CN106279344A - 一种从防风中分离的天然化合物及其制备方法、医药应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从防风中分离的天然化合物，及其医药新用途。本发明提供的从中草药防风中首次分离的天然化合物，该天然化合物(Ⅰ)结构新颖，化合物(Ⅰ)，该天然产物单独作用时，对脱发具有治疗作用；该天然产物还可以和其他药物联合作用时，可以开发成治疗脱发的药物。
Description
技术领域
本发明属于生物医药领域，涉及一种从防风中分离的天然化合物，及其医药新用途。
背景技术
中草药防风为多年生草本，高30-2000px。根粗壮，长圆柱形，有分枝，淡黄桂冠色，根斜上升，与主茎近等长，有细棱。花期8-9月，果期9-10月。其喜凉爽气候，耐寒，耐干旱。宜选阳光充足，土层深厚，疏松肥沃、排水良好的砂质壤土栽培，不宜在酸性大，粘性重的土壤中种植。防风的根可生用。味辛、甘，性微温。有祛风解表，胜湿止痛，止痉的功效。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从中草药防风中首次分离的天然化合物，以及该天然化合物的制备方法，同时还提供该天然化合物的应用，该天然化合物结构新颖可以单独或者协同其他药物用于治疗脱发。
本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
一种从防风中分离的天然化合物，所述天然化合物是具有下述结构式的化合物(Ⅰ)，
上述天然化合物的制备方法，包含以下操作步骤：(a)将防风粉碎，用75～85％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中正丁醇取物用大孔树脂除杂，先用25％乙醇洗脱8个柱体积，再用70％乙醇洗脱12个柱体积，收集70％洗脱液，减压浓缩得70％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中70％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为85:1、45:1、25:1和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为72％的甲醇水溶液等度洗脱，收集10～16个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(Ⅰ)。
进一步的，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
上述天然化合物在制备治疗脱发的药物中的应用。
本发明的优点：
本发明提供的一种结构新颖的天然产物，该天然产物单独作用时，对脱发具有治疗作用；该天然产物还可以和其他药物联合作用时，可以开发成治疗脱发的药物。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
实施例1：化合物(Ⅰ)分离制备及结构确证
分离方法：(a)将防风(2kg)粉碎，用80％乙醇热回流提取(15L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3L×3次)、乙酸乙酯(3L×3次)和水饱和的正丁醇(3L×3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用25％乙醇洗脱8个柱体积，再用70％乙醇洗脱12个柱体积，收集70％洗脱液，减压浓缩得70％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中70％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为85:1(10个柱体积)、45:1(8个柱体积)、25:1(10个柱体积)和15:1(8个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1(10个柱体积)、15:1(8个柱体积)和1:1(6个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为72％的甲醇水溶液等度洗脱，收集10～16个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(Ⅰ)(HPLC归一化纯度大于98％)。
