CN106456776A - 用PI3K抑制剂Pictilisib治疗PR阳性腔性A乳腺癌的方法 - Google Patents

Abstract

提供了用于治疗患者中的乳腺癌的方法和组合物，与内分泌治疗剂组合，用PI3K抑制剂GDC‑0941进行。

Description

用PI3K抑制剂Pictilisib治疗PR阳性腔性A乳腺癌的方法

对相关申请的交叉引用

依据37CFR§1.53(b)提交的此非临时申请要求2014年5月21日提交的美国临时申请流水号62/001,205依据35USC§119(e)的权益，通过援引将其完整收录。

发明领域

一般而言，本发明涉及用抑制PI3激酶活性的化合物治疗过度增殖性病症，诸如癌症。本发明还涉及使用所述化合物以在体外，原位和体内诊断或治疗哺乳动物细胞或相关病理学状况的方法。

发明背景

磷脂酰肌醇是在细胞膜中找到，并且参与胞内信号转导的许多磷脂之一。经由3’-磷酸化磷酸肌醇的细胞信号传导已经牵涉多种细胞过程，例如恶性转化，生长因子信号传导，炎症和免疫(Rameh et al(1999)J.Biol Chem.274:8347-8350)。最初将负责生成这些磷酸化信号传导产物的酶，磷脂酰肌醇3-激酶(也称为PI 3-激酶或PI3K)鉴定为与病毒癌蛋白和在肌醇环的3’-羟基处磷酸化磷脂酰肌醇(PI)及其磷酸化衍生物的生长因子受体酪氨酸激酶相关的活性(Panayotou et al(1992)Trends Cell Biol 2:358-60)。磷酸肌醇3-激酶(PI3K)是在肌醇环的3-羟基残基处磷酸化脂质的脂质激酶(Whitman et al(1988)Nature,332:664)。由PI3激酶生成的3-磷酸化磷脂(PIP3)起第二信使作用，募集具有脂质结合域(包括plekstrin同源性(PH)区)的激酶，例如Akt和PDK1，磷酸肌醇依赖性激酶-1(Vivanco et al(2002)Nature Rev.Cancer 2:489；Phillips et al(1998)Cancer 83:41)。

PI3激酶家族包含通过结构同源性细分的至少15种不同的酶，并基于序列同源性和通过酶催化形成的产物分为3类。I类PI3激酶由2个亚基构成：110kd催化亚基和85kd调节亚基。调节亚基含有SH2域并结合由具有酪氨酸激酶活性的生长因子受体或癌基因产物磷酸化的酪氨酸残基，从而诱导磷酸化其脂质底物的p110催化亚基的PI3K活性。I类PI3激酶牵涉细胞因子，整联蛋白，生长因子和免疫受体下游的重要信号转导事件，这提示对此途径的控制可以导致重要的治疗效果，诸如调控细胞增殖和致癌作用。I类PI3K能磷酸化磷脂酰肌醇(PI)，磷脂酰肌醇-4-磷酸和磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP2)以分别生成磷脂酰肌醇-3-磷酸(PIP)，磷脂酰肌醇-3,4-二磷酸和磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸。II类PI3K磷酸化PI和磷脂酰肌醇-4-磷酸。III类PI3K只能磷酸化PI。癌症中的关键PI3-激酶同等型(isoform)是I类PI3-激酶p110α，如p110α中的复发性致癌突变指示的(Samuels et al(2004)Science304:554；US 5824492；US 5846824；US 6274327)。其它同等型在癌症中可以是重要的，并且还牵涉心血管和免疫炎性疾病(Workman P(2004)Biochem Soc Trans 32：393-396；Patelet al(2004)Proc.Am.Assoc.of Cancer Res.(Abstract LB-247)95th Annual Meeting,March 27-31,Orlando,Florida,USA；Ahmadi K and Waterfield MD(2004)“Phosphoinositide 3-Kinase:Function and Mechanisms”Encyclopedia of BiologicalChemistry(Lennarz W J,Lane M D编)Elsevier/Academic Press)，在结肠，乳腺，脑，肝，卵巢，胃，肺和头和颈实体瘤中以相当大的频率找到p110α的致癌突变。约35-40％的激素受体阳性(HR+)乳腺癌肿瘤含有PIK3CA突变。在成胶质细胞瘤，黑素瘤，前列腺，子宫内膜，卵巢，乳腺，肺，头和颈，肝细胞和甲状腺癌中找到PTEN异常。

磷酸肌醇-3激酶(PI3K)/Akt信号传导途径的上调是大多数癌症中的常见特征(Yuan and Cantley(2008)Oncogene 27:5497-510)。在许多人类癌症中已经检测到该途径中的遗传偏差(Osaka et al(2004)Apoptosis 9:667-76)，并且主要作用为刺激细胞增殖，迁移和存活。该途径的激活在激活性点突变或编码p110a PI3K同等型的PIK3CA基因的扩增后发生(Hennessy et al(2005)Nat.Rev.Drug Discov.4:988-1004)。在肿瘤抑制基因PTEN(与PI3K具有相反功能的磷酸酶)内的遗传删除或功能丧失性突变也提高PI3K途径信号传导(Zhang and Yu(2010)Clin.Cancer Res.16:4325-30)。这些异常导致经由激酶，诸如Akt和mTOR的下游信号传导升高，并且已经提出了升高的PI3K途径的活性是针对癌症治疗的抗性的标志(Opel et al(2007)Cancer Res.67:735-45；Razis et al(2011)Breast CancerRes.Treat.128:447-56)。

PI3激酶是由p85和p110亚基组成的异二聚体(Otsu et al(1991)Cell 65:91-104；Hiles et al(1992)Cell 70:419-29)。已经鉴定出四种独特的I类PI3K，称作PI3Kα(阿尔法)，β(贝塔)，δ(德耳塔)，和ω(伽马)，每个由独特的110kDa催化亚基和调节亚基组成。催化亚基中的三种，即p110α，p110β和p110δ各自与相同的调节亚基p85相互作用；而p110伽马与独特的调节亚基p101相互作用。人细胞和组织中的这些PI3K之每种的表达样式是独特的。在PI3Kα，β和δ亚型的每一个中，p85亚基作用为通过其SH2域与靶蛋白中的磷酸化的酪氨酸残基(存在于合适的序列背景中)的相互作用将PI3激酶定位于质膜(Rameh et al(1995)Cell,83:821-30；Volinia et al(1992)Oncogene,7:789-93)。

测量生物标志物(例如，血浆中的分泌性蛋白质)的表达水平可以是鉴定会响应特定疗法(包括例如用治疗剂治疗)的患者和患者群体的有效手段。需要更有效的手段来测定哪些具有过度增殖性病症诸如癌症的患者会响应哪种用治疗剂的治疗，并且将此类测定掺入对于患者更有效的治疗方案中，无论治疗剂是作为单一药剂使用，还是与其它药剂联合使用。

PI3激酶/Akt/PTEN途径是用于癌症药物开发的有吸引力的靶物，因为预期此类药剂会抑制细胞增殖，抑制提供癌细胞的存活和化学抗性的来自基质细胞的信号，逆转凋亡的抑制，及战胜癌细胞对细胞毒剂的内在抗性。已经报告了PI3激酶抑制剂(Yaguchi et al(2006)Jour.of the Nat.Cancer Inst.98(8):545-556；US 7173029；US 7037915；US6608056；US 6608053；US 6838457；US 6770641；US 6653320；US 6403588；US 7750002；WO2006/046035；US 7872003；WO 2007/042806；WO 2007/042810；WO 2004/017950；US 2004/092561；WO 2004/007491；WO 2004/006916；WO 2003/037886；US 2003/149074；WO 2003/035618；WO 2003/034997；US 2003/158212；EP 1417976；US 2004/053946；JP 2001247477；JP 08175990；JP 08176070)。

某些噻吩并嘧啶化合物具有p110α结合，PI3激酶抑制活性，并抑制癌细胞的生长(Wallin et al(2011)Mol.Can.Ther.10(12):2426-2436；Sutherlin et al(2011)Jour.Med.Chem.54:7579-7587；US 2008/0207611；US 7846929；US 7781433；US 2008/0076758；US 7888352；US 2008/0269210。GDC-0941(CAS登记号957054-30-7,GenentechInc.)是具有有希望的药动学和药学性质的选择性口服生物利用性PI3K抑制剂(Folkes etal(2008)Jour.of Med.Chem.51(18):5522-5532；US 7781433；Belvin et al,AmericanAssociation for Cancer Research Annual Meeting 2008,99th:April 15,Abstract4004；Folkes et al,American Association for Cancer Research Annual Meeting2008,99th:April 14,Abstract LB-146；Friedman et al(2008),American Associationfor Cancer Research Annual Meeting 2008,99th:April 14,Abstract LB-110)，并且与某些化疗剂组合显示针对实体瘤细胞系的体外和体内协同活性(US 2009/0098135)。

提高治疗响应性，延迟疾病进展，改善耐受性，并且潜在地根治化学疗法抗性恶性细胞的新的靶向治疗将代表在对具有乳腺癌的女性的护理中的重大进展。用于治疗具有激素受体阳性(HR+)转移性乳腺癌(MBC)的患者的主要策略已经是在受体水平上阻断雌激素的作用或减少雌激素生成。已知乳腺癌是一种异质性疾病。存在不同亚型，可以基于以下定义：(i)乳腺癌肿瘤的分子概况；(ii)遗传阵列测试；或(iii)使用免疫组织化学分析的方法。大多数乳腺癌是腔性肿瘤(luminal tumor)。腔性肿瘤细胞看起来最像乳腺癌中在作为乳腺导管衬里的内部(腔)细胞中开始的细胞。乳腺癌的分子亚型在计划治疗和开发新疗法中可以是有用的，包括：腔性A，腔性B，三重阴性/基底样，和HER2型。腔性A亚型占乳腺癌的约40％，并且趋于呈ER+(雌激素受体阳性)和/或PR+(孕酮受体阳性)，HER2-(HER2/neu受体阴性)，低Ki67。ER/PR/HER2是临床验证的预测和预后生物标志物。增殖标志物Ki-67是乳腺癌患者中的例示性预后参数。

芳香酶抑制剂(AI)，诸如阿那曲唑(anastrozole)，来曲唑(letrozole)和依西美坦(exemestane)通过抑制芳香酶(负责雄激素向雌激素的外周转化的酶)阻断外周雌激素合成(Simpson and Dowsett(2002)Recent Prog Horm Res 57:317-38)。临床试验已经证明他莫昔芬(tamoxifen)和AI疗法两者在治疗具有HR阳性MBC的绝经后女性中的功效(Nabholtz et al.(2000)J Clin Oncol 18：3758-67；Mouridsen et al.(2001)J ClinOncol 19：2596-606；Osborne et al.(2002)J Clin Oncol 20：3386-95；Howell et al.(2004)J Clin Oncol 22:1605-13；Paridaens et al.(2004)Proceedings Am Soc ClinOncol 22:14S)。另外，氟维司群(fulvestrant)(一种下调ER蛋白质水平的雌激素受体(ER)拮抗剂)已经得到美国食品和药品管理局(FDA)批准用于HR阳性MBC，并且得到欧洲药物局(EMA)批准用于治疗在在先抗雌激素疗法后具有疾病进展的绝经后女性中的ER阳性MBC(Howell et al.(2002)J Clin Oncol 20:3396-403；Osborne et al.(2002)J Clin Oncol20:3386-95；Di Leo et al.(2010)J Clin Oncol 28:4594-600)。尽管现有的治疗能提供疾病进展中的一些延迟，但是内分泌疗法的主要限制仍然是治疗剂抗性的几乎全面的形成，这导致绝大多数患者的最终死亡。MBC仍然是女性中的癌症死亡的第二高的原因，强调此种疾病中持续的未满足的需要。

癌症中磷酸肌醇3-激酶(PI3K)途径的异常活化(经由PI3K途径组分中的遗传变化(PI3K激活性突变或遗传扩增，拮抗性肿瘤抑制因子PTEN的丧失)或经由异常受体酪氨酸激酶(RTK)信号转导)是在多种肿瘤类型中的共同发现。这与对内分泌疗法的抗性组合提示抑制PI3K信号传导可以在乳腺癌的治疗中具有广泛的应用。

腔性A乳腺癌比腔性B乳腺癌具有更高的雌激素受体(ER+)和/或孕酮受体(PR+)表达。具有这些表达样式的腔性A乳腺癌患者较好响应内分泌激素治疗，并且具有一般有利的预后(Rouzier et al(2005)Clin.Cancer Res.11：5678-5685)。

内分泌疗法(包括他莫昔芬和AI)的活性是早期HR阳性乳腺癌患者的存活的持续改善的主要原因。然而，近半数呈现出转移性HR阳性疾病的患者不响应前线内分泌治疗，并且几乎所有确实响应的患者最终都产生针对内分泌疗法的抗性。

HR阳性MBC患者中针对激素疗法的抗性的机制很可能是多因素的。非临床和临床数据提示ER和/或PgR表达的降低或丧失和生长因子信号传导的上调是导致雌激素非依赖性肿瘤生长的突出机制中的两种(Johnston 2009；Osborne和Schiff 2011)。已经在用内分泌疗法治疗的患者的高达20％中观察到ER表达随时间的丧失(Gutierrez et al.2005)，这可以解释获得性抗雌激素抗性和随后的疾病进展。已经显示了经由多种生长因子信号传导途径调节ER表达。特别地，EGFR/HER2和促分裂原活化的蛋白质激酶(MAPK)途径的激活导致对ER表达的抑制，这导致对他莫昔芬的抗性(McClelland et al.2001；Knowlden etal.2003；Hutcheson et al.2003)。在调控ER水平外，生长因子信号传导途径能经由在丝氨酸118和丝氨酸167处的受体的直接磷酸化直接增强ER的转录活性(Chen et al.2002；Campbell et al.2001)。已经假定ER的“非基因组”活性刺激许多胞内信号传导途径，包括胞质溶胶中的MAPK和PI3K途径( and 2005；Acconcia et al.2005)。已经提出了这些非基因组活性为乳腺癌中的内分泌响应和抗性的重要特征(Schiff etal.2003)。

多组非临床和临床数据支持PI3K途径在产生对激素疗法的抗性中的关键作用。已经证明PI3K途径的激活(经由PIK3CA突变，PTEN表达的丧失或HER2过表达)在ER阳性乳腺癌模型中促进对抗雌激素疗法的抗性和激素不依赖性(Shou et al.(2004)J Natl CancerInst 96:926-3；Miller et al.(2009)Cancer Res 2009；69:4192-201；Miller et al.(2010)J Clin Invest 120:2406-13)。人HR阳性肿瘤的蛋白质组学和转录概况分析提示了，升高的PI3K信号传导与较低的ER水平相关，其已经与对内分泌疗法的抗性关联起来(Creighton et al.2010；Miller et al.(2010)J Clin Invest 120:2406-13)。来自用他莫昔芬治疗的HR阳性患者的肿瘤样品的回顾性分析支持将PI3K途径与对抗雌激素疗法的抗性联系起来的非临床观察结果；已经发现了具有活化的PI3K途径的患者具有降低的总体存活(OS)(Kirkegaard et al.(2005)J Pathol 207：139-46)和较短的无复发存活(Shomanet al.(2005)Mod Pathol 18:250-9)。已经显示了非临床模型中对PI3K/mTOR途径的抑制上调ER/PgR表达(Creighton et al.2010)，并且增强来曲唑的抗肿瘤效果(Boulay etal.2005)。

