CN106659197A - 具有益生假长双歧杆菌的宠物食品组合物 - Google Patents

Abstract

提供了一种生产涂覆的磨成粗粒的食物的方法，该涂覆的磨成粗粒的食物包括：磨成粗粒的食物、所述磨成粗粒的食物上的包含脂肪的涂层、所述磨成粗粒的食物上的包含益生菌的涂层；其中所述磨成粗粒的食物包含内部甘油。

Description

具有益生假长双歧杆菌的宠物食品组合物

发明领域

本发明涉及包含益生菌的宠物食品组合物。

相关申请

本申请要求2013年12月20日提交的美国专利申请号14/136,528的优先权，其全部内容通过引用并入本文。

发明背景

研究已开始着重于一些有价值的细菌菌株及其作为益生剂的潜在用途。益生菌被认为是存活或死亡的细菌的制剂、其组分如蛋白质或碳水化合物、或细菌发酵物的纯化部分，其通过在GI道中保留和促进天然微生物群落，并加强对异常免疫反应的正常控制来促进哺乳动物的健康。一些人认为益生菌在从待治疗的个体的物种或与其紧密相关的物种衍生时更有效。因此，需要不同于衍生自人类的益生菌株的待用于伴侣动物的衍生自伴侣动物的益生菌株。

有效使用益生菌的持久的困难之一在于提供有效剂量。并且这通常涉及直到摄取时保持足够的细菌存活。一旦与产品例如酸奶混合，细菌的数量在制造时间和销售时间之间会下降到在其最终被摄取时其数量小到无法提供有益效果的这样的点。涉及益生菌的有效性的另一问题可涉及引入细菌的产品的制造。最常见的制造条件不利于细菌的应用，例如过热、过冷或过压，所有这些条件可有害地减少细菌群落。另一个因素是细菌与施加它们的产品的相容性。尽管细菌可以提供有益效果，但是在与产品结合时，可能会有对细菌的产品有害的组分。或者，组分加入产品的方式可能对产品有害，使得产品的个别组分如果以某些方式或顺序加入时仅对细菌有害。

上述所有情况在面对宠物食物产品时尤其如此，所有宠物食物产品传统上是以阻止细菌生长的方式制备和配制。一个实例是使用塑化剂，例如甘油，其通常用于宠物食品中的零食(treat)或仿微湿肉块，以增强风味和/或质地，和/或改变最终产品的水活度。因此，将细菌引入宠物食物产品已经是持久的挑战。不仅要尝试保持有益细菌以益生菌形式存活，还要防止有害细菌的生长。所需要的是能够递送有效量的益生菌以提供益处的宠物食品。

发明内容

提供了一种涂覆的磨成粗粒的食物(kibble)，其包括：磨成粗粒的食物；所述磨成粗粒的食物上的包含脂肪的涂层；所述磨成粗粒的食物上的包含益生菌的涂层；其中所述磨成粗粒的食物包含内部甘油。

提供了一种用于制备涂覆的磨成粗粒的食物的方法，包括挤出具有内部甘油的磨成粗粒的食物；以及用假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)涂覆所述磨成粗粒的食物。

附图说明

图1是示例性涂覆的食物产品的剖视示意图。

图2是示出在甘油和无甘油体系的存在下在23℃下AHC-7益生菌的稳定性的图。

图3是示出在甘油和无甘油体系的存在下在40℃下AHC-7益生菌的稳定性的图。

图4是示出在存在和缺少外部涂覆的甘油时AHC-7益生菌的稳定性的图。

图5是示出在存在和缺少内部甘油时AHC-7细菌的稳定性的图。

图6是示出在存在两个不同水平的内部甘油和缺少内部甘油时磨成粗粒的食物中AHC-7的稳定性的图。

发明详述

本发明包括一种食物产品；例如，一种磨成粗粒的食物，其包含甘油和涂覆在所述磨成粗粒的食物外部上的益生菌如假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)(AHC-7)。已发现，如果甘油与AHC-7一起涂覆在磨成粗粒的食物的外部上使得AHC-7与甘油接触，则会危害AHC-7的稳定性。然而，如果甘油加入到磨成粗粒的食物中而AHC-7施加到磨成粗粒的食物表面，则AHC-7是稳定的。

如本文所用，“伴侣动物”意思是家养动物，例如家养的犬、猫、兔、白鼬、马、牛等。

如本文所用，术语“其突变体”包括与参考菌株的16s-23s基因间隔区多核苷酸序列(16s-23s intergenic spacer polynulceotide)具有至少93％同源性、至少96％同源性、或至少98％同源性的衍生的细菌菌株，但是在细菌基因组中的其它DNA序列中另外包含DNA突变。

如本文所用，术语“DNA突变”包括天然的或诱导的突变，包含至少单个碱基改变，所述碱基改变包括缺失、插入、颠换和对于本领域技术人员已知的其它DNA修饰，包括导入到亲本核苷酸或氨基酸序列通过与亲本序列保持至少50％同源性的遗传修饰。包含一个或多个DNA突变的序列可以与亲本序列具有至少60％、至少75％或至少85％的同源性。如本文所用，序列“同源性”可以使用本领域技术人员已知的标准技术来确定。例如可以使用在http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/上公开的在线同源性算法“BLAST”程序来确定同源性。

序列

SEQ.ID NO.1：来自假长双歧杆菌AHC-7(NCIMB 41199)的16s-23s基因间隔区核苷酸序列。

SEQ.ID NO.2：用于16s-23s DNA序列分析的引物序列。

细菌保藏号

下表示出了可用于本发明的假长双歧杆菌菌株。细菌菌株保藏在英国阿伯丁国家工业食品与海洋细菌保藏中心(National Collections of Industrial Food and MarineBacteria，NCIMB)。保藏单位地址：圣马恰尔大道23号，阿伯丁，邮编AB24 3RY，苏格兰(23StMachar Drive,Aberdeen,AB24 3RY,Scotland)。

菌株	保藏号	保藏日期	16s-23s序列
				假长双歧杆菌AHC-7	NCIMB 41199	2003年9月4日	SEQ.ID NO.1

益生菌是对宿主产生有益影响的存活或死亡的微生物、经处理的微生物的组合物，其组分如蛋白质或碳水化合物，或者细菌发酵物的纯化部分。益生菌的一般使用是以活细胞的形式。然而，其可以扩展到非存活细胞，如含有由益生菌表达的有益因子的杀灭的培养物或组合物。这可以包括热杀灭的微生物或通过暴露于变化的pH或经受压力而杀灭的微生物。对于本发明的目的而言，“益生菌”还意在包括在发酵期间由用于本发明的微生物产生的代谢物，如果它们没有被单独指出。这些代谢物可以被释放到发酵培养基中，或者它们可以储存在微生物内。如本文所用，“益生菌”也包括细菌、细菌匀浆、细菌蛋白质、细菌提取物、细菌发酵物上清液及它们的混合物，当以治疗剂量给出时，其对宿主动物执行有益功能。

已发现，在供给活细菌细胞后，通过从哺乳动物的切除并洗涤的GI道直接分离可获得的假长双歧杆菌的菌株粘附于GI道，并且当以存活、非存活或分次形式喂给动物时也具有显著的免疫调节性。在未被理论束缚的情况下，据认为，通过从切除并洗涤的GI道分离可获得的假长双歧杆菌与肠粘膜组织密切相关。在未被进一步理论束缚的情况下，这被认为导致产生本发明的益生假长双歧杆菌，其产生选择性的宿主反应，该宿主反应带来假长双歧杆菌的益生作用。已发现，通过从切除并洗涤的GI道分离可获得的益生菌可以通过与粘膜上皮和宿主免疫细胞的直接相互作用来调节宿主的免疫系统。这种免疫调节，结合与益生菌相关的传统作用机制，即通过营养物的吸着(occlusion)和竞争阻止病原体粘附于肠，导致产生本发明的作为益生有机体高度有效的假长双歧杆菌。

