二氯甲烷溶液)表明化合物11(Rf＝0.9)已消耗，形成新的组分(Rf＝0.40)。向混合物中加入水，搅拌5分钟，然后使层分离。除去水层，用饱和碳酸氢钠溶液碱化至pH＝8。将溶液用氯化钠饱和，然后用氯仿(3×750mL)萃取。合并的氯仿萃取液用无水硫酸钠干燥并汽提得到油状物。在高真空下，油形成玻璃状泡沫固体(11.6g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.62(1H,d,J＝4.1Hz)；8.14(1H,d,J＝8.2Hz)；7.72(1H,t,J＝7.5Hz)；7.54(1H,t,J＝7.8Hz)；7.37(2H,m),7.3-7.15(部分位于CHCl3下方,m)；5.03(1H,d,J＝17.7Hz)；4.71(1H,s)；4.45(1H,d,J＝17.7Hz)；3.64(2H,q,J＝12Hz)；2.85(3H,br s)；1.24(3H,s)；1.23(3H,s)ppm。
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ209.1(q),169.7(q),155.6(q),148.9(CH),142.3(q),136.8(CH),132.1(CH),130.5(CH),128.7(q),124.7(CH x2),124.3(CH),122.0(CH),70.6(CH2),70.2(CH),56.0(CH2),49.5(q),21.0(CH3),20.7(CH3)ppm。
通过正离子电喷雾的质谱M+H＝367.1764m/z(对于组成C20H23N4O3的理论值：367.1765m/z)
1-[1-(4-羟基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-2-氧代-5-吡啶-2-基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基]-3-(3-甲基氨基-苯基)-脲(TR1)
在氮气气氛下将化合物12(3.41g，9.31毫摩尔)的二氯甲烷(28mL)溶液冷却至-10℃。缓慢加入化合物7(1.74g，7.01毫摩尔，由于化合物12的纯度低，仅为0.75摩尔当量)的二氯甲烷(10mL)溶液，同时保持温度在-5至-10℃之间，搅拌混合物20分钟。将混合物加热至0℃，再搅拌20分钟，然后进一步加热至20℃，最后搅拌30分钟。TLC(洗脱液：10％甲醇的二氯甲烷溶液)表明化合物12(Rf＝0.40)和化合物7(Rf＝0.8)已被消耗，形成化合物13(Rf＝0.55)。在Rf＝0.60和0.90处可以看到其他较小的TLC组分。在25℃下减压汽提混合物除去溶剂，然后重新溶于乙酸乙酯(35mL)中。将混合物冷却至0℃，缓慢加入水(20mL)，然后缓慢加入盐酸(32％；17mL)，同时保持温度低于5℃。将混合物缓慢加热至20℃，并在该温度下搅拌3小时。TLC(洗脱液：10％甲醇的二氯甲烷溶液)表明化合物18(Rf＝0.55)已被消耗，形成化合物19(Rf＝0.50)。在Rf＝0.60和0.90处可以看到其他较小的TLC组分。除去乙酸乙酯层，水层用更多的乙酸乙酯(20mL)洗涤。将二氯甲烷(100mL)加入到水层中，并用20％氢氧化钠溶液将pH调节至10，同时保持温度在0-5℃。二氯甲烷层用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，然后真空除去溶剂，得到泡沫状玻璃状固体(4.90g)。粗产物通过硅胶(100g)快速色谱纯化，用2％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，直到除去TLC测定的Rf＝0.6的组分，然后用5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱。合并良好馏分，并汽提得到黄色泡沫/固体(3.56g)。将固体溶于热的异丙醇(20mL)中，并且当其冷却至室温时使其缓慢结晶。将混合物过滤并用少量冷异丙醇洗涤。将产物在35℃/0.1mmHg下在干燥枪中真空干燥3天，得到1.68g白色固体。将固体与较小试验反应的产物混合，得到2.03g白色粉末。
1H NMR(400MHz,CD3CN)δ8.57(1H,dd,J＝4.4和2.4Hz)；8.08(1H,d,J＝8.2Hz)；7.89(1H,dt,J＝7.4和2.0Hz)；7.59(1H,dt,J＝8.2和1.4Hz)；7.47-7.42(3H,m)；7.32-7.25(2H,m)；7.00(1H,t,J＝8.2Hz)；6.79(1H,t,J＝2.0Hz)；6.67(1H,d,J＝7.5Hz)；6.57(1H,dd,J＝8.2和2.0Hz)；6.24(1H,dd,J＝8.2和2.0Hz)；5.45(1H,d,J＝8.2Hz)；4.87,4.97(2H,AB系统,JAB＝18.1Hz)；4.34(1H,br s)；3.57(2H,d,J＝6.1Hz)；3.18(1H,t,J＝5.8Hz)；2.70(3H,s)；1.14(3H,s)；1.13(3H,s)ppm。
通过正离子电喷雾质谱法得到的精确质谱M+H＝515.2418m/z(对于组成C20H23N4O3的理论值：515.2407m/z)。
通过手性HPLC色谱分离外消旋混合物(TR1)，得到纯的对映异构体(TR2)和(TR3)
柱：Chiralcel OD 250mm×20mm,5μm
模式：超临界流体(SFC)
洗脱剂：甲醇40％，无改性剂
流速：50mL/分钟
运行时间：4分钟
TR2的停留时间：2.2分钟
TR3的停留时间：2.8分钟
通过置信水平为100％的视觉圆二色谱(VCD)确定(TR2)和(TR3)的绝对构型(如上所示)。
(TR2)的X-射线粉末衍射(XRPD)确认化合物是无定形的。
实施例2：TR2和TR2-A的手性合成
根据以下方案5合成(TR2)和(TR2-A)。应当理解，通过适当改变起始材料7和10，该方案通常可以适用于合成如本文所述的本发明化合物。化合物7和10按照实施例1所述方法进行合成。
(1-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-3,3-二甲基-2-氧代-丁基]-2-氧代-5-吡啶-2-基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)-氨基甲酸苄酯(11)
在氮气气氛下在0-5℃下将化合物10(300g,776毫摩尔)在四氢呋喃(3.0L)中浆料化。以小份添加叔丁醇钾(113.3g)，同时将温度保持在0-5℃。短暂形成澄清溶液后形成另一固体。混合物加热至约20℃1小时，然后重新冷却至0-5℃。缓慢加入化合物3(600.4g,1.94摩尔)，同时将温度保持在0-5℃。混合物加热至约20℃，并再搅拌2小时。TLC(洗脱液：50％乙酸乙酯的己烷溶液)表明仍存在一些化合物10。混合物加热至30℃，并再搅拌1小时。TLC表明反应完成。将混合物倒入水(8L)中，并用乙酸乙酯萃取(8L，然后3L)。使用5％盐水(5L)洗涤合并的有机萃取液，然后用无水硫酸钠干燥。蒸发溶液得到粘性橙色油状物(895g)。将油状物缓慢倒入搅拌中的己烷(3L)。搅拌得到的化合物2小时，形成细浆料。过滤混合物并用己烷(2×1L)洗涤。在约25℃下空气干燥产物过夜，得到棕褐色固体(448g,94％产量)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.63(1H,d,J＝4.8Hz),8.15(1H,d,J＝8.2Hz),7.81(1H,t,J＝7.5Hz),7.47(1H,t,J＝7.5Hz),7.42–7.28(6H,m),7.23(1H,t,J＝7.5Hz),7.10(1H,d,J＝8.2Hz),6.73(1H,d,J＝8.2Hz),5.49(1H,d,J＝8.2Hz),5.20–5.10(3H,m),4.45(1H,d,J＝17.7Hz),3.67(2H,s),1.24(3H,s),1.19(3H,s),0.90(9H,s),0.08(3H,s),0.05(3H,s)。
3-氨基-1-(3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-5-吡啶-2-基-1,3-二氢苯并[e][1,4]二氮杂-2-酮(12)
化合物11(448g,729毫摩尔)溶解在二氯甲烷(15L)中，并在氮气气氛下冷却至-10至-5℃。将溴化氢气体鼓泡通入混合物，直至其饱和。溶液变浑浊，然后形成油状物。在0℃下将该混合物搅拌2小时。TLC(洗脱液：10％甲醇的二氯甲烷溶液)表明反应完成。加入水(4L)，将混合物搅拌5分钟。除去二氯甲烷层，水层用更多的二氯甲烷(500mL)洗涤水层。用固体碳酸氢钠将水层调节至pH＝8，然后用二氯甲烷(3×2L)萃取。合并的二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥，然后在真空下部分蒸发，得到厚浆料。过滤浆料并用乙醚(300mL)洗涤。在室温下空气干燥，得到白色固体(220g,82％产率)。HPLC纯度为97.7％。