在临床设置中，来自两项II期研究的数据提示了，与单一药剂内分泌疗法相比，PI3K/mTOR和雌激素信号传导途径的组合抑制可以提供卓越的益处。施用雷帕霉素类似物(rapalog)(依维莫司)提高了具有ER阳性乳腺癌的患者中的新辅助设置中的来曲唑功效，如通过Ki67表达降低测量的(Baselga et al.2009)。与单一药剂他莫昔芬相比，在接受AI在先治疗的ER阳性患者的II期研究中对他莫昔芬添加依维莫司显著改善临床受益率(CBR)，进展前时间和总体存活(Bachelot et al.2012)。最后，来自III期BOLERO-2研究的数据表明，对依西美坦添加依维美司与单一药剂依西美坦相比在ER阳性，HER2阴性MBC患者中使PFS增加超过两倍，所述患者的疾病是来曲唑或阿那曲唑的在先治疗不应的(Baselgaet al.2012)。因此，可以证明ER和PI3K途径的组合抑制是在接受AI治疗的情况中经历复发性或进行性疾病(PD)的MBC患者中的有效疗法。

GDC-0941(pictrelisib,pictilisib,Genentech Inc.,Roche,RG-7321,CAS登记号957054-30-7)，命名为4-(2-(1H-吲唑-4-基)-6-((4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉，具有有力的PI3K活性(WO 2011/036280；US 8242104；US8343955)，并且正在具有局部晚期或转移性实体瘤的患者中研究。GDC-0941是II，III，和IV类PI3K家族成员(包括DNA依赖性蛋白质激酶和哺乳动物雷帕霉素(rapamycin)靶物[mTOR]，其对p110α具有＞250倍的选择性)的弱抑制剂。GDC-0941通过诱导G1阻滞和凋亡有力抑制一大批乳腺癌细胞系的体外生长(Friedman et al.(2009)AACR-NCI-EORTCMolecular Targets and Cancer Therapeutics,15-19November 2009,Boston,MA.Abstract C201；O’Brien et al.(2010)Clin Cancer Res 16:3670-83)。GDC-0941在I期测试中已经超过其最小有效靶剂量(与临床前模型中的90％肿瘤生长抑制有关的暴露)，并且已经在可耐受剂量时表明药效学和抗肿瘤活性(Baird et al.(2010)J Clin Oncol2010ASCO Annual Meeting Proceedings(Post-Meeting Edition)2010；28(15Suppl):2613；Dolly et al.(2010)J Clin Oncol 2010ASCO Annual Meeting Proceedings(Post-Meeting Edition)28(15Suppl):3079；Von Hoff et al.(2010)J Clin Oncol 2010ASCOAnnual Meeting Proceedings 2010；28(15Suppl):2541)。

发明概述

GDC-0941(pictrelisib,pictilisib,Genentech Inc.,Roche,RG-7321)是PI3K同等型的有力的多靶性I类(泛)抑制剂。GDC-0941目前在用于治疗晚期实体瘤的II期临床试验中。GDC-0941命名为4-(2-(1H-吲唑-4-基)-6-((4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉(US 7781433；US 7750002；Folkes et al(2008)Jour.ofMed.Chem.51(18):5522-5532)，并且具有结构：

包括其立体异构体，几何异构体，互变异构体和药学可接受盐。

本发明提供了治疗具有PR+或腔性A型乳腺癌的患者的方法，其通过施用治疗有效量的GDC-0941和内分泌治疗剂进行。

本发明还提供了用于治疗PR+，腔性A型乳腺癌的制品，其包含：GDC-0941；和使用说明书。

本发明还提供了用于确定要联合使用以治疗PR+，腔性A型乳腺癌的化合物的方法，其包括：

a)用GDC-0941和选自下组的内分泌治疗剂的治疗组合处理具有PIK3CA突变的体外肿瘤细胞系：氟维司群，来曲唑，他莫昔芬和依西美坦，并且

b)测量协同或非协同效应；

从而确定用于治疗癌症的协同性治疗组合。

本发明还提供了选择PR+，腔性A型乳腺癌患者以用GDC-0941治疗的方法，其包括：

(a)检测自所述患者获得的生物学样品中的PIK3CA或PTEN突变；并且

(b)比较在对所述患者施用GDC-0941或GDC-0941和内分泌治疗剂的组合前自所述患者获得的生物学样品中的PIK3CA或PTEN突变状态，

其中在施用GDC-0941或GDC-0941和内分泌治疗剂的组合后获得的样品中的PIK3CA或PTEN突变状态的变化或调控鉴定会响应用GDC-0941治疗的患者。

本发明还提供了监测PR+，腔性A型乳腺癌患者中的治疗功效的方法，其包括：

(a)用GDC-0941治疗所述患者；

(b)测量在施用GDC-0941后自所述患者获得的生物学样品中的功能性PI3K蛋白质水平；并且

(c)改变对所述患者施用的GDC-0941的剂量，GDC-0941的给药频率，或疗法的过程。

本发明还提供了优化GDC-0941或GDC-0941和内分泌治疗剂的组合在治疗PR+，腔性A型乳腺癌中的治疗功效的方法，所述方法包括：

(a)检测在施用至少一剂GDC-0941或GDC-0941和选自氟维司群和来曲唑的内分泌治疗剂的组合后自患者获得的生物学样品中的PIK3CA或PTEN突变；并且

(b)比较在对所述患者施用GDC-0941或GDC-0941和内分泌治疗剂的组合前自所述患者获得的生物学样品中的PIK3CA或PTEN突变状态，

其中在施用GDC-0941或GDC-0941和治疗剂的组合后获得的样品中的PIK3CA或PTEN的变化或调控鉴定具有升高的受益于用GDC-0941或GDC-0941和内分泌治疗剂的组合治疗的可能性的患者。

本发明还提供了鉴定用于监测PR+，腔性A型乳腺癌治疗中对GDC-0941或GDC-0941和内分泌治疗剂的组合的响应性的生物标志物的方法，所述方法包括：

(a)检测自患者获得的生物学样品中的选自PIK3CA或PTEN突变的生物标志物的表达，调控或活性，所述患者已经接受至少一剂GDC-0941或GDC-0941和选自下组的内分泌治疗剂的组合：氟维司群，来曲唑，他莫昔芬，和依西美坦；并且

(b)与参照样品中的所述生物标志物的状态比较所述生物标志物的表达，调控或活性，其中所述参照样品是在对所述患者施用GDC-0941或GDC-0941和内分泌治疗剂的组合前自所述患者获得的生物学样品；

其中将与所述参照样品相比低或高至少2倍的所述生物标志物变化的调控鉴定为可用于监测对GDC-0941或GDC-0941和内分泌治疗剂的组合的响应性的生物标志物。

本发明还提供了GDC-0941或GDC-0941和治疗剂的组合在治疗患者中的PR+，腔性A型乳腺癌中的用途，其包括对所述患者施用治疗有效量的GDC-0941或GDC-0941和选自下组的内分泌治疗剂的组合：氟维司群，来曲唑，他莫昔芬，和依西美坦，

其中已经对在对所述患者施用GDC-0941或GDC-0941和治疗剂的组合前自所述患者获得的生物学样品测试了PIK3CA或PTEN突变状态，并且其中PIK3CA或PTEN突变状态指示所述患者对GDC-0941或GDC-0941和内分泌治疗剂的组合的治疗响应性。

本发明还提供了GDC-0941和内分泌治疗剂，其在治疗PR+或腔性A型乳腺癌中使用，其中GDC-0941具有结构：

包括其立体异构体，几何异构体，互变异构体，和药学可接受盐。

本发明还提供了如上所述使用的前述化合物，其中GDC-0941是盐双甲磺酸盐。

本发明还提供了如上所述使用的前述化合物，其中先前已经用化学疗法，放射疗法和/或手术切除治疗所述患者。

本发明还提供了如上所述使用的前述化合物，其中先前已经用内分泌治疗剂治疗所述患者。

本发明还提供了如上所述使用的前述化合物，其中先前已经用芳香酶抑制剂治疗所述患者。

本发明还提供了如上所述使用的前述化合物，其中所述芳香酶抑制剂选自来曲唑，阿那曲唑和依西美坦。

本发明还提供了如上所述使用的前述化合物，其中所述内分泌治疗剂选自：氟维司群，来曲唑，他莫昔芬，和依西美坦。其中所述内分泌治疗剂选自：氟维司群，来曲唑，他莫昔芬，和依西美坦。

本发明还提供了GDC-0941和内分泌治疗剂在制备用于治疗PR+或腔性A型乳腺癌的药物中的用途，其中GDC-0941具有结构：

包括其立体异构体，几何异构体，互变异构体，和药学可接受盐。

本发明还提供了GDC-0941和内分泌治疗剂用于治疗PR+或腔性A型乳腺癌的用途，其中GDC-0941具有结构：

包括其立体异构体，几何异构体，互变异构体，和药学可接受盐。

如前文描述的发明。

附图简述

图1显示了与氟维司群组合用GDC-0941治疗ER阳性乳腺癌患者的临床研究方案。

图2显示了用GDC-0941，来曲唑，和GDC-0941和来曲唑的组合处理的PR+芳香酶抑制剂敏感性(顶部)和PR-，芳香酶抑制剂抗性(底部)细胞系MCF7-ARO(Wallin et al(2012)Clin Cancer Res；18:3901-3911)的细胞存活力的图。

图3A显示了意图治疗(ITT)研究中的无进展存活的Kaplan-Meier图(实施例1)。基于未分层的Cox模型评估危害比；基于未分层的时序检验评估p值。

图3B显示了无进展存活的Kaplan-Meier图。

图3C显示了无进展存活的Kaplan-Meier图。

图4显示了来自登记到研究上的患者的腔性A和腔性B PAM50内在亚型的流行度，和与相关生物标志物的关联。

图5A显示了PR阳性亚组中的无进展存活的Kaplan-Meier图。

图5B显示了PR阳性亚组中的无进展存活的Kaplan-Meier图。

图5C显示了PR阳性亚组中的无进展存活的Kaplan-Meier图。

图6显示了基于内在亚型分析的无进展存活的Kaplan-Meier图。将用GDC-0941+氟维司群或安慰剂治疗的腔性B患者与用GDC-0941+氟维司群或安慰剂治疗的腔性A患者比较。

图7显示了用于PR+亚组中的PAM50分析的无进展存活的Kaplan-Meier图的图。

图8显示了无进展存活的Kaplan-Meier图的图。

发明详述

现在将详细描述本发明的某些实施方案，其例子在所附结构和式中例示。尽管会结合列举的实施方案描述本发明，但是应当理解，它们并不意图将本发明限制于那些实施方案。相反，本发明意图覆盖可以包括在如由权利要求书限定的本发明的范围内的所有备选，修改和等同方案。本领域技术人员会认识到与本文所述的那些方法和材料类似或等同的许多方法和材料，其可以在本发明的实践中使用。本发明决不限于描述的方法和材料。在引入的文献，专利和类似材料中的一个或多个与本申请(包括但不限于定义的术语，术语用法，描述的技术等)不同或矛盾的情况中，以本申请为准。

定义

当在本说明书和权利要求书中使用时，词语“包含”和“包括”意图规定叙述的特征，整体，组件或步骤的存在，但是它们不排除一种或多种其它特征，整体，组件，步骤或其组的存在或添加。

术语“治疗”和“处理”是指治疗性处理和防范性或预防性措施两者，其中目的是预防或减缓(减轻)不期望的生理变化或病症，诸如癌症的生长，发生或传播。为了本发明的目的，有益或期望的临床结果包括但不限于症状的缓解，疾病程度的减小，疾病的稳定化(即不恶化)状态，疾病进展的延迟或减缓，疾病状态的改善或缓解，和消退(无论部分或全部)，无论是可检测的还是检测不到的。“治疗/处理”还可以指与不接受治疗时预期的存活相比延长存活。需要治疗的那些对象包括已经患有状况或病症的那些对象以及倾向于具有状况或病症的那些对象或其中要预防状况或病症的那些对象。

短语“治疗有效量”指本发明化合物的量，其(i)治疗本文中描述的特定疾病，状况，或病症，(ii)减轻，改善，或消除特定疾病，状况，或病症的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟特定疾病，状况，或病症的一种或多种症状的发作。在癌症的情况中，治疗有效量的药物可减少癌细胞数；缩小肿瘤体积；抑制(即一定程度的减缓，优选停止)癌细胞浸润到周围器官中；抑制(即一定程度的减缓，优选停止)肿瘤转移；一定程度的抑制肿瘤生长；和/或一定程度的减轻与癌症有关的一种或多种症状。就药物可预防癌细胞生长和/或杀死现有癌细胞的程度而言，它可以是抑制细胞的和/或毒害细胞的。对于癌症疗法，可以例如通过评价疾病进展前时间(TTP)和/或测定响应率(RR)来测量功效。

术语“检测”包括任何检测手段，包括直接和间接检测。

术语“诊断”在本文中用于指分子或病理状态，疾病或状况的鉴定或分类。例如，“诊断”可以指鉴定特定类型的癌症，例如肺癌。“诊断”还可以指特定类型的癌症的分类，例如通过组织学(例如，非小细胞肺癌)，通过分子特征(例如以特定基因或蛋白质中的核苷酸和/或氨基酸变异为特征的肺癌)，或两者。

术语“预后”在本文中用于指预测可归于癌症的死亡或进展的可能性，包括例如新生性疾病，诸如癌症的复发，转移性扩散和药物抗性。

术语“预测”在用于本文时指患者将对一种药物或一组药物有好的或不好的响应的可能性。在一个实施方案中，预测涉及那些响应的程度。在另一个实施方案中，预测涉及患者在治疗(例如用特定治疗剂的治疗和/或外科手术去除原发性肿瘤，和/或经某段时间的化疗)后是否存活和/或存活的可能性，而不复发癌症。本发明的预测方法在临床上可用于做出治疗决定，为任何特定患者选择最适宜的治疗形式。本发明的预测方法是有价值的工具，用于预测患者是否可能对治疗方案(诸如给定的治疗方案，包括例如施用给定的治疗剂或组合，外科手术干预，化疗等)有好的响应，或用于预测患者在治疗方案后是否可能长期存活。