结构确证：HR-ESI-MS显示[M+H]+为m/z 469.3238，结合核磁特征可得分子式为C30H44O4，不饱和度为9。核磁共振氢谱数据δH(ppm，CDCl3，600MHz)：H-1(1.49，m)，H-1(2.87，ddd，J＝13.3，7.0，4.2Hz)，H-2(2.41，ddd，J＝15.4，6.8，4.2Hz)，H-2(2.65，ddd，J＝15.4，11.2，7.0Hz)，H-5(1.37，d，J＝11.2Hz)，H-6(1.68，m)，H-6(1.93，m)，H-7(1.73，m)，H-7(1.87，m)，H-9(1.60，d，J＝9.4Hz)，H-11(4.17，d，J＝9.1Hz)，H-15(5.43，d，J＝10.3Hz)，H-16(5.52，d，J＝10.3Hz)，H-18(2.46，d，J＝8.4Hz)，H-19(1.41，m)，H-20(1.10，m)，H-21(1.28，m)，H-21(1.48，m)，H-22(1.36，m)，H-22(1.51，m)，H-23(1.32，s)，H-24(9.82，s)，H-25(1.06，s)，H-26(1.17，s)，H-27(1.24，s)，H-28(0.87，s)，H-29(0.90，d，J＝6.3Hz)，H-30(0.93，d，J＝6.1Hz)，OH-11(3.13，s)，OH-12(4.73，brs)；核磁共振碳谱数据δC(ppm，CDCl3，125MHz)：39.2(CH2，1-C)，22.3(CH2，2-C)，207.6(C，3-C)，34.5(C，4-C)，63.2(CH，5-C)，20.4(CH2，6-C)，40.9(CH2，7-C)，57.8(C，8-C)，51.6(CH，9-C)，38.2(C，10-C)，71.9(CH，11-C)，146.7(C，12-C)，119.2(C，13-C)，36.3(C，14-C)，128.9(CH，15-C)，139.5(CH，16-C)，41.4(C，17-C)，47.3(CH，18-C)，40.1(CH，19-C)，40.7(CH，20-C)，30.7(CH2，21-C)，39.2(CH2，22-C)，22.3(CH3，23-C)，201.1(CH，24-C)，15.7(CH3，25-C)，19.4(CH3，26-C)，20.9(CH3，27-C)，19.1(CH3，28-C)，17.2(CH3，29-C)，21.3(CH3，30-C)。红外波谱表明该化合物含有羟基(3478cm-1)，羰基(1760cm-1)，双键(1663cm-1)和醛基(1641cm-1)。13C-NMR、DEPT和HSQC谱中显示有30个碳信号，包括七个甲基，六个亚甲基，九个次甲基(一个连氧碳和两个烯烃碳，一个醛基)，以及八个季碳(一个酮基，一个含氧烯属季碳，一个烯属季碳)，以上功能结构再结合不饱和数表明该化合物为五环三萜结构。1H-NMR谱结合HSQC谱显示的五个叔甲基质子信号δH 1.32(3H，s)，1.06(3H，s)，1.17(3H，s)，1.24(3H，s)和0.87(3H，s)，两个仲甲基质子信号δH 0.90(3H，d，J＝6.3Hz)，0.93(3H，d，J＝6.1Hz)以及1H-NMR数据表明该化合物为乌苏烷型三萜类化合物。HMBC谱中H-5和H3-23与C-24的相关性表明C-4位连有一个醛基，NOESY谱中H-24与H3-25的相关信号暗示醛基处在β位。从红外谱中可知结构中含有羟基，而从1H-NMR数据可知含有两个羟基。HMBC谱中H-9和H-18与C-12，H-18和H3-27与C-13，OH-12与C-12相关信号以及它们的碳化学位移表明该化合物存在烯醇式结构，羟基连接在C-12位与C-12和C-13形成的双键构成烯醇式结构，此外根据HMBC谱中OH-11与C-11的相关信号以及化学位移确认另一个-OH连在C-11位。另C-15与C-16也形成双键结构，C-3位形成酮基。HMBC谱中H3-23和H-24与C-3的相关性以及它们的碳化学位移进一步确证C-3位形成酮基。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和NOESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。
该化合物化学式及碳原子编号如下：
实施例2：药理作用
脱发是一种最常见皮肤疾病。长期以来，人们一直致力于寻找和研发治疗脱发的药物，如糖皮质激素、米诺地尔等。然而到目前为止，尚没有一种药物能完全治愈脱发，且存在较大的不良反应。因此，开发疗效确切、无不良反应的防治脱发的药物具有重要的社会意义和经济意义。本实施例采用环磷酰胺(Cyclophosphamide，CTX)建立小鼠脱毛模型，观察药物对改善脱毛小鼠毛发生长的作用。
1、材料与方法
1.1动物
SPF级，雄性C57BL/6小鼠，体质量18～20g，上海斯莱克实验动物有限公司。饲养环境：室温控制在24～26℃，光线每12h明暗交替，自由进食，隔日更换垫料。
1.2试剂与样品