3-氨基-1-(4-乙酰氧基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-5-吡啶-2-基-1,3-二氢-苯并[e][1,4]二氮杂-2-酮(13-A)
将化合物12(50g,136.5毫摩尔)溶解在饱和(约1.5摩尔)的氯化氢的乙酸(500mL)溶液中，在约20℃搅拌2小时。TLC(洗脱液：10％甲醇的二氯甲烷溶液)表明反应完成。在真空下蒸发溶液，得到琥珀色油状物。油状物溶解在水(500mL)中，用固体碳酸氢钠调节至pH＝8。混合物用二氯甲烷(2×300mL)萃取。用水洗涤合并的二氯甲烷层并用无水硫酸钠干燥。在真空下蒸发溶液，得到琥珀色泡沫化(foamed-up)玻璃体。将该玻璃体溶解于热乙酸乙酯(250mL)。冷却过程中发生结晶。过滤混合物并用略微冰冷的乙酸乙酯(50mL)洗涤滤饼。在30℃真空干燥产物，得到灰白色固体(48.7g,87％产率)。
(R)-3-氨基-1-(4-乙酰氧基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-5-吡啶-2-基-1,3-二氢-苯并[e][1,4]二氮杂-2-酮(R)-扁桃酸盐(14-A R-扁桃酸盐)
在20℃将化合物13-A(28g,68.7毫摩尔)在乙腈(178mL)中浆料化。加入R-扁桃酸(6.27g,41.1毫摩尔)，搅拌混合物直至形成澄清溶液。加入乙醚(59mL)，之后缓慢冷却混合物至-5℃。过滤混合物并用冰冷的30％乙醚的乙腈溶液(40mL)洗涤。在40℃真空干燥产物，得到接近白色的固体(20.3g,43％ee通过手性HPLC得到的R-异构体)。在约45℃条件下将粗产物溶解在乙腈(89mL)中，使其缓慢冷却至20℃，静置2小时。缓慢形成纤维状晶体。过滤混合物并用冷(-18℃)乙腈(20mL)洗涤，接着用乙醚(40mL)洗涤。在35℃真空干燥产物，得到白色固体(8.2g,21％产率，98.8％ee通过手性HPLC得到的R-异构体)。
(R)-3-氨基-1-(4-乙酰氧基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-5-吡啶-2-基-1,3-二氢-苯并[e][1,4]二氮杂-2-酮(14A)
将化合物14-A R-扁桃酸盐(8.2g,14.63毫摩尔)溶解于二氯甲烷(100mL)并用饱和的碳酸氢钠溶液(2×75mL)洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥并在真空下蒸发，得到泡沫化玻璃体(5.3g,89％产率)。
(R)-1-[1-(4-乙酰氧基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-2-氧代-5-吡啶-2-基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基]-3-(3-叔丁氧基羰基-甲基氨基-苯基)-脲(18A)
化合物14-A(6.83g,16.72毫摩尔)溶解在二氯甲烷(50mL)中，并在氮气气氛下冷却至-5至-10℃。在20分钟时间内缓慢加入化合物7(5.46g粗,22.0毫摩尔)的二氯甲烷(10mL)溶液，同时保持温度在-5至-10℃。将化合物加热至0℃，搅拌20分钟，之后再进一步加热至20℃30分钟。TLC(洗脱液：10％甲醇的二氯甲烷溶液)表明仅有少量14-A残留。在30℃真空蒸发混合物，得到玻璃状泡沫。粗产物通过硅胶(250g)色谱纯化，用1％-3％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱。真空蒸发良好的产品馏分，得到泡沫化玻璃体(6.42g,58％产率,96.8％HPLC纯度,98.9％ee R-异构体手性HPLC纯度)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.60(1H,d,J＝4.1Hz),8.15(1H,d,J＝7.5Hz),7.79(1H,dt,J＝8.0,2.0Hz),7.51(1H,dt,J＝8.0,1.3Hz),7.41–7.32(3H,m),7.26(t,部分位于CHCl3峰下方),7.18(1H,t,J＝7.5Hz),7.11(1H,d,J＝8.2Hz),7.06(1H,d,J＝8.2Hz),6.93(1H,d,J＝8.2Hz),6.81–6.75(1H,m),5.70(1H,d,J＝7.5Hz),5.02(1H,d,J＝18.0Hz),4.52(1H,d,J＝18.0Hz),4.16(2H,q,J＝8.0Hz),3.21(3H,s),2.06(3H,s),1.45(9H,s),1.29(3H,s),1.25(3H,s)ppm。
(R)-1-[1-(4-乙酰氧基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-2-氧代-5-吡啶-2-基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基]-3-(3-甲基氨基-苯基)-脲(TR2-A)
将化合物18-A(5.18g,7.89毫摩尔)溶解在饱和(约1.5摩尔)的氯化氢的乙酸(50mL)溶液中，在约20℃搅拌3小时。TLC(洗脱液：10％甲醇的二氯甲烷溶液)表明反应完成。真空蒸发溶液，去除大部分乙酸。油状物溶解在水(50mL)中，用固体碳酸氢钠调节至pH＝8。混合物用二氯甲烷(2×50mL)萃取。用水洗涤合并的二氯甲烷层并用无水硫酸钠干燥。在真空下蒸发溶液，得到琥珀色泡沫化玻璃体(3.79g,86％粗产率)。部分粗产物(1.78g)通过硅胶(100g)色谱纯化，用1％-3％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱。真空蒸发良好的产品馏分，得到泡沫化玻璃体(1.39g,78％回收率)。96.2％HPLC纯度,98.3％ee R-异构体手性HPLC纯度。通过正离子电喷雾质谱得到的精确质谱：
M+H＝557.2510m/z(对于组成C30H32O6N5理论值：557.2512)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.60(1H,d,J＝4.8Hz),8.15(1H,d,J＝8.2Hz),7.78(1H,dt,J＝8.0,2.0Hz),7.50(1H,dt,J＝8.0,2.0Hz),7.40–7.31(2H,m),7.25(t,部分位于CHCl3峰下方),7.10(1H,d,J＝7.5Hz),7.03(1H,t,J＝8.2Hz),6.91(1H,d,J＝8.2Hz),6.84(1H,s),6.76(1H,t,J＝2.0Hz),6.53(1H,dd,J＝8.2,2.0Hz),6.29(1H,dd,J＝8.2,2.0Hz),5.72(1H,d,J＝8.2Hz),4.98(1H,d,J＝17.7Hz),4.50(1H,d,J＝17.7Hz),4.14(2H,q,J＝8.0Hz),3.75(1H,br s),2.78(3H,s),2.05(3H,s),1.28(3H,s),1.24(3H,s)ppm。
(R)-1-[1-(4-羟基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-2-氧代-5-吡啶-2-基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基]-3-(3-甲基氨基-苯基)-脲(TR2)
将TR2-A(2.01g,3.61mmol)的甲醇(26mL)溶液加入碳酸钾(1.0g,7.23mmol)的水(12mL)溶液中，并在20℃搅拌2小时。TLC(洗脱液：10％甲醇的二氯甲烷溶液)表明水解完成。减压蒸发掉大部分甲醇。残留物再用水(20mL)稀释，并萃取到二氯甲烷中(2×40mL)。蒸发合并的萃取液得到玻璃状泡沫(1.82g)。粗产物通过硅胶(100g)色谱纯化，用1％-3％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱。真空蒸发良好的产品馏分，得到浅黄色泡沫化玻璃体(1.45g,78％产率)。97.1％HPLC纯度,95.0％ee R-异构体手性HPLC纯度)。正离子电喷雾质谱得到的精确质谱为M+H＝515.2398m/z(对于组成C28H30O6N4的理论值为515.2407)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.60(1H,d,J＝4.8Hz),8.12(1H,d,J＝7.5Hz),7.78(1H,dt,J＝7.5,2.0Hz),7.52(1H,dt,J＝7.5,1.4Hz),7.39–7.32(2H,m),7.26(t,部分位于CHCl3峰下方),7.20(1H,d,J＝8.2Hz),7.04(1H,t,J＝8.0Hz),6.94–6.85(2H,m),6.76(1H,t,J＝1.4Hz),6.55(1H,dd,J＝8.2,2.0Hz),6.30(1H,dd,J＝8.2,2.0Hz),5.70(1H,d,J＝8.2Hz),4.90(1H,d,J＝17.7Hz),4.49(1H,d,J＝17.7Hz),3.58(2H,q,J＝8.2Hz),3.16(1H,br s),2.78(3H,s),1.21(3H,s),1.20(3H,s)ppm。