在依照本发明使用时，术语对特定治疗剂或治疗选项“抗性升高”意味着对标准剂量的药物或对标准治疗方案的响应降低。

在依照本发明使用时，术语对特定治疗剂或治疗选项“敏感性降低”意味着对标准剂量的药剂或对标准治疗方案的响应降低，其中降低的响应可通过增加药剂剂量或治疗强度来弥补(至少部分弥补)。

可以使用指示对患者有益处的任何终点评估“患者响应”，包括但不限于：(1)在某种程度上抑制肿瘤生长，包括减缓和完全的生长阻滞；(2)减少肿瘤细胞数目；(3)减小肿瘤尺寸；(4)抑制(即降低，减缓或完全阻止)肿瘤细胞浸润临近的外周器官和/或组织；(5)抑制(即降低，减缓或完全阻止)转移；(6)增强抗肿瘤免疫应答，其可以但不必造成肿瘤消退或排斥；(7)在某种程度上减轻一种或多种与肿瘤有关的症状；(8)延长治疗后存活的长度；和/或(9)降低治疗后给定时间点的死亡率。

“生物标志物”是作为正常生物过程，致病性过程或对治疗性干预的药理学响应的指标客观测量和评价的特征。生物标志物可以是几种类型的：预测的，预后的或药效学(PD)。预测性生物标志物预测哪些患者可能响应或受益于特定疗法。预后生物标志物预测患者疾病的可能过程并且可以指导治疗。药效学生物标志物确认药物活性，并且能够实现剂量和施用日程表的优化。

当其在体外或体内发生时，通过使用在建立药效学(PD)中通常使用的一种或多种方法分析生物学样品来检测生物标志物(包括一种或一组PIK3CA突变)的状态的“变化”或“调控”，所述方法包括：(1)对生物学样品的基因组DNA或反转录的PCR产物测序，由此检测一种或多种突变；(2)通过定量信使水平或评估拷贝数评估基因表达水平；和(3)通过免疫组织化学，免疫细胞化学，ELISA或质谱术分析蛋白质，由此检测蛋白质的降解，稳定化或翻译后修饰，诸如磷酸化或泛素化。

术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物中通常以不受调节的细胞生长为特征的生理状况。“肿瘤”包括一种或多种癌性细胞。癌症的例子包括但不限于癌瘤，淋巴瘤，母细胞瘤，肉瘤和白血病或淋巴样恶性肿瘤。此类癌症的更具体的例子包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)，肺癌，包括小细胞肺癌，非小细胞肺癌(“NSCLC”)，肺的腺癌和肺的鳞癌，腹膜癌，肝细胞癌，胃癌或胃的癌，包括胃肠癌，胰腺癌，成胶质细胞瘤，宫颈癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，肝瘤，乳腺癌，结肠癌，直肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜或子宫癌，唾液腺癌，肾癌或肾的癌，前列腺癌，外阴癌，甲状腺癌，肝的癌，肛门癌，阴茎癌，以及头和颈癌。如本文中使用的，胃的癌包括胃癌，其可以在胃的任何部分中发生并可以扩散遍及整个胃以及其它器官；特别是食管，肺，淋巴结和肝。

术语“造血恶性”是指在牵涉诸如白细胞，淋巴细胞，天然杀伤细胞，浆细胞和髓样细胞，诸如嗜中性粒细胞和单核细胞等细胞的造血过程中产生的癌症或过度增殖性病症。造血恶性包括非何杰金(Hodgkin)氏淋巴瘤，弥漫性大造血淋巴瘤，滤泡性淋巴瘤，套细胞淋巴瘤，慢性淋巴细胞性白血病，多发性骨髓瘤，急性髓性白血病和髓样细胞白血病。淋巴细胞性白血病(或“成淋巴细胞性”)包括急性成淋巴细胞性白血病(ALL)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。髓性白血病(又为“髓样”或“非淋巴细胞性”)包括急性髓性(或成髓细胞性)白血病(AML)和慢性髓性白血病(CML)。

“内分泌治疗剂”是可用于治疗癌症(不管作用机制如何)的生物学(大分子)或化学(小分子)化合物。内分泌治疗剂的例子包括但不限于氟维司群，来曲唑，他莫昔芬和依西美坦。

内分泌治疗剂可以是(i)抗雌激素和选择性雌激素受体调控剂(SERM)，包括例如他莫昔芬(包括柠檬酸他莫昔芬)，雷洛昔芬(raloxifene)，屈洛昔芬(droloxifene)，4-羟基他莫昔芬，曲沃昔芬(trioxifene)，keoxifene，LY117018，奥那司酮(onapristone)，和(柠檬酸托瑞米芬(toremifine citrate))；或(ii)抑制调节肾上腺中的雌激素生成的酶芳香酶的芳香酶抑制剂，诸如例如4(5)-咪唑，氨鲁米特(aminoglutethimide)，(醋酸甲地孕酮(megestrol acetate))，(依西美坦；Pfizer)，福美坦(formestanie)，法倔唑(fadrozole)，(伏氯唑(vorozole))，(来曲唑；Novartis)，和(阿那曲唑；AstraZeneca)。

“治疗剂”是可用于治疗癌症(无论作用机制如何)的生物学(大分子)或化学(小分子)化合物。

术语“哺乳动物”包括但不限于人，小鼠，大鼠，豚鼠，猴，犬，猫，马，牛，猪和绵羊。

“包装插页”用于指通常包括在治疗用产品的商业包装中的说明，它们含有关于关注此类治疗用产品使用的适应征，用法，剂量，施用，禁忌症和/或警告的信息。

如本文中所使用的，短语“药学可接受盐”指本发明化合物的药学可接受的有机或无机盐。例示性的盐包括但不限于硫酸盐，柠檬酸盐，乙酸盐，草酸盐，氯化物，溴化物，碘化物，硝酸盐，硫酸氢盐，磷酸盐，酸式磷酸盐，异烟酸盐，乳酸盐，水杨酸盐，酸式柠檬酸盐，酒石酸盐，油酸盐，丹宁酸盐，泛酸盐，酒石酸氢盐，抗坏血酸盐，琥珀酸盐，马来酸盐，龙胆酸盐，富马酸盐，葡糖酸盐，葡糖醛酸盐，糖酸盐，甲酸盐，苯甲酸盐，谷氨酸盐，甲磺酸盐，“mesylate”，乙磺酸盐，苯磺酸盐，对甲苯磺酸盐和扑酸盐(即1,1’-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐))。药学可接受盐可能牵涉包含另一种分子，诸如乙酸根离子，琥珀酸根离子或其它反荷离子。抗衡离子可以是稳定母体化合物电荷的任何有机或无机模块。另外，药学可接受盐可以在其结构中具有超过一种带电荷原子。在多个带电荷原子作为药学可接受盐的组成部分的情况中可以具有多种抗衡离子。因此，药学可接受盐可具有一种或多种带电荷原子和/或一种或多种抗衡离子。

可以通过本领域中可用的任何合适方法制备期望的药学可接受的盐。例如用无机酸(诸如氢氯酸，氢溴酸，硫酸，硝酸，甲磺酸，磷酸等等)或用有机酸(诸如乙酸，马来酸，琥珀酸，扁桃酸，富马酸/延胡索酸，丙二酸，丙酮酸，草酸，乙醇酸，水杨酸，吡喃糖苷酸(pyranosidyl acid)(诸如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸)，α羟酸(诸如柠檬酸或酒石酸)，氨基酸(诸如天冬氨酸或谷氨酸)，芳香酸(诸如苯甲酸或肉桂酸)，磺酸(诸如对甲苯磺酸或乙磺酸)，等等)处理游离碱。例如，一般认为适合于自碱性药用化合物形成药学有用的或可接受的盐的酸的讨论见P.Stahl et al,Camille G.(编)Handbook of PharmaceuticalSalts.Properties,Selection and Use.(2002)Zurich:Wiley-VCH；S.Berge et al,Journal of Pharmaceutical Sciences(1977)66(1)1 19；P.Gould,International J.ofPharmaceutics(1986)33 201 217；Anderson et al,The Practice of MedicinalChemistry(1996),Academic Press,New York；Remington’s Pharmaceutical Sciences,18^th ed.,(1995)Mack Publishing Co.,Easton PA；以及The Orange Book(Food&DrugAdministration,Washington,D.C.，在其网站上)。这些公开内容通过对它们的援引收入本文。

短语“药学可接受”指示物质或组合物必须与构成配制剂的其它成分，和/或用其治疗的哺乳动物是化学和/或毒理学相容的。

如本文中所使用的，术语“协同的”指比两种或更多种单一药剂的叠加效果更有效的治疗组合。GDC-0941的化合物或其药学可接受盐，和一种或多种治疗剂之间的协同相互作用的确定可以基于自本文中描述的测定法获得的结果。可以用CalcuSyn软件使用Chou和Talalay组合法和剂量-效果分析来分析这些测定法的结果以获得组合指数(Chou和Talalay,1984,Adv.Enzyme Regul.22:27-55)。已经在数种测定系统中评估了本发明提供的组合，而且可以利用由Chou和Talalay，“New Avenues in Developmental CancerChemotherapy”，Academic Press，1987，第2章中描述的用于量化抗癌剂之间的协同，叠加，和拮抗的标准程序来分析数据。组合指数小于0.8的值指示协同，大于1.2的值指示拮抗，而介于0.8和1.2之间的值指示叠加效应。组合疗法可提供“协同性”和证明“协同的”，即一起使用活性成分时所实现的效果大于分开使用化合物所致效果的和。当活性成分如下所述时可获得协同效应：(1)以组合的单位剂量配制剂共配制和同时施用或投递；(2)作为分开的配制剂交替或平行投递；或(3)通过一些其它方案。当在交替疗法中投递时，当化合物序贯施用或投递时(例如通过分开的注射器中的不同注射或者在分开的丸剂或片剂中)可以获得协同效应。一般而言，在交替疗法期间，序贯(即连续)施用有效剂量的每种活性成分，而在组合疗法中，一起施用有效剂量的两种或更多种活性成分。使用BLISS不依赖性模型和最高单一药剂(HSA)模型两者评估组合效应(Lehár et al.2007,Molecular SystemsBiology 3:80)。BLISS评分量化来自单一药剂的加强程度，并且BLISS评分＞0提示大于简单叠加。HAS评分＞0提示比相应浓度的单一药剂响应的最大值大的组合效应。

“ELISA”(酶联免疫吸附测定法)是“湿式实验室”类型分析性生物化学测定法的常用形式，其使用一种亚型的异质固相酶免疫测定法(EIA)来检测液体样品或湿样品中的物质的存在(Engvall E,Perlman P(1971).″Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).Quantitative assay of immunoglobulin G″.Immunochemistry 8(9):871–4；VanWeemen BK,Schuurs AH(1971)″Immunoassay using antigen-enzyme conjugates″.FEBSLetters 15(3):232-236)。ELISA可以实施其它形式的配体结合测定法，而不是严格“免疫”测定法，尽管由于此方法的共同用途和发展历史，该名称带有原始的“免疫”。所述技术本质上需要能在固相上固定化的任何连接试剂以及会特异性结合并且使用酶以产生能适当定量的信号的检测试剂。在清洗之间，仅配体和其特异性结合对应物通过抗原-抗体相互作用与固相保持特异性结合或“免疫吸附”，而洗去非特异性或未结合的组分。不像其它分光光度湿式实验室测定形式(其中可以在清洗后重复使用相同的反应孔(例如比色杯))，ELISA板在作为板的一部分的固相上免疫吸附反应产物，并且如此不容易重复使用。实施ELISA牵涉至少一种对特定抗原具有特异性的抗体。在固体支持物(通常是聚苯乙烯微量滴定板)上非特异性(经由吸附至表面)或特异性(经由对相同抗原特异性的另一种抗体捕获，在“三明治式”ELISA中)固定化具有未知量的抗原的样品。在固定化抗原后，添加检测抗体，与抗原形成复合物。检测抗体可以与酶共价连接，或者自身可以通过经由生物缀合与酶连接的二抗检测。在每个步骤之间，通常用温和去污剂溶液清洗板以除去没有特异性结合的任何蛋白质或抗体。在最后的清洗步骤后，通过添加酶底物使板显色以产生可见信号，其指示样品中抗原的量。

“免疫组织化学”(IHC)是指通过利用抗体与生物组织中的抗原特异性结合的原理来检测组织切片的细胞中的抗原(例如蛋白质)的过程。免疫组织化学染色广泛用于诊断异常细胞，诸如在癌性肿瘤中发现的细胞。特异性分子标志物是特定细胞事件，诸如增殖或细胞死亡(凋亡)特征性的。IHC也广泛用于了解生物标志物和差异表达的蛋白质在生物组织的不同部分中的分布和定位。可以以多种方式实现显现抗体-抗原相互作用。在最常见的情况中，可以将抗体与能催化颜色产生反应的酶(诸如过氧化物酶)缀合(见免疫过氧化物酶染色)。或者，也可以将抗体用荧光团，诸如荧光素或罗丹明标记(见免疫荧光)。

“免疫细胞化学”(ICC)是使用经由特定表位靶向细胞中的特定肽或蛋白质抗原的抗体的常见实验室技术。然后，可以使用几种不同的方法检测这些结合的抗体。ICC能评估特定样品中的细胞是否表达所讨论的抗原。在发现免疫阳性信号的情况中，ICC也确定哪个亚细胞区室在表达抗原。

“Kaplan-Meier图”是用于从寿命数据评估存活函数的评估器(Kaplan,E.L.；Meier,P.(1958).“Nonparametric estimation from incomplete observations”.J.Amer.Statist.Assn.53(282)：457–481)。在医学研究中，它常常用于测量治疗后存活某个时间量的患者的分数。存活函数的Kaplan-Meier评估的图是一系列幅度下降的水平步长，其在采集足够大的样品时接近该群体的真实存活函数。假设在连续的不同采样观察(“点击”)之间的存活函数的值是恒定的。

临床试验药物

GDC-0941(pictrelisib,pictilisib,Genentech Inc.,Roche,RG-7321,CAS登记号957054-30-7)是PI3K同等型的有力的多靶性I类(泛)抑制剂。GDC-0941目前在用于治疗晚期实体瘤的II期临床试验中。GDC-0941命名为4-(2-(1H-吲唑-4-基)-6-((4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉(US 7781433；US 7750002；Folkes etal(2008)Jour.of Med.Chem.51(18):5522-5532)，并且具有结构：