通过从切除并洗涤的犬GI道分离可获得的本发明的假长双歧杆菌具有对抗许多致病菌菌株/种类的体外抗微生物活性，如通过本领域技术人员已知的抑菌圈或细菌生长抑制试验所测定的。在不被理论束缚的情况下，据认为，体外抗微生物活性是动物(如犬和猫)体内的潜在益生活性的指标。本发明的细菌可以具有对抗鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)、李斯特单核细胞增生菌(Listeria monocytogenes)、无害李斯特菌(Listeria innocua)或大肠杆菌(Eschericia coli)或它们的组合的体外抗微生物活性。

在不被理论束缚的情况下，据认为，本发明的假长双歧杆菌细菌的抗微生物活性可以是本文的假长双歧杆菌细菌带来的许多不同作用的结果。在本领域中先前已建议，分离自粪便样本的几个细菌菌株在口服食用后通过抑制致病有机体经吸收而附着至肠粘膜，表现出其对GI道的益生作用。这需要口服食用“活的”或存活的细菌细胞，从而使菌落在肠中形成。然而，据认为，本发明中使用的假长双歧杆菌，在若以存活形式提供而由于吸收发挥一些益生作用时，由于抑制致病微生物的生长或杀灭致病微生物和/或改变宿主动物的免疫能力的一种或多种物质的体外发酵期间的生产，可以以存活或非存活形式实现很大程度的益生作用。这种形式的益生活性是令人期望的，因为本发明的细菌可以作为存活或非存活培养物或者纯化的发酵产物给出，并且仍然对宿主动物实现有益的治疗效果。

在某些实施方案中，本发明的假长双歧杆菌细菌能够在通过GI道运输后维持存活能力。这是令人期望的，以便于细菌的活培养物可被口服摄取，以及在通过食道和胃运输后在肠道和肠中发生定植(colonization)。通过本发明的细菌在肠道和肠中的定植期望用于对宿主实现长期益生有益性。非存活细胞或其纯化的分离物的口服给药引起暂时的有益性，但是由于细菌是非存活的，因此它们不能生长，并在原位持续地实现益生作用。结果，这可能需要对宿主有规律地给药，从而维持健康益处。相反，能够以存活形式幸免于胃运输并随后通过附着于肠粘膜并在其上增殖而定植的活细胞能够持续地在原位实现益生作用。

因此，在某些实施方案中，本发明的细菌在pH为2.5的介质中悬浮1小时后维持存活能力。如本文所用，“维持存活能力”意思是，使用本领域技术人员已知的平板计数法，最初悬浮于测试介质中的至少25％的细菌是存活的。在某些实施方案中，“维持存活能力”意思是至少50％的最初悬浮的细菌是存活的。本发明的细菌期望用于在暴露于低pH后维持存活能力，因为这模拟于在动物口服食用后暴露于胃中的胃液和体内的上肠。

此外，在某些实施方案中，当存在至少0.5％猪胆汁盐时，本发明的细菌具有至少33％的生长。在进一步的实施方案中，当存在至少1％猪胆汁盐时，本发明的细菌具有至少33％的生长。在不被理论束缚的情况下，据认为，能够在至少0.5％猪胆汁的存在下生长的本发明的细菌能够在肠中存在的条件下存活。这被认为是将猪胆汁加入模拟肠条件的培养基的结果。

再者，本发明中使用的假长双歧杆菌细菌可以对体外肠上皮细胞具有明显的粘附性。如本文所用，“明显的粘附性”意思是与体外上皮细胞共同培养的细菌总数的至少4％粘附于上皮细胞；或者在某些实施方案中，至少6％的共同培养的细菌细胞粘附于体外上皮细胞。在不被理论束缚的情况下，据认为，体外肠上皮细胞粘附性是细菌在体内定居于动物GI道的能力的指标。

本领域技术人员已知16s-23s基因间多核苷酸序列是作为在细菌基因组中可用于识别细菌的不同种类和菌株的DNA的序列。

在某些实施方案中，假长双歧杆菌菌株具有与根据SEQ.ID NO.1的多核苷酸序列具有至少93％、至少96％或至少99％同源性的16s-23s基因间多核苷酸序列。在某些实施方案中，根据本发明的细菌菌株具有根据SEQ.ID NO.1的16s-23s多核苷酸序列。在另外的实施方案中，根据本发明的细菌菌株是假长双歧杆菌菌株NCIMB 41199(AHC-7)或其突变体。

通过从切除且洗涤的犬胃肠道分离可获得的假长双歧杆菌菌属的菌株可以用于在动物诸如伴侣动物或人类中口服食用后实现益生有益性。这种益生有益性通常维持并改善动物的整体健康。有益于在治疗上缓解其症状或通过预防疗法进行疾病预防的动物健康和生理的非限制性元素包括：炎性疾病、免疫缺陷、炎症性肠疾病、肠易激综合症、癌症(特别是胃肠系统和免疫系统的癌症)、腹泻病、抗生素相关的腹泻、阑尾炎、自身免疫疾病、多发性硬化、阿尔茨海默氏病、淀粉样变性、类风湿性关节炎、关节炎、关节松动(jointmobility)、糖尿病、胰岛素耐受性、细菌感染、病毒感染、真菌感染、牙周病、泌尿生殖系统疾病、手术相关的创伤、手术引起的转移性疾病、败血病、体重减轻、体重增加、过量脂肪组织积累、厌食症、发烧控制、恶病质、伤口愈合、溃疡、肠道屏障感染、过敏、哮喘、呼吸紊乱、循环系统紊乱、冠心病、贫血、血液凝固系统紊乱、肾脏疾病、中枢神经系统疾病、肝脏疾病、局部缺血、营养失调、骨质疏松症、内分泌失调和表皮紊乱。优选的是治疗胃肠道，包括治疗或预防腹泻、免疫系统调节，优选地治疗或预防自身免疫疾病和炎症；维持或改善皮肤和/或包被系统(coat system)的健康，优选地治疗或预防皮肤的特应性疾病；改善或减少老化的影响，包括精神意识和活动水平；以及预防感染期间和之后的体重减轻。

上述公开的紊乱的治疗可以通过使用本领域技术人员已知的技术来测定。例如，包括自身免疫疾病和炎症的炎性紊乱可以使用体内免疫功能测试如淋巴细胞母细胞化(lymphocyte blastogenesis)、自然杀伤细胞活性、抗体对疫苗的反应、迟发型超敏反应和它们的混合来检测和监控。在本文中简要地描述了这类方法，但其对于本领域人员是已知的。

本发明的假长双歧杆菌细菌的使用方法通常涉及由动物口服食用。口服食用可以作为正常饮食摄入的一部分或者作为正常饮食摄入的补充而发生。口服食用通常每月至少一次进行，不然，每周至少一次或每日至少一次。本发明中使用的假长双歧杆菌细菌以治疗有效量给予伴侣动物，以维持或改善动物的健康。如本文所用，涉及细菌的术语“治疗有效量”意思是当以本发明的方式使用时，细菌的量足以给需要治疗的宿主动物提供期望的效果或益处，该量还足够低以避免副作用如毒性、刺激或过敏反应，并与合理的益处/风险比相称。具体的“治疗有效量”将随着诸如下列的因素而改变：所治疗的具体病症、使用者的身体状况、治疗的持续时间、同时疗法的性质(如果有的话)、待使用的具体给药形式、采用的载体、剂型的溶解性和具体的给药方案。

细菌可以以每日约10⁴菌落形成单位(CFU)至约10¹⁴CFU或每日约10⁶CFU至约10¹²CFU的剂量给予伴侣动物。在某些实施方案中，磨成粗粒的食物可以含有约10⁴CFU/g至约10¹²CFU/g的假长双歧杆菌的至少0.001％。假长双歧杆菌细菌可以以存活形式或者作为杀灭的细胞或蒸馏物、分离物或本发明细菌的发酵产物的其它部分或它们的任意混合物给予动物。