实施例3:通过(3-氨基苯基)甲基氨基氨基甲酸叔丁酯(N4)合成(TR2-A)的替代方 法
(TR2)和(TR2-A)可根据以下方案6进行合成：
化合物14-A根据以下方案7进行合成：
化合物11根据以下方案8进行合成：
化合物N4根据以下方案9进行合成：
4-羟基-3,3-二甲基-2-丁酮(1)
将多聚甲醛(465g,15.48mol)和3-甲基-2-丁酮(1111g,12.90mol)加入三氟乙酸(6.0L)，在油浴中在1小时内将混合物缓慢加热至90℃。在约50℃多聚甲醛全部溶解。油浴冷却至75℃(向油中加入干冰)。一旦烧瓶内容物温度降低至85℃，加入多聚甲醛(465g,15.48mol)和3-甲基-2-丁酮(1111g,12.90mol)的另一进料。混合物缓慢放热至约92℃(油浴仍为75℃)。一旦烧瓶内容物温度降低至85℃，加入多聚甲醛(465g,15.48mol)和3-甲基-2-丁酮(1111g,12.90mol)的最后进料。放热结束之后，在90℃再搅拌混合物8小时，之后冷却至室温过夜。GC(少量样品加入水中并用于氢氧化钠调节至pH＝14然后萃取至DCM)表明约2％3-甲基-2-丁酮和86％产物。将产物溶液倒入冰(16kg；来自冷冻器的超冷室)和固体氢氧化钠(3kg)的搅拌中的混合物中。加入氢氧化钠(约260g)的另一进料，将pH刚好调节至14。GC表明水解完成。水性溶液用氯化钠(加入约3kg)饱和，然后立刻用DCM(3×8L)萃取。使用饱和盐水(3L)洗涤合并的DCM层，然后用无水硫酸钠干燥。真空蒸发溶液，得到浅棕色液体(约3.7kg)。粗产物通过20cmVigreux蒸馏柱(约95℃/45mmHg)蒸馏(前段被去除，蒸馏之后仍保留一些残留物)得到接近无色的产物(2.85kg,63％产率,GC纯度＝98％)。
1-溴-4-羟基-3,3-二甲基-2-丁酮(2)
化合物1(2566g,22.09mol)溶解在甲醇(13L)中并在20℃搅拌。覆盖反应烧瓶以避光。在15分钟内加入溴(200g,1.25mol)。在短暂的导入期之后，反应脱色并发生轻微放热。一旦混合物脱色，将其冷却至0-5℃。在2小时内缓慢加入溴(3300g,20.65mol)，同时保持温度为0-5℃(现在快速脱色)。GC表明约94％产物和<1％的起始材料。通过GC可以看到几个小的后峰。立刻将混合物倒入饱和盐水溶液(20L)和冰(4kg)中，然后用DCM(4×8L)萃取。使用饱和盐水(2×5L)洗涤合并的DCM萃取液，然后用无水硫酸钠干燥。在40℃下真空蒸发溶液，得到浅黄色/棕色液体(4191g,97％产率,GC纯度91％)。
1-溴-4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-3,3-二甲基-2-丁酮(3)
将咪唑(645g,9.47mol)加入DCM(8.5L)中并在氮气气氛下冷却至-15至-20℃。在-15至-20℃下加入化合物2(1650g,8.46mol)，得到透明溶液。缓慢加入叔丁基-二甲基甲硅烷基氯化物(1365g,9.06mol)，保持温度为15至-20℃。在该温度下再搅拌混合物3小时。GC表明78％的产物，小于1％的起始物和14％的残留叔丁基-二甲基甲硅烷基氯化物。将反应混合物倒入冷水(7.5L)中。去除水层并再用DCM(2L)再次萃取。合并的DCM层用水(2×2L)洗涤，接着用饱和盐水(2×3L)洗涤，之后用无水硫酸钠干燥。在40℃下真空蒸发溶液，得到黄色油状物(2559g,97％产率,GC纯度约75％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.24(s,2H)；3.55(s,2H)；1.17(s,6H)；0.86(s,9H)；0.02(s,6H)。
2-(2-氨基苯甲酰基)吡啶(4)
将2-溴吡啶(1075g,6.80mol)的甲苯(4.2L)溶液冷却至<-65℃，同时在氮气气氛下搅拌。在1小时内加入正丁基锂(1.6M，己烷中；4160mL,6.66mol)，同时保持温度<-60℃。在<-60℃条件下搅拌混合物30分钟，之后通过GC检查是否存在2-溴吡啶。在30分钟内将2-氨基苄腈(350g,2.96mol)的甲苯(2.3L)溶液(可能需要稍微加热以使其溶解)缓慢加入，并保持温度<-60℃。使混合物缓慢加热至室温，同时搅拌过夜。将混合物小心地倒入冷的盐酸溶液(1.96L 32％盐酸,3L水和2kg并)，同时搅拌。再搅拌混合物1小时，之后使其分层。去除下层水层，用盐酸溶液(350mL 32％盐酸和3L水)萃取上层有机层。向合并的酸性水层中加入冰(4kg)，之后用35％氨溶液(约6.5L)调节至pH＝10。按需要加入更多的冰，使最终温度为0–5℃。在0-5℃再搅拌浆料30分钟。过滤浆料并用水洗涤直至无氨。在50℃的循环空气烘箱中干燥产物(直至达到恒重)，得到黄色/橙色固体(558g,95％产率，87％GC纯度)。
2-(苯并三唑-1-基)-2-(苄氧基羰基氨基)-乙酸(8)
将剧烈搅拌的苯并三唑(512g,4.30mol)、氨基甲酸苄酯(650g,4.30mol)和乙醛酸一水合物(396g,4.30mol)在甲苯(12L)中的混合物加热至回流，用迪安斯塔克装置去除水。调节加热速率以保持不起泡(foaming down)。在收集约150mL水之后停止水蒸发。搅拌的混合物中同时形成固体。在回流下再加热混合物1小时，之后使其缓慢冷却过夜。将固体过滤和硬拉下来(pull down hard)30分钟，之后用MTBE(2×1L)洗涤。在40℃对产物进行空气干燥(直至达到恒重)，得到接近白色的固体(1330g,95％产率,经TLC确定单一斑点)。
(苯并三唑-1-基-[2-(吡啶-2-羰基)-苄基氨基甲酰基]-甲基)-氨基甲酸苄酯(9)
在60L反应容器中将粗化合物4(2000g,10.09mol)和化合物8(3620g,11.09mol)在DCM(36L)中的混合物冷却至0–5℃。一次性加入4-二甲基氨基吡啶(148g,1.21mol)。在30分钟内以小量逐份加入盐酸1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(2417g,12.61mol)，同时保持温度为0-5℃。在0-5℃下再搅拌混合物1小时，得到透明的深棕色溶液。TLC(洗脱液：50％乙酸乙酯的己烷溶液)表明所有的化合物4(Rf＝0.7黄色斑点)已被消耗，形成化合物9(Rf＝0.35)。加入饱和碳酸氢钠溶液(20L)并将混合物搅拌5分钟。去除水层，用无水硫酸钠干燥有机层，之后真空蒸发，得到厚的油状物(约150g,140％粗产率)。
(2-氧代-5-吡啶-2-基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)–氨基甲酸苄酯(10)
将粗化合物9(约7.15kg)溶解在甲醇(10L)中并在室温下搅拌。一次性加入用氨(10L)饱和的甲醇溶液。在室温下搅拌混合物1小时。TLC(洗脱液：50％乙酸乙酯的己烷溶液)表明化合物9(Rf＝0.35)使苯并三唑(Rf＝0.5)减少，得到未环化的中间体(Rf＝0.1)。首先将混合物加热至约30℃，然后使其搅拌过夜，同时冷却至室温。在搅拌的混合物中形成固体。TLC(洗脱液：50％乙酸乙酯的己烷溶液)表明未环化的中间体(Rf＝0.1)环化形成化合物10(Rf＝0.15)。过滤浆料并用冷甲醇(1L)洗涤滤饼，接着用乙酸乙酯(3L)、最后用乙烷(2L)洗涤。将滤液汽提至其原始体积的大约一半，使其静置2天。过滤掉形成的第二产物(如果形成的话)，并用冷甲醇、乙酸乙酯和己烷洗涤。合并的良好产物在40-50℃下在循环空气橱中空气干燥，得到灰白色固体(1785g)。所述物质在2倍体积的DCM中浆料化，过滤并重新干燥，以改进纯度(如果需要的话)。
使用上述方法由114.4kg粗化合物9制得总共27.6kg(92％HPLC纯度)粗化合物10。DCM浆料降低产量至25.9kg(98％HPLC纯度；42％产率，经过化合物4的两步骤)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.67(1H,s),8.61(1H,d,J＝4.1Hz),8.10(1H,d,J＝7.5Hz),7.84(1H,dt J＝1.4,7.5Hz),7.50-7.28(8H,m),7.20(1H,t,J＝7.5Hz),6.99(1H,d,J＝7.5Hz),6.65(1H,d,J＝8.2Hz),5.37(1H,d,J＝8.2Hz),5.15(2H,d,J＝2.7Hz)。