包括其立体异构体，几何异构体，互变异构体，和药学可接受盐。

磷酸肌醇3-激酶(PI3K)信号级联(细胞存活，生长和代谢的关键介导物)在人癌症中频繁改变。PIK3CA(编码PI3K的α催化亚基的基因)中的激活性突变在约30％的乳腺癌中发生。这些突变导致酶的组成性活性并且是致癌的。突变体PIK3CA H1047R在腔性乳腺上皮中的表达诱发表达腔和基底标志物的异质肿瘤，并且在雌激素受体方面呈阳性。PIK3CAH1047R癌基因靶向多能祖细胞，并且重演具有PIK3CA H1047R的人乳腺肿瘤的特征(Meyeret al(2011).Cancer Res；71(13):4344–51)。PI3K的高活化可以由于PIK3CA(编码PI3K的p110α亚基的基因)中的体细胞突变而发生。HER2癌基因在所有乳腺癌的25％中扩增，并且这些肿瘤中的一些还含有PIK3CA突变。PI3K能增强转化并赋予对HER2定向疗法的抗性。在也过表达HER2的MCF10A人乳腺上皮细胞中引入的PI3K突变E545K和H1047R对MCF10A/HER2细胞赋予功能获得。表达芳香酶的MCF7细胞在培养物中将雄烯二酮转化为雌激素。图2显示了用GDC-0941，来曲唑和GDC-0941和来曲唑的组合处理的PR+芳香酶抑制剂敏感性(顶部)和PR-，芳香酶抑制剂抗性(底部)细胞系MCF7-ARO(Wallin et al(2012)Clin Cancer Res；18:3901-3911)的细胞存活力的图。H1047R PI3K而不是E545K PI3K的表达显著上调HER3/HER4配体调蛋白(HRG)(Chakrabarty et al(2010)Oncogene 29(37):5193-5203)。

氟维司群(AstraZeneca，CAS登记号129453-61-8)是在美国批准用于治疗激素受体阳性(HR+)乳腺癌患者和在欧盟批准用于ER+患者，包括在抗雌激素疗法后具有疾病进展的绝经后女性的药物(Kansra(2005)Mol Cell Endocrinol 239(1-2):27–36；Flemming et al(2009)Breast Cancer Res Treat.May；115(2):255-68；Valachis etal(2010)Crit Rev Oncol Hematol.Mar；73(3):220-7)。氟维司群是没有激动剂效果的雌激素受体拮抗剂，其既通过下调又通过降解雌激素受体起作用(Croxtall(2011)Drugs 71(3):363–380)。氟维司群命名为(7α,17β)-7-{9-[(4,4,5,5,5-五氟戊基)亚硫酰基]壬基}雌-1,3,5(10)-三烯-3,17-二醇，并且具有结构：

氟维司群属于一类可逆性类固醇ER拮抗剂，其直接与雌激素竞争ER结合，并且没有他莫昔芬的部分激动剂性质。在结合ER后，它阻断雌激素信号传导并提高ER蛋白质的降解。氟维司群对ER的亲和力比他莫昔芬的亲和力大大约100倍(Howell et al.(2000)Cancer 89:817-25)。与SERM一样，氟维司群附着于雌激素受体并作为雌激素拮抗剂发挥功能。然而，与SERM不同，氟维司群没有雌激素激动剂效果。它是一种纯抗雌激素。另外，在氟维司群结合雌激素受体时，受体被靶向破坏。

氟维司群(250mg每月一次)在2002年得到FDA批准，并且在2004年得到EMA批准，用于治疗在抗雌激素疗法后疾病进展的绝经后女性中的HR阳性MBC。在多中心III期研究中，发现氟维司群在二线设置中至少等同于阿那曲唑(一种非类固醇AI)(Howell et al.(2002)J Clin Oncol 20:3396-403；Osborne et al.(2002)J Clin Oncol 20:3386-95)。氟维司群用于晚期乳腺癌的一线治疗时也与他莫昔芬一样有活性(Howell et al.(2004)JClin Oncol 22:1605-13)，并且在AI后转移性疾病设置中在患者中显示与非类固醇AI依西美坦相似的活性水平(Chia et al.(2008)J Clin Oncol 26:1664-70)。已经证明了高剂量氟维司群(500mg每月一次)在临床受益率和总体响应率上至少与阿那曲唑一样有效，并且与具有晚期HR阳性乳腺癌的女性的一线治疗的显著更长的进展前时间相关(Robertson etal.(2009)J Clin Oncol 27:4530-5)。高剂量的氟维司群最近表明在用500mg治疗的具有ER阳性晚期乳腺癌的女性较之用250mg治疗的患者中卓越的无进展存活(PFS)(Di Leo etal.(2010)J Clin Oncol 28:4594-600)。氟维司群(250mg和500mg)在这些研究中耐受较好，并且比他莫昔芬产生更少的雌激素效应，并且比AI阿那曲唑导致更少的关节痛(Osborne et al.(2002)J Clin Oncol 20:3386-95)。这些结果导致批准每月一次给予500mg氟维司群作为在美国和欧盟(2010年)用于在用AI治疗后疾病已经扩散的绝经后女性的当前批准的推荐剂量。这些研究表明，氟维司群是晚期乳腺癌患者的重要治疗选择，并且因而认为是本研究的适当的对照疗法。

来曲唑(Novartis Pharm.)是一种口服非类固醇芳香酶抑制剂，用于治疗手术后的激素响应性乳腺癌(Bhatnagar et al(1990)J.Steroid Biochem.andMol.Biol.37:1021；Lipton et al(1995)Cancer 75:2132；Goss,P.E.and Smith,R.E.(2002)Expert Rev.Anticancer Ther.2:249-260；Lang et al(1993)The Journal ofSteroid Biochem.and Mol.Biol.44(4–6):421–8；EP 236940；US 4978672)。由FDA批准用于治疗绝经后女性中激素受体阳性(HR+)或具有未知受体状态的局部或转移性乳腺癌。来曲唑命名为4,4’-((1H-1,2,4-三唑-1-基)亚甲基)二苄腈(CAS登记号112809-51-5)，并且具有结构：

他莫昔芬是一种口服活性选择性雌激素受体调控剂(SERM)，其用于治疗乳腺癌。在1977年，他莫昔芬第一次由FDA(ICI Pharmaceuticals，现在为AstraZeneca)批准用于治疗转移性乳腺癌(Jordan VC(2006)Br J Pharmacol 147(Suppl 1):S269-76)。他莫昔芬是一种经由其活性代谢物羟基他莫昔芬的乳腺组织中的雌激素受体拮抗剂。在其它组织，诸如子宫内膜中，其表现为激动剂，并且如此可以表征为混合的激动剂/拮抗剂(New Engl.J.Med.(2009)361：766Aug.20,2009)。他莫昔芬是绝经前女性中激素受体阳性乳腺癌的通常的内分泌(抗雌激素)疗法，并且也是绝经后女性中的标准，尽管芳香酶抑制剂也频繁在此设置中使用。他莫昔芬目前用于治疗绝经前和绝经后女性中的早期和晚期雌激素受体(ER)阳性乳腺癌两者(Jordan VC(1993)Br J Pharmacol 110(2):507-17)。它也得到FDA批准用于在有发生疾病的高风险的女性中预防乳腺癌和用于降低对侧(在相反乳房中)乳腺癌。他莫昔芬命名为(Z)-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-N,N-二甲基乙胺(CAS登记号10540-29-1)，并且具有结构：

临床试验

对具有晚期或转移性ER+乳腺癌(MBC)的患者进行多中心，国际，随机化，双盲，安慰剂对照的II期试验，所述患者先前接受用芳香酶抑制剂治疗，并且在接受AI(芳香酶抑制剂)疗法时经历复发或进展。

设计试验以评估在依靠AI疗法已经进展的具有HR阳性MBC的绝经后女性中对氟维司群添加时添加GDC-0941的PI3K途径抑制是否能延长PFS。见实施例1。含有PIK3CA中突变的体外和体内乳腺癌模型通常对GDC-0941敏感(O’Brien et al.(2010)Clin Cancer Res16:3670-83)。

研究目标

·评估所有治疗患者中的氟维司群+GDC-0941较之氟维司群+安慰剂的功效，如通过PFS测量的

·评估具有和没有PIK3CA突变的患者中的氟维司群+GDC-0941对氟维司群+安慰剂的功效，如通过PFS测量的

·评估氟维司群+GDC-0941较之氟维司群+安慰剂的安全性，聚焦于国家癌症研究所不利事件常见术语标准(National Cancer Institute Common Terminology Criteriafor Adverse Events)第4.0版(NCI CTCAE v4.0)3和4级不利事件(AE)，严重AE(SAE)，和实验室异常

·评估所有治疗患者中和具有和没有PIK3CA突变和/或PTEN丧失的患者中氟维司群+GDC-0941的临床活性，如通过响应率，响应的持续时间，临床受益率(CBR)，和OS测量

·评估PIK3CA突变和PTEN丧失对用氟维司群+GDC-0941，和氟维司群+安慰剂治疗的患者中的PFS，响应率，和OS的预测和预后影响

·评估在与氟维司群一起施用时GDC-0941的药动学(PK)参数(AUC0-last，Cmax，Cmin)

·评估GDC-0941的PK参数和肿瘤响应之间的潜在关系

·在具有和没有GDC-0941施用的情况中探索氟维司群单点浓度

·探索药物代谢酶和转运蛋白和其它患者特异性共变量的药物遗传学差异与在与氟维司群一起施用时GDC-0941的PK之间的关系

·经由患者样品的别的分子表征鉴定治疗响应的潜在的新颖的预测生物标志物

·依照治疗分配比较患者的健康相关生活质量(HRQL)和疼痛症状的差异

研究结果

表1：基线时的患者和肿瘤特征

表2：患者布置

表3：不利事件，不管与GDC-0941-氟维司群组的≥10％中的研究治疗的关系如何

图3A-C显示了无进展存活的Kaplan-Meier图。群体：GDC-0941和安慰剂GDC-0941ITT(意向治疗)患者。基于未分层的Cox模型评估危害比；基于未分层的时序检验评估p值。益处在几乎所有检查的患者亚组中评估的所有PR+(孕酮受体阳性)患者群体中得到维持，指示PR+患者群体可以自用GDC-0941和氟维司群治疗的方案得到实质性益处。

表4：各个亚组间的无进展存活分析

表5：各个亚组间的无进展存活的分析

表6：

治疗

在截止日期时，在PIK3CA突变体肿瘤患者中发生了总共37例进行性疾病事件，并且总共84名患者在研究的第I部分中进展。此时，随访的中值持续时间是5.7个月，组合组中及仅氟维司群组中的患者继续接受研究治疗。与接收安慰剂的患者的暴露的14.3周相比，对GDC-0941的暴露的中值持续时间是11.7周。在组合和仅氟维司群组中，对氟维司群的暴露的中值持续时间为16.0和16.1周。疾病进展是组合疗法(44％)和仅氟维司群组(52％)中最频繁的中断原因。总共28(31％)和10(13％)名患者分别在组合疗法和仅氟维司群组中出于与疾病进展无关的事件而中断口服药剂(GDC-0941或安慰剂)。药动学分析证明氟维司群暴露在所有原发性患者亚组间是相似的，并且可以通过使用I期数据开发的GDC-0941popPK模型较好地预测观察到的GDC-0941暴露(数据未显示)。

功效

在意向治疗群体(N＝168；84例PFS事件)中，基于当地调查人员评估的放射摄影研究，中值无进展存活(PFS)是6.3个月(对于GDC-0941加氟维司群)比3.8个月(对于安慰剂加氟维司群)(危害比，0.77；95％置信区间[CI]，0.50至1.19；P＝0.24)。见图3A。对于具有可检测的PIK3CA突变体肿瘤的患者(n＝70；34例PFS事件)，中值PFS是6.2个月(对于GDC-0941加氟维司群)比5.1个月(对于安慰剂加氟维司群)(对于进展或死亡的危害比，0.92；95％CI，0.48至1.76；P＝0.81)，并且具有螺旋和激酶域突变的患者的PFS HR的95％CI在很大程度上是重叠的。见图3B。对于没有可检测的PIK3CA突变体肿瘤的患者(n＝70；34例PFS事件)，中值PFS是5.8个月(对于GDC-0941加氟维司群)比3.6个月(对于安慰剂加氟维司群)(对于进展或死亡的危害比，0.64；95％CI，0.35至1.17；P＝0.14)。见图3C。

探索性的亚组分析(表6)提示了具有较好表现状态(0对1)(仅牵涉骨的疾病)的患者和接受组合疗法的具有孕酮受体阳性(PR)肿瘤的患者相对于仅接受氟维司群的患者的PFS改善的趋势。在PR阳性亚组(n＝116，代表ITT的70％；57例PFS事件)中，中值PFS是7.2个月(对于GDC-0941加氟维司群)比3.7个月(对于安慰剂加氟维司群)(用于进展或死亡的危害比，0.46；95％CI，0.27至0.78；P＝0.0042；相互作用检验，P＝0.035；图3A)。鉴于PR表达与腔性A亚型相关联(Prat,2013)，通过定量逆转录酶PCR(qRT-PCR)用50基因预测器(PAM50)将患者样品分类为内在亚型。如预期，在通过此测定法评估的151份患者样品中，大多数分类为腔性A或腔性B，在PR阳性亚组中的腔性A肿瘤富集(图4)。在腔性A-阳性亚组(n＝98，代表ITT的65％；42例PFS事件)中，中值PFS是没有达到的(对于GDC-0941加氟维司群)比5.26个月(对于安慰剂加氟维司群)(用于进展或死亡的危害比，0.60；95％CI，0.32至1.12；P＝0.11；相互作用检验，P＝0.23)。这两个亚组(即具有PR阳性或腔性A肿瘤的患者)中的组合疗法中的此种可能的改善不依赖于肿瘤PIK3CA突变状态。进一步探索性分析其肿瘤为PR阳性和腔性A亚型两者的患者(n＝73，代表ITT的43％；34例PFS事件)，中值PFS是没有达到的(对于组合疗法)比5.7个月(对于安慰剂加氟维司群)(用于进展或死亡的危害比，0.31；95％CI，0.14，0.67)。表8显示了ITT，PR和腔性A/B亚组中的PFS分析的汇总。

表8：ITT，PR和腔性A/B亚组中的PFS分析的汇总

PR阳性和腔性A亚组的多变量分析提示了治疗效果在调节可能的基线不平衡后得到维持(表9)。

表9：PR阳性和腔性A亚组的多变量分析

基于当地评估，响应率在组合疗法和仅氟维司群组中分别为7％和5％。在组合疗法分支中治疗的具有PIK3CA突变体肿瘤的经历响应的患者比接受仅氟维司群的患者有数值更大的数目(13％比3％)。没有可检测的PIK3CA突变体肿瘤的患者的响应率在组合疗法和仅氟维司群群体中分别为2％和5％。

图6显示了根据腔性亚组的无进展存活的Kaplan-Meier图。比较用GDC-0941+氟维司群或安慰剂治疗的腔性B患者与用GDC-0941+氟维司群或安慰剂治疗的腔性A患者。腔性A亚型患者群体表现出对于受益于GDC-0941和氟维司群的组合是预后性的和预测性的。表10显示了图6的图的评分。