假长双歧杆菌细菌或者其纯化或分离的部分用于制备用来维持或改善动物的健康的组合物。如上所示，组合物可以是正常饮食摄入的部分，或者是补充物。当组合物包括正常饮食摄入的一部分时，组合物可以是宠物食品诸如饼干或磨成粗粒的食物的形式。

图1是示例性涂覆的磨成粗粒的食物18的剖视图，磨成粗粒的食物10涂覆有一个或多个不同涂层12、14和16。如图中实线和虚线所示，任意一个涂层或所有涂层可以完全或部分地覆盖磨成粗粒的食物的表面。涂层12、14和16的选择和组合可以用于改善涂覆的磨成粗粒的食物18的味道、质地或外观，磨成粗粒的食物18是磨成粗粒的食物10与涂层12、14和16的一个或多个的组合。为避免疑义，涂层12、14和16的任意一个或任意组合可以存在于本发明的不同实施方案中。涂层12、14和16的至少一个将含有AHC-7。在某些实施方案中，AHC-7可以通过由调味系统组成的干介质或液体介质与其它干成分或液体成分以不同比例组合施加在磨成粗粒的食物上。如图1所示，在一些实施方案中，涂层12、14和16可以是不同的。即，在涂层施加后可以有无关紧要的涂层混合，存在不同涂层的不同的层。通过无关紧要的混合，认为在不同涂层之间的界面处将会有一些相互作用，但并没有涂层的混杂(commingling)，使得随着时间的推移，出现仅一个涂层，而不是两个或多个不同的涂层。可以使用额外的涂层，即三个以上的涂层。在图1中，磨成粗粒的食物10具有圆形；然而，应理解的是，食物在形状上是不受限制的，并且考虑到食物块的体积和表面面积的功能方面以及美观考虑，可以具有产品所需的任意形状或尺寸。磨成粗粒的食物10可以是包括两个或多个不同形状、尺寸和/或组成的磨成粗粒的食物的食物产品的一个组分。

磨成粗粒的食物10可以是干燥的食物，其水分含量为磨成粗粒的食物重量的小于约20％、小于约15％、小于约12％、小于约9％、或小于约5％的水。低水分含量可以有助于磨成粗粒的食物10的储存稳定性，特别是随着时间的推移，磨成粗粒的食物10对微生物生长的抗性。磨成粗粒的食物10包含塑化剂，例如甘油。甘油具有低水活度(Aw)，小于或等于约0.1。甘油可以内部地加入到磨成粗粒的食物中(内部甘油)，或外部地作为包衣剂(enrobing agent)加入(外部甘油)。低至1％的外部加入的甘油水平对细菌具有有害作用。内部加入到磨成粗粒的食物的甘油水平对细菌显示很小的有害作用，或者不显示有害作用。当甘油被内部地加入到磨成粗粒的食物时，甘油通过预调配缸(pre-conditionercylinder)注入挤出机中，或者与口粮(ration)混合。对于甘油的外部施加，通过任意的喷涂和/或混合方法将甘油涂覆在磨成粗粒的食物表面。维持甘油的温度，使得其具有足够流动性用于泵送和喷涂。在某些实施方式中，磨成粗粒的食物10内部包含包括任何涂层在内的磨成粗粒的食物重量的约0.5％至约35％、约1％至约20％，或约5％至约15％的量的甘油。将甘油以某种水平包含在磨成粗粒的食物10内可以使磨成粗粒的食物比无甘油的水分含量相当的磨成粗粒的食物更柔软，并更容易咀嚼。例如，根据最终水分含量，在某些实施方案中，最终水分含量可以是约0.1aw至约0.5aw，在磨成粗粒的食物内部具有甘油的磨成粗粒的食物的柔软度可以比无内部甘油的磨成粗粒的食物的柔软度高出(所测得的压缩力低出)2或甚至3的系数。

除了作为塑化剂的功能外，甘油可以为磨成粗粒的食物提供甜味。对于用来提供鲜味(savory taste)的磨成粗粒的食物，如果比例没有适当地平衡，这种甜味可能是不期望的。包含酸诸如甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、乳酸、山梨酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、磷酸、抗坏血酸、硫酸、盐酸或它们的组合可以减少与塑化剂相关的味道的改变。酸可以以磨成粗粒的食物的大于0％且小于约2％或小于约1.5％的量存在。在一些实施方案中，将酸并入到甘油中，并如上所述将甘油加入磨成粗粒的食物中，即加入到磨成粗粒的食物内。在一些实施方案中，将酸与甘油分离地(内部地或外部地)加入磨成粗粒的食物。在一些实施方案中，在不加入抵消量的酸或其它酸味成分的情况下(例如，食物存在有甜味，而不是鲜味)，使用甘油。一些狗例如可以优选甜味，或者甘油可与用来具有甜味的食物一同使用。

磨成粗粒的食物可以是可被人类或动物摄取并对人类或动物提供营养价值的任何适合的组合物。磨成粗粒的食物可以在按照这里公开的处理之前进行涂覆，或者不经涂覆。磨成粗粒的食物通常将是蛋白质和淀粉成分的营养平衡的混合物的基础食物组合物。磨成粗粒的食物可以经烘烤、挤出、压丸或形成。磨成粗粒的食物的这类形状及其生产方法对于食品制造领域技术人员是熟知的。挤出和挤压蒸煮例如描述在食品科学与技术百科全书(Encyclopedia of Food Science and Technology)第2卷的第794-800页(Y.H.Hui编辑，John Wiley&Sons股份有限公司1992)。

磨成粗粒的食物不限于特定组合物。磨成粗粒的食物可以是营养全面且均衡的动物饮食，其提供所有必需的营养物(除了水之外)以维持生命。营养全面且均衡的磨成粗粒的食物可以满足共有营养剖面(consensus nutrient profile)，如用于狗粮或猫粮的美国饲料管理协会(AAFCO)标准。磨成粗粒的食物可以是非营养均衡的零食或补充物，但可以提供一些营养价值(例如卡路里)。在这样的情况下，磨成粗粒的食物可以作为零食或补充物而不是主要的饮食使用，或者，磨成粗粒的食物可以与不同颗粒混合，使得磨成粗粒的食物与其它食料的混合是营养全面且均衡的。例如，磨成粗粒的食物可以与营养上不同的磨成粗粒的食物、或者水果或蔬菜块(如胡萝卜块、豌豆块、大豆碎块(soy morsel)、干果等)、或者肉块(如干燥的或储藏的肉，包括肉干，或者其它的制备的或储藏的肉)、或者包含所需营养物的片剂、胶囊或药丸或它们的组合混合，使得混合物是营养全面且均衡的。磨成粗粒的食物可以是任何适合的形式，如任意形状的一口大小的或丸状的。

涂层12外部地施加在形成的磨成粗粒的食物上。涂层12是磨成粗粒的食物10外部之上或附近的表面涂层，据认为一些涂层12可以在磨成粗粒的食物10与涂层12之间的界面处迁移到磨成粗粒的食物10内。在某些实施方案中，涂层12可以包括脂肪；并且可以协助确保干基质的粘附性，干基质可以是具有或没有益生菌的风味系统。术语“脂肪”是指任何食用级的脂肪或脂质，包括禽源、动物来源、植物来源、或人造来源的脂肪，包括但不限于粗脂肪或精脂肪。典型的动物来源脂肪包括例如动物脂肪，选择白色油脂、猪油、乳源脂肪如黄油和通常包含在奶酪中的脂肪。典型的植物来源的脂肪包括椰子油、大豆油和玉米油。典型的禽源脂肪包括例如来自鸡、火鸡、鸭和鹅的组织的脂肪。