(1-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-3,3-二甲基-2-氧代-丁基]-2-氧代-5-吡啶-2-基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)-氨基甲酸苄酯(11)
在氮气气氛下在0-5℃将化合物10(1040g,2.69摩尔)浆料化在四氢呋喃(10.4L)中。一次性加入叔丁醇钾(423g,3.77mol)，得到10℃放热。大体形成接近透明的溶液，之后形成另一固体。将混合物再冷却至0-5℃。在30分钟内缓慢加入粗化合物3(2080g,粗产物6.72mol，含5.04mol活性成分)，同时保持温度为0-5℃。再搅拌30分钟。将混合物加热至20-25℃，再搅拌1小时。TLC(洗脱液：50％乙酸乙酯的己烷溶液)表明形成化合物12(Rf＝0.55)，但仍有化合物10(Rf＝0.15)。还可以看到甲硅烷基副产物斑点。一次性加入叔丁醇钾(78g,0.70mol)的另一进料，在20分钟内搅拌混合物。偶尔TLC检查表明所有化合物10已被消耗。如果TLC表明仍有一些化合物10，加入额外的粗化合物3(200g,0.65mol)搅拌10分钟。加入额外的叔丁醇钾(78g,0.70mol)并搅拌20分钟。现在反应应该完全，但可以重复该步骤直至化合物10被消耗。再搅拌混合物1小时，然后使其在室温下静置过夜。将反应混合物倒入5％盐水溶液(20L)并用乙酸乙酯(10L，然后5L)萃取。合并的有机萃取液用5％盐水溶液(5L)萃取，然后用无水硫酸钠干燥。真空蒸发溶液，得到粘性油状物(有时包含一些晶体)。将油状物缓慢倒入己烷(15L)，放置一段时间以形成固体。将得到的浆料搅拌2小时以形成细浆料。过滤混合物并用己烷(2×3L)洗涤。在循环空气橱中20-30℃空气干燥滤饼得到茶色固体(1291g,78％产率,97.6％HPLC纯度)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.63(1H,d,J＝4.8Hz),8.15(1H,d,J＝8.2Hz),7.81(1H,t,J＝7.5Hz),7.47(1H,t,J＝7.5Hz),7.42–7.28(6H,m),7.23(1H,t,J＝7.5Hz),7.10(1H,d,J＝8.2Hz),6.73(1H,d,J＝8.2Hz),5.49(1H,d,J＝8.2Hz),5.20-5.10(3H,m),4.45(1H,d,J＝17.7Hz),3.67(2H,s),1.24(3H,s),1.19(3H,s),0.90(9H,s),0.08(3H,s),0.05(3H,s)。
(3-硝基苯基)-氨基甲酸叔丁酯(N2)
将三乙胺(915g,9.04mol)和4-(二甲基氨基)-吡啶(30g,0.25mol)在室温下加入3-硝基苯胺(833g,6.03mol)的四氢呋喃(6.1L)溶液。将混合物加热至回流，然后关闭外部加热。以保持回流的速率加入二碳酸二叔丁酯(1448g,6.63mol)的四氢呋喃(2.2L)溶液。再采用外部加热将混合物加热至回流2小时。TLC(洗脱液：33％乙酸乙酯的己烷溶液)表明所有的3-硝基苯胺(Rf＝0.6)已被消耗，形成化合物N2(Rf＝0.85)。混合物冷却至室温过夜。真空蒸发溶剂，将残留物溶解在DCM(15L)中。用水洗涤(2×8L)混合物，然后用无水硫酸钠过夜。将DCM溶液通过硅胶柱(1kg)，用更多的DCM(5L)洗涤以去除残留的4-(二甲基氨基)-吡啶。真空蒸发溶液得到厚浆料。加入己烷(4L)，使混合物冷却过夜。过滤混合物并用己烷(3L)洗涤。在循环空气橱中干燥滤饼过夜，得到茶色固体(1205g,84％产率,经TLC确定单一斑点)。
甲基-(3-硝基苯基)-氨基甲酸叔丁酯(N3)
在氮气气氛下将(3-硝基苯基)-氨基甲酸叔丁酯(904g,3.79mol)的四氢呋喃(11.25L)溶液冷却至0-5℃。在1小时内以小份逐次加入叔丁醇钾(555g,4.95mol)，同时保持温度<10℃。然后在约10℃搅拌混合物90分钟，之后重新冷却至0–5℃。在1小时内缓慢加入硫酸二甲酯(622g,4.93moles)，同时保持温度<10℃。使混合物加热至室温，同时搅拌过夜。TLC(洗脱液：10％乙酸乙酯的己烷溶液)表明所有的N2(Rf＝0.35)已被消耗，形成N3(Rf＝0.45)。将混合物小心地倒入稀氨溶液(3L 33％w/w氨溶液和10L水)并搅拌1小时。将混合物萃取至DCM(3×5L)。合并的有机萃取液用水(5L)然后用盐水(5L)洗涤，之后用无水硫酸钠干燥。真空干燥混合物以得到红色/棕色油状物(943g,98％产率,98.5％GC纯度)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.14(1H,t,J＝2.1Hz),7.98(1H,dd,J＝8.1,2.0Hz),7.61(1H,d,J＝8.1Hz),7.47(1H,t,J＝8.1Hz),3.31(3H,s),1.46(9H,s)。
(3-氨基苯基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯(N4)
将三乙胺(30mL)加入甲基-(3-硝基苯基)-氨基甲酸叔丁酯(500g,1.98mol)的甲醇(2.5L)溶液中。在氮气气氛下小心地加入碳载钯(5％w/w；Johnson Matthey型87L糊料,50％水；50g)，使用帕尔摇瓶在50psi氢气压力下氢化混合物。快速摄取氢气，混合物从20℃放热至75℃。放热结束之后氢化持续1小时。TLC(洗脱液：89％氯仿、10％甲醇和1％氨溶液)表明N3(Rf＝0.75)已被消耗，并形成N4(Rf＝0.55)。将混合物小心地过滤通过GF-F纤维垫顶部的硅藻土床。真空蒸发滤液至干燥。得到的固体残余物在己烷(1000mL)中浆料化1小时。过滤混合物并用己烷(500mL)洗涤。在40℃真空烘箱中干燥产物，得到茶色固体(429g,97％产率)。98.6％GC纯度，熔点范围＝100–102℃。(该氢化也在常压下进行)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.09(1H,t,J＝7.9Hz),6.65–6.56(2H,m),6.5(1H,dd,J＝8.1,2.0Hz),3.65(2H,br s),3.22(3H,s),1.45(9H,s).
3-氨基-1-(4-乙酰氧基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-5-吡啶-2-基-1,3-二氢苯并[e][1,4]二氮杂-2-酮(13-A)
45％w/v溴化氢的乙酸(2080mL,11.6mol)溶液用更多的乙酸(11L)稀释并在室温下搅拌。一次性加入化合物11(2230g,3.63mol)(伴有4℃放热)。加热混合物至35-40℃持续2小时。TLC(少量样品用碳酸氢钠中和，并萃取至二氯甲烷，洗脱液是5％甲醇的二氯甲烷溶液)表明所有的化合物11(Rf＝0.95)已被消耗，仅残留少量Cbz保护的中间体(Rf＝0.45)。真空蒸发混合物(75℃/<100毫巴)以去除大部分乙酸。在<10℃的温度下将厚残留物溶解在冷水(20L)中，用二氯甲烷(2x 8L)洗涤以去除苄基溴化物和甲硅烷基副产物。各二氯甲烷洗涤液重新用水(3L)萃取。向水溶液中加入新鲜二氯甲烷(10L)。向搅拌的混合物中加入固体碳酸氢钠直至停止冒泡且pH＝8。去除二氯甲烷层，用更多的二氯甲烷(5L)萃取水层。合并的二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥并真空蒸发得到厚油状物。将乙酸乙酯(5L)加入油中，但仍在旋转Rotavap烧瓶中。油溶解并结晶出固体。将浆料冷却至室温并过滤。用冷乙酸乙酯充分洗涤滤饼。蒸发母液以得到进一步产物。在35℃在循环空气橱中干燥产物，得到灰白色粉末(1250g,84％产率,98.6％HPLC纯度)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.62(1H,d,J＝3.9Hz),8.17(1H,d,7.8Hz),7.81(1H,dt,J＝2.0,7.8Hz),7.49(1H,dt,J＝2.0,7.8Hz),7.42–7.33(2H,m),7.23(1H,dt,J＝1.0,7.8Hz),7.09(1H,d,J＝8.3Hz),5.10(1H,d,J＝18.0Hz),4.67(1H,s),4.43(1H,d,J＝18.0Hz),4.18(2H,q,J＝10Hz),3.65(2H,br s),2.47(1H,br s),2.08(3H,s),1.32(3H,s),1.28(3H,s)。