表10：

HR＝危害比

CI＝组合指数

根据腔性亚组，图7显示了PR+患者的无进展存活的Kaplan-Meier图。

根据PR亚组，图8显示了腔性A患者的无进展存活的Kaplan-Meier图。

结论

●不依赖于PIK3CA突变状态，GDC-0941+氟维司群在在前AI疗法失败的ER+MBC患者中是有活性的。GDC-0941+氟维司群将此患者组的中值PFS改善了10.5周(分别在安慰剂和GDC-0941治疗组中从3.8至6.2个月)

●与氟维司群组合的340mg剂量的GDC-0941具有可接受的耐受性概况。非PD事件的中断率(31％)类似于用其它途径抑制剂观察到的中断率(BOLERO-2和TAMRAD，24％)。340mg剂量的毒性影响患者接受治疗直至进展的能力(66％的患者经历不利事件的剂量修改)。

●探索性分析提示PR+亚组实质性受益于与内分泌疗法组合的GDC-0941。亚组分析提示益处在雌激素和孕酮受体两者方面呈阳性的患者中是特别显著的，这导致中值PFS的几乎加倍并且超过15周的总体改善(在安慰剂和Pictilisib治疗组中分别从3.7个月至7.2个月)。ITT分析被具有较差预后特征的患者(特别是在PR-亚组中)偏向安慰剂的不平衡性所混淆。PR+可以鉴定以初始内分泌敏感性为特征的群体，其自用GDC-0941治疗得到较大的益处。

药物组合物和配制剂

本发明的药物组合物或配制剂包含与一种或多种药学可接受载剂，助流剂，稀释剂或赋形剂一起配制的GDC-0941和治疗剂的组合。

本发明的GDC-0941和治疗剂可以以未溶剂化形式以及用药学可接受溶剂，诸如水，乙醇，等溶剂化的形式存在，并且意图是本发明涵盖溶剂化和未溶剂化形式两者。

本发明的化合物也可以以不同的互变异构体形式存在，并且本发明的范围内涵盖所有此类形式。术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指经由低能垒可互变的不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子移变异构体)包括经由质子迁移的互变，诸如酮-烯醇和亚胺-烯胺异构化。化合价互变构体包括通过重组一些成键电子的互变。

药物组合物涵盖散装组合物和个别剂量单位两者，它们包含超过一种(例如两种)药学活性剂(包括GDC-0941和选自本文中描述的别的药剂的列表的治疗剂)，以及任何药学无活性的赋形剂，稀释剂，载剂或助流剂。散装组合物和每个个别剂量单位可以含有固定量的前述药学活性剂。散装组合物是尚未形成个别剂量单位的材料。例示性剂量单位是口服剂量单位，诸如片剂，丸剂，胶囊剂等。类似地，通过施用药物组合物治疗患者的方法也意图涵盖施用散装组合物和个别剂量单位。

药物组合物也涵盖同位素标记的本发明的化合物，其与本文中叙述的那些化合物相同，但是事实上一个或多个原子由具有与通常在自然界中找到的原子质量或质量数目不同的原子质量或质量数目的原子替换。规定的任何特定原子或元素的所有同位素都是本发明的化合物及其用途的范围内涵盖的。可以掺入本发明化合物中的示例性同位素包括氢，碳，氮，氧，磷，硫，氟，氯和碘的同位素，诸如²H，³H，¹¹C，¹³C，¹⁴C，¹³N，¹⁵N，¹⁵O，¹⁷O，¹⁸O，³²P，³³P，³⁵S，¹⁸F，³⁶Cl，¹²³I和¹²⁵I。某些同位素标记的本发明的化合物(例如，用³H和¹⁴C标记的那些化合物)可用于化合物和/或底物组织分布测定法。氚化(³H)和碳-14(¹⁴C)同位素因其易于制备和可检测性是有用的。此外，用较重的同位素诸如氘(²H)替代可以提供源自较大的代谢稳定性的某些治疗优点(例如延长的体内半衰期或降低的剂量要求)，并且因此在一些情况中可以是优选的。正电子发射性同位素诸如¹⁵O，¹³N，¹¹C和¹⁸F可用于正电子发射断层摄影术(PET)研究以检查底物受体占据。一般地，可以通过遵循与下文的实施例中公开的那些规程类似的规程，通过用同位素标记的试剂替代非同位素标记的试剂制备经同位素标记的本发明的化合物。

依照治疗组合中使用的标准药学实践配制GDC-0941和治疗剂以治疗性处理(包括预防性处理)哺乳动物(包括人)的过度增殖性病症。本发明提供了包含与一种或多种药学可接受的载剂，助流剂，稀释剂，添加剂或赋形剂联合的GDC-0941的药物组合物。

合适的载剂，稀释剂，添加剂和赋形剂是本领域技术人员公知的，并且包括材料，诸如碳水化合物，蜡，水溶性和/或可膨胀聚合物，亲水或疏水材料，明胶，油，溶剂，水等。使用的具体载剂，稀释剂或赋形剂会取决于应用本发明化合物的手段和目的。一般地，基于本领域技术人员认为对哺乳动物施用安全(GRAS)的溶剂选择溶剂。一般地，安全溶剂是无毒的水性溶剂，诸如水和在水中可溶或可混溶的其它无毒溶剂。合适的水性溶剂包括水，乙醇，丙二醇，聚乙二醇(例如PEG 400，PEG 300)，二甲亚砜(DMSO)，克列莫佛(cremophor)(例如CREMOPHORBASF)及其混合物。配制剂还可以包含一种或多种缓冲剂，稳定剂，表面活性剂，润湿剂，润滑剂，乳化剂，悬浮剂，防腐剂，抗氧化剂，避光剂，助流剂，加工助剂，着色剂，甜味剂，香化剂(perfuming agent)，芳香剂，和提供药物(即，本发明的化合物或其药物组合物)的优美呈现或有助于制造药物产品(即药物)的其它已知添加剂。

可以使用常规的溶解和混合规程制备配制剂。例如，在存在上文描述的一种或多种赋形剂的情况中在合适的溶剂中溶解散装药物物质(即，本发明的化合物或化合物的稳定化形式(例如与环糊精衍生物或其它已知的络合剂的复合物)。通常将本发明的化合物配制成药物剂量形式以提供容易可控制剂量的药物并且使患者能够遵守规定的方案。

根据用于施用药物的方法，可以以多种方式包装用于应用的药物组合物(或配制剂)。一般地，用于分配的制品包括其中已经以适当形式放置药物配制剂的容器。合适的容器是本领域技术人员公知的，并且包括诸如瓶(塑料和玻璃)，小囊，安瓿，塑料袋，金属圆筒等材料。容器还可以包括防破坏的装置，以防止不经意地接近包装的内容物。另外，容器已经在其上放置描述容器内容物的标签。标签还可以包含适当的警告。

可以针对各种施用路径和类型制备本发明化合物的药物配制剂。例如，任选地，可以以冻干配制剂，研磨粉末或水性溶液的形式将具有期望纯度的GDC-0941与药学可接受的稀释剂，载剂，赋形剂或稳定剂混合(Remington's Pharmaceutical Sciences(1995)第18版,Mack Publ.Co.,Easton,PA)。可以通过于环境温度在适当的pH，和在期望纯度，与生理学可接受的载剂，即在采用的剂量和浓度对接受者无毒的载剂混合进行配制。配制剂的pH主要取决于具体用途和化合物的浓度，但是可以在约3至约8的范围内。

药物配制剂优选是无菌的。特别地，要用于体内施用的配制剂必须是无菌的。容易通过过滤流过无菌过滤膜完成此类灭菌。

通常可以以固体组合物，冻干配制剂或以水性溶液贮存药物配制剂。

会以与较好医疗实践一致的方式，即施用的量，浓度，进度表，过程，媒介物和途径来进行本发明的药物配制剂的定剂量和施用。在此上下文中考虑的因素包括治疗的特定疾病，治疗的特定哺乳动物，个体患者的临床状况，病症的原因，药剂投递位置，施用方法，施用安排，和医学从业人员已知的其它因素。要施用的化合物的“治疗有效量”会受此类考虑因素控制，并且是预防，改善或治疗凝血因子介导的病症必需的最小量。此类量优选低于对宿主有毒或使宿主显著更易于出血的量。

每剂口服或肠胃外施用的GDC-0941的初始药学有效量会在每天约0.01-1000mg/kg，即约0.1至20mg/kg患者体重的范围中，使用的化合物的典型初始范围为0.3至15mg/kg/天。GDC-0941的剂量和要施用的治疗剂的剂量的范围各自可以为每单位剂量形式约1mg至约1000mg，或每单位剂量形式约10mg至约100mg。可以以按重量计约1:50至约50:1的比率，或以按重量计约1:10至约10:1的比率施用GDC-0941化合物和治疗剂的剂量。

可接受的稀释剂，载剂，赋形剂和稳定剂在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，而且包括缓冲剂，诸如磷酸盐，柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如氯化十八烷基二甲基苄基铵；氯化己烷双胺；苯扎氯铵，苄索氯铵；酚，丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清清蛋白，明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，组氨酸，精氨酸或赖氨酸；单糖，二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖，甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖类，诸如蔗糖，甘露醇，海藻糖或山梨醇；成盐反荷离子，诸如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如TWEEN^TM，CREMOPHORPLURONICS^TM或聚乙二醇(PEG)。活性药学成分还可包载入例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊(例如分别是羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)，胶状药物投递系统(例如脂质体，清蛋白微球体，微乳剂，纳米颗粒和纳米胶囊)，或粗滴乳状液。此类技术披露于例如Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版,(1995)MackPubl.Co.,Easton,PA。

可以制备GDC-0941和治疗性化合物的持续释放制剂。持续释放制剂的合适例子包括含有GDC-0941的固体疏水性聚合物的半透性基质，该基质以定型制品的形式存在，例如薄膜或微胶囊。持续释放基质的例子包括聚酯，水凝胶(例如聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))，聚交酯(US 3773919)，L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸酯的共聚物，不可降解的乙烯-乙酸乙烯，可降解的乳酸-乙醇酸共聚物诸如LUPRON DEPOT^TM(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林构成的可注射微球体)及聚-D-(-)-3-羟基丁酸。

药物配制剂包括那些适用于本文中详述的施用路径的。配制剂可以方便地以单位剂量形式呈现，并且可以通过药学领域中公知的任何方法制备。技术和配制剂一般参见Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版(1995)Mack Publishing Co.,Easton,PA。此类方法包括使活性成分与构成一种或多种辅助成分的载剂联合的步骤。一般地，通过使活性成分与液体载剂或细分的固体载剂或两者均匀且密切地联合，然后若需要的话使产品成型来制备配制剂。

适于口服施用的GDC-0941和/或治疗剂的配制剂可以制备为离散单位，诸如丸剂，硬的或软的，例如明胶胶囊，扁囊剂，含片，锭剂，水性或油性悬浮剂，可分散粉剂或颗粒剂，乳剂，糖浆剂或酏剂，各自含有预定量的GDC-0941和/或治疗剂。可以以组合配制剂将该量的GDC-0941和该量的治疗剂配制成丸剂，胶囊，溶液或悬浮液。或者，可以将GDC-0941和治疗剂分开配制成丸剂，胶囊，溶液或悬浮液，用于通过交替施用。

配制剂可以依照本领域已知用于制造药物组合物的任何方法来制备，而且此类组合物可以含有一种或多种药剂，包括增甜剂，矫味剂，着色剂和防腐剂，以提供美味的制剂。压制片剂可以通过在合适的机器中压迫自由流形式(诸如粉末或颗粒)的活性组分来制备，任选混合有粘合剂，润滑剂，惰性稀释剂，防腐剂，表面活性剂或分散剂。铸制片剂可以通过在合适的机器中浇铸用惰性液体稀释剂弄湿的粉状活性组分的混合物来制备。片剂可以任选包衣或刻痕，而且任选配制成以自其提供活性组分的缓慢或受控释放。

本发明的药物配制剂的片剂赋形剂可以包括：填充剂(或稀释剂)，以提高构成片剂的粉状药物的散装体积；崩解剂，当它被摄入时，以促进片剂分解成小碎片，理想的是各药物颗粒，并促进药物的快速溶解和吸收；粘合剂，以确保能形成具有所需机械强度的颗粒剂和片剂，并在片剂压制后保持它成一体，防止它在包装，运输和例行操作期间分解成其成分粉末；助流剂，以在生产期间改进构成片剂的粉末的流动性；润滑剂，以确保制成片剂的粉末不会在制造期间粘附至用于压制片剂的设备。它们改进粉末混合物经过压片机的流动并使制成的片剂自设备喷出时的摩擦和破裂最小化；抗粘附剂，功能与助流剂相似，降低制造期间构成片剂的粉末和用于冲压出片剂形状的机器之间的粘附；掺入片剂的矫味剂，以给予片剂更令人愉快的味道或掩盖令人不快的味道，和着色剂，以帮助鉴别和患者顺从。

含有与适合于制备片剂的无毒药学可接受赋形剂混合的活性组分的片剂是可接受的。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂，诸如碳酸钙或钠，乳糖，磷酸钙或钠；粒化和崩解剂，诸如玉米淀粉，或海藻酸；粘合剂，诸如淀粉，明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，诸如硬脂酸镁，硬脂酸或滑石。片剂可以是未包衣的，或者可以通过已知技术来包衣，包括微囊化，以延迟胃肠道中的崩解和吸收，并由此提供较长一段时间里的持续作用。例如，可以单独地或与蜡一起地采用延迟时间的材料，诸如甘油基单硬脂酸酯或甘油基二硬脂酸酯。

为了治疗眼或其它外部组织，例如口和皮肤，配制剂优选作为以例如0.075至20％w/w的量含有活性组分的表面软膏剂或乳膏来应用。当配制成软膏剂时，可以与石蜡或水易混的软膏剂基材一起采用活性组分。或者，可以与水包油乳膏基材一起在乳膏中配制活性组分。

乳膏基材的水相可以包括多羟基醇，即具有两个或更多个羟基的醇，诸如丙二醇，丁烷1,3-二醇，甘露醇，山梨醇，甘油和聚乙二醇(包括PEG 400)及其混合物。表面配制剂可以根据需要包括增强活性组分经由皮肤或其它受影响区域吸收或穿透的化合物。此类皮肤穿透增强剂的例子包括二甲亚砜及相关类似物。

本发明的乳状液的油相可以以已知方式自已知组分构建，包括至少一种乳化剂与脂肪或油，或与脂肪和油二者的混合物。优选的是，与起稳定剂作用的亲脂性乳化剂一起包括亲水性乳化剂。总而言之，在有或无稳定剂的情况中，乳化剂构成乳化蜡，而且蜡与油和脂肪一起构成乳化软膏基材，其形成乳膏配制剂的油性分散相。适合于在本发明的配制剂中使用的乳化剂和乳状液稳定剂包括60，80，十六醇十八醇混合物，苯甲醇，肉豆蔻醇，甘油基单硬脂酸酯和月桂基硫酸钠。