在含有甘油的磨成粗粒的食物之上施加脂肪涂层可以降低脂肪涂层吸收到磨成粗粒的食物中。保持脂肪涂层在磨成粗粒的食物的表面上可以以相对较低水平的追加脂肪帮助增强食物的风味和/或口感，因为在食用食物时，在食物和口之间的界面处会有较大比例的脂肪。示例性脂肪包括家禽脂肪如鸡脂，和牛脂。脂肪涂层可以以涂覆的磨成粗粒的食物的重量的约1％至约15％、约6％至约8％、或约11％至约13％的量存在。疏水脂肪涂层会帮助将水分保留在食物内；即，在运输和储存期间，特别是在干燥条件下(相对湿度低于约35％)，防止食物失去额外的水分。相比在磨成粗粒的食物中不包含塑化剂的食物，较重的脂肪涂层对在磨成粗粒的食物中包含甘油的食物会是有益的，例如，在磨成粗粒的食物中具有塑化剂的涂覆的磨成粗粒的食物可具有涂覆的磨成粗粒的食物重量的约11％至约13％的脂肪涂层。如果食物产品是营养全面且均衡的宠物食品，可期望的是使食物的全部脂肪含量(包括在磨成粗粒的食物中任何脂肪以及在所有涂层的层中的脂肪)保持在涂覆的磨成粗粒的食物重量的小于约25％或小于约20％，以确保其它营养物以适合的比例存在。

脂肪涂层可包含一个或多个结构剂(structurant)。结构剂可以改变在脂肪涂层中固体的浓度和/或结晶顺序。结构剂可以改变脂肪涂层的其它物理化学性质，如粘性或密度。特别是，结构剂可以在涂覆的磨成粗粒的食物被加工、运送和使用时防止或减少脂肪涂层弄脏。例如，涂覆的磨成粗粒的食物的颗粒可以彼此相互作用，与制造设备(包括包装设备)、包装、食用餐具、食用餐盘，手等相互作用，并且结构剂可以帮助使脂肪涂层保持牢固和有弹力，以便在这些相互作用期间，涂层不会移动或离开食物。高熔点(大于或等于60℃)的脂肪或食用蜡可以用于该目的。在口感或味道方面，脂肪优选于食用蜡。脂肪涂层可以包含脂肪涂层组合物重量的约1％至约10％或约2％至约4％的结构剂。结构剂可以包含胶，如黄原胶或瓜尔豆胶、它们的变体或它们的组合。

结构剂可以包含乳化剂。乳化剂可以提供极性组分，其改善脂肪涂层与其它涂层(如果使用亲水涂层，则为亲水涂层)之间的相互作用。在一些实施方案中，乳化剂通过与含水唾液的相互作用，可有助于脂肪从食物到口中的转移，以及脂肪在口内的分布。因此，乳化剂可以帮助使脂肪涂层像釉一样保留在磨成粗粒的食物表面，并且可以在其被食用时改善食物的味道和/或口感。由此，即使脂肪涂层(例如在添加乳化剂前)不是乳化液，乳化剂也可以是期望的。乳化剂可以以脂肪涂层组合物重量的约1％至约10％、或约2％至约5％的量存在。在一些实施方案中，乳化剂可以施加在脂肪涂层之上。当作为单独涂层或单独涂覆的层施加时，乳化剂可以以脂肪涂层组合物重量的约0.1％至约5％、或约1％至约3％的量存在。

可以使用任何食用乳化剂，例如卵磷脂、聚甘油酯或它们的组合。一些化合物，如高熔融温度(60℃至80℃)的单甘油酯和/或双甘油酯，可以对脂肪涂层提供结构益处并提供极性组分。这样的结构剂也可以根据脂肪体系中结构剂的水平提高脂肪体系(脂肪+结构剂)的总熔点。适合的甘油酯的混合物是市售的来自美国堪萨斯州莱内克萨地区的卡拉安配料(Caravan Ingredients)公司的商品名为的商品。适合的甘油酯的混合物是例如Trancendim(注册商标)180或130。结构剂可以以脂肪涂层组合物重量的约0.1％至约10％存在。结构剂可以共混到脂肪涂层内，使得有包含脂肪和结构剂的组合物的单一涂层。在一些实施方案中，结构剂可以作为包覆型涂层单独地施加在脂肪涂层上。

含有益生菌14的涂层可以施加在涂层12之上，涂层12可以是脂肪涂层。AHC-7涂层描述了将AHC-7添加至磨成粗粒的食物。在某些实施方案中，施加的AHC-7的重量为约10³cfu/g的最小水平，或者约10⁶cfu/g至约10⁸cfu/g或约10⁸cfu/g至约10¹⁰cfu/g。AHC-7也可以通过像脂肪酸、蛋白质、单甘油酯、多糖(碳水化合物、糖类、水解胶体等)的其它载体施加至磨成粗粒的食物基质。

可以施加附加的涂层或涂层16。涂层16可以包含干的添加剂或液态添加剂。如果脂肪涂层12包含乳化剂，则乳化剂能够使液态添加剂成层。液态添加剂可以由于乳化剂而与脂肪涂层12保持关联，但由于液态添加剂(大部分为亲水的)和脂肪(大部分为疏水的)的不相容性，而在脂肪涂层12的表面处保留。这尤其但不排他地对液态增味剂(palatant)有用，因为最有效的是将增味剂施加在食物的最外面的涂层上，因此，当食物被食用时，增味剂容易地被口中的味觉感受器获得。由于施加在脂肪涂层12之上的液态添加剂将吸引在表面而无意于通过脂肪涂层12或与其混合，液态添加剂应在食物的表面处更容易获得。干的添加剂，包括干的增味剂或其它干的成分可以施加在脂肪涂层12之上或者施加在脂肪涂层12之上所施加的液态添加剂之上。通常，干的添加剂将可接受地粘附于脂肪润湿的表面或液体润湿的表面。一些具体的干的添加剂将具有这样的化学性质，其使得更有利地将干的添加剂直接施加至脂肪涂层12，或在液态添加剂层被施加在脂肪涂层12之上以后，或者甚至作为脂肪涂层12的一部分或以液态添加剂的形式(如在将干的添加剂施加至食物之前在水中溶解或混合干的添加剂)施加干的添加剂。在一些实施方案中，脂肪与液态添加剂的重量比可以是约0.3至约8。其它比例是可行的。

涂层16可以包含乳化剂，以降低涂覆的磨成粗粒的食物的表面能，并减轻或防止磨成粗粒的食物粘着在一起，使得磨成粗粒的食物可以自由地分散并容易地作为不同块食用。当然，有时使磨成粗粒的食物结块会是期望的，犹如从涂覆的磨成粗粒的食物形成小吃或零食。通常，如果多个涂层施加在脂肪涂层12之上时，期望将增味剂安置在最外面涂层上，所以它们最容易被口中的味觉感受器接触到。或者，增味剂可以以较高浓度包含在内层中。

添加脂肪涂层可以密封水分，并帮助维持随时间的推移的柔软度。在一些实施方案中，通过使用该方法，食物的柔软度增加至少20％、或至少40％。在一些实施方案中，当在18℃至22℃和40％至60％相对湿度下储存6个月时，食物的柔软度下降不超过25％。可以使用下述的食物柔软度测试法测定柔软度。柔软性可以有助于使得咀嚼(masticate)较软食物的过程可以比咀嚼松脆食物刺激更多的唾液分泌，这可以帮助将脂肪和增味剂从食物转移至口中的味觉感受器，并因此提高了食物的适口性。

食物柔软度测试是压缩应变测试。使用具有1KN测压元件和板/砧设置(plate/anvil set-up)的校准的英斯特朗(Instron)压缩试验机(或等同装置)，将一块磨成粗粒的食物尽量平地放置在测试点处(这将根据所测试的磨成粗粒的食物的形状而变化)。砧是圆柱形平底测试夹具，并且直径必须大于所测试的磨成粗粒的食物的直径。设置试验机将磨成粗粒的食物压缩至其原始高度的33.33％。对每一类测试的磨成粗粒的食物重复至少25个磨成粗粒的食物块。清除样品间的所有碎屑或残余物。报告最大装载(kgf)压力(最大观察装载/磨成粗粒的食物表面积)和杨氏模量(Young's Modulus)(使用英斯特朗布鲁荷尔(Instron's Bluehill)软件中的自动计算或等同方法)。对每组25个样品报告平均最大压力和平均杨氏模量。如果使用英斯特朗压缩试验机，则使用以下参数：