头孢呋辛酯购自中国药品生物制品检定所。化合物(Ⅰ)自制，制备方法见实施例1。环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司)。CBA检测试剂盒(美国，BD公司)、CD4检测试剂盒(上海颖心实验室设备有限公司)、CD8检测试剂盒(上海颖心实验室设备有限公司)。
1.3仪器
JEM-1010型电镜(日本，日本电子公司)、C6型流式细胞仪(美国，BD公司)、MK3型酶标仪(美国，Thermo公司)。
1.4小鼠分组及模型制备
C57BL/6小鼠用麻醉机麻醉。麻醉后，将松香和石蜡按1∶1的比例混合加热融化，并均匀涂抹于项背部，凝固变硬后揭去，诱导生长期毛发，每只小鼠脱毛面积约为2.0cm×2.0cm。注意不要烫伤小鼠皮肤。脱毛后9天(小鼠背部皮肤诱导生长期毛囊产生)，根据随机数字表，将小鼠分为5组，每组20只，分别是空白对照组、模型对照组、头孢呋辛酯组(280mg·kg-1)、化合物(Ⅰ)组(280mg·kg-1)、头孢呋辛酯与化合物(Ⅰ)组合物组【140mg·kg-1头孢呋辛酯+140mg·kg-1化合物(Ⅰ)】。所有小鼠脱毛区皮下注射CTX150mg/kg后，模型组任其自然生长，空白对照组给予生理盐水(100mg/kg)灌胃治疗，其他组药物灌胃治疗，持续8周。
1.5组织取材
分别在给药后1、2、4、8周，每组随机选取小鼠各5只，行眼眶采血，每只1～2mL。用于ELISA检测：每组取2个血样，加入EDTA抗凝，3000r/min离心30min取上清，于－20℃保存备用。用于流式细胞术检测：每组取3个血样，分离血清，于-70℃保存备用。所有动物取血后立即处死，取其脱毛区域皮肤组织。经10％福尔马林固定，常规石蜡包埋，石蜡切片，切片厚4～5μm，-80℃下保存备用。
1.6ELISA检测外周血CD4+、CD8+表达水平
样本室温下平衡20min。设置标准品孔、样本孔和空白孔。空白孔什么都不加，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。待测样本先加样本稀释液40μL，再加待测样本10μL，随后标准品孔和样本孔(空白孔不加)加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃恒温箱孵育60min。弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，重复5次。所有孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。加终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔OD值。统计CD4和CD8的OD值，将CD4/CD8均值作为结果进行统计分析。
1.7统计学方法
结果以均数±标准差表示。采用SPSS17.0统计软件分析数据，组间比较应用单因素方差分析。
2、实验结果
2.1体质量变化和毛发生长情况
小鼠经CTX诱导脱毛至实验结束，各组小鼠体质量无明显差异(P＞0.05)。脱毛小鼠经头孢呋辛酯、化合物(Ⅰ)、头孢呋辛酯与化合物(Ⅰ)组合物给药后1～2周，各组小鼠脱毛区局部皮肤由粉色逐渐转变成灰黑色，小鼠脱毛区皮肤灰黑色区域明显比模型组和生理盐水组要大；给药至4～8周，各组小鼠脱毛区呈黑色，且有毛发逐渐长出、伸长。给药组毛发相对于模型组和生理盐水组，毛发更为致密。
2.2对脱毛小鼠外周血CD4+/CD8+比值表达水平的影响
头孢呋辛酯组、化合物(Ⅰ)组、头孢呋辛酯组与化合物(Ⅰ)组合物组外周血CD4+/CD8+比值随着时间的延长，呈下降趋势。1、2、3、4周，与模型对照组比，头孢呋辛酯组与化合物(Ⅰ)组合物组外周血CD4+/CD8+比值显著下降(P＜0.01)；与模型对照组比，头孢呋辛酯组、化合物(Ⅰ)组外周血CD4+/CD8+比值下降(P＜0.05)。试验结果见表1。
表1对脱毛小鼠外周血CD4+/CD8+比值表达水平的影响
| 组别 | 1周 | 2周 | 3周 | 4周 |
| 模型对照组 | 5.48±0.06 | 5.37±0.05 | 4.99±0.09 | 4.83±0.11 |
| 头孢呋辛酯组 | 5.15±0.05 | 4.76±0.06 | 4.40±0.17 | 4.12±0.08 |
| 化合物(Ⅰ)组 | 4.87±0.02 | 4.34±0.13 | 4.16±0.06 | 3.65±0.27 |
| 头孢呋辛酯与化合物(Ⅰ)组合物组 | 3.94±0.04 | 3.67±0.02 | 3.29±0.25 | 2.94±0.08 |
脱毛模型最常用实验动物为C57BL/6小鼠，由于其为有色种属，皮肤颜色随毛囊的发育而表现不同的颜色，是研究毛囊发育和再生一种很好的实验动物。