(R)-3-氨基-1-(4-乙酰氧基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-5-吡啶-2-基-1,3-二氢苯并[e][1,4]二氮杂-2-酮(R)-扁桃酸盐(14-A R-扁桃酸盐)
在20℃将化合物13-A(1266g,3.10mol)在乙腈(8050mL)中浆料化。似乎约一半固体溶解。向搅拌中的混合物中加入R-扁桃酸(283g,1.86mol,0.6摩尔当量)。缓慢加入剩余固体，形成透明的黄色溶液。加入乙醚(2660mL)。溶液在20℃保持透明。在30分钟内将混合物缓慢冷却至-5℃。随着温度降至低于5℃，向溶液中加入之前制备的R-扁桃酸盐(>99％ee，手性HPLC)作为晶种。形成极稠厚的悬浮液(几乎凝固)，缓慢地变稀薄，同时再搅拌2小时。过滤(缓慢)混合物并用冷(-18℃)50％乙腈的乙醚(1.5L)溶液洗涤，再仅用乙醚(2.5L)洗涤。产物在循环空气橱中在35℃干燥过夜，得到接近白色的固体(1022g略潮)。如果在空气干燥过程中仍残留任何乙腈，固体可能略粘。手性HPLC显示所述盐由约69％R-异构体和32％S-异构体组成。在约45℃将粗产物(1022g)溶解在乙腈(4.1L)中。加热直至刚好变成溶液，然后立刻自然冷却，仅偶尔搅拌。延长加热或过度加热似乎会造成产物分解。一旦温度降低至低于35℃，向溶液中加入之前制得的R-扁桃酸盐作为晶种。在4小时内缓慢冷却混合物至约20℃，偶尔搅拌。过滤稠厚的混合物并用冷(约-10℃)乙腈(1L)洗涤，接着用乙醚2L)洗涤。在35℃循环空气橱中干燥产物过夜，得到白色晶体状固体(461g,手性HPLC确定99.5％ee R-异构体，26.5％产率)。
加入上述步骤或在实施例2中制备的R-扁桃酸盐作为晶种可以用来加速结晶，但不是必须的。
(R)-3-氨基-1-(4-乙酰氧基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-5-吡啶-2-基-1,3-二氢苯并[e][1,4]二氮杂-2-酮(14-A)
将化合物14-AR-扁桃酸盐(4474g,7.98mol)溶解在饱和碳酸氢钠(25L)和二氯甲烷(25L)的搅拌中的混合物中，搅拌10分钟。去除水层并用二氯甲烷(5L)再次萃取。合并的二氯甲烷层用更多的饱和碳酸氢钠溶液(10L)洗涤。新的水层用二氯甲烷(5L)再次萃取。合并的二氯甲烷萃取液用无水硫酸钠干燥。蒸发游离碱溶液至体积降至15L。认为该溶液含3260g(7.98mol)化合物14-A。在下一步骤中直接使用该溶液。99.6％HPLC纯度,99.3％eeR-异构体手性HPLC纯度。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.62(1H,d,J＝4.1Hz),8.17(1H,d,J＝7.5Hz),7.82(1H,dt,J＝1.3,8.1Hz),7.50(1H,dt,J＝2.0,7.8Hz),7.42–7.33(2H,m),7.23(1H,t,J＝6.8Hz),7.09(1H,d,J＝8.2Hz),5.10(1H,d,J＝18.0Hz),4.67(1H,s),4.43(1H,d,J＝18.0Hz),4.18(2H,q,J＝10Hz),2.48(1H,br s),2.08(3H,s),1.56(2H,br s),1.32(3H,s),1.28(3H,s)。
(R)-1-[1-(4-乙酰氧基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-2-氧代-5-吡啶-2-基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基]-3-(3-叔丁氧基羰基-甲基氨基-苯基)-脲(18-A)
将1,1’-羰基二咪唑(421g,2.60mol)的DCM(3260mL)浆料冷却至0-5℃，同时在氮气气氛下搅拌。在30分钟内缓慢加入化合物N4(577g,2,60mol)的DCM(1630mL)溶液，同时保持温度为0-5℃。在加入过程中，1,1’-羰基二咪唑缓慢溶解形成浅橙色溶液。在0-5℃再搅拌溶液1小时，之后加热至15-20℃，再搅拌1小时。在30分钟内缓慢加入21.73％w/v化合物14A(3751mL,含815g,2.00mol)的DCM溶液，同时保持温度为15-20℃。在该温度下再搅拌混合物2小时。TLC(少量样品淬灭至饱和碳酸氢钠溶液，洗脱液是乙酸乙酯)表明所有的化合物14A(Rf＝0.1)已被消耗，形成化合物18A(Rf＝0.35)。用饱和碳酸氢钠溶液(2×6L)洗涤混合物。各洗涤液用DCM(2L)重新萃取。合并的DCM层用无水硫酸钠干燥，真空蒸发，得到厚的油状物(2020g,仍略含溶剂-湿)。加入乙酸乙酯(5L)，持续蒸发以从混合物中去除残留DCM。用乙酸乙酯使混合物体积至7.25L(粗浓度约25％w/v)。85.8％HPLC纯度，含有两种前期运行组分(6.9％和0.8％)和两种后期运行组分(3.9％和0.6％)。
化合物18-A的纯化
色谱柱湿填充有3kg在79％乙酸乙酯、20％己烷和1％三乙胺(仅在柱填充时使用三乙胺)中的硅胶。用乙酸乙酯将约1000mL化合物18A溶液(含约250g粗产物)稀释至2000mL，然后缓慢加入己烷(500mL)，同时搅拌。向柱中加入该澄清溶液。用20％己烷的乙酸乙酯溶液(需要约35L)洗脱柱直至去除极性较小的杂质，然后用乙酸乙酯(需要约35L)洗脱直至去除化合物18A。真空蒸发良好馏分以去除溶剂。停止蒸发，产物油仍可移动，之后形成厚非焦油/玻璃物。HPLC纯度96.8％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.61(1H,d,J＝4.1Hz),8.15(1H,d,J＝7.5Hz),7.79(1H,dt,J＝2.0,7.5Hz),7.51(1H,t,J＝7.9Hz),7.42–7.30(3H,m),7.26(1H,t,J＝7.5Hz),7.19(1H,t,J＝8.1Hz),7.13–7.05(2H,m),6.93(1H,d,J＝7.5Hz),6.86(1H,br s),6.75(1H,d,J＝8.1Hz),5.70(1H,d,J＝7.5Hz),5.03(1H,d,J＝18.4Hz),4.52(1H,d,J＝18.4Hz),4.16(2H,q,J＝11.0,6.0Hz),3.21(3H,s),2.07(3H,s),1.45(9H,s),1.29(3H,s),1.26(3H,s)。
(R)-1-[1-(4-乙酰氧基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-2-氧代-5-吡啶-2-基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基]-3-(3-甲基氨基-苯基)-脲(TR2-A)
将化合物18-A(1046g)溶解在用氯化氢(11L)饱和的乙酸(约1.5摩尔)中，得到浅橙色溶液。化合物由15℃放热至23℃。在室温下搅拌混合物3小时。TLC(少量样品用碳酸氢钠中和并萃取至DCM；洗脱液是乙酸乙酯)表明所有的18-A(Rf＝0.35)已转化为TR2-A(Rf＝0.20)。将氮气鼓泡通过该溶液1小时，以降低氯化氢含量。在真空(65℃/<60mmHg)下去除大部分乙酸，得到厚琥珀状油。将产物溶解在DCM(10L)中，倒入搅拌的饱和的碳酸氢钠溶液(15L)。加入更多的固体碳酸氢钠，直至停止冒泡并且pH＝8。(不使用除碳酸氢盐之外的强碱。即使碳酸盐也会去除乙酸酯基团)。去除DCM层，用DCM(2×2L)重新萃取水层。合并的DCM萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤通过硅藻土床。真空蒸发DCM溶液，得到泡沫化油状物。向材料中加入乙酸乙酯(5.5L)，但仍在旋转蒸发烧瓶中，关闭真空。油状物溶解，缓慢形成固体。使混合物冷却至室温，同时静置过夜。过滤混合物并用乙酸乙酯(4L)洗涤。硬拉下滤饼，然后在35℃真空烘箱中干燥过夜。打散固体并过筛，之后在35℃进一步真空干燥2天(第二和第三天干燥之间无重量变化)，得到灰白色粉末(740g)。如果需要的话，可用乙酸乙酯对TR2-A重结晶。
使用上述方法由约5234g化合物18-A制得总共3711g(84％产率,98.2％HPLC纯度,99.9％ee R-异构体手性HPLC纯度)化合物TR2-A。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.60(1H,d,J＝4.9Hz),8.15(1H,d,J＝7.9Hz),7.77(1H,dt,J＝1.8,7.9Hz),7.49(1H,dt,J＝1.8,7.9Hz),7.38(1H,dd,J＝1.8,7.9Hz),7.33(1H,ddd,J＝1.2,4.9,7.3Hz),7.25(具有CHCl3峰,t,J＝7.3Hz),7.10(1H,d,J＝7.3Hz),7.03–6.93(3H,m),6.75(1H,t,J＝2.1Hz),6.52(1H,dd,J＝1.8,7.3Hz),6.28(1H,dd,J＝1.8,7.9Hz),5.72(1H,d,J＝7.9Hz),4.96(1H,d,J＝18.0Hz),4.50(1H,d,J＝18.0Hz),4.14(2H,q,J＝10.6Hz),3.73(1H,br s),2.77(3H,s),2.05(3H,s),1.26(3H,s),1.23(3H,s)。