·测试参数

ο测试速率＝6.35mm/分钟

ο控制模式＝压缩扩展(compressive extension)

ο测试值终点1＝33％压缩应变

压缩测试结构以最大装载(kgf)报告，其可以对硬质和软质磨成粗粒的食物进行不同的描述。对于硬质磨成粗粒的食物，结果可以称为硬度，而对于软质磨成粗粒的食物，结果可以称为咀嚼度或柔软度。杨氏模量用于描述软质和硬质磨成粗粒的食物的相同的特征。

所公开的涂层可以用于改变磨成粗粒的食物的质地(口感和湿感)。可以通过测量压碎磨成粗粒的食物所需的力来测定质地。压碎磨成粗粒的食物所需的力模拟咀嚼。在磨成粗粒的食物中不含有内部添加的甘油且仅覆盖有含乳化剂的脂肪的磨成粗粒的食物的情况下，磨成粗粒的食物可以是光滑的并具有酥脆质地，并且其柔软度的值可以为约4千克力(kgf)至约12kgf、约3kgf至约9kgf、或约3.5kgf至约5.5kgf。在某些实施方案中，如先前讨论的，具有柔软质地的磨成粗粒的食物可以含有磨成粗粒的食物重量的约0.5％至约35％、约1％至约20％、或约5％至约15％的量的内部添加的甘油，并且质地可以作为柔软度或咀嚼度来测定，如在食物柔软度测试中所描述的。软质磨成粗粒的食物的“柔软度”的值可以是约1千克力/平方厘米(kgf/cm²)至约9kgf/cm²、约3kgf/cm²至约8kgf/cm²、或约3kgf/cm²至约7kgf/cm²。硬质磨成粗粒的食物的质地也可以用磨成粗粒的食物的杨氏模量(磨成粗粒的食物的单位面积上的力，kgf/cm²)来表征。对于硬质磨成粗粒的食物，最大压力可以是约12kgf/cm²至约35kgf/cm²、或约12kgf/cm²至约20kgf/cm²。软质磨成粗粒的食物显示约1kgf/cm²至约15kgf/cm²、约2kgf/cm²至约7kf/cm²、或约2.5kgf/cm²至约5kgf/cm²的杨氏模量。具有不同质地和/或涂层的磨成粗粒的食物可以以任意期望的比例共混，以为宠物提供质地多样性。

如所公开的涂层或系列涂层的一个可能的优点是提高留在磨成粗粒的食物表面上的脂肪的量。表面上的脂肪水平可以为作为涂层沉积的脂肪总水平的约25％以上。例如，如果约10％脂肪添加在磨成粗粒的食物的表面上方，则期望水平的表面脂肪可以为至少约2.5％，或者甚至约5％或更多，其余的是浸入磨成粗粒的食物的脂肪或其它涂覆层，或者二者。

通常，除了包含在这些产品内的营养平衡添加剂如维生素和矿物质或其它添加剂如防腐剂和乳化剂等以外，大部分的磨成粗粒的食物将由可描述为基本为蛋白质或基本为淀粉的成分组成。尽管下列不应视为是限制性的，但蛋白质成分可以通常定义为具有至少约15wt％的蛋白质含量的任何材料；而淀粉材料具有比该含量低得多的蛋白质含量，并且具有含淀粉或含碳水化合物的材料的主要部分。

常用于商品化宠物食品的蛋白质材料的实例包括植物蛋白粉，如大豆、棉花籽或花生粕(peanut meal)，动物蛋白质如酪蛋白、白蛋白、乳清包括干燥乳清，和肉组织包括鲜肉以及提取脂肪的或干燥的“粉(meal)”，如鱼粉、禽肉粉、肉粉、肉骨粉、酶处理蛋白质水解物等。蛋白质材料的其它类型包括微生物蛋白质如酵母，以及其它类型的蛋白质，包括诸如小麦面筋或玉米面筋的材料。酵母也可以加入风味；小麦面筋或玉米面筋也可以用作调质剂(texturizing agent)，并且可以用于提高产品的孔隙率。

典型的淀粉材料的实例包括酶淀粉材料，谷物如玉米、玉蜀黍(maize)、小麦、高粱、大麦，和蛋白质相对较低的各种其它谷物。很多其它材料可以加入磨成粗粒的食物中，其不一定落入类别(蛋白质的或淀粉的)中，包括碳水化合物和豆类，如苜蓿或大豆。

用于磨成粗粒的食物的典型配方是本领域公知的。除了蛋白质和淀粉材料，本发明的组合物通常可包括维生素、矿物质和其它添加剂，如调味剂、防腐剂、乳化剂和湿润剂。根据兽医和营养领域中已知的膳食标准确定营养平衡，包括维生素、矿物质、蛋白质、脂肪和碳水化合物的相对比例。

干的添加剂是指在施加至食物时包含干的添加剂重量的小于40％的极性溶剂(如水)的任何添加剂。可以干的形式提供的示例性添加剂包括各种香料，如肉类和奶酪调味剂；肉类固体和干动物消化物；香草；干的增味剂；水解的(通过化学或酶)植物蛋白；矿物质；益生元；益生菌；封装的化合物；营养物；药物或顺势疗法的化合物；着色剂；及它们的组合。干的添加剂的其它实例包括面包酵母(Bakery yeast)或啤酒酵母(Brewer's yeast)，其包含在酿造、圆酵母(Torula yeast)和各种酵母提取物中常用的酵母属(Saccharomyces)(通常为酿酒酵母(S.cerevisiae))酵母的干燥粉碎细胞。各种酵母和酵母提取物已知用作增味剂、益生元或益生菌，和其它食用微生物，活微生物提取物或死微生物提取物可以被期望用于相同或其它用途。

液态添加剂是指包含液态添加剂组合物重量的至少40％、至少50％、至少60％或至多90％的极性溶剂(如水)的任何添加剂。液态添加剂包括在施加至食物前已经溶解、悬浮或浸没在极性溶剂的干的添加剂。可以液态形式提供的示例性增味剂包括动物源消化物；维生素；氨基酸；蛋白质或蛋白水解物，包括植物源的蛋白或蛋白水解物、动物源的蛋白或蛋白水解物和合成蛋白；其它营养物；酵母悬浮液；香料组合物；酸化剂；染料组合物；肉汤(broth)；抗氧化剂；及它们的组合。

包含本发明的细菌的磨成粗粒的食物也可以包括益生元(prebiotic)。“益生元”包括这样的物质或化合物，其通过宠物的肠道菌群发酵，并因此在损害致病菌的同时促进在宠物胃肠道中细菌的生长与发育。这种发酵的结果是在结肠中释放脂肪酸，特别是短链脂肪酸。这具有降低结肠中的pH值的作用。适合的益生元的非限制性实例包括寡糖，如菊粉及其水解产物，通常已知为低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖或淀粉的低聚衍生物。益生元可以以任何适合的形式提供。例如，益生元可以以含有纤维的植物材料的形式提供。适合的植物材料包括芦笋、朝鲜蓟、洋葱、小麦或菊苣，或这些植物材料的残渣。或者，益生元纤维可以作为菊粉提取物提供，例如来自菊苣的提取物是适合的。适合的菊粉提取物可以获自比利时的提尔蒙3300(Tirlemont 3300)的欧拉夫提公司(Orafti SA)，商品名为“拉芙缇莱(Raftiline)”。例如，菊粉可以以拉芙缇莱(Raftiline)(g)ST的形式提供，其是精炼白色粉末，包含按重量计约90％至约94％的菊粉，按重量计至多约4％的葡萄糖和果糖，以及按重量计约4％至9％的蔗糖。或者，纤维可以是低聚果糖的形式，诸如获自比利时的提尔蒙3300(Tirlemont 3300)的欧拉夫提公司(Orafti SA)，商品名为“拉芙缇罗斯(Raftilose)”。例如，菊粉可以拉芙缇罗斯(Raftilose)(g)P95的形式提供。另外，低聚果糖可通过水解菊粉、酶促法或使用微生物获得。