本发明的药物配制剂的水性悬浮液含有与适合于制备水性悬浮液的赋形剂混合的活性材料。此类赋形剂包括：悬浮剂，诸如羧甲基纤维素钠，交联羧甲纤维素，聚维酮，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，藻酸钠，聚乙烯吡咯烷酮，黄芪胶和阿拉伯胶；和分散剂或湿润剂，诸如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)，烯烃氧化物与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)，环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物(例如十七碳乙烯氧基鲸蜡醇)，环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯)。水性悬浮液还可以含有一种或多种防腐剂，诸如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯；一种或多种着色剂；一种或多种矫味剂；和一种或多种增甜剂，诸如蔗糖或糖精。

药物组合物可以是无菌可注射制剂形式，诸如无菌可注射水性或油性悬浮液。可以依照已知技术，使用上文所述那些合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂来配制这种悬浮液。无菌可注射制剂可以是在无毒胃肠外可接受稀释剂或溶剂中的溶液或悬浮液，诸如在1,3-丁二醇中或自冻干粉制备的溶液。在可以采用的可接受的媒介和溶剂中有水，林格氏溶液和等张氯化钠溶液。另外，可以方便地采用无菌非挥发性油作为溶剂或悬浮介质。为了这一目的，可以采用任何温和的非挥发性油，包括合成的甘油单酯或二酯。另外，脂肪酸诸如油酸同样可以用于制备可注射制剂。

可以与载剂材料组合以产生单个剂量形式的活性组分的量会根据所治疗的宿主和具体的施用模式而变化。例如，预定对人口服施用的时间-释放配制剂可以含有大约1至1000mg的活性材料，其与适当和方便量的载剂材料复合，载剂材料可以在总组合物的约5至约95％(重量:重量)变化。可以制备药物组合物来提供容易测量的量供施用。例如，预定用于静脉内输注的水溶液可以含有约3至500μg的活性组分每毫升溶液，以便能以约30mL/小时的速率输注合适的体积。

适合于胃肠外施用的配制剂包括水性和非水性无菌注射溶液，其可以含有抗氧化剂，缓冲剂，抑菌剂和使得配制剂与预定接受者的血液等张的溶质；和水性和非水性无菌悬浮液，其可以包括悬浮剂和增稠剂。

适合于表面施用于眼的配制剂还包括滴眼液，其中活性组分在适合于活性组分的载剂(尤其是水性溶剂)中溶解或悬浮。活性组分优选以约0.5至20％w/w，例如约0.5至10％w/w，例如约1.5％w/w的浓度存在。

适合于在口中表面施用的配制剂包括在调味基材(通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄芪胶)中包含活性组分的锭剂；在惰性基材(诸如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)中包含活性组分的软锭剂(pastilles)；和在合适的液体载剂中包含活性组分的漱口水。

用于直肠施用的配制剂可以作为具有合适基材(包括例如可可脂或水杨酸盐)的栓剂存在。

适合于肺内或鼻部施用的配制剂具有例如0.1至500微米范围内的粒度(包括介于0.1和500微米之间的范围中的粒度，增量几微米，诸如0.5，1，30微米，35微米，等)，其通过经鼻道快速吸入或通过经口吸入从而到达肺泡囊来施用。合适的配制剂包括活性组分的水性或油性溶液。适合于气雾剂或干粉施用的配制剂可以依照常规方法来制备，而且可以与其它治疗剂诸如以前用于治疗或预防下文所述病症的化合物一起递送。

适合于阴道施用的配制剂可以作为在活性组分之外含有诸如本领域已知适宜的载剂的阴道栓(pessaries)，棉塞(tampons)，乳膏剂，凝胶剂，糊剂，泡沫剂或喷雾配制剂呈现。

可以将配制剂包装在单剂(unit-dose)或多剂(multi-dose)容器中，例如密封的安瓿和管形瓶，而且可以将其在冷冻干燥(冻干)条件下贮存，在临使用前仅需要添加无菌液体载剂，例如水以便注射。由先前所述种类的无菌粉末，颗粒和片剂制备临场注射的溶液和悬浮液。优选的单位剂量配制剂为那些含有如上所述每日剂量或单位每日亚剂量或其合适分数的活性组分的。

本发明进一步提供了兽用组合物，其包含至少一种如上定义的活性组分及其兽用载剂。兽用载剂为可用于施用所述组合物目的的材料，并且可以为固体，液体或气态物质，它们在其它方面呈惰性或在兽药领域中可接受的，而且与活性组分相容的。可以胃肠外，口服或通过任何其它期望途径来施用这些兽用组合物。

组合疗法

可以与内分泌治疗剂组合采用GDC-0941以治疗孕酮受体阳性(PR+)和/或腔性A型乳腺癌。在某些实施方案中，在单一配制剂中将GDC-0941与内分泌治疗剂组合为单一片剂，丸剂，胶囊剂或溶液剂以同时施用组合。在其它实施方案中，依照剂量方案或疗法过程在分开的配制剂中以分开的片剂，丸剂，胶囊剂或溶液剂施用GDC-0941和内分泌治疗剂以序贯施用GDC-0941和内分泌治疗剂。GDC-0941和内分泌治疗剂的组合可以具有协同特性。药物组合配制剂或给药方案的内分泌治疗剂优选对GDC-0941具有互补活性，并且使得它们彼此没有不利地彼此影响。可以以对于预定目的有效的量施用治疗组合的此类化合物。在一个实施方案中，本发明的药物配制剂包含GDC-0941和内分泌治疗剂，诸如本文中描述的。在另一个实施方案中，通过给药方案施用治疗组合，其中在每日两次至每三周一次(q3wk)的范围中施用治疗有效量的GDC-0941，并且在每日两次至每三周一次的范围中交替分开施用治疗有效量的内分泌治疗剂。

本发明的治疗组合包括GDC-0941和选自氟维司群和来曲唑的内分泌治疗剂，用于在治疗乳腺癌中分开，同时或序贯使用。

可以以同时或序贯方案施用组合疗法。当序贯施用时，可以以两次或更多次施用来施用组合。组合施用包括使用分开的配制剂或单一药物配制剂的共施用，和任一次序的序贯施用，其中优选存在有所有活性剂同时发挥它们的生物学活性的一段时间。

任何上述共施用药剂的合适剂量就是那些当前使用的，而且可以由于新鉴定的药剂和其它治疗剂或处理的组合作用(协同)而降低，诸如以提高治疗指数或减轻毒性或其它副作用或后果。

在抗癌疗法的具体实施方案中，可以作为辅助疗法与手术疗法和放射疗法组合治疗组合。依照本发明的组合疗法包括施用GDC-0941和一种或多种其它癌症治疗方法或模式。会选择GDC-0941和治疗剂的量和相对施用时机以实现期望的组合治疗效果。

药物组合物的施用

可以通过对于要治疗的状况适宜的任何路径施用本发明的治疗组合。合适的路径包括口服，胃肠外(包括皮下，肌肉内，静脉内，动脉内，吸入，皮内，鞘内，硬膜外，和输注技术)，透皮，直肠，鼻，表面(包括口腔和舌下)，阴道，腹膜内，肺内和鼻内。表面施用还可涉及使用透皮施用诸如透皮贴或离子透入装置。药物配制的讨论见Remington’sPharmaceutical Sciences，第18版，(1995)Mack Publishing Co.，Easton，PA。药物配制剂的其它例子可见于Liberman，H.A.和Lachman，L.，编，Pharmaceutical Dosage Forms，Marcel Decker，第3卷，第2版，New York，NY。对于局部免疫抑制治疗，可以通过损伤内施用来施用化合物，包括灌注或以其它方式在移植前使移植物接触抑制剂。应当领会，优选的路径可以随例如接受者的状况而变化。若口服施用化合物，则它可以与药学可接受载剂，助流剂，或赋形剂一起配制成丸剂，胶囊剂，片剂，等。若胃肠外施用化合物，则它可以与药学可接受胃肠外媒介或稀释剂一起，及以单位剂量可注射形式配制，如下文详述的。

治疗人患者的剂量的范围可以为约1mg至约1000mg的GDC-0941，诸如约5mg至约20mg的化合物。根据药动学(PK)和药效学(PD)特性，包括特定化合物的吸收，分布，代谢和排泄，可以一天一次(QD)，每天两次(BID)，或更频繁施用剂量。另外，毒性因素可以影响剂量和施用给药方案。当口服施用时，可以每天两次，每天或更低频率(诸如每周或每两或三周一次)摄入丸剂，胶囊剂或片剂达规定的时间段。可以将方案重复多个治疗周期。

治疗方法

本发明的方法包括：

●基于生物标志物鉴定的诊断方法；

●测定患者是否会响应GDC-0941或GDC-0941和内分泌治疗剂的组合的方法；

●通过监测GDC-0941或GDC-0941和内分泌治疗剂的组合的清除来优化治疗功效的方法；

●通过监测治疗剂抗性突变的发生来优化GDC-0941或GDC-0941和内分泌治疗剂的组合的治疗方案的方法；和

●用于鉴定哪些患者会最受益于用GDC-0941，或GDC-0941和内分泌治疗剂的组合疗法治疗并且对患者监测其对用GDC-0941，或GDC-0941和内分泌治疗剂的组合疗法治疗的敏感性和响应性的方法。

本发明的方法可用于在哺乳动物(例如人)中抑制异常细胞生长或治疗过度增殖性病症诸如癌症。例如，所述方法可用于诊断，监测和治疗哺乳动物(例如人)中的多发性骨髓瘤，淋巴瘤，白血病，前列腺癌，乳腺癌，肝细胞癌，胰腺癌和/或结肠直肠癌。

(1)GDC-0941和(2)内分泌治疗剂的治疗组合可用于治疗疾病，状况和/或病症，包括但不限于那些以PI3激酶途径的激活为特征的。因而，本发明的另一个方面包括治疗能通过抑制脂质激酶(包括PI3)来治疗的疾病或状况的方法。在一个实施方案中，用于治疗实体瘤或造血恶性的方法包括以组合配制剂或通过交替对哺乳动物施用治疗组合，其中所述治疗组合包含治疗有效量的GDC-0941和治疗有效量的一种或多种选自氟维司群和来曲唑的内分泌治疗剂。可以采用(1)GDC-0941和(2)内分泌治疗剂的治疗组合治疗过度增殖性疾病或病症，包括造血恶性，肿瘤，癌症和新生性组织，以及恶性前和非新生性或非恶性过度增殖性病症。在一个实施方案中，用治疗组合和药学可接受的载剂，佐剂或媒介物治疗人患者，其中所述治疗组合的GDC-0941或其代谢物以可检测地抑制PI3激酶活性的量存在。

造血恶性包括非何杰金氏淋巴瘤，弥漫性大造血淋巴瘤，滤泡性淋巴瘤，套细胞淋巴瘤，慢性淋巴细胞性白血病，多发性骨髓瘤，AML和MCL。

本发明的另一方面提供了用于在患有本文中描述的疾病或状况的哺乳动物，例如人中治疗此类疾病或状况中使用的药物组合物或治疗剂组合。还提供了药物组合物在制备用于在患有本文中描述的病症和状况的温血动物(诸如哺乳动物，例如人)中治疗此类疾病和状况的药物中的用途。

制品

在本发明的另一个实施方案中，提供了可用于治疗上文描述的疾病和病症的含有GDC-0941的制品或“试剂盒”。在一个实施方案中，试剂盒包含装有GDC-0941的容器。试剂盒可以进一步包括在容器上或与容器相关联的标签或包装插页。术语“包装插页”用于指通常包括在治疗用产品的商业包装中的用法说明书，其含有关于关注此类治疗用产品应用的适应征，用法，剂量，施用，禁忌症，和/或警告的信息。合适的容器包括例如瓶，管形瓶，注射器，泡罩包等。容器可以由多种材料，诸如玻璃或塑料制成。容器可以容纳有效用于治疗状况的GDC-0941或其配制剂，并且可以具有无菌存取口(例如，容器可以是具有皮下注射针可刺穿的塞子的管形瓶或静脉内溶液袋)。组合物中的至少一种活性剂是GDC-0941。标签或包装插页指示该组合物用于治疗选择的状况，诸如癌症。在一个实施方案中，标签或包装插页指示可以使用包含式I化合物的组合物治疗源自异常细胞生长的病症。标签或包装插页也可指示可以使用组合物治疗其它病症。或者/另外，制品可以进一步包含第二容器，其包含药学可接受的缓冲液，例如抑菌性注射用水(BWFI)，磷酸盐缓冲盐水，林格(Ringer)氏溶液和右旋糖溶液。它可以进一步包含商业和使用者立场上所期望的其它物质，包括其它缓冲剂，稀释剂，滤器，针，和注射器。

试剂盒可以进一步包括关于施用GDC-0941和(若存在的话)第二药物配制剂的指导。例如，如果试剂盒包含包含GDC-0941的第一组合物和第二药物配制剂，那么试剂盒可以进一步包括关于对有此需要的患者同时，序贯或分开施用第一和第二药物组合物的指导。

在另一个实施方案中，试剂盒适合于投递固体口服形式的GDC-0941，诸如片剂或胶囊剂。此类试剂盒优选包括多个单位剂量。此类试剂盒可以包含以其预期使用的次序将剂量取向的卡。此类试剂盒的一个例子是“泡罩包”。泡罩包是包装业中公知的，并且广泛用于包装药物单位剂型。若想要的话，可以提供记忆辅助物，例如以数字，字母或其它标记的形式或用日历插页，指派治疗日程表中可以施用剂量的日期。

依照一个实施方案，试剂盒可以包含(a)其中装有GDC-0941的第一容器；和任选地(b)其中装有第二药物配制剂的第二容器，其中所述第二药物配制剂包含具有抗过度增殖活性的第二化合物。或者/另外，试剂盒可以进一步包含第三容器，其包含药学可接受的缓冲液，诸如抑菌性注射用水(BWFI)，磷酸盐缓冲盐水，林格氏溶液和右旋糖溶液。它可以进一步包含商业和使用者立场上所期望的其它物质，包括其它缓冲剂，稀释剂，滤器，针，和注射器。

在试剂盒包含GDC-0941和第二治疗剂(即治疗剂)的情况中，试剂盒可以包含用于容纳分开的组合物的容器，诸如分开的瓶或分开的箔包，然而，分开的组合物也可以包含在单一未分开的容器内。通常，试剂盒包含用于施用分开的组分的指导。在分开的组分优选以不同的剂量形式(例如口服和胃肠外)施用，以不同的剂量间隔施用时，或在开处方的内科医生期望滴定组合的个别组分时，该试剂盒形式是特别有利的。

实施例

实施例1：用GDC-0941治疗腔性A型乳腺癌患者的临床研究

试验设计：对具有晚期或转移性乳腺癌(MBC)的患者进行一项多中心，国际，随机化，双盲的，安慰剂对照的，II期试验，所述患者先前已经接受用芳香酶抑制剂治疗，并且在接受AI(芳香酶抑制剂)疗法的情况中经历复发或进展。患者接受用(1)GDC-0941340mg+氟维司群，(2)安慰剂+氟维司群，或(3)安慰剂治疗。患者在周期1的第1天(随机化前)和第15天(随机化后)和周期2的第1天和此后每28天接受肌肉内(IM)氟维司群500mg，与在周期1的第15天开始每天一次口服施用并且连续施用的接着的实验治疗组合。

