CN106233131A - 样本分离器具以及样本分离吸附装置 - Google Patents

Abstract

本发明涉及样本分离器具以及样本分离吸附装置。样本分离器具(1)具有收纳电泳用的分离介质的收容部(10)、和将多孔质材料作为形成材料的支承体(20)，收容部(10)具有供分离介质填充的内部空间(10c)，并且，设置与内部空间(10c)连通的供给口(10a)以及排出口(10b)，支承体(20)以堵塞排出口(10b)的方式设置。

Description

样本分离器具以及样本分离吸附装置

技术领域

本发明涉及样本分离器具以及样本分离吸附装置。

本申请基于2014年12月4日在日本申请的日本特愿2014－245857号主张优先权，并在此引用其内容。

背景技术

在分子生物学、生化学中，从包含多个蛋白质、核酸等的试样(样本)分离单个的蛋白质、核酸等生物体分子，并进行检测的分析。作为从样本分离单个的生物体分子的手法，已知聚丙烯酰胺凝胶电泳(Poly-Acrylamide Gel Electrophoresis)。PAGE是使用包含聚丙烯酰胺的凝胶(分离介质)作为载体分子，并检测生物体分子的分子量的差的方法。

另外，对于分离出的各个生物体分子，使被称为转印膜的树脂性的片吸附来保持。有时将该操作称为“转印”。

被转印的生物体分子使用用荧光试剂等标识的抗体，根据抗原抗体反应进行检测。使用这样的抗体来检测生物体分子的手法已知蛋白免疫印迹法。

近年来，提出一种使上述的样本的分离、和分离出的各个生物体分子的检测自动化的技术(例如参照专利文献1、2)。

专利文献1、2所提出的装置都具有收容进行样本的电泳的凝胶的样本分离部、和进行分离出的生物体分子的转印的转印膜(样本吸附部件、吸附用部件)。在这些装置中，利用样本分离部内的凝胶进行了样本的分离后，在使样本分离部和转印膜接触的状态下，以横跨样本分离部和转印膜的方式施加电压。通过这样操作，能够使在样本分离部分离出的生物体分子再电泳到转印膜，并能够在一个装置中连续地进行样本的分离、和分离出的生物体分子的转印(向转印膜的吸附)。

专利文献1:日本特开2007－292616号公报

专利文献2:日本特开2010－8376号公报

在上述专利文献所记载的技术中，若样本分离部和转印膜接触的位置的接触面积发生变动，则转印的状态不稳，生物体分子的稳定的检测变得困难。

因此，寻求一种能够进行稳定的转印的器具。

发明内容

本发明是对包含多个蛋白质、核酸的样本良好地进行分离，并且能够稳定地使转印膜转印的样本分离器具。另外，提供一种具有这样的样本分离器具，并能够稳定、连续地实施样本的分离和向转印膜的吸附的样本分离吸附装置。

本发明的一方式提供一种样本分离器具，该样本分离器具具有收纳电泳用的分离介质的收容部、和将多孔质材料作为形成材料的支承体，上述收容部具有供上述分离介质填充的内部空间，并且设置与上述内部空间连通的供给口以及排出口，上述支承体以堵塞上述排出口的方式设置。

在本发明的一方式中，可以为还具有在上述排出口中保持上述支承体的保持部件的结构。

在本发明的一方式中，可以为还具有收容在上述内部空间的分离介质，上述分离介质与上述支承体一体地形成的结构。

在本发明的一方式中，可以为上述分离介质是聚丙烯酰胺凝胶的结构。

本发明的一方式提供一种样本分离吸附装置，该样本分离吸附装置具备存积第一缓冲液的第一缓冲液槽、存积第二缓冲液的第二缓冲液槽、配置在上述第一缓冲液槽中的第一电极、配置在上述第二缓冲液槽中的第二电极、配置在上述第一缓冲液槽的上述的样本分离器具、以及转印样本的转印体，在上述样本分离器具中，上述供给口在上述第一缓冲液槽的内部开口，并且上述排出口位于上述第二缓冲液槽的内部，上述样本分离器具具有的上述支承体与上述转印体的一个面相接，上述第二电极与上述转印体的另一个面相接。