对于干燥磨成粗粒的食物，适合的加工方法是挤出蒸煮(extrusion)，然而也可使用烘焙和其它适合的加工方法。如果使用益生元，益生元可以在处理前与干燥磨成粗粒的食物的其它成分混合。

磨成粗粒的食物可以含有其它活性剂，如长链脂肪酸和锌。适合的长链脂肪酸包括α-亚油酸、γ亚麻酸、亚油酸、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸。鱼油是二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸的合适来源。

琉璃苣油、黑加仑种子油和月见草油是γ亚麻酸的合适来源。红花油、向日葵油、玉米油和大豆油是亚油酸的合适来源。这些油也可被用在上文提及的涂层基底中。锌可以多种适合的形式提供，例如硫酸锌或氧化锌。此外，常用于宠物食品的多种成分是脂肪酸和锌的来源。已经观察到作为益生元来源的菊苣与富含亚油酸的油如大豆油的组合提供意料不到的益处，提示了协同效应。

实施例

实施例1

作为涂层，期望AHC-7益生菌与以下物质直接接触：磨成粗粒的食物原材料和其它涂层，如调味剂、脂肪、增味剂，以及外部施加用于改善质地的任意其它成分，如甘油或乳化剂。为了理解由与其它材料相互作用引起的对AHC-7的影响，以适当比例制备几种样品；样品包含AHC-7益生菌和一个涂层成分，其包含鸡脂、干增味剂(SPF336)或甘油。

样品1是AHC-7原料(AHC-7原料包含AHC-7(益生菌)和麦芽糖糊精(载体)，其量为足以获得约10¹¹cfu/g的目标AHC-7浓度的量)和增味剂336(比例约为1:295)。样品2是AHC-7原料与含有抗氧化剂(1:1086)的鸡脂的混合物。样品3是AHC-7原料与甘油的混合物(比例约为1:2090)。为了避免由于混合引起的误差并提高测量准确性，对每个样品(1、2和3)取样四次，制备4个单独样品组(对于样品1四个，对于样品2四个，以及对于样品3四个)，各包括装载10g样品的50ml塑料管。于室温下，在涡旋型混合器上将塑料管中的样品(1、2和3)完全混合，随后使用塑料盖将每个管密封。将样品1、2和3(每个样品4根管)储存在23℃(代表典型室温/储存温度)，以评定在其它涂层组分的存在下AHC-7的稳定性。在AHC-7的稳定性评定期间，在各取样时间使用放置在塑料管中的10g样品。对于样品1以0天、8天、16天和30天的时间间隔，对于样品2和3以0天、7天、15天和29天的时间间隔，从23℃的储存条件取出样品。图2中示出了在23℃下，样品1、2和3中的AHC-7益生菌损失。AHC-7损失测定为初始AHC-7计数(cfu/g)和各次取样时的AHC-7计数(cfu/g)之间的δ。AHC-7计数表示为log计数。结果显示，AHC-7在与增味剂(样品1)和鸡脂(样品2)直接接触时非常稳定。然而，在与甘油(样品3)直接接触时，AHC-7显示快速损失。数据证实了在与甘油接触时AHC-7的敏感性以及在脂肪和干增味剂存在时的良好稳定性。

实施例2

为了确定在较高温度(40℃)下存在其它涂层组分时AHC-7益生菌的稳定性，如同实施例1一样制备另一组样品。样品4是AHC-7原料(AHC-7原料是AHC-7(益生菌)和麦芽糖糊精(载体)，其充足地添加以达到约10¹¹cfu/g的目标AHC-7浓度)和含氧化剂的鸡脂(比例约为1:1086)。样品5是AHC-7原料与甘油的混合物(比例约为1:2090)。该实施例没有增味剂。为了避免由于混合引起的误差并提高测量准确性，对每个样品(4和5)取样四次，制备4个单独样品组(对于样品4，四个，以及对于样品5，四个)，各包括装载10g样品的50ml塑料管。于室温下，在涡旋型混合器上将塑料管中的样品4和5完全混合，随后使用塑料盖将管密封。将样品4和5(每个样品4根管)在40℃下储存，以评定在其它涂层组分的存在下AHC-7的稳定性。在AHC-7的稳定性评定期间，在各取样时间使用放置在塑料管中的10g样品。对于样品4和5，以0天、7天、15天和29天的时间间隔从40℃的储存条件取出样品。图3中示出了在40℃下样品4和5中的AHC-7益生菌损失。在40℃的较高温度下与鸡脂(样品4)直接接触29天时，AHC-7非常稳定。然而，在与甘油(样品5)直接接触时，AHC-7显示快速损失。相比23℃(样品3)，在较高温度(40℃)(样品5)下损失速率似乎较大。数据证实了在与甘油接触时AHC-7的敏感性以及在脂肪存在时的良好稳定性。

实施例3

为了确定涂层是否对益生菌稳定性具有影响，制备了具有不同磨成粗粒的食物涂层的各种样品。第一个磨成粗粒的食物是通过将表1中列出的成分挤出而产生，其获得脂肪和蛋白质含量分别为13％和28％的磨成粗粒的食物。为了磨成粗粒的食物的制备，使用搅拌器(型号V-1401；霍巴特，特洛伊，OH)以1000kg为批次将干成分(列于表1)共混约20min，以在处理之前在混合物中达到合理的均匀性。将成分的混合物转移到预调配缸，在预调配缸中材料在95℃下以足够的蒸汽/水(约21％的水)混合3分钟(min)，以使淀粉部分地胶凝，并柔化和水化所有成分。然后用单螺杆挤出机将成分的水合混合物挤出，穿过不同挤出机筒区域(1-6)筒温度为90℃至140℃。用于制备该产品的冲模(die)直径为0.28"。将磨成粗粒的食物干燥成最终水分含量为2.5％至3.5％，且水活度(Aw)为约0.2。在施加涂层前磨成粗粒的食物的体积密度为360g/lt。磨成粗粒的食物的组分示于表1。

表1

在干燥后，对磨成粗粒的食物喷涂多个涂层。如表2所示，涂覆三个单独的磨成粗粒的食物样品组。每个样品组包含30克涂覆的磨成粗粒的食物。

表2

对于样品组6：在干燥后，对磨成粗粒的食物喷涂脂肪层(涂覆的磨成粗粒的食物的总重量的不超过6％)，其包含50％鸡脂和50％牛脂的混合物，并具有通常为35℃的熔融温度。在对磨成粗粒的食物涂覆脂肪层后，将干混合层施加至磨成粗粒的食物涂覆脂肪的表面。该混合物包含约1.2％的增味剂(palatant)(SPF 336)和约0.02％的AHC-7原料(AHC-7原料包含AHC-7(益生菌)和麦芽糖糊精(载体)，其量为足以获得约10¹¹cfu/g的目标AHC-7浓度的量)。这种施加产生涂覆的磨成粗粒的食物重量的约0.02％的益生菌材料浓度，提供初始AHC-7浓度为10⁸cfu/g。在第一脂肪层后添加第二层。通过使用具有多个递送口(delivery port)的混合器单程(single pass)在第一层后施加第二层。脂肪层的温度比熔点高约10℃，以确保在泵送和处理期间没有问题，并确保最大程度吸收进磨成粗粒的食物。

