CN106399200B - 一株产碱菌及其在高盐高聚废水中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株产碱菌及其在高盐高聚废水中的应用。本发明的产碱菌(Alcaligenes sp.)Z‑1保藏编号为CGMCC No.12585。本发明在高盐高聚废水的环境中能将聚丙烯酰胺、聚磺类物质等大分子聚合物有效分解为小分子容易降解的物质,并通过分解有机物获得能量,维持自身的生长繁殖。经过本细菌处理含有聚丙烯酰胺、聚磺类等有机物的高盐高聚废水中,高聚物被分解率能达到95%以上,可以有效降低废水的COD,COD去除率能达到50%以上。
Description
技术领域
本发明属于微生物和废水处理领域,涉及了一种产碱菌Z-1及其在高盐高聚废水中的应用。
背景技术
我国石油和化工行业每年产生大量的高盐难降解有机废水,这些有机废水中往往含有大量人工合成的大分子聚合物添加剂,这些聚合物分子量大结构复杂,难以降解,在环境中存在时间久,对环境和人的危害较大。此类废水直接排放会对地表水、地下水、土壤、植物和生态环境造成严重污染,对企业的生存和发展造成了许多负面影响,也成为社会、公众和政府部门高度关注的问题。
张淑侠,何焕杰等在《复合菌剂处理深井聚磺钻井液废水技术研究》中发现了微生物复合菌剂HBS5,并用来处理难降解聚磺类钻井液废水的最佳条件为:温度在20℃以上,菌剂加量0.5g/L(SV30为25%~35%),曝气量0.25L/m in,初始钻井废水COD质量浓度≤1100mg/L。
尽管国内外对含聚磺类物质、聚丙烯酰胺等大分子有机物的废水处理报道较多,但是对于电导为15000~38000us/cm,COD为3500~7000mg/L的难降解废水用微生物处理效果一直不是很理想,所以找到一种或者多种能在电导为15000~38000us/cm的高盐废水中存活,并能高效降解磺类物质、聚丙烯酰胺的菌种。
发明内容
发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足,提供一种能够在高盐高聚环境中能有效分解聚丙烯酰胺、聚磺类物质等大分子聚合物的菌株。
本发明通过以下技术方案予以实现:
本发明提供了一种菌株Z-1,经过分子生物学鉴定为产碱菌属(Alcaligenessp.),该菌株与2016-6-2日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC),地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,保藏登记号CGMCC NO.12585。
本发明还提供了所述的产碱菌(Alcaligenes sp.)Z-1在高盐高聚废水处理中的应用,其中所述的高盐废水中溶氧量为2.0~7.0mg/L。
在本发明所述的应用中,所述的高盐高聚废水中的无机盐为NaCl、CaCl2、MgCl2;电导为15000~38000us/cm;所述的高盐废水COD为5000~7000mg/L,聚合物提供COD占总COD比例为1%~20%。
所述的高盐高COD废水中投加生长促进剂,所述生产促进剂选自单糖、二糖、多糖其中一种或多种。优选所述的生长促进剂的投加量提供的COD为原高盐高COD废水COD的5‰-5%。
所述的产碱菌(Alcaligenes sp.)Z-1加入高盐高聚废水中,所述复合生物菌剂量/有机废水量优选为0.1wt‰~2wt‰。经过一定时间曝气,能降解废水中的有机物,降低废水的COD。
本发明提供的产碱菌Z-1与现有技术相比,该均能将大分子有机物有效分解分解为小分子容易降解的物质,并通过分解有机物获得能量,利用废水中单糖、小分子有机酸或者醇类等多种小分子有机物,维持自身的生长繁殖。经过本发明产碱菌Z-1处理含有聚丙烯酰胺、聚磺类等有机物的高盐废水中,高聚物被分解率能达到95%以上,可以有效降低废水的COD,COD去除率能达到50%以上。采用本发明产碱菌Z-1处理高盐高聚废水,能极大程度降低废水处理成本,减少此类废水处理的能耗和物耗;并且随着菌种产碱菌Z-1加入量的增加,降解效率有大幅度的提高,从而提高生化效率,缩小了生化占地面积。此外,当生化系统受到冲击以后,加入菌种Z-1,可以缩短生化系统恢复时间。
具体实施方式
下面结合实例对本发明技术方案做进一步详细描述。以下实施例仅用于说明本发明,并不限制本发明的范围。
实施例1微生物菌剂的制备方法和在生产聚丙烯酰胺厂废水中的应用
本发明的菌株Z-1是从钻井废水储池底泥通过驯化培养、筛选和分离而获得。
1.Z-1生物学特性
Z-1为单球菌,革兰氏阴性菌。在固体培养基上,菌落呈圆形,白色,光滑,湿润有光泽,边缘整齐,不粘。
2.对菌株Z-1 16S rDNA鉴定,具体步骤如下:
正向引物F1:5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’,反向引物R1:5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’,进行DNA扩增(PCR)。PCR反应条件:95℃预变性5min,95℃变性30s,58℃退火30s,72℃延伸90s,35个循环,72℃最终延伸10min,4℃保存。PCR产物用0.8%的琼脂糖凝胶分离,纯化与回收后测序。所测序列使用NCBIBlast比对分析,确定菌株Z-1从属于产碱菌(Alcaligenes sp.)。