在本发明的一方式中，可以为上述转印体被设置成能够相对于上述支承体相对地移动的结构。

根据本发明，能够提供一种可以对包含多个蛋白质、核酸的样本良好地分离，并且稳定地使转印膜转印的样本分离器具。另外，能够提供一种具有这样的样本分离器具，并可以稳定、连续第实施样本的分离和向转印膜的吸附的样本分离吸附器具。

附图说明

图1是第一实施方式所涉及的样本分离器具的说明图。

图2是第一实施方式所涉及的样本分离器具的说明图。

图3第二实施方式所涉及的样本分离器具的说明图。

图4第二实施方式所涉及的样本分离器具的说明图。

图5第三实施方式所涉及的样本分离吸附装置的示意立体图。

图6第三实施方式所涉及的样本分离吸附装置的剖视图。

图7第四实施方式所涉及的样本分离吸附装置的说明图。

具体实施方式

[第一实施方式]

以下，参照图1、图2，对本发明的第一实施方式所涉及的样本分离器具进行说明。此外，在以下的全部的附图中，为了容易观察附图，各构成要素的尺寸、比率等适当地不同。

以下说明的本发明所涉及的样本分离器具、后述的样本分离装置能够通过凝胶电泳对作为生物体分子的混合物的样本进行分离，并在检测的操作中适合使用。

此外，在本说明书中“生物体分子”是指参与生物体内的反应的生物体相关分子，可以是包含来自天然的分子、合成分子、来自天然的分子和合成分子中的任意一方或者两方的复合体的任意一个。

作为解析对象物的生物体分子通常是高分子化合物，优选来自生物体或者是生物体相关的高分子化合物，能够例示蛋白质、脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)、肽核酸、糖，它们的二种以上结合或者相互作用而形成的复合体。在生物体分子是来自生物体的生物体分子的情况下，可以来自动物、植物以及微生物中的任意一个。

通过电泳进行分离，向转印膜转印并利用抗体所检测出的(利用蛋白免疫印迹法所检测出的)生物体分子大多是蛋白质或者包含蛋白质的复合体。本发明的样本分离器具或者样本分离吸附装置使用这样的蛋白质或者包含蛋白质的复合体(样本)作为对象。

图1是样本分离器具1的说明图。在以下的说明中，有时将样本分离器具1仅称为“分离器具1”。图1(a)是分离器具1的分解立体图，图1(b)是分离器具1的立体图，图1(c)是图1(b)的线段Ic－Ic中的箭头方向的剖视图。

如图1所示，分离器具1具有收容部10、支承体20、和保持部件30。

(收容部)

如图1(a)所示，收容部10具有第一部件11、第二部件12、隔离物13、14。

第一部件11以及第二部件12是俯视矩形的板状部件。第一部件11和第二部件12成为短边方向的长度一致，而长边方向的长度，第一部件11比第二部件12长的构成。

隔离物13、14是具有与第一部件11的长边方向的长度相同的长度的棱柱。

收容这些第一部件11、第二部件12、隔离物13、14的收容部10可以使用相同的形成材料来形成，也可以使用不同的形成材料来形成。

作为收容部10的形成材料，能够例举丙烯酸树脂、聚碳酸酯树脂等树脂材料、玻璃、陶瓷这样的无机材料等。第一部件11以及第二部件12的任意一方或者两方可以使用具有透光性的材料来形成。

并且，对于第一部件11以及第二部件12，可以在相互对置的面上实施后述的用于适合保持分离介质的表面处理。

如图1(a)(b)所示，对于组装收容部10来说，首先在俯视时使第一部件11和第二部件12的短边方向的端部位置一致，并且使长边方向的一端的位置一致。而且，在第一部件11的短边方向的两端沿着第一部件11的长边方向配置了隔离物13、14的状态下，利用第一部件11和第二部件12夹持隔离物13、14来固定。