实施例4:溶解度研究
溶解度研究确认(TR1)和(TR2-A)在水性溶液中比YF476溶解度更高；(TR2-A)在水性溶液中比(TR1)溶解度更高。在透明玻璃小瓶中对测试化合物(2.5mg固体；n＝1)称重，加入伯瑞坦-罗宾森(Britton-Robinson’s)缓冲液(0.5mL)(pH 2.01,pH 3.06,pH 4.06,pH5.08,pH 5.99,pH 6.98和pH 8.16)。使用瓶辊体系在环境温度下搅拌溶液过夜，然后过滤(0.45μm孔径；未预饱和)。从滤液中取两等份(50μL)样品，用1体积0.1N氯化氢和甲醇(1:1v/v)稀释，之后用HPLC-UV分析。以10mg/mL(n＝1)在DMSO中制备标样，然后在0.1N氯化氢和甲醇(1:1v/v)中稀释10倍，得到1mg/mL溶液。对滤液中测试化合物相对于浓度标样的浓度进行定量。
采用梯度HPLC-UV系统进行分析，总循环时间为6分钟。使用光电二极管阵列检测器进行220nm-300nm的UV检测。
(TR1)和(TR2-A)相对于YF476的溶解度优势在pH4-6时特别明显，这是小肠–十二指肠至末端空肠或中髂骨(mid ilium)部分(大部分药物吸收在此发生)的pH范围。该增加的溶解度表示(TR1),(TR2),(TR3)和(TR2-A)可能更容易被生物利用，因此与YF476相比是更好的药物候选物。
以上表中所列数值对针对结晶YF476和(TR2-A)以及无定形(TR1)的。
结晶(TR2-A)与无定形(TR2-A)的溶解度曲线几乎相同，因此可能具有相当的口服生物利用度。这是令人惊讶的，因为结晶YF476的生物利用度差且必须转化为无定形形式(喷雾干燥的分散体)，以增加溶解度和口服生物利用度。这对于(TR2-A)而言不是必须的。
实施例5:形态研究
与YF476不同，研究表明(TR1)和纯的对映异构体(TR2)和(TR3)与结晶状态相比，优选无定形状态。
最初尝试结晶(TR2)和(TR3)是不成功的，表示优选无定形状态。确实，(TR2)的XRPD分析确认无定形状态。
对于合适的药物组合物的制剂，这表明相对于YF476的优点。YF476是结晶的，具有差的溶解度和生物利用度。可使用无定形YF476来增加生物利用度，但需要对其稳定化，这可通过喷雾干燥在羟丙基甲基纤维素上形成固体分散体来实现。(TR)(外消旋、非外消旋或对映异构体纯形式)(其优选无定形状态)的制剂避免了稳定化的需要。
实施例6:CCK受体拮抗
采用以下评价标准在CCK1和CCK2受体功能试验中将(TR2)和(TR3)与YF476和YM022进行比较：
HTRF:时间分辨的均一荧光
cAMP:环状腺苷一磷酸盐
CHO:中华仓鼠卵巢
实验结果示于下表：
(TR2)和(TR3)是有效的CCK2受体拮抗剂，效力较差的CCK1受体拮抗剂。在CCK2实验中，有利地将(TR2)与YF476和YM022进行比较：(TR2)与YF476和YM022相比效力仅差约5倍；虽然(TR2)对CCK2受体的亲合性与YF476对CCK2受体的亲合性相比低约5倍，但它是YM022对CCK2受体的亲合性的两倍。此外，(TR2)对CCK2受体相对于CCK1受体的选择性比YF476的选择性高30％。拮抗剂的效力表示为IC50，即导致对照激动剂响应的一半最大抑制的拮抗剂浓度。拮抗剂对受体的亲合性表示为KB，即平衡时占据50％受体的拮抗剂浓度。
实施例7:受体结合筛选
在一组80种受体中测试(TR2)和(TR3)结合其他细胞受体和核受体的可能性。实验使用放射标记的受体配体(激动剂或拮抗剂，取决于受体)，采用闪烁计计数来测量测试化合物抑制配体结合的能力。未发现明显的受体结合(除CCK2和CCK1以外)。
实施例8:临床前研究:细胞的体外增殖
在稳定转染了人胃泌素/CCK2受体基因(AGSGR)人胃腺癌细胞系中进行的磺酰罗丹明B(SRB)增殖实验中测试(TR2)和(TR3)的效力。SRB是结合蛋白的荧光染料，因此具有高速蛋白合成的细胞(增殖细胞)在SRB实验中显示高水平荧光。胃泌素片段G17具有对AGSGR细胞的抗增殖效果。因此，当用G17处理时，在SRB实验中细胞显示较低的荧光水平。将(TR2)和(TR3)与阳性对照YF476和YM022进行比较。浓度为100nM的(TR2)、YF476和YM022都完全抑制G17(10nM)的抗增殖效果。浓度为500nM的(TR3)具有同样的效果。在不存在G17的情况下，测试化合物不影响AGSGR细胞增殖。
实施例9:临床前研究:胃瘘大鼠
在有知觉的慢性胃瘘大鼠中测试皮下注射YF476、(TR2)和(TR3)对五肽胃泌素刺激的胃酸分泌的影响。所有治疗均剂量依赖性地抑制酸分泌响应。YF476、(TR2)和(TR3)的ED50值分别为0.012,0.03和0.3μmol/kg。
实施例10:健康对象的药代动力学
在最初实验中，健康志愿者以胶囊形式服用单次口服剂量100mg(TR2)作为活性药物成分。测试血浆浓度。单次口服剂量100mg活性药物成分之后(AUC＝439.1)(TR2)血浆浓度曲线下方的区域为单次口服剂量YF476 100mg(AUC＝198.5)的类似制剂的大约两倍。因此，观察到(TR2)与YF476相比生物利用度更高。
在进一步的临床研究中，健康志愿者(n＝8)以胶囊形式服用单次口服剂量5,15,50和100mg(TR2)作为活性药物成分(API)。(胶囊制剂：TR2粉末(API)在硬明胶胶囊中，无赋形剂、未加工)。测试血浆浓度。在单次口服剂量100mgAPI(AUC0–24h(ng.h/mL)＝241.5)之后(TR2)的血浆浓度曲线(AUC)下方的平均面积是单次口服剂量YF476 100mg(AUC0–24h＝81.3；n＝10)的类似制剂(YF476粉末(结晶)在硬明胶胶囊中，无赋形剂、未加工API)的大约三倍。因此，观察到(TR2)与YF476相比在健康对象中具有更好的口服生物利用度。
健康志愿者(n＝8)服用胶囊形式的单次口服剂量5,15,25和50mg(TR2-A)作为API(TR2-A(结晶)在硬明胶胶囊中，无赋形剂、未加工)。测试(TR2)和(TR2-A)的血浆浓度。在单次口服剂量50mg of(TR2-A)API(AUC0–24h＝212.5)之后(TR2)血浆浓度的曲线下方的面积与单次口服剂量(TR2)100mg(AUC0–24h＝241.5)的类似制剂大致相同。因此，观察到(TR2-A)与(TR2)相比在健康对象中具有更好的口服生物利用度。此外，(TR2-A)的血浆浓度低(AUC0–24h<10),表明(TR2-A)用作(TR2)的前药。
实施例11:临床研究:健康对象中的药效
五肽胃泌素诱导胃酸分泌，从而增加胃液中的H+浓度。在最初研究中，在健康志愿者中观察到，与给予相应剂量的YF476和五肽胃泌素输注观察到的结果相比，单次口服剂量5,25和100mg的(TR2)与五肽胃泌素输注组合给药对静脉输注五肽胃泌素诱导的胃反流液中的H+浓度增加产生类似的剂量依赖性抑制。因此，在健康对象中，(TR2)作为CCK2受体拮抗剂的效力与YF476类似。
在进一步临床研究中，在健康志愿者中单次口服剂量5,15,50和100mg的(TR2)或5,15,25和50mg(TR2-A)与五肽胃泌素输注组合给药(i.v.剂量0.6μg/kg/h，2h)。(TR2-A)给药后平均H+浓度曲线示于图1。
与给予YF476和五肽胃泌素输注观察到的结果相比，(TR2)和(TR2-A)均观察到对静脉输注五肽胃泌素诱导的胃反流液中的H+浓度增加类似的剂量依赖性的抑制。与给予100mg YF476观察到的结果相比，100mg(TR2)和50mg(TR2-A)对静脉输注五肽胃泌素诱导的胃反流液中的H+浓度增加产生类似的抑制。因此，在健康对象中，(TR2)作为CCK2受体拮抗剂的效力与YF476类似，并且(TR2-A)的效力大于(TR2)和YF476。观察到的结果显示(TR2)以剂量依赖性方式抑制五肽胃泌素的效果，并且对于完全抑制所需的(TR2-A)的剂量与(TR2)相比较低。
本发明的实施方式已用实施例进行描述，这些实施方式应认为是示例性而非限制性的。应理解可以在不脱离本发明真实范围的情况下作出形式和细节上的变化，这也是所附权利要求所限定的。

Claims (54)

1.一种药物组合物，所述组合物包含式(A)化合物或其药学上可接受的盐、酯、硫酯、酯或硫酯的盐，或其前药：