目前关于脱发的病理生理机制尚未明确，可能的原因主要与局部感染、神经毒物、精神抑郁、内分泌因素等因素相关。近年来随着遗传、基因、分子水平的不断发展，国内外诸多学者认为脱发主要是一种由T细胞免疫介导的自身免疫性炎症疾病，由于毛囊异常暴露于潜在免疫活性的免疫系统，再通过毛囊的抗原物质激活强大的免疫系统，诱发释放大量炎症，继而引起脱发。CD4+和CD8+T细胞在脱发患者毛囊内及周围的浸润是引起毛发脱落的关键，CD8+T细胞一直被认为对毛囊发挥直接的细胞毒作用，而CD4+T细胞起辅助细胞作用，在脱发的发病过程中两者是共同发挥作用的。
头孢呋辛酯、化合物(Ⅰ)、头孢呋辛酯组与化合物(Ⅰ)组合物维持治疗对脱毛小鼠具有明显疗效，显著改善了小鼠脱毛区的毛发生长情况，通过下调外周血CD4+/CD8+比值来发挥作用，为临床脱发的药物治疗提供了新的治疗方案。化合物(Ⅰ)单独的作用时，具有对对毛发生长的改善作用明显的作用，化合物(Ⅰ)配以头孢呋辛酯联合作用时，对毛发生长的改善作用效果显著，并且优于头孢呋辛酯或化合物(Ⅰ)单独的作用效果，可以开发成防治脱发的药物。
上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
Claims (4)
1.一种从防风中分离的天然化合物，其特征在于，所述天然化合物是具有下述结构式的化合物(Ⅰ)，
2.权利要求1所述的天然化合物的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：(a)将防风粉碎，用75～85％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中正丁醇取物用大孔树脂除杂，先用25％乙醇洗脱8个柱体积，再用70％乙醇洗脱12个柱体积，收集70％洗脱液，减压浓缩得70％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中70％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为85:1、45:1、25:1和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为72％的甲醇水溶液等度洗脱，收集10～16个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(Ⅰ)。
3.根据权利要求2所述的化合物(Ⅰ)的制备方法，其特征在于：所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
4.权利要求1所述的天然化合物在制备治疗脱发的药物中的应用。
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Citations (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105324389A (zh) * | 2013-04-24 | 2016-02-10 | 艾伯维公司 | 甲基巴多索隆的2,2-二氟丙酰胺衍生物、其多晶型形式及使用方法 |
| CN105693493A (zh) * | 2016-04-23 | 2016-06-22 | 贺玉皓 | 一种丙酸氯倍他索的药物组合物及其医药用途 |
| CN105713065A (zh) * | 2016-04-23 | 2016-06-29 | 何淑琼 | 一种硫唑嘌呤的药物组合物及其医药用途 |
| CN105777680A (zh) * | 2016-04-28 | 2016-07-20 | 薛丽云 | 一种盐酸多柔比星的药物组合物及其医药用途 |
| CN105777683A (zh) * | 2016-04-08 | 2016-07-20 | 庄立 | 双环醇的药物组合物及其医药用途 |
| CN105777850A (zh) * | 2016-04-28 | 2016-07-20 | 周俭 | 一种泛昔洛韦的药物组合物及其医药用途 |
| CN105777856A (zh) * | 2016-04-23 | 2016-07-20 | 陈昊 | 一种乙酰半胱氨酸的药物组合物及其医药用途 |
| CN105801525A (zh) * | 2016-05-31 | 2016-07-27 | 蒋灵锟 | 一种腺苷钴胺的药物组合物及其医药用途 |
| CN105837533A (zh) * | 2016-04-23 | 2016-08-10 | 高满珍 | 一种醋酸丙氨瑞林的药物组合物及其医药用途 |
| CN105859702A (zh) * | 2016-05-20 | 2016-08-17 | 江苏神龙药业有限公司 | 一种塞来昔布的药物组合物及其医药用途 |
| CN105859659A (zh) * | 2016-04-27 | 2016-08-17 | 周飞燕 | 一种盐酸丁螺环酮的药物组合物及其医药用途 |