如图1(b)(c)所示，收容部10是具有内部空间10c，并在一端侧具有供给口10a、在另一端侧具有排出口10b的扁平的角筒状的构造物。在内部空间10c中收容后述的电泳用的分离介质。

供给口10a在第二部件12中较大地开口。由此，作业者在分离介质的填充时、样本的供给时操作变得容易，作业性提高。

(支承体)

支承体20是将多孔质材料作为形成材料的长方体状的部件。如图1所示，在分离器具1中，支承体20被设置成堵塞收容部10的排出口10b。另外，从收容部10的排出口10b突出地设置支承体20。

支承体20通过粘合剂、两面胶带或者压接、热熔敷固定在排出口10b中即可。作为粘合剂，能够使用乙酸乙烯树脂系粘合剂、合成橡胶系粘合剂。

详细后述，作为收容于收容部10的分离介质，适合使用包括水、和担载水的高分子量的载体分子的凝胶状的物质。支承体20具有在排出口10b中支承这样的分离介质的功能。

因此，支承体20优选是相对于水是不溶性的、不阻碍分离介质的凝胶化，并具备具有与分离介质的紧贴性的程度的亲水性的多孔质材料。例如能够适合使用纤维化树脂的毛毡(无纺织布加工品)等。作为纤维化树脂的形成材料，能够例示聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)、聚乙烯(PE)、聚丙烯(PP)。

作为支承体20的形成材料的纤维化树脂可以仅使用一种，也可以是两种以上的混合物。另外，作为支承体20的形成材料的纤维化树脂可以是进行过亲水化处理等追加处理的纤维化树脂。作为支承体20，优选作为形成PET树脂的纤维化树脂的材料的毛毡。

这样的支承体20优选具有例如在施加10N的压力时也几乎不变形的程度的刚性。若使用具有这样的刚性的支承体20，则在后述的转印操作中，支承体20不易变形，实现稳定的操作。此外，在上述，将支承体20用长方体状的部件进行了说明，但并不限于此，也可以是膜状等能够支承的形状。

(保持部件)

保持部件30被设置在收容部10的排出口10b侧的端部。保持部件30具有与收容部10的排出口10b连通的贯通孔30a。贯通孔30a被设置成从面向排出口10b的侧到与排出口10b相反侧为相同的直径。

保持部件30在贯通孔30a的内部收容从收容部10的排出口10b突出的支承体20，保持支承体20的侧面20a。收容在贯通孔30a中的支承体20被配置为端面20x的位置与贯通孔30a的端部一致，或者从贯通孔30a的端部稍微突出。

另外，如图1(c)所示，对于保持部件30，与收容部10侧相反侧的端面30x在线段Ic－Ic的向视方向的剖面上弯曲。因此，在线段Ic－Ic的向视方向的剖面上观察分离器具1时，分离器具1的排出口10b侧的前端成为支承体20的端面20x。

保持部件30能够使用与收容部10同样的形成材料来形成。

在分离器具1的组装时，首先在保持部件30的贯通孔30a内插入支承体20，之后，在另外组装的收容部10的排出口10b插入支承体20即可。

通过这样操作，组装作业变得容易。

图2是有关在内部空间10c中收容有分离介质的分离器具1的一个例子的说明图。图2(a)是与图1(c)对应的剖视图，图2(b)是图1(b)的线段IIb－IIb中的向视方向的剖视图。