研究设计为评估与单一药剂氟维司群相比对氟维司群添加GDC-0941对PFS的影响。在所有治疗的患者(不依赖于来自肿瘤的诊断评估的结果)中和在诊断阳性患者的特定子集中实施这些比较(见测定方法部分)。在筛选时；在周期2，4，6，8和11结束时；并且此后每12周，在接着的周期的第1天的研究治疗启动前实施功效肿瘤评估。见图1。

主要终点是无进展存活(PFS)，其基于所有治疗患者和具有PIK3CA突变体肿瘤的患者中由当地调查人员评估的放射摄影研究。

基于这些诊断子集在具有ER阳性MBC的患者中的设想的(projected)流行度，此研究的登记包括具有PIK3CA基因中的活化性突变的随机化患者及具有PTEN表达的丧失(和PIK3CA野生型)的随机化患者(Saal et al.(2005)Cancer Res 65:2554-9；Stemke-Haleet al.(2008)Cancer Res 68:6084-91)。此样本允许在总体群体及生物标志物阳性和阴性子集两者中对两种实验药剂进行提供信息的评估(见统计方法部分)。如果具有生物标志物阳性肿瘤的患者的流行度低于设想的，那么一旦随机化足够数目的患有野生型肿瘤的患者就可以将适格性进一步限制于其肿瘤含有PIK3CA突变或PTEN蛋白质丧失的患者(参见统计方法部分)。

在随机化前需要存档肿瘤样品中的PIK3CA突变状态和PTEN表达的前瞻性分析。为了最小化完成患者分层需要的存档肿瘤样品的分子分析延迟治疗的可能性，在随机化前对周期1第1天登记合格的患者给予单剂肌肉内(IM)氟维司群(500mg)(这会启动氟维司群“导入(run-in)”期)。

在氟维司群导入期(周期1第1天至周期1第14天)期间以1:1:1比率(GDC-0941340mg:GDC-0980 30mg:与GDC-0941 340mg或GDC-0980 30mg对应的安慰剂)将患者随机化至实验治疗分支。与在周期1的第15天开始每天一次口服施用GDC-0941，GDC-0980或安慰剂组合，患者在周期1的第15天(在随机化后)和后续28天周期的第1天接受氟维司群500mg。

使用三种变量对患者分层：PI3K途径改变状态，对在前AI疗法的抗性(原发性或继发性抗性)和可测量的疾病(对不可测量)。原发性抗性定义为1)在辅助性设置中完成AI治疗的6个月(即26周)期间或之内的疾病复发，或2)在转移性设置中开始AI治疗的6个月内的疾病进展和对AI治疗没有响应。继发性抗性定义为最少6个月的SD，或对在前转移性AI治疗的完全响应(CR)或PR。经由使用动态分级随机化算法及使用预定义的分层变量将患者分配到研究分支。患者接受研究治疗直到进展，不可耐受的毒性，选择性退出研究，或研究完成或终止。接受安慰剂的患者有机会接受开放标签交换疗法，以接受与他们接受的安慰剂匹配的实验研究治疗。该方案为出于不利事件的剂量中断或研究药物治疗的减少/降低提供详细准则。

结局测量：所有治疗患者中和具有PI3K途径异常的患者中的主要功效结局测量是：PFS(无进展存活)，定义为自周期1第1天的第一剂氟维司群至疾病进展的第一次观察(如由调查人员按照改良实体瘤响应评估标准第1.1版(RECIST v1.1)评估的)或研究时任何原因的死亡(最后一剂研究治疗后≤30天)的时间。在所有治疗患者中和具有PI3K途径异常的患者中的次要活性结局测量如下：

·未确认的和已确认的客观肿瘤响应的比率，如由调查人员按照改良RECISTv1.1评估的

·临床受益率，如通过经历完全响应(CR)，部分响应，或稳定疾病达至少24周的患者的百分比定义的

·已确认的客观响应的持续时间，定义为自客观肿瘤响应的第一次观察直到疾病进展的第一次观察(如由调查人员按照改良RECIST v1.1评估的)，稳定疾病或更好的最近肿瘤评估，或研究时任何原因的死亡(最后一剂研究治疗后≤30天)的时间，

·OS定义为自治疗启动直到任何原因的死亡的时间。会使用下面的结局测量来评估与GDC-0941组合时的氟维司群，或安慰剂的安全性和可耐受性：

·依照NCI CTCAE v4.0分级的AE的发生率，性质，和严重性，

·施用研究治疗期间和之后生命体征，身体发现，和临床实验室结果的临床重大变化。药动学(PK)结局测量是氟维司群的GDC-0941单点浓度的参数(AUC0-last，Cmax，Cmin)。探索性结局测量如下：

·肿瘤DNA和RNA中的全基因组测量，包括突变状态，RNA基因表达值，DNA拷贝数，和蛋白质表达

·CTC的计数和来自外周血的ctDNA中PIK3CA突变状态

·HRQL和症状严重性和干扰的患者报告的结局，要使用欧洲癌症研究和治疗组织(European Organization for Research and Treatment of Cancer,EORTC)QLQ-C30，QLQ-BR23(附录K)，mBPI-sf，和每日疼痛日志评估

患者：用于此研究的适格标准选择为增强此试验中的患者的安全性。许多排除标准具体基于研究药物治疗的已知安全性概况，以及GDC-0941的非临床和临床数据。关键的纳入标准如下：在进入研究时，年龄≥18岁的绝经后女性，具有雌激素受体阳性，人表皮生长因子受体2型(HER2)阴性晚期或转移性乳腺癌，按照国家或当地治疗准则，推荐用内分泌疗法(即氟维司群)治疗，并且用细胞毒性化学疗法治疗对于患者是不必要的。在研究的部分I中，患者必须已经经历辅助性设置中用AI治疗期间(或在中断AI后的6个月内)的疾病复发或者转移性设置中用AI治疗期间的进展。AI必须是登记前最近的治疗，并且患者在复发或疾病进展前必须已经接受至少4周用AI治疗。在研究的部分II中，患者必须已经经历在用AI治疗期间或之后已经进展的疾病。出于毒性而非方案完成或者出于疾病进展而中断AI的患者不是适格的。

其它关键的纳入标准包括0或1的东部肿瘤学合作组(Eastern CooperativeOncology Group,ECOG)表现状态，所有患者必须同意提供其疾病的肿瘤样品，通过RECISTv1.1的可测量的疾病或在周期1的第1天的28天内有放射学扫描的疾病，足够的血液学和终末器官(end-organ)功能。

关键的排除标准包括：(1)针对晚期乳腺癌或MBC用氟维司群，PI3K抑制剂，或mTOR抑制剂的在先治疗，(2)患者在周期1的第1天前的2周内需要抗高血糖疗法，在先抗癌疗法或放射疗法，(3)用一种细胞毒性化学疗法方案的在先治疗或(4)在用于MBC的两种内分泌疗法上经历复发性或进展性疾病。需要抗高血糖疗法的患者，那些具有临床重大心脏，肺功能障碍，活动性自身免疫性疾病，免疫受损状态，肝疾病的临床重大历史的患者，和那些具有未治疗或活动性中枢神经系统(CNS)转移的患者也自研究参与排除。在登记前自所有患者获得知情同意书。

测定方法：针对PI3K的突变分析：在约30％的乳腺癌中找到PIK3CA基因中的体细胞突变，并且最常在外显子9和20中在编码氨基酸E542，E545和H1047的密码子中发生。扩增PIK3CA的外显子9和20的实时PCR(RT-PCR)测定法提供了灵敏且定量的方法自存档肿瘤材料检测突变。自肿瘤样品提取DNA，并进行检测野生型等位基因的定量RT-PCR(qRT-PCR)测定法以及用于包括但不限于以下氨基酸变化的核苷酸替代的测定法：E542(K)，E545(A，G，或K)，和H1047(L，R，Y)。在用于定量实时PCR的Cobas z 480(Roche MolecularDiagnostics)上运行来自所有样品的测定法，并且使用合适的截留和自动化软件做出突变呼叫(call)。在组织病理学审查后，通过宏观或显微解剖对肿瘤含量<20％的样品富集肿瘤含量。

为了患者分层目的，含有PIK3CA突变体的肿瘤定义为含有任何一种预先定义的活化性突变的样品。PIK3CA野生型指派定义为不含任何预先定义的活化性突变的样品。PIK3CA状态未知的指派是如下的样品，其中任何一种预先定义的突变未被确定地评估且没有任何别的活化性突变。另外，自从患者收集的血浆样品提取ctDNA，并且用于经由使用上文描述的qRT-PCR测定法检测致癌突变。在基线时和在治疗后测量的突变的流行度可以提供关于对疗法的响应或抗性的信息。出于随机化目的，不会使用来自ctDNA分析的结果对患者分层。

经由使用已经使用数种可得细胞系对照验证了特异性的方案通过IHC检查PTEN状态。只有在内部对照基质或正常(非肿瘤)组织元件中观察到合适的染色时才对存档肿瘤材料评分。也可以通过用于mRNA水平的qRT-PCR测定法或荧光原位杂交(FISH)测定法中的染色体丢失来检查PTEN状态。

使用在合适的美国病理学家学院(College of American Pathologists,CAP)/美国临床肿瘤学会(American Society of Clinical Oncology)准则下运行的IHC测定法在CAP认证的实验室中确认ER(雌激素受体)和PgR(孕酮受体)状态，以确认HR阳性乳腺癌的诊断。此分析的结果不是满足登记标准所要求的，并且在患者随机化之前可能不可得。如果来自中心实验室分析的结果提示患者的肿瘤是ER和PgR阴性，那么对主治调查人员告知此结果，并且患者继续参与研究由主治调查人员自行处理。

HER2状态：还经由依照HercepTest包装插页中的说明书使用DAKO HercepTest试剂盒通过IHC对肿瘤样品测试HER2蛋白质过表达。认为3+的IHC结果是HER2阳性。认为2+的IHC结果是不明确的，并且对组织测试HER2基因扩增。经由依照PathVysion包装插页中的说明书使用标准HER2 FISH试剂盒(Abbott Laboratories)对存档原发性肿瘤材料评估HER2基因扩增。

也可以对自FFPE切片获得的DNA分析相关癌基因和肿瘤抑制基因中的突变或拷贝数变化。具体地，使用基于(Life Technologies)平台的多重突变测定法测定KRAS，NRAS，BRAF，EGFR和AKT1中的突变状态。如果在运行PIK3CA突变测定法后保留足够的样品，那么也可以对ctDNA实施这些测定法。在(Life Technologies)平台上实施c-MYC，CCND1，FGFR1，FGFR2，IGF1R，PIK3CA，CDK4和牵涉PI3K信号传导的潜在其它基因的基于qPCR的拷贝数测定法。

如果在已经实施上述测定法后保留足够的DNA，那么可以实施用于突变检测的全基因组方法。外显子重测序的目标是双倍的。一个目标是对潜在感兴趣的已知基因的宿主询问内分泌抗性或对研究治疗的响应/抗性。例子包括PI3K途径中的其它基因，其它RTK，已知的肿瘤抑制基因，及具有可能与内分泌生物学抗性或研究治疗响应相关的预先存在逻辑假设的其它基因。第二个目标是实施较广泛的假设产生分析，以评估基因组中的任何蛋白质编码突变在其肿瘤已经变得对内分泌疗法有抗性或与对研究治疗的响应/抗性相关联的患者中是否以或更高或更低的频率发生。目前在探索和评价用于外显子再测序的两种方法：使用基于灵敏质谱术的Sequenom系统和外显子捕获再测序的进化技术扫描已知的突变(Hodges et al.(2007)Nat Genet 39:1522-7)。可以使用这两种方法之一或二者。考虑到全基因组测序领域正在快速演变，还可能实施另一种技术，这取决于要分析来自此试验的活组织检查时的验证的水平和领域。在肿瘤组织不生成足够用于外显子再测序的DNA的情况中，使用全基因组扩增。若可得的话，可以利用自冷冻的非FFPE组织分离的剩余的DNA进行DNA拷贝数概况分析。在必要时，使用全基因组扩增材料。使用商品化的阵列比较基因组杂交平台(Agilent Co.)。目标是开发拷贝数变化数据库，可以询问所述数据库以询问假设驱动的问题或鉴定新颖的响应预测器。

在有足够的存档或新鲜组织来分离RNA的情况中，实施乳腺癌，PI3K信号传导和/或内分泌疗法抗性中重要的一组基因的基因mRNA和MiRNA表达概况分析。在冷冻的肿瘤组织可得的情况中，提取RNA，并且经由使用经验证的商品化平台(诸如Affymetrix或Agilent)进行全局基因表达或miRNA水平概况分析。目标是检查是否有与临床响应相关的基因表达样式。

免疫组织化学测定法：Ki67抗原是一种重要的细胞周期相关核蛋白，其由活跃细胞周期的所有阶段(G1，S，G2和M期)中的增殖细胞表达。因而，它是肿瘤增殖状态的有用的标志物。经由使用标准技术通过IHC测定Ki67蛋白质水平。如果保留足够的切片，那么也可以对分析物，诸如pPRAS40，p4EB-P1和pS6实施IHC，因为这些蛋白质的磷酸化可能与新生性细胞中的途径活化状态相关。

反相蛋白质阵列：反相蛋白质阵列提供了在非常少量的肿瘤材料(诸如可以自活组织检查或存档的冷冻的非FFPE组织的激光捕获显微解剖获得)中对数百个可能的磷酸化事件进行概况分析的潜力。该技术的基础是将连续稀释的来自细胞系或肿瘤样品的少量裂解物在微阵列载片上固定化。如此，在载片上排列多个样品，并且可以用检测特定磷酸表位的抗体探查。使用此技术，我们对代表已知在乳腺癌中失调的许多途径的100个关键信号传导节点(包括但不限于HER家族中的受体和PI3K/mTOR，雌激素和RAS/MAPK信号传导途径的多种组分)进行概况分析。

循环肿瘤细胞分析：经由使用Cellsearch，Biocept，Cellective和/或其它CTC计数和分子概况分析平台对全血实施CTC分析。自血液分离的CTC经历分子分析，诸如PI3K突变状态和PTEN状态。出于随机化目的，不会使用来自CTC分析的结果对患者分层。

药动学测定法：经由使用经验证的液相层析串联质谱术(LC-MS/MS)测定法对血浆样品评价GDC-0941和氟维司群。可以使用样品进行GDC-0941相关代谢物的探索性评估，别的药效学开发和/或氟维司群血浆水平的测定。