对于样品组7：在干燥后，对磨成粗粒的食物喷涂脂肪层，其包含49％鸡脂、49％牛脂和2％乳化剂(180,卡拉安配料，莱内克萨，KS)的混合物，以获得涂覆的磨成粗粒的食物重量的约5％的脂肪层浓度。使用的乳化剂具有56℃-68℃的熔融温度，并包括约5:1至约25:1的单甘油酯与双甘油酯的比例(平均比约为12:1)。在对磨成粗粒的食物涂覆脂肪层后，将干混合层施加至磨成粗粒的食物涂覆脂肪的表面。该混合物包含约1.2％的增味剂(SPF 336)和约0.02％的AHC-7原料(AHC-7原料是AHC-7(益生菌)和麦芽糖糊精(载体)，其充足地添加以达到约10¹¹cfu/g的目标AHC-7浓度)。这种施加产生涂覆的磨成粗粒的食物重量的约0.02％的AHC-7原料浓度，提供初始AHC-7浓度为10⁸cfu/g。在第一脂肪层后添加第二层。通过使用具有多个递送口的混合器单向在第一层后施加第二层。脂肪层的温度比熔点高约10℃，以确保在泵送和处理期间没有问题，并确保最大程度吸收进磨成粗粒的食物。

对于样品组8：在干燥后，在35℃至50℃下对磨成粗粒的食物喷涂一层甘油(化学部，P&G，辛辛那提，OH)，以获得涂覆的磨成粗粒的食物重量的2.5％的外部甘油浓度。使用的甘油为99.7％甘油，MC＝0.3，比重(25℃下)＝1.261g/min，无水基底(anhydrous bases)上甘油的百分比＝99-101。该甘油涂层立即被磨成粗粒的食物吸收。在对磨成粗粒的食物涂覆甘油后，将包含50％鸡脂和50％牛脂的混合物的脂肪层施加至磨成粗粒的食物的涂覆甘油的表面。这种施加产生涂覆的磨成粗粒的食物重量的约5％的脂肪层浓度。在对磨成粗粒的食物涂覆脂肪层后，将干混合层施加至磨成粗粒的食物涂覆脂肪的表面。该混合物包含约1.2％的增味剂(SPF 336)和约0.02％的AHC-7原料(AHC-7原料是AHC-7(益生菌)和麦芽糖糊精(载体)，其充足地添加以达到约10¹¹cfu/g的目标AHC-7浓度)。这种施加产生涂覆的磨成粗粒的食物重量的约0.02％的AHC-7原料浓度，给出初始AHC-7浓度为10⁸cfu/g。在第一脂肪层后添加第二层。通过使用具有多个递送口的混合器单向在第一层后施加第二层。脂肪层的温度比熔点高约10℃，以确保在泵送和处理期间没有问题，并确保最大程度吸收进磨成粗粒的食物。

将样品组6、7和8的成品磨成粗粒的食物放置在开放的培养皿(petri dish)中，并在不同相对湿度(RH)的25℃干燥器中培养1个月。使用水活度(Aw)为0.23、0.33和0.43的饱和盐浆维持干燥器的RH(即，干燥器RH＝盐浆Aw×100％)。在培养期结束时，未观察到样品组6、7或8的水活度随时间变化。该Aw的稳定性显示，磨成粗粒的食物已达到平衡水分含量(M.C.'s)并因此达到平衡Aw，其也相当于干燥器中盐浆的Aw，如表3所示。这确保磨成粗粒的食物处于平衡状态，其通常用于针对水活度和水分含量在样品间进行区分。

表3

在样品组6、7和8中使用的各种涂层对AHC-7稳定性的影响绘制在图4中。通过取由菌落总数确定的AHC-7水平的Log，并验算在T＝0和当针对水活度磨成粗粒的食物处于平衡时在1个月结束时的AHC-7计数之间的差异，来计算Log损失。图4中的数据显示，在脂肪中存在或不存在180乳化剂时(样品组6和7)，AHC-7高度稳定。然而，证实外部甘油层对AHC-7稳定性不利，如在样品组8中AHC-7益生菌水平的下降量所示。

对于样品组3和5，当仅用原料(甘油)培养AHC-7益生菌时(实施例1和2)，观察到相似效果。在1个月后，每克磨成粗粒的食物，菌落形成单位有>4.64log的损失；然而，当用SPF336干增味剂培养时，如在样品组6和7中所示，AHC-7益生菌非常稳定。

图4中的数据还显示，在高达0.43的Aw下在1个月培养期后可以检测到AHC-7益生菌。然而，这并不暗示在如此高的Aw下持续了很长一段时间，AHC-7益生菌是稳定的。可能是AHC-7益生菌在这些条件下可以随着时间快速死亡。

实施例4

为了确定并入磨成粗粒的食物的甘油是否对涂覆的AHC-7的稳定性具有不利效果，制备了以下样品，其组分列于表4。第一个磨成粗粒的食物是通过将表1中列出的成分挤出而产生，其获得脂肪和蛋白质含量分别为13％和28％的磨成粗粒的食物。为了磨成粗粒的食物的制备，使用搅拌器(型号V-1401；霍巴特，特洛伊，OH)以1000kg为批次将干成分(列于表4)共混约20分钟(min)，以在处理之前在混合物中达到合理的均匀性。在样品组11和12中，使用甘油作为塑化剂，并直接泵送入预调配缸，在预调配缸中其被加入面团(dough)。内部添加至磨成粗粒的食物的甘油的水平为9％。在预调配缸中，将材料在95℃下以足够的蒸汽/水(约21％的水)混合3min，以使淀粉部分地胶凝，并柔化和水化所有成分。然后用单螺杆挤出机将成分的水合混合物挤出，穿过不同挤出机筒区域(1-6)筒的温度范围为90℃至140℃。用于制备该磨成粗粒的食物的冲模直径为0.28"。

表4

在干燥后，对磨成粗粒的食物喷涂多个涂层。类似于表2中的样品组6，对四个磨成粗粒的食物样品组(样品组9至12)进行涂覆。每个样品组包含30克磨成粗粒的食物(平均密度为300g/L至375g/L)。

对于样品组9至12：在干燥后，对磨成粗粒的食物喷涂不超过涂覆的磨成粗粒的食物重量的6％的脂肪层，其包含50％鸡脂和50％牛脂的混合物，并具有通常为35℃的熔融温度。在对磨成粗粒的食物涂覆脂肪层后，将干增味剂层施加至磨成粗粒的食物涂覆脂肪的表面。该混合物包含约1.2％的增味剂(SPF 336)和约0.02％的AHC-7原料(AHC-7原料是AHC-7(益生菌)和麦芽糖糊精(载体)，其充足地添加以达到约10¹¹cfu/g的目标AHC-7浓度)。这种施加产生涂覆的磨成粗粒的食物重量的约0.02％的益生菌原料浓度，给出初始AHC-7浓度为10⁸cfu/g。在第一脂肪层后添加第二层。通过使用具有多个递送口的混合器单向在第一层后施加第二层。脂肪层的温度比熔点高约10℃，以确保在泵送和处理期间没有问题，并确保最大程度吸收进磨成粗粒的食物。

将样品组9至12的成品磨成粗粒的食物放置在开放的培养皿中并在不同相对湿度(RH)的25℃干燥器中培养1个月。使用水活度(Aw)为0.23、0.33和0.43的饱和盐浆维持干燥器的RH(即，干燥器RH＝盐浆Aw×100％)。

如图5所示，在1个月培养期后，观察到在不同RH下磨成粗粒的食物产品上AHC-7益生菌有小于约0.1log的损失。图表显示，在储存结束时，在任一Aw下没有损失。数据显示，在时间“0”时，在缺少甘油的样品组(样品组9和10)和具有9％内部甘油的样品组(样品组11和12)的表面上，且Aw水平为(0.23-0.43)时，AHC-7高度稳定。该数据与在具有外部甘油层的样品组8(参见图4)中观察到的AHC-7的高log损失形成对比。因此，这项工作显示，与外部甘油涂层相反，内部甘油对AHC-7涂覆细菌的稳定性几乎没有副作用，甚至当通过涂覆的脂肪层将AHC-7与甘油涂层分开时(如在样品组8)也如此。