其中，R1和R2各自独立地是H或C1–3脂族基团、卤素或C1–3卤代脂族基团，或其中R1和R2与与它们键合的间隔碳原子一起形成C3–6碳环部分；
L是键或C1–3亚烷基；
R3是-OR6或-SR6；
W和X独立地是氢、卤素、C1–8烷基或C1–8烷氧基；R4和R5均独立地是单环芳基或杂芳基，其任选地被一个或多个独立地选自以下基团的取代基取代：卤素、羟基、氨基、硝基、羧基、甲酰胺基、氰基、-SO3H、和任选取代的C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基或二(C1–8烷基)氨基；
R6是氢或烷基(优选甲基)；
以及任选的一种或多种药学上可接受的赋形剂。
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，R4和R5中的至少一个是未取代的或取代的苯基或吡啶基。
3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，R4和R5中的至少一个是未取代的、单取代的或二取代的苯基，或未取代的、单取代的或二取代的2-,3-或4-吡啶基。
4.如权利要求1、2或3所述的组合物，其特征在于，R5是具有间位取代基的苯基，所述间位取代基选自NHMe、NMeEt、NEt2、F、Cl、Br、OH、OCH3、NH2、NMe2、NO2、Me、(CH2)n-CO2H、CN、CH2NMe2、NHCHO和(CH2)n-SO3H，其中n为0-2；未取代的苯基或任选地具有选自F、Cl、CH3和CO2H的取代基的2-、3-或4-吡啶基；和R4是2-、3-或4-吡啶基或苯基。
5.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，W和X都是H。
6.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，式(A)化合物是式(B)化合物或其药学上可接受的盐、酯、硫酯、酯或硫酯的盐，或其前药：
7.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，R1和R2各自独立地是C1–2烷基，L是C1–3亚烷基(例如亚甲基)，R3是-OH。
8.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述化合物是式(A)或(B)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3为-OR6、-SR6、-OC(O)R7或–SC(O)R7，R6是氢或烷基(优选甲基)，R7是任选取代的脂族、杂脂族、芳族或杂芳族部分。
9.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述式(A)或(B)化合物选自下组化合物或其药学上可接受的盐、酯、硫酯、酯或硫酯的盐，或其前药：
10.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述式(A)或(B)化合物是化合物(TR)或其药学上可接受的盐、酯、酯的盐，或其前药：
11.如权利要求10所述的组合物，其特征在于，(TR)以对映异构体(TR2)和(TR3)的外消旋混合物、对映异构体(TR2)和(TR3)的非外消旋混合物提供，或以光学纯形式的单一对映异构体(TR2)或(TR3)提供：
12.如权利要求11所述的组合物，其特征在于，所述化合物(TR)是化合物(TR2)或其药学上可接受的盐：
13.如权利要求1-5中任一项所述的组合物，其特征在于，式(A)化合物是式(C)化合物或其药学上可接受的盐：
其中，Y是–O–或–S–；以及
R7是任选取代的脂族基团、杂脂族、芳族或杂芳族部分。
14.如权利要求13所述的组合物，其特征在于，式(C)化合物是式(TR-A)化合物或其药学上可接受的盐：
15.如权利要求14所述的组合物，其特征在于，式(TR-A)化合物是式(TR2-A)化合物或其药学上可接受的盐：
16.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物以口服剂型或舌下剂型，例如片剂或者胶囊提供。
17.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物以胃肠外剂型，例如可注射溶液或悬浮液或长效制剂提供。
18.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包含额外的活性剂。
19.如权利要求18所述的组合物，其特征在于，所述额外的活性剂是组胺H2-受体拮抗剂、PPI、钾-竞争性酸抑制剂或任何其它胃酸抑制剂、细胞毒性剂、肿瘤特异性抗体或止痛剂。
20.式(C)化合物或其药学上可接受的盐：
其中，R1和R2各自独立地是H或C1–3脂族基团、卤素或C1–3卤代脂族基团，或其中R1和R2与与它们键合的间隔碳原子一起形成C3–6碳环部分；
L是键或C1–3亚烷基；
Y是–O–或–S–；
W和X独立地是氢、卤素、C1–8烷基或C1–8烷氧基；
R4和R5均独立地是单环芳基或杂芳基，其任选地被一个或多个独立地选自以下基团的取代基取代：卤素、羟基、氨基、硝基、羧基、甲酰胺基、氰基、-SO3H、和任选取代的C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基或二(C1–8烷基)氨基；
R7是任选取代的脂族基团、杂脂族、芳族或杂芳族部分。
21.如权利要求20所述的化合物，其特征在于，R4和R5中的至少一个是未取代的、单取代的或二取代的苯基，或未取代的、单取代的或二取代的2-,3-或4-吡啶基。
22.如权利要求20或21所述的化合物，其特征在于，(a)R5是具有间位取代基的苯基，所述间位取代基选自NHMe、NMeEt、NEt2、F、Cl、Br、OH、OCH3、NH2、NMe2、NO2、Me、(CH2)n-CO2H、CN、CH2NMe2、NHCH和(CH2)n-SO3H，其中n为0-2；未取代的苯基或任选地具有选自F、Cl、CH3和CO2H的取代基的2-，3-或4-吡啶基；和R4是2-、3-或4-吡啶基或苯基；和/或(b)W和X都是H。
23.如权利要求20-22中任一项所述的化合物，其特征在于，式(C)化合物是式(D)化合物或其药学上可接受的盐：
24.如权利要求20-23中任一项所述的化合物，其特征在于，R1和R2各自独立地是C1–2烷基，L是C1–3亚烷基(例如亚甲基)，Y是–O–。
25.如权利要求20-23中任一项所述的化合物，其特征在于，式(C)或(D)是式(E)化合物或其药学上可接受的盐：
其中R8选自下组：
26.如权利要求25所述的化合物，其特征在于，所述化合物是式(F)化合物或其药学上可接受的盐：
27.如权利要求20-26中任一项所述的化合物，其特征在于，R7是取代或未取代的C1–6脂族基团，例如甲基。
28.如权利要求20-27中任一项所述的化合物，其特征在于，所述化合物是化合物(TR2-A)或其药学上可接受的盐：
29.如权利要求1-18中任一项所述的药物组合物或如权利要求20-28中任一项所述的化合物，用于治疗。
30.如权利要求1-19中任一项所述的药物组合物或如权利要求20-28中任一项所述的化合物，用于治疗或预防与CCK2/胃泌素受体相关的疾病、由高胃泌素血症引起的或相关的疾病或与胃酸相关的疾病。
31.用于权利要求30的组合物或化合物，用于治疗和/或预防以下任意一种或多种疾病：胃和十二指肠溃疡、NSAID诱导的胃溃疡、消化不良、GORD、巴雷特氏食管、ZES、由PPI或其它酸抑制剂诱导的高胃泌素血症(包括戒断的效果)、胃炎(包括幽门螺杆菌诱发的胃炎和自身免疫性慢性萎缩性胃炎的并发症，例如胃类癌和ECL细胞增生)、神经内分泌肿瘤(不限于胃类癌)、壁细胞增生、胃基底腺息肉、胃癌、结肠直肠癌、甲状腺髓样癌、胰腺癌和小细胞肺癌。
32.如权利要求1-19中任一项所述的药物组合物或如权利要求20-28中任一项所述的化合物，用于治疗或预防由中枢CCK2受体控制的生理功能的丧失或功能障碍相关的疾病；例如焦虑、伤害感受、疼痛、药物成瘾、镇痛依赖或镇痛戒断反应。
33.如权利要求1-19中任一项所述的药物组合物或如权利要求20-28中任一项所述的化合物，通过与组胺H2-受体拮抗剂、PPI、钾-竞争性酸抑制剂或任何其它胃酸抑制剂一起联合给药用于治疗或预防酸相关的疾病。
34.如权利要求1-19中任一项所述的药物组合物或如权利要求20-28中任一项所述的化合物，通过与细胞毒性治疗剂或肿瘤特异性抗体一起联合给药来治疗胰腺肿瘤、胃肿瘤、结肠肿瘤或甲状腺髓样瘤，或其他CCK2受体携带肿瘤。
35.如权利要求1-19中任一项所述的药物组合物或如权利要求20-28中任一项所述的化合物，通过与止痛剂一起联合给药来治疗疼痛。