产碱菌(Alcaligenes sp.)Z-1的16S rDNA序列详见序列表,该菌株已于2016年6月2日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保存登记号CGMCC NO.12585。
3.本发明的产碱菌Z-1菌株的培养方法,包括如下步骤:
1)种子液的制备
A.固体培养基:牛肉膏:10g,蛋白胨:10g,NaCl:5g,葡萄糖:10g,蒸馏水:1000ml,琼脂粉:18g,pH:7.0-7.2;
B.液体培养基:牛肉膏:10g,蛋白胨:10g,NaCl:5g,葡萄糖:10g,蒸馏水:1000ml,pH:7.0-7.2;
C.将上述培养基高温蒸气(121℃,30min)灭菌后,在超净台中倒于灭菌的平板上,培养基凝固后待用;
D.将菌Z-1通过划线的方法接种于上述平板上,将平板倒置于30℃培养箱培养24~36h待菌落长出;
E.用接种环取平板上的生长良好的Z-1菌落刮下,接种于液体培养基中,三角瓶装液量为60%,在温度30℃、120rpm、培养时间24~36h至对数生长期,获得种子液。
2)发酵罐发酵
A.发酵液体培养基配方为:葡萄糖15g/L,KH2PO4 5g/L,(NH4)2HPO4 6g/L,柠檬酸0.9g/L,酵母膏19.5g/L,微量元素溶液5mL,消泡剂0.1%,蒸馏水1000mL,调节pH至7.0。微量元素溶液组成为:FeSO4·7H2O 10g/L,ZnSO4·7H2O 5.25g/L,CuSO4·5H2O 3g/L,H3BO30.3g/L,CoCl2.6H2O 0.04g,CaCl2 2.0g/L,Na 2MoO4·2H2O 0.15g/L,蒸馏水1000mL,pH7.0。
B.将上述培养获得的Z-1种子液,按照发酵液总量2%~5%的接种量移至发酵罐,进行发酵培养,条件为:罐温30℃,罐压0.03MPa,通气量1:1V/V/min,搅拌速度150rpm、发酵时间12~18h,使发酵液中菌浓度为3×109CFU/mL;
3)菌剂的保存
将上述获得的发酵菌液静置沉淀,浓缩3~5倍,制成液态菌剂,至于4℃环境中保存。
4)菌剂的使用
高效复合生物菌剂使用期间,加入自来水中曝气活化0.5-1h即可,菌剂投加量期间,投加量为:菌剂量/水量=0.1‰~2‰,可以一次投加或分多次投加。
4.Z-1菌处理某生产聚丙烯酰胺厂废水
某生产聚丙烯酰胺厂废水,废水电导为45000~60000us/cm,无机盐以NaCl为主,COD为12000~18000mg/L,其中聚丙烯酰胺提供COD含量占总量15%~18%。废水稀释2~3倍,用高效菌种Z-1进行处理。进水电导为16000~25000us/cm,COD约为5500~6000mg/L,聚丙烯酰胺提供COD含量占总量5%~6%,加入Z-1菌投加量为1‰,经过好氧24~36h好氧,出水COD达到1500mg/L以下,聚丙烯酰胺提供COD含量占出水总COD0.3%~0.5%。
实施例2:Z-1菌处理处理某海上平台钻井废水
与实施例1不同的是某海上平台钻井废水中COD为5000~7000mg/L,其中聚丙稀酰胺提供COD约占总COD的5%,聚磺类大分子物质提供COD约占总COD量为6%-10%,废水电导为27000~35000us/cm。利用Z-1菌处理此废水,菌种投加量为2‰,其中好氧48h处理后,出水COD达到1500mg/L以下;在投加菌种的同时投加生长促进剂,生长促进剂提供COD约为200mg/L,出水COD达到500mg/L以下,聚丙稀酰胺、聚磺类的含量均小于0.2%。
实例3:Z-1菌处理处理某天然气钻采废水
与实施例1不同的是处理废水为山西某地天然气钻采废水,出水COD为5500mg/L,电导为25000~28000us/cm,其中聚磺类等大分子约占8%,投加0.5‰Z-1菌处理,48h后出水COD达到500mg/L,聚磺类等大分子比例在0.3%以下。
发明原理
产碱菌Z-1是从钻井废水储池底泥中分离筛选的一种能降解聚丙烯酰胺、聚磺类等大分子有机物的细菌。Z-1在电导为15000~38000us/cm的高盐废水生存环境,首先产生对聚合物具有一定降解能力的生物水解酶,首先进攻聚合物的侧链,对其进行脱链分解,利用分解过程产生的碳源和氮源、硫源维持提供自身生长所需。待侧链分解后,主链裸露再外,Z-1会分泌单加氧酶的作用下,使聚合物主链逐渐被断开,断裂为分子量较小的物质,从而使微生物利用聚合大分子作为碳源成为可能。经过一系列多重微生物酶参与的氧化反应长链的聚丙烯酰胺就被断裂成短链,比较短的分子链进一步被微生物利用从而产生了乙酸,从而聚丙烯酰胺、聚磺类等大分子聚合物被微生物所利用,在微生物利用有机物维持自身生长繁殖过程中,达到废水COD被降解的目的。
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<110> 中海油天津化工研究设计院有限公司
中海油能源发展股份有限公司
<120> 一株产碱菌及其在高盐高COD废水中的应用
<130> THY-16-63
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1387
<212> DNA
<213> Alcaligenes sp.