分离介质40是在电泳时保持生物体分子、且生物体分子电泳时能够在其内部移动的介质。在凝胶电泳中，通常使用包括水、和担载水的高分子量的载体分子的凝胶状的分离介质。

在凝胶电泳中，对于附加了样本的分离介质，若使一端侧和另一端侧产生电位差，则作为荷电粒子的蛋白质在凝胶内移动。此时，由于凝胶中的载体分子阻挡蛋白质的移动的“分子筛效应”，基于蛋白质的电荷、分子量、形状等的不同，电压施加时每单位时间的蛋白质的移动距离不同。结果能够分别分离分析对象物所包含的多个蛋白质。

分离介质40如果是对上述那样的电泳通常使用的分离介质则可使用。分离介质40的形成材料根据作为分离对象的样本的内容或者预测为样本所包含的生物体分子的种类适当地选择即可，能够例示聚丙烯酰胺凝胶、二甲基丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶等。

这样的分离介质40通过从分离器具1的供给口10a流入分离介质40的前体(单体以及交联剂)，并在内部空间10c中使前体聚合而凝胶化来获得。

具体而言，在支承体20的外侧设置用于防液体泄漏的罩后，从供给口10a流入分离介质40的前体，使前体聚合而凝胶化。罩若在使用前取下，则也作为支承体20的端面20x的保护件发挥作用。

在流入前体前，预先在供给口10a侧配置梳齿状的夹具，在前体流入到浸渍夹具为止后除去夹具，如图2(b)所示，由此可以在分离介质40的端部设置多个槽40a。能够根据夹具的形状控制多个槽40a的间隔。例如等间隔地设置多个槽40a，并向槽40a注入样本，由此容易在分离介质40中等间隔地控制样本间的间隔。

若如上述那样收容分离介质40，则在使前体流入到内部空间10c时，前体不仅内部空间10c，也浸渍至将多孔质材料作为形成材料的支承体20。若在这样的状态下使前体聚合，则分离介质40被收容至内部空间10c，并且也填充至作为多孔质材料的支承体20的内部空间。因此，分离介质40从供给口10a的端部到支承体20的端面20x由单一部件形成。另外，分离介质40和支承体20一体地形成即可。例如如上述所记载那样通过分离介质40侵入支承体20，从而一体地形成分离介质40和支承体20、通过粘合剂一体地形成分离介质40和支承体20即可。

如上述那样分离介质40由于是具有水和高分子的载体分子的凝胶状物质，所以有时因凝胶的含水量的变化、温度变化而收缩。例如在收容分离介质40后，在排出口10b配置支承体20，从而在分离介质40不与支承体20一体形成的情况下，由于分离介质40各向同性地收缩，因此收缩到内部空间10c内，分离介质40有可能从排出口10b侧后退。该情况下，分离介质40与支承体20分离，样本的分离操作、后述的样本的转印的状态有可能产生不良状况。

可是，如上述那样，若采用分离介质40和支承体20一体地形成的构造，则在分离介质40收缩的情况下，分离介质40被拉向支承体20侧而收缩。因此，分离介质40不会从排出口10b侧后退，能够将排出口10b侧的端部的位置保持为固定。

根据以上那样的结构的分离器具1，能够提供一种可以良好地使包含多个蛋白质、核酸的样本分离，并且稳定地使转印膜转印的样本分离器具。

此外，在分离器具1中具有保持部件30，但可以不使用保持部件30，而由收容部10和支承体20构成分离器具。

另外，收容部10由第一部件11、第二部件12、隔离物13、14构成，但并不限于此。例如也可以使用第一部件11和隔离物13、14由单一部件构成的构造物、以及第二部件12来构成收容部。

[第二实施方式]

图3、4是对本发明的第二实施方式所涉及的样本分离器具进行说明的说明图，是表示样本分离器具的前端侧(排出口侧)的形状的局部剖视图。对于第二实施方式所涉及的样本分离器具，样本分离器具的前端侧的形状与第一实施方式的样本分离器具1不同。因此，与分离器具1共用的部件省略说明。

图3所示的样本分离器具2(分离器具2)在收容部10的排出口10b侧的端部设置有保持部件31。保持部件31具有与收容部10的排出口10b连通的贯通孔31a。贯通孔31a被设置成与面向排出口10b的一侧的开口直径L1相比，与排出口10b相反侧的开口直径L2小。