| CN105884720A (zh) * | 2016-04-23 | 2016-08-24 | 陈斌 | 一种盐酸丁螺环酮的药物组合物及其医药用途 |
| CN105906684A (zh) * | 2016-05-19 | 2016-08-31 | 黄芳 | 一种氟哌啶醇的药物组合物及其医药用途 |
| CN105906683A (zh) * | 2016-05-18 | 2016-08-31 | 江苏神龙药业有限公司 | 一种羧基麦芽糖铁注射液及其医药用途 |
| CN105949044A (zh) * | 2016-05-28 | 2016-09-21 | 蒋灵锟 | 一种盐酸丙咪嗪的药物组合物及其医药用途 |
| CN105949042A (zh) * | 2016-06-07 | 2016-09-21 | 王昌荣 | 一种加巴喷丁的药物组合物及其医药用途 |
| CN106008651A (zh) * | 2016-05-15 | 2016-10-12 | 刘雨 | 一种硝酸异山梨酯的药物组合物及其医药用途 |
| CN106046112A (zh) * | 2016-06-24 | 2016-10-26 | 胡逸穹 | 一种二氟尼柳的药物组合物及其医药用途 |
| CN106046013A (zh) * | 2016-05-31 | 2016-10-26 | 王昌荣 | 一种氢溴酸右美沙芬的药物组合物及其医药用途 |
| CN106083988A (zh) * | 2016-06-22 | 2016-11-09 | 陈露 | 一种二巯丁二酸的药物组合物及其医药用途 |
| CN106117166A (zh) * | 2016-06-23 | 2016-11-16 | 崔坤峰 | 氨力农的药物组合物及其在高血压治疗中的应用 |
| CN106478568A (zh) * | 2016-09-12 | 2017-03-08 | 南通市科通科技信息咨询有限公司 | 一种兰索拉唑的药物组合物及其医药用途 |
-
2016
- 2016-08-14 CN CN201610663701.2A patent/CN106279344A/zh active Pending
Patent Citations (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105324389A (zh) * | 2013-04-24 | 2016-02-10 | 艾伯维公司 | 甲基巴多索隆的2,2-二氟丙酰胺衍生物、其多晶型形式及使用方法 |
| CN105777683A (zh) * | 2016-04-08 | 2016-07-20 | 庄立 | 双环醇的药物组合物及其医药用途 |
| CN105837533A (zh) * | 2016-04-23 | 2016-08-10 | 高满珍 | 一种醋酸丙氨瑞林的药物组合物及其医药用途 |
| CN105693493A (zh) * | 2016-04-23 | 2016-06-22 | 贺玉皓 | 一种丙酸氯倍他索的药物组合物及其医药用途 |
| CN105713065A (zh) * | 2016-04-23 | 2016-06-29 | 何淑琼 | 一种硫唑嘌呤的药物组合物及其医药用途 |
| CN105884720A (zh) * | 2016-04-23 | 2016-08-24 | 陈斌 | 一种盐酸丁螺环酮的药物组合物及其医药用途 |
| CN105777856A (zh) * | 2016-04-23 | 2016-07-20 | 陈昊 | 一种乙酰半胱氨酸的药物组合物及其医药用途 |
| CN105859659A (zh) * | 2016-04-27 | 2016-08-17 | 周飞燕 | 一种盐酸丁螺环酮的药物组合物及其医药用途 |
| CN105777850A (zh) * | 2016-04-28 | 2016-07-20 | 周俭 | 一种泛昔洛韦的药物组合物及其医药用途 |
| CN105777680A (zh) * | 2016-04-28 | 2016-07-20 | 薛丽云 | 一种盐酸多柔比星的药物组合物及其医药用途 |
| CN106008651A (zh) * | 2016-05-15 | 2016-10-12 | 刘雨 | 一种硝酸异山梨酯的药物组合物及其医药用途 |
| CN105906683A (zh) * | 2016-05-18 | 2016-08-31 | 江苏神龙药业有限公司 | 一种羧基麦芽糖铁注射液及其医药用途 |
| CN105906684A (zh) * | 2016-05-19 | 2016-08-31 | 黄芳 | 一种氟哌啶醇的药物组合物及其医药用途 |
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