<400> 1
gagagagctt gctctcttgg tggcgagtgg cggacgggtg agtaatatat cggaacgtgc 60
ccagtagcgg gggataacta ctcgaaagag tggctaatac cgcatacgcc ctacggggga 120
aaggggggga ttcttcggaa cctctcacta ttggagcggc cgatatcgga ttagctagtt 180
ggtggggtaa aggctcacca aggcaacgat ccgtagctgg tttgagagga cgaccagcca 240
cactgggact gagacacggc ccagactcct acgggaggca gcagtgggga attttggaca 300
atgggggaaa ccctgatcca gccatcccgc gtgtatgatg aaggccttcg ggttgtaaag 360
tacttttggc agagaagaaa aggtatctcc taatacgaga tactgctgac ggtatctgca 420
gaataagcac cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtagggt gcaagcgtta 480
atcggaatta ctgggcgtaa agcgtgtgta ggcggttcgg aaagaaagat gtgaaatccc 540
agggctcaac cttggaactg catttttaac tgccgagcta gagtatgtca gaggggggta 600
gaattccacg tgtagcagtg aaatgcgtag atatgtggag gaataccgat ggcgaaggca 660
gccccctggg ataatactga cgctcagaca cgaaagcgtg gggagcaaac aggattagat 720
accctggtag tccacgccct aaacgatgtc aactagctgt tggggccgtt aggccttagt 780
agcgcagcta acgcgtgaag ttgaccgcct ggggagtacg gtcgcaagat taaaactcaa 840
aggaattgac ggggacccgc acaagcggtg gatgatgtgg attaattcga tgcaacgcga 900
aaaaccttac ctacccttga catgtctgga atcccgaaga gatttgggag tgctcgcaag 960
agaaccggaa cacaggtgct gcatggctgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta 1020
agtcccgcaa cgagcgcaac ccttgtcatt agttgctacg caagagcact ctaatgagac 1080
tgccggtgac aaaccggagg aaggtgggga tgacgtcaag tcctcatggc ccttatgggt 1140
agggcttcac acgtcataca atggtcggga cagagggtcg ccaacccgcg agggggagcc 1200
aatctcagaa acccgatcgt agtccggatc gcagtctgca actcgactgc gtgaagtcgg 1260
aatcgctagt aatcgcggat cagaatgtcg cggtgaatac gttcccgggt cttgtacaca 1320
ccgcccgtca caccatggga gtgggttcac cagaagtagg tagcctaacc gaaggaggcg 1380
ctaccac 1387
Claims (5)
1.一种产碱菌(Alcaligenes sp.) Z-1,其特征在于,所述的产碱菌Z-1的保藏编号为CGMCC No.12585。
2.一种权利要求1所述的产碱菌(Alcaligenes sp.) Z-1在高盐高聚废水处理中的应用,其特征在于,所述的高盐高聚废水中溶氧量为2.0~7.0 mg/L;所述的高盐高聚废水中的无机盐为NaCl、CaCl2、MgCl2;电导为15000~38000 us/cm,COD为5000~7000 mg/L,聚合物为聚丙烯酰胺、聚磺类聚合物,且聚合物提供COD占总COD比例为1%~20%。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述的高盐高聚废水中投加生长促进剂,所述生长促进剂选自单糖、二糖、多糖其中一种或多种。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述的生长促进剂的投加量提供的COD为原高盐高聚废水COD的5‰-5%。
5.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述的产碱菌Z-1的投加量为高盐高聚废水的0.1wt‰至2wt‰。
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