此处，采用分离器具2的厚度方向(第一部件11与第二部件12的层叠方向)的宽度发生变化，而开口直径L1和开口直径L2发生变化的结构。

分离器具2具有支承体21。支承体21是将多孔质材料作为形成材料的部件，图3的视野的剖面视形状成为宽度在分离器具2的厚度方向上渐减的梯形状。即，在支承体21中，与内部空间相反侧的宽度L2比分离器具2的内部空间侧的宽度W1小。此外，在图中，支承体21的收容部10侧的端部位于收容部10的排出口10b外，但可以将支承体21的至少一部分收容在排出口10b中。

图4所示的样本分离器具3(分离器具3)在收容部10的排出口10b侧的端部设置有保持部件32。保持部件32具有与收容部10的排出口10b连通的贯通孔32a。贯通孔32a被设置成比排出口10b的开口直径L3小的开口直径L4。

分离器具3具有支承体22。支承体22是将多孔质材料作为形成材料的部件。支承体22在图4的视野的剖面视形状中，排出口10b侧的端部向分离器具3的厚度方向伸出。即，在支承体22中，与内部空间相反侧的宽度L4比分离器具3的内部空间侧的宽度W3小。

根据以上那样的结构的分离器具2、3，与上述的分离器具1同样地能够提供一种可以稳定地使转印膜转印的样本分离器具。另外，通过采用支承体21、22，从而抑制支承体的脱落，实现稳定的作业。

[第三实施方式]

图5、6是对本发明的第三实施方式所涉及的样本分离吸附装置100进行说明的说明图。在以下的说明中，有时将样本分离吸附装置100仅称为“分离吸附装置100”。图5是分离吸附装置100的示意立体图。图6是分离吸附装置100的剖视图，是表示使用时的样子的图。

如图5、6所示，本实施方式的分离吸附装置100具有样本分离部110和样本吸附部120。

样本分离部110具有第一缓冲液槽111、第一电极112、桥梁部113、和上述的本发明所涉及的样本分离器具。在图5中，作为样本分离器具，示出具有第一实施方式所示的分离器具1。

第一缓冲液槽111是具有存积缓冲液的内部空间111a的容器。在第一缓冲液槽111中安装分离器具1。

安装在第一缓冲液槽111中的分离器具1的供给口10a在第一缓冲液槽111的内部空间111a开口。另外，分离器具1的保持部件30侧的前端比第一缓冲液槽111的底部靠下方突出地设置。

第一电极112被配置在第一缓冲液槽111的内部空间111a中。作为第一电极112，例如能够使用白金电极。

桥梁部113是夹持第一缓冲液槽111，并在向规定的高度方向上抬起的状态下支承的部件。桥梁部113被设置成在支承了第一缓冲液槽111的状态下，能够沿分离器具1的厚度方向(图中，符号D所示的空心箭头的方向)移动。另外，桥梁部113也可以设置用于调整第一缓冲液槽111的高度位置的调整单元。

样本吸附部120具有第二缓冲液槽121、第二电极122、和转印体123。

第二缓冲液槽121是俯视呈矩形，并具有存积缓冲液的内部空间121a的容器。样本分离部110的桥梁部113被配置在第二缓冲液槽121的两侧，第一缓冲液槽111以及分离器具1横跨第二缓冲液槽121而配置在第二缓冲液槽121的上方。

安装在第一缓冲液槽111中的分离器具1的排出口10b位于第二缓冲液槽121的内部空间121a。

第二电极122是俯视呈矩形的板状的部件，被配置在第二缓冲液槽121的内部空间121a中。作为第二电极122，例如能够使用白金电极。

第二电极122与第一电极112电连接，能够对第一电极112与第二电极122之间施加电压。此时，将第一电极112用作阴极，将第二电极122用作阳极。

转印体123是俯视呈矩形的板状或者薄膜状的部件，是能够吸附并保持生物体分子的部件。转印体123的形成材料根据作为分离对象的样本的内容或者预测样本所包含的生物体分子的种类适当地选择即可，能够例示PVDF(聚偏二氟乙烯)、硝化纤维素膜等。