36.如权利要求1-19中任一项所述的药物组合物或如权利要求20-28中任一项所述的化合物，通过将如权利要求1-10中任一项所述的药物组合物或如权利要求20-28中任一项所述的化合物单独给药或与PPI、组胺H2-受体拮抗剂、钾-竞争性酸抑制剂或任何其它胃酸抑制剂一起联合给药用于治疗或预防由高胃泌素血症导致的骨疾病(例如骨丢失、骨质量受损和骨折)。
37.一种在有需要的对象中治疗或预防与CCK2/胃泌素受体相关的疾病、由高胃泌素血症引起的或相关的疾病或与胃酸相关的疾病的方法，所述方法包括向所述对象给予治疗有效量的如权利要求1-15和20-28中任一项所述的式(A),(B),(C),(D),(E),(F),(TR),(TR-A)or(TR2-A)化合物或如权利要求1-19中任一项所述的药物组合物。
38.如权利要求37所述的方法，其特征在于，所述疾病是与CCK2受体携带细胞相关的疾病或涉及胃泌素的生理功能的丧失或功能障碍的疾病。
39.如权利要求37或38所述的方法，其特征在于，所述疾病选自以下任意一种或多种疾病：胃和十二指肠溃疡、NSAID诱导的胃溃疡、消化不良、GORD、巴雷特氏食管、ZES、由PPI或其它酸抑制剂诱导的高胃泌素血症(包括戒断的效果)、胃炎(包括幽门螺杆菌诱发的胃炎和自身免疫性慢性萎缩性胃炎的并发症，例如胃类癌和ECL细胞增生)、神经内分泌肿瘤(不限于胃类癌)、壁细胞增生、胃基底腺息肉、胃癌、结肠直肠癌、甲状腺髓样癌、胰腺癌和小细胞肺癌。
40.一种在有需要的对象中治疗或预防由中枢或外周CCK2受体控制的生理功能的丧失或功能障碍相关的疾病，例如焦虑、伤害感受、疼痛、药物成瘾、镇痛依赖或镇痛戒断反应的方法，所述方法包括向所述对象给予治疗有效量的如权利要求1-15和20-28中任一项所述的式(A),(B),(C),(D),(E),(F),(TR),(TR-A)或(TR2-A)化合物或如权利要求1-19中任一项所述的药物组合物。
41.一种在有需要的对象中治疗或预防与酸相关的疾病的方法，所述方法包括将治疗有效量的如权利要求1-15和20-28中任一项所述的式(A),(B),(C),(D),(E),(F),(TR),(TR-A)或(TR2-A)化合物或如权利要求1-19中任一项所述的药物组合物与组胺H2-受体拮抗剂、PPI、钾-竞争性酸抑制剂或任何其它胃酸抑制剂一起向所述对象联合给药。
42.一种在有需要的对象中治疗胰腺肿瘤、胃肿瘤、结肠肿瘤或甲状腺髓样瘤、或其他CCK2受体携带肿瘤的方法，所述方法包括将治疗有效量的如权利要求1-15和20-28中任一项所述的式(A),(B),(C),(D),(E),(F),(TR),(TR-A)或(TR2-A)化合物或如权利要求1-19中任一项所述的药物组合物与细胞毒性治疗剂或肿瘤特异性抗体一起向所述对象联合给药。
43.一种在有需要的对象中治疗疼痛的方法，所述方法包括将治疗有效量的如权利要求1-15和20-28中任一项所述的式(A),(B),(C),(D),(E),(F),(TR),(TR-A)或(TR2-A)化合物或如权利要求1-19中任一项所述的药物组合物与止痛剂一起向所述对象联合给药。
44.一种在有需要的对象中治疗或预防由高胃泌素血症导致的骨疾病(例如骨丢失、骨质量受损和骨折)的方法，所述方法包括将治疗有效量的如权利要求1-15和20-28中任一项所述化合物或如权利要求1-19中任一项所述的药物组合物单独给药或将治疗有效量的如权利要求1-15和20-28中任一项所述化合物或如权利要求1-19中任一项所述的药物组合物与PPI、组胺H2-受体拮抗剂、钾-竞争性酸抑制剂或任何其它胃酸抑制剂一起联合给药。
45.式(A)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防通过CCK2/胃泌素受体介导的疾病、由高胃泌素血症引起的或相关的疾病或与胃酸相关的疾病的药物中的用途：
或其药学上可接受的盐、酯、硫酯、酯或硫酯的盐，或其前药，
其中R1和R2各自独立地是H或C1–3脂族基团、卤素或C1–3卤代脂族基团，或其中R1和R2与与它们键合的间隔碳原子一起形成C3–6碳环部分；
L是键或C1–3亚烷基；
R3是-OR6或-SR6；
W和X独立地是氢、卤素、C1–8烷基或C1–8烷氧基；R4和R5均独立地是单环芳基或杂芳基，其任选地被一个或多个独立地选自以下基团的取代基取代：卤素、羟基、氨基、硝基、羧基、甲酰胺基、氰基、-SO3H、和任选取代的C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基或二(C1–8烷基)氨基；
R6是氢或烷基(优选甲基)。
46.如权利要求45所述的用途，其特征在于，所述化合物是权利要求1-15或20-28中任一项所述的化合物。
47.式(A)化合物或其药学上可接受的盐、酯、硫酯、酯或硫酯的盐，或其前药，用作药物：
其中R1和R2各自独立地是H或C1–3脂族基团、卤素或C1–3卤代脂族基团，或其中R1和R2与与它们键合的间隔碳原子一起形成C3–6碳环部分；
L是键或C1–3亚烷基；
R3是-OR6或-SR6；
W和X独立地是氢、卤素、C1–8烷基或C1–8烷氧基；R4和R5均独立地是单环芳基或杂芳基，其任选地被一个或多个独立地选自以下基团的取代基取代：卤素、羟基、氨基、硝基、羧基、甲酰胺基、氰基、-SO3H、和任选取代的C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基或二(C1–8烷基)氨基；
R6是氢或烷基(优选甲基)。
48.如权利要求47所述的用途，其特征在于，所述化合物是权利要求1-15或20-28中任一项所述的化合物。
49.一种分离的式(A)化合物或其药学上可接受的盐、酯、硫酯、酯或硫酯的盐，或其前药：
其中R1和R2各自独立地是H或C1–3脂族基团、卤素或C1–3卤代脂族基团，或其中R1和R2与与它们键合的间隔碳原子一起形成C3–6碳环部分；
L是键或C1–3亚烷基；
R3是-OR6或-SR6；
W和X独立地是氢、卤素、C1–8烷基或C1–8烷氧基；R4和R5均独立地是单环芳基或杂芳基，其任选地被一个或多个独立地选自以下基团的取代基取代：卤素、羟基、氨基、硝基、羧基、甲酰胺基、氰基、-SO3H、和任选取代的C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基或二(C1–8烷基)氨基；以及
R6是氢或烷基(优选甲基)。
50.如权利要求49所述的分离的化合物，其特征在于，所述化合物是权利要求1-15或20-28中任一项所述的化合物。
51.一种制备式(A-iii)化合物的方法：
所述方法包括将式(A-i)化合物与式(A-ii)化合物偶联以形成式(A-iii)化合物的步骤；其中
R1和R2各自独立地是H或C1–3脂族基团、卤素或C1–3卤代脂族基团，或其中R1和R2与与它们键合的间隔碳原子一起形成C3–6碳环部分；
L是键或C1–3亚烷基；
W和X独立地是氢、卤素、C1–8烷基或C1–8烷氧基；
R3是-OR6,-SR6,-OC(O)R7或–SC(O)R7；
R6是氢或烷基(优选甲基)；
R7是任选取代的脂族、杂脂族、芳族或杂芳族部分；以及
R4’和R5’独立地是单环芳基或杂芳基，所述单环芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自以下基团的取代基取代：卤素、羟基、氨基、硝基、羧基、甲酰胺基、氰基、-SO3H和任选取代的C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基或二(C1-8烷基)氨基；或其保护形式；
任选地，所述方法包括式(A-iii)化合物脱保护以形成式(A)化合物的额外步骤
其中R1,R2L,W,X和R3如式(A-i)所定义，R4和R5均独立地是单环芳基或杂芳基，其任选地被一个或多个独立地选自以下基团的取代基取代：卤素、羟基、氨基、硝基、羧基、甲酰胺基、氰基、-SO3H、和任选取代的C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基或二(C1–8烷基)氨基。
52.如权利要求51所述的方法，其特征在于：
(a)式(A-i)化合物是式(C-i-a)化合物，优选式(C-i-b)化合物：
(b)式(A-ii)化合物是式(A-ii-a)化合物：
其中PG是氨基保护基团，优选BOC保护基团。
53.式(A-i)或(C-i-a)中间体：
其中R1,R2,R3,L,Y,W,X,R4’和R7如权利要求1,7,8,13,20-28和51中任一项所定义，优选地，所述中间体是式(C-i-d)中间体：
54.一种制备式(C-i-2)化合物的方法，所述方法包括将对映异构体混合物形式的式(C-i)混合物进行手性拆分，其中，所述手性拆分包括在溶剂如乙腈中将式(C-i-c)化合物暴露于手性酸，如R-扁桃酸，优选地，式(C-i-2)化合物是式(C-i-d)化合物，式(C-i)化合物是式(C-i-c)化合物
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