表5

此外，对于所有具有相同Aw的磨成粗粒的食物，观察到的log损失是相似的(参见图5)，这确认了与甘油为外部存在时所看到的相反，内部存在的甘油对AHC-7损失几乎没有影响；无论磨成粗粒的食物的最终水分含量如何(表5)。这些结果确认了磨成粗粒的食物的水活度是影响时间“0”时的益生菌稳定性的主要因素，而水分含量不是。这些观察结果是有意义的，因为是水活度而不是水分含量确定了微生物生长的可用水的下限。此外，数据显示高达0.43的Aw下在1个月培养期后可以检测到AHC-7益生菌。然而，这并不暗示在如此高的Aw下持续了很长一段时间，益生菌是稳定的。可能是益生菌在这些条件下可以随着时间快速死亡。

实施例5

测试了并入甘油的磨成粗粒的食物对AHC-7稳定性的影响。磨成粗粒的食物样品的组分示于表6。

表6

样品组13、14和15在小型挤出机上制备。为了磨成粗粒的食物的制备，使用搅拌器(型号HL-600；霍巴特，特洛伊，OH)以50kg为批次将干成分(列于表6)共混约10min，以在处理之前在混合物中达到合理的均匀性。将成分的混合物转移到预调配缸，在预调配缸中材料在95℃下以足够的蒸汽/水(约21％的水)混合3min，以使淀粉部分地胶凝，并柔化和水化所有成分。然后用双螺杆挤出机将成分的水合混合物挤出，穿过不同挤出机筒区域(1-6)筒温度为90℃至140℃。用于制备该产品的冲模直径为0.28"。将磨成粗粒的食物干燥成最终水分含量为2.5％至3.5％，且水活度(Aw)为约0.2。在施加涂层前磨成粗粒的食物的体积密度为350g/lt。磨成粗粒的食物的组分示于表6。样品组13、14和15具有相似的干磨成粗粒的食物结构(chassis)，除了在样品组14和15中内部存在3％和5％的甘油。将来自挤出机的干磨成粗粒的食物(900g至1200g)放置在搅拌器(厨房助手(Kitchen Aid)，重型，本顿港，密西根州，USA)中，该搅拌器设定为慢速设置(设置2)。将鸡脂加温，之后装载于磨成粗粒的食物上，将AHC-7与其混合，同时在装载前机械搅拌鸡脂。通过配备有蠕动泵的喷雾嘴组件(科勒-帕母(Cole-Parmer)，芝加哥，USA)将AHC-7通过脂肪(涂覆的磨成粗粒的食物重量的6％)装载在磨成粗粒的食物上(目标AHC-7计数为10⁷cfu/g)，该喷嘴组件允许将含有AHC-7的脂肪均匀喷涂在磨成粗粒的食物上，其在搅拌器内缓慢旋转(设置2)，以达到脂肪在磨成粗粒的食物上的均匀沉积。将干增味剂加六偏磷酸钠(涂覆的磨成粗粒的食物重量的1.6％)缓慢加在喷涂脂肪的磨成粗粒的食物的顶部。针对AHC-7损失评价样品组13、14和15。将样品组转移至纸袋，并使用纸和塑料带密封。将纸袋储存在40℃和75％相对湿度的恒定条件室中15天。以0天、4天、10天和15天的间隔对样品组取样，并通过平板计数法对AHC-7进行评定。结果在图6中示出。对于没有内部甘油(样品组13)和具有两个不同水平的内部甘油的样品组(样品组14和15)的AHC-7损失相互之间没有显著差异(P>0.05)。这较早地确认了实施例4的结果，即，无论磨成粗粒的食物配方如何(实施例4具有含玉米和鸡肉副产品粉(CBPM)的磨成粗粒的食物配方，而实施例5具有不含玉米和鸡肉副产品粉的磨成粗粒的食物配方)，当内部地添加甘油时，对AHC-7损失几乎没有影响。

本文公开的尺寸和值不应理解为严格限制为所记载的确切数值。相反，除非另有说明，每个这样的尺寸意指所记载的值和该值附近的功能上等同的范围。例如，公开为“40mm”的尺寸意指“约40mm”。

本文引用的每个文件，包括任何交叉引用或相关的专利或申请以及本申请要求优先权或其权益的任何专利申请或专利，以其全部内容通过引用合并于本文，除非明确的排除或另有限制。任何文件的引用，均不是承认其是关于本文公开或主张的任何发明的现有技术，或者，在单独引用或与任何其它参考文献组合时，其参考、教导、暗示或公开任何这样的发明。此外，当本文件中术语的任何含义或定义与通过引用并入的文件中的同一术语的任何含义或定义有冲突时，在本文件中指定给该术语的含义或定义应适用。

尽管已说明和描述了本发明的具体实施方案，但对于本领域的技术人员显而易见的是，在不脱离本发明的精神和范围的情况下可作出各种其它改变和变型。因此，随附权利要求书中旨在涵盖本发明范围内的所有这些改变和变型。

Claims (20)

1.一种涂覆的磨成粗粒的食物，其包含：

磨成粗粒的食物；

所述磨成粗粒的食物上的包含脂肪的涂层；

所述磨成粗粒的食物上的包含益生菌的涂层；

其中所述磨成粗粒的食物包含内部甘油。

2.如权利要求1所述的涂覆的磨成粗粒的食物，其中所述益生菌包括动物双歧杆菌。

3.如权利要求2所述的涂覆的磨成粗粒的食物，其中所述动物双歧杆菌具有与SEQ IDNO.1的序列具有至少93％同源性的16s-23s基因间多核苷酸序列。

4.如权利要求2所述的涂覆的磨成粗粒的食物，其中在25℃培养一个月后，动物双歧杆菌的损失小于约0.1log。

5.如权利要求4所述的涂覆的磨成粗粒的食物，其中所述培养是在干燥器中。

6.如权利要求1所述的涂覆的磨成粗粒的食物，其中所述涂覆的磨成粗粒的食物包含约1％至约20％的内部甘油。

7.如权利要求1所述的涂覆的磨成粗粒的食物，其中所述涂覆的磨成粗粒的食物包含约10⁶cfu/g至约10⁸cfu/g的动物双歧杆菌。

8.如权利要求1所述的涂覆的磨成粗粒的食物，其中水活度水平为约0.1至约0.3。

9.如权利要求1所述的涂覆的磨成粗粒的食物，其中所述脂肪作为第一涂层施用，且所述益生菌作为第二涂层施用。

10.如权利要求1所述的涂覆的磨成粗粒的食物，其中所述脂肪涂层以所述涂覆的磨成粗粒的食物的总重量的约1％至约15％的量存在。

11.如权利要求1所述的涂覆的磨成粗粒的食物，其中所述涂覆的磨成粗粒的食物具有约1kgf/cm²至约9kgf/cm²的“柔软度”值。

12.如权利要求1所述的涂覆的磨成粗粒的食物，其中所述涂覆的磨成粗粒的食物包含益生菌。

13.如权利要求1所述的涂覆的磨成粗粒的食物，其中所述涂覆的磨成粗粒的食物包括第三涂层。

14.如权利要求13所述的涂覆的磨成粗粒的食物，其中所述第三涂层包含增味剂。

15.如权利要求14所述的涂覆的磨成粗粒的食物，其中所述增味剂是风味成分，其可以是干的或液态的。

16.一种生产涂覆的磨成粗粒的食物的方法，所述方法包括：

a.挤出具有内部甘油的磨成粗粒的食物；和

b.用动物双歧杆菌涂覆所述磨成粗粒的食物。

17.如权利要求16所述的方法，其中所述磨成粗粒的食物涂覆有脂肪。

18.如权利要求17所述的方法，其中在涂覆所述动物双歧杆菌之前涂覆所述脂肪。

19.如权利要求16所述的方法，其中用约10⁶cfu/g至约10⁸cfu/g的动物双歧杆菌涂覆所述磨成粗粒的食物。

20.如权利要求16所述的方法，其中所述涂覆的磨成粗粒的食物包含约1％至约20％的内部甘油。