转印体123通过层叠在第二电极122的一面上，并使与第二电极122侧相反侧的面朝向样本分离部110侧来配置。

如图6所示，在分离吸附装置100的使用时，在第一缓冲液槽111中存积缓冲液150，在第二缓冲液槽121存积缓冲液160。缓冲液150为阴极用的缓冲液，缓冲液160为阳极用的缓冲液。

缓冲液150、160能够使用公知的组成的缓冲液，根据作为分离对象的样本的内容或者预测样本所包含的生物体分子的种类适当地选择即可。作为优选的缓冲液，能够例示三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)/甘氨酸缓冲液、Tris/甘氨酸/十二烷基硫酸钠(SDS)缓冲液、乙酸缓冲液、炭酸钠缓冲液、N－环己基－3－氨基丙烷磺酸(CAPS)缓冲液、Tris/硼酸/乙二胺四乙酸(EDTA)缓冲液、Tris/乙酸/乙二胺四乙酸(EDTA)缓冲液、3－吗啉代丙烷磺酸(MOPS)缓冲液、磷酸缓冲液、Tris/酪氨酸缓冲液、Tris/甲醇缓冲液、Tris/甲醇缓冲液等。

在分离吸附装置100的使用时，从分离器具1的供给口10a向分离介质40供给样本后，将分离器具1设置于第一缓冲液槽111。此时，以规定的压力将分离器具1的支承体20向转印体123按压。

向转印体123按压支承体20时的“规定的压力”优选是0.1N以上且10N以下，更优选是2N以上且8N以下，进而优选是5N以上且6N以下。上限值以及下限值能够任意地组合。

之后，在第一缓冲液槽111以及第二缓冲液槽121中存积缓冲液150。预先在第一缓冲液槽111中存积达到供给口10a的量的缓冲液150。

第一电极112浸渍在缓冲液150中。

另外，预先在第二缓冲液槽121中存积达到分离器具1的前端即支承体20的端面20x的量的缓冲液160。第二电极122以及转印体123浸渍在缓冲液160中。

在这样的状态下，在第一电极112以及第二电极122之间施加规定的电压，使附加到分离器具1的分离介质40的样本所包含的生物体分子电泳。电泳的种类并未特别限制，根据供给给电泳的生物体分子适当地选择即可。在生物体分子为蛋白质的情况下，例举使用SDS电泳、Native电泳、Blue Native电泳、二维电泳等电泳法。

附加到分离器具1的分离介质40的样本在支承分离介质40内向支承体20侧移动，并且在分离介质40中，基于生物体分子的电荷、分子量、形状等的不同而被分离(分离操作)。

在样本所包含的生物体分子中的、移动速度最快的生物体分子到达支承体20时，样本分离部110的桥梁部113沿着第二缓冲液槽121的边缘开始移动。由此，分离器具1的支承体20转印体123相对地移动。

在转印体123中，伴随着支承体20的移动，吸附经由支承体20排出的生物体分子的位置发生变化。由此，转印体123在不必再次混合而分离的状态下保持由分离介质40分离出的生物体分子(转印操作)。

转印操作后，取出保持有生物体分子的转印体123，实施蛋白免疫印迹法等公知的方法，能够检测分离出的生物体分子的种类、数量。

根据以上那样的结构的分离吸附装置100，由于使用上述的本发明的样本分离器具1，所以能够稳定、连续地实施样本的分离和向转印体的吸附。

[第四实施方式]