用于探索性药动学/药效学基因型-表型相关性的DNA：已确立，药物代谢酶和转运蛋白的遗传变体能影响药物的PK，这影响它们的安全性和功效。例如，携带编码尿苷二磷酸葡糖醛酸基转移酶1A1(其推动SN-38(伊立替康的活性代谢物)的代谢和排泄)的基因的缺陷等位基因的患者有较高的风险发生与使用标准剂量的伊立替康有关的不利影响(O’Dwyer and Catalano(2006)J Clin Oncol 24:4534-8)。来自GDC-0941的体外代谢研究的初步结果提示它们由多种I期细胞色素P450酶(包括CYP2C8和CYP3A4/5)部分代谢。尽管体外研究有助于阐明酶在药物代谢中的作用，但是出于许多原因，诸如酶在体外和体内遇到的药物浓度的差异，这些结果并不总是预示体内代谢。为此原因，在本研究中自所有患者收集用于DNA分离的血液样品，用于可能影响GDC-0941的PK的基因或生物标志物的潜在药物遗传学分析。分析样品的决定基于PK数据的审查。也使用来自体外代谢的结果和每种分子可得的临床药理学数据的总体指导基因型分型工作。对可辨别的DNA样品实施分析，因为有必要将患者的PK数据与基因型联系起来。此分析局限于可能牵涉GDC-0941的PK(例如药物代谢，部署或消除)和/或药效学响应的基因的评估。可以在研究完成后长达2年贮存和分析样品，此时破坏为此分析收集的所有DNA样品。

统计方法：在解决主要和次要终点时，不会为多重比较做出调整。在个别的探索性终点中使用多重比较调整以说明全基因组相关性比较。假设总体登记率为每个地点每个月0.14名患者，预期在30和90名患者已经完成8周后，并且在已经发生进行性疾病的90例事件后，在第一名患者登记后分别约9和17个月时发生安全性分组的预先计划的安全性分析。预期在第一名患者登记后约27个月发生最终分析。

功效分析：基于在中心实验室实施的结果，对所有确认为ER阳性和/或PgR阳性的随机化患者实施主要功效分析。如果基于在中心实验室实施的分析，有相当多数目的患者其肿瘤呈ER和PgR阴性，那么可以登记另外的患者以满足支持研究的主要目的需要的登记要求。另外的灵敏度分析可以包括随机化并接受至少一剂任何研究药物的所有患者。主要功效分析由两个诊断亚组中预先规定数目的总体事件(PTEN无效患者中的45例事件和PI3KCA突变体患者中的60例事件)的发生来触发。使用未分层的存活分析来评估PFS和经确认的响应的持续时间。还实施另外的分层灵敏度分析。在主要功效分析中和在灵敏度分析中为所有患者，并且类似地为每个诊断性PI3K途径层(即PIK3CA突变体，PTEN无效，双重野生型，PI3KCA突变体/PTEN无效组合，和“未知”)中的患者产生Kaplan-Meier曲线。总体上和依照PI3K途径改变层提供PFS的未分层危害比评估和90％置信区间(CI)，其比较氟维司群与GDC-0941的组合对氟维司群+安慰剂。另外的分析包括经由使用分层时序检验的PFS的危害比评估。

在最后一次肿瘤评估日(或者如果在基线拜访后没有实施肿瘤评估，那么在周期1的第1天的第一次氟维司群治疗日加1天)检查没有疾病进展或死亡的随机化患者的数据。在已知患者无进展的肿瘤评估的最后日期检查失去随访的患者的数据。经由使用分类分析对每个治疗分支评估最佳(经确认的和未确认的)肿瘤响应的评估以及90％CI。计算氟维司群+GDC-0941对氟维司群+安慰剂分支中肿瘤响应率的差异，并且总体上和依照PI3K层提供90％CI。使用相同的方法分析疾病稳定化和CBR。使用与用于PFS终点的方法相同的方法分析经确认的响应的持续时间和OS。经由使用其接受交换治疗的第一天作为评估PFS的基线及其在交换治疗启动前的最后一次扫描作为基线肿瘤测量，交换患者在其交换后的功效数据依照研究分支分开汇总。

下文呈现了来自实体瘤响应评估标准(RECIST)，第1.1版，(Eisenhauer EA,Therasse P,Bogaerts J,et al.New response evaluation criteria in solid tumors:修改的RECIST准则(第1.1版).Eur J Cancer(2009)45:228-47)的选择部分，为了清楚起见根据需要稍微修改并且添加解释文本。

基线时肿瘤的可测量性：在基线时，如下所述将肿瘤损伤/淋巴结分类为可测量的或不可测量的。

肿瘤损伤：必须在至少一个维度上精确测量肿瘤损伤(要记录测量平面中的最长直径)，最小尺寸如下：

·根据计算机断层摄影术(CT)或磁共振成像(MRI)扫描(CT/MRI扫描切片厚度/间隔不大于5mm)的10mm

·通过临床检查的10mm测径器测量(不能用测径器精确测量的损伤应记录为不可测量的)

·根据胸部X射线的20mm

恶性淋巴结：要认定是病理学扩大和可测量的，在通过CT扫描评估时(推荐CT扫描切片厚度不大于5mm)，淋巴结在短轴上必须≥15mm。

在基线和随访时，仅测量和追踪短轴。对于关于淋巴结测量的信息，还可见下文关于“靶和非靶损伤的基线记录”的注释。

响应标准

靶损伤的评估：用于测定靶损伤的客观肿瘤响应的标准是：

·完全响应(CR)：所有靶损害消失，任何病理性淋巴结(无论是靶还是非靶)必须短轴缩小至<10mm。

·部分响应(PR)：靶损伤的直径的总和缩小至少30％，采用基线直径总和作为参照。

·进行性疾病(PD)：靶损伤的直径的总和增大至少20％，采用研究时(包括基线)最小总和(最低点)作为参照。

在相对增大20％外，总和还必须展现至少5mm的绝对增大。

出现一个或多个新损伤也认为是进展。

尽管为了清楚理解的目的通过例示和实施例相当详细地描述了前述发明，但是描述和实施例不应解释为限制本发明的范围。通过援引明确完整收录本文中引用的所有专利和科学文献的公开内容。

Claims (41)

1.一种治疗方法，其包括对具有PR+或腔性A型乳腺癌的患者施用治疗有效量的GDC-0941和内分泌治疗剂，其中GDC-0941具有结构：

包括其立体异构体，几何异构体，互变异构体，和药学可接受盐。

2.权利要求1的方法，其中GDC-0941是盐双甲磺酸盐。

3.权利要求1或权利要求2的方法，其中先前已经用化学疗法，放射疗法，和/或手术切除治疗所述患者。

4.权利要求1或2的方法，其中先前已经用内分泌治疗剂治疗所述患者。

5.权利要求1或2的方法，其中先前已经用芳香酶抑制剂治疗所述患者。

6.权利要求5的方法，其中所述芳香酶抑制剂选自来曲唑，阿那曲唑和依西美坦。

7.权利要求4的方法，其中所述患者已经复发。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述PR+或腔性A型乳腺癌是转移性的。

9.权利要求3的方法，其中先前已经用一种或多种选自下组的治疗剂治疗所述患者：5-FU，多西他赛，艾日布林，吉西他滨，GDC-0973，GDC-0623，帕利他赛，他莫昔芬，氟维司群，地塞米松，来曲唑，依维莫司，依西美坦，艾日布林，和来曲唑。

10.权利要求1-9中任一项的方法，其中以三周或四周间隔每天对所述患者施用GDC-0941。

11.权利要求10的方法，其中所述三周或四周间隔继之以不对所述患者施用GDC-0941的一周假期间隔。

12.权利要求1-9中任一项的方法，其中每天施用GDC-0941达5天，继之以两天假期。

13.权利要求1-12中任一项的方法，其中口服施用GDC-0941。

14.权利要求1-13中任一项的方法，其中GDC-0941的治疗有效量介于每天200和400mg之间。

15.权利要求1-14中任一项的方法，其中所述内分泌治疗剂选自：氟维司群，来曲唑，他莫昔芬，和依西美坦。

16.权利要求15的方法，其中来曲唑的治疗有效量是每天1至10mg。

17.权利要求15的方法，其中对所述患者施用所述内分泌治疗剂，并且随后施用GDC-0941。

18.权利要求15的方法，其中GDC-0941和所述内分泌治疗剂的施用导致协同效应。

19.权利要求1-18中任一项的方法，其中所述PR+，腔性A型乳腺癌表达选自下组的PIK3CA突变体：E542K，E545K，Q546R，H1047L和H1047R。

20.权利要求1-18中任一项的方法，其中所述PR+，腔性A型乳腺癌表达PTEN突变体。

21.权利要求1-20中任一项的方法，其中所述患者呈HER2阴性，且ER(雌激素受体)阳性。

22.一种用于治疗PR+，腔性A型乳腺癌的制品，其包含：

a)GDC-0941；和

b)使用说明书。

23.一种用于确定要组合使用以治疗PR+，腔性A型乳腺癌的化合物的方法，其包括：

a)用GDC-0941和选自下组的治疗剂的治疗组合处理具有PIK3CA突变的体外肿瘤细胞系：5-FU，多西他赛，艾日布林，吉西他滨，GDC-0973，GDC-0623，帕利他赛，他莫昔芬，氟维司群，地塞米松，和来曲唑，并且

b)测量协同或非协同效应；

从而确定用于治疗癌症的协同治疗组合。

24.权利要求1-21中任一项的方法，其中已经对在对所述患者施用所述组合前自所述患者获得的生物学样品测试PIK3CA或PTEN突变状态，并且其中PIK3CA或PTEN突变状态指示所述患者对GDC-0941的治疗响应性。

25.权利要求23的方法，其中进一步对所述患者施用治疗有效量的治疗剂。

26.权利要求1-21中任一项的方法，其中通过测量施用GDC-0941后的功能性PI3K蛋白质水平来测试自所述患者获得的生物学样品，其中功能性PI3K蛋白质水平的变化指示所述患者会对GDC-0941有抗性或有响应。

27.一种选择具有PR+，腔性A型乳腺癌的患者以用GDC-0941治疗的方法，其包括：

(a)检测自所述患者获得的生物学样品中的PIK3CA或PTEN突变；并且

(b)比较在对所述患者施用GDC-0941或GDC-0941和治疗剂的组合前自所述患者获得的生物学样品中的PIK3CA或PTEN突变状态，

其中在施用GDC-0941或GDC-0941和治疗剂的组合后获得的样品中的PIK3CA或PTEN突变状态的变化或调控鉴定会响应用GDC-0941治疗的患者。

28.一种监测具有PR+，腔性A型乳腺癌的患者中的治疗功效的方法，其包括：

(a)用GDC-0941治疗所述患者；

(b)测量在施用GDC-0941后自所述患者获得的生物学样品中的功能性PI3K蛋白质水平；并且

(c)改变对所述患者施用的GDC-0941的剂量，GDC-0941的给药频率，或疗法过程。

29.一种优化GDC-0941或GDC-0941和治疗剂的组合在治疗PR+，腔性A型乳腺癌中的治疗功效的方法，所述方法包括：

(a)检测在施用至少一剂GDC-0941或GDC-0941和选自下组的治疗剂的组合后自患者获得的生物学样品中的PIK3CA或PTEN突变：5-FU，多西他赛，艾日布林，吉西他滨，GDC-0973，GDC-0623，帕利他赛，他莫昔芬，氟维司群，地塞米松，和来曲唑；并且

(b)比较在对所述患者施用GDC-0941或GDC-0941和治疗剂的组合前自所述患者获得的生物学样品中的PIK3CA或PTEN突变状态，

其中在施用GDC-0941或GDC-0941和治疗剂的组合后获得的样品中的PIK3CA或PTEN的变化或调控鉴定具有增加的受益于用GDC-0941或GDC-0941和治疗剂的组合治疗的可能性的患者。

30.一种鉴定用于监测PR+，腔性A型乳腺癌治疗中对GDC-0941或GDC-0941和治疗剂的组合的响应性的生物标志物的方法，所述方法包括：

(a)检测自患者获得的生物学样品中的选自PIK3CA或PTEN突变的生物标志物的表达，调控，或活性，所述患者已经接受至少一剂GDC-0941或GDC-0941和选自下组的治疗剂的组合：5-FU，多西他赛，艾日布林，吉西他滨，GDC-0973，GDC-0623，帕利他赛，他莫昔芬，氟维司群，地塞米松，和来曲唑；并且

(b)与参照样品中的所述生物标志物的状态比较所述生物标志物的表达，调控，或活性，其中所述参照样品是在对所述患者施用GDC-0941或GDC-0941和治疗剂的组合前自所述患者获得的生物学样品；

其中将与所述参照样品相比低或高至少2倍的所述生物标志物变化的调控鉴定为可用于监测对GDC-0941或GDC-0941和治疗剂的组合的响应性的生物标志物。

31.GDC-0941或GDC-0941和治疗剂的组合在治疗患者中的PR+，腔性A型乳腺癌中的用途，其包括对所述患者施用治疗有效量的GDC-0941或GDC-0941和选自下组的治疗剂的组合：5-FU，多西他赛，艾日布林，吉西他滨，GDC-0973，GDC-0623，帕利他赛，他莫昔芬，氟维司群，地塞米松，和来曲唑，

其中已经对在对所述患者施用GDC-0941或GDC-0941和治疗剂的组合前自所述患者获得的生物学样品测试了PIK3CA或PTEN突变状态，并且其中PIK3CA或PTEN突变状态指示所述患者对GDC-0941或GDC-0941和治疗剂的组合的治疗响应性。

32.GDC-0941和内分泌治疗剂，其用于在治疗PR+或腔性A型乳腺癌，其中GDC-0941具有结构：

包括其立体异构体，几何异构体，互变异构体，和药学可接受盐。

33.依照权利要求32使用的化合物，其中GDC-0941是盐双甲磺酸盐。

34.依照权利要求32或33使用的化合物，其中先前已经用化学疗法，放射疗法，和/或手术切除治疗所述患者。

35.依照权利要求32至34中任一项使用的化合物，其中先前已经用内分泌治疗剂治疗所述患者。

36.依照权利要求32至35中任一项使用的化合物，其中先前已经用芳香酶抑制剂治疗所述患者。

37.依照权利要求36使用的化合物，其中所述芳香酶抑制剂选自来曲唑，阿那曲唑和依西美坦。

38.依照权利要求32至37中任一项使用的化合物，其中所述内分泌治疗剂选自：氟维司群，来曲唑，他莫昔芬，和依西美坦。

39.GDC-0941和内分泌治疗剂在制备用于治疗PR+或腔性A型乳腺癌的药物中的用途，其中GDC-0941具有结构：

包括其立体异构体，几何异构体，互变异构体，和药学可接受盐。

40.GDC-0941和内分泌治疗剂用于治疗PR+或腔性A型乳腺癌的用途，其中GDC-0941具有结构：

包括其立体异构体，几何异构体，互变异构体，和药学可接受盐

41.如说明书描述的发明。