图7是对本发明的第四实施方式所涉及的样本分离吸附装置200(分离吸附装置200)进行说明的说明图，是与图6对应的图。

分离吸附装置200具有上述的样本分离部110、和样本吸附部220。

样本吸附部220具有第二缓冲液槽221、第二电极222、转印体223、卷出辊224、和卷绕辊225。

第二缓冲液槽221能够采用与上述的第二缓冲液槽121同样的结构。

第二电极222是例如具有与排出口10b的开口直径同等的大小的俯视矩形的板状的部件，被配置在分离器具1的支承体20的下方与支承体20对置的位置上。作为第二电极222，例如能够使用白金电极。

第二电极222与第一电极112电连接，能够在第一电极112与第二电极222之间施加电压。此时，将第一电极112用作阴极，将第二电极222用作阳极。

转印体223是单向地延伸的带状的部件，是能够吸附并保持生物体分子的部件。转印体223的形成材料能够采用与上述的转印体123同样的材料。

转印体223以呈辊状卷绕的状态配置在卷出辊224上，一边从卷出辊224卷出，一边通过支承体20与第二电极222之间，并卷绕于卷绕辊225。

在这样的分离吸附装置200的使用时，从分离器具1的供给口10a向分离介质40供给样本后，将分离器具1设置于第一缓冲液槽111。此时，利用分离器具1的支承体20和第二电极222夹持转印体223，并以规定的压力将支承体20向转印体223按压。

向转印体223按压支承体20时的“规定的压力”优选是0.1N以上且10N以下，更优选是2N以上且8N以下，进而优选是5N以上且6N以下。上限值以及下限值能够任意地组合。

在这样的状态下，在第一缓冲液槽111以及第二缓冲液槽221中存积缓冲液150。在第一电极112以及第二电极222之间施加规定的电压，使附加到分离器具1的分离介质40的样本所包含的生物体分子电泳。

在样本所包含的生物体分子中的、移动速度最快的生物体分子到达支承体20时，从卷出辊224卷出呈辊状卷绕的转印体223，卷绕辊225卷绕。由此，分离器具1的支承体20进而转印体223相对地移动。

在转印体223中，伴随着转印体223的移动，吸附生物体分子的位置发生变化。由此，转印体223在不必再次混合而分离的状态保持由分离介质40分离出的生物体分子(转印操作)。

转印操作后，取出保持有生物体分子的转印体223，实施蛋白免疫印迹法等公知的方法，能够检测分离出的生物体分子的种类、数量。

即使是以上那样的结构的分离吸附装置200，由于使用上述的本发明的样本分离器具1，所以能够稳定、连续地实施样本的分离和向转印体的吸附。

实施例

以下，根据实施例对本发明进行说明，但本发明并不限于这些实施例。

此外，在实施例中，作为分离器具，使用了与第一实施方式所说明的分离器具1相同的结构的分离器具。另外，作为分离吸附装置，使用与第三实施方式所说明的分离吸附装置100相同的结构的分离器具。因此，在以下的说明中，适当地使用图1、2中附加的符号来进行说明。

[实施例1]

生物体分子样本使用利用8mol/L的尿素、2mol/L的硫脲、4质量％的3-(3-胆酰胺丙基)二甲基铵-1-丙磺酸盐(CHAPS)、20mmol/L的二硫苏糖醇(DTT)的各水溶液使生物体组织(老鼠肝脏)可溶化，并通过离心分离除去不溶的夹杂物而提取出的蛋白质溶液。

在固定了由聚对苯二甲酸乙二醇酯的多孔质材料形成的支承体20的分离器具1中，以不阻碍凝胶聚合的方式注入充分减压下进行脱气的10质量％丙烯酰胺溶液。在丙烯酰胺溶液中还加入四甲基乙二胺(TEMED)和过硫酸铵(APS)来进行凝胶化，制成聚丙烯酰胺凝胶的分离介质40。

在第一缓冲液槽111中存积阴极用的缓冲液180mL，在第二缓冲液槽121中存积阳极用的缓冲液200mL。

作为阴极用的缓冲液，使用了100mmol/L的MOPS、50mmol/L的双(2－羟乙基)氨基－三(羟甲)甲烷)(Bis－Tris)、50mmol/L的Tris、0.25％的SDS的混合水液。

作为阳极用的缓冲液，使用了100mmol/L的MOPS、50mmol/L的Bis－Tris、50mmol/L的Tris、20体积％EtOH的混合水液。

在上述蛋白质溶液加入SDS溶液而平衡化后，添加到在供给口10a侧露出的分离介质40。之后，在第一电极112与第二电极122之间以50mA的恒定电流施加电压，利用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS－PAGE)法进行了生物体分子的分离。

确认出在使转印体吸附生物体分子后，用3质量％脱脂乳进行封闭处理，并利用蛋白免疫印迹法能够检测出蛋白质的条带像。

[实施例2]

首先，使用电泳装置(夏普株式会社，Auto 2D，BM－100)，用IEF(等电点电泳)芯片按固有的电荷分离出上述蛋白质溶液(第一维电泳)。将IEF芯片的凝胶部分含浸于SDS溶液而平衡化后，将IEF芯片的凝胶部分设置在供给口10a侧露出的分离介质40。

之后，与实施例1同样地，利用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS－PAGE)法进行了生物体样本的分离(第二维电泳)。

确认出使用保持有蛋白质的转印膜，与实施例1同样地利用蛋白免疫印迹法能够检测出特定的蛋白质。

在本实施方式中，由于通过二维电泳将蛋白质展开，所以在本实施方式中转印有蛋白质的转印膜能够用作具有分子量、等电点等蛋白质信息的蛋白质芯片。

根据以上的结果，确认出本发明是有用的。

工业上的利用可能性

本发明能够在医学、工学、药学、理学、农学等生命科学领域中广泛利用。

符号说明

1、2、3…样本分离器具(分离器具)；20、21、22…支承体；10…收容部；10a…供给口；10b…排出口；10c…内部空间；30、31、32…保持部件；40…分离介质；100、200…样本分离吸附装置(分离吸附装置)；111…第一缓冲液槽；112…第一电极；121、221…第二缓冲液槽；122、222…第二电极；123、223…转印体；150、160…缓冲液。

Claims (7)

1.一种样本分离器具，具有：

收容部，能够收容电泳用的分离介质；以及

支承体，将多孔质材料作为形成材料，

上述收容部具有能够填充上述分离介质的内部空间，并且设置与上述内部空间连通的供给口以及排出口，

上述支承体以堵塞上述排出口的方式设置。

2.根据权利要求1所述的样本分离器具，其中，

上述支承体从上述排出口突出。

3.根据权利要求1或者2所述的样本分离器具，其中，

还具有在上述排出口中保持上述支承体的保持部件。

4.根据权利要求1～3中的任意一项所述的样本分离器具，其中，

还具有填充至上述内部空间的分离介质，上述分离介质与上述支承体一体地形成。

5.根据权利要求1～34中的任意一项所述的样本分离器具，其中，上述分离介质是聚丙烯酰胺凝胶。

6.一种样本分离吸附装置，具备：

第一缓冲液槽，能够存积第一缓冲液；

第二缓冲液槽，能够存积第二缓冲液；

第一电极，被配置在上述第一缓冲液槽中；

第二电极，被配置在上述第二缓冲液槽中；

被配置在上述第一缓冲液槽中的权利要求1～5中的任意一项所述的样本分离器具；以及

转印体，转印样本，

在上述样本分离器具中，上述供给口在上述第一缓冲液槽的内部开口，上述排出口位于上述第二缓冲液槽的内部，

上述样本分离器具所具有的上述支承体与上述转印体的一个面相接，

上述第二电极与上述转印体的另一个面相接。

7.根据权利要求6所述的样本分离吸附装置，其中，

上述转印体被设置成能够相对于上述支承体相